CURS 3 Populaiile limfocitare i markerii lor de suprafa

Populaiile limfocitare i markerii lor de suprafa

-

din totalul celulelor seriei albe, limfocitele reprezint cam 25-40%, ceea ce corespunde unei
valori absolute de 1500-4000 de limfocite pe mm3
din punct de vedere morfologic, se mpart n:
1. Limfocite mici
aproximativ 80-85% din totalul limfocitelor periferice
diametru 6-9 m
raport nucleu/citoplasma supraunitar
subvarieti:
a. limfocite T
b. limfocite B
2. Limfocite mari
10-15% din totalul limfocitelor periferice
diametru 10-16m
prezint citoplasm foarte abundent ce nconjoar de jur mprejur nucleul
n citoplasm sunt prezente din abunden granulaii azurofile uor de evideniat n microscopia
optic
se numesc LGL (Large Granular Limphocytes)
ea include celulele NK implicate n imunitatea natural i RIC

1. Limfocitele mici
difereneierea LT/LB NU poate fi fcut niciodat pe baza unor criterii morfologice
diferene din punct de vedere electronomicroscopic
diferenierea se face rapid i eficient pe baza unui test funcional: testul Rozetrii (foarte vechi,
const n punerea n contact a limfocitelor raportate anterior prin tehnici de gradient cu eritrocite
de oaie; singurele care angajeaz legturi cu acestea i formeaz conglomerate celulare sunt LT)

LB NU sunt celule rozetante

LT prezint pe suprafaa lor un receptor tipic de adeziune intercelular (CD2). El NU exist pe
suprafaa LB
LT NU reprezint o populaie celular omogen, ci este foarte heterogen din punct de vedere
funcional
avem 4 subvarieti de LT:

Laura & Daniel

CURS 3 Populaiile limfocitare i markerii lor de suprafa

a. TH
b. TC
c. TS
d. TCS (contrasupresoare)
diferenierea dintre ele NU poate fi fcut pe baza criteriilor morfologice i nici pe baza testului
rozetrii pentru c toate rozeteaz la fel
diferenierea dintre ele se face prin evidenierea markerilor de suprafa
pe TH se afl un marker diferit de TC, TS, TCS
se bazeaz pe utilizarea Ac monoclonali (artificiali, cu nalt specificitate, marcai fluorescent i
recunosc tipic NUMAI 1 marker)
conteaz de fapt markerii de suprafa, NU forma limfocitelor

Limfocitele T
I.
Caractere generale
- reprezint populaia limfocitar majoritar prezent n sngele periferic (68-80% din totalul
limfocitelor periferice)
- sunt celule cu durat de via lung sau foarte lung (ani, yeci de ani, ct o via de om)
- celule intens recirculante (ele patruleaz continuu n ntreg organismul n cutarea Ag pentru
care sunt programate genetic)
II.
Receptorii de suprafa ai LT
- expun pe suprafaa lor 3 categorii de receptori:
1. Receptori de recunoatere Ag
a. Complexul TCR-CD3 - rol n recunoaterea Ag (epitopilor)
b. Coreceptori: CD4 sau CD8 (recunoaterea moleculelor prezentatoare ale
epitopilor CD4 MHC II
CD8 MHC I
Din a. i b. => recunosc simultan att Ag prezentat ct i moleculele prezentatoare ale acestora =
recunoaterea Ag asociativ (reprezint i principala cale de activare metabolic a LT)
2. Receptori cu rol accesor n activarea LT:
o CD28
o CD45
3. Receptori de adeziune intercelular
- permite stabilirea de contacte LT alte tipuri de celule
o CD2
o LFA1 (CD11A/CD18)
- CD = titulatura de catalog a receptorilor prezeni la suprafaa limfocitelor. CD urmat de un
numr = un singur receptor prezent la suprafaa LT. s-a recurs la aceast titulatur, pentru a se
nlocui titulaturile mai vechi, descriptive. Unele se mai pstreaz (LFA1 antigen asociat
funciei leucocitare; VLA antigen cu apariie foarte trzie, el apare dupa ce LT au fost activate,
deci apar foarte trziu; ICAM molecule de adeziune intercelulara)
- CD = cluster of designation
= class du differention
= clas de difereniere

