LZ NFZCL

2. 1.
Biologia molecular a excitabilitii celulare

Excitabilitatea este capacitatea (condiia) unui sistem viu de a capta semnale sau mesaje, ca form de actualizare a informaiei, necesare organizrii lui ntru existen (Zgrean L. 2002). Din aceast tentativ de definiie reiese c excitabilitatea este o condiie sine qua non a existenei oricrui sistem viu, de la cel unicelular pn la cel mai complex sistem pluricelular. Dealtfel, capacitatea de a capta i prelucra sau decodifica semnalul purttor de informaie i de a rspunde printr-o reacie biologic corespunztoare, se manifest de la cele mai simple forme de organizare a materiei vii i se continu, trecnd prin structuri din ce n ce mai specializate, pn la capacitatea de a controla i modela reacia de rspuns n raport cu parametrii determinani i proiectai n viitor, deci cu finalitate programat (fig.2.1). Relaia indestructibil dintre excitabilitate i existena sistemului viu este susinut de suportul comun al excitabilitii, indiferent de complexitatea sistemului biologic.
Excitabilitate
Identitate
Transport ionic membranar
Evoluie
Adaptabilitate
Fig. 2. 1. Interrelaiile dintre transportul ionic membranar i principalele dimensiuni ale existenei sistemelor biologice.
Acest suport este reprezentat, n general, de dinamica repartiiei ionilor la nivelul membranelor celulare. La rdul ei, dinamica repartiiei ionilor rezult din interaciunea legilor termodinamicii, masei, i cmpului electromagnetic cu sistemul de transport ionic membranar (STIM)Fig.2.9. n ciuda caracterului relativ restrictiv att al legilor fizice, ct i al funciei STIM, repartiia ionilor de o parte i de alta a membranei celulare - interfaa funcional dintre semnal i celula excitabil - reprezint un sistem departe de echilibru. Ca urmare, excitabilitatea, la nivel celular, i, mai ales, la nivel de sistem megacelular, cum este creierul uman, reprezint o dimensiune a crei limite, sunt dificil de cuantificat. Cu toate acestea, cuantificarea limitelor/parametrilor excitabilitii sistemului nervos i muscular este o necesitate fundamental att din perspectiv clinic ct i a cunoaterii celui mai complex sistem de prelucrare i, posibil, de generare a informaiei. Rspunsul oricrei structuri vii la aciunea unnui semnal este rezultatul interaciunii specifice dintre semnal, ca suport al informaiei i o structur capabil s decodifice i s-i preia mesajul informaional. Ca urmare a interaciunii, semnalul devine stimul iar structura ce preia informaia se definete ca receptor, stabilindu-se, astefel, relaia de condiionare reciproc funcional ntre cele dou sisteme.
66
Selecie din NEUROELECTROFIZIOLOGIE CLINICA. Editor: Leon Zgrean, 2005
Deoarece este dificil de a stabili de la ce nivel de organizare a materiei aceste tipuri de interaciune pot fi cuantificate printr-un rspuns reproductibil, obiectivul acestui capitol este prezentarea mecanismelor moleculare ce stau la baza excitabilitii celulelor nervoase i musculare, precum i extrapolarea lor, prin cuantificare/standardizare, n vederea utilizrii parametrilor rezultai n scop diagnostic i/sau terapeutic. Prezentarea mecanismelor i parametrilor excitabilitii va fi n raport cu relaia funcional ce se stabilete ntre elementele implicate n definirea excitabilitii (fig. 2.2).
SISTEM
CELUL
RECEPTOR
STIMUL
RSPUNS
Fig. 2.2. Interrelaia dintre elementele ce definesc excitabilitatea
Principiul fundamental al rspunsului unei celule la aciunea stimulului const n modificarea rapid a echilibrului dinamic iniial al repartiiei ionilor de o parte i de alta a membranei celulare. Modificarea repartiiei ionice, realizat prin intermediul STIM, este nsoit de o modificare brusc a potenialului electric membranar, modificare ce constituie formarea potentialului de aciune. Integrarea funcional a ecuaiei stimul-rspuns din perspectiva temporal este de multe ori la fel de important ca i excitabilitatea nsi. n acest sens transportul ionic transmembranar, corespunztor tuturor proceselor implicate n excitarea sau activarea unei celule, se realizeaz prin mecanism pasiv, fr a necesita reacii chimice productoare de energie necesar deplasrii unui numr de ioni echivalent cu o variaie de potenial membranar de cca 500 V. n realitate, transportul ionic rspunztor de excitarea celular necesit un consum mare de energie, dar aceast energie se obine prin transformarea energiei poteniale acumulat n gradientul electrochimic transmembranar ionic n energie cinetic. Energia potenial a gradientului electrochimic ionic se obine din procesele metabolice celulare i se acumuleaz prin transportul ionic activ, contra gradientului de concentraie, n special a Na+ din compartimentul intracelular n cel extracelular, i a K+ n sens opus. Astfel, pentru transportul ionic activ se consum, n timpul repausului, cca. 50% din energia produs de celula nervoas. n acest fel se ctig timp, n obinerea rspunsului, cu alte cuvinte, transportul ionic corespunztor excitrii celulare se realizeaz mult mai rapid n condiiile eliberrii energiei poteniale a gradientului electrochimic. Primul element al ecuaiei stimul rspuns din fig. 2.2 este stimulul. Natura stimulilor ce acioneaz n, i asupra organismului este foarte variat. innd seama de natura stimulului i de principiu c excitarea / activarea unei celule respect principiul cauz-efect, n sensul c orice rspuns, implicit, potenialul de aciune, este efectul unei cauze (stimul), se pot descrie trei mecanisme de excitare/activare a celulelor: 1. Excitarea de ctre un stimul fizic (electromagnetic-luminos, acustic, termic, modificarea brusc a dimensiunilor unei celule) a receptorului specific sau excitarea artificial a celulei nervoase de un stimul electric sau magnetic;
67
2. Excitarea de ctre un stimul chimic din mediul extern a receptorului specific (gust, olfactiv), sau excitarea de ctre neuromediator a unei celule nervoase; 3. Excitarea prin mecanisme celulare intrinseci autoexcitare. Acest mecanism de excitare asigur desfurarea unor funcii vitale (respiraia, activitatea cardiac .a) iar, n ultimul timp, sunt tot mai multe argumente care susin implicarea lui n activitatea cortical. Toate aceste mecanisme de excitare au un factor comun- potenialul de aciune n diferite ipostaze care, fiind, relativ, uor cuantificabil/msurabil, reprezint, n general, principalul obiect de lucru pentru neuroelectrofiziologia clinic. Astfel, tehnicile neuroelectrofiziologice fie, utilizeaz un curent electric standardizat, n raport cu obiectivul urmrit, ca stimul pentru a msura, apoi rspunsul electric al celulei/celulelor, din perspectiva mai multor parametri (de timp, amlitudine), fie, urmresc generarea natural i conducerea potenialelor n sistemul nervos, sau, n fine, rspnsul efector (contracia muscular). Principiul i metodologia principalelor tehnici de investigare medical vor fi prezentate n capitolele acestei cri. Pentru o bun utilizare a tehnicilor neuroelectrofiziologice i o interpretare ct mai just a rezultatelor obinute vor fi prezentate, n continuare, mecanismele interaciunii dintre stimul i celul a crei consecin este generarea potenialului de aciune. Capacitatea celulei de a rspunde la un stimul specific depinde de polaritatea membranar din momentul aciunii. Pentru o bun nelegere a fenomenului de polaritate membranar sunt necesare cteva precizri. Termenul de polaritate electric membranar nu se refer la o diferen de repartiie a numrului total de anioni sau cationi ntre compartimentul extra- i intracelular, deoarece numrul total al sarcinilor anionice este considerat egal cu cel al sarcinilor cationice, att n fiecare din cele dou sectoare, intra- i extracelular, ct i ntre ele (fig. 2.3).
Fig. 2.3. Repartiia ionilor n sectorul intra- i extracelular. Numrul sarcinilor cationice i anionice este egal pentru fiecare compartiment i ntre cele dou compartimente. n apropierea faei extracelulare sunt dispui cationi iar a celei intracelulare, anioni,
Polaritatea electric de repaus a membranei rezult, pe de o parte, din repartiia mai bogat a sarcinilor pozitive n apropiere feei externe i a celor negative n apropierea feei citoplasmatice, iar,
intracelular
extracelular
68
pe de alt parte, din repartiia inegal, de o parte i de alta a membranei celulare, a fieccruia dintre principalii ioni implicai n polaritatea membranei celulare (Na+ , K+ , Ca++, Cl-) Dispunerea preponderent a cationilor i anionilor pe cele dou fee ale membranei celulare reprezint doar o fraciune mic din cantitatea acestora i se datoreaz prezenei n concentraie mai mare a unor molecule ncrcate negativ (aminoacizi, proteine) n sectorul intracelular, molecule ce nu pot difuza prin membrana celular. Repartiia inegal a principalelor tipuri de ioni de o parte i de alta a membranei celulare -polaritatea membranar- reprezint condiia principal a excitabilitii celulare i este rezultatul activitii componentelor STIM: canale, pompe i transportori.
2.1.1. Sistemul de transport ionic membranar (STIM).

STIM este constituit din structuri proteice transmembranare a cror funcie principal este transportul ionilor prin membranare celulare(Fig.2.9). Aceast funcie a STIM completeaz funcia membranei celulare de a asigura identitatea celular din punct de vedere a compoziiei chimice citoplasmatice n n raport cu mediul extracelular i , n acelai timp de a permite schimbul informaional cu mediul extracelular. Urmare funciei de transport a STIM se ndeplinesc att condiia de meninere a identitii celulare - nici o specie ionic nu se afl n aceeai concentraie, de o parte i alta a membranei celulare - ct i cea de schimb informaional, via excitabilitate, transport ionic transmembranar controlat. Moleculele proteice ce constituie STIM reprezint o proporie important din totalitatea proteinelor membranare, controlul sintezei lor necesitnd pn la 20 % din genele unei celule, dei majoritatea acestor proteine au o lung existen filogenetic. Un exemplu n acest sens, calmodulina, o protein reglatoare a transportului celular de Ca++, se pare a fi aprut odat cu celulele eucariote, pstrndu-se n regnul vegetal i animal. STIM Diversificarea i creterea numrului de structuri cu funcie de transport ionic constituie aspectul cel mai important al specializrii celulelor nervoase i musculare ca celule excitabile. Mai mult, pentru asigurarea parametrilor funcionali ai excitabilitii neuronale, celulele gliale intervin printr-un STIM mai puin complex, comparativ cu cel neuronal, n meninerea compoziiei electrolitice a lichidului interstiial n limite care s favorizeze transportul ionic n neuronii nvecinai. n raport cu mecanismul de transport ionic structurile proteice ce constituie STIM sunt denumite canale, pompe i transportori.
2.1.1.1. Canalele ionice

