Rembrandt Harmenszoon van Rijn

(n. 15 iulie 1606, Leiden d. 4 octombrie 1669, Amsterdam)

Lecia de anatomie a dr. Nicolaes Tulp 1
 METODE DE
STERILIZARE I
DEZINFECIE
N LABORATORUL DE
MICROBIOLOGIE

2
 Sterilizarea distrugerea sau ndeprtarea
tuturor microorganismelor, inclusiv a
sporilor.

Dezinfecia distrugerea formelor

vegetative ale microorganismelor, dar nu
n mod necesar i a sporilor.
Dezinfecia = totalitatea mijloacelor fizice, chimice, biologice i
farmacologice care urmresc ndeprtarea, inactivarea sau distrugerea
germenilor patogeni din mediu

1. profilactic = prevenirea izbucnirii i rspndirii bolilor cu punct de plecare

cunoscut
2. curent = la patul bolnavului pe toat perioada de spitalizare
3. terminal = aupra tuturor obiectelor folosite de bolnav, mobilierului, camerei3
 ASEPSIA I ANTISEPSIA

Asepsia i antisepsia reprezint elementele necesare i inseparabile

ale procesului de dezinfecie.

Asepsia este ansamblul msurilor luate prin care se previne

contaminarea unor materiale i organisme, n primul rnd omul, cu
microorganisme.

4
ASEPSIA (gr a = fr, sepsis = putrefacie) reprezint ansamblul de
msuri prin care se mpiedic contactul dintre germeni i plaga
operatorie sau accidental. Deoarece se previne infecia, asepsia
este o metod profilactic.

ANTISEPSIA (gr anti = mpotriva, sepsis = putrefacie) reprezint

totalitatea mijloacelor prin care se urmrete distrugerea
germenilor prezeni ntr-o plag, pe tegumente sau n mediu. Ea
este o metod curativ.

ASEPSIA i ANTISEPSIA se completeaz reciproc i se folosesc

simultan, alctuind mpreun sterilizarea, care reprezint forma
cea mai complet de dezinfecie.

5
 ISTORIC
nainte de Hipocrate, cei care practicau medicina recomandau pentru
prevenirea infectrii plgilor, splarea acestora cu ap cald i pansarea
lor cu buci de pnz alb. Se utilizau diferite macerate din plante cu
efect antiseptic i cicatrizant.
n perioada lui Hipocrate, era recomandat splarea plgilor cu ap cald
i vin vechi, iar echipa chirurgical trebuia s se spele pe mini nainte
de operaie, iar plgile erau pansate cu pnz alb.

n perioada Evului Mediu, se descoper noiunea de

infecie i a fenomenului de contagiune (= transmitere
a unei boli de la un om la altul, direct sau indirect) de
ctre Ambroise Par. Un mare pas n descoperirea i
folosirea metodelor de combatere a infeciilor a fost
fcut prin inventarea microscopului de ctre Van Ambroise Par (1510
1590)
Leeuwenhoek.
 Sir Joseph Lister (1827 1912), n Anglia, este cel care utilizeaz
primele metode de antisepsie prin folosirea acidului carbolic n
tratamentul plgilor.

Semmelweis este cel care introduce n clinica sa obligativitatea splrii

minilor cu ap i spun i ap clorurat nainte de a ncepe un act
chirurgical sau obstetrical.
Louis Pasteur este considerat printele asepsiei, fiind primul care
descoper diverse familii de germeni i demonstreaz relaia de
cauzalitate ntre acetia i apariia diverselor boli.
La noi n ar, V. Babe contribuie la progresul bacteriologiei i totodat
al asepsiei.
Constantin Dimitrescu-Severeanu i apoi Prof. Thoma Ionescu au fost
primii chirurgi care au aplicat metodele de antisepsie preconizate 7de
Lister.
 STERILIZAREA
1. Ageni fizici:
A. Cldura
B. Frigul
C. Uscarea
D. Radiaiile
E. Ultrasunetele
F. Presiunea mecanic
G. Presiunea osmotic

8
 DEZINFECIA/ASEPSIA

2. Ageni chimici:
A. Substane chimice elementare
B. Compui anorganici
C. Compui organici

9
 1. A. STERILIZAREA PRIN
CLDURA

Punctul termic mortal cea mai sczut

temperatur care distruge n 10 minute
toate bacteriile unei specii.

