RECEPTORI NUCLEARI ORFANI

STUDENTI: ANTINIEA IOANA LOREDANA OMUSORU DIANA U N G U R E A N U S T E FA N I A FA C U LT AT E A D E B I O L O G I E MASTER ANUL II GENETICA MOLECULARA

CUPRINS:
1. Generalitati 2. Structura si domeniul functional al receptorilor nucleari 2.1. Clasificare 2.2. Activarea receptorilor nucleari 2.3. Dimerizarea RXR si raspunsul heterodimerilor la liganzii RXR 3. Receptorii nucleari orfani 3.1. Receptorii orfani care heterodimerizeaza cu RXR 3.2. Receptorii orfani care se leaga ca homodimeri 3.3. Receptorii orfani care se leaga ca monomeri 3.4. Receptorii nucleari atipici 4. Cai de semnalizare hormonale 5. Concluzii

Generalitati- receptori nucleari

Receptorii nucleari sunt o clasa de proteine intracelulare responsabile

de detectarea hormonilor steroizi si tiroidieni precum si al altor molecule.

Receptorii nucleari sunt clasificati drept factori de transcriptie

O proprietate unica a receptorilor nucleari este capacitatea acestora de a

interactiona direct cu ADN-ul si de a controla expresia ADN-ului genomic.

Joaca un rol cheie atat in dezvoltarea embrionara cat si in mentinerea

homeostazieie organismului adult

Generalitati- receptori nucleari

Suprafamilia

receptorilor

nucleari

are

ca

parti

componente:
- Familia receptorilor nucleari hormonali (NHR) - Familia receptorilor orfani
NHR sunt receptori pentru care au fost identificati liganzii

hormonali, in timp ce pentru receptorii orfani, liganzii nu sunt cunoscuti

Suprafamilia receptorilor nucleari

Structura si domeniul functional al NR

Regiune A/B,N-Terminal

secventa si marimea cea mai variabila, include functia de activare a transcriptie AF-1 care activeaza genele tinta prin interactia cu componente ale mecanismului transcriptional
Cu

AF-1 depinde de tipul celular si de

promotor
Lipirea are de obicei loc in aceasta

regiune

Regiune A/B,N-Terminal

Este

posibil ca acest domeniu este responsabil pentru actiunea specificcelulara a receptorilor nucleari
Aceasta regiune poate fi fosforilata de

diferite kinaze implicate in transductia semnalului (MAPK, kinaza ciclindependenta), care regleaza activitatea receptorilor.

Regiunea DBD (ADN binding domain) - domeniul C

Domeniul cel mai conservat, confera

capacitatea de a recunoaste secventa tinta specifice si de a activa genele

Contine doua mtive zinc finger,

divizate de fragmente de 60-70 aminoacizi in fiecare zinc finger, patru cisteine coordoneaza un ion de zinc.
Secventa de la baza primului zinc

finger (P box) recunoaste ADN-ul, intru-cat secventa de la baza celui deal doilea zinc finger(D box), este implicata in dimerizarea receptorilor

Regiunea principala - domeniul D

Este

un domeniu cu o conservare moderata, are rolul de a lega DBD (DNA binding domain-domeniul pentru legarea ADN) si LBD (ligand binding domain domeniul pentru legarea ligandului), permite schimbarea conformatei receptorului(rotirea DBD).

Adeseori

include localizare nucleara

un

semnal

de

Mutatiile din aceasta regiune anuleaza

interactiunea cu corepresorul receptorului nuclear.

Regiunea LBD (ligand binding domain) domeniul E

Leaga liganzii si mediaza homo si

heterorodimerizarea si interactioneaza cu proteinele heat shock

Regiunea este alcatuita din 12 regiuni

- elicoidale. A 12-a regiune contine domeniul AF-2, responsabil pentru transactivarea dependenta de ligand

Acest domeniu include deasemenea si

alte secvente necesare pentru transactivare, dispersate in receptorul de repaus dar localizate aproape una de cealalta dupa legarea ligandului.

Activarea receptorilor nucleari

film

Activarea receptorilor nucleari

Dimerizarea RXR si raspunsul heterodimerilor la liganzii RXR

RXR se comporta ca un partener heterodimer esential pentru

multi dintre receptorii nucleari incluzand si receptorii orfani.

Membrii non-steroizi ai receptorilor nucleari si care au liganzi

sunt toti heterodimeri cu RXR (de ex.: VDR, TR, RAR)

Atunci cand RXR formeaza heterodimeri cu receptorii orfani, este

responsabil de ligandul acestuia chiar si in absenta liganzilor partenerului sau.