Din punct de vedere chimic, canalele ionice sunt formate din glicoproteine cu mas molecular cuprins ntre 25 i 250 kDa. Acestea sunt organizate n dou sau mai multe subuniti identice sau diferite ce delimiteaz un canal central al crui lungime este egal cu grosimea membranei celulare (Fig. 2. 7 , 2.8). Dei au fost intuite din punct de vedere al funciei lor, nc de la sfritul sec XIX, studiul lor a nceput odat cu dezvoltarea tehnicii de patch-clamp de ctre Erwin Neher i Bert Sakmann din anul 1976. Tehnica de patch-clamp const n fixarea, prin suciune, pe vrful unei micropipete din sticl, cu diametrul de 1, a unei suprafee corespunztoare din membrana unei celule. Prin nregistrarea curenilor de membran cu ajutorul unui microelectrod plasat n interiorul pipetei, se poate selecta o zon din membran coninnd un singur canal ionic(Fig.2.4). n ultimul deceniu, abordarea din perspectiva genetic a cercetrii canalelor ionice a deschis un nou domeniu al patologiei canalopatii. Patologia legat de alterarea funciilor celulelor nervoase i musculare ca urmare a alterrii controlului genetic al sintezei proteinelor din structura STIM este
69
deosebit de complex i are un impact deosebit innd seama de implicarea transportului ionic n desfurarea diverselor funcii ale sistemului nervos i muscular. Pentru o clasificare a canalopatiilor neurologice vezi Graves D.T.2005, iar pentru implicarea canalelor ionice n diferite forme ale sindromului de epilepsie idiopatic vezi Mulley C.J. 2003. Numrul tipurilor de canale ionice cunoscute pn n prezent este peste 100, dar innd seama de faptul c prima descriere a structurii secundare a unei proteine ce formeaz un canal a fost realizat relativ recent, (Huang, 1982), este de ateptat o cretere semnificativ a acestei valori. Mecanismul de funcionare al acestui sistem de transport reprezint unul din criteriile de clasificare a canalelor ionice i va fi prezentat pentru fiecare din tipurile mai bine cunoscute, dar prezentarea ctorva principii Fig. 2.4 Fixarea micropipetei pe membrana celular cu generale de funcionare, este util n vederea izolarea unui canal ionic controlat de acetilcolin, pentru nregistrea curenilor prin metoda patch clamp. (Modificat formrii unei imagini de ansamblu asupra dup Kandel.E. 2000 transportului ionic prin canalele membranare. n celula nervoas i muscular canalele ionice permit un flux de cca. 100 000 000 ioni, calculat pentru fiecare secund de excitare/canal. Aceast deplasare rapid a ionilor este pasiv numai aparent pentru c, n realitate, ea este determinat de o for ce rezult din gradientul electrochimic, pentru care s-a consumat energie n timpul ct celula era n stare de repaus. Dac analizm i mai atent acest proces constatm c la meninerea concentraiei ionice a lichidului interstiial dintr-o anumit zon particip toate celulele din zona respectiv iar probabilitatea ca toate aceste celule s fie excitate simultan este foarte mic. Ca urmare, dei fiecare excitare celular necesit un influx mare de ioni de sodiu i este condiionat de un eflux de K+ , iar capacitatea de transport a pompelor Na+ K+, deci de restabilire a concentraiilor, raportat la unitatea de timp este de aproximativ 1000 de ori mai redus dect cea a canalelor ionice, este puin probabil ca prin excitarea repetat, fiziologic, a unei celule s se produc o scdere a concentraiei extracelulare a Na+ sau o scdere a concentraiei intracelulare a K+, pn la limita perturbrii excitabilitii. Un alt principiu de funcionare a canalelor ionice este capacitatea lor de a selecta, ntr-un grad mai mare sau mai redus transportul ionic. Majoritatea canalelor permit trecerea unui singur element ionic, dar exist i canale ionice permeabile pentru mai multe tipuri de ioni. Primul sau cel mai general grad de selecie este cel n raport de tipul de sarcin, pozitiv sau negativ. Astfel exist canale selective cationice, permisive pentru ionii din lichidul extracelular: Na+, Ca2+ i Mg2+, dar cu o distribuie i funcie mai puin cunoscut. Toate canalele anionice sunt permeabile la Cl-. Dac mecanismul de selecie a cationilor i anionilor este relativ simplu fiind dependent de sarcina electric a aminoacizilor din structura canalelor, mecanismul selectrii unui singur tip de ion din categoria cationilor, este mai puin cunoscut. Unul din criteriile implicate n procesul de selectare ionic este diametrul canalului i al ionului. Referitor la acest criteriu sunt necesare cteva precizri. n primul rnd, diametrul ionilor aflai n lichidele organismului este mai mare dect cel al atomului fizic deoarece moleculele de ap sunt atrase electrostatic de ctre cationi, prin intermediul atomului de oxigen, i de ctre anioni prin intermediul hidrogenului, formnd un strat mai gros de molecule de ap,
70
pentru ionii cu diametrul mai mic. Astfel diametrul ionilor de sodiu poate deveni mai mare dect cel al ionilor de potasiu. n al doilea rnd, conform rezultatelor cercetrilor realizate de ctre George Eisenman i Bertil Hille, canalele ionice prezint o zon mai ngust ce acioneaz ca un filtru de selectare a ionilor. Procesul de selectare la acest nivel nu se face numai n funcie de diametrul iniial al ionilor hidratai deoarece acetia pierd o parte din moleculele de ap datorit unor interaciuni chimice ce se realizeaz ntre ei i aminoacizii din peretele canalului. Pierderea moleculelor de ap este proporional cu interaciunea electrostatic dintre ioni i aminoacizii din structura canalului. Dac aceast for electrostatic este mai mic dect cea dintre ioni i moleculele de ap acetia nu vor putea strbate filtrul iar, dac este mai mare, legtura chimic format va avea o durat mai mic de 1s. Dup acest timp de recunoatere ionul este eliberat, putnd astfel, s-i recapteze moleculele de ap. n general, sensul de deplasare a ionilor este unic, n acest caz, canalele comportndu-se ca un rezistor n care fluxul de curent (ioni) variaz liniar cu gradientul electrochimic. Exist un numr mai mic de tipuri de canale prin care fluxul nu variaz liniar cu fora gradientului electrochimic, comportndu-se ca un rectificator sau redresor. Aceste canale intervin n restabilirea potenialului de membran. Dac deplasarea ionilor prin canalele membranare este, n primul rnd, asigurat de ctre fora generat de gradientul electrochimic, deschiderea i nchiderea canalelor este un proces complex controlat de mai muli factori. Trecerea dintr-o stare n alta a canalelor se realizeaz prin modificri conformaionale ale proteinelor ce le compun, induse de factorul de control al deschiderii sau nchiderii canalului respectiv. Studii genice i electrofiziologice au stabilit c, n ciuda diversitii mari a tipurilor de canale, se cunosc doar trei familii principale de gene ce controleaz sinteza proteinelor din structura lor, i, mai mult toate canalele aparinnd unei familii genice au acelai mecanism funcional de control. Una dintre aceste familii este rspunztoare de formarea canalelor ionice controlate de valoarea potenialului electric al membranei neuronale. Acest tip de canale denumite canale controlate de voltaj sau canale voltaj-dependente include pe cele selective pentru Ca2+, Na+, i K+. Canalele ionice controlate de ctre transmitori sunt codificate de o alt familie de gene i cuprind canalele ce prezint receptori pentru acetilcolin(Ach), acid -aminobutiric (GABA), glicin etc. A treia familie de gene controleaz sinteza proteinelor ce formeaz canalele ionice din structura sinapselor electrice. n general, dup modul lor de funcionare canalele sunt de dou categorii principale: canale fr poart (nongated ion channels) care sunt deschise permanent, deci permit transportul ionic n funcie doar de gradientul electrochimic; canale cu poart (gated ion channnels) a cror deschidere i nchidere este controlat prin mai multe mecanisme. Canalele ionice fr poart Cunoscute i sub numele de canale de scurgere (din engl. leakage channels), permit deplasarea pasiv a ionilor de K+, Na+ , Cl- i Ca2+ n timpul ct membrana plasmatic prezint potenial de repaus. Identitatea canalelor de acest tip nu este pe deplin elucidat dar permeabilitatea lor este mult mai mic n comparaie cu a celor controlate de voltaj sau de neurotransmitor. Dealtfel, ntre transportul ionic prin aceste canale i cel realizat prin intermediul pompelor exist o interdependen al crui rezultat este stabilirea unei stri de echilibru ntre cele dou sisteme de transport.
71
Canalele fr poart pentru sodiu permit influxul pasiv al acestui cation n timpul repausului fiind n echilibru cu efluxul lui realizat de ctre pompa Na+ - K+ . O importana deosebit au canalele fr poart, n special, cele de Na+ pentru celulele nervoase ce prezint capacitatea de a genera spontan, poteniale de aciune, Canalele fr poart pentru clor au o repartiie celular asemntoare celor pentru Na+ , dar rata lor de transport este, probabil, mult mai mic datorit concentraiei mari a anionilor intracelulari. Din cele prezentate, rezult c transportul ionic prin aceste canale ionice se realizeaz conform gradientului electrochimic dar fr a se ajunge niciodat la egalizarea concentraiilor dintre cele dou sectoare separate de membrana celular. Explicaia const n faptul c dei canalele fr poart nu prezint un sistem propriu de control, fluxul ionic prin intermediul lor este modulat, pe de o parte, de capacitatea mai mic de transport fa de canalele controlate iar, pe de alt parte, concentraia intracelular mare a anionilor organici fixeaz electrostatic K+. n acest fel, n ciuda gradientului de concentraie i a unui numr mare de canale fr poart, efluxul de K+, semnificativ din punct de vedere cantitativ, nu poate avea loc dect n urma unui influx corespunztor de sarcini pozitive. Aceast condiie se realizeaz n timpul depolarizrii, cnd, pentru majoritatea celulelor influxul de sarcini pozitive este produs de Na+. Dar n aceste condiii efluxul de K+ va avea loc prin canalele controlate, a cror rat de transport este mult mai mare dect a celor fr poart. O alt funcie important a canalelor de acest tip, dar, n general, mai puin prezentat, este meninerea homeostaziei presiunii osmotice i, implicit, a volumului i formei celulare. Aceast funcie este ndeplinit prin faptul c pe lng permeabilitatea fa de ioni, canalele permit difuzia moleculelor de ap. Canale ionice cu poart Dac potenialul de repaus este echilibrul dintre transportul prin intermediul canalelor fr poart i a pompelor ionice, potenialul de aciune este rezultatul transportului ionic controlat prin intermediul canalelor cu poart. Dup mecanismul de control al transportului ionic canalele cu poart pot fi: 1. canale voltaj-dependente - controlate de potenialul electric de membran; 2. canale controlate de ligani; 3. canale controlate de stimuli mecanici; 4. canale controlate de concentraia altui ion dect al celui care este transportat. n general, un canal este controlat de un singur factor dar exist canale prin care transportul este dependent de doi factori dintre care unul este principal; ex. canalele de K+ dependente de concentraia Ca2+ i de potenialul de membran.
Dintre cele patru tipuri prezentate canalele voltaj dependente i canalele mediate de transmitori sunt cele mai rspndite i studiate. ntre aceste dou tipuri de canale exist o relaie de interdependen funcional, ordinea intrrii n activitate fiind diferit n funcie de segmentul celular; n segmentul presinaptic activarea canalelor voltaj dependente determin eliberarea sinaptic a neurotransmitorului care ajuns la segmentul postsinaptic induce prin intermediul canalelor controlate chimic, modificri ale potenialului de membran care vor activa canalele voltaj-dependente care, la rndul lor, vor produce fie un potenial postsinaptic excitator (PPSE) fie un potenial postsinaptic inhibitor (PPSI). 1. Canalele voltaj dependente sunt canalele ionice a cror poart este controlat de valoarea potenialului de membran i reprezint cel mai important tip de canale implicat n generarea i transmiterea potenialului de aciune. Canalele din aceast categorie se deschid 72
atunci cnd potenialul de membran atinge valoarea proprie fiecrui tip de canal. Dup o perioad scurt de timp, specific fiecrui tip de canal, n care rmne deschis permind deplasarea ionilor, conform gradientului de concentraie, canalul se nchide. n aceast categorie sunt descrise canale pentru Na+ , K+ , Ca2+ i Cl- .
Canalele de sodiu controlate de voltaj sunt formate dintr-un lan polipeptidic coninnd cca. 2000 de aminoacizi, organizat n 4 domenii identice, care, la rndul lor conin, fiecare, 6 segmente transmembranare. Aceast structur reprezint subunitatea i este comun tuturor tipurilor de canale de sodiu voltaj-dependente. Unul dintre segmente, din fiecare unitate, conine un numr mare de resturi de aminoacizi de arginin i lizin cei mai electropozitivi aminoacizi i ndeplinete funcia de senzor de voltaj. Pe lng subunitatea canalele de sodiu voltaj-dependente mai conin nc una sau dou subuniti , n funcie de specie i esut, anexate la subunitatea . Aceste subuniti controleaz stabilitatea i sensibilitatea subunitii (C.Hammond. 2001). Variaia potenialului de membran induce modificri de conformaie spaial a proteinelor din senzor i poart determinnd deschiderea sau activarea a canalului.(Fig. 2.5). Cercetarea mecanismului deschiderii i nchiderii canalelor voltaj dependente nceput cu o jumtate de secol n urm de ctre Hodgkin i Huxley, continu s prezinte nc necunoscute. Din cercetrile, realizate de ctre cei doi pioneri ai neuroelectrofiziologiei, rezult c transportul prin canalele ionice voltaj-dependente implic modificri conformaionale reversibile a proteinelor din structura lor, induse de variaia potenialului de membran. Dealtfel Hodgkin i Huxley au prevzut sistemul de poart ca fiind o molecul cu sarcin electric pozitiv (gating charge) care, atunci cnd
Extracelular
__ + + + + + + + + + + + + + +
TTX
__ _
SCTX
+ + + + + + + + + + + + + + +
Bistrat lipidic
X BT
LA
Por
Poarta
Senzor de voltaj
Fig. 2.5. Diagrama imaginar a unitilor funcionale ale unui canal i locurile de legare propuse pentru mai multe toxine care afecteaza canalele de Na+. Receptori: TTX- tetrodotoxin i saxitonin; ScTx- toxina scorpionic si anemonic; BTX, batrachotoxina, aconitina, veratridina si grayanotoxina; LA, loc de aciune a anestezicelor locale; sarcinile electronegative de la captul extracelular al porului constituie filtru de selectivitate al canalului ionic. ( modificat dup SIEGEL, G., J. et al.).
membrana este depolarizat s-ar putea deplasa realiznd deschiderea canalului. Conform ipotezei lor, aceast deplasare ar trebui s fie nsoit de un curent de poart (gating current). Din motive tehnice acest curent nu a putut fi msurat dect aproape trei decenii mai trziu de ctre Clay Armstrong care, a sugerat un model de funcionare a canalelor voltaj-dependente conform cruia micarea ionilor prin canal, care este blocat n timpul potenialului de repaus, apare cnd membrana celular este depolarizat pn la o valoare denumit potenial prag. Odat atins valoarea potenialului prag, poarta se dechide i influxul de sodiu continu pn cnd este activat componenta de inactivare a canalului, care va opri fluxul ionic.
73
Distribuia canalelor de Na+ voltaj-dependente a fost cercetat prin marcarea unor substane care se leag specific de structura proteic a canalului. Deoarece substanele cu aceast proprietate, produc blocarea canalelor ionice i, implicit pierderea funciei de excitabilitate, sunt denumite neurotoxine (tetrodoxina (TTX), batrachotoxina). Din studii electrofiziologice efectuate n paralel cu curba de legare a TTX rezult c viteza de conducere a impulsului prin axoni crete proporional cu densitatea canalelor; axonii nemielinizai prezint un numr relativ mic de canale din aceast categorie, densitatea fiind cuprins, n funcie de celul, ntre 35 i 500 de canale/m2. n cazul densitii de 500 de canale/m2 suprafaa din membrana celular ocupat de ctre acestea nu depete 1/10 din suprafaa total celular. Variaia de potenial nregistrat prin patch-clamp n timpul influxului prin canalele de Na+ voltaj-dependente corespunde ratei de transport ionic calculat la o valoare mai mare de 107 ioni/sec. Cunoaterea mecanismului de aciune a substanelor care interacioneaz cu canalele de Na+ voltaj-dependente este necesar pentru trecerea de la aspectele teoretice la utilizarea blocanilor acestor canale n scop terapeutic. Blocarea canalelor de Na+ voltaj-dependente se poate realiza fie prin blocarea componentei de activare fie prin ntrzierea sau blocarea componentei de inactivare. Tetrodotoxina i Saxitoxina sunt molecule hidrosolubile i competiioneaz pentru acelai situs extracelular producnd blocarea componentei de activare. Sensibilitatea canalelor fa de TTX variaz n limite destul de mari; n timp ce majoritatea sunt blocate la concentraii nanomolare, canalele din miocard i din muchiul scheletic denervat necesit concentraii de ordinul micromolar. Veninul scorpionului nord-african ntrzie procesul de inactivare a canalului crescnd astfel volumul i durata influxului ionic. Ca rezultat apar furnicturi, senzaie de arsuri dureroase, aritmii cardiace i chiar paralizii excitatorii. Batrachotoxina i unele substane neurotoxice, extrase din plante, cum sunt veratridina i aconitidina, fiind liposolubile se leag de un situs intramembranar al structurii proteice ce constituie canalul. Efectul acestei categorii de neurotoxice este ntrzierea procesului de inactivare. Anestezicele locale, procaina i lidocaina fac parte din grupa blocanilor canalelor de Na+ voltaj-dependente i sunt folosite n practica medical pentru blocarea reversibil a conducerii potenialului de aciune n fibrele nervoase senzitive i motorii. Canalele de Ca2+ voltaj-dependente au fost descrise pentru prima dat de ctre Fatt, P. i Ginsborg, B. L. n 1958, n fibra muscular de crab. Cercetri ulterioare, au demonstrat prezena acestor canale n toate celulele excitabile (Hagiwara, 1983). Pentru multe tipuri de celule canalele de Ca2+ reprezint principala component a generrii potenialului de aciune, cum este n cazul fibrei musculare la organismele nevertebrate, a fibrei muchiului neted i a majoritii celulelor glandulare, la vertebrate. De o importan deosebit pentru reglarea contractibilitii fibrei miocardice sunt canalele de 2+ Ca de la nivelul sarcolemei i a reticulului sarcoplasmic din aceste celule. Distribuia canalelor de Ca2+ voltaj-dependente la nivelul celulelor nervoase este mult mai redus, n comparaie cu canale de Na+; n medie, densitatea canalelor de calciu nu depete valoarea de 100/m2, fiind de aproape cinci ori mai mic dect cea a canalelor de sodiu. n aceiai termeni de comparaie, o deosebire i mai mare este ntre fluxul ionic per canal 180000 de ioni de Ca2+/ sec. dei gradientul lui de concentraie este cu trei ordine de mrime mai mare dect al sodiului. Din parametrii prezentai se poate deduce c variaia curenilor generai de influxul de Ca2+ este mai lent dect n cazul influxului de Na+. Dealtfel, canalele de Ca2+ voltaj-dependente sunt mai puin implicate n transmiterea axonic, la distane mari, a potenialului de aciune. Funcia lor este mai important n