Timpul termic mortal cel mai scurt

interval de timp necesar pentru ca toate
bacteriile unei populaii microbiene s fie
distruse la o temperatur dat. 10
 1. A. STERILIZAREA PRIN
CLDUR
1. Cldur umed:
1. Autoclavarea
2. Fierberea
3. Tindalizarea
4. Pasteurizarea
2. Cldur uscat:
1. Cuptoare speciale cu aer cald (pupinele sau etuve)
2. Aducerea la incandescen
3. Flambarea
4. Incinerarea

11
1.A.1.1. STERILIZAREA PRIN CLDUR UMED
AUTOCLAVAREA

Cldura umed distruge bacteriile mai

repede dect cldura uscat la aceeai
temperatur, deoarece este mai
penetrant.
Sterilizarea prin cldur umed utilizeaz
vaporii de ap sub presiune n autoclav:
121C 15 min.
134C 3 min.

12
1.A.1.1. STERILIZAREA PRIN CLDUR UMED
AUTOCLAVAREA

Bacteriile n form vegetativ sunt distruse

la temperaturi cu 10 15C mai mari
dect temperatura lor maxim de
dezvoltare.

Majoritatea bacteriilor n forma vegetativ

mor n timp de 10 minute la 50 60C.

13
1.A.1.1. STERILIZAREA PRIN CLDUR UMED
AUTOCLAVAREA

Majoritatea sporilor bacterieni sunt distrui n 10

minute la 100C.
Sporii de Clostridium botulinum pot rezista 8 ore
la 100C.
Cel mai rezistent sporul de Bacillus
stearotermophilus necesit pentru distrugere
15 18 minute la 121C i 40 minute la 115C.
Sporii de B. stearotermophilus indicator n
aprecierea eficienei sterilizrii prin cldur
umed.
14
1.A.1.1. STERILIZAREA PRIN CLDUR UMED
AUTOCLAVAREA

Ce se poate steriliza prin autoclavare?

- Instrumentar medical

- Material moale (pansamente, cmpuri operatorii,

halate etc.)

- Soluii perfuzabile

- Materiale de laborator (medii de cultur, tampoane

pentru recoltri prelevate, materiale infecte).

15
16
Autoclave

17
18
 Controlul sterilizrii n autoclav
Se folosesc tuburi din sticl ce conin
substane sub forma de pulbere, cu punct
de topire cunoscut, n jur de 120C
(parachinona, sulf, acid benzoic).
Se aeaz n autoclav o dat cu obiectele
de sterilizat; dac n autoclav s-a ajuns la
temp. de topire a acestor substane, dup
deschiderea autoclavului se va observa c
sunt solidificate n bloc.
19
 1.A.1.2. STERILIZAREA PRIN CLDURA
UMED
FIERBEREA

Prin fierbere timp de 30 minute se distrug

bacteriile n forma vegetativ, virusurile i
fungii, dar rezist unii spori bacterieni.

20
 1.A.1.3. STERILIZAREA PRIN CLDURA
UMED
TINDALIZAREA
= sterilizare fracionat prin meninerea
substanelor la temperaturi de maximum 100C
timp de 30 60 minute, succesiv, timp de mai
multe zile (3 8).
n intervalele dintre nclziri, recipientele se
menin la temperatura camerei, timp n care
eventualii spori prezeni n preparat vor trece n
forma vegetativ i astfel vor fi distrui la
nclzirea ulterioar.
21
 1.A.1.4. STERILIZAREA PRIN CLDURA
UMED
PASTEURIZAREA
= prin nclziri la 62 - 85C pe perioade de timp
variabile
Este o metod de conservare a unor produse
alimentare (lapte, bere, sucuri, conserve).
Sunt distruse formele vegetative ale bacteriilor i
fungii, dar rezist sporii i enterovirusurile.
n functie de temperatur, se disting 3 tipuri de
pasteurizare:
- nalt: 8 15 sec. la 85C
- Mijlocie: 15 min. la 71 74C
- Joas: 30 min. la 62 - 65C
22
toate etapele fiind urmate de rcire brusc la 4C.
 1.A.1.4. STERILIZAREA PRIN CLDURA
UMED
PASTEURIZAREA

Pasteurizarea = sterilizare partial, fiind distruse

doar formele vegetative, prin coagularea
proteinelor la temp. sub 100C.
Metoda reduce nr. microorganismelor i opreste
trecerea sporilor n forme vegetative.

