STUDIUL MEIOZEI LA OM Definitie: Tip particular de diviziune, care consta dintr-o succesiune de doua diviziuni inseparabile ale nucleului,

la eucariotele cu reproducere sexuata. Prin meioza, la om se formeaza cele doua tipuri de celule sexuale(gameti) : spermatozoid si ovul(haploizi) care prin fecundatie vor da nastere celulei-ou sau zigot(diploida). Cele doua diviziuni ale meiozei sunt : 1. Meioza primara/heterotipica/Meioza reductionala 2. Meioza secubdara/homotipica/Meioza ecuationala. Aspecte nucleare in meioza Diviziunea meiotica porneste dintr-un stadiu de repaus celular relativ, denumit interfaza, care are trei etape : G1, S si G2. In stadiul S(sinteza) al interfazei se produce replicarea semiconservativa a fiecarui cromozom si cantitatea totala de ADN se dubleaza de la 2N ADN cat este in stadiul G1 al interfazei la 4N ADN in stadiul G2. Aspectul nucleului in interfaza este omogen, mic de volum, cromatidele sunt uniform repartizate in toata masa ncleului. MEIOZA I In aceasta etapa, numarul cromozomilor este redus la jumatate 2n->n+n. Incepe de la spermatocitele si ovocitele primare celule diploide rezultate dintr-o serie de diviziuni mitotice(etapa de multiplicare celulara) a spermatogoniilor si ovogoniilor. Are 4 etape : 1. Profaza I 2. Metafaza I 3. Anafaza I 4. Telofaza I Profaza I are o durata lunga deoarece pregateste mecanismul reductiei cromozomilor. Este compartimentata in 5 stadii distincte: 1. Leptonem 2. Zigonem 3. Pahinem 4. Diplonem 5. Diakineza Leptonem Leptos-subtire, nema-filament Cresterea in volum a nucleului Cromozomii incep sa se spiralizeze si sa se condenseze se formeaza o retea de filamente subtiri care prezinta in unele locuri condensari minore(cromomere)

 Talia si pozitia cromomerelor sunt tipice pentru o pereche de cromozomi si identice pe cei doi cromozomi omologi. Zigonem Zigos-jug, unire, nema filament Nucleul creste si mai mult in volum Cromozomii se spiralizeaza si mai mult Are loc imperecherea omologilor prin asezare unul in fata celuilalt, unul de origine materna, unul de origine paterna, formand bivalentii Omologii se pun in contact in puncte precise, numite zigomere/sinapse, care apar de la extremitatile polarizate spre zona centrala, asa incat centromerii si cromomerelese gasesc fata in fata in perechea de omologi Pahinem Pachis-gros,nema-filament Volumul nucleului creste, atingand maximum la sfarsitul acestei perioade Cromozomii omologi sunt complet imperecheati, cu zigomere pe toata suprafata lor Cromozomii sunt mai grosi prin spiralizare si mai scurti prin contractie Apar doua planuri de clivaj : Reductional intre cei doi omologi si ecuational intre cele doua cromatide ale cromozomului, care formeaza un complex numit tetrada Intre cromatidele interne ale tetradei se interpune complexul sinaptonemal, format din elemente fibrilare cu o componenta centrala si doua laterale, cu diametrul de 1000, care are rolul de a fixa lateral cromozomii in vederea crossing-over-ului Crossing-over-ul este schimbul de segmente cromatidice care se produce in aceasta etapa intre cromatidele interne ale fiecarei perechi de omologi prin ruperea segmentelor cromatidice la nicelul chiasmelor. La om se produce cel putin un CO pentru fiecare brat cromozomial(cu exceptia acrocentricilor la care nu se realizeaza CO). La barbati au loc circa 50 CO, iar la femeie70 de recombinari intr-o meioza. Acest mecanism al CO se mai numeste si recombinare intracromozomiala si este o sursa de variabilitate pentru specia umana. Diplonem Diplos-dublu, nema-filament Complexele sinaptonemale se degradeaza si cromozomii omologi incep sa se separe longitudinal(desinapsa) ca si cum s-ar respinge reciproc