1. Receptori de recunoatere Ag
Laura & Daniel

CURS 3 Populaiile limfocitare i markerii lor de suprafa

Caracteristicile recunoaterii Ag realizat de LT
i. LT recunosc Ag NUMAI dup structura lor primar (secvena de aa). Recunosc n
mod tipic doar Ag hidrofili
ii. LT recunosc NUMAI Ag prezentat pe suprafaa APC n complex cu molec MHC
(LT, spre deosebire de LB NU recunosc niciodat Ag solubile)
iii. Recunoaterea realizat de LT e prin definiie o recunoatere asociativ

a. Complexul TCR-CD3

pe suprafaa LT aflate n repaus exist n jur de 60000 de asemenea complexe

TCR (receptorul celulei T pentru Ag)
heterodimer constituit din 2 lanuri transmembranare ( i ) orientate cu capetele Nterminale afar i cele C-terminale n interiorul LT
lanurile sunt elaborate dup codul unor gene diferite: Cz 14, Cz 7
n segmentul extracelular i se asociaz ntre ele prin puni disulfurice

membrana LT strbtut de lanuri separ 3 segmente n cele 2 lanuri

a. segmentul extracelular

Laura & Daniel

CURS 3 Populaiile limfocitare i markerii lor de suprafa

lanurile NU sunt liniare, ci adopt o configuraie imunoglobin-like (sunt organizate n
bucle sau domenii situate simetric)
- pe cele 2 lanuri exist cte 2 domenii, fiind de principiu formate din 100-110 aa
- domeniile N-terminale sunt constituite din secvene de aa variabile/hipervariabile. Ele se
noteaz cu V i V
- V i V se asociaz ntre ele i constituie o cavitate de dimensiuni mici = situs
combinativ pentru Ag (SCAg)
- celelalte 2 domenii sunt constituite din secvene de aa constante ca structur pe
majoritatea limfocitelor. Se noteaz cu C i C
- dintre cele 2 perechi de domenii, cele mai importante din punct de vedere funcional sunt
cele variabile. Ele formeaz SCAg i pentru aceasta ele sunt responsabile de
recunoaterea Ag
- dei V i V sunt implicate n recunoaterea Ag, ele NU angajeaz niciodat contacte cu
Ag prin ntreaga lor secven de aa, ci realizeaz contacte cu Ag care sunt punctiforme,
realizate prin intermediul unor mici secvene de aa (8-15) rezultate n urma plicaturrii
V i V. Aceste segmente sunt situate n vrful plicaturilor i protruzioneaz adnc n
cavitate, realiznd legturi cu Ag prin potrivire de form sau complementaritate => ele se
numesc CDR (regiuni determinante ale complementaritii)
domeniile variabile V, V
- circular prin plicaturare
- plicaturile exist prin intermediul celor 3 puni disulfurice intradomeniu
- secvenele din vrful plicaturilor sunt doar ele responsabile de contactul cu Ag (8-15 aa).
Ele se numesc CDR
- pe fiecare domeniu exist 3 CDR. Ele constituie paratopul
- restul secvenelor = zona scheletal (FR framework regions)
- recunoaterea Ag se face prin stabilirea de contacte difereniate ntre CDR i complexul
MHC epitop
- LT recunosc doar Ag care sunt prezentate pe suprafaa APC
- APC expun prin moleculele MHC un epitop
- CDR1 CDR2 angajeaz legturi NUMAI cu moleculele MHC, recunoscnd din acestea
doar domeniile polimorfe (MHC I 1,2, MHC II 1, 1)
- CDR3 sunt singurele care asigur legturi cu epitopul prezentat
e recunoscut att epitopul, ct i prezentatorul acestuia, deci se realizeaz o recunoatere
Ag asociativ intrareceptorial (1 receptor 2 molecule recunoscute)
domeniile constante C, C
- poriunea din segmentul extracelular al TCR ntre domeniile intern i membranar = zona
balama
- n aceast poriune (ZB) lanurile i se asociaz ntre ele prin puni disulfurice =>
heterodimerul
- ea e poriunea din TCR dotat cu maximum de flexibilitate. n jurul ZB TCR execut n
mod continuu micri de baleiere, care favorizeaz recunoaterea Ag (contactul cu
complexul MHC epitop prezentat pe suprafaa APC)
-

b. segmentul transmembranar
-

constituit din 22-25 aa

Laura & Daniel

CURS 3 Populaiile limfocitare i markerii lor de suprafa

c. segmentul intracitoplasmatic
-

este extrem de scurt 5-12 aa

Funciile TCR
- realizeaz recunoaterea Ag
- genereaz semnale activatoare care apar secundar recunoaterii Ag
- NU poate realiza transmisia sau transducia semnalelor ctre sistemele enzimatice din
profunzime. Ea se realizez prin a doua component a complexului TCR-CD3, adic prin
CD3

