Universitatea Ovidius Constanta Facultatea de Medicina

Celulele stem mezenchimale in terapii celulare

CONSTANA 2014

Page 1

Universitatea Ovidius Constanta Facultatea de Medicina Cuprins

1. Introducere ............................................................................................................................... 3 1.1.Celula stem mezenchimala : generalitati...................................................................................4 1.2.Heterogenitatea culturilor e celule stem mezenchimale.....................................................! 1. ................................................................................................................................................. 4 1.1 ................................................................................................................................................." 1.2 ............................................................................................................................................#

1. Introducere
CONSTANA 2014 Page 2

Universitatea Ovidius Constanta Facultatea de Medicina

Celulele stem mezenchimale au $ost i enti$icate %entru %rima ata in gelatina &harton in anul 2004 e catre &ang si cola'oratorii. (e atunci au $ost %u'licate numeroase stu ii con$orm carora celulele stem mezenchimale sunt consi erate instrumente )erita'ile e inlocuire* re%arare* regenerare si intinerire a celulelor si tesuturilor 'olna)e. Cercetarile in )itro +in la'orator, sau %e mo ele animale au emonstrat e-a utilitatea %otentiala a trans%lantului e celule stem mezenchimale. .n acest %roiect am urmarit sa e/%un atat caracteristicile si utilitatea acestor celule stem mezenchimale cat si noutatile* istoria* e)olutia cat si im%actul unor inter)entii ce im%lica aceste celule in tera%iile celulare. Obiectivul acestui stu iu e cercetare )izeaz0 urm0toarele %reocu%0ri me icale: 1 istoria natural0 a celulelor stem* e)olu2ia 3i utilitatea acestora 1 %er$orman2a unui trans%lant 1 im%actul unei inter)en2ii +tera%eutice* e e%istare* e %re)en2ie sau e e uca2ie,. Celulele stem mezenchimale sunt in %rezent e)aluate in i$erite stu ii %re4 clinice si clinice o$erin %otential semni$icati) %entru tera%ii celulare in omeniul re%ararii si regenerarii tisulare. Celulele stem se utilizeaz0 in %rezent 5n tratamentul a mai mult e 60 e a$ec2iuni se)ere* acute sau cronice* %ro%rietatile lor s%eci$ice con$erin u4le un %otential urias in tratarea 'olilor. Trans%lantul e celule stem autolog +%entru aceeasi %ersoana, este in icat %entru cazurile in care 'oala nu este e natura genetica +ere itara,* iar trans%lantul alogen +%entru o %ersoana i$erita $ata e cea e la care s4a $acut %rele)area, este in icat atat %entru 'olile mostenite cat si %entru celelalte ti%uri e 'oli. Primul trans%lant e celule stem in cor onul om'ilical a $ost e$ectuat e echi%a con usa e Pro$. 7liane 8luc9man 5n 1:!! la un co%il care su$erea e anemie a%lastic0 ;anconi. .n %rezent e/ista in lume %este #00.000 e unitati e celule stem in sangele cor onului om'ilical stocate* intre care %este 20.000 au $ost eli'erate in )e erea trans%lantului %entru tratarea a$ectiunilor maligne si non4maligne la co%ii si a ulti.