 Cromatidele raman unite la nivelul chiasme, care marcheaza localizarea CO Diakineza Dia-divergent, kinesis-miscare Spiralizare si contractie maxima a cromozomilor Scade numarul chiasmelor Cromozomii raman uniti numai prin capetele lor(telomere) Centromerii se indeparteaza si cromozomii au aspecte caracteristice inelare, ramanand astfel pana in metafaza I(terminalizarea sinapselor) La sfarsitul profazei nucleolii dispar, membrana nucleara se dezintegreaza, incepe formarea fusului de diviziune si atasarea microtubulilor la kinetocori. Metafaza I Cromozomii in tetrada se dispun in planul median al celulei formand placa ecuatoriala/placa metafazica Cromozomii se ataseaza pe fibrilele fusului de diviziune cu centromerii de o parte si de alta a placii metafazice, in mod aleator cei de origine materna si paterna proces cunoscut sub denumirea de recombinare intercromozomiala Deoarece fiecare pereche se separa independent de celelalte perechi, rezulta un numar f. mare de combinatii cromozomiale in gameti, in functie de numarul de cromozomi ai speciei. De exemplu, la om se formeaza 2 tipuri de gameti, adica 8.388.608 variante de gameti diferiti pentru fiecare dintre cele doua sexe. Anafaza I Separarea cromozomilor bicromatidici-Reductia cromozomiala Cromozomii migreaza spre polii opusi ai celulei Cromatidele sunt diferite intre ele in unele regiuni datorita CO Telofaza I Are loc reasamblarea nucleilor Citokineza se realizeaza fara separarea completa a celulelor fiice(doua spermatocite secundare la barbat, un ovocit secundar si primul globul polar la femeie), care raman atasate printr-o punte citoplasmatica formand o diada. MEIOZA II Interfaza nu exista - Nu este precedata de replicarea ADN-ului si seamana cu o diviziune mitotica, dar care are loc intr-o celula cu numar haploid de cromozomi bicromatidieni(23). Este o diviziune homotipica/ecuationala. Profaza II este f.scurta pentru ca nu mai are cele 5 etape.

Metafaza II Formarea fusului de diviziune Cromozomii condensati se dispun in planul ecuatorial al celulei cu centromerul in plan si cromatidele surori de o parte si cealalta a planului Anafaza II Clivaj ecuational la nivelul centromerilor si cromatidelor surori Din 23 de cromozomi bicromatidici la cei doi poli migreaza doua mase heterocromatice formate din cate 23 de cromozomi monocromatidici Telofaza II Din cele doua celule fiice se formeaza 4 celule haploide cu cate 23 de cromozomi monocromatidieni, care prin maturare se transforma in gameti fecundabili Gametii rezultati nu sunt identici, fiecare avand alta constelatie genetica datorita proceselor de recombinare intracromozomiala(CO) si recombinare intercromozomiala(segregarea independenta) Reconstituirea nucleilor interfazici Formarea membranei celulare intre cele 4 celule. Comportamentul cromozomilor sexuali in meioza Ovogeneza ovocitul de ordinul I are doi cromozomi X care se vor imperechea lateral, la fel ca si autozomii. Spermatogeneza In P I, cromozomii X si Y fiind asimetrici si neomologi se vor atasa cap la cap in regiunea bratelor scurte in zona pseudoautozomala, formand vezicula sexuala, care persista pana in diakineza si in AI se separa in cele doua celule. Aceasta atasare cap la cap si nu margine la margine( ca autozomii si perechea XX) are rolul de a impiedica aparitia CO intre cromozomii diferiti ai sexului si mentinerea cate unui singur tip de cromozomi sexuali. Acest aspect a favorizat evolutia spre gonocorism a speciei umane, caracterizat de gonade distincte la indivizi diferiti Cu toate acestea in zona pseudoautozomala se poate inregistra CO. Initierea meiozei Este stimulata de acidul retinoic si mediata de proteina STRA8 In ovarele fetale acidul retinoic produs de mezonefros induce expresia proteinei STRA8, care induce ovocitele de ordinul I sa inceapa meioza

