Utilizarea RAPD (Radom Amplified Polymorphic DNA) in genetica conservativa

Un obiectiv principal al geneticii conservative il reprezinta estimarea nivelului si al distributiei variatiei genetice in cadrul speciilor pe cale de disparitie. Datele genetice sunt de multe ori de o importanta majora in intelegerea structurii, a relatiilor evolutive, a datelor demografice si a taxonomiei populatiilor, a raselor si speciilor; astfel acestea joaca un rol important in obtinerea unor strategii adecvate de management a conservarii taxonilor. In prezent, tehnicile cele mai utilizate de catre genetica conservativa in detectarea variatiilor la nivel molecular sunt cele bazate pe electroforeza izoenzimala. Izoenezimele poseda o serie de avantaje care le fac importante in analiza genetica: sunt necesare cantitati mici de tesut, in cele mai multe cazuri, alele poseda mostenire simpla Mendeleana si expresie codomonanta iar comparatiile intre locii omologi in cadrul populatiilor si intre speciile inrudite sunt simple. u toate acestea, izoenzimele au si o serie de limitari cele mai importante fiind cele care influenteaza foarte mult prelevarea de probe genomice !doar genele care codifica enzimele solubile sunt studiate" si numarul mic de loci disponibil pentru studiu !maxim #$". % dezvoltare mai recenta in detectarea polimorfismelor genetice este &D'(ul polimorfic amplificat aleator !)&*D + )andom &mplified *ol,morphic D'&, -elsh si Mc lelland, .//$; -illiams si colab., .//$". 0pre deosebire de izoenzime, )&*D asigura o esantionare a genomului arbitrara si poate genera un numar esential, nelimitat de loci pentru utilizarea in analiza genetica. )&*D are, de asemenea, un avantaj fata de o lata tehnica larg utilizata in analiza genetica + )12* + restriction fragment length pol,morphism + care necesita proceduri de o complexitate mai redusa si o cantitate mult mai mica de &D' genomic !aproximativ egal cu cantitatea de izoenzime, -hit3us si colab., .//#". &ceasta tehnica !)&*D", este relativ noua, dar a dovedit deja utilitatea sa intr(o varietate mare de studii asupra evolutiei inclusiv in alcatuirea hartilor genetice, productia de mar3eri genetici legati de caracteristicile fenotipice specifice, determinarea parintilor, identificarea clonelor si a soiurilor si in dinamica populatiilor. 4ehnica )&*D a fost cel mai des utilizata in studiile realizate pe semintele de plante, dar incepe sa fie utilizta cu o frecventa mai ridicata si in cazul altor organisme. &vantajele utilizarii )&*D in analiza genetica, face ca aceasta tehnica sa fie potrivita pentru analiza organismelor rare si a celor aflate pe cale de disparitie, acolo unde disponibilitatea de material si incapacitatea de a detecta locii ezoenzimelor polimorfe sunt adesea factori care impiedica analiza detaliata. Desi au fost efectuate multe studii,utilizand )&*D, cu implicatii in conservarea unor grupe importante de tulpini si soiuri de plante importante din punct de vedere economic, pana in prezent au fost publicate foarte putine studii asupra taxonilor rari sau aflati pe cale de disparitie. *ot exista mai multe motive pentru acest lucru, inclusiv noutatea acestei tehnici, costul precum si problemele in descrierea variatiei genetice rezultate din unul din dezavantajele acestei tehnici: expresia dominanta.

Caracteristici tehnice *rocedeul )&*D nu a suferit modificari substantiale fata de metoda originala, datorita actualitatii sale. *rimerii oligonucleotidici ai secventelor selectate arbitrat !&D' monocatenar, de obicei .$(meri" sunt desfasurati intr(o reactie de polimerizare in lant !pentru protocoale * ) de baza" folosind ca matrita &D' genomic. De obicei este folosit un primer iar per reactie sunt necesare doat .$(56 ng de &D'. Daca primer(ul se leaga la situsuri de componente diferite care se afla la distanta de aproximativ 73b una de cealalta, regiunea dintre capetele situsurilor de legare va fi amplificata. *entru ca acest lucru poate aparea in mai multe locatii din interiorul genomului, pentru orice primer dat, in urma unei singure reactii pot rezulta mai multe fragmente de &D'. *rodusele de reactie sunt vizualizate prin electroforeza pe gel de agaroza dupa colorarea cu bromura de etidiu !1ig..". *rimerii .$(mer utilizati pentru )&*D au un continut de 8 + variind dela 6$9 la :$9; daca contin polindroame, secventa polindrom nu este mai mare de sase baze