HEMOGLOBINA: DOZARE,

SPECTROSCOPIE,
CRISTALE TEICHMANN.
HEMATOCRITUL. INDICII
ERITROCITARI.

HEMATOCRITUL
=fractiunea din sange compusa din celulele
sgv, in principal hematii
Barbati: ~45 %
Femei: ~ 35 - 40 %
Nou-nascuti: ~ 50%

Centrifugare
3000rpm, 510 min

VARIATIILE HEMATOCRITULUI
1. Cu nr de globule rosii: scade in anemie, creste in policitemie
2. Cu locul de recoltar: sg venos are HCT> sg arterial, dar mai putin
decat sg splenic
3. Cu statusul de hidratare: hemodilutie vs hemoconcentratie
4. Cu raportul eritropoieza / eritroliza

Impreuna cu ceilalti parametri eritrocitari: HCT, Hb, Nr hematii se stabileste dgn de

anemie.
Tipul de anemie se stabileste in functie de indicii eritrocitari:
MCV / VEM= Media volumului globulelor = 80-94 3
MCH / HEM= Hemoglobina eritrocitara medie = 25-33 pg
MCHC/ CHEM= Concentratia medie a hemoglobinei =32-36%

ANEMIILE
In functie de indici, anemiile se clasifica atfel;
i
1. anemie normocroma, normocitara
- hemoragie acuta
-anemie aplastica/ hipoplatica
-leucemie
- boala renala/ hepatica
2. anemie hipocroma, microcitara

In functie de cant Hb:

-Usoara: 8-11 g/dl

- deficit de fier

-Moderata: 6-8 g/dl

- pierderi sgv cronice

-Severa: <6 g/dl

-anemie hemolitica
- anemia din inflamatiile cronice
3. anemie normocroma, megalocitara
- deficit de vit B12
- deficit de acid folic

HEMOGLOBINA

-Functie principala in transportul gazelor sgv

- este o cromoproteina
- GM 68000 da
-Are 4 subunitati, fiecare avand 17000 da:
-Globina (polipeptid): tipuri de lanturi polpeptidice
-Grupare prostetica(hem): -Fe2+
-nucleu tetrapirolic (ca si vit B 12)

TIPURILE DE HB

Conversia de la HbF la HbA apare in primele 3-6 luni de la nastere.

65% din Hb este sintetizata in eritroblasti.
35% din Hb este sintetizata in reticulocite.

METABOLISMUL FIERULUI
Cantitatea totala de Fier din organism : 4 +/- 0.5 g
Este impartit in urmatoarele compartimente:
-Hb 67%
-Fier stocat ca feritina si hemosiderina 27%
-Mioglobina 3,5 %
-Enzime oxidative 0.2 %
-Plasma
Absorbtia fierului
Necesar minim:

-nou nascut 10 mg/24h

- copii 5 mg/ 24 h
-femei tinere: 20 mg/24 h
- femei insarcinate: 30mg/24 h
- barbati: 10 mg/ 24 h

1 Fe2+ leaga 1 O2 => 1 Hb leaga 4 O2 => 1 g Hb leaga 1.34 ml O2

La o concentratie a Hb in sg de 15 g/100 ml, sunt 20 ml O2 in 100 ml sg.

IDENTIFICAREA HEMOGLOBINEI

Metoda colorimetrica Sahli:

-Aparatul folosit este hemometrul Sahli,format dintr-un support cu 3 eprubete: doua laterale
care contin standardul (solutie declorhemina) si una centrala, gradate in unitati Sahli(US), de la
10 la 140 US si uneori si in grame Hb/100ml sange.
-In spatele eprubetelor se afla un geam mat care usureaza compararea nuantelor solutiilor de
clorhemina. Aparatul are anexata o pipeta capilara pentru recoltarea sangelui, asemanatoare cu
pipeta Potain, dar care nu prezinta portiunea dilatata si
are doar un reper la diviziunea 20 l (0,02 ml).
Principiu:
Se compara Solutia de clorhemina (hematina) obtinuta din sangele din care se face
dozarea(Hb+HCl) cu clorhemina standard a aparatului. Metoda este subiectiva, depinde
mult desensibilitatea vizuala a persoanei care lucreaza.