Acesti heterodimeri (de ex.: RXR-LXR; RXR-NGFI-B; RXR-

PPAR) sunt liganzi sensibili la RXR iar RXR este activ sau tolerant

Dimerizarea RXR si raspunsul heterodimerilor la liganzii RXR

Capacitatea heterodimerilor RXR de a raspunde la

liganzii specifici RXReste dependenta in primul rand de partenerul sau specific

Heterodimerizarea cu RXR poate duce la proprietatea

complexului RXR-receptor orfan de a raspunde la liganzii specificii RXR-ului

In plus fata de a fi un partener heterodimer obligat

pentru multi dintre receptorii orfani, RXR are un rol critic in generarea diversitatii reaspunsurilor hormonale.

Receptorii nucleari orfani

Receptorii orfani nu prezinta vreun ligand cunoscut

endogen sau exogen, spre ex.:SPH (Small Heterodimer Partner) poate interactiona cu RXR hormonii tiroidieni inhibandu-le functia transactivatoare.
Receptorii

nucleari orfani au un comportament asemanator unor proteine virale sau celulare, care prin oligomerizare, blocheaza functia unor proteine cu rol in proliferarea celulara.

Receptorii nucleari orfani

Acesti receptori se gasesc in 2 familii:

Familia proteinelor G Familia receptorilor nucleari

Recent a aparut terminologia receptorilor orfani

adoptati. Acestia au fost initial descrisi ca orfani dar mai apoi liganzii lor au fost identificati. De exemplu: receptorii pentru acizii grasi ai colesterolului.

Receptori orfani care heteromizeaza cu RXR CAR constitutive androstane receptor

Este

o proteina care la om este codificata de gena RN1I3 (subfamilia receptorilor nucleari 1, grupa I, membrul 3).
Exprimata cel mai abundent la nivelul

ficatului si al intestinului
Proteina heterodimerizeaza

cu RXR (receptorul X ritenoidic) si regleaza transcriptia genelor tinta implicate in metabolizarea medicamentelor si curatirea bilirubinei.

Model conceptual pentru starea activa-inactiva a CAR . ApoCAR (in verde) arata interactiunea terminala K205-C care stabilizeaza AF2 in conformatia activa. Legarea la androstenol duce la o miscare (sageata cu doua capete) a helixului H11 catre locul de legare generatie a nodului H10H11 si disocierea H12 din proteina .

Receptori orfani care heteromizeaza cu RXR FXR farnesoid X receptor

FXR farnesoid X receptor-cunoscut

si sub denumirea de acidului biliar (RAB)

receptorul

FXR farnesoid X receptor- receptor

nuclear codificat de gena RN1H4 (subfamilia receptorilor nucleari 1, grupa H, membrul4)

FXR este exprimat la un nivel inalt

in ficat si intestine
Are ca si liganzi naturali acidul
FXR regleaza un numar mare de gene tinta implicate in metabolismul acidului biliar, lipoproteinelor si a glucozei. FXR se leaga la ADN impreuna cu RXR ca heterodimer sau ca monomer regland expresia unor gene variate.

chenodeoxicolic si alti acizi biliari

Receptori orfani care heteromizeaza cu RXR FXR farnesoid X receptor

Receptorul farnesoid X (FXR)

formeaza un heterodimer cu RXR si se fixeaza (leaga) la elementul de raspuns (FXRE) al lui FXR, care de obicei este o repetitie inversa distantata de o nucleotida (IR1), in genele sale tinta pentru a induce expresia genei.

Receptori orfani care heteromizeaza cu RXR LXR liver X receptor

LXR (liver X receptor) sunt reglatori importanti ai colesterolului, ai acizilor

grasi si a homeostaziei glucozei.

a fost adoptat dupa descoperirea oxisterolilor ca liganzi endogeni ai acestuia.
Acest receptor

Prezinta 2 izomorfi: LXR LXR

Distributia acestora in tesuturi difera:

- LXR este exprimat in ficat, rinichi, intestin, tesut gras, plamani si splina - LXR este exprimat in aproape toate tesuturile si organele

Receptori orfani care heteromizeaza cu RXR LXR liver X receptor

Receptorul X al ficatului (LXRliver X receptor) formeaza un heterodimer obligat cu receptorul X retinoidic (RXR 9cis-acid retinoic) care se fixeaza la DR4 (direct repeat sequences de 4 nucleotide), a LXRE (elementului de raspuns al LXR) in regiunile de reglare ale genelor tinta, astfel reprimand expresia genelor. In urma legarii ligandului de LXR sau RXR, conformatia heterodimerului se modifica,ceea ce conduce la eliberarea de co-represori si la recrutarea de co-activatori. Acest lucru duce la transcriptie genelor tinta