2. Celula stem mezenchimala eneralitati

CONSTANA 2014 Page <

Universitatea Ovidius Constanta Facultatea de Medicina

Celulele stem sunt celule care au atat ca%acitatea e autore%licare +reinoire, cat si ca%acitatea e i$erentiere in alte ti%uri celulare= %ractic sunt celule nes%ecializate care au nastere unor celule s%ecializate. Celulele stem sunt e oua ti%uri: > em'rionare* sunt celulele recoltate in em'rioni %ana in sta iul e 'lastocist si ele au ca%acitatea e a a nastere tuturor tesuturilor in organism= > a ulte* rezi a in ma-oritatea tesuturilor a ulte si contri'uie la mentinerea homeostaziei tisulare si la reinoirea celulelor tisulare in caz e leziune= se cre e ca si ele %ot a nastere altor ti%uri e celule ar oricum ca%acitatea lor e i$erentiere este mult mai re usa ecat a celor em'rionare= > in stroma ma u)ei osoase e/ista un su'set e celule nehemato%oietice numite celulel stem mezenchimale= > aceste celule %ot $i recoltate si culti)ate in )itro si in use sa se i$erentieze terminal in osteo'lasti* con rocite* a i%ocite* tenocite* celule neurale si celule ale stromei hemato%oietice= S4a crezut multa )reme ca aceste celule stem a ulte au un %otential e i$erentiere restrictionat la ti%urile e celule in tesutul in care se gasesc. S4a constatat insa ca aceste celule stem a ulte %ot a nastere si altor ti%uri celule* in alte tesuturi. (e e/em%lu* celule stem hemato%oietica %oate a nastere la celule o)ale he%atice +'loo to4li)er,. Celula stem neurala* %e langa cele trei ti%uri e celule in creierul a ult* %oate %ro uce celule stem hemato%ietice +'rain4to4'loo ,. Celulele stem mezenchimale in ma u)a %ot %ro uce celule asemanatoare celulelor neuronale +marro?4to4'rain,. > celulele stem a ulte +cum sunt cele hemato%oietice si mezenchimale, au ca%acitatea e a %arasi tesutul lor gaz a* %ot circula in sange si a%oi se %ot gre$a in tesutul tinta. Pentru a4si %une in $unctiune %rogramul e i$erentiere este necesar ca aceste celule sa a-unga intr4un microme iu tisular o%tim.

!I"U#I$% &% C%$U$% '!%M UM()%

CONSTANA 2014 Page 4

Universitatea Ovidius Constanta Facultatea de Medicina

Celula stem

Hemato%oietica Neurala 7%iteliala 7m'rionara Cezenchimala Creier

Ca u)a osoasa

7%i erm Celule germinale %rimor iale

Maduva osoasa Masa celulara interna a blastocistului;

CA@ACT7@.ST.C.A7 C7ABA7AO@ ST7C C7D7NCH.CAA7 +CSC,. > cel mai $rec)ent %ro'ele e ma u)a osoasa se o'tin %rin %unctie sau in cursul inter)entiilor chirurgicale= > u%a e%unerea celulelor %e %lacile e cultura* in me iu e cultura su%limentat cu ser $etal 'o)in se o'tine cultura %rimara e celule stem mezenchimale= > la microsco%ia o%tica o'isnuita culturile e CSC se %rezinta ca o %o%ulatie omogena e celule e $orma asemanatoare $i'ro'lastilor. Stu iile asu%ra ciclului celular au aratat ca oar o $ractiune in CSC %roli$ereaza acti) +E10F,* restul sunt 'locate la sta iul 80G81 al ciclului celular. Acest %rocent mare e celule a$late la sta iul 80G81 sugereaza com%etenta si is%oni'ilitatea lor s%re i$erentiere.

CONSTANA 2014

Page "

Universitatea Ovidius Constanta Facultatea de Medicina

;igura 1. As%ectul culturilor e CSC.

Cultura primara este apoi expandata; unele preparate de CSM pot rezista pana la 15 replicari dar altele inceteaza sa prolifereze dupa circa 4 replicari, in functie de procedura folosita la recoltarea maduvei, frecventa scazuta a CSM in materialul recoltat si varsta donorului. In ciuda potentialului lor expansiv in vitro, CSM nu isi pierd kariotipul normal si activitatea telomerazei, totusi cultivarea de lun a durata interfera cu functionarea normala a celulelor si duce la aparitia semnelor de senescenta si apoptoza celulara. Cu a!utorul anticorpilor monoclonali s"a reusit o mai buna caracterizare a fenotipului CSM si s"a descoperit ca aceste celule n"au un fenotip specific# ele imprumuta carateristici moleculare ale celulelor mezenc$imale, endoteliale, epiteliale si musculare. CSM nu exprima markeri specifici liniei $ematopoietice %C&45, C&'4 si C&14(. CSM produce o ama lar a de factori de crestere, interleukine si c$emokine $ematopoietice si ne$ematopoietice si desi unii factori sunt exprimati constitutiv alti factori sunt exprimati doar dupa stimulare. )cesti factori sunt importanti si au rol inductiv*re lator nu numai pentru CSM cat si pentru celelalte tipuri celulare din micromediul maduvei osoase, lucru intarit si de constatarea ca CSM secreta un numar important de molecule din matricea extracelulara, cum sunt fibronectina, laminina, cola en si proteo licani si un numar de receptori celulari implicati in interactiunile celula"matrice si celula"celula. +oarte importanta este expresia puternica a C&44
CONSTANA 2014 Page #