74
determinarea modelului de generare a potenialului de aciune n dendrite i corpul celular, prin controlul sintezei i, mai ales, al eliberrii neurotrasmitorului la nivelul segmentului presinaptic Dup criterii electrofiziologice i farmacologice canalele de Ca2+ voltaj-dependente sunt clasificate n dou tipuri distincte (Shepherd, 1994) : Canalele de Ca2+ de tip T se caracterizeaz prin activarea lor produs de ctre o depolarizare de valoare redus (65 mV). Activarea simultan a mai multor canale dintr-o celul determin o variaie de potenial de scurt durat sau tranzitorie, de unde deriv i numele. Canalele din acest tip sunt mai bine reprezentate n membrana plasmatic a dendritelor i a corpului neuronal. La acest nivel, prin activarea simultan a mai multor canale determinat de prezena unui numr mare de sinapse, se genereaz un potenial de aciune care este rezultatul funciei de integrare spaio-temporal ndeplinit de celula nervoas. Funcia de integrare prin intermediul acestui tip de canale ionice este de o importan deosebit datorit capacitii acestora de a integra multitudinea de semnalele sinaptice de intensitate att de mic nct pentru alte tipuri de canale voltaj-dependente este de valoare subliminar. Prin aceste particulariti de excitabilitate canalele de tip T determin descrcrile rapide ritmice, n special, de la nivelul S.N.C. Prezena semnificativ a tipului T de canale voltaj-dependente n miocard a favorizat cercetarea lor electrofiziologic la nivelul acestor celule, datorit facilitilor tehnice de laborator. Canale de Ca2+ de tip L , identificate n neuron de ctre Richard Tsien i colab. (Nowycky, 1985), se caracterizeaz prin faptul c activarea lor este determinat de un prag mai nalt de depolarizare (20 mV) iar variaia curentului indus de influxul de Ca+ este de durat mai lung, comparativ cu tipul T, de unde rezult i denumirea de canale cu activitate de lung durat (long lasting channel). Aceste canale determin, n special, n terminaiile dendritice, poteniale de Ca2+ implicate n transmiterea sinaptic. Canalele de potasiu voltaj-dependente reprezint, de departe, cea mai mare diversitate de canale ionice controlate de valoarea potenialului de membran. Dei acest tip de canale nu intervine, n mod direct, pentru realizarea funciei mesagerului chimic pentru celule, participarea lui la desfurarea activitii celulei nervoase este indispensabil. Semnificaia funcional deosebit a canalelor de potasiu rezult din faptul c ionii de potasiu sunt responsabili de controlul celui mai important factor al excitabilitii celulelor, i mai ales al celulelor nervoase potenialul membranar de repaus. Astfel, ionii de K+ controleaz majoritatea proceselor ionice membranare, responsabile de activitatea electric a celulei nervoase: meninerea potenialului membranar de repaus; scderea excitabilitii celulare prin hiperpolarizarea membranei; controlul duratei potenialului de aciune prin rapiditatea realizrii repolarizrii; controlul influxului de Ca2+ etc. Canalele de K+ prezint n structura lor una din cele patru uniti ce alctuiesc canalele de Na+ i 2+ Ca (vezi fig. 2.6). innd seama numai de funciile enumerate ale ionilor de K+ i de faptul c fiecare dintre ele este realizat prin intermediul unor canale ionice distincte, rezult complexitatea acestui sistem de transport. Deoarece este dificil realizarea unei clasificri care se respecte toate criteriile electrofiziologice i funcionale, exist mai multe clasificri din care mai cunoscut este cea propus de ctre Shepherd, G. M. 1994. dup care canalele de K+ voltaj-dependente sunt mprite n urmtoarele categorii: Canale de rectificare ntrziat (delayed rectifier), prezente, la majoritatea celulelor excitabile, sunt activate la un interval scurt dup o depolarizare puternic, iar inactivarea lor se desfoar relativ
75
lent. Durata celor dou procese variaz de la o celul la alta att de semnificativ nct nu se poate exclude posibilitatea existenei mai multor tipuri structurale incluse n aceast categorie. Rolul cel mai important al acestor canale este limitarea duratei desfurrii potenialelor de aciune. Majoritatea axonilor prezint numai acest tip de canale de K+ voltaj-dependente, dei unele zone sunt srace sau lipsite de aceste canale, cum este axolema nodurilor Ranvier. Canalele de potasiu Ca-dependente sunt activate n prezena creterii concentraiei citoplasmatice a calciului ionic. La o concentraie a Ca2+ normal, de repaus, canalele de K+ rmn nchise. Dac valoarea concentraiei citosolice crete la 10M, ca urmare a influxului de Ca2+ prin canalele voltaj- dependente, canalele de potasiu dependente de calciu, se activeaz funcionnd asemntor celor de rectificare ntrziat. Ca urmare ionii de potasiu prsesc celula determinnd o hiperpolarizare lent. Acest balans ionic are ca rezultat pstrarea n limite normale a excitabilitii celulare, opunndu-se depolarizrii precoce care ar urma unui influx de Ca2+. Unele celule pot prezenta mai multe tipuri de canale de K+ dependente de Ca2+ deosebindu-se ntre ele prin conductana determinat prin tehnica de patch clamp i prin sensibilitatea fa de diferite substane blocante.
Fig. 2.6 Structura transmembranar a canalelor ionice Kv - canale de K+ voltajdependente; Kir - canale de K+ de rectificare Kca - canale de K+ activate de Ca 2+.
Curentul de posthiperpolarizare, produs de activarea acestui tip de canale prin depolarizare, este lent, i crete n timpul descrcrilor repetitive de poteniale, reflectnd sensibilitatea lui fa de creterea concentraiei de Ca2+. Funcia acestui curent este de a determina ncetinirea treptat a descrcrilor de poteniale ceea ce permite neuronului s ntrerup descrcarea de impulsuri declanate de ctre un stimul, pentru a putea rspunde la altul. Canalele de potasiu de tip M sunt activate prin depolarizare, dar spre deosebire de alte canale ionice acestea nu prezint un mecanism propriu, specializat de inactivare. Aceste canale sunt cuplate cu receptori din membrana celular. Dintre receptorii implicai n acest proces, un receptor colinergic, muscarinic (ce confer denumirea M tipului de canale) i un receptor pentru peptidul asemntor gonadoliberinei (GnRH-like peptide), sunt mai bine cunoscui ca modulatori ai neuronilor coninnd canale de K+ de tip M.
76
Un aspect funcional interesant al acestor canale este dependena de timp. Mai mult, s-a constat c activitatea unor canale din acest tip este stimulat de ctre substanele adrenergice prin intermediul -receptorilor i de ctre somatostatin, avnd ca mesager secund AMPc. Deoarece aproape n fiecare an este descris cte un canal, cteva tipuri de canale permeabile pentru acest cation i a cror identitate structural i funcional nu este nc suficient stabilit, sunt incluse de ctre Steve Watson i Debbie Girdlestone n categoria alte canale. Din aceast categorie fac parte canale dependente doar parial de valoarea potenialului de membran. Canalele de K+ dependente de ATP sunt controlate de raportul ATP/ADP intracelular. Unele din canalele din acest tip sunt dependente i de valoarea pH -lui extracelular. Dintre blocanii i inhibitorii canalelor din acest tip fac parte tolbutamidul, fentolamina lidocaina, tetraetilamoniu (TEA), 4-aminopiridin (4 AP), .a. Canalele de K+ dependente de Na+ sunt deschise cnd concentraia intracelular a sodiului depete valoarea de 20 mM. Conductana acestor canale este mult mai mare (~ 220pS), comparativ cu celelalte canale permeabile pentru K+; 1 siemen (S) =1/ohm. Canalele din acest tip sunt blocate de ctre TEA i 4 AP. Canalele de K+ senzitive la creterea de volum a celulei se deschid atunci cnd volumul celulei crete peste valoarea normal. Activarea acestor canale este produs, n general, cnd creterea volumului celular este rezultatul unui dezechilibru osmotic ntre compartimentul intra- i extracelular, urmat de ptrunderea osmotic intracelular a apei. Mecanismul de activare al acestui tip de canale poate fi interpretat ca o reflectare a relaiei dintre concentraia mediului n care se afl celula i excitabilitatea ei. Lidocaina i qinidina sunt blocante ale canalelor de K+ dependente volumul celular. Canalele de clor voltaj-dependente sunt mai puin cunoscute i, probabil, mai puin rspndite la nivelul celulelor nervoase. Funcia lor este atestat pentru celule miocardice, fibrele musculare striate i pentru o varietate mare de celule epiteliale. Dup descrierea principalelor canale ionice voltaj-dependente, se poate constata, cu uurin, c n ciuda diversitii lor mari i a variaiilor relativ restrnse a valorii potenialului de membran, procesele de activare i inactivare a canalelor se realizeaz cu o mare precizie integrat la nivel celular i supracelular, dificil de imaginat, i, mai ales, de descris, n dinamica desfurrii lor. Participarea celor dou categorii principale de canale ionice - fr poart i controlate de voltaj la meninerea potenialului de repaus, respectiv, la generarea potenialului de aciune necesit intervenia celei de a treia categorii de canale ionice, a cror funcie este controlat de neurotransmitor sau neuromediator n vederea transmiterii semnalului de la o celul la alta. Potenialul de aciune, odat generat ntr-un segment al celulei nervoase, este transmis prin fibrele nervose pn la captul lor terminal unde, n urma unor procese declanate prin intermediul canalelor ionice voltaj-dependente, determin eliberarea transmitorului n spaiul sau fanta sinaptic.
Transmiterea informaiei mediat de transmitorul eliberat de segmentul presinaptic, la segmentul postsinaptic se realizeaz prin intermediul canalelor ionice care vor fi activate specific de ctre acesta prin cuplarea lui cu receptorii care, de cele mai multe ori, sunt inclui n structura canalelor pe care le activeaz. 2. Canalele ionice controlate de ligani sunt canale controlate de substane chimice
sintetizate fie de alte celule dect cea n structura creia se afl, fie de celula din care face parte. Canalele controlate de substane (ligani) provenind de la alte celule reprezint tipul cel mai bine cunoscut definind, n general, canalele controlate, direct, de neurotransmitor i implicate n transmiterea sinaptic rapid.
77
Fig. 2.7. Schema general a receptorului - canal mediat de Ach. 1,2,3- poziiile aminoacizilor din structura filtrului de selecie. Poarta reprezint zona cea mai ngust a porului. n partea extracelular a moleculei proteice reprezentnd receptorul-canal se afl locul de legare a transmitorului. (modificat dup Zigmond M.I. et al. 1999).
Canalele din aceast categorie, localizate n segmentul postsinaptic al sinapselor cu transmitere rapid, excitatorie sau inhibitorie, sunt adesea descrii ca receptorii ionotropici.Din aceast categorie fac parte, n general, receptorii pentru neurotransmitorii nonpeptidergici, precum acetilcolin, glutamat, glicin, ac. -aminobutiric, .a.
Fig. 2.8. Schema general a canalului-receptor pentru NMDA. Sunt prezentate, aproximativ, situsurile de legare ale agonitilor i antagonistilor. NMDA - N-metil-Daspartat; GLU- glutamat; PCP- fenciclidina; MK-801- dizocilpin, APV- D-2-amino-5phosphonopentanoic acid, 3-(2-Carboxypiperazin-4-yl)propanephosphonic acid. (modificat dup Zigmond M.I. et al., 1999).
78
Deoarece receptorii din aceast categorie sunt canale ionice ce conin n structura lor unul sau mai multe locusuri de legare a neurotransmitorului, n prezent este mai frecvent folosit termenul de receptor canal. Din varietatea mare de receptori de aceast categorie, mai bine cunoscut este receptorul-canal colinergic nicotinic (Fig. 2.7.). Acesta este format din cinci subuniti: dou , i cte una , i . Fiecare subunitate este compus din patru domenii transmembranare. Unul din domeniul fiecrei uniti conine aminoacizii ncrcai negativ orientai spre interiorul canalului i dispui in trei inele n jurul canalului porului. Aceste inele constituie filtrul de selecie a cationilor. Receptorul-canal pentru glutamat are o structur mai complex i particip la transportul de Ca2+ n celula nervoas.. Deoarece Ca2+ pe lng rolurile multiple pe care le ndeplinete, poate deveni neurotoxic la concentraii intracelulare crescute, controlul acestui canal este dependent de mai multe substane (Fig. 2.8). Canalele controlate de ligani sintetizai de celula din care fac parte pot fi: - canale controlate de proteine G sau de mesageri secunzi (Ca2+, IP3 etc.), descrise i ca receptori metabotropici, i care particip la transmiterea sinaptic lent sau la modularea transmiterii sinaptice; - canale controlate de neurotransmitor dar localizate pe segmentul presinaptic, avnd rolul de a controla eliberarea i concentraia acestuia n spaiul sinaptic (autoreceptori) De menionat c de multe ori acelai neurotransmitor poate aciona pe ambele tipuri de receptori determinnd rspuns rapid sau mai lent. Cuplarea neurotransmitorului cu canalul ionic poate avea dou efecte: a. Influxul de Na+ n segmentul postsinaptic, urmat de depolarizare i generarea potenialului postsinaptic excitator (PPSE) care se va propaga n celul. b. Efluxul de K+ sau influxul de Cl- n segmentul postsinaptic, urmat de hiperpolarizare i generarea potenialului postsinaptic inhibitor (PPSI) care se va inhiba celula, n sensul, de a diminua excitabilitatea celulei, fcnd-o mult mai greu depolarizabil. ntre cele dou tipuri de sinapse exist un echilibru ce confer starea de funcionalitate a creierului. 3. Canalele ionice controlate de stimuli mecanici denumite canale mecanosenzitive au o rspndire larg n organism att n teritoriul somatic ct i n cel vegetativ. Poarta canalelor de acest tip este ancorat prin intermediul unor proteine fibrilare de un situs de ancorare plasat la o distan corespunztoare dimensiunilor celulare, n membrana plasmatic a aceleai celule sau a celulei invecinate (Fig. 2.9.). Modificarea distanei dintre poart i situs-ul de ancorare ca urmare a modificrii dimensiunilor celulei, respectiv, a distanei dintre cele dou celule, determin deschiderea canalelor i un transport ionic corespunztor, care induce diferite procese n funcie de tipul de celul.
A
extrcelular membran celular
situs de ancorare
situs de ancorare
intracelular membran celular
intracelular protein fibrilar poart
protein fibrilar extrcelular
Fig. 2.9. Canale ionice mecanosenzitive. A. Situs-ul de ancorare i canalul ionic localizate n aceeai celul, poarta este deschis prin alungirea celulei. B. Situs-ul de ancorare i canalul ionic localizate n dou alturate, poarta se deschide prin creterea distanei dintre cele dou celule. (Adaptat dup C.Hammond 2001) intracelular
membran celular
79
Transformarea unui semnal mecanic n semnal electric definete fenomenul de mecanotransducie i caracterizeaz o varietate mare de mecanoreceptori care ndeplinesc diverse funcii n organism. n receptorii tactili, auditivi, vestibulari, proprioreceptori, receptori vegetativi ca baroreceptori i voloreceptori din aparatul cardiovascular deschiderea acestui tip de canale declaneaz un potenial de receptor care este transmis la centrul reflexului corespunztor iar n celule musculare cardiace sau vasculare, influxul ionic favorizeaz fenomenul contractil. 4. Canalele ionice controlate de concentraia altor ioni dect a celui transportat reprezint un tip mai restrns de canale implicate n interelaia K+, Ca2+, H+ , avnd un rol, n general, de modulare i integrare a excitabiliti. Din prezentarea principalelor tipuri de canale ionice se pot desprinde cteva concluzii despre relaia dintre structura i rolul lor n asigurarea funciei celulei excitabile. Canalele fr poart permit transportul ionic transmembranar controlat de gradientul electrochimic meninnd valoarea potenialului membranar de repaus. Canalele voltaj-dependente de Na+ i K+ asigur realizarea fazelor de depolarizare i repolarizare a potenialului de aciune precum i deplasarea lui pe distane mari. Canalele de Ca2+ voltaj-dependente au rol, n special, n eliberarea neuromediatorului din veziculele sinaptice. Canalele controlate de neurotransmitor sunt responsabile, n primul rnd de transmiterea semnalului de la o celul la alta
2.1.1.2. Pompele ionice