 In testiculul fetal acidul retinoic sintetizat de mezonefros este degradat de enzima CYP26B1 produsa in celulele Sertoli iar meioza este blocata pana la pubertate, cand este permisa sinteza acidului retinoic. Spermatogeneza Totalitatea proceselor parcurse de spermatogonie(46,XY) pana la stadiul de spermatozoid adult(23,X sau 23,Y). Spermatogeneza incepe la pubertate(sub actiunea FSH, LH si acidului retinoic) si continua toata viata. Se desfasoara in intregime in testicul. Dureaza 64 de zile, indiferent de varsta individului, deci este un proces rapid. Este un proces intens, 1ml de sperma contine 70 milioane spermatozoizi. Deoarece doar un spermatozoid fecundeaza un ovul, ar parea un proces ineficient, dar acest numar mare de spermatozoizi asigura sanse egale pentru un spermatozoid X sau Y de a fecunda un ovul si astfel se mentine sex ratio primar de 1 :1. Este un proces autointretinut, nefiind conditionat de factori externi In schimb depinde de pozitia normala a gonadei(pozitia intraabdominala in criptorhidie, prin temperatura ridicata sau ischemia afecteaza meioza) Distributia exacta a cromozomilor este asigurata de desfasurarea ei ritmica si regulata. Varsta inaintata nu produce anomalii de distributie a cromozomilor In schimb aparitia unei mutatii va duce la copierea ei neintrerupta(erori de copiere - 20-25 cicluri de replicare anual), ceea ce face ca barbatii sa aiba un risc crescut pentru copii cu boli monogenice autozomal dominante(acondroplazie, boala Huntington, neurofibromatoza). Celulele germinale primordiale apar la sfarsitul S-3 in mezodermul veziculei ombilicale Etapa de multiplicare : spermatogonia trece printr-o serie de mitoze Etapa de crestere : la pubertate spermatogoniile acumuleaza proteine, isi cresc volumul si formeaza spermatocitele de ordinul I(46,XY) Etapa de maturatie : spermatocitele de ordinul I traverseaza cele doua etape ale meiozei formand 4 spermatide Spermiogeneza : 4 spermatide->4 spermatozoizi. Ovogeneza Totalitatea etapelor si transformarilor parcurse de ovogonie(46,XX) pana la celula sexuala matura si fertilizanta, ovulul(23,X) Incepe prenatal si este discontinua.

 Etapa de multiplicare: incepe in L II de viata intrauterina cand ovogoniile situate in stratul profund al corticalei ovariene incep sa se divida prin mitoza. Dureaza pana la sfarsitul L V cand exista o rezerva de aprox. 7 milioane de ovogonii, dar nu toate se vor matura Etapa de crestere : acumulare de proteine si marirea volumului nucleului, fara diviziune, formand ovocitele de ordinul I(46,XX). Prenatal si dupa nastere se produce o scadere drastica a numarului de ovocite cu o rezerva ovariana de 300.000 de ovocite la pubertate dintre care doar 300-400 vor intra in ovulatie la pubertate. Deci la femeie numarul de ovocite este limitat pe cand la barbat spermatogoniile se produc pana la batranete. Etapa de maturatie : cu putin timp inainte de nastere, ovocitul de ordinul I isi dubleaza cantitatea de ADN si incepe meioza I, pe care nu o termina decat la pubertate. Ovocite le de ordinul I raman cantonate in asa numita profaza suspendata(dictioten) localizata intre diplonem si diakineza, datorita unei proteine inhibitoare(OMI-ovocyte meiosis inhibitor), pana la ovulatie. Aceasta faza poate dura 10-50 ani si este foarte susceptibila la actiunea agentilor mutageni, care pot duce la erori de segregare in meioza I. La pubertate, sub actiunea FSH, LH cateva ovocite de ordinul I incep sa se matureze lunar, dar numai una, maxim doua termina meioza I formand doua celule haploide inegale datorita pozitiei excentrice a nucleului : ovocitul de ordinul II(cu toata citoplasma ovocitului I) si primul globul polar(polocit). Ovocitul de ordinul II trece direct in metafaza II, cand este expulzat de ovar in trompele uterine(2 min). Aici are un comportament diferit, in functie de fecundare. Daca in 12 ore nu este fecundat de un spermatozoid, nu isi continua meioza si este eliminat sub forma de preovul. Daca este fecundat, termina meioza secundara si elibereaza ovulul si al doilea globul polar. Ritmul ovogenezei este lent( 1 ovul pe luna) si putin intens, deci apar putine erori de copiere, in schimb pot apare frecvent accidente de segregare a cromozomilor, mai ales dupa varsta de 35 de ani, care duc la aparitia gametilor aneuploizi, care dupa fecundare produc anomalii cromozomiale. Recombinarea genetica Reprezinta alaturi de mutatii si migratii sursa de variabilitate genetica a speciei umane. Recombinarea genetica este reprezentata de totalitatea mecanismelor care duc la aparitia unor combinatii genetice noi prin redistribuirea materialului ereditar cuprins intre doua unitati genetice diferite, In functie de marimea unitatilor genetice(genom, cromozom, gena) se pot distinge urmatoarele tipuri de recombinare :

