Curs 6

VARIABILITATEA
EREDITAR
Conf. dr. Cristina RUSU
VARIABILITATEA GENETIC
probleme:
1. Variabilitatea: definiie i surse
2. Mutaiile genice:
2.1. Substituiile nucleotidice
2.2. Deleiile si inseriile nucleotidice mici
2.3. Recombinri omoloage nealelice
2.4. Expansiunea instabil a repetiiilor
trinucleotidice
2.5. Corelaii dintre genotip i fenotip
3. Anomaliile cromozomiale (vezi LP)
Variabilitatea genetic = ansamblul de fenomene
care produc diferenele genetice
- ntre indivizii unei populaii,
- ntre populaii diferite
Sursele de variabilitate:
1.1. Mutaiile,
1.2. Recombinrile genetice,
1.3. Migraiile.
DIVERSITATE
EVOLUIE
VARIABILITATEA GENETIC: definiie i surse
1. Mutaiile
Mutaiile:
modificri
n secvena
sau aranjarea
nucleotidelor din ADN
Nenaturale,
permanente (),
ereditare

Consecine:
fr efect,
variaii fenotipice
normale,
boal.
Clasificarea mutaiilor - criterii
Mrimea materialului genetic:
M. genice

M. cromozomiale
(anom. structur)

M. genomice
(anom. numr)

Tipul de celul afectat:
M. germinale ereditare

M. somatice clone
anormale (mbtrnire,
cancer) ne-ereditare
Cauz:
M. spontane
erori de replicare ADN
erori de recombinare
(CO inegal)
erori de distribuie
(nedisjuncie)
M. induse ag.mutageni

Consecine fenotipice
M. germinale:
M. patogene ( boli)
M. neutre ( acelasi caracter)
M. benefice ( caracter mai bun)
M. somatice clone cancer,
mbtrnire
COMENTARII:
(1). Mutaiile n special cele genomice sunt
frecvente.
M. germinale = 3% nn

Mutaiile sunt o cauz major de boal
sau de predispoziie la mbolnvire
COMENTARII:

(2). M. somatice, produse prin erori de replicare,
se acumuleaz cu vrsta efecte la vrsta a III-a
(50.000/genom/zi corecie erori una la
fiecare replicare genom x 10
15
diviziuni
cteva mii)

(3). Mutaiile spontane = mai frecvente ca cele
induse.

COMENTARII:
(4). Mutaiile induse:
ageni mutageni exogeni:
- fizici (radiaiile UV, ionizante) efecte relativ mici;
- chimici (ag. alchilani / metilani etc., ce polueaz
atmosfera / alimente efecte relativ mari !!!);
fumul de igar cel mai important agent
mutagen exogen
- biologici (virusuri)
ageni mutageni endogeni:
produi oxidani (10.000 leziuni /genom /zi) sisteme
antioxidante + mecanisme de reparare + antioxidani exogeni.
2. Recombinrile genetice (RG)
RG = producerea unor combinaii genetice noi
(recombinani), prin rearanjarea materialului
genetic cuprins n dou uniti genetice diferite.
RG presupune: asociere intim + interaciune /
schimb egal
RG = proces natural (normal) cea mai mare
surs de variabilitate.

RG: genomice, cromozomice, genice
a) R. genomic:
- n procesul sexual (fecundarea) = unirea genomuri gamei
b) R. cromozomial
- n gametogenez

- R. intercromozomial
(anafaza I) = asortarea
independent a crz.omologi
2
23
x 2
23
combinaii
zigot cu structur genetic
unic.

- R. intracromozomial
(profaz I) = CO egal
c) R. intragenic
CO egal ntre dou
gene gen hibrid
(fuziune genic)
3. Migraiile
Migraii = transferul de gene prin deplasarea i
ncruciarea unui grup de indivizi dintr-o
populaie n alt populaie genetic diferit.


Surs important de variabilitate i vigoare
hibrid (heterozis)
MUTAIILE GENICE

MUTAIILE GENICE: definiie i clasificare

MG = modificri ale secvenei nucleotidice sau aranjrii
ADN unei gene variante alelice

x m1
gena N = m2
0 m3
Clasificarea
mutaiilor genice
dup mecanism:
modificarea secvenei N:
substituii = nlocuirea unei perechi de baze (pb).
deleii = pierderea unei/unor pb
inserii= introducerea unei/unor pb

modificarea aranjrii N:
recombinri omoloage nealelice deleie / duplicaie
segmente ADN
amplificarea repetiiilor trinucleotidice
Clasificarea mutaiilor genice
dup dinamica:
M. stabile / fixe se transmit constant de la o generatie
la alta;
M. instabile / dinamice! cresc cand se transmit de la
o generatie la alta ( boli)
dup secvenele genice implicate:
Exoni (de obicei cu consecinte, exonii fiind secvente
codante),
Introni (de obicei fara consecinte, exonii fiind secvente
necodante)
secvene reglatoare (de obicei cu blocarea/
nefunctionarea genei)

1. SUBSTITUIA NUCLEOTIDIC

Substituie = nlocuirea unui singur nucleotid (i
deci a unei pb) = mutaie punctiform.