CD3
complex pentameric, format din 5 lanuri:
3 lanuri scurte i groase care prezint segmente intracitoplasmatice destul de reduse
(notate , , ). Au GM de aproximativ 21-25kda i sunt elaborate dup gene prezente pe
cromozomul 11
- la cele 3 lanuri scurte i groase se asociaz 2 lanuri foarte lungi i efilate care cel mai
frecvent sunt identice ntre ele (notate , au GM de 16kda, fiind elaborate dup codul
unor gene aflate pe cromozomul 1)
- cele 5 lanuri se asociaz ntre ele prin puni disulfurice i se asociaza la TCR
complexul heptameric TCR-CD3
- CD3 trimite semnalele activatoare ctre lanurile , ele avnd acces la sistemele
enzimatice de profunzime
-

Laura & Daniel

CURS 3 Populaiile limfocitare i markerii lor de suprafa

-

CD3 fixeaz localizarea membranar a unor enzime foarte importante pentru activarea
metabolic a LT. Ea se face la nivelul unor secvene mici de aa prezente n poriunea
intracitoplasmatic a tuturor lanurilor CD3 se numesc ITAM (motive activator
imunoregulatoii tirozinice)

b. Coreceptori
-

CD4
coreceptor de recunoatere Ag
GM 60kda
elaborat dup codul unor gene prezente pe Cz 12
distribuia: CD4 e distribuit tipic pe suprafaa TH
el e considerat marker definitoriu pentru TH
TH = LT CD4+

e o glicoprotein transmembranar orientat cu captul N-terminal afar, C-terminal

nuntru
exist 3 segmente:
a. segmentul extracelular
organizat n bucle sau domenii
4 bucle diferite ntre ele (D1 D2 D3 D4)
E implicat n recunoaterea moleculelor prezentatoare de Ag

Laura & Daniel

CURS 3 Populaiile limfocitare i markerii lor de suprafa

Contactele se stabilesc cnd LT coopereaz n vederea recunoaterii Ag cu APC,

care expun MHC cu epitop
Receptorul recunoate NUMAI moleculele MHC II, contactndu-l prin D1,

NUMAI domeniul monomorf al moleculei MHC II 2

b. segmentul transmembranar
c. segmentul intracitoplasmatic
este foarte lung
prin el contribuie esenial la activarea TH

CD4 se afl n contact fizic cu o enzim (proteintirozinkinaz PTK1). Varietatea

tipic pentru TH e PTK p56lck
p56 proteina 56kda
lck titulatura protooncogenei responsabil de sinteza acestei proteinkinaze
(kinaz caracteristic leucocitelor)

CD8
glicoprotein transmembranar heterodimeric: 1 lan i unul
orientat cu capetele N-terminale afar i cele C-terminale la interior
elaborat dup codul unor gene de pe Cz 2
particularitate: n segmentul extracelular prezint cte un domeniu
domeniile sunt poziionate simetric => conformaie Ig-like
segmentele intracitoplasmatice sunt foarte lungi
CD8 e prezent pe suprafaa TC i TS (LT CD8+)
funcii realizate diferit prin segmentul extracelular i cel intracitoplasmatic
segmentul extracelular: cooperarea ntre TC/TS i APC (cooperarea se face cu ocazie
prezentrii i recunoaterii Ag. n timpul cooperrii CD8 recunoate specific NUMAI
moleculele MHC I, angajnd legturi NUMAI cu domeniul monomorf al MHC I 3).
Are rol important n activarea TC/TS.
segmentul intracitoplasmatic: se afl n contact cu aceeai PTK p56lck

Cei 4 receptori (TCR, CD3, CD4, CD8) realizeaz recunoaterea Ag asociativ.