Pompele ionice din celulele nervoase sunt considerate ca cel mai activ sistem de transport ionic deoarece activitatea lor este aproape continu fiind puin dependent de starea de activitate a celulei i reprezint cel mai mare consumator de energie rezultat din activitatea metabolic celular. Se apreciaz c peste 50% din energia consumat de celula nervoas este folosit pentru activitatea pompelor ionice. Din punct de vedere chimic pompele ionice sunt proteine complexe din structura membranelor celulare, incluse ntr-o familie de proteine denumit ATP-aze de tip P deoarece mecanismul de transport implic fosforilarea unui reziduu aspartil din structura lor. Prin activitatea lor pompele asigur gradientul de concentraie ionic la nivelul membranei celulare, a reticulului endoplasmic i a mitocondrilor. Din punct de vedere funcional transportul prin intermediul pompelor ionice contracareaz transportul prin toate tipurile de canale ionice. Pentru celula nervoas este mai important activitatea pompelor care asigur repartizarea inegal a Na+, K+, Ca2+ i Cl-, condiie obligatorie a excitabilitii. Pompa de sodiu-potasiu Este o protein dispus integral n grosimea membranei, tuturor celulelor avnd ca funcie expulzarea Na+ din celul i introducerea K+ . Identificat ca enzim a crei activitate de hidroliz a ATP era dependent de concentraia Na+-i K+, afost denumit, iniial, ATP-az Na+-K+ dependent. Prin studii ulterioare, s-a dovedit c pompa Na+-K+ este un complex format din dou subuniti diferite. Subunitatea este o molecul proteic politop coninnd cca 1000 de aminoacizi care formeaz 10 segmente transmembranare. Se poate prezenta sub forma a trei izomeri identificai n sistemul nervos. Aceast subunitate are activitate catalitic, prezint pe suprafaa intracelular un situs de legare pentru Na+ i unul pentru ATP, iar pe suprafaa extracelular un situs pentru K+ i unul pentru ouabain, o substan glicozidic extras din seminele unor liane din pdurile ecuatoriale, cu
80
structur asemnroare strofantinei i digitalicelor. Toate aceste substane blocheaz, n proporie diferit pompa Na+-K+ i sunt utilizate n scop terapeutic. Subunitatea este de natur glicoproteic, are rol de reglare a activitii de transport i de fixare a pompei n structura membranei celulare. Pentru aceast subunitate au fost identificate trei forme izomere, dintre care 1 este mai rspndit. Izomerul 2 este identificat n creierul embrionar ca molecul de adeziune pe celulele gliale. Pe msur ce creierul devine matur, izomerul 2 este mai bine exprimat pe astrocit i mai redus n neuron. Din cercetrile mecanismului de aciune al acestui sistem de transport ionic rezult c: efluxul de Na+i influxul de K+ sunt strns dependente de hidroliza ATP; transportul ionic nu se poate realiza dect atunci cnd Na+ i ATP se afl n interiorul celulei iar K+ n exteriorul ei; ouabaina este inhibitorie numai cnd se afl n exteriorul membranei, unde se leag competitiv cu K+ pe acelai situs; pentru fiecare molecul de ATP hidrolizat, trei ioni de sodiu sunt transportai n exterior i doi ioni de K+ introdui n celul. Activitatea de transport a pompei poate s fie dedus din capacitatea ei de a hiroliza aproximativ 100 de molecule de ATP pe fiecare secund. ntre activitatea pompei i potenialul de membran exist o relaie de interdependen care este, de fapt, un mecanism de reglare a fluxului ionic membranar. Prin intensificarea efluxului de Na+ se produce hiperpolarizarea membranei, ceea ce are ca rezultat scderea excitabilitii i ncetinirea disocierii sodiului din subunitatea catalitic. Cnd celula este n repaus se realizeaz un echilibru ntre cantitatea de ioni care se deplaseaz pasiv, prin difuzie, i cantitatea de ioni transportai activ prin intermediul pompei. Aceast stare de echilibru (steady state) reprezint un echilibru ntre cele dou forme de transport ionic, cu pstrarea permanent a unui gradient electrochimic care determin potenialul de membran. Pompa Na+-K+ este cel mai important sistem de transport membranar al tuturor celulelor animale. Pentru o celul nervoas la care fiecare impuls nervos generat i transmis determin un influx pasiv de Na+ i un eflux pasiv de K+, energia necesar transportului acestor ioni n sens opus gradientului electrochimic poate reprezenta pn la dou treimi din consumul total energetic. Pompele de calciu. Diferena mare de concentraie intra-extracelular precum i diversitatea de funcii a Ca2+ la nivel celular pretind un sistem de control foarte precis al transportului i homeostaziei acestui ion. Pompele de Ca2+ sunt localizate n membrana celular i n peretele reticulului endoplasmic care reprezint un adevrat depozit de Ca2+. Prin activitatea pompelor este sczut concentraia Ca2+ citosolic. Prin intermediul canalelor de Ca2+, care au aceeai localizare ca i pompele, se produce creterea concentraiei lui citoplasmatice. Din cercetri recente reiese c structura i mecanismul pompei de Ca2+, n special n ceea ce privete cooperarea cu molecula de ATP, sunt foarte asemntoare cu pompa Na+ K+. Dup unii autori, asemnrile sunt att de mari nct se poate considera c cele dou pompe deriv dintr-o molecul ancestral comun (Shepherd, 1994). Un argument n susinerea acestei idei este faptul c aceste sisteme de transport se afl n membrana celular a unor bacterii actuale. Componenta funcional interesant a pompei este captul carboxiterminal care prin interaciunea cu segmentul ATP-azic i situsul de legare al calciului, exercit un efect inhibitor asupra activitii pompei. Rezultatul acestei interaciuni este meninerea concentraiei citosolice de Ca2+ la o valoare necesar desfurrii proceselor celulare. Creterea concentraiei citosolice a calciului peste valoarea normal, determin intervenia unei alte molecule proteice complexe, probabil de o vrst
81
comparabil cu cea a pompei. Ca2+, n exces, legndu-se de calmodulin, i blocheaz efectul inhibitor asupra activitii pompei iar rezultatul acestei interaciuni este creterea activitii pompei de a scoate Ca2+ din celul. Pompa de calciu din peretele reticulului endoplasmatic, mai bine studiat n celula miocardic, ndeplinete funcia de a transporta acest cation de la concentraia mic din citosol nspre concentraia mai mare din lumenul reticulului endoplasmatic. Mecanismul de transport al acestei pompe este controlat tot de o molecul proteic cunoscut sub numele de fosfolamban a crei funcie const n reglarea activitii pompei de calciu din reticulul sarcoplasmic; cnd nu este fosforilat are efect inhibitor, iar n starea fosforilat, acest efect este blocat. Fosforilarea este dependent de AMPc i de o proteinkinaz activat de Ca2+. Importana acestui sistem de reglare a concentraiei citosolice de calciu reiese i din faptul c fosfolambanul este identificat n celula miocardic, fibra muscular neted i muchiul striat lent, lipsind din cel rapid i din celula nervoas (Katz, 1992). Pompa de clor. Dei concentraia i distribuia ionilor de clor i sodiu sunt apropiate, mecanismul i sistemul de transport activ transmembranar pentru Cl- sunt mult mai puin cunoscute. Participarea ionilor de clor la activitatea neuronal este foarte important mai ales la nivelul sinapselor inhibitorii din SNC. Prezena canalelor de Cl- dintre care, probabil, majoritatea nu sunt prevzute cu sistem propriu de control (non-gated channels), impune cel puin urmtoarea ntrebare: dac concentraia extracelular a Cl- este de cel puin zece ori mai mare dect concentraia intracelular, iar majoritatea canalelor membranare pentru Cl- nu sunt controlate nici de neurotransmitor nici de gradientul electric membranar, de ce nu se realizeaz influxul pasiv de Cl- prin difuzie? Rspunsul ar putea consta din faptul c n interiorul celulei se afl numeroase sruri ale acizilor glutamic, aspartic i fosforic precum i o cantitate de proteine mult mai mare dect extracelular. Datorit valorii pH-lui intracelular toate aceste substane se manifest ca purttoare de sarcini negative. Spre deosebire de majoritatea celorlalte substane purttoare de sarcini electrice, deci implicate n generarea gradientului electric transmembranar, anionii intracelulari avnd molecula mai mare nu pot strbate membrana plasmatic. Ca urmare, ionii de clor, dei prezint un gradient de concentraie favorabil influxului, nu ptrund n celul datorit excesului de sarcini negative greu mobilizabile din celul. Dealtfel aceste sarcini negative intracelulare se opun i efluxului de K+, contracarnd fora ce rezult din gradientul lui de concentraie. Aceste dou aspecte determinate de mobilitatea mult mai redus a anionilor intracelulari prin membrana plasmatic datorit moleculei lor mai mari, pe de o parte i lipsei unui sistem de transport corespunztor, pe de alt parte, contribuie ntr-un mod substanial la meninerea i dinamica potenialului electric de membran. n ciuda implicrii Cl- n transmiterea sinaptic GABA-ergic, pn n prezent nu au fost aduse dovezi clare despre existena unei ATP-aze care s transporte activ Cl- din celul. Probabil cel mai important sistem de transport al Cl- din celula nervoas este simporterul K, Cl.
2.1.1.3.Transportori ionici
Transportorii ionici sunt molecule proteice transmembranare care leag ionul sau alte particule dintr-o parte a membranei, le transport prin membran i le elibereaz de partea opus a membranei celulare (Somjen G. 2004). Acest sistem de transport este repartizat n toate celulele i ndeplinete o mare diversitate de funcii, n raport cu tipul i activitatea celular, dobndind, astfel statutul de element celular funcional indispensabil (Fig.2.10). Din perspectiva excitabilitii celulare, sistemul de
82
ClH+ ClHCO3-
H+ 3Na+ 2K+ ATP ADP+Pi ATP H+ K+ ADP+Pi
Na+ 3Na+ Ca2+ Glcz, AA, Na+ Cl