S = cel mai frecvent tip de mutaie ntlnit la om.
a).Substituia nucleotidic:
localizare intragenic:exoni, introni, reg.reglatoare
n EXONI:

a). Codon sens
(1) codon sens sinonim
protein N (silent m.)
(2) alt codon sens AA1 AA2
protein An (missens m.)
(3) codon nonsens prematur
protein An scurtat (instabil)
(non-sens m.)

b). Codon nonsens
codon sens protein An alungit
alt codon nonsens protein N
ADN N (1) (2) (3)
TTT TTC CTT ATT


ARNm
AAA AAG GAA UAA


Pr
..liz... ...liz... ..glu.. ..STOP..
Substituia nucleotidic: localizare intragenic
n INTRONI:
Anulare situsuri de decupare:
(splice site mutations)
5GT---------AG3

absena matisrii includerea
intron n ARNm instabil

ADN
X
GA-----------AG

ARNm



Pr ---------------------

Exon 1 Exon 2
Exon 1 Intron Exon 2
instabil
m a t i s a r e
Substituia nucleotidic: localizare intragenic
n SECVENELE DE REGLARE
reg 5 - promotor modificri cantitative
ale sintezei proteinelor
reg 3 anomalii de poliadenilare
ARNm instabil
19
b). Mecanismele posibile de producere a
substituiilor
(1). erori de replicare a ADN, datorit mperecherii
greite (mismatch) a nucleotidelor n catena nou
sintetizat.
A T
G C
A T
T
G T
A
G C
MPERECHERE
GREIT
A
G
T
C
A
A
T
T
T A
G C C
T A
G
MUTAIE
Substituii nucleotidice
prin erori de replicare a
ADN
21
Mecanismele posibile de producere a substituiilor
(2). leziuni provocate n ADN de factori
mutageni, exogeni sau endogeni,
(fizici sau chimici )
- dezaminare,
- depurinare,
- demetilare
c). Mecanismele reparare a leziunilor ADN
Erorile de mperechere au o frecven mare, de
~1:10.000 (10
-4
).

Rata mutaiilor este meninut la un nivel sczut (10
-10
)
prin intervenia unor mecanisme de recunoatere i
reparare a leziunilor (controlul calitii ADN).

Aciunea lor este cuplat cu mecanismele de control a
progresiei prin ciclul celular i cu apoptoza.
G1 Go reparare G1 sau apoptoz

NU au o eficien absolut; n final, se produce o mutaie
nou la fiecare replicare / diviziune celular.
Mecanismele reparare a leziunilor ADN
Tipuri mecanisme reparare (R):
R. erorilor de mperechere a nucleotidelor din cursul
replicrii
(mismatch repair = MMR)
R. bazelor /nucleotidelor modificate dup replicare:
excizie a bazelor (BER)
excizia nucleotidelor (NER)
R. rupturilor ADN (sistemul HR)
Mecanismele reparare a leziunilor ADN
Mecanismele de reparare (MMR, BER, NER) difer prin
inta lor dar modul de aciune este asemntor
(implicnd multiple gene i enzime mutator);
Etape:
recunoaterea leziunii ADN,
excizia fragmentului de ADNmodificat
(endonucleaz)
ndeprtarea i degradarea fragmentului
(exonucleaz)
refacerea secvenei normale
(ADNpolimeraza)=reparare
legarea ei la caten (ligaza)
Mecanismele reparare a leziunilor ADN
Mutaiile genelor ce codific enzime de reparare
acumulare rapid mutaii creterea
susceptibilitii la cancer

Ex.1, mutaiile genelor implicate n calea MMR cancerul
colorectal non-polipozic ereditar (HNPCC) = 5% din cancere
de colon
Caracteristici: apar sub 45-50 ani; loclizare proximal de
unghiul splenic; cancere mucinoase; instabilitatea
microsateliilor
Ex.2., mutaiile genelor implicat n calea HR cancerul de sn
ereditar (genele BRCA1, BRCA2); Ataxia telangiectazia
2. DELEII I INSERII MICI
Del /Ins - care NU sunt multiplu de 3 nucleotide
decalarea (defazarea) cadrului de lectur al genei
(m. frameshift) schimbarea secvenei AA n aval
de del/ins

Del /Ins a 3 nucleotide / multiplu de 3 1-n
aminoacizi
Mecanismul de producere a deleii /inserii:
glisare / derapare replicativ

determinat de mperecherea decalat a unor
secvene repetate
Acest mecanism explic polimorfismul minisateliilor i
expansiunea repetiiilor trinucleotidice
3. RECOMBINAREA GENIC ABERANT
(recombinare omoloag nealelic)
Are loc n profaza meiozei I:
- mperecherea (sinapsa) greit ntre regiuni
omoloage (secvene de ADN identice sau
cvasiidentice;
ex., R1 ~ R2) dar nealelice;

- CO schimb inegal ntre crz. omologi deleii,
duplicaii, inversii a unor segmente mari
Recombinarea omoloag nealelic (RON)
RON se produce datorit arhitecturii genomului uman
Conine numeroase regiunile omoloage (~identice):
duplicaii segmentare (5-10% din genom);
secvene repetitive mici (numr mic de repetiii identice)
situate n anumite segmente ale cromozomilor
(la/lng centromer sau telomere);