Tehnica:
1.In eprubeta centrala se pune HCl pana la diviziunea 10 US.
2.Se recolteaza sange capilar din pulpa degetului sau din calcai (la nou-nascut) direct cu pipeta
capilara, aspirandu-se pana la reperul 20 l. Se poate folosi si sange venos.
3. Se sterge varful pipetei de eventualele urme de sange.
4. Se introduce varful pipetei pana la fundul eprubetei si se sufla cu grija sangele in HCl, fara a
se forma bule; se clateste de 2-3 ori pipeta cu Solutia din eprubeta, apoi se agita usor pentru
omogenizare.
5. Se asteapta 10 minute formarea clorheminei de culoare maron-brun.6.
Cu o pipeta Pasteur se adauga putin cate putin apa distilata si se omogenizeaza cu o bagheta
subtire de sticla, pana cand culoarea solutiei de clorhemina din eprubeta centrala devine
identica cu cea a clorheminei standard a aparatului.

Citirea si transformarea US in Grame%:

Citirea se face la nivelul inferior al meniscului solutiei de clorhemina,
direct in unitati sahli(US).
Aparatul este astfel realizat incat la 100 US corespund 16 g HB/100
ml sange.De exemplu, se citesc 80 US =>
100 US.16 g%
80 US..x%
=>x=(80x16)/100=12,8%Hb
Valori normale:
-nou-nascut: 110-135 US sau 17-20 g%
-barbati: 90-110 US sau 15-17g%
-femei: 80-100 US sau 13,5-15,5 g%

OBSERVAREA CRISTALELOR TEICHMAN

= cristale de hematina (clorhemina)
- obtinute prin tratarea Hb cu HCl
- rezulta din reactia NaCl cu acid acetic glacial
Tehnica:
1.Se face un frotiu, prin punerea unei picaturi de sange pe lama si
intinderea ei in strat subtire cu ajutorul unei lame inclinate la 45.
2. Se usuca frotiul la temperature camerei sau la flacara, maxim 40-45C
3. Se adauga pe frotiu o picatura de amestec acid acetic glacial si NaCl 1%
si se acopera cu o lamella.
4. Se incalzeste la flacara pana la fierbere-pana apar bule. Culoarea
preparatului devine maron => s-a format clorhemina: hematiile lizeaza,
eliberand Hb, iar HCl in stare nascanda descompune Hb in hem+globina
si apoi HCl+hem=>clorhemina.
5. Se raceste lent, la temperature camerei si se observa la MO (obiectivul
10x sau 40x)prezenta unor cristale rombice, brune, numite cristale
Teichman

Interpretare: Prezenta cristalelor Teichman arata ca in reactive s-a

folosit sange. Este o metoda de identificare a petelor de sange,
folosita in medicina legala. Nu permite insa precizarea specie de la
care provine sangele, pentru ca hemul este acelasi la toate
vertebratele, numai globina difera.

Evidentierea spectroscopica a Hb
Normal, hematiile contin oxi-Hb, carb-Hb si eventual mici cantitati de met-Hb
si carboxi-Hb. Este importanta cunoasterea spectrelor de absorbtie caracteristice
fiecaruia din acesti compusi deoarece pe baza lor se identifica prezenta acestora in
sange.
Principiul spectroscopiei: Razele de lumina care trec prin
lentilele spectroscopului sunt descompuse in cele 7 culori care compun lumina
alba: rosu, orange, galben, verde, albastru,indigo, violet.
Hb si derivatii ei au spectre de absorbtie diferite, adica absorb razele luminoase cu
o anumita lungime de unda (). Astfel, una sau mai multe culori vor fi acoperite de
benzi intunecate, negre, care corespund lungimii de unda in care acea substanta
absoarbe razele luminoase.
Tehnica: se prepara solutii cu derivati de Hb, se pun in eprubete si eprubetele se
analizeaza la spectroscop.

1.Oxi-hemoglobina
Solutia de oxi-Hb (HbO2) se obtine din 20 ml apa si 3 picaturi de sange. La
contactul cu aerul solutia capata o culoare rosu-deschis, pentru ca Hb se
satureaza cu oxigen.
Spectroscopic, se observa 2 benzi de absorbtie:una mai lata care acopera
partial culoarea galbena (577 nm) si una mai ingusta peste culoarea
verde(536-556 nm).

2.Hemoglobina redusa
Pentru prepararea solutiei de Hb redusa (HbH+) se folosesc 10 ml din
solutia de oxi-Hb la care se adauga cateva cristale de hidrosulfit de sodium.
Culoarea solutiei este rosu-violaceu.
Analiza spectroscopica arata o singura banda de absorbtie care acopera
culorile galben si verde, numita banda Stokes.
Scaderea oxi-Hb si cresterea proportiei de HbH+ peste 1/3 din Hb totala,
adica peste 5g%,duce la coloratia albastruie a tegumentelor si mucoaselor,
numita cianoza.
Concentratiile normale ale Hb reduse sunt:
-0.75 g% in sg arterial
-2.4 g% in sg capilar
-4.5 g% in sg venos

De exemplu, in insuficienta cardiaca, insuficienta respiratorie, desaturarea

Hb de oxigen creste la nivel tisular, creste concentratie Hb reduse si
apare cianoza.