-
K+
TRANSPORTORI
POMPE
ATP H+
Na+2Cl K+
ADP+Pi ATP K Cl+
CANALE
ADP+Pi K+ ClNa Cl
+
Ca2+
Ca
2+
AA
Fig. 2. 10. Componentele sistemului de transport ionic membranar.
transportori membranari poate fi prezentat ca un sistem care integreaz excitabilitatea fiecrei celule n n raport cu statusul metabolic propriu i al organismului. Aceast integrare se realizeaz prin funcia transportorilor membranari de conectare a transportului ionic cu metabolismul celular, echilibrul osmotic i, mai ales, cu echilibrul acido-bazic al celulei i al mediului extracelular. Conectarea funcional dintre STIM i principalii parametri ai homeostazei celulare se rsfrnge i asupra relaiei dintre acetia i excitabilitate. Aceast relaie se manifest n cazul modificrilor de excitabilitate induse de perturbrile metabolice i ale echilibrului acido-bazic din diverse stri patologice. La rndul ei, creterea excitabilitii peste limita normal, urmat de o activitate nervoas i, mai ales, muscular corespunztoare, poate determina modificri ale echilibrului acido-bazic. La sfritul acestui capitol se pot desprinde cteva concluzii: sistemul de transport ionic membranar (STIM), n repaus, controleaz distribuia ionilor de o parte i alta a membranei celulare, meninnd starea departe de echilibru, iar, sub aciunea unui stimul specific, permite apropierea de echilibru a sistemului; dac n repaus, starea departe de echilibru a distribuiei ionilor se menine prin consum de energie i acumularea energiei poteniale a sistemului, apropierea de echilibru se realizeaz printr-un flux ionic incomparabil mai mare, consumndu-se doar energia potenial.
83
2.2. Poteniale de membran