RON determin deleii, duplicaii, inversii ADN
BOLI GENOMICE
(deosebite de bolile cauzate de alterarea secvenei genice)
Bolile genomice
Descrise recent (Lupski, 2002)
Frecvente (10
-4
)
n funcie de mrimea segmentului implicat
(si deci nr de gene) :
boli monogenice (NF1)
sdr. cu microdeleii (sdr. VCF)
rearanjamente cromozomiale mari (inversii,
izocromozomi).
4. EXPANSIUNEA INSTABIL
A REPETIIILOR TRINUCLEOTIDICE
Tip nou de mutaii instabile sau dinamice diferit de
mutaiile clasice= permanente i stabile
Se produc n genomul uman n regiuni cu repetiii
trinucleotidice:
dispuse n tandem: CGG CGG CGG
polimorfice (ntr-un numr diferit la persoanele normale); ex
CGG = 6-50 repetiii.
situate n diferite segmente ale genei (promotor; exoni; introni);
ex. CGG n regiune promotor a genei FMR1 (Xq27.3 n situsul
fragil FRAXA)
inerte funcional (CGG=6-50 fenotip normal)
instabilitate intergeneraional (meiotic)
Expansiunea instabil a repetiiilor trinucleotidice
instabilitatea intergeneraional (meiotic):
Pe msur ce gena trece prin meioz de la o generaie la alta
nr. repetiiilor trinucleotidice crete progresiv dar moderat;
se produce o premutaie (pt CGG = 60-200 repetiii) normal
mecanism: glisare sau derapare replicativ

Cnd se ajunge la un prag critic (ex. pt CGG = 230 repetiii)
blocarea expresiei genei mutaie boal

boli prin mutaii dinamice (expansiunea trinucleotidelor):
Sdr. X fragil (prin expansiunea CGG) retard mintal legat de X
Boala Huntington (prin expansiunea CAG) boal neurologic
degenetaiv
Distrofia miotonic (prin expansiunea CTG) afeciune
neuromuscular
Mecanismul de producere a expansiunii
repetiiilor trinucleotidice:
glisare / derapare replicativ

determinat de mperecherea decalat a
unor secvene repetate
Expansiunea instabil a repetiiilor trinucleotidice
instabilitatea intergeneraional (meiotic):
Pe msur ce gena trece prin meioz de la o generaie la alta
nr. repetiiilor trinucleotidice crete progresiv dar moderat;
se produce o premutaie (pt CGG = 60-200 repetiii) normal
mecanism: glisare sau derapare replicativ

Cnd se ajunge la un prag critic (ex. pt CGG = 230 repetiii)
blocarea expresiei genei mutaie boal
boli prin mutaii dinamice (expansiunea trinucleotidelor):
Sdr. X fragil (prin expansiunea CGG) retard mintal legat de X
Boala Huntington (prin expansiunea CAG) boal neurologic
degenetaiv
Distrofia miotonic (prin expansiunea CTG) afeciune
neuromuscular
Sdr. X fragil
transmitere recesiv legat de (F
S
B
B
)
particular
expansiune
expansiune
expansiune expansiune
Brbat
transmitor
Femei bolnave
Boli prin mutaii dinamice -
caracteristici:
Expansiunea crete n succesiunea generaiilor boala
apare mai precoce i este mai grav (anticipaie)

Intensitatea /gravitatea manifestrii bolii depinde
uneori de sexul printelui; mama n sdr. X fragil; tatl
n boala Huntington
EFECTELE FENOTIPICE ALE MUTAIILOR
GENICE PATOGENE
1. Pierderea (total/parial) a funciei(activitii) genei
- n majoritatea bolilor recesive (bolnavii = homozigoi)
2. Ctigul de funcie
- creterea nivelului de expresie a proteinei
- ex., activarea permanent a unui receptor n absena ligandului
3. Achiziia unor proprieti noi a proteinei mutante
- ex., deficit n alfa-1 antitripsin varianta 1 AT Pittsburg nu
mai acioneaz ca o anti- elastaz ci ca un inhibitor al coagulrii.
4. Expresia inadecvat a genei ca timp i loc
- ex., persistena ereditar a Hb fetale
- oncogenele
Corelaii dintre genotip i fenotip
o gen o boal
n unele boli (ex., sicklemia) mutaia este unic la toi
bolnavii manifestare identic a bolii;
n alte boli bolnavii au mutaii diferite n aceeai gen
graviti dfierite.
o gen mai multe boli
Mutaii diferite n gena RET b. Hirschprung (megacolon
congenital); cancer ereditar tiroid+suprarenale
Mutaii diferite a genei beta-globin sicklemia (AR); beta-
talasmia (AR); methemoglobinopatia (AD)
mai multe gene o boal
B. Hirschprung mutaii gene RET sau ECE1 sau EDN3

Mutaiile genice
cauz major de boal
sau de
predispoziie la mbolnvire

3. ANOMALIILE CROMOZOMIALE
VEZI LUCRRILE PRACTICE