Prezentarea tehnologiilor de bioremediere

Principiile generale ale procesului de bioremediere n cadrul proceselor de bioremediere a mediilor poluate cu compui organici sunt implicate cteva componente importante, care sunt incluse n aa numitul triunghi al bioremedierii (figura 2.10.). Aceste componente sunt reprezentate de: substratul supus bioremedierii care se refer la diferite medii terestre sau acvatice contaminate cu diferite categorii de poluani, inclusiv compui foarte greu biodegradabili i substane xenobiotice; microorganismele (indigene sau special selectate) care au rolul de a degrada parial sau total agentul poluant din substratul supus bioremedierii; parametri fizico-chimici (nutrienii surs de azot, fosfor, magneziu, potasiu; aerare; temperatur; pH; umiditate etc.) care s susin eficiena biodegradrii poluanilor i o evoluie optim a procesului de bioremediere. Atunci cnd cele trei componente de baz sunt corect armonizate, procesul bioremedierii, indiferent dac se desfoar n condiii aerobe, microaerofile sau anaerobe, duce n final la mineralizarea total a poluantului, pn la produi prietenoi pentru mediul nconjurtor (H 2O, CO2, biomas microbian i ali compui netoxici). Un rol important n procesul de bioremediere revine microorganismelor care prin activiti catalitice asigur ndeprtarea parial sau total a poluantului din mediu sau conversia acestuia n forme mai puin toxice sau chiar inofensive pentru mediu. n acest context, pentru succesul aplicaiilor de bioremediere se impune respectarea ctorva condiii legate de microorganismele responsabile de acest proces. Condiiile pe care trebuie s le ndeplineasc microorganismele ce vor fi utilizate n procesele de bioremediere sunt: s provin din natur, de preferin din situl poluat supus bioremedierii i s nu prezinte patogenitate; s nu fie rezultatul unor procedee de manipulare genetic; s posede un echipament enzimatic adecvat i implicit o flexibilitate metabolic fa de o gam ct mai divers de poluani; s se integreze n arealul poluat, fr s afecteze echilibrul ecologic al zonei; s nu produc efecte nedorite, care s contravin legislaiilor i normelor de protecie a mediului.

Fig. 2.10. Elementele implicate n procesul de bioremediere

(triunghiul bioremedierii)

Eficiena tehnologiilor microbiene bazate pe folosirea microorganismelor n scopul remedierii diferitelor zone poluate (terestre sau acvatice) depinde n mare msur de microorganismele utilizate. Pentru depoluarea mediilor contaminate cu hidrocarburi sau reziduuri petroliere sunt utilizate cu precdere microorganismele hidrocarbon-oxidante, care fac parte din cinci grupe de microorganisme: bacterii ( Achromobacter, Acinetobacter, Bacillus, Corynebacterium, Flavobacterium, Mycobacterium, Pseudomonas etc.); cianobacterii (Anabaena, Nostoc, Oscillatoria); levuri (Candida, Rhodotorula, Sacharomyces); fungi filamentoi (Aspergillus, Cladosporium, Fusarium, Penicillium, Trichoderma) i alge (Chlorella, Chlamydomonas, Dunaliella etc.). Dintre microorganisme, grupul cel mai utilizat n procesele de bioremediere este reprezentat de bacteriile hidrocarbon-oxidante. Dimensiunea celulelor este de 1-4 m lungime i de 0,1-3 m grosime. Sunt de obicei mobile, fiind capabile s se deplaseze i s se orienteze mai uor spre sursele de hran care n siturile poluate pot fi reprezentate de poluantul respectiv. De asemenea, bacteriile hidrocarbon-oxidante au un grad ridicat de hidrofobicitate al suprafeelor celulare, fapt ce determin un grad ridicat de afinitate pentru substraturile hidrofobe de tipul hidrocarburilor poluante. n funcie de natura acceptorului final de electroni, bacteriile utilizate n procesele de bioremediere pot prezenta trei tipuri de metabolism energetic, i anume: bacterii aerobe, care necesit pentru cretere i dezvoltare prezena

oxigenului molecular ca acceptor final de electroni; bacterii anaerobe, care nu pot crete n prezena oxigenului, utiliznd ali compui diferii de oxigen (de tipul NO 2-, SO42-, CO2), ca acceptori finali de electroni i bacterii facultativ anaerobe care se pot dezvolta att n prezena ct i n absena oxigenului. (figura 2.11.). Prezena diferitelor categorii de poluani organici hidrofobi n mediile contaminate, determin modificri structurale i funcionale ale comunitilor de microorganisme existente n mod natural n aceste situri i apariia unor comuniti microbiene specifice adaptate condiiilor de poluare, de unde pot fi izolate i selectate microorganisme ce vor fi utilizate n procese de bioremediere. n general, n mediile poluate, se constat o cretere numeric a populaiilor de bacterii care utilizeaz substratul poluant, cu o reducere concomitent a diversitii lor taxonomice, predominante fiind speciile care degradeaz hidrocarburile, pentru mediile contaminate cu hidrocarburi.

