VARIABILITATEA EREDITAR

2
VARIABILITATEA GENETIC
probleme:
1. Variabilitatea: definiie i surse
2. Mutaiile genice:
2.1. Substituiile nucleotidice
2.2. Deleiile si inseriile nucleotidice mici
2.3. Recombinri omoloage nealelice
2.4. Expansiunea instabil a repetiiilor
trinucleotidice
2.5. Corelaii dintre genotip i fenotip
3. Mutaiile cromosomice i genomice
3
Variabilitatea genetic = ansamblul de fenomene
care produc diferenele genetice
- ntre indivizii unei populaii,
- ntre populaii diferite
Sursele de variabilitate:
1.1. Recombinrile genetice,
1.2. Mutaiile,
1.3. Migraiile.
DIVERSITATE
EVOLUIE
1. VARIABILITATEA GENETIC: definiie i surse
4
1.1. Recombinrile genetice (RG)
RG = producerea unor combinaii genetice noi
(recombinani), prin rearanjarea materialului
genetic cuprins n dou uniti genetice diferite.
RG presupune: asociere intim + interaciune /
schimb egal
RG = proces natural (normal) * cea mai mare
surs de variabilitate.

RG: genomice, cromozomice, genice
5
R. genomic:
- n fecundare unirea genomuri gamei
R. cromozomial
- n gametogenez
- R. intercromozomial
(anafaza I) = asortarea
independent a crz.omologi
2
23
combinaii posibile
gamet cu structur genetic
unic.
- R. intracromozomial
(profaz I) = CO egal
R. intragenic
CO egal ntre dou gene
gen hibrid (fuziune
genic)
6
1. 2. Mutaiile
Mutaiile:
modificri
n secvena
sau aranjarea
nucleotidelor (secvenelor)
din ADN
Nenaturale,
permanente (),
ereditare

Consecine:
fr efect,
variaii fenotipice
normale,
boal.
7
Clasificarea mutaiilor
criterii:
Mrimea materialului genetic:
M. genice
(10
-6
/locus)
M. cromozomiale
(anom. structur)
(10
-6
/diviz. cel)
M. genomice
(anom. numr)
(10
-2
/diviz. cel)

Tipul de celul afectat:
M. germinale ereditare
M. somatice clone an.
ne-ereditare
Cauz:
M. Spontane (majoritatea)
erori de replicare a
ADN
erori de recombinare
(CO inegal)
erori de distribuie
(nedisjuncie)
M. induse de ag.mutageni

Consecine fenotipice
M. germinale:
M. patogene
M. neutre
M. benefice
M. somatice clone cancer,
mbtrnire
8
COMENTARII:
(1). Mutaiile n special cele genomice sunt
frecvente.
M. germinale = 3% nn

Mutaiile sunt o cauz major de boal
sau de predispoziie la mbolnvire
9
COMENTARII:

(2). M. somatice, produse prin erori de replicare,
se acumuleaz cu vrsta efecte la vrsta a III-a
(50.000/genom/zi corecie erori una la
fiecare replicare genom x 10
15
diviziuni
cteva mii)
(3). Mutaiile spontane = mai frecvente ca cele
induse.

10
COMENTARII:
(4). Mutaiile induse:
ageni mutageni exogeni:
- fizici (radiaiile UV, ionizante) efecte relativ mici;
- chimici (ag. alchilani / metilani etc., ce polueaz
atmosfera / alimente efecte relativ grave !!!);
fumul de igar cel mai important agent
mutagen exogen
- biologici (virusuri)
ageni mutageni endogeni:
produi oxidani (10.000 leziuni /genom /zi) sisteme
antioxidante + mecanisme de reparare + antioxidani exogeni.
11
1.3. Migraiile
Migraii = transferul de gene prin deplasarea i
ncruciarea unui grup de indivizi dintr-o
populaie n alt populaie genetic diferit.