Potenialul de membran, n general, definete o diferen de potenial electric ntre compartimentul intra- i extracelular i este rezultatul ditribuiei ionilor de o parte i alta a membranei celulare. Din capitolul 2.1. reiese c distribuia ionic n cele dou compartimente separate de membrana celular este controlat de STIM i integrat continuu n raport de starea de excitare i activitatea metabolic celular. Valorile concentraiilor principalilor ioni care contribuie la valoarea potenialului electric prezint o variaie permanent, meninndu-se ntr-o stare mai apropiat sau mai indeprtat de echilibru. Din acest motiv valoarea concentraiei fiecrui ion, acceptat ca baz de discuie (vezi fig 2.11.) , este o valoare medie care variaz, uneori semnificativ, n funcie de specie, organism, celul i timp. Potenialul electric membranar corespunztor acestui echilibru, n codiii de repaus, este definit ca potenial de repaus. Valoarea potenialului de repaus al celulei nervoase, cuprins ntre -50 i -80mV, este determinat n cea mai mare msur de echilibrul ionilor de potasiu. Cnd valoarea potenialului de membran devine mai puin negativ dect potenialul de repaus, fenomenul este denumit depolarizare iar cnd devine mai negativ, hiperpolarizare; revenirea din ambele stri spre valoarea de repaus a potenialului definete procesul de repolarizare (Fig. 2.12) Aceste procese au loc n mod continuu n celula excitabil n diferite grade, n funcie de mai muli factori, intra- i extracelulari i sunt nsoite de variaii mici ale potenialului electric, locale sau care se deplaseaz pe distane mici, constituind potenialul electrotonic. Cnd procesul de depolarizare atinge un prag critic al potenialului de membran se declaneaz deschiderea canalelor controlate de voltaj i, ca urmare a unui influx cationic mult amplificat fa de cel din repaus, are loc o modificare, de scurt durat a polaritii membranei, ceea ce constituie suportul pentru potenialul de aciune. Din cele prezentate, mai sus, rezult c potenialul de membran are ca suport distribuia ionilor de o parte i de alta a membranei celulare, distribuie care, la rndul ei, este rezultatul aciunii integrate a unei multitudini de factori aparinnd fiecrei celule sau domeniului extracelular. Din aciunea acestui concert de factori reiese dimensiunea dinamic a valorii Fig. 2.11. Valorile concentraiilor (mM) intrapotenialului de membran i necesitatea descrierii i extracelulare a principalilor ioni din celula diferitelor stri ale acestuia n relaie cu celula sau tipul nervoas. A- anionii anorganici. de celule deoarece, spre exemplu, o variaie de potenial de 15 mV n sensul depolarizrii poate sau nu s induc o depolarizare generatoare de potenial de aciune, n funcie de valoarea potenialului de repaus, a potenialului prag i mai ales, de rapiditatea de producere a variaiei de potenial. ntre cele trei forme de manifestare ale potenialului electric de membran exist o interdependen funcional avnd ca element comun concentraia ionic real i care este modulat de factorul temporal i de organizarea spaial sinaptic.
84
2.2.1.Potenialul de repaus
Repartiia inegal de o parte i de alta a membranei celulare a principalilor ioni este rezultatul activitii sistemului de transport ionic membranar (STIM) i reprezint o condiie obligatorie pentru meninerea excitabilitii celulare. Transportul ionic la nivel celular este un proces continuu indiferent de starea de activitate a celulei, dar valoarea parametrilor de transport variaz n funcie de activitatea celulei. Din aceast perspectiv se poate descrie transportul ionic i valoarea potenialului de membran a celulei excitabile n condiii de repaus i de activare sau excitare. Starea de repaus a unei celule excitabile se caracterizeaz prin stabilirea unui echilibru dinamic ntre fluxul ionic prin mecanisme pasive i active pentru fiecare dintre ionii principali participani la realizarea potenialului de membran. Realizarea acestui echilibru este susinut de meninerea concentraiei ionice i a potenialului de membran la valori aproape constante. n aceast stare diferena de concentraie de o parte i de alta a membranei celulare pentru fiecare ion este maxim i corespunde valorii maxime a gradientului de concentraie. Potenialul de repaus, definete diferena de potenial transmembranar ce permite celulei excitabile s rspund aciunii unui stimul, prin modificarea rapid a repartiiei ionice i, implicit, a valorii potenialului de membran genernd potenialul de aciune. n repaus, distribuia ionilor de o parte i de alta a membranei plasmatice este rezultatul interrelaiei dintre permeabilitatea selectiv a membranei i cuplarea transportului ionic cu procesele metabolice energogenetice. Permeabilitatea membranei celulare fa de o anumit substan se definete prin proprietatea membranei respective de a permite transportul pasiv, conform legilor fizice. Suportul permeabilitii selective a membranei fa de transportul ionic este reprezentat de canalele ionice din structura ei i asigur potenialul de membran i particip la homeostazia hidroelectrolitic celular. Din punct de vedere funcional sunt descrise canale ionice cu poart i canale ionice fr poart pentru principalii ioni implicai n meninerea potenialului de membran: K+, Na+ , Ca2+ i Clcare permit trasportul selectiv, controlat diferit n funcie de tipul de canal. Pentru ambele tipuri de canale, cu sau fr poart, n general, fora motrice principal care determin transportul ionic este gradientul electrochimic. Transportul prin canalele fr poart este, practic, continuu i n echilibru cu transportul activ prin pompele ionice i prin transportori. Fluxul ionic prin aceste dou sisteme antagonice de transport este mult mai redus comparativ cu fluxul prin canalele cu poart i deine funcia principal n meninerea potenialului de repaus. Un aspect funcional important ce caracterizeaz permeabilitatea membranar selectiv este dependena de factorul temporal. Conform acestui parametru se poate afirma c membrana celulelor excitabile este permeabil la toi ionii anorganici din lichidul intra- i extracelular. Dar aceast permeabilitate nu este continu pentru toi ionii i pentru toate tipurile de canale ci se manifest alternativ, n funcie de starea funcional a celulei. Mai mult, activarea i inactivarea canalelor cu poart este dependent de factorul temporal n sensul c fiecare tip de canal prezint o perioad proprie de laten i o durat a strii deschis. Astfel, pe lng diversitatea canalelor rezultnd din existena mecanismelor de activare, diversitatea canalelor este amplificat prin implicarea factorului temporal. Valoarea poteialului de repaus (50 i 80 mV) pentru majoritatea neuronilor este stabilit prin msurarea diferenei de potenial cu ajutorul a doi microelectrozi dintre care unul este plasat intracelular iar cellalt, extracelular. Cei doi electrozi sunt conectai la un amplificator de voltaj, care la rndul lui este cuplat cu un osciloscop ce permite cuantificarea amplitudinii potenialului transmembranar (Vm). Vm = Vin Vext.
85
unde Vin este potenialul intracelular iar Vext., cel extracelular. Deoarece, conform conveniei, electrodul extracelular este zero, potenialul membranar de repaus (VR) este egal cu potenialul intracelular (Vin). Potenialul de repaus poate fi calculat n funcie de valoarea concentariei intra- extracelulare a ionilor care particip la determinarea potenialului de membran. innd seama de faptul c pentru toate celulele excitabile canalele de K+ fr poart au rspndirea i ponderea cea mai important n meninerea potenialului de repaus se poate afirma c potenialul de repaus reprezint potenialul de echilibru al potasiului. Valoarea potenialului de echilibru al potasiului se poate calcula conform ecuaiei lui Nerst:
[K+]ext RT EK = ln zF [K+]int
unde EK este valoarea potenialului de echilibru al potasiului, cnd concentraiile lui, intra- i extracelular sunt n echilibru; R constanta gazelor; T temperatura, n grade Kelvin; z valena potasiului; F constanta Faraday; [K+ ]ext i [K+]int concentraia extra- i intracelular a K+. nlocuind n formula de mai sus valorile z = 1, RT/ZF la 25oC = 26 mV i constanta de transformare a logaritmului natural n logaritm n baza 10, care este 2,3 se obine valoarea potenialului de echilibru al potasiului care variaz n funcie de concentraia acestuia n raport cu diferite celule. n tabelul 2.1 se poate urmri valoarea de potenialului de echilibru a ionilor principali corespunztoare concentraiilor dintr-un neuron cerebral de la obolan i din axonul gigant. Tabel 2.1.Valoarea potenialului de echilibru n raport cu concentraia principalilor ioni
Ion Neuron cerebral K+ Na+ ClK+ Axon gigant Na+ Cl-
concentraie intracelular (mM) 140 7 7 400 50 52
concentraie extracelular (mM) 3 140 140 20 440 560
potenial de echilibru (mV) -97 +75 -75 -75 +55 -60
Valoarea potenialului de repaus determinat prin nregistrri electrofiziologice este, n general mai mic dect valoarea calculat conform ecuaiei lui Nerst. Aceast diferen se explic prin faptul c valoarea potenialului de membran obinut conform ecuaiei lui Nerst cuprinde n calcul numai concentraia potasiului, n timp ce valoarea determinat electrofiziologic, este rezultatul participrii mai multor ioni, cu pondere diferit, n funcie de tipul de celul, i, mai ales, de tipul i distribuia canalelor. Pentru celula glial valoarea potenialului de repaus determinat electrofiziologic este cea mai apropiat de valoarea potenialului de echilibru al potasiului, deoarece permeabilitatea membranei celulare fa de potasiu este incomparabil mai mare fa de permeabilitatea pentru sodiu sau clor.
86
Neuronii centrali avnd mai multe canale ionice fr poart pentru Na i Cl, comparativ cu celula glial, potenialul lor de repaus este cel mai departe de potenialul de echilibru al potasiului. Sarcolema celulei musculare scheletice conine, comparabil cu alte celule excitabile, un numr mai mare de canale fr poart pentru clor, conferindu-i astfel o participare aproape egal cu potasiul la meninerea potenialului de repaus. Pentru calcularea potenialului de repaus n funcie de concentraia mai multor ioni se poate utiliza ecuaia Goldman-Hodkin-Katz:
EM= ln
RT PK[K+]ext. + PNa[Na+] ext .+ PCl[Cl-]int F PK [K+]int + PNa[Na+]int. + PCl[Cl-]ext
Din cele prezentate reiese c valoarea potenialului de repaus este rezultatul participrii tuturor sistemelor membranare de transport dintre care, ponderea cea mai mare, o dein canalele de K+ fr poart. Importana acestor canale rezult din cercetrile efectuate pe celulele gliale a cror membran plasmatic prezint canale fr poart, permeabile aproape n exclusivitate pentru K+ . innd seama c gradientul de concentraie transmembranar al acestui cation are, aproximativ, aceeai valoare ca i la nivelul celorlalte celule excitabile, este nevoie s analizm mecanismul lui de meninere, n ciuda numeroaselor canale deschise permanent fa de K+. Factorul principal care se opune efluxului de K+ este fora electrostatic datorat concentraiei mari a anionilor organici intracelulari pentru care membrana celular nu este permeabil (Fig. 2.11). Pe de alt parte, concentraia mare a ionilor de Na+ din mediul extracelular, se opune efluxului de K+ , care ar rezulta din gradientul lui de concentraie. Ca urmare a aciunii celor dou fore electrostatice ce se opun efluxului ionilor de K+ , se menine valoarea mare a gradientului de concentraie al acestui cation n celule excitabile, n repaus. Ecuaia factorilor ce asigur echilibrul de meninere a potenialului de membran cuprinde, pe lng forele gradientului electrochimic, i activitatea de transport activ a pompelor ionice, n special a pompelor de Na-K i Ca. Activitatea acestora depinde de cel puin doi factori principali. Metabolismul energetic al celulei asigur funcionarea continu a acestora iar concentraia ionic modeleaz rata lor de transport. Un aspect deosebit al potenialului de repaus este relaia dintre acesta i generarea potenialului de aciune din celule cu activitate electric spontan, rspunztoare de desfurarea unor funcii vitale precum activitatea neuronilor din centrii respiratori, pace-maker-ul cardiac etc. Din perspectiva potenialului de repaus, n general, aceste celule apar ca lipsite de capacitatea de a menine potenialul de repaus, permind o depolarizare fr stimuli din exteriorul celulei. n final, despre potenialul de repaus, se pot desprinde cteva concluzii: potenialul de repaus este o msur a repartiiei ionice de o parte i de alta a membranei celulare; repartiia ionic este un parametru integrativ al structurii i funciei sistemului de transport ionic membranar (STIM) corelat cu activitatea metabolic a celulei; potenialul de repaus este o premis/condiie a excitabilitii celulare, n sensul c n funcie de valoarea potenialului de repaus n momentul cnd intervine stimulul se va genera rspunsul celulei prin modificarea potenialului de membran ce constituie potenialul de aciune.
87
2.2.2.Potenialul electrotonic
Modificrile de potenial electric membranar, de amplitudine inferioar celei generatoare de potenial de aciune i care se produc ntr-o anumit zon a celulei nervoase ca urmare a aciunii unor stimuli, neuromediatorilor, neuromodulatorilor sau a altor substane care interacioneaz cu transportul ionic transmembranar, constituie potenialul electrotonic. Pentru o mai bun nelegere a acestei noiuni s urmrim modificrile de potenial de membran induse de transmiterea sinaptic axodendritic i de aciunea unui stimul mecanic asupra receptorilor de ntindere din fusul neuromuscular. Transmiterea potenialului de aciune de la un neuron la altul se face, n general, prin multiple sinapse (n medie 1000) ntre terminaiile axonice i dendritice ale celor doi neuroni. Localizarea sinapselor n compartimentul dendritic este destul de neomogen, distana de la fiecare sinaps pn la segmentul iniial al axonului, locul unde se genereaz potenialul de aciune, fiind foarte variabil. Eliberarea neurotransmitorului va induce la nivelul fiecrei sinapse, prin cuplarea cu canalele receptor, potenialul postsinaptic excitator care se va transmite ca o variaie de potenial de membran spre corpul celular i spre vrful dendritei. Aceast variaie de potenial ce pleac de la fiecare sinaps constituie potenialul electrotonic. n cazul alungirii brute a fibrelor musculare intrafuzale (ex. lovirea tendonului sau modificarea brusc a poziiei corpului sau al unui segment urmare aciunii unei fore exterioare organismului-ineria) se vor produce i modificri de tensiune a terminaiilor nervoase senziteive cu care fibrele musculare sunt n contact. Modificrile de tensiune vor induce deschiderea canalelor ionice din mecanoreceptorii terminaiilor nervoase, urmat de modificri ale potenialului de membran care se vor deplasa sub form de potenial electrotonic pna la primul nod Ranvier al axonului senzitiv unde va genera potenialul de receptor, transmis, apoi la mduva spinrii. n ambele exemple potenialul electrotonic va genera sau nu, n funcie procesului de sumaie, un potenial ce se va deplasa, neschimbat, pe distane mai mari, ca potenial de aciune, respectiv potenial de receptor. Potenialul electrotonic i procesul de sumaie spaiotemporal sunt elementele eseniale ale funciei de procesare i integrare a semnalului la nivelul fiecrei celule i, implicit, la nivelul sistemului nervos.