- recunoaterea e dublu asociativ:
o recunoatere Ag asociativ intrareceptorial (realizat de TCR)
o recunoatere Ag asociativ interreceptorial (recunosc moleculele prezentatoare)
stabilirea unui numr mare de contacte intre moleculele prezentatoare i cele prezentate
LT leg. cu MHC (5) prin TCR i CD4/CD8
cu Epi (2) prin TCR
DAR ele se realizeaz DOAR cnd e recunoscut epitopul
- moleculele MHC de regul sunt molecule prezentate NUMAI pe membranele celulare =>
LT recunosc NUMAI Ag membranare
- Ag membranare pot fi de 3 tipuri:
1) Ag prezentate
2) Ag constitutive
3) Ag ataate

Laura & Daniel

CURS 3 Populaiile limfocitare i markerii lor de suprafa

- LT NU recunosc niciodat Ag ataate (Ac) i Ag constitutive (Ac/NK)

- LT recunosc DOAR Ag prezentate n complex cu MHC
recunoaterea Ag de LT este o recunoatere MHC restrictiv

Laura & Daniel

CURS 3 Populaiile limfocitare i markerii lor de suprafa

2. Receptori cu rol accesor n activarea LT

CD28

glicoprotein transmembranar homodimeric

GM 45kda
distribuie: prezent NUMAI pe suprafaa TH/TC i niciodat pe TS
segmentul extracelular: cte o bucl pe domeniu
segmentul intracitoplasmatic: lung sau foarte lung
funcie: favorizeaz net cooperarea dintre TH/TC i APC
n timpul cooperrii se stabilesc legturi ntre CD28 i un contraligand (CD80)
prezent NUMAI pe suprafaa APC profesionale => semnale activatoare care se
trimit ctre profunzime, ele contnd enorm pentru maturarea funcional a TH/TC
TH produce diverse tipuri de IL
TC produce CK

o CD45
glicoprotein transmembranar
GM 100-200kda
pe suprafaa tuturor celulelor de origine hematogen (excepie eritrocitele i
trombocitele)

Laura & Daniel

CURS 3 Populaiile limfocitare i markerii lor de suprafa

pe suprafaa LT e extrem de bine reprezentat (ocup 10% din suprafaa lor

membranar)
NU exist ca receptor izolat
El se ataeaz prin puni disulfurice la lanul al CD3 => CD45 e activat
ntotdeauna ca urmare a stimulrii Ag
Funcie enzimatic, e o fosfataz (PTP) care impreun cu PTK formeaz un cuplu
funcional extrem de important

3. Receptorii de adeziune intercelular

- foarte importani printre altele n cooperarea prin contact ntre LT i APC
= cooperare cognitiv

o CD2
- receptor panT (pe toate LT) i pe suprafaa celulelor NK
- glicoprotein transmembranar
- are GM 50kda
- segmentul extracelular prezint 2 domenii
- segmentul intracitoplasmatic este foarte lung
- funcii: segmentul extracelular stabilirea de contacte cu un contraligand prezent pe
APC (LFA3[CD58]) contacte prin complementaritate
Laura & Daniel

10

CURS 3 Populaiile limfocitare i markerii lor de suprafa

segmentul intracitoplasmatic pregtirea activrii LT, se afl n contact fizic

cu o enzim PLC (fosfolipaza C)
- cnd se stabilesc contacte CD2-LFA3, CD2 sufer modificri conformaionale ce
permit translocarea PLC de la nivelul citoplasmei la nivelul membranei
- LT naive = limfocite care n existena lor NU au ntlnit niciodat Ag pentru care au
fost programate genetic s l recunoasc
- cuplul de adeziune CD2-LFA3 = cuplul de adeziune de linia nti (primele legturi
dintre APC i LT se stabilesc prin acest cuplu). Afinitatea reciproc CD2-LFA3 e
extrem de mare
LFA1
prezent pe LT, LB, NK
2 lanuri (CD11a) i (CD18)
segmentul extracelular 2 domenii (imagine de Ig-like)
segmentul intracitoplasmatic foarte lung
funcie: segmentul extracelular stabilirea de contacte cu un contraligant prezent pe
suprafaa APC (din categoria ICAM)
prezent pe suprafaa LT, n mod particular pe suprafaa LT cu memorie (au ntlnit de
nenumrate ori Ag pentru care sunt programate s l recunoasc)
cuplul de adeziune LFA1-ICAM = cuplul de linie a doua (legturile se stabilesc mai
trziu i sunt instabile o perioad de timp)

Rolul receptorilor
- stabilirea de contacte APC-LT pe arii ntinse ale membranelor
- aceste cupluri de adeziune favorizeaza net prezentarea i recunoaterea Ag pentru c
MHC+Epi i TCR NU sunt poziionate fa n fa. Astfel ele au timp s pluteasc pe
membran i s vin n contact unul cu altul

LT
TH
TC
TS

Laura & Daniel

CD3
+
+
+

CD4
+
-

CD8
+
+

CD28
+
+
-

11