23
24
Equipment for the high-temperature short-time pasteurization of milk.

25
26
 1.A.2.1. STERILIZAREA PRIN CLDUR
USCAT
CUPTOARE CU AER CALD (ETUVE)

Formele vegetative ale bacteriilor sunt

distruse prin cldura uscat n 10 minute
la 60 80C.
Sporii cei mai rezistenti sunt cei ai speciei
B. stearotermophilus (rezist 20 minute la
180C).

1 ora 180 C 27
 1.A.2.1. STERILIZAREA PRIN CLDUR
USCAT
CUPTOARE CU AER CALD (ETUVE)

Ce se poate steriliza prin cldura uscat?

- Sticlrie de laborator
- Obiecte de porelan
- Unele instrumente medicale
- Substane sub form de pulbere
- Soluii neapoase

28
 1.A.2.2. STERILIZAREA PRIN CLDUR
USCAT
ADUCEREA LA INCANDESCEN

Se sterilizeaz ansa bacteriologic i

spatula.
Nu se indic utilizarea acestei metode
pentru instrumentele medicale care se pot
degrada.

29
 1.A.2.3. STERILIZAREA PRIN CLDUR
USCAT
FLAMBAREA

= trecerea prin flacr timp de cteva

secunde a obiectului de sterilizat (gura
eprubetelor, flacoanelor, partea efilata a
pipetelor Pasteur etc.)

30
 1.A.2.4. STERILIZAREA PRIN CLDUR
USCAT
INCINERAREA
Se folosete pentru materialele infectate
care nu se recupereaz:
- Seringi de unic folosin
- Pansamente
- Animale de experien
- Deeuri biologice rezultate
din laboratoarele de microbiologie

31
 1.A.2. STERILIZAREA PRIN CLDUR
USCAT

Mecanismul distrugerii bacteriilor prin

caldur uscat const n:
- accelerarea fenomenului de oxido reducere
- asfixie
- coagulare
- carbonizare.

32
 1.B. FRIGUL
Bacteriile suport, n general, mai bine
temperaturile sczute dect pe cele
ridicate.
La temperaturi sub cea minim de
cretere, metabolismul i nmulirea
bacteriilor nceteaz, majoritatea trecnd
n stare de laten.

33
 1.B. FRIGUL
REFRIGERAREA
La +4 +10C majoritatea bacteriilor
rezist luni i ani de zile, cu condiia
evitrii uscrii.
Unele bacterii care se ntlnesc numai la
om (meningococii, gonococii) nu sunt
rezistente i mor repede la temperaturi
sub cea optim.

34
 1.B. FRIGUL
CONGELAREA
n general, la 0C efectul temperaturii este
bactericid, efect crescut prin operaii
repetitive de ngheare dezgheare.
Moartea bacteriilor se produce prin
nghearea apei din constituia lor, cu
formarea de pungi cu soluii
hiperconcentrate, care au efect toxic
i/sau producerea de cristale de ghea.

35
 1.C. USCAREA
Aciunea uscrii difer n funcie de forma
de via a bacteriilor.

Formele vegetative sunt mai sensibile,

fiind distruse prin concentrarea srurilor i
denaturarea fizico chimic a proteinelor.

36
 1.C. USCAREA
Pentru formele vegetative, rezistena la uscare
depinde de coninuul n lipide al nveliurilor
celulare cu ct cantitatea de lipide este mai
mare, cu att pierderea de ap se produce mai
ncet.
De exemplu:
micobacteriile care au n compoziia lor 40% lipide rezist
timp de 6 8 luni n praf,
bacilii Gram (-) cu 20% lipide rezist doar 1 2 sptmni
pneumococul moare n cteva ore n condiii de uscciune
gonococul se distruge imediat.
37
 1.C. USCAREA

Pentru conservarea bacteriilor n laborator

se ntrebuinteaz liofilizarea, metod de
uscare n stare de congelare sub vid.

Prin liofilizare, bacteriile pot supravieui

timp ndelungat chiar pstrate la
temperatura camerei.