Universitatea Ovidius Constanta Facultatea de Medicina

%receptor pentru li anzi de enul acidului $ialuronic si osteopontinului(, care !oaca un rol central in or anizarea matricei extracelulare din maduva osoasa si os. +i ura ,. &etalii ale micromediul din maduva osoasa in care rezida CSM

CONSTANA 2014

Page 6

Universitatea Ovidius Constanta Facultatea de Medicina

3. *%!%#O+%)ICI!(!%( CU$!U#I$O# &% C%$U$% '!%M M%,%)C*IM($%

4 can se in)estigheaza culturile e CSC in %unct e )e ere %roli$erati)* acestea %ar a $i neomogene. > stu iile au aratat ca in culturile e CSC e/ista o %o%ulatie celulara HlatentaI* $ormata in celule mici si agranulare +celule @S41,* cu o ca%acitate re usa e a genera colonii e celule= aceste celule au un %ro$il antigenic i$erit e ma-oritatea celulelor %roli$erati)e in culturile e CSC. Totusi* aceste celule @S41 %ot $i $acute sa %roli$ereze in anumite con itii si se cre e ca re%rezinta un rezer)or e/4)i)o e celule care se reinoiesc +celule stem autentice,* neanga-ate inca s%re %roli$erare sau i$erentiere in cultura. > marea ma-oritate a celulelor intr4o cultura e CSC sunt celule %roli$erati)e* care in $unctie e con itiile e me iu* mani$esta %otential e i$erentiere s%re anumite linii celulare. Circa <0F in aceste celule au un tri%lu %otential e i$erentiere: s%re calea osteocitara* con rocitara si a i%oasa* restul celulelor %rezinta un %otential e i$erentiere s%re calea osteocitara si con rocitara sau oar osteocitara. Nu s4au i enti$icat celule cu %otential ual e i$erentiere s%re calea osteocitaraG a i%oasa sau con rocitaraGa i%ocitara si nici nu s4au i enti$icat celule cu %otential e i$erentiere limitat strict la calea con rocitara sau a i%ocitara. S4au i enti$icat insa celule cu un %otential c)a ru%lu e i$erentiere: s%re calea osteocitara* con rocitara* a i%ocitara si a stromei hemato%oietice. Culturile e celule stem mezenchimale o'tinute in ma u)a osoasa nu sunt omogene ci sunt $ormate in celule latente si anga-ate in %roli$erare* cu i$erite %otentiale e i$erentiere. Pe masura ce aceste celule %roli$ereaza si se i$erentiaza isi %ier ca%acitatea e autoreinoire +stemicitatea,.

CONSTANA 2014

Page !

Universitatea Ovidius Constanta Facultatea de Medicina

4. I%#(#*I( "#O$IF%#(!I-( ( C%$U$%$O#

'!%M

M%,%)C*IM($%
Ca u)a osoasa este consi erata in )i)o ca $iin locul in care rezi a celulele stem mezenchimale neanga-ate +uncommitte ,* care %rin %otentialul lor e autoreinoire si e i$erentiere $urnizeaza organismului celule mezenchimale ne i$erentiate si i$erentiate* %e urata intregii e/istente a acestuia. Conce%tul e ierarhie %roli$erati)a a $ost ez)oltat %entru a e/%lica e/istenta unor %o%ulatii celulare intr4 un tesut si care cu%rin atat celule stem* cat si %rogenitori neanga-ati +uncommitte , si anga-ati +committe ,. Conce%tul se 'azeaza %e %resu%unerea ca %roli$erarea* i$erentierea si maturarea celulelor sunt %rocese in e%en ente: celulele stem se i)i $ara a se matura iar celulele %ornite %e care i$erentierii se %ot matura ar isi %ier ca%acitatea e i)iziune. Totusi* %o%ulatia e celule %rogenitoare anga-ate +committe , se i)i si se si matureaza* %rezentan %ro%rietati interme iare intre celulele stem si celulele $unctionale mature. Asa ar* notiunea e stemicitatea celulelor stem nu este o %ro%rietate a unui ti% %articular e celula ci este s%ectrul %osi'ilitatilor e i$erentiere un ti%urilor celulare intr4o %o%ulatie e celule. .n $igura e mai -os este %rezentata ierarhia %roli$erati)a a celulelor stem mezechimale in ma u)a osoasa +ce ti%uri celulare %ot lua nastere in celulele stem mezenchimale in con itii e stimulare %otri)ita,.

CONSTANA 2014

Page :