2.2.3.Potenialul de aciune
Sistemul nervos este cel mai complex i performant sistem biologic de captare, procesare, stocare a semnalului ca suport al informaiei i, probabil, de generare a informaiei. Dac, pn n prezent, capacitatea creierului de a genera informaie a rmas doar la nivelul unor tentative discrete filosofice sau artistice, funciile de captare, procesare i stocare a informaiei au beneficiat de un interes mai mare din partea cercetrii tiinifice. Prin aceste procese sistemul nervos ndeplinete funcia fundamental de integrare, pe de o parte, a funciilor componentelor organismului n vederea funcionrii lui ca sistem, iar, pe de alt parte, de integrare a acestuia n mediu de via. Printre cele mai vechi referine scrise care fac legtura ntre lezarea creierului i simptomele induse, sunt cele consemnate ntr-un papirus egiptean din sec. XVII .c. i care cuprinde transcrierea unor documente scrise cu cca. cinci milenii n urm. Papirusul a fost descoperit la Teba, n 1862, de Edwin Smith (Voiculescu Vlad, Mircea Steriade. 1963) i descifrat de ctre James Breasted n anul 1930, (Kandel, 2003)
88
Primele referiri la natura suportului de trasmitere a semnalului n sistemul nervos i ntre acesta i celelalte componente ale organismului provin din medicina sacerdotal, au fost preluate de ctre grecii antici care considerau c creierul secret un fluid sau spirit care este transmis prin nervi la muchi. Aceast concepie despre exitabilitatea creierului i natura suportului de comunicare dintre creier i componentele organismului i interrelaia lui cu mediul de via se identific n dou idei, care elaborate din perioada lui Aristotel (384-322 .c.), au devenit dogme dinuind mai bine de dou milenii. Una se refer la inexcitabilitatea creierului i a fost detronat de doi fiziologi Fritsch i Hitzig, n 1870, care au nlocuit stimulul mecanic aristotelian cu stimulul electric. Cealalt idee-dogm susine localizarea funciilor psihice i ale sensibilitii n inim, i, n ciuda unor argumente de observaie clinic sau experimental, a fost susinut pn la apariia lucrrii lui William Harvey De motu cordis et sanguinis in animalibus. 1628. Primele date experimentale despre natura electric a semnalului ce determin contracia muscular aparin lui Luigi Galvani care n 1791 a demonstrat contracia a unui muchi de broasc dup stimularea lui electric. Dup numai cincizeci de ani, Carlo Matteuci, a obinut primele rezultate despre natura electric a impulsului nervos. Dubois Reymond realizeaz n 1851 prima detectare electromiografic prin msurarea curenilor emii de un muchi de iepure, n timpul contraciei. Dup 1900 prin utilizarea galvanometrului cu coard se reuete descrierea curenilor musculari n diferite tipuri de contracie. Din aceast perioad dateaz i primele cercetri romneti n domeniul electromiografiei (Athanasiu, I. i Marinescu, Gh. 1929). Primele cercetri experimentale asupra curenilor electrici cerebrali au fost realizate de ctre Caton n 1875 iar prima nregistrare experimental de tip electroencefalografic, aparine lui Pravdici-Neminski (1913). Hans Berger (1924), propune termenul de electroencefalogram pentru nregistrarea activitii electrice corticale) odat cu primele nregistrri efectuate la om. n prezent, un numr mare de tehnici de cercetare i investigare clinic se bazeaz pe nregistrarea i analiza curenilor electrici ce nsoesc activitatea celulelor excitabile. Din perspectiva funciei de sistem informaional, suportul cel mai important de transmitere i prelucrare a semnalului n sistemul nervos este potenialul de aciune. Din punct de vedere al transportului ionic membranar, potenialul de aciune este rezultatul unei perturbri brute a echilibrului dinamic al repartiiei ionilor corespunztoare potenialului de repaus. Cauza i mecanismul care genereaz aceast modificare difer n funcie de tipul de celul. Generarea potenialului de aciune este un proces complex care se declaneaz, n general, ntr-o zon specializat a celulelor excitabile. n aceast zon de declanare (trigger zone) ajung i se integreaz variaiile de potenial membranar induse prin trei mecanisme principale: 1) de aciunea unui stimul specific asupra terminaiilor senzitive; 2) aciunea unui neurotransmitor asupra receptorilor postsinaptici; 3) depolarizarea spontan a unor celule excitabile, precum celulele miocardice, neuroni din centrii nervoi prevzui cu automatism. n cazul neuronilor senzitivi, variaia potenialului de membran indus de aciunea unui stimul asupra terminaiilor axonice se va transmite ca potenial de receptor pn la zona de integrare sau declanare, reprezentat de primul nod Ranvier. Dac potenialul de receptor este suficient de puternic se va declana potenialul de aciune care va fi transmis spre segmentul nervos central. Pentru neuronii care primesc semnale de la ali neuroni prin intermediul sinapselor, zona de declanare a potenialului de aciune este reprezentat de segmentul iniial al axonului unde ajung variaiile de potenial generate la nivelul sinapselor localizate n compartimentul dendritic sau somatic al neuronului respectiv. Dup integrarea potenialelor sinaptice, potenialul de aciune generat se va
89
deplasa spre captul distal al axonului, unde va determina eliberarea neurotransmitorului n sinapsele derivate din axonul respectiv. Dac n urma integrrii variaiilor de potenial reprezentnd potenialele de receptor sau potenialele sinaptice rezult, la nivelul zonei de declanare, o variaie de potenial echivalent valorii prag a neuronului respectiv, se deschid canalele ionice voltaj dependente care vor declana potenialul de aciune. ntr-o prima faz se deschid canalele voltaj dependente care vor permite un influx rapid de cationi care va determina scderea diferenei de potenial faza de depolarizare urmat de deschiderea canalelor de potasiu voltaj dependente prin care efluxul ionic va readuce potenialul de membran la valoarea potenialului de repaus faza de repolarizare. Pentru majoritatea celulelor efluxul de potasiu continu dup revenirea potenialului la valorea potenialului de repaus, rezultnd, astfel, o posthiperpolarizare denumit i hiperpolarizare postpotenial ( Fig.2.12 ).
+30
0 depolarizare repolarizare
Vm (mV)
- 55 - 70
potenial prag potenial de repaus hiperpolarizare
depolarizare
repolarizare timp (ms)
Fig. 2.12. Variaia potenialului de membran (Vm) n raport cu activitatea celulei nervoase
Faza de depolarizare, pentru majoritatea celulelor excitabile din organismul uman, este determinat de deschiderea canalelor de Na voltaj dependente. La valoarea prag al potenialului de membran se deschid un numr limitat de canale care vor induce, apoi, activarea n cascad, prin mecanism de feed-back pozitiv, a canalelor, nsoit de o cretere corespunztoare a conductanei i o variaie de potenial de cca.100 mV.(Fig.2.13). Durata fazei de depolarizare este mai mic de 1ms rezultnd din timpul n care un canal rmne n starea deschis- cca. 0,43 ms pentru neuronii cerebrali i 0,7 ms pentru fibra muscular scheletic (Hammond C. 2001). Deoarece canalele de Na voltaj dependente dintr-o celul nu se deschid simultan, durata depolarizrii depete puin durata ct un canal rmne deschis. Faza de repolarizare a potenialului de aciune este determinat de deschiderea canalelor voltaj dependente pentru potasiu. Pe baza proprietilor fiziologice se descriu dou categorii de canale de K controlate de potenialul de membran: 1) canale de rectificare ntrziat care se activeaz i se deschid dup o perioad de cca. 4 ms dup depolarizare i se inactiveaz mult mai lent dect canalele
90
de sodiu; 2) canale de tip A care activeaz i se inactiveaz rapid. Parametrii de funcionare a canalelor din prima categorie prezint o mare variabilitate din perspectiva timpului i asigur repolarizarea membranei(Fig.2.13).
mV 20
PA
0 -10
-30
gNa
-50
gK
-70
Fig. 2.13. Variaia conductanei pentru Na (gNa) i K (gK) n timpul potenialului de aciune (PA)
0,5
1,5
2,5
3 ms
Pentru un numr mult mai redus de tipuri de celule excitabile potenialul de aciune nu este dependent numai de canale voltaj dependente pentru sodiu ci i de ali cationi. Astfel, potenialele de aciune din celulele Purkinje din cerebel, din terminaiile axonice din neurohipofiz i din celulele (fibrele) Purkinje din miocard, sunt dependente, ntr-o msur mai mare sau mai mic, de calciu. Dup ce un canal a fost deschis urmeaz starea de inactivare n care fluxul ionic este oprit dar canalul nu poate fi activat dect dup nchiderea porii i revenirea potenialului de membran la valoarea de repaus. Aceast secven a strilor funcionale ale canalelor ionice determin i controleaz perioada refractar i, implicit, asigur deplasarea unidirecional a potenialului de aciune, n condiii fiziologice. Perioada refractar reprezint timpul de la debutul unui potenial de aciune pn la momentul recuperrii posibilitii generrii unui nou potenial. n aceast perioad aplicarea unui stimul, indiferent de intensitate, nu poate induce modificri ale potenialului de membran deoarece canalele voltaj dependente pentru Na sunt sau deschise sau n starea de inactivare.innd seama c deschiderea canalelor nu se face simultan iar perioada n care sunt deschise i cea de inactivare sunt constante rezult c primele canale care se deschid vor fi primele care vor deveni disponibile pentru un nou stimul. Astfel, in periaoda refractar absolut nici un canal nu poate fi activat de un nou stimul iar n perioada refractar relativ se poate obine un rspuns, mai ales la un stimul supraliminar, prin implicarea unui numr mai mic de canale ionice. Potenialul de aciune, odat declanat se transmite diferit prin axonii mielinizai i nemielinizai (vezi cap. 3)
91
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17. 18. 19. 20. 21. 22. 23. 24. 25. 26. 27. Alberts, B., Bray, D., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K., Watson, J. D. (1994). Molecular Biology of The Cell. New York Anatoli N. Lopatin, Colin G. Nichols (2001) Ion Channel Localiyation Methods and Protocols, Humana Press Catterall, W. A. (1988). Structure and function of voltage-sensitive ion channels. Science. 242: 50-61. Chiesi, M., Voherr, T., Schwaller, R., Carafoli, E. (1990). Cardiac phospholamban is related to the inhibitory domain of the plasma membrane Ca-pump. Circulation. 82 (Supll. III) : III-349. Dubois Reymond Prcis dlectromyographie, (1959), Maloine (Lbr.) S.A., Paris Citat in ref. 170. Eccles, J. C., Eccles, R. M., Lundberg, A. (1958). The action potentials of alpha motoneurones suplying fast and slow muscles. J. Physiol. (Lond.) 142:257. Fatt, P., Ginsborg, B. L. (1958). The ionic requirements for production of action potentials in crustacean muscle fibres. J.Physiol.(Lond.), 142:516-543. Graves D.T., Hanna G.M.(2005). Neurological channelopathies. Postgrad. Med. J. 81:20-32 Gupta S.K, (2001) Pharmacology and Therapeutics in the New Milenium, Narosa Publishing House Hagiwara, S. (1983). Membrane Potential-Dependent Ion Channels in Cell Membrane: Phylogenetic and Developmental Approaches. New York: Raven Press. Hammond C. (2001).Cellular and Molecular Neurobiology. Academic Press Hill, R. R., Robins, N. (1991). Plasticity of presynaptic and postsynaptic elements of neuromuscular junction repeatedly observed in living adult mice. J. Neurocytol. 20:165. Hille, B. (1989). Voltage gated channels and electrical excitability, In Textbook of Physiology. (Patton, H. D. Ed.), Vol. I. Hodgkin, A. L., Huxley, A. F. (1952). A quantitative description of membrane current and its application to conduction and excitation in nerve. J. Physiol. (Lond.), 117: 500-544. Kandel, E. R., Schwartz, J. H. Jessell, T. M. Eds. Principles of Neural Science. (2000), Fourth edition, Mc Graw-Hill. Katz, A. M. (1992). Physiology of the heart. Raven Press, New-York. Mulley C. J., Scheffer E. I., Petrou S., Berkovic F. S. (2003). Channelopathies as a genetic cause of epilepsy. Curr. Opin. Neuro.16:171-176 Nowycky, M. C., Fox, A. P. and Tsien, R. W. (1985). Three types of neuronal calcium channel with different calcium agonist sensitivity. Nature., 310: 440-443. Payne, J. A., Stevenson, T. J., and Donaldson, L. F. Molecular characterization of a putative K-Cl cotransporter in rat brain. A neuronal-specific isoform. (1996)J. Biol. Chem. 271:16245-16252,. Shepherd, G. M. (1994). Neurobiology. Oxford University Press. Siegel G. J., Agranoff R. W. , Albers R. W. Fisher S. K(1998) Basic Neurochemistry Molecular, Cellular and Medical Aspects, Sixth Edition, Lippincott+Raven Publishers Smith, K. J., Blakemore, W. F., Murray, J. A., Patterson, R. C. (1982). Internodal myelin volume and axon surface area. A relationship determinig myelin thickness. J. Neurol. Sci., 55:231. Stamatoiu, I., Agian, B., Vasilescu, C. (1981). Electromiografie Clinic. (Ed. Medical). Bucureti. Sqiure L., Bloom F., McConnell S. K., Roberts J., Spitzer N.C., Zigmond M. J. (2003) Fundamental of Neuroscience , Academic Pres. Voiculescu V., Steriade M. din Istoria Cunoaterii Creierului(1963) Editura Stiinific.Bucureti Zgrean Leon (1996) Elemente de Neurobiologie, edit. Univ. Carol Davila. Bucureti Zgrean Leon (2002) Neurotiine-principii fundamentale, edit. Univ. Carol Davila. Bucureti
92