38
 1.D. RADIAIILE
U.V. LUMINA SOLAR
Lumina solar, datorit coninutului n U.V. are
efect bactericid, efect influenat de
permeabilitatea atmosferei.
Lumina solar constituie factorul principal de
reducere a florei microbiene a aerului, de pe
suprafaa solului i n apele limpezi, puin
adnci.
Timpul de distrugere este variabil n funcie de
specia bacterian: 1h pentru Escherichia coli, 2
3 h pentru Salmonella typhi i 5 7 ore pentru
Mycobacterium tuberculosis. 39
 RADIAIILE
U.V.
U.V. (240 280 nm) distrug bacteriile:

direct prin absorbia lor de ctre acizii nucleici

i proteinele bacteriene, absorbie urmat de
rupturi ale legaturilor chimice cu formarea de noi
legturi ntre pirimidine
indirect prin modificri ale mediului
producerea de ozon n aer i peroxizi n ape,
compusi care nu au aciune antibacterian.

40
Ultraviolet lamps are used to sterilize workspaces and
tools used in microbiology laboratories and health care
facilities.

41
 1.D. RADIAIILE
RADIAIILE IONIZANTE
Radiaiiile X i gamma (cele mai
penetrante i eficiente, provenite de la
60Co i 137Cs) au efect bactericid prin

ionizare, cu formare de radicali de oxigen

bactericizi.
Radiaiile ionizante se folosesc pentru
sterilizarea produselor termolabile (ex.
instrumentar medical din material plastic
de unica folosin).
42
 1.E. ULTRASUNETELE
Efectul bactericid se exercit datorit
fenomenului de cavitaie, prin activarea
gazelor dizolvate n citoplasm, urmat de
ruperea peretelui celular.
n medicin, ultrasunetele se folosesc la
sterilizarea unor instrumente medicale.

43
 1.F. PRESIUNEA MECANIC
Majoritatea bacteriilor n forma vegetativ
rezist bine la 3.000 atm., pierderea
viabilitii producndu-se dup 14 ore la
6.000 atm.
Sporii bacterieni sunt mult mai rezisteni,
necesitnd pentru inactivare 12.000
20.000 atm.

44
 1.G. PRESIUNEA OSMOTIC
La o presiune osmotic mai mare, n mediu
hipertonic, se produce uscarea osmotic a
bacteriilor, prin trecerea n stare de laten sau
moartea lor. Apa iese din celul, citoplasma se
retract mpreun cu membrana citoplasmatic,
care se desprinde de peretele bacterian.
Hiperosmolaritatea se folosete n conservarea
alimentelor prin concentraii mari de sare sau de
zahr.
n medii hipotone, celula bacterian se
hidrateaz, devine turgescent, se rup
nveliurile, obinndu-se moartea celulei. 45
 Filtrarea
Este o metod de sterilizare prin care
microorganismele sunt reinute de o
substan poroas.
Se realizeaz la temp. camerei i se aplic
unor lichide biologice sau soluii
injectabile, care se altereaz prin tratare
termic.

46
This water filter for hikers and backpackers is advertised to "eliminate Giardia,
Cryptosporidium and most bacteria." The filter is made from 0.3 micron pleated
glass fiber with a carbon core.

47
48
 A typical set-up in a microbiology laboratory for filtration sterilization of medium
components that would be denatured or changed by heats sterilization of medium

components

49
 2. Ageni chimici
a) Oxidul de etilen
Este un gaz cu mare putere de penetrabilitate. Poate penetra prin:
mase plastice, cauciuc, lemn, hrtie, textile. Sterilizarea se face cu
un aparat special cu funcionare automat, asigurnd temperatura n
etuv de 40C.
b) Aldehidele
Cea mai folosit este glutaraldehida. Are aciune bactericid,
fungicid, viricid. Realizeaz dezinfecii chir i n prezena unor
substane organice cum ar fi: snge, plasm, urin.
Se pot steriliza instrumente pentru chirurgia laparoscopic i
materiale din plastic.
c) Formolul
Se utilizeaz foarte puin, o dat cu introducerea glutaraldehidei.
50
Astzi se mai folosete doar la dezinfecia ncperilor.
 ANTISEPSIA
ANTISEPTICELE = Substane care distrug microorganismele, dar nu sunt
toxice pentru organismul viu, ele fiind utilizate n aplicaii pentru tegumente
i mucoase i pentru splarea plgilor.

DEZINFECTANTELE = Substane bactericide mai puternice, iritante pentru

organismul viu, din aceast cauz fiind utilizate pentru distrugerea
germenilor de pe obiecte, suprafee, produse septice.