3.Carboxi-hemoglobina
Obtinerea solutiei de carboxi-Hb (HbCO) se realizeaza prin barbotarea timp de o ora
in Solutiade oxi-Hb, a CO provenit din arderea incompleta a carbunilor.
Solutia are culoare visinie si se gaseste gata-preparata in laborator.La spectroscop,
se observa 2 benzi de absorbtie asemanatoare cu ale oxi-Hb: in galben
si verde,deplasate putin spre violet.
Pentru a deosebi oxi-Hb de carboxi-Hb, se adauga solutiei cateva cristale de
hidrosulfit desodium si se analizeaza din nou spectroscopic:
-Daca este oxi-Hb, se reduce si apare banda Stokes;
-Daca este carboxi-Hb, nu se reduce si spectrul nu se modifica.

HbCO este un compus patologia al Hb, format rapid la expunerea sangelui la

monoxide decarbon, afinitatea Hb pentru CO fiind de 200 ori mai mare decat penntru
oxigen. O concentratie a CO in aerul atmosferic de 0.1% este suficienta pentru ca
50% din Hb sa se combine cu CO.Intoxicatia este letala atunci cand 70% din Hb
totala este sub forma de HbCO.

4. Met-hemoglobina
Se adauga 5 picaturi de fericianura de potasiu K3[Fe(CN)6] la 10 ml de solutie oxi-Hb si se
obtine Solutia de met-Hb, de culoare maron.
Analizata spectroscopic, met-Hb are 4 spectre de absorbtie: in rosu, galben, verde si albastru.
Met-Hb este Hb ce contine Fe3+, care nu fixeaza O2, ci radicalii OH. Astfel, Hb transporta
numai jumatate din cantitatea de oxigen (hipoxemie).
Legatura Fe3+OH este mai stabila ca legatura Fe3+ O2.
Ca si HbCO, met-Hb deviaza la stanga curba de disociere a oxi-Hb, cedarea O2 la tesuturi
facandu-se mai greu. Ca urmare, apare hypoxemia si hipoxia tisulara, semnele clinice aparand
la concentratii de peste 50% ale met-Hb din Hb totala. La concentratii peste 60% se instaleaza
coma.Sangele in car peste 15% din Hb totala este met-Hb (2g%) are culoare bruna si apare
cianoza albastra-cenusie a mucoaselor si tegumentelor.Mici cantitati de met-Hb se formeaza tot
timpul, dar Fe3+ este transformat in Fe2+ de o enzima sintetizata in ficat: methemoglobinreductaza, precum si pe cale neenzimatica, de glutationul redus si acidul ascorbic (vitamina C).
Concentratia sanguine normal maxima a met-Hb este 1% la adulti si1.5% la copii, care au
mecanismele de reducere sufficient dezvoltate.

Indici eritrocitari
VEM - volum eritrocitar mediu
- VEM = Ht x 10/ E
Ht hematocrit
E nr. Eritrocite / mm3
N = 80-94 3
VEM scazut = microcitoza anemii feriprive
VEM crescut = macrocitoza anemii megaloblastice
- deficit de vit B 12/acid folic
VOLUM CRITIC ERITROCITAR peste 134 3 hematia se
sparge

HEM Hemoglobina eritrocitara medie

= cantitatea medie de hemoglobina din eritrocit
HEM = Hb x 10/E
N: 25-33 pg eritrocit normocrom
HEM scazut E hipocrom
HEM crescut E hipercrom
CHEM - concentratia de hemoglobina medie eritrocitara
-Procentul de hemoglobina din eritrocit
CHEM = Hb x 100/Ht
N : 32-36%
scazut : hipocrom , crescut : hipercrom

Indice de sfericitate
-Diametrul hematiei raportat la grosimea eritrocitului
N : 3 - 3.4
Indicele de sfericitate scade in sferocitoza

Largirea distributiei eritrocitare RDW/RBC distribution weight

-Cuantifica heterogenitatea volumului eritrocitar
-RDW peste 17% in anemiile feriprive ( anemia microcitara
talasemii)
-Valori crescute in stadiile initiale ale carentei nutritionale de Fe
- Nu se modifica in anemiile cronice simple