Receptori orfani care heteromizeaza cu RXR PXR pregnane X receptor

Este o proteina care este gena NR1KI2. codificata de catre

Este exprimat la un nivel inalt in ficat si intestin, iar intr-o proportie mai mica in rinichi si stomac Cunoscut pentru senisbiliatea sa in detectarea steroizilor si al medicamentelor (SXR)

Functia sa primara este de a detecta prezenta substantelor toxice si ca raspuns activeaza expresia proteinelor implicate in detoxifierea si in inlaturarea acestor substante din organism.
Proteina codificata este un reglator al transcriptiei genei citocrom P450 (CYP3A4 ), care se leaga la elementul de raspuns al promotorului CYP3A4 ca un heterodimer cu RXR Formeaza un heterodimer- obligat cu RXR
PXR este un factor de transcriptie care regleaza expresia genei CYP3A (in galben), din ficat si intestin. Impreuna cu RXR actioneaza ca un heterodimer. Medicamentul A se leaga la PXR si induce expresia enzimei CYP3A ( roz) accelerand metabolismul medicamentului B care este un substrat pentru CYP3A (citocrom P450).

Receptori orfani care se leaga ca homodimeri GCNF- germ cell nuclear factor
Este o proteina codificata de gena NR6A1 La adulti

este exprimat in principal la nivelul celulelor germinale ale gonadelor si este implicat in reglarea embriogenezei si in diferentierea celulelor germinale
GNFC se leaga preferential la ADN ca un

homodimer la elementele DR0 iar in absenta unui presuspus ligand reprima tranascriptia.

Rolul fiziologic potential in gametogeneza a

acestuia este in prezent necunoscut.

Receptori orfani care se leaga ca homodimeri HNF-4 hepatocyte nuclear factor

Factorul nuclear hepatocitic 4 este o proteina exprimata in ficat, rinichi, intestin si in celulele pancreatice La organismul uman exista doua izomorfe ale sale: si codificate de doua gene separate HNF4A si HNF4G. Aceasta controleaza genele implicate in metabolismul glucozei, a colesterolului si a acizilor grasi, metabolismul aminoacizilor precum si in dezvoltarea si diferentierea celulelor hepatice. Studii le arata ca pierderea HNF-4 functional conduce la deficiente de expresie a mai multor gene implicate in transportul si metabolismul glucozei Regleaza transcriptia factorului de transcriptie HNF1A (OMIM 142410) care este gena cauzatoare a MODY3 (maturity-onset diabetes of the young)

Receptori orfani care se leaga ca monodimeri ERR si receptorii pentru estrogen si

Studiile au aratat ca exista 3 tipuri de receptori pentru estrogen: , si ERR actioneaza ca factori de transcriptie activati de estrogen (17-estradiol). In absenta estrogenului , acestia nu se leaga la ADN

Calea clasica de actiune a ERR in celula

Receptori orfani care se leaga ca monodimeri ERR

ERR este loc alizat pe cromozomul 6q subbanda 25.1 Este exprimat in uter, ovar, glanda mamara, hipotalamus Este o proteina termolabila, usor degradabila in prezenta proteazelor

Receptori orfani care se leaga ca monodimeri SF-1 steroidogenic factor

Factorul steroidogenic SF-1 controleaza dezvoltarea sexuala in embrion si la pubertate Este codificat de gena NR5A1 Regleaza reproducerea , prin reglarea transcriptiei genelor cheie implicate in dezvoltarea sexuala si in reproducere Are ca obiective gene din axa hipotamamo- hipofizo-gonadala, precum si multe din genele implicate steroidogeneza gonadala si suprarenalelor. Mutatiile la nivelul genei NR5A1 pot duce la aparitia organele genitale intersexuale, la lipsa pubertatii si la infertilitate

Receptori orfani care se leaga ca monodimeri NGFI-B

Este o proteina codificata de gena NR4A1 Este implicat in medierea ciclului celular, inflamare si apoptoza Are un rol cheie in medierea raspunsului imun iar in plus localizarea intracelulara joaca rol in supravietuirea celulara si in programarea moartii celulare

Receptori nucleari atipici DAX-1

Este codificat de gena NR0B1, gena localizata pe bratul scurt (p) al cromozomului X Aceasta gena codifica o proteina careia ii lipseste domeniul de legare al ADN-ului Controleaza activitatea anumitor gene din celule care formeaza tesutul in timpul dezvoltarii embrionare.