Pentru a putea fi utilizate ca antiseptice, substanele chimice trebuie :

S aib capacitate bactericid.
S fie lipsite de miros neplcut.
S aib proprieti antiseptice n orice mediu.
S fie uor solubile n ap i s dea amestecuri stabile.
S nu acioneze asupra esuturilor.
S fie ieftine i uor transportabile. 51
 PRINCIPALELE GRUPE DE ANTISEPTICE

1. Substane pe baz de iod. Acioneaz asupra fungilor i bacteriilor,

inclusiv formele sporulate. Pentru majoritatea sunt bactericide. Iodul
ptrunde n anfractuozitile tegumentelor i n porii glandelor, distrugnd
germenii din glomerulul acestora. Exist n diverse combinaii:
- Tinctura de iod - soluie alcoolic 2%+ iodur de sodiu 2%, folosit
curent pentru tegumente
- Soluie Lugol - alctuit din iod 5% i iodur de potasiu 10%
dizolvate n ap, cu slab activitate antiseptic
- Iodoforii - combinaii ale iodului cu detergeni,
polivinilpirolidon, realiznd substane active n timp,
cu activitate antiseptic puternic, n soluii slabe
putnd fi utilizate i la splarea plgilor. Cel mai
cunoscut produs este Betadina.
52
2. Alcoolii
Alcoolul etilic este unul din cele mai folosite antiseptice pentru tegumente.
Concentraia optim este de 70-100% . Este bactericid dar nu omoar sporii.
Proteinele l inactiveaz.
3. Substane pe baz de clor
Elementul activ al acestor substane este clorul. Acesta este pus n libertate
sub form de clor activ i i exercit aciunea bactericid.
- Hipocloritul de sodiu Este o soluie apoas de clor tamponat cu
bicarbonat de calciu; produce dizolvarea esuturilor necrozate i
dezodorizeaz plgile. Precauie n plgile sngernde deoarece
dizolv cheagurile.
- Cloramina B Sub form de pulbere sau comprimate de 500 mg. Are
aciune bactericid n special asupra bacililor gram-negativi i BK. Se
pot folosi soluii 0,2-2 %.
- Clorhexidina Compus al clorului cu acidul acetic. Are o bun toleran
53
local. Soluia 0,05% se utilizeaz pentru plgile i suprafeele arse.
4. Substane care degaj oxigen
Oxigenul acioneaz n special asupra germenilor anaerobi. Se utilizeaz n
tratamentul plgilor infectate cu anaerobi sau delabrante. Cele mai utilizate
sunt:
- Apa oxigenat Soluie apoas 3% peroxid de hidrogen. Are aciune
bactericid dar i mecanic datorit efervescenei produs n esuturi.
De asemenea are i aciune uor hemostatic.
- Acidul boric Sub form de soluii 2-3 % pentru splarea plgilor
- Permanganatul de potasiu Se utilizeaz sub form de soluii 1-3 %0
pentru splturi vaginale, uretrale i splarea plgilor
5. Mercurul
Se folosete sub forma srurilor de mercur, care au n special aciune
bacteriostatic. Cele mai folosite sunt:
- Mercurocromul cu aciune puternic bactericid n special asupra
stafilococului. Se folosesc soluii apoase i hidro alcoolice 2-4%
- Fenosept este o soluie apoasa de borat fenil mercuric 0,2%. Are
54
aciune bacteriostatic i fungistatic.
6. Coloranii
Sunt bazici i acizi. Cei acizi sunt mai puin eficieni. Aciunea antibacterian
este echivalent cu mecanismul coloraiei, formndu-se sruri cu
protoplasma celular.
7. Detergenii
Posed nalte caliti bactericide i bacteriostatice. Acetia emulsioneaz
grsimile i uleiurile, dezorganizeaz membrana, inactiveaz enzimele, etc.
Cei mai utilizai sunt:
- Bromocetul Soluie hidroalcoolic de bromur de cetilpirinum 0,1%
utilizat n plgi
- TEGO 103G Soluie 0,1 % utilizat pentru dezinfecia lenjeriei i a
tegumentelor
- Deconex Produi cu aciune puternic inclusiv asupra HIV i VHB
- Surfanios Soluie 2% 55

- Hexanios Soluie diluat 0,5%

 https://www.youtube.com/watch?v=zDmP14twN8g

Metode de sterilizare in lab de microbiologie

https://www.youtube.com/watch?v=0dlDf8HiiQw
Cum sa folosesti un autoclav!

56