LZ NFZCL

Încărcat de

Informații document

Titlu original

Drepturi de autor

Formate disponibile

Partajați acest document

Partajați sau inserați document

Opțiuni de partajare

Vi se pare util acest document?

Este necorespunzător acest conținut?

Drepturi de autor:

Formate disponibile

LZ NFZCL

Încărcat de

Drepturi de autor:

Formate disponibile

2. 1.

Biologia molecular a excitabilitii celulare

Transport ionic membranar

Fig. 2.2. Interrelaia dintre elementele ce definesc excitabilitatea

2.1.1. Sistemul de transport ionic membranar (STIM).

2.1.1.1. Canalele ionice

Selecie din NEUROELECTROFIZIOLOGIE CLINICA. Editor: Leon Zgrean, 2005

extrcelular membran celular

intracelular membran celular

intracelular protein fibrilar poart

protein fibrilar extrcelular

2.1.1.2. Pompele ionice

H+ 3Na+ 2K+ ATP ADP+Pi ATP H+ K+ ADP+Pi

Na+ 3Na+ Ca2+ Glcz, AA, Na+ Cl

ADP+Pi ATP K Cl+

Fig. 2. 10. Componentele sistemului de transport ionic membranar.

2.2. Poteniale de membran

Ion Neuron cerebral K+ Na+ ClK+ Axon gigant Na+ Cl-

concentraie intracelular (mM) 140 7 7 400 50 52

concentraie extracelular (mM) 3 140 140 20 440 560

potenial de echilibru (mV) -97 +75 -75 -75 +55 -60

RT PK[K+]ext. + PNa[Na+] ext .+ PCl[Cl-]int F PK [K+]int + PNa[Na+]int. + PCl[Cl-]ext

potenial prag potenial de repaus hiperpolarizare

repolarizare timp (ms)

S-ar putea să vă placă și