Proteina codificata actioneaza ca un reglator dominant-negativ al transcriptiei al altor receptori nucleari inclusiv pentru FS-1
Joaca un rol importanat in dezvoltarea multor tipuri de tesuturi: glandele suprarenala, pituitara si hipotalamus

Receptori nucleari atipici SPH small heterodimer partner

Este o proteina codificata de gena NR0B2 Este diferit de ceilalti receptori deoarece nu are domeniul de legare de ADN (DBD) Este clasificat ca si receptor datorita omologiei sale cu alti receptori nucleari (DAX-1) prin aceea ca are o dimerizare putativa si domeniu de legare de ligand. Rolul sau principal pare a fi reprimarea altor receptori nucleari prin asociere pentru a produce heterodimeri neproductivi Interactioneaza cu receptorii hormonilor retinoizi si tiroidieni inhiband activarea transcriptiei ligand-dependenta a acestora Pare sa actioneze c a un reglator negativ al cailor de semnalizare receptor-dependente

FXR / RIP14: Caile de semnalizare ale farnesoidului si a retinoidului

FXR (receptorul x farnesoid) poate juca un rol in semnalizarea retinoida, actionand ca

un nou receptor al acidului retinoic.

Activarea FXR de catre farnesol, (izopren intermediar in aceasta cale), a fost primul

exemplu de receptor reglat de metabolitii intracelulari, sugerand existenta unui sistem de semnalizare potential nou la vertebrate.
Agonistul RAR sintetic (TTNPB) este de asemenea un activator, desi ambii compusi

activeaza la concentratii suprafiziologice si intr-un mod dependent de timp, sugerand ca un metabolit retinoid sau un nou terpenoid poate fi un ligand pentru FXR RIP14.

LXR si SF-1: Caile de semnalizare ale oxisterolului

LXR (receptorul x din ficat) are doua izoforme: si , care se leaga in regiunea promotor a genelor tinta si formeaza heterodimeri cu receptorul retinoid X (RXR). LXR este activat de catre o clasa specifica de oxisteroli: 22 (R) hidroxicolesterol (OHC), 24(S) OHC si 24, 25(S)- epoxicolesterol, care actioneaza ca intermediari in caile de producere a acidului biliar si in biosinteza hormonului steroid.

Activarea LXR de catre aceste molecule duce la inducerea genei sale tinta CYP7a, care codifica rata - limitarea enzimei in productia de acizi biliari. Prin urmare, LXR joaca un rol important in conversia colesterolului in acizi biliari.
Activarea LXR normalizeaza glicemia i sensibilitatea la insulina, imbunatateste rezulatatele in diabetul zaharat tip 2 si ofera rezistenta la insulina

LXR si SF-1: Caile de semnalizare ale oxisterolului

SF-1 (factorul steroidogenic 1) este un receptor orfan exprimat in esuturile steroidogene,cu un rol esenial in reglarea biosintezei hormonilor steroizi si in metabolismul colesterolului , actionand in multiple puncte de control a caii steroidogene.

Promotorii genei specifice StAR (proteina reglatoare acuta steroidogenica), ale caror produse actioneaza in etapele critice ale metabolismulului colesterolului, sunt activati de catre oxisterolii 25 -, 26 -, i 27 - (OHC) prin intermediul SF-1. Activarea SF-1 prin oxisteroli amplifica transcrierea genei tinta SF-1 si "blocarea" celulei intr-un mod steroidogenic, actionand ca "senzori" si controland etape cruciale in caile metabolice cheie.
Aceste rezultate sugereaza un mecanism nou pentru o steroidogeneza crescuta.

PXRSXR: Cai de semnalizare a steroidelor si xenobioticelor

Activitatea murin PXR (mPXR) este modulata de un numar de steroizi naturali si sintetici, inclusiv pregnani naturali. Unii dintre acesti steroizi, numiti steroizi catatoxici, sunt cunoscuti pentru capacitatea lor de a induce expresia genelor citocromului P450, care confera protectie nespecifica sau rezistenta fata de o serie de medicamente si compusi xenobiotici. Pe langa activarea genei CYP450, influenteaza homeostazia colesterolului prin reglementarea biosintezei, depozitarea si secretia acestuia. Activarea mPXR prin acesti steroizi poate duce la eliberarea lor in ficat prin actiunea CYP3A1, o gena tinta mPXR.