Recombinarea genomica. Se realizeaza in cadrul fecundarii a doi gameti diferiti pentru a forma zigotul. Daca parintii sunt neinruditi, atunci zigotul are o vigoare hibrida mai mare(heterozis), decat in cazul casatoriilor consangvine. Recombinarea intercromozomiala. Se produce in timpul anafazei meiozei primare prin asortarea independenta, care produce 2 tipuri de gameti la fiecare dintre sexe, atunci cand gametii se deosebesc prin alelele unei singure gene. Dupa fecundare pot rezulta (2) adica( 2)46 combinatii, care depaseste de 8000x populatia actuala a globului. Recombinarea intracromozomiala. Are loc in profaza meiozei primare prin procesul de crossing-over si este denumit si recombinare omoloaga. Caracteristici : se realizeaza prin ruperea ADN-ului de catre endonucleaza SPO11 punctele de ruptura corespund unor regiuni promotoare, bogate in GC ulterior se indeparteaza SPO11 si capatul 5 sub actiunea complexului MRN ramane protruziv capatul 3 monocatenar situat la fiecare parte a unei rupturi acest capat 3 invadeaza cromatida cromozomului omolog si acelasi proces se realizeaza pentru cromatida opusa- apare o dubla jonctiune in forma de cruce(Holliday) apoi se produce repararea punctelor de ruptura prin sinteza de ADN si rezolutia jonctiunilor Holliday. Recombinarea intragenica. Apare prin crossing-over egal intre alelele aceleiasi gene si produce o gena hibrida sau o gena de fuziune. Fuziunea genica se poate produce si prin translocatii, deletii, care pot asocia un promotor cu o proto-oncogena din alta pozitie si o poate activa ducand la aparitia proceselor maligne.

Erori de recombinare si distributie in meioza si consecintele lor Erori de recombinare-CO inegal care a dus la duplicatia unor segmente genice(ex :genele hemoglobinelor Erori de distributie : non-disjunctia si non-conjuctia Intarzierea anafazica Nesepararea ovocitelor de ordinul II- gameti diploizi-zigoti triploizi Erori de fecundare : dubla fecundare : gemeni dizigoti sau himere

Himerele pot avea acelasi sex genetic si evolutie normala, sau sex genetic dublu-hermafroditi adevarati. Importanta meiozei BIOLOGICA Reducerea la jumatate a numarului diploid de cromozomi in gameti asigura mentinerea constanta a numarului de cromozomi ai unei specii. GENETICA Prin mecanismele de recombinare meiotica se produce schimbul de informatie genetica, care duce la formarea de indivizi noi, cu rol fundamental in fenomenele de adaptare, selectie naturala si evolutie biologica. MEDICALA Studiul unor sindroame genetice, consecinta : 1. Modificarii morfologiei si structurii cromozomiale prin deletii, duplicatii, inversii, transpozitii 2. Nondisjunctiei sau nonconjunctiei cromozomiale in meioza I sau II