MICROBIOLOGIE GENERAL NOTE DE CURS

1. CONCEPTUL DE BACTERIE
Primele bacterii au fost evideniate i descrise de ctre A. Leeuwenhoek n 1675.
Recunoaterea lor ca grup distinct a fost fcut n perioada 1850-1875 de ctre Cohn,
pe baza proprietilor grupului omogen al eubacteriilor.
Stanier i Lwoff (1973) consider c F.
Cohn este adevratul fondator al
bacteriologiei ca ramur a biologiei.
Descoperirea diferitelor grupuri de bacterii (actinomicete, spirochete, mixobacterii
etc.) a scos n eviden multe caractere care nu sunt unitare, de exemplu:
au fost derscrise bacterii imobile sau mobile prin unul sau mai muli flageli,
prin alunecare, trre sau prin contracia unui folament axial;
s-a evideniat c multiplicarea se poate face prin diviziune, nmugurire sau
formare de celule specializate (spori), sau prin segmentare i fragmentare (la
actinomicete);
unele bacterii (actinomicetele) prezint, datorit structurii lor miceliene,
analogii frapante cu grupul fungilor n care au fost ncadrate mult vreme;
mixobacteriile prezint un ciclu de dezvoltare complex, care include un stadiu
de cretere vegetativ i unul de fructificaii policelulare, adesea cu dimensiuni
macroscopice ca protistele amoeboide.

Conceptul de bacterie a fost definit n perioada 1960-1964, oferind posibilitatea de a

grupa pe criterii obiectiv-tiinifice, discriminatorii, microorganismele reunite pn atunci
numai pe baz de acord pur convenional.
Stanier (1962, 1964, 1967) a demonstrat primul c diversificarea prin evoluie a
lumii bacteriene are la baz un caracter comun celula procariot.
Conceptul de bacterie, n forma sa actual poate fi definit n funcie de aceast
organizare procariot i prin antitez cu tipul de organizare eucariot.

Celua procariot, mai puin complex, este unitatea de structur a bacteriilor sensu lato i a
algelor albastre-verzi.
Celula eucariot, mai complex, este unitatea de structur a tuturor celulelor animale, a
plantelor vasculare, a briofitelor, a fungilor i a tuturor celorlalte grupuri de alge.
Divergena fundamental care separ bacteriile i algele albastre-verzi de toate
celelalte organisme, corespunznd diferenei dintre tipul procariot i eucariot, reprezint cea
mai mare discontinuitate evolutiv prezent azi n lumea vie.
Nu se cunosc intermediari ntre procariote i eucariote, adic nu se cunosc organisme
cu o structur celular de tranziie.
Dodge (1965, 1971), pornind de la observaia c dinoflagelatele au unele
caracteristici ale procariotelor i altele aparinnd eucariotelor propune includerea lor ntr-un
grup intermediar Mesokariota.
Cercetrile de microscopie electronic i cele de biologie molecular au dezvluit i
accentuat discontinuitatea dintre procariote i eucariote i au dus la acumularea unui numr
important de caractere discriminatorii, care permit s se stabileasc ceea ce este realmente
tipic i ceea ce este numai aparent i superficial similar, pentru ncadrarea pe baze tiinifice a
diferitelor entiti ntr-un grup sau altul.

Poziia microorganismelor n lumea vie

Diferenele fundamentale dintre bacterii i celula vegetal (ca prototip de celul
eucariot) demonstreaz absena oricrei puni de legtur ntre lumea bacterian i cea a
plantelor, de aceea ncadrarea bacteriilor n rndul plantelor este arbitrar i nelogic (Stanier
i Van Niel, 1962, 1977). Meninerea acestei ncadrri a bacteriilor n grupa plantelor de-a
lungul anilor a reprezentat rezultatul refuzului ndrtnic de a privi lucrurile n fa, singurul
argument care poate fi invocat fiind acela al aprecierii pretiinifice, dup care n lumea vie ar
exista doar dou categorii de organisme mutual exclusive plantele i animalele.
Pe msur ce lumea microscopic a fost cunoscut mai aprofundat a devenit evident c
unele microorganisme nu pot fi clasificate fr rezerve n nici unul din cele dou regnuri
tradiionale i c exist grupuri ntregi cu caractere intermediare revendicate n egal
msur i de botaniti i de zoologi (de ex., Euglena, Chlamydomonas, Volvox etc.).
Incnvenientele majore ale sistemului tradiional de clasificare au fost sesizate iniial
de Hogg (1860) care a propus gruparea microorganismelor ntr-un regn nou, regnul
Primigenum, denumit ulterior Protoctista.
Haeckel (1866) propune crearea unui regn menit s grupeze toate formele inferioare
de via, regnul Protista, definit i delimitat n mai multe variante, pentru ca n formele sale
finale (1894-1904) s includ numai microorganismele unicelulare sau unicelular-coloniale.
Stanier (1970) mparte regnul Protista n dou subgrupuri:
protiste inferioare, corespunznd microorganismelor procariote (bacterii i
alge albastre-verzi);
protiste superioare, corespunznd microorganismelor eucariote, care includ
algele, fungii i protozoarele.
n aceast accepiune, cadrul conceptului de Protista este exins la toate organismele
unicelulare, cenocitice sau multicelulare care nu formeaz esuturi.
Sistemul celor patru regnuri propus de Copeland (1938) i modificat de Hutchinson
(1967) i Weisz (1971) are ca trstur esenial diviziunea lumii microorganismelor n patru
regnuri:
1. Regnul Monera (Mychota), care include bacteriile propriu-zise i algele
albastre-verzi;
2. Regnul Protoctista (Protista), incluznd organismele eucariote inferioare cu
organizaie unicelular, unicelular-colonial, sinciial sau multicelular, fr diferenieire
celular avansat (de ex., algele cu excepia celor dou procariote, fungii, mixomicetele i
protozoarele).
3. Regnul Plantae (Metaphyta, Weisz) - corespunznd plantelor terestre i
acvatice organisme eucariote superioare, multicelulare, cu perete celular i difereniere
celular variabil de la limitat la intermediar.
4. Regnul Animalia (Metazoa, Weisz) - incluznd organisme multicelulare
eucariote, coninnd celule fr perete celular i fr plastide, avnd i prezentnd o
difereniere avansat, tisular i de organe.
Dei are o serie de avantaje mari fa de sistemele anterioare i reprezint o
contribuie major la interpretearea lumii vii, sistemul celor patru regnuri, n diferitele sale
variante, prezint o serie de imperfeciuni, care, dei sunt proprii lumii vii ca obiect de
clasificare, apar cu eviden maxim, legate tot de lumea organismelor simple.
ntre aceste imperfeciuni sunt menionate urmtoarele:
Regnul Protoctista (Protista), foarte diferit n raport cu grupul Monera
(Meychota), este lipsit de unitate i de claritate, din cauza faptului c limitele
de organizare ale organismelor sunt foarte largi, iar diferenierea lui de
organismele superioare nu este clar trasat. Aceast situaie se datoreaz

faptului c nu exist nici o cale bun pentru a separa organismele eucariote

inferioare de cele superioare, ci numai diferite alternative de opiune, cu
dificulti i incnveniente diferite. Lund drept criteriu nivelul de difereniere
tisular, apartenena algelor i a fungilor superiori la regnul Protista este o
consecin imediat, care atrage dup sine o a doua, eterogenitatea lui. Linia de
demarcaie ntre Protista, pe de o parte, i plantele i animalele superioare, pe
de alta, este trasat, n primul rnd de gradul de difereniere tisular situaie
care creeaz o delimitare destul de neclar. n fapt, regnul Protoctista
reprezint mai curnd o confederaie de organisme excluse din celelalte trei
regnuri (Monera, Plantae, Animalia), care cuprinde o foarte larg gam de
organisme cu diferite niveluri intermediare de organizare, superioare n raport
cu procariotele, dar inferioare plantelor vasculare i animalelor superioare.
Sistemul celor cinci regnuri, propus de Whittacher (1969), ncearc s ocoleasc
deficienele sistemelor precedente, utiliznd urmtoarele criterii de grupare:
1. Stabilirea a trei niveluri de organizare: a) procariot; b) eucariot unicelulur;
c) eucariot multicelular;
2. Existena a trei modaliti principale de nutriie, determinante a trei direcii majore
de evoluie, care la nivelul multicelular (multinuclear) se exprim prin divergenele evolutive
ale celor tri regnuri superioare:
a. nutriia fotosintetic (secundar absorbtiv) caracteristic plantelor;
b. nutriia ingestiv tipic pentru animale;
c. nutriia absorbtiv caracteristic fungilor.
Consecinele adoptrii acestor criterii sunt n esen pe lng unele restructurri ale
grupelor mai mici urmtoarele:
1. apariia regnului Fungi ca al treilea regn de organisme superioare,
alturi de plante i animale;
2. trecerea algelor verzi n regnul Plantae, alturi de plantele verzi
superioare;
3. plasarea liniei de demarcalie dintre organismele superioare i protiste la
trecerea de la unicelular la multicelular multinuclear.
n acord cu aceste principii, sistemul celor cinci regnuri elaborat de Whittaker are
urmtoarea structur:
1. Regnul Monera include organisme unicelulare de tip procariot, corespunznd
bacteriilor, organisme cu existen unicelular-solitar sau unicelular-colonial, cu excepia
actinomicetelor care au organizare de tip micelial. Modul de nutriie este predominant
absorbtiv, iar metabolismul de tip foto- sau chimiosintetic. Reproducerea se face prin
diviziune asexuat, mai rar prin nmugurire. Rar, prezint fenomene de protosexualitate.
Imobile sau mobile (prin flageli simpli, de tip special, sau prin alunecare-trre).
2. Regnul Protista include organisme primar unicelulare sau unicelular-coloniale
de tip eucariot. n unele cazuri sunt prezente stadii de via cu structur simpl sau
multinuclear. Modul de nutriie este diferit de la un grup la altul (absorbie, ingestie,
fotosintez sau combinaii ale acestor tipuri). Reproducerea este, de asemenea, de tip diferit,
incluznd diviziunea asexuat (la nivel haploid) i procese sexuale adevrate, cu cariogamie i
meioz. Sunt imobile sau mobile prin flagel de tip superior sau prin alte mijloace.
3. Regnul Plantae include organisme multicelulare cu celule eucariote, care au
peretele celular celulozic, frecvente vacuole n citoplasm i pigmeni fotosintetici n plastide.
Modul principal de nutriie este cel fotosinteic; unele linii au devenit absorbtiive. Esenial
imobile, triesc ancorate pe un substrat. Prezint difereniere structural care duce la apariia
unor organe de fotosintez, ancorare i de sprijin (suport), iar la formele superioare la
formarea unor esuturi specializate fotosintetice, vasculare i de acoperire. Reproducerea este
3