PXRSXR: Cai de semnalizare a steroidelor si xenobioticelor

PXR-ul uman (hPXR) sau SXR este, de asemenea, activat de un numar mare de steroizi agonisti si antagonisti (estrogen si tamoxifen), de medicamente (rifampicina si nifedipina), compusi xenobiotici si compusi alimentari bioactivi (fitoestrogeni). Multi dintre acesti compusi induc catabolismul enzimelor CYP450, inclusiv CYP3A4, care metabolizeaza un numar de steroizi si xenobiotice, inclusiv 60% din medicamentele relevante clinic la om.

Rifampicina este implicata in interactiunile medicamentoase prin inducerea CYP3A4 si modificarea metabolismului altor medicamente. Administrarea pe termen lung de rifampicina la pacientii cu tuberculoza duce la eliberarea crescuta de steroizi. Aceasta poate in unele cazuri duce diagnosticarea gresita a sindromului Cushing, din cauza unei cresteri de steroizi la nivel urinar.

PXRSXR: Cai de semnalizare a steroidelor si xenobioticelor

Eliminarea de hormoni steroizi este importanta in mentinerea homeostaziei hormonale, unde ligand-ul poate fi eliminat din sange la nivelul ficatului, dupa medierea efectului sau asupra tesuturilor tinta cu ajutorul receptorilor specifici. Astfel, PXR - SXR este un nou senzor steroid si xenobiotic care actioneaza ca un receptor cu o larga specificitate implicat in eliminarea si detoxifierea unui numar de natural de compusi bioactivi ingerati.

Reprezentarea schematica a mecanismelor prin care cafestolul creste nivelul de colesterol in vivo, prin PXR si FXR
1) Cafestolul este consumat sub forma de cafea

nefiltrata trece in stomac si apoi in intestinul subtire. 2) In intestin, cafestolul activeaza PXR si FXR. La activarea PXR, cafestol induce expresia genei Cyp27A1 si ABCA1, ducand la o cretere a efluxului de colesterol in circulatie. Cafestol induce si expresia genelor Cyp3A11 i GST1 , conducand la o cretere in detoxifiere. Cafestolul actoneaza prin intermediul atat FXR si PXR prin inducerea genei FGF15, care semnaleaza reprimarea sintezei acizilor biliari. 3) In ficat, Cyp7A1, Cyp8B1,si expresia NTCP este reprimata prin FXR, reducand astfel sinteza acizilor biliari. Reglementarea directa a genelor tinta de catre FXR si PXR in intestin combinat cu efectele indirecte la nivelul ficatului, contribuie la efectul de crestere a colesterolului la om.

CAR: Calea de semnalizare a androstanului

CAR este un receptor steroid nou care participa la dezactivarea ligand-

dependent, ca raspuns la steroizi.

Prezinta activitate semnificativa atunci cand este combinat cu RXR, dar ca raspuns la metabolitii androstan, androstenol si androstanol aceasta activitate este oprita. Acesti liganzi exista in mod natural si functioneaza ca agonisti inversi datorita capacitatii lor de a inversa activarea transcriptionala efectuata de receptori nucleari.

Prin urmare, CAR defineste o cale de semnalizare a androstanului, care functioneaza intr-o maniera opusa caii conventionale de semnalizare a receptorilor nucleari.

Receptorul PPAR

Membrii subfamiliei PPAR formeaza heterodimeri cu RXR. Exista trei subtipuri PPAR mentionati ca PPAR , , si .

Acesti receptori difera in distributia lor in tesut, precum si in capacitatea lor relativa de a fi activati printr-o varietate de diferiti liganzi. PPAR este foarte exprimat n tesuturi, cum ar fi ficatul si rinichii.
Activarea PPAR reglementeaza transcrierea mai multor enzime cheie implicate in metabolismul acizilor grasi, inclusiv oxidarea acizilor grasi si enzimele bifunctionale. Astfel, medicamente specifice PPAR precum gemfibrozil si fenofibrat functioneaza prin reglarea metabolismului acidului gras care duce la scaderea lipidelor la om.

Concluzii
Receptorii

nucleari, incluzand receptorii nucleari orfani, reprezinta cea mai mare familie de factori transcriptionali. Studiul asupra acestor proteine a avut un impact major asupra cunostintelor despre reglarea fiziologica si metabolica. Studii structurale prin metode diferite cum ar fi cristalografia cu raze X, au adus informatii privind mecanismul de functionare al receptorilor orfani. De asemenea, aceste studii au condus la o cunoastere mai peofunda a domeniului de legare a liganzilor, sugerand ca ar fi posibila descoperirea sau crearea unor liganzi pentru receptorii orfani.

Bibliografie