Fig. 2.11. Caracteristici fiziologice ale microorganismelor hidrocarbon-oxidante

Una dintre caracteristicile fundamentale ale microorganismelor utilizate n procese de bioremediere, este diversitatea metabolic, cuplat cu o extraordinar flexibilitate fiziologic ce permite microorganismelor s utilizeze un spectru larg de poluani. n general, cele mai eficiente sunt comunitile microbiene care acioneaz sinergic asupra poluanilor organici, speciile individuale fiind mai puin eficiente n ceea ce privete metabolizarea poluantului respectiv. Pe lng utilizarea poluantului ca unic surs de carbon i energie, microorganismele pot utiliza i co-metabolismul, care reprezint o cale alternativ prin care un anumit poluant poate fi metabolizat. n general, se consider c densitatea populaiilor microbiene care degradeaz hidrocarburile i proporia lor n comunitile naturale de microorganisme reprezint un indicator sensibil al expunerii mediului respectiv la poluarea cu anumii compui organici de tipul hidrocarburilor.

Studiul ct mai aprofundat al proceselor de degradare microbian a hidrocarburilor n mediu, face posibil dezvoltarea unor tehnologii de bioremediere care s se bazeze pe utilizarea activitii degradative a microorganismelor, pentru ndeprtarea acestor poluani din ecosistemele contaminate. O caracteristic important a microorganismelor care cresc pe substraturi reprezentate de hidrocarburi este sinteza unor substane tensioactive cunoscute sub denumirea de biosurfactani [10]. Surfactanii produi de microorganisme sunt n general lipide, iar proprietile lor de ageni de suprafa deriv din structura lor asimetric ce include ntr-o singur molecul, att o component hidrofob ct i o component hidrofil, influennd prin aceasta caracteristicile fizice ale interfeei dintre faze nemiscibile. Din punct de vedere chimic, biosurfactanii pot fi: glicolipide, lipopolizaharide i complexe polizaharid-lipide, lipopeptide, acizi grai i lipide neutre. n figura 2.12. sunt prezentate unele aspecte legate de structura chimic i rolul biosurfactanilor n decontaminarea unor medii poluate cu compui organici hidrofobi. Natura chimic a biosurfactanilor este influenat de microorganismul productor i natura substratului folosit ca surs de carbon n mediul de biosintez [74].

Fig. 2.12. Rolul surfactanilor microbieni n procese de bioremediere

Proprietile fizice caracteristice ale biosurfactanilor sunt: tensiunea superficial, tensiunea interfacial, concentraia critic micelar, solubilitatea i balana hidrofil-lipofil. n procesele de bioremediere, datorit structurii i proprietilor fizico-chimice caracteristice, biosurfactanii pot avea o aciune important n degradarea diferitelor

tipuri de hidrocarburi poluante, inclusiv a celor greu biodegradabile i compuilor xenobiotici. Mecanismele prin care biosurfactanii acioneaz asupra compuilor organici hidrofobi de tipul hidrocarburilor sunt: dispersia hidrocarburilor n mediu, ceea ce conduce la creterea suprafeelor de contact prin reducerea tensiunii interfaciale dintre faza apoas i faza neapoas [84] creterea gradului de solubilitate al poluanilor organici hidrofobi cu slab solubilitate n ap [84,109]. Surfactanii acioneaz la interfaa dintre faze nemiscibile datorit componentei hidrofobe i hidrofile din structura lor. Astfel, adaosul de surfactant determin creterea concentraiei de compui hidrofobi n faza apoas, prin solubilizarea sau emulsionarea substraturilor hidrofobe de tipul hidrocarburilor. n general, solubilizarea are loc nainte de a se atinge un prag specific de concentraie, numit concentraie critic micelar, cnd moleculele de surfactant se agreg n micele; facilitarea transportului poluantului din faza solid n faza apoas, aciune care poate fi cauzat de numeroase fenomene cum ar fi: scderea tensiunii superficiale a apei n particulele de sol, interaciunea surfactantului cu interfeele solide i interaciunea poluantului cu moleculele de surfactant [35, 99, 107]. Stabilirea formulei optime de nutrieni constituie o problem important care condiioneaz eficiena procesului de bioremediere. Natura surselor de azot i fosfor i concentraia lor trebuie stabilit n funcie de mediul contaminat n care se aplic (ap, sol, lam etc.) i de gradul de contaminare. n general, n sol sursele de azot i fosfor se adaug sub form de fertilizatori azotai i fosfatici. n mediile acvatice contaminate cu iei s-a sugerat administrarea fertilizatorilor cu azot i fosfor ncapsulai ntr-o matrice, care le permite s pluteasc i din care sunt eliminai lent. De asemenea, se opteaz i pentru utilizarea unor surse de azot i fosfor oleofile (uree parafinizat i cetil-fosfat) care rmn la interfaa apa/iei i induc o stimulare a degradrii cu 30-40% [22, 60, 83]. Selectarea formulelor optime de nutrieni se realizeaz pe baza urmtoarelor criterii: durabilitate, uurin de aplicare i preul de cost. n general, concentraiile optime de fertilizatori sunt cuprinse ntre 0,2-0,4% pentru sursa de azot (utilizat mai ales sub form de sulfat de amoniu - (NH 4)2 SO4) i de 0,02-0,2% pentru sursa de fosfor (utilizat mai ales sub form de K2HPO4). Oxigenul este un parametru deosebit de important pentru desfurarea procesului de bioremediere. Biodegradarea ieiului i a reziduurilor petroliere reprezint un proces deosebit de activ n aerobioz, datorit faptului c toate cile biochimice cunoscute funcioneaz cu aportul oxigenazelor i al oxigenului molecular. n mediile acvatice, anoxice i n sedimente, lipsa oxigenului limiteaz foarte mult biodegradarea ieiului, dei astzi este unanim recunoscut c procesul poate avea loc i n anaerobioz, dar este foarte lent. Bacteriile anaerobe capabile s degradeze hidrocarburile reprezint un potenial considerabil pentru a fi testate i folosite n degradarea anaerob a ieiului din medii poluate slab aerate. Astfel de bacterii pot utiliza ca acceptori finali de electroni SO 4, NO3, CO2.

Cunoscndu-se faptul c biodegradarea ieiului se face cu randamente mari n prezena oxigenului molecular, au fost propuse, n cadrul multor tehnologii microbiene o serie de msuri de stimulare prin aerare intens. Astfel, poate fi folosit aerarea forat, foarte eficient n cazul multor medii acvatice sau aratul repetat al solurilor, care mbuntete gradul de aerare i favorizeaz biodegradarea. Ali factori care influeneaz buna desfurare a procesului de bioremediere sunt temperatura i pH-ul. Temperatura optim se ncadreaz n limitele 20-28 oC, temperaturile inferioare valorii de 5-10 oC conducnd la ncetinirea procesului de biodegradare, pn la stoparea lui. pH-ul optim pentru biodegradarea hidrocarburilor este cuprins ntre 5,0-8,0, valorile extreme, att de aciditate ct i de alcalinitate producnd o diminuare a procesului de biodegradare.

2.4.2. Tehnologii microbiene de remediere a siturilor contaminate cu hidrocarburi n ultimii ani, au luat o amploare pretutindeni n lume activitile de cerecetaredezvoltare sub aspectul implicrii tehnologiilor microbiene n depoluarea mediului nconjurtor contaminat cu diveri compui organii de tipul hidrocarburilor i reziduurilor petroliere. Normele de legislaie privind protecia mediului nconjurtor au devenit foarte severe, iar gsirea celor mai adevate metode i tehnologii de decontaminare vizeaz deopotriv att cercetarea fundamental ct i cea aplicativ. Dezvoltarea tehnologiilor microbiene de remediere a zonelor poluate reprezint o modalitate de depoluare tot mai agreat datorit eficienei, economicitii i nealterrii echilibrului natural al mediului. Cei mai des ntlnii contaminai organici prezeni att n sol ct i n mediul acvatic sunt: compui organici semivolatili (SVOC), compui organici volatili (VOC), hidrocarburi poliaromatice (PAH), compui organici halogenai (HO), compui organici nehalogenai (NHO), dioxine/furani (D/F), pesticide (P), benzen-toluenetilbenzen-xilen (BTEX), 1,1,1-tricloroetene (TCA), 1,1-dicloretan (DCA). Procesele de bioremediere pot surveni spontan n natur, ca o modalitate proprie de autoaprare, n acest caz fiind vorba de bioremedierea intrinsec, sau este vorba de bioremedierea stimulat, proces indus ca urmare a interveniei omului prin tehnologii adecvate siturilor poluate cu diferii contaminani. Astfel tehnologiile de bioremediere pot fi aplicate mediilor terestre sau acvative, in situ sau ex situ. Ambele modaliti de bioremediere se difereniaz n tehnologii specifice diferitelor medii poluate sau tipuri de contaminani. Utilizarea biotehnologiilor de decontaminare are n vedere i asigurarea condiiilor de aero sau anaerobioz, specifice microorganismelor utilizate. n figurile 2.13. i 2.14. sunt prezentate, schematic, tehnologiile de bioremediere aplicate in situ sau ex situ, mediilor terestre sau acvatice.

Fig. 2.13. Tehnologii de bioremediere a solurilor

Fig. 2.14. Tehnologii de bioremediere a apelor subterane

Tehnologiile de bioremediere in situ implic intervenii direct pe locaia contaminat, prin aplicarea unor tehnologii microbiene specifice, fr a mai fi necesar o exacavare a solului sau o pompare a apei. De obicei se urmrete depoluarea simultan a solului i apei subterane. Tratarea biologic in situ este recomandabil cu precdere n cazul unor extensii importante ale polurii, att n profunzime, ct i lateral. Tehnologiile de remediere ex situ implic activiti preliminare aplicate sitului contaminat: excavare, mutare, aerare etc. (n cazul solurilor contaminate); pompare, filtrare, separare (n cazul apelor poluate). Principalele condiii menite s asigure accelerarea procesului de degradare sunt aerarea, umiditatea i aportul de nutrimente. Sursa de microorganisme provine n mod obinuit din flora bacterian prezent n sol, dar exist i situtii n care se procedeaz la un adaos suplimentar de microorganisme din exterior. n alegerea celor mai adecvate tehnologii de bioremediere este obligatoriu a se analiza o serie de factori fizici, chimici i biologici care influeneaz procesele de bioremediere a mediilor poluate cu hidrocarburi reziduale, dup cum sunt prezentai n figura 2.15.

Fig. 2.15. Factori care influeneaz bioremedierea mediilor poluate cu rezuduuri petroliere

Factorii fizici se refer n mod deosebit la carcateristicile mediului poluat (permeabilitate, porozitate, granulozitate, durata polurii), umiditate, pH, potenial redox i aderena poluantului la particulele de sol i sedimente. Factorii chimici includ, pe de o parte, caracteristicile poluantului legate de tipul de poluant n funcie de gradul de biodegradabilitate, natura i concentraia sa, gradul de toxicitate al acestuia, solubilitate, caracterul lipofil, bioaccesabilitatea i pe de alt parte caracteristicile mediului poluat, cum ar fi: prezena sau absena unui cosubstrat, prezena nutrienilor necesari degradrii sau conversiei poluantului, coninutul n materie organic a mediului, salinitatea i mineralizarea mediului. Factorii biologici se refer la condiiile privind configuraia biotic a unui sit ecologic: tipuri de microorganisme, existena unor relaii trofice ntre microorganisme, ceea ce determin funcionarea unor comuniti microbiene, densitatea microorganismelor existente n mod natural ntr-un sit poluat etc. Un rol important n determinarea configuraiei biotice a unui mediu poluat l are capacitatea microorganismelor de a se adapta la o gam divers de compui poluani pe care i utilizeaz ca surse de carbon i energie. Rspunsul adaptativ al microorganismelor la mediul poluat poate fi determinat de diverse procese cum ar fi: inducia unor enzime specifice la o serie de membri ai comunitii microbiene, fapt ce determin o cretre a capacitii degradative a microorganismelor, creterea ponderii numerice a unei populaii componente dintr-o comunitate microbian, populaie ce este capabil s preia i s metabolizeze substratul poluat, apariia unor procese mutaionale ntruna dintre populaiile componente ale unei comuniti microbiene i selecia natural a unor mutante care au capaciti metabolice noi. Enhanced bioremediation reprezint o tehnologie care se bazeaz fie pe biostimularea microbiotei indigene, fie pe bioaugmentare proces prin care se suplimenteaz situl poluat cu inocul bacterian special selectat, a crui componen include tulpini bacteriene cu eficien ridicat n degradarea poluantului. Este o tehnologie care se poate aplica att solurilor ct i apelor contaminate cu hidrocarburi i reziduuri petroliere. Biostimularea microbiotei indigene se realizeaz prin adaosul de nutrieni, n special surs de azot i fosfor care sunt n cantiti insuficiente pentru degradarea pe cale microbian a poluantului. Cele mai utilizate surse de azot sunt srurile de amoniu, nitraii i ureea. Bioaugmentarea tehnologie care se bazeaz pe aportul n mediul contaminat, de microorganisme biodegradative special selectate [59]. Aceast tehnologie se aplic mai ales n anumite condiii: n medii n care bacteriile indigene nu au eficien n degradarea poluantului deoarece nu au avut timpul necesar pentru a se adapta la contaminant; pentru contaminanii recalcitrani pentru care numai un numr limitat de microorganisme sunt capabile s-i transforme sau s-i degradeze n compui mai puin toxici sau inofensivi. Land farming este o tehnologie de tratare a solurilor contaminate cu hidrocarburi petroliere uor sau moderat biodegradabile, mai puin costisitoare, care implic o bun aerare realizat prin arare/excavare sau amestecul solului poluat cu sol nepoluat, nisip sau alte materiale care permit o mai bun aerare [48].

Bioslury tehnologie ex situ de tratare a solurilor contaminate prin umectare i adaos de aditivi, nutrieni i oxigen, pentru a asigura condiiile optime de degradare aerob a contaminanilor. Pasta (noroiul) asfel obinut este introdus ntr-un bioreactor, permind astfel un mai bun contact ntre microorganisme i contaminani. Bioreactorul asigur un set de parametri controlabili (aerare, temperatur, pH, omogenizare) care eficientizeaz procesul de degadare a poluanilor. Aceast tehnologie este recomandat decontaminrii solurilor poluate cu lubrifiani. Bioventing tehnologie de bioremediere a solurilor poluate prin adaos de oxigen cu rol n stimularea proceselor microbiene degradative aerobe. Aportul de oxigen se realizeaz prin sonde i pompe pentru asigurarea injeciei i absorbiei n soluri cu o anumit permeabilitate [85]. Procedeul implic n afara degradrii microbiene a contaminanilor i o stimulare a gradului de volatilizare a unor contaminani. Biosparging biotehnologie de reducere a contaminanilor petrolieri (volatili i lubrifiani) din soluri cu permeabilitate ridicat i ape freatice prin stimularea biodegradrii compuilor poluani, ca urmare a injeciei de oxigen i nutrieni. Biopile tehnologie de bioremediere a solurilor contaminate cu hidrocarburi care const n excavarea solului i construirea unor movile n care printr-un sistem de suflante i tuburi se pompeaz aer i nutrieni asigurndu-se totodat umectabilitatea pentru a favoriza procesul de biodegradare. Tehnologia are avantajul economicitii, necesitnd suprafee reduse i uor controlabile pe durata procesului, negenernd poluare secundar [47]. Composting este o tehnologie prin care solul contaminat este mrunit (triturat), umectat i amestecat cu ageni de gonflare (fn, paie) pentru o mai bun aerare i asigurarea condiiilor de bioremediere printr-un metabolism microbian fermentativ. Aceast tehnologie necesit temperaturi relativ nalte (54-65 oC), biodegradarea poluanilor avnd loc att n condiii aerobe ct i anaerobe [46, 90]. Biofiltrarea reprezint un procedeu complementar altor tehnologii de bioremediere realizat prin crearea unor bariere active de microorganisme, capabile s rein fizic, prin adeziune, dar i s descompun hidrocarburile poluante n compui cu greutate molecular sczut i cu grad redus de toxicitate. Fitoremedierea reprezint o biotehnologie specific, care se poate aplica n vederea reecologizrii unor suprafete de sol contaminate cu compui organici i/sau anorganici prin dezvoltarea unui covor vegetal. Tehnologia se bazeaz pe utilizarea unor plante ierboase sau lemnoase specifice, care au rolul de a stimula rata de degradare sau transformare a unor poluani organici n forme netoxice i de stabilizare a substratului poluat. Totodat, la nivelul rizosferei se dezvolt o microbiot specific, cu un metabolism foarte activ n descompunerea unor poluani.