n primul rnd sexuat, cu cicluri de generaii alternative, haploide i diploide, primele fiind
progresiv reduse spre membrii superiori regnului.
4. Regnul Fungi. Exceptnd subregnul Gymnomycota, include organisme
multinucleare, cu nuclei de tip eucariot, dispersai ntr-un sinciiu micelial, acoperit de un
perete celular, adesea septet, caracterizate prin lipsa plastidelor i a pigmenilor fotosintetici.
Nutriia este de tip absorbtiv. Diferenierea somatic este absent sau limitat; n schimb,
diferenierea esutului reproductiv i complicare ciclului de via sunt foarte marcate la
formele superioare. n primul rnd imobile (dar cu flux citoplasmatic n miceliu), triesc
nclavate n mediu sau n sursa de hran. Prezint cicluri reproductive tipice, incluznd
procese sexuale i asexuale. Micelii, cel mai des haploide la formele inferioare i dicariotice
la multe forme superioare.
5. Regnul Animalia include organisme multicelulare de tip eucariot, fr perete
celular, fr plastide i fr pigmeni fotosintetizani. Nutriia este n primul rnd de tip
ingestiv, cu digestie ntr-o cavitate intern; unele forme sunt absorbtive; la unele grupuri
lipsete cavitatea digestiv intern. La formele superioare nivelul de organizare i de
difereniere tisular depete de departe celelalte regnuri, ducnd la apariia a diferite sisteme
senzoriale neuromotorii. Motilitatea organismelor sau a prilor lor (la formele sesile) se
bazeaz pe existena unor fibrile contractile. Reproducerea predominant sexuat; stadiile
haploide, diferite de cele ale gameilor, aproape lipsesc la organismele situate deasupra
filumurilor inferioare.
Sistemul lui Whittaker, dei foarte recent creat, este agreat de un mare numr de
specialiti, care consider c el reprezint cel mai bine relaiile dintre organisme, att n ceea
ce privete nivelurile de organizare ale lumii vii, ct i modul de nutriie care afecteaz tipul
de organizare. El are avantaje evidente n sensul unei mai pregnante coerene a regnurilor, ca
uniti de clasificare decurgnd din precizarea mai net a caracterelor lor definitorii, dar i o
serie de limitri care sunt evideniate chiar de Whittaker, dar care nu sunt legate de lumea
bacteriilor.

2. ANATOMIA BACTERIILOR
2.1. Morfologie
Forma bacteriilor este controlat genetic. Dei variaz destul de mult, n funcie de
condiiile de mediu, polimorfismul acestor microorganisme este relativ limitat i caracterizat,
de cele mai multe ori, prin predominana formei tipice pentru specia dat.
Deoarece forma bacteriilor este greu de apreciat direct din mediile naturale,
cunotinele de morfologie bacterian se refer, de obicei, la celulele cultivate, n condiii
artificiale de laborator, n care caz forma celulei poate fi influenat de vrsta culturii, de
compoziia mediului, de temperatur etc. Datorit acestui fapt, forma bacteriilor care
reprezint un criteriu taxonomic important se apreciaz n mod convenional pe celule
provenite din culturi tinere, n faza de cretere activ, pe medii de cultur corespunztoare i
n condiii optime de temperatur, tensiunea O2, pH etc. n culturi vechi, n care cele mai
multe bacterii sunt pe cale s degenereze sau s moar, apar celule cu forme aberante (cu
aspecte de Y, ramificate, filamentoase etc.), care se observ i n cazul cultivrii n condiii
improprii de mediu (temperatur nepotrivit, concentraii mari de sruri anorganice, doze
subletale de substane antibacteriene); acestea rezult din interferena unor aciuni nocive cu
procesul de diviziune normal sau din altererarea mecanismelor de permeabilitate selectiv,
urmat de imbibiia cu ap i autoliza structurilor celulare prin aciunea enzimelor proprii.
Dup forma celulei, bacteriile pot fi grupate n cinci mari categorii:
1. sferice; 2. cilindrice; 3. spiralate sau elicoidale; 4. filamentoase; 5. ptrate.
La cela mai multe specii, celulele-fiice se separ i rmn independente datorit
agitrii mecanice, curenilor de convecie din mediu, micrii browniene, forelor rezultate din
presiunea de turgor a celulelor care cresc, ct i a aciunii flagelilor, n cazul bacteriilor
mobile.
La unele specii aparinnd grupului de bacterii sferice i uneori chiar al celor
cilindrice, celulele-fiice nu se despart la sfritul diviziunii, ci formeaz grupri caracteristice
cu valoare texonomic. Rareori ns toate celulele speciei respective sunt grupate tipic.
Caracteristic este modul de grupare dominant. Modul de grupare a celulelor dup diviziune
este n funcie de raportul geometric dintre diferite planuri succesive de diviziune i de
tendina celulelor-fiice de a rmne unite. n unele cazuri, gruparea nu reprezint un caracter
morfologic propriu, ci este o consecin a stadiului de cretere sau a condiiilor de cultur.
Spre exemplu, Corynebacterium diphteriae are tendina s se grupeze n palisad, iar
Mycobacterium tuberculosis n grupuri de trei bacili, care dau impresia de structur
ramificat. Aceste moduri de grupare reprezint ns excepii de la regul, deoarece cea mai
mare parte dintre bacteriile respective apar izolate unele de altele.

1. Bacteriile sferice (cocii) au form sferic, ovoidal, elipsoidal, reniform, uneori

neregulat, sau parial poliedric, diametrele celulei fiind aproximativ egale. Deoarece aceast
form este adesea modificat de diferii factori de mediu este discutabil dac n stare vie
celula este realmente sferic.
n funcie de poziia celulelor-fiice dup diviziune, cocii prezint urmtoarele ase subtipuri
morfologice:
a) cocul simplu sau izolat, la care celulele rezultate din diviziune rmn
independente;
b) diplococul, la care diviziunea se face dup planuri succesive paralele, celulele
rezultate rmnnd grupate cte dou (Streptococcus pneumoniae);
c) streptococul la care diviziunea se face dup planuri succesive paralele, dar
celulele rezultate formeaz lanuri de lungimi variabile, ca un irag de mrgele (Streptococcus
pyrogenes);
d) tetracocul sau tetrada, la care planurile succesive de diviziune sunt
perpendiculare unele fa de altele, iar celulele rezultate sunt dispuse n grmezi de patru
elemente (Micrococcus tetragenes);
e) sarcina, la care planurile de diviziune sunt orientate n trei direcii diferite,
perpendiculare unul pe alrul (al doilea pe primul, i al treilea pe primele dou), de unde
rezult o grupare n cuburi sau pachete (Sarcina flava, S. aurantiaca);
f) stafilococul la care planurile succesive de diviziune sunt dispuse n cteva
direcii, iar organismele rezultate se aranjeaz n grupri neregulate n form de ciorchine
(Staphylococcus aureus).
Lampropedia are forma unor celule rotunde sau aproape cubice, grupate n iruri
regulate, formnd tablete rectangulare de 16, 32 sau 64 de celule agregate, datorit unei
matrice extracelulare. Celulele care formeaz tablete, avnd n interior incluziuni
refringente strlucitoare, sunt acoperite de un nveli structurat complex, distinct de peretele
celular, care nu nconjur celulele individuale, ci numai ansamblul gruprii lor. Izolat din
rumen, ape mloase, stagnante, Lampropedia formeaz pelicule pe suprafaa mediilor lichide.
2. Bacteriile cilindrice cunoscute mai ales sub denumirea comun de bacili, au form de
bastonae. Raportul dintre cele dou axe variaz mult, unele bacterii putnd lua form aproape
sferic-oval (cocobacili); acestea din urm fiind greu difereniate de coci, dar n culturi pure
exist mereu cteva celule suficient de lungi, pentru a identifica natura lor cilindric.
Bacilii sunt drepi sau uor ncurbai la mijloc sau la una din extremiti.
Capetele pot fi tiate drept (Bacillus antracis) sau rotunjite ca la majoritatea celorlali.
Marginile laterale ale celulei sunt de obicei paralele, dar pot fi i apropiate la
extremiti, n firm de suveic (Fusiformis fusiformis), sau ndeprtate i rotunjite la una sau
ambele extremiti, n form de mciuc sau de picot (Corynebacterium).
Bacilii pot fi grupai:

cte doi (diplobacili);

n lanuri cu lungimi variabile (streptobacili);

n palisad ca scndurile unui gard, celulele rmnnd apropiate i paralele n

sensul axului lung, aezarea fiind rezultatul unei micri de basculare a celuleifiice, avnd ca punct de sprijin peretele transvers recent separat;

sub form de rozet sau de stea (Agrobacterium stellulatum, Ag. radiobacter,

Phyllobacterium stappi).

3. Bacteriile spiralate sau elicoidale cuprind trei subtipuri morfologice:

a) vibrionul, n form de virgul (Vibrio cholerae);
b) spirilul, n form de spiral cu mai multe ture de spiral rigide (Spirillum
volutans);
c) spirocheta, n form de spiral cu mai multe ture flexibile, care se pot strnge sau
relaxa (Borrelia, Treponema i Leptospira).
4. Bacteriile filamentoase au ca prototip actinomicetele, microorganisme cu asemnri
morfologice asemntoare cu fungii, avnd particularitatea de a forma hife ramificate (de
unde aspectul de miceliu). n unele cazuri aspectul filamentos este determinat de aezarea
celulelor individuale n lanuri de celule reunite printr-o teac delicat cu perete neted, care n
condiii favorabile pot acumula hidroxid de fier sau mangan.
5. Bacteriile ptrate evideniate n apa hipersalin din unele bli din Peninsula Sinai
(Walsby, 1980) au forma unor ptrate cu latura de 1,5-11 m i o grosime inegal (0,1 m sau
chiar mai mic n regiunea central i 0,2-0,5 m la periferie, Parkes, 1981). Uneori formeaz
placarde de 8-16 ptrate la care se vd net planurile de diviziune.
Celulele conin vacuole cu gaze, care dispar la presiune, situate frecvent de-a lungul
marginilor ptratelor. n unele cazuri sunt dispersate la ntmplare n celul.
Multiplicarea se face prin diviziune. n unele cazuri, fiecare bacterie ptrat crete pn ia
forma unui dreptunghi, care se divide n dou ptrate egale. Alteori, diviziunea se face n dou
planuri ce alterneaz n unghi drept iar celulele rezultate din diviziune formeaz placarde.
Bacteriile ptrate au fost ncadrate n genul Quadra aparinnd probabil grupului
Archaebacteria (Parkens i Walsbz,1981).
n afara acestor cinci tipuri morfologice de baz exist bacterii cu forme particulare,
rezultate din gruparea lor ntr-un trichom, prezena unor prelungiri celulare (prostec), a unor
aprndice acelulare etc.
Bacteriile care formeaz trichoame. Trichomul este o grupare de celule sub forma unui
filament multicelular, uniseriat, rezultat din diviziune, n care celulele adiacente au o suprafa
relativ mare de contact strns i sunt meninute ntr-un nveli parietal comun (Starr,1973)
(Leucothrix, Beggiatoa, Caryophanon latum, Sphaerotilus natans).
Bacteriile prostecate. Unele bacterii prezint o complicaie morfologic prosteca (gr. =
adaos, apendice, coad) sub forma unui apendice semirigid, situat n continuarea unei celule
procariote i avnd totdeauna un diametru mai mic dect cel al celulei mature.
Funciile prostecii:
- implicat n reproducerea bacteriilor care nmuguresc;
- mrete suprafaa celulei i implicit a membranei plasmatice, permind
sporirea activitilor asociate (respiraia i absorbia de sunbstane nutritive);
- are rol de fixare (Caulobacter), dei frecvent a fost gsit i la celule plutitoare.

Bacteriile cu apendice acelulare. Bacteriile prezint un aspect filamentos datorit unor

apendice acelulare, formate din substane secretate sau excretate de ele, nedelimitate de perete
celular. Gallionella ferruginea, prezent n ape feruginoase, are forma unui bob de fasole de
0,5x1,2 m i este situat la extremitatea unui apendice filamentos acelular, format dintr-un
produs secretat de ea nsi prin porii situai pe partea sa concav.

Celulele bacteriene miniaturale (minicelulele). Minicelulele sunt corpusculi mici,

aproximativ sferci, care nu cresc i sunt formai printr
o septare neobinuit, n apropierea uneia dintre extremitile unei bacterii cilindrice. Au cel
mai adesea un diametru mai mic dect al unei celule bacilare parentale. Sunt lipsite de
material nuclear sau deficiente n ADN. De aceea sun incapabile de cretere i diviziune. Au
fost descrise ca un proces de diviziune inegal (asimetric) la Escherichia coli, Salmonella,
Bacillus subtilis, Haemophilus influenzae, Erwinia amylovora .a.

2.2. Proprieti fizice

Dimensiuni
Bacteriile au dimensiuni foarte mici, n medie 0,5-1 m x 3-6 m. Cele mai mici
aparin genului Mycoplasma i au diametrul 125-250 nm. Cele mai mari pot ajunge la 1020m lungime, iar n cazul formelor filamentoase, n mod excepional, chiar la 500 m
(Saprospira grandis).
Sub raportul dimensiunilor cele mai mici bacterii se suprapun virusurilor mari
(Poxvirus), vizibile la microscopul fotonic, iar cele mai mari depesc mrimea celor mai mici
protiste eucariote.
Deoarece celulele difer mult ca form, stanier (1970) recomand volumul ca unic
baz satisfctoare de apreciere a mrimii bacteriilor. Volumul celulei bacteriene poate fi
apreciat cu ajutorul formulelor de calcul aplicate corpurilor geometrice regulate.
Suprafaa celulei bacteriene se poate calcula ncadrnd bacteriile ntr-o form
geometric regulat, pe baza dimensiunilor celulei.
Exemple:
1,104x10-9 cm2 (Mycoplasma),
35,340x10-9 cm2 (Escherichia coli),
12 576 x10-9 cm2 (Saprospira grandis).
Densitatea sau greutatea specific a celulei bacteriene vii (n stare umed) variaz
ntre 1,07 i 1,32. Valoarea acestui indice este n funcie de proporia relativ a substanerlor
celulare cu densitate diferit de cea a apei (D=1). Lipidele au densitatea sub 1,0, glucidele 1,41,6, proteinele1,5, acizii nucleici 2,0, srurile minerale 2,0-2,5.
Deoarece compoziia chimic a bacteriilor este variabil chiar la aceeai specie, n
funcie de condiiile de mediu sau de vrsta celulei, densitatea lor este caracteristic numai n
raport cu anumite condiii de cretere. Celulele tinere, care sunt turgescente, au o densitate
mai mic dect cele btrne, iar la bacteriile cultivate pe medii lichide valoarea ei este mai
mic dect la cele cultivate pe medii solidificate. Datorit densitii lor mici, bacteriile rezist
la sedimentare spontan n medii gazoase i lichide, din care ns pot fi separate prin
centrifugre.
Greutatea unei bacterii poate fi calculat mprind greutatea unei anumite mase de celule
la numrul unitilor componente. Celulele de Escherichia coli, care sunt de 500 de ori mai mici
dect o celul vegetal sau animal de dimensiuni medii ( 10 m), au o greutate de 1012 dal,
respectiv de 6 x 106 dal ori mai mare dect greutatea unei molecule de ap (g.m.=18 dal.)
Raportul dintre suprafaa celulei i greutate are o valoare foarte ridicat la bacterii.
n cazul unui coc cu diametrul de 1 m acest raport este de ~ 55 000, la E. coli ~ 81 000, la
Chlamydia ~ 193 000, iar la Mycoplasma ~ 290 000. Acelai raport la om (24000 cm2/70 000 g)
8

este de 0,342, respectiv de 84 146 ori mai mic dect la Bacillus megaterium, de 239 233 ori
mai mic dect la Escherichia coli, i de 850 611 ori mai mic dect la Mycoplasma
Datorit raportului foarte mare dintre suprafaa i volumul bacteriilor, comparativ cu
alte organisme, asemntor aceluia al particulelor de substane n state de dispersie coloidal,
o cantitate mic de bacterii, de exemplu 1 g de Escherichia coli, care conine 1,8 x 1012 celule
nsumeaz o suprafa total de contact cu mediul de circa 56 000 cm2; pentru comparaie
menionm c 1 g celule de drojdie conine 8,3 x 109 celule, care au o suprafa de 9 100 cm2.
Mrimea considerabil a acestei suprafee reactive de la interfaa celular mediu este
deosebit de important, deoarece, practic toate substanele care intr i ies din celul trec prin
aceast zon.
Teoretic, pe baza unor considerente de ordin biologic i biochimic, limita inferioar
de mrime a unei celule bacteriene este determinat de posibilitatea ei de a conine toi
constituenii necesari pentru cretere i diviziune, respectiv un numr minim de enzime
diferite (probabil cteva sute), aflate fiecare ntr-un numr variabil de molecule, acizi nucleici,
glucide, lipide etc. Cea mai mic bacterie vizibil la microscopul fotonic are dimensiuni foarte
apropiate de aceast limit molecular necesar pentru meninerea funciilor celulare.
Celulele cu dimensiuni mai mici nu ar fi fizic suficient de cuprinztoare pentru a conine
ntreg echipamentul enzimatic i moleculele necesare pentru via.
n cazul microorganismelor eucariote, limita cea mai mic de mrime este determinat
de limitri structurale: cele mai mici protiste eucariote sunt algele din genul Micromonas (M.
pulsatilla 1-1,5 m) cu un singur cloroplast i o singur mitocondrie, care alturi de nucleu
ocup ceaq mai mare parte din celul. Orice reducere de dimensiuni dincolo de aceast limit
nu se poate face dect prin eliminarea unui organit celular, fr de care ns funciile
metabolice ar nceta de ndat. Ca regul general, celulele eucariote sunt ns mai mari dect
cele procariote i conin structuri absente la procariote.
Celulele procariote nu pot depi anumite limite de mrime i, n general, nu pot
ajunge la dimensiunile foarte mari ale celulelor eucariote.
Limita superioar de mrime a unui organism unicelular este posibil corelat cu
raportul suprafa/volum, avnd n vedere c toi nutrienii trebuie s ptrund n celul, iar
produii de catabolism s fie eliminai. Pe msur ce dimensiunile unei celule cresc, volumul
ei crete mult mai rapid dect suprafaa (volumul crete la cub n raport cu raza celulei, n
timp ce suprafaa crete cu raza la ptrat). Cnd raza celulei crete de trei ori, volumul crete
de 27 de ori (33), iar suprafaa de numai 9 ori (32). n prezena acestui dezechilibru, celula nu
poate ngloba nutrieni i elimina substane reziduale n acord cu necesitile crescute ale
volumului celular mrit (Nester i colab., 1973).
Celulele eucariote mari au rezolvat aceast problem fie prin modificarea adecvat a
formei (aducnd astfel prileinterne ale celulei aproape de suprafa), fie, mai ales, prin
prezena curenilor citoplasmatici care asigur circulaia nutrienilor i a produilor de uzur
dintr-o zon n alta.
Ca o regul general, valabil la toate nivelele de complexitate biologic, rata
metabolismului este invers proporional cu mrimea organismului, iar rata de cretere
(determinat n special de rata global a metabolismului) crete pe msur ce dimensiunile
celulare scad n corelaie cu raportul suprafa/volum.
Dimensiunile mici ale bacteriilor apar ca o condiie esenial pentru creterea i
multiplicarea lor rapid, n comparaie cu celulele eucariote, ceea ce le confer un mare
avantaj biologic n natur, asigurnd supravieuirea lor n competiie cu alte organisme.
Celulele mai mari au nevoie de mult timp pentru ca nutrienii s ptrund n celul i s fie
metabolizai pentru a asigura creterea acesteia.
Un alt factor care pare s determine o limit superioar de mrime a celulelor
bacteriene este dificultatea de meninere a unei reglri satisfctoare i de coordonare a
9

activitii metabolice ntr-o celul mare cu organizare de tip procariot. Unele bacterii foarte
mari, Spirillum volutans, Thiospirillum jenense etc., nu pot fi cultivate dect extrem de greu,
n contrast cu bacteriile mici din acelai grup fiziologic (Stanier, 1970). Explicaia const n
faptul c la aceste bacterii condiiile fizico-chimice necesare dezvoltrii sunt foarte restrnse,
iar capacitatea de reglare a funciilor metabolice eseniale pentru a le conferi flexibilitatea
adaptativ la modificri minore ale mediului foarte limitat.

10

3. ULTRASTRUCTURA CELULEI BACTERIENE

Lund ca reper peretele celular, constituenii celulei bacteriene pot fi grupai n dou
mari categorii:
intraparietali, care formeaz protoplastul (membrana plasmatic, mezosomii,
citoplasma, nucleoidul, ribosomii, magnetosomii);
extraparietali (capsula, stratul mucos, glicocalixul, spinii, flagelii, fimbriile
i pilii).

3.1. Peretele celular

Celula bacterian este delimitat de un perete celular bine definit structural i cu
consisten rigid.
Situat n afara membranei citoplasmatice, el este acoperit, la unele specii, de o
capsul sau de un strat mucos pericelular, iar la bacteriile mobile este strbtut de flageli.
Datorit indiceluli de refracie mic, peretele celular este invizibil ori foarte greu
vizibil la celulele vii examinate la microscopul fotonic. Evidenierea lui este ns posibil prin
colorare selectiv sau prin examinare la microscopul electronic.
La bacteriile tinere, care au citoplasm abundent, compact i omogen, peretele
celular ader intim la coninutul celular subiacent. La celulele btrne sau n curs de liz,
plasmoliz etc., peretele celular devine evident, fiind deprtat de citoplasm.
Punerea n eviden a peretelui celular se poate face fie prin izolarea lui ca structur
intact complet, fie prin modificarea raporturilor lui spaiale cu citoplasma. Aceast
modificare se poatwe obine pe cale dezintegrrii celulare prin ultrasonare sau agitare cu perle
de sticl, cu ajutorul dehnicii de microdisecie sau prin provocarea unui oc osmotic (inducie
de plasmoliz sau plasmoptiz) ori a autolizei celulare.
Examinat la microscopul electronic, peretele celular izolat are aspectul unui sac gol,
care conserv forma bacteriei din care provine, i constituie asemntoare ochiurilor unei
plase, cu tram regulat, care apare ca fiind formt din fascicule de fibre paralele care se
ncrucieaz.
Grosimea peretelui celular variaz ntre 15 i 35 nm, excepional putnd s ajung la
80 nm, ca la Lactobacillus acidophilus. Este mai subire la celulele tinere care cresc mai
rapid.
n funcie de prezena i particularitile de structur ale peretelui celular au fost
propuse trei diviziuni n cadrul regnului Procaryotae (Gibbson i Murray, 1978):
1. Firmacutes (l. firmus = tare; cutis = piele, nveli), corespunznd bacteriilor Grampozitive cu perete celular gros, lipsit ns de membrana extern;
2. Gracilicutes (l. gracilis = subire), corespunznd bacteriilor Gram-negative cu perete
celular n mod obinuit subire, avnd n structura sa membran extern;
3. Mollicutes (l. mollis = moale, delicat), corespunznd genului Mycoplasma, care
cuprinde bacterii Gram-negative fr perete celular uniform.
n funcie de structur i de compoziia chimic, pereii celulari ai bacteriilor aparin
la trei categorii, care coincid cu modul de colorare: Gram-pozitiv, Gram-negativ sau
acidorezistent.
Pereii celulari din cele trei categorii au drept constituient comun peptidogicanul, dar
se deosebesc n ceea ce privete raportul, prezena, natura, cantitatea i aranjamentul structural
al proteinelor, polizaharidelor i lipidelor.

11

Peretele celular al bacteriilor Gram-pozitive apare la microscopul electronic

ca un strat unic, relativ omogen, dei frecvent pot fi deosebite mai multe structuri contigue,
foarte rar bine definite.
Componentul major este peptidoglicanul (80-90% din greutatea uscat), care apare
foarte net dup colorare cu sruri ale metalelor grele i poate fi degradat dup tratare cu
lizozim.
n afar de peptidoglican, peretele celular al bacteriilor Gram-pozitive mai conine
proteine i polizaharide care includ acizii teichoici, teichuronici, neteichoici i polizaharide
neutre.
Peptidoglicanul (sin. murein), glicopeptid, mucopeptid, glicozaminopeptid,
mucocomplex este un component parietal caracteristic i comun tuturor bacteriilor, cu
excepia genului Mycolasma, a formelor L i a bacteriilor halofile extreme.
Este unu heteropolimer compus dintr-o poriune glican i o component peptidic.
Poriunea glicanic -foarte uniform- are structura unor lanuri lineare formate din
resturile alternente a dou N-acetilhexozamine diferite, legate ntre ele prin legturi -1,4.
Componenta peptidic conine ca unitate de construcie un tetrapeptid. Unitile
tetrapeptidice aparinnd lanurilor de glican adiacente sunt legate prin intermediul unor
puni specializate, interpeptidice.
Astfel alctuit sacul peptidoglicanic este n esen o molecul unic, gigant i rigid,
avnd o structur de reea tridimensional care formeaz n jurul protoplastului bacterian o
reea ca o plas rigid cu ochiuri mici.
Peptidoglicanul poate fi atacat de lizozim i de penicilin.
Acizii teichoici sunt molecule polimere lungi i flexibile (formate din 1,5-poli ribitolfosfat i 1,3-poli glicerofosfat) localizate exclusiv n peretele celular, membrana plasmatic i
straturile capsulare ale bacteriilor.
Sunt prezeni numai la bacteriile Gram-pozitive i aparin la trei categorii:
acizii teichoici parietali (la suprafae celulei), legai covalent de stratul
peptidoglicanic al peretelui celular;
acizi teichuronici legai de peretele celular;
acizii teichoici membranari (sau lipoteichoici) legai covalent de fraciunea
glicolipidic a membranei plasmatice, formnd o reea ntre membrana
plasmatic i peretele celular.
Acizii teichoici confer bacteriilor Gram-pozitive o serie de proprieti importante:
au rol esenial n meninerea unei concentraii de ioni metalici, n particular
Mg2+ la suprafae extern a membranei plasmatice, important pentru activarea
unor sisteme enzimatice membranare dependente de cationi;
au rol arhitactural;
joac un rol important ca determinani de patogenitate (inhib fagocitoza i
protejeaz bacteriile contra efectului bactericid al fagocitozei);
leag i controleaz activitatea autolizinelor cu rol n creterea i diviziunea
peretelui celular;
acizii lipoteichoici acioneaz ca receptori de fag i de colicine, crend avantaje
adaptative bacteriilor Gram-pozitive.
Peretele celular al bacteriilor Gram-negative este mai subire dect al
bacteriilor Gram-pozitive, este distinct stratificat, are o structur mai complex datorit
prezenei membranei externe, care apare cu o structur similar membranei plasmatice
(triplustrat).
Este alctuit din urmtoarele structuri:
12

1. Complexul peptidoglican-lipoprotein care este situat n zona median a peretelui, are

o grosime de 1,5-3,0 nm i este electronodens; stratul peptidoglicanic reprezint 2,410% din greutatea peretelui celular.
La bacteriile Gram-negative sacul mureinic poate fi conceput ca o reea
bidimensional sau ca un monostrat molecular, cu structur relativ constant.
2. Membrana extern a peretelui celular (numit astfel pentru c este situat la exterior
fa de stratul peptidoglicanic i de membrana plasmatic) are o grosime de 6-20 nm.
Membrana extern este alctuit din fosfolipide (35%), care formeaz un strat intern
continuu, proteine (15%) i lipopolizaharide (50%), care sunt asociate cu stratul extern.

Fig.1. Reprezentarea schematic a nveliuilor celulare, evideniind structura membranei

externe a peretelui celular i raporturile cu spaiul periplasmic i membrana citoplasmaric.
(G. Zarnea, 1983, dup DiRienzo i Inouye, 1980)

Semnificaia biologic a peretelui celular

Peretele celular reprezint sistemul de susinere mecanic, un fel de corset neelastic,
al ntregii arhitecturi celulare.
Datorit rigiditii sale determin celulelor o form caracteristic.
Asigur protecia fa de ocul osmotic. Presiunea osmotic intern este de ~5-6 atm.
(la Escherichia coli de ~20-30 atm.). Fr suportul rigid al peretelui celular membrana
plasmatic nu ar putea rezista acestei presiuni interne i nu ar putea asigura protejarea
protoplastului.
Particip la procesul de cretere i diviziune celular, urmnd membrana
citoplasmatic n formarea septurilor transversale, care, dup replicarea cromozomului
bacterian separ celula-mam n dou celule-fiice.
Unii constitueni parietali imprim suprafeei celulare o anumit specificitate, jucnd
rolul de receptori pentru unii bacteriofagi, determinnd fenomenul de recunoatere a
celulelor apte de conjugare sau, n cazul bacteriilor patogene, acionnd ca factori antigenici
capabili s induc n organismul animal infectat elaborarea de anticorpi specifici care pot
servi ca receptori celulari de suprafa.

13

 Conine enzime autolitice capabile s atace structura glicopeptidului, active n

momentul sporulrii, al eliberrii sporului prin liza sporangelui, al germinrii, ca i n
biosinteza peretelui celular i n reglarea acestui proces.
La bacteriile Gram-negative, prezena membranei externe i a constituenilor ei
confer bacteriilor respective proprieti deosebite n raport cu mediul nconjurtor:
acioneaz ca barier impermeabil pentru molocule hidrofobe, mpiedicnd
intrarea n celul a diferitelor substane potenial nocive i pierderea unor
metabolii necesari;
funcioneaz ca o sit molocular asigurnd trecerea unor oligopeptide,
oligozaharide i a unor substane hidrofile; transportul pasiv este mediat de
molecule proteice transmembranare, numite porine care formeaz adevrate
canale moleculare prin membrana extern;
membrana extrn reine n spaiul periplasmic enzimele degradative sintetizate
n celul, dup ce au traversat membrana plasmatic, precum i o varietate de
molecule nutritive; prin aceast funcie activitile enzimatice eseniale pentru
celul, dar potenial duntoare pentru constituenii citoplasmatici, au loc n
afara membranei plasmatice, iar degradarea moleculelor nutritive mari la
monomeri simpli este efectuat n apropierea proteinelor de legare i a
permeazelor specifice care permit transportul selectiv n celul a unor molecule
mai mari de 700 daltoni;
este sediul unor sisteme de transport specifice: pentru vitamina B12, maltoz,
maltodextrine, ioni ferici i nucleozide);
este implicat n adsorbia unor fagi.

3.2. Protoplatii i sferoplatii

Protoplastul reprezint ansamblul structurilor celulare rmase dintr-o bacterie Grampozitiv dup ndeprtarea integral a peretelui celular sub aciunea lizozimului.
mbrcat n membrana citoplasmatic, protoplastul se menine n medii izotonice sau
hipertonice ca formaiune aproximativ sferic, pstrnd, n general, proprietile i activitile
vitale ale celulei din care provine (capacitatea respiratorie normal, sinteza de proteine i de
acizi nucleici, viabilitatea n culturi i, n anumite condiii, chiar capacitatea de diviziune i
aptitudinea de a asigura multiplicarea fagului al crui acid nucleic se gsea deja n celul n
momentul pierderii peretelui celular).
Protoplastul nu este capabil s refac prin sintez peretele celular dac acesta a fost
complet ndeprtat. Funcia de barier osmotic asigutat de membrana citplasmatic, este
mult mai labil n lipsa proteciei conferite de peretele celular rigid i, ca urmare, n medii
hipotonice protoplastul lizeaz.
La bacteriile Gram-negative, peretele celular nu poate fi degradat complet, astfel c
tratarea cu lizozim i slbete doar structura prin degradarea selectiv a mucocomplexului. n
medii hipotonice celula astfel tratat se lizeaz, iar n mediile hipertonice se transform n
sferoplast, corp sferic echivalent unui protoplast, nconjurat de constituenii peretelui celular
care au rezistat la aciunea lizozimului.
Protoplatii aparinnd unor specii diferite de bacterii (B. megaterium i B. subtilis)
fuzioneaz n prezena unor substane ce acioneaz ca ageni de fuzionare , producnd
formarea de bacterii bi- sau multinucleate care n cursul reversiei la forma bacilar (prin
refacerea peretelui celular) sau unterior, ntr-o perioad scurt de timp, duc la apariia unor
bacterii cu genotip haploid, modificat prin recombinare genetic cu caractere provenind de la
cele dou celule originare (Schaeffer, 1976, Fodor i Alfldi, 1976).

14

3.3. Spaiul periplasmic

Spaiul periplasmic sau zona periplasmic este un compartiment ntlnit numai la
bacteriile gram-negative, delimitat spre interior de membrana citoplasmatic, iar spre exterior
de un strat care acioneaz ca o sit molecular, corespunznd membranei externe a peretelui
celular (Mitchell, 1961).
Spaiul periplasmic i complexul peptidoglican-lipoprotein ocup aceeai zon a
peretelui celular, n care primul adpostete constituenii periplasmici, iar cellalt susine i
ntrete nveliurile celulei.
Spaiul periplasmic conine numeroase enzime implicate n nutriie, proteine
specifice, neenzimatice proteine de legare, care leag specific anumite substane (zaharuri,
aminoacizi, ioni anorganici) transportndu-le pn la nivelul proteinelor de transport legate de
membran.

Semnificaia biologic
Membrana extern a peretelui celular las s treac n regiunea periplasmatic
numeroase substraturi hidrofile (echivalente cu tetra- i pentamere de aminoacizi, dimeri i
trimeri de carbohidrai). Funcia principal a enzimelor periplasmice (fosfataze, sulfataze,
amidaze etc.) este de a pregti chimic substanele care difuzeaz prin membrana extern
pentru trecerea lor prin membrana plasmatic n citoplasm. Prin acest mecanism, bacteriile
Gram-negative prin intermediul enzimelor degradative acioneaz asupra unei largi varieti
de substraturi ntlnite n natur, convertind substanele care difuzeaz n spaiul periplasmic
n molecule transportabile n celul, unde sunt accesibile imediat proteinelor de legare i
permeazelor. Acest aspect confer bacteriilor Gram-negative un deosebit avantaj biologic. De
aceea bacteriile adaptate la viaa n mri, ruri, lacuri etc. sunt n majoritatea lor Gramnegative.
Spre deosebire de bacteriile Gram-negative, cele Gram-pozitive elibereaz cea mai
mare parte a enzimelor lor extracelular, n mediu. Acest mecanism este avantajos pentru
bacteriile care triesc n condiii de mare concentraie de substrat i de mare densitate
populaional, deoarece produii de digestie ai enzimelor extracelulare, neasociate cu peretele
celular, sunt accesibili tuturor celulelor aflate n vecintatea locului lor de producere.

3.4. Membrana plasmatic

Membrana plasmatic (membran citoplasmatic, membran celular) este
formaiunea structural care acoper de jur mprejur citoplasma bacterian, separnd-o de
suprafaa intern a peretelui celular, de care este de obicei strns lipit, datorit diferenei de
presiune osmotic ntre coninutul celular i mediul extern.
Membrana plasmatic poate fi pus n eviden la microscopul fotonic, fie dup o
colorare selectiv cu albastru Victoria, fie prin examinarea bacteriilor vii la microscop, n
cmp ntunecat, n care caz apare ca o linie net, luminoas, strlucitoare.
Membrana plasmatic examinat la microscopul electronic pe seciuni ultrafine n
condiii tehnice standard - apare ca o formaiune triplu stratificat, cu o grosime de 7,5-10 nm,
alctuit din dou straturi ntunecate care separ un strat mai clar.
Robertson a denumit aceast structur unitate de membran (unit-membrane),
pornind de la ideea c ea reprezint unitatea structural din care sunt alctuite structurile
membranare complexe. Aspectul de triplu strat a dus la elaborarea modelului de structur
greit, n acord cu care stratul bimolecular de fosfolipide ar fi mrginit de fiecare parte de un
strat proteic (Robertson, 1969), variant a modelului propus iniial de Danielli-Dawson
(1935).

15

 Modelul de structur acceptat n unanimitate modelul mozaicului fluid (SingerNicolson, 1972) propune o aezare caracteristic a componentelor specifice ale membranei
reprezentate de lipide, proteine i glucide n acord cu proprietile lor, satisfcnd exigenele
termodinamice i furniznd o explicaie satisfctoare a proprietilor generale ale
biomembranelor. Dup acest model fosfolipidele formeaz un film fluid, discontinuu, n care
plutesc proteinele globulare, n timp ce glucidele interacioneaz fie cu unele fie cu altele.

Fig.2. Evidenierea structurii internea membranei plasmatice, prin tehnica de nghearefracturare de-a lungul planului central al stratului dublu lipidic
(G. Zarnea, 1983, dup Staehlin i Hull, 1979)
Lipidele sunt reprezentate de fosfolipide molecule amfipatice cu structur complex,
avnd o extremitate polar, hidrofil (hidrosolubil n stare izolat), alctuit dintr-o grupare
fosfat (PO-4) i ali constitueni, legai printr-o molecul de glicerol care formeaz un fel de
punte de cozile moleculei, reprezentate de doi acizi grai, ce constitue regiunea nepolar,
hidrofob (insolubil n ap) a moleculei. n contact cu apa gruprile polare poart de regul
sarcini electrice.
Deoarece cele dou extremiti ale moleculelor lipidice au solubiliti incompatibile,
n suspensie apoas ele se organizeaz spontan pentru a forma un dublu strat de molecule,
discontinuu i fluid-vscos, n care moleculele sunt aranjate coal-la-coad n aa fel nct
capetele ionice polare (hidrofile) sunt expuse spere soluia apoas de ambele pti ale
membranei, iar lanurile nepolare (hidrofobe) ale acizilor grai sunt orientate n direcia opus
contactului cu apa. n felul acesta, cele dou monostraturi de molecule formeaz mpreun
dou straturi hidrofile periferice separate de poriunea central hidrofob. Aceast modalitate
de aranjare reprezint configuraia de minim energie posibil pentru o suspensie de lipide n
ap i este, n acelai timp, foarte adecvat pentru funcia de barier ntre dou soluii apoase
(cun sunt interiorul celulei i mediul extern). Structura de dublu strat fosfolipidic explic
proprietile de permeabilitate ale membranei, deoarece acest strat este impermeabil fa de
particulele ncrcate i fa de ioni i uor penetrabil de moleculele liposolubile.
Fiecare dublu strat este un lichid bidimensional n care moleculele lipidice difuzeaz
lateral, schimbndu-i poziia pn la un milion de ori pe secund. n schimb deplasarea unei
molecule de pe un monostrat pe altul (trenziia flip-flop) se face foarte rar (cel mai des o
dat pe lun pentru o molecul dat). Raritatea deplasrilor flip-flop ale lipidelor i
proteinelor permite meninerea compoziiei membranei i a structurii ei caracteriestice.
Dublul strat fosfolipidic trebuie s fie suficient de fluid pentru a permite micarea
liber a proteinelor membranare implicate n procesele de transport activ.
16

Fosfolipidele formeaz matricea structural a membranei i sunt rspunztoare de

integritatea structural a acesteia. Prin structura caracteristic a dublului strat, ele confer
membranei impermeabilitatea la cele mai multe molecule hidrosolubile, care sunt insolubile
n regiunea uleioas a prii de mijloc a membranei.
Proteinele, n raport cu poziia lor n structura membranei, sunt de dou tipuri:
proteinele integrate (intrinsece);
proteinele de suprafa (periferice sau extrinsece).
Proteinele integrate, n general insolubile n ap, nu pot fi ndeprtate fr ruperea
dublului strat lipidic. Au o orientare fix: fiecare protein de acelai tip este ndreptat n
aceeai direcie. Cele mai multe strbat toat grosimea membranei celulare (proteinele
transmembranare) dar unele pot fi expuse fie numai pe suprafaa intern (citoplasmatic), fie
spre suprafaa extern. Regiunile lor dirijate spre interior i/sau spre exterior au caracter
hidrofil, ceea ce mpiedic tranziia lor tip flip-flop.
Proteinele de suprafa, neinserate n dublul strat lipidic, sunt n general hidrosolubile
i situate fie pe suprafaa intern, fie pe cea extern, de regul legate de proteinele integrate.
Din punct de vedere funcional, proteinele de membran pot fi:
enzime care fac biosinteza nveliurilor celulare (membrana plasmatic,
polimeri parietali, extraparietali),
proteine de transport care asigur transportul moleculelor solubile din mediu n
celul i invers;
citocromi i alte proteine aparinnd sistemului transportor de electroni;
proteine cu activitate adenozinfosfatazic (ATP-aza);
proteine implicate n turnover-ul lipidelor i al proteinelor membranare
(fosfolipaze, proteaze, peptidaze).

Fig. 3. Membrana plasmatic reprezentarea schematic a unui model tridimensional

(G. Zarnea, 1983, dup Lodish i Rothman, 1979)
Glucidele reprezint componentul cel mai slab reprezentat n structura membranei i
se regsesc sub forma unor polizaharide legate de proteine (glicoproteine) sau interacionnd
cu anumite lipide (glicolipide).

17

Semnificaia biologic
Membrana plasmatic reprezint singura suprastructur citoplasmatic permanent a
celulei bacteriene, avnd rolul de a delimita spaiul intracelular. Ea formeaz un compartiment
nchis, dar nu reprezint o grani fizic inert a celulei, ci o structur funcional capabil s
asigure o deosebire net ntre interiorul i exteriorul acesteia. Aceast proprietate este
consecina faptului c membrana plasmatic prezint o asimetrie funcional, cu importan
esenial pentru viaa celulei, n sensul c suprafaa intern funcioneaz diferit de cea extern.
Astfel un ion sau o molecul pompat la interior printr-un punct al membranei ar putea fi
eliminat n altul cu o cheltuial inutil de energie. Aceast asimetrie funcional are la baz o
asimetrie de structur molecular, manifestat pe mai multe ci:
cele dou monostraturi lipidice includ proporii variate ale diferitelor tipuri de
molecule lipidice;
carbohidraii sunt prezeni numai pe suprafaa extern a membranei, n timp ce
proteinele periferice sunt situate aproape ntotdeauna pe faa intern;
fiecare tip de protein integrat are o orientare definit, care este aceeai pentru
fiecare molecul de acelai tip.
Membrana plasmatic este asociat cu toate funciile (transport, fosforilare), care la
organismele superioare sunt legate de structuri difereniate.
Membrana plasmatic poate s-i mreasc suprafaa, furniznd mai mult spaiu
pentru diferite activiti celulare (respiraie, fotosintez) prin invaginare, formnd sisteme de
membrane, care uneori se ramific n citolpasm, sau se pot detaa, formnd entiti virtual
independente.
Funcioneaz ca o barier osmotic, dotat cu impermeabilitate cvasitotal fa de
multe tipuri de mlecule, permind trecerea nestnjenit a altora. Ea asigur n acest fel
schimburile necesare i selective ntre mediul extern i cel intracelular, meninnd constant
compoziia chimic i ionic a celulelor, care, la rndul lor, influeneaz critic numrul enorm
de reacii interdependente ce au loc n citoplasm.
Proprietile de permeabilitate ale membranei plasmatice pot fi sintetizate astfel:
substanele uor solubile n solvenii lipidelor, ca i unii anioni (ex. Cl-)
traverseaz uor biomembranele;
unii ioni ca Na+, K+, glucidele i proteinele, nu o pot traversa uor, celula
recurgnd la mecanisme speciale de transport.
Membrana plasmatic bacterian i structurile derivate din ea formeaz baza
structural a sinergonului fotosintezei i a celui respirator, reprezentnd prin aceasta un
echivalent funcional al cloroplastelor, respectiv al mitocondriilor din celulele eucariote.
Este implicat n mobilitatea bacterian, datorit faptului c una din structurile
corpului bazal al flagelului este strns legat de structura sa.
Unele proteine legate de membran sau aflate n contact lax cu ea (fiind localizate n
spaiul periplasmic) joac rolul de chemoreceptori.
Particip la formarea i eliminarea unor proteine, ca enzimele i exotoxinele, care pot
fi sintetizate n membrana plasmatic, sau pe suprafae ei extern. n primul caz, trecerea lor
extracelular s-ar realiza fie printr-un mecanism de tipul pinocitozei inverse, fie datorit unei
poriuni glucidice legate, care ar facilita eliberarea. n al doilea caz, moleculele sintetizate ar
difuza liber n mediu.

3.5. Mezosomii
Mezosomii (Fitz James, 1967) au fost descrii iniial sub denumiri diferite:
membrane intracitoplasmatice (Hopwoord, 1960), corpi periferici (Chapman, 1953),
condrioizi (Van Iterson, 1961) sau plasmalemasomi (Edwards, 1963).

18

 Greenawalt (1975) consider mesozomii structuri membranoase intracitoplasmatice,

caracterizate prin trei particulariti definitorii:
deriv ultrastructural din membrana celular ca o invaginare n form de sac
sau pung, care conine corpi membranoi;
pot fi extrudai din sacul mezosomal n spaiul dintre membrana plasmatic i
peretele celular prin agitare, ndeprtarea peretelui celular sau dup plasmoliz;
sunt asociai fizic i/sau topografic cu replicarea i segregarea cromosomului,
cu formarea septului de diviziune i cu sporularea.
Structurile membranare care nu ntrunesc aceste condiii trebuie numite membrane
intracelulare (intracitoplasmatice) sau structuri similare mezosomilor (mezosome-like).
La microscopul electronic apar sub forma unor structuri cu form, mrime, localizare
i complexitate foarte diferite, n general putnd varia nu numai n funcie de starea
fiziologic a celulei, ci i de calitatea i natura tehnicilor de prfixare i fixare, precum i de
unghiul de secionare.

Fig. 4. Structura schematic a mezosomului bacterian, evideniind modul de ptrundere a

citoplasmei n structura acestuia, ntr-un spaiu care nu este conectat nici cu cisternele
tubululor, nici cu mediul extern. Tubulii din sacul mezosomal apar pe seciunea transversal
circulari. Situsul de legare al genomului este localizat pe faa citoplasmatic a sacului
mezosomal (G. Zarnea, 1983, dup Reusch i Burger, 1973).
Au fost descrise trei tipuri morfologice de mezosomi, dup unii autori
interconvertibile:
lamelari (formai prin plierea membranei invaginate ntr-un aranjament n
spiral ncolcit ca un ghem);
veziculari sau saciformi (vezicule aproape sferice);
tubulari (de forma unor tubuoare lungi).
Dup localizare mezosomii pot fi:
septali;
periferici;
nucleari.

19

 Mezosomii au caracteristicile structurale ale membranei plasmatice din care deriv

(structura triplustratificat i grosimea de 7,5 8,0 nm).
Sunt mai numeroi i mai bine dezvoltai la bacteriile Gram-pozitive, n timp ce la
bacteriile Gram-negative sunt relativ mai greu de observat, fiind n general rudimentari, slab
dezvoltai ca mrime i mai puini ca numr.
Prin expunere n medii hipertonice, mezosomii sunt extrudai n spaiul dintre
membran i peretele celular sub forma unor filamente, ca un irag de mrgele, care poate
ajunge la dimensiunea de 20 nm.

Fig. 5. Reprezentarea schematic a stadiilor de formare a mezosomilor. A, B. Dezvoltarea

unui mezosom sacular turtit, dintr-un mezosom sferic (vezicular). x i y reprezint punctele
terminale ale sacului i situsurile poteniale de cretere ale membranelor intracelulare. C.
Pentru simplificare diagrama ilustreaz numai dezvoltarea n punctul x printr-o secven de
sgei i vezicule, dei procesul are loc i n punctul y. D. Mezosom cu structur complex
multilamelar, format prin creterea i plierea sacului turtit prin extinderea lui x la x` i a lui y
la y`. (G. Zarnea, 1983).

Originea, creterea i diferenierea mezosomilor

Formarea mezosomilor este un proces complex, care ncepe cu invaginarea
membranei plasmatice i sfrete cu legarea de genomul bacterian; are loc n special n zona
n care creterea membranei se face mai repede dect a peretelui celular, ceea ce are drepr
consecin invaginarea acestuia sub forma unor pungi pline cu membrane (Rogers, 1970).
Invaginarea iniial duce la formarea unui sac sferic, conectat cu membrana printr-un
peduncul de lungime variabil, deschis spere mediul extern i/sau spaiul periplasmic.
Mezosomul simplu, sferic, sufer n continuare modificri rezultate din diferite grade de
turtire nsoite de invaginri secundare, care duc la formarea de lamele, vezicule i tubuli. n
cazul n care complexitatea mezosomului crete, dezvoltarea se face pe seama membranei nou

20

sintetizate care se adaug membranei invaginate. Concomitent cu creterea n complexitate

apare posibilitatea unui grad mai mare de compartimentare a constituenilor citoplasmatici,
chiar n mezosomi, care apar la microscopul electronic sub forma unor canale rezultate din
invaginrile secundare.
Nu se cunoate natura stimulilor implicai n invaginare i nici a celor care determin
modificri de form, localizare i complexitate.

Semnificaia biologic
Mezosomul nu este o structur static ci este un organit influenat permanent de
dinamica proceselor celulare.
Morfologia mezosomului este influenat de condiiile de prelucrare premergtoare
examinrii la microscopul electronic (prefixare, calitatea i natura fixrii chimice etc.), care
afecteaz tipul, forma i poate chiar localizarea n celul.
Unii autori consider mezosomii ca fiind structuri vestigiale sau redundante, versatile
(instabile) i multifuncionale, neeseniale pentru viabilitatea bacteriilor, avnd o deosebit
plasticitate structural, ca un rspuns la nevoi specifice, variate.
Formarea mezosomilor este modalitatea prin care celula bacterian are posibilitatea
de a-i mri, prin invaginare i pliere, suprafaa membranei plasmatice, ca rspuns la
condiiile de mediu, de aceea, se consider c nu ar avea funcii diferite sau suplimentare fa
de cele ale membranei plasmatice.
Rolul mezosomilor n replicarea genomului bacterian a fost demonstrat pe baze
morfologice, genetice i biochimice. Fiind legat de membrana plasmatic, ct i de materialul
nuclear are un rol important n controlul replicrii cromosomului i al plastidelor bacteriene,
prin transmiterea semnalului biochimic care ia natere la suprafaa celulei. La B. subtilis, n
faza iniial, fiecare nucleosom este legat de un mezosom, pentru ca pe msur ce celula
crete i se apropie de diviziune mezosomul s se divid, iar formaiunile rezultate s migreze
spre extremitile celulei, antrennd cromosomii bacterieni progeni. Fora care realizeaz
aceast deplasare este reprezentat de sinteza i ncorporarea de constitueni noi de membran
celular.
Mezosomii particip la reacii de fosforilare, oxidoreducere i transport de electroni,
care au loc ns cu o pndere mai mic dect n membrana plasmatic.
Conin fosfataze acide, esteraze etc. i ar putea funciona ca organite subcelulare
degradative, asimilabile funcional cu lizosomii din celulele eucariote (Revsch, 1972).
Au rol n unele procese secretorii ca, de exemplu, n producerea i eliberarea unor
exoenzime ca penicilinaza.
Mezosomii ar fi implicai n sinteza nveliurilor celulare, n mod particular a
membranei plasmatice, a peretelui celular i a septului transversal care separ celulele dup
diviziune. Tichy i Landman (1969) consider c ar reprezenta o regiune specializat prin
care, n cursul transformrii genetice, ADN transformat ar ptrunde n celul.

3.6. Citoplasma
Citoplasma bacterian este, n general, considerat ca un sistem coloidal complex
format din proteine, glucide, lipide, ap i substane minerale, sistem n care apa i compuii
dizolvai n ea acioneaz ca faza extern a unui sol (Lamanna, 1949). Deoarece n citoplasm
coexist strile de emulsie i de soluie, aceasta poate fi considerat ca un complex de stri
fizice ntr-o continu transformare. Se caracterizeaz prin meninerea permanent a strii de
gel ceea ce are ca rezultat o imobilitate a coninutului (lipsa curenilor citoplasmatici) i
reprezint o condiie indispensabil a meninerii nemicibilitii nucleului cu citoplasma, avnd
n vedere absema unor membrane intracelulare.

21

 Citoplasma bacterian nu are o organizare definit, similar celulei eucariote, care

conine organite difereniate i delimitate de membrane. La celulele tinere i n condiii
normale de dezvoltare, citoplasma ader la peretele celular i se prezint ca o mas dens,
omogen i intens colorabil. La celulele btrne citoplasma i pierde treptat afinitatea
tinctorial, se retract centripet ndeprtndu-se de perete i capt o structur granular cu
vacuole din ce n ce mai evidente la microscopul electronic.
La bacteriile examinate pe seciuni mai puin fine (~ 50 nm), zona citoplasmatic
apare ca fiind plin de agregate de ribosomi, aspect rezultat din suprapunerea acestor structuri
cu de 10 nm. Pe seciuni extrem de subiri citoplasma apare ca mas amorf i lipsit de
particule structurale, cu ribozomi rari.
n interiorul citoplasmei se gsesc materialul nuclear, incluziunile, vacuolele i
ceilali constitueni ai protoplastului.
O caracteristic a citoplasmei bacteriene este prezena unei mari cantitpi de ARN,
ceea ce explic bazofilia ei intens, mai evident la celulele tinere. Celulele moarte se
coloreaz mai puin intens, ca i celulele btrne, la care sinteza ARN a ncetat, iar cel
existent a fost folosit ca surs de N i P.

3.7. Nucleul
Spre deosebire de celulele eucariote care au un nucleu cu structur bine definit,
mrginit de o membran i coninnd un numr definit de cromozomi capabili de diviziune
mitotic, nucleul bacterian reprezint o form primitiv de organizare, lipsit de membran
(de tip procariot), inclavat direct n citoplasm, n mod obinuit n partea central a celulei i
care nu sufer modificri de tip mitotic n cursul ciclului de diviziune.
Datorit caracterelor sale particulare, aceast structur a fost desemnat cu numeroi
termeni ca: nucleoid, nucleosom, material nuclear, nucleoplasm, echivalent nuclear sau
"nucleu" prin analogie funcional cu structura echivalent a celulelor eucariote.
Deoarece citoplasma bacterien este puternic bazofil ca urmare a prezenei ARNului, nu este posibil diferenierea la microscopul fotonic cu colorani bazici a materialului
nuclear constituit din ADN, la fel de bazofil.
Evidenierea corpului cromatic bacterian la microscopul fotonic nu se poate face prin
colorare selectiv dect dup ndeprtarea ARN-ului citoplasmatic prin hidroliz acid
(tehnica Robino i Feulgenw) sau enzimatic (tehnica Boivin, cu ribonucleaz). Cu aceste
tehnici materialul nuclear apare sub diferite forme (granule sferice sau ovalare, halter,
bastonae izolate sau dispuse n V, filament axial etc.), reprezentnd 5-16% din volumul
celulei.
Materialul nuclear este localizat n mod obinuit n partea central a celulei. El se
prezint ca o zon mai clar, cu o densitate medie mai mic dect aceea a citoplasmei
nconjurtoare, astfel c la bacterii contrastul dintre structurile intracelulare este inversat n
raport cu acela caracteristic celorlalte celule, la cere nucleul este mai dens dect citoplasma.
Acest aspect este determinat de densitatea neobinuit de mare a citoplasmei bacteriene. Pe
seciuni ultrafine se observ c regiunea nuclear este plin cu fibrile fine cu ntre 2,0 i 5,0
nm, uneori aranjate n iruri ondulate, paralele, care dispar dup digestia cu
dezoxiribonucleaz, ceea ce arat c sunt formate din ADN i corespund cromosomului
bacterian.
Cromosomul bacterian denumit i lineom, nucleosom sau genofor, s-a dovedit a fi
alctuit dintr-o singur molecul de ADN, de form circular (extremitile sunt reunite), cu o
lungime de 1 400 m i un de 2,5 nm, corespunznd diametrului moleculei de ADN dublu
catenar.

22

Organizarea fizic a nucleului

Molecula de ADN depete de aproximativ 1 000 de ori lungimea linear a celulei.
Ea este mpachetat pentru a forma un corp cromatic de 1 500 de ori mai mic dect propria sa
dimensiune n stare desfurat. Teoretic mpachetarea unei molecule att de lungi ntr-un
volum mic implic plierea moleculei de cel puin 1000 de ori i meninerea ei n stare compact.
Au fost propuse mai multe modele pentru a explica mecanismul acestui proces care
dac s-ar face la ntmplare ar duce la ncuracrea moleculei de ADN astfel nct o parte din
infermaia genetic ar deveni inaccesibil pentru transcriere.
Stonington i Pettijohn (1971) au izolat nucleul din E. coli sub forma unei structuri
compacte cu g.m. 2,5 x 1090,5 x 109 dal (1 600 1 700 S). Aceast structur este alctuit
din ADN corespunznd genomului pliat, complexat cu ARN i proteine i este foarte sensibil
la Rnaz. Complexul ADN-ARN-protein conine 80% ADN; ARN-ul reprezint 10% din
greutate i este format din ARNr i ARNm, n stare nscnd, iar proteina care formeaz tot
10% (mai puin de 1% din proteina celular total), este ARN-polimeraz (subunitile , i
). Dup tratare cu ribonucleaz, din acest complex se elibereaz o molecul de ADN dublu
helicat depliat, ceea ce demonstreaz c ARN are rolul de a stabiliza i menine forma
condensat (compact) a nucleului.

Fig. 6. Modelul lui Worcel i Burgi (1072)

pentru plierea cromosomului la E. coli.
Cromosomul formeaz ~ 50 bucle superhelicale
n jurul unei structuri celulare format din
ARN. Trastarea cu DN-az, care produce incizii
monocatenare, elibereaz bucle individuale i
reduce progresiv valoarea constantei de
sedimentare (S) del la 1500 S laa 155 S.
Tratarea cu ribonucleaz depliaz complet
cromosomul, dndu-i form care sedimenteaz
mai lent (G. Zarnea, 1983).

Fig. 7. Modelul lui Pettijohn (1974) de mpachetare

a cromosomului bacterian. A. Cromosom circular
nepliat cu 350 m. B. Cromosom pliat cu 7 bucle.
n realitate, ar exista 40-80 domenii de pliere,
corespunznd unui de 30 m. C. Cromosom pliat
n care buclele au suferit transformare superhelicat.
Dac pasul suprahelici este de 11 nm, nucleului
este de 2 m. Modelul bidimensional devine
tridimensional prin plierea zonelor superhelicale
deasupra i dedesubtul planului hrtii. DNaza
produce incizii monocatenare i desface
superhelicea n bucla respectiv, fr a afecta
structura superhelical a altor domenii (D). E.
Secionarea a dou molecule de ARN ale unor
domenii adiacente unete cele dou domenii fr
pierderea structurii lor superhelicale (G. Zarnea,
1983).
23

 Pettijohn i Hecht (1974) au elaborat un model n acord cu care ADN din

cromosomul de E. coli ar fi condensat ntr-o structur compact printr-un proces de pliere i
formare de superhelice, n care structura condensat a ADN este meninut de molecule de
ARN, ce leag i stabilizeaz buclele de pliere. Pentru a menine starea condensat a ADN
este necesar o sintez continu de ARN, fapt care explic asocierea ARN-polimerazei.
Rouviere-Yaniv (1975) a izolat de la E. coli o protein specific, proteina HU,
asociat cu ADN i implicat n plierea lui n celul.
n mod nomal, bacteriile aflate n faza de repaus n culturi staionare i vechi au un
singur cromosom, astfel c sunt unicelulare.
n faza de cretere activ, n culturi tinere pe medii optime, ele apar ca multinucleate,
avnd 2-4 cromosomi, care sunt genetic identici, deoarece provin din replicarea dintr-un
singur cromosom parental. De aceea, indiferent de aspectul morfologic al materialului
nuclear, din punct de vedere genetic, bacteriile sunt organisme haploide, astfel nct chiar
atunci cnd celula primete un aport de material nuclear exogen prin procese de transfer
genetic diploidia nu este dect parial i tranzitorie.
Apariia bacteriilor multinucleate este n mod obinuit rezulatul unei lipse de
sincronizare ntre ritmul de cretere i ritmul de diviziune celular.

Semnificaia biologic
Cromosomul bacterian poart n structura sa toat informaia genetic esenial,
necesar pentru existena unei celule, respectiv setul de determinani genetici reprezentnd
acel minimum necesar pentru ca o bacterie s poat ocupa poziia s-a ecologic normal: gene
necesare pentru metabolismul energetic, pentru biosintez, cretere i diviziune i, n acelai
timp, pentru reglarea activitilor celulare. El determin i arhitectura celulei bacteriene,
ereditatea i capacitatea de evoluie a acesteia.

3.6. Ribosomii
Sunt particule nucleoproteice intracitoplasmatice de form aproximativ sferic.
Au diametrul de aproximativ 20 nm.
Pot fi caracterizai dup constanta de sedimentare la ultracentrifug (uniti Svedberg
S) i prin apacitatea d a participa la sinteza proteinelor in vitro.
La procariote se gsesc n citoplasm 15 000-10 000 particule ribozomale, cu
constanta de sedimentare 70 S cu tendina de a se disocia rapid n dou subuniti inegale cu
constantele de sedimentare de 30 S i 50 S.
2+
+
Mrimea i stabilitatea lor este n funcie de concentraia ionilor Mg i K .
Subunitatea mic 30 S (g.m. 900 000 dal) este alctuit din 21 molecule de proteine
diferite, notate de la S1 la S21 i o molecul de ARNr, notat 16 S.
Subunitatea ribosomal mic are trei regiuni: capul (1/3 din subunitatea mic), baza
(formeaz restul de 2/3) i platforma, care este separat de cap printr-o scobitur numit
fisur sau despictur.
Subunitatea mare 50 S (g.m. 1 000 000 dal) este alctuit din 34 de proteine diferite,
notate de la L1 la L34 i ou molecule de ARNr, una de 23 S i cealalt de 5 S.
Moleculele 16 S i 23 S aleARNr nu sunt transcrise separat, ci deriv din degradarea
catabolizat de o nucleaz a unui precursor mare de 30 S (pre-ARNr).
Modelul de structur al subunitii mari include o protuberan central, flancat de
cte o prelungire de fiecare parte, cea mai extins fiind denumit peduncul,iar cealalt
creast, ntre ele avnd o vale.

24

 Cnd cele dou subuniti sunt asociate, pedunculul subunitii mari are baza aproape
de constricia de pe o subunitate mic, iar capul nei subuniti mici i protubrana subunitii
mari sunt aproximativ aliniate.

Fig. 8. Reprezentarea schematic a subunitilor ribosomale30 S i 70 S (G. Zarnea, 1983).

Proteinele i moleculele de ARN ocup poziii bine definite la suprafaa ribosomilor,
conferind subunitii 50 S o form asemntoare unui fotoliu i subunitii 30 S forma unei
haltere asimetrice rezemat orizontal pe braele i sptarul fotoliului.
ntre cele dou subuniti rmne un canal lung i ngust, prin care trece ARNm,
purttor al informaiei genetice necesare pentru sinteza proteinelor.

Semnificaia biologic
Ribosomii sunt componeni eseniali ai sistemului de traducere a informaiei
genetice, reprezentnd adevrate fabrici de proteine.

Fig. 9. Rolul poliribosomilor n biosinteza proteinelor (G. Zarnea, 1983).

La nivelul lor se desfoar ciclul ribosomal care determin iniierea, creterea i
terminarea lanului polipeptidic, n care interacioneaz cu ARNm, pentru a lega specific
moleculele de aminacizi, asigurnd formarea moleculei de protein. Aceast activitate are loc

25

numai cnd cele dou subuniti sunt asociate i combinate cu ARNm, ca i cu ali
componeni neribosomali ca ARNt i unele proteine.
n cursul procesului de biosintez a proteinelor ribosomii individuali au tendina de a
se grupa n iruri lineare de 4-50 de elemente formnd polisomi (poliribosomi sau ergosomi).
Mrimea acestora este determinat de lungimea moleculelor de ARNm.
Poliribosomii se deplaseaz de-a lungul moleculei de ARNm, permimd ca lanil
polipeptidic s creasc progresiv n lungime, pe msur ce ribosomii se deplaseaz spre
extremitatea terminal a secvenei de baze traduse, fapt care confer o eficien mult mai mare
procesului de biosintez a proteinelor.

26

4. METABOLISMUL MICROORGANISMELOR