Surs important de variabilitate i vigoare
hibrid (heterozis)
12
2. MUTAIILE GENICE

MUTAIILE GENICE: definiie i clasificare

MG = modificri ale secvenei nucleotidice sau aranjrii
ADN unei gene variante alelice

m1
gena N m2
m3
13
Clasificarea mutaiilor genice

dup mecanism:

modificarea secvenei N:
substituii = nlocuirea unei perechi
de baze (pb).
deleii = pierderea unei/unor pb
inserii= introducerea unei/unor pb

modificarea aranjrii N:
recombinri omoloage nealelice
deleie / duplicaie segmente ADN
amplificarea repetiiilor trinucleotidice

A
T

14
Clasificarea mutaiilor genice
dup dinamica:
M. stabile / fixe
M. instabile / dinamice!
dup secvenele
genice implicate:
exoni,
introni
secvene reglatoare

15

2.1. SUBSTITUIA NUCLEOTIDIC

Substituie = nlocuirea unui singur nucleotid (i
deci a unei pb) = mutaie punctiform.

S = cel mai frecvent tip de mutaie ntlnit la om.
16
a).Substituia nucleotidic:
localizare intragenic
n EXONI:
a). Codon sens
(1) codon sens sinonim
protein N (silent m.)
(2) alt codon sens AA1 AA2
protein An (missens m.)
(3) codon nonsens prematur
protein An scurtat (instabil)
(non-sens m.)
b). Codon nonsens
codon sens protein An
alungit
alt codon nonsens protein N
ADN N (1) (2) (3)
TTT TTC CTT ATT


ARNm
AAA AAG GAA UAA


Pr
..liz... ...liz... ..glu.. ..STOP..
17
Substituia nucleotidic: localizare intragenic
n INTRONI:
Anulare situsuri de decupare:
(splice site mutations)
5GT---------AG3

absena matisrii includerea
intron n ARNm instabil

ADN
X
GA-----------AG

ARNm



Pr ---------------------

Exon 1 Exon 2
Exon 1 Intron Exon 2
instabil
m a t i s a r e
18
Substituia nucleotidic: localizare intragenic
n SECVENELE DE
REGLARE
reg 5 - promotor
modificri cantitative ale
sintezei proteinelor
reg 3 anomalii de
poliadenilare ARNm
instabil

19
b). Mecanismele posibile de producere a
substituiilor
(1). erori de replicare a ADN, datorit mperecherii
greite (mismatch) a nucleotidelor n catena nou
sintetizat.
20
Mecanismele posibile de producere a substituiilor
(2). leziuni provocate
n ADN de factori
mutageni, exogeni
sau endogeni,
(fizici sau chimici )
- dezaminare,
- depurinare,
- demetilare
21
c). Mecanismele reparare a leziunilor ADN
Erorile de mperechere au o frecven mare, de
~1:10.000 (10
-4
).

Rata mutaiilor este meninut la un nivel sczut (10
-10
)
prin intervenia unor mecanisme de recunoatere i
reparare a leziunilor (controlul calitii ADN).

Aciunea lor este cuplat cu mecanismele de control a
progresiei prin ciclul celular i cu apoptoza.
G1 Go reparare G1 sau apoptoz

NU au o eficien absolut; n final, se produce o mutaie
nou la fiecare replicare / diviziune celular.
22
Mecanismele reparare a leziunilor ADN
Tipuri mecanisme reparare (R):
R. erorilor de mperechere a nucleotidelor din cursul
replicrii
(mismatch repair = MMR)
R. bazelor /nucleotidelor modificate dup replicare:
excizie a bazelor (BER)
excizia nucleotidelor (NER)
R. rupturilor ADN (sistemul HR)
23
Mecanismele reparare a leziunilor ADN
Mecanismele de reparare (MMR, BER,
NER) difer prin inta lor dar modul de
aciune este asemntor (implicnd
multiple gene i enzime mutator);
Etape:
recunoaterea leziunii ADN,
excizia fragmentului de
ADNmodificat (endonucleaz)
ndeprtarea i degradarea
fragmentului (exonucleaz)
refacerea secvenei normale
(ADNpolimeraza)=reparare
legarea ei la caten (ligaza)
24
Mecanismele reparare a leziunilor ADN
Mutaiile genelor ce codific enzime de reparare
acumulare rapid mutaii creterea
susceptibilitii la cancer

Ex.1, mutaiile genelor implicate n calea MMR cancerul
colorectal non-polipozic ereditar (HNPCC) = 5% din cancere
de colon
Caracteristici: apar sub 45-50 ani; loclizare proximal de
unghiul splenic; cancere mucinoase; instabilitatea
microsateliilor
Ex.2., mutaiile genelor implicat n calea HR cancerul de sn
ereditar (genele BRCA1, BRCA2); Ataxia telangiectazia
25
2.2. DELEII I INSERII MICI
Del /Ins - care NU sunt multiplu de 3 nucleotide
decalarea (defazarea) cadrului de lectur al genei (m.
frameshift) schimbarea secvenei AA n aval de del/ins








Del /Ins a 3 nucleotide / multiplu de 3 1-n aminoacizi
Mecanismul de
producere a
deleii /inserii:
glisare / derapare
replicativ

determinat de
mperecherea
decalat a unor
secvene repetate
Secvenele repetate din catena nou-
sintetizat se aliniaz greit (gliseaz
nainte sau napoi) fa de secvenele
complementare ale catenei matri
Acest mecanism
explic polimorfismul
minisateliilor i
expansiunea repetiiilor
trinucleotidice
27
2.3. RECOMBINAREA GENIC ABERANT
(recombinare omoloag nealelic)
Are loc n profaza meiozei I:
- mperecherea (sinapsa)
greit ntre regiuni
omoloage (secvene de ADN
identice sau cvasiidentice;
ex., R1 ~ R2) dar nealelice;

- CO schimb inegal ntre
crz. omologi deleii,
duplicaii, inversii a unor
segmente mari
28
Recombinarea omoloag nealelic (RON)
RON se produce datorit arhitecturii genomului uman
Conine numeroase regiunile omoloage (~identice):
duplicaii segmentare (5-10% din genom);
secvene repetitive mici (numr mic de repetiii identice)
situate n anumite segmente ale cromozomilor
(la/lng centromer sau telomere);

RON determin deleii, duplicaii, inversii ADN
BOLI GENOMICE
(deosebite de bolile cauzate de alterarea secvenei genice)
29
Bolile genomice
Descrise recent (Lupski, 2002)
Frecvente (10
-4
)
n funcie de mrimea segmentului implicat
(si deci nr de gene) :
boli mendeliene (NF1)
sdr. cu microdeleii (sdr. VCF)
rearanjamente cromozomiale mari (inversii,
izocromozomi).
30
2.4. EXPANSIUNEA INSTABIL
A REPETIIILOR TRINUCLEOTIDICE
Tip nou de mutaii instabile sau dinamice diferit de
mutaiile clasice= permanente i stabile
Se produc n genomul uman n regiuni cu repetiii
trinucleotidice:
dispuse n tandem: CGG CGG CGG
polimorfice (ntr-un numr diferit la persoanele normale); ex
CGG = 6-50 repetiii.
situate n diferite segmente ale genei (promotor; exoni; introni);
ex. CGG n regiune promotor a genei FMR1 (Xq27.3 n situsul
fragil FRAXA)
inerte funcional (CGG=6-50 fenotip normal)
instabilitate intergeneraional (meiotic)
31
Expansiunea instabil a repetiiilor trinucleotidice
instabilitatea intergeneraional (meiotic):
Pe msur ce gena trece prin meioz de la o generaie la alta
nr. repetiiilor trinucleotidice crete progresiv dar moderat;
se produce o premutaie (pt CGG = 60-200 repetiii) normal
mecanism: glisare sau derapare replicativ

Cnd se ajunge la un prag critic (ex. pt CGG = 230 repetiii)
blocarea expresiei genei mutaie boal
boli prin mutaii dinamice (expansiunea trinucleotidelor):
Sdr. X fragil (prin expansiunea CGG) retard mintal legat de X
Boala Huntington (prin expansiunea CAG) boal neurologic
degenetaiv
Distrofia miotonic (prin expansiunea CTG) afeciune
neuromuscular
32
Sindromul X fragil

Inciden
1/4.000 de nou-nscui de sex masculin.
Tip de transmitere
recesiv legat de cromosomul X.
Genetic
mutaia genei FMR1, localizat Xq27.3, se caracterizeaz prin amplificarea unei secvene trinucleotidice CGG,
existent n regiunea netranslat 5 a genei. n mod normal exist mai puin de 60 de repetiii CGG; n cursul
ovogenezei printr-o aliniere eronat a secvenelor CGG se poate produce creterea numrului de repetiii la mai
mult de 200 de secvene, cu apariia bolii la descendeni.
Patogenie:
n cazul prezenei unei amplificri trinucleotidice de 60-200, persoana are o premutaie, existnd un risc crescut
de a avea descendeni anormali;
prezena a mai mult de 200 de repetiii trinucleotidice determin hipermetilarea citozinei la nivelul regiunii
promotor a genei, ceea ce duce la pierderea funciei genei;
hipermetilarea citozinei modific replicarea regiunii respective i condensarea cromatinei ceea ce este corelat cu
apariia situsului fragil caracteristic (figura), evideniat prin cultivarea limfocitelor n mediu srac n acid folic sau
prin introducerea n mediu de cultur a metotrexatului
este prezent fenomenul de anticipaie, corelat cu creterea numrului de repetiii CGG n cursul ovogenezei;
Diagnostic clinic
fenotipul caracteristic sindromului X-fragil apare la brbaii aduli i const n dismorfie facial (fa alungit,
cu prognatism i urechi mari, proeminete) macroorhidie i retard mental moderat cu tulburri de comportament. La
copil afeciunea este sugerat de ntrzierea apariiei limbajului, hiperactivitate cu deficit de atenie sau
comportament de tip autist.
Diagnostic paraclinic
evidenierea prin PCR a numrului de repetiii CAG la descendenii unui individ afectat; evidenierea situsului X
fragil prin tehnici citogenetice clasice.
Prognostic
retard mental mediu.
Tratament
nu exist tratament specific.
33
Boli prin mutaii dinamice -
caracteristici:
Expansiunea crete n succesiunea generaiilor boala
apare mai precoce i este mai grav (anticipaie)

Intensitatea /gravitatea manifestrii bolii depinde
uneori de sexul printelui; mama n sdr. X fragil; tatl
n boala Huntington
34
2.6. EFECTELE FENOTIPICE ALE
MUTAIILOR GENICE PATOGENE
1. Pierderea (total/parial) a funciei(activitii) genei
- n majoritatea bolilor recesive (bolnavii = homozigoi)
2. Ctigul de funcie
- creterea nivelului de expresie a proteinei
- ex., activarea permanent a unui receptor n absena ligandului
3. Achiziia unor proprieti noi a proteinei mutante
- ex., deficit n alfa-1 antitripsin varianta 1 AT Pittsburg nu
mai acioneaz ca o anti- elastaz ci ca un inhibitor al coagulrii.
4. Expresia inadecvat a genei ca timp i loc
- ex., persistena ereditar a Hb fetale
- oncogenele
35
Corelaii dintre genotip i fenotip
o gen o boal
n unele boli (ex., sicklemia) mutaia este unic la toi
bolnavii manifestare identic a bolii;
n alte boli bolnavii au mutaii diferite n aceeai gen
graviti dfierite.
o gen mai multe boli
Mutaii diferite n gena RET b. Hirschprung (megacolon
congenital); cancer ereditar tiroid + suprarenale (sdr. MEN)
Mutaii diferite a genei beta-globin sicklemia (AR); beta-
talasmia (AR); methemoglobinopatia (AD)
mai multe gene o boal
B. Hirschprung mutaii gene RET sau ECE1 sau EDN3
36

Mutaiile genice
cauz major de boal
sau de
predispoziie la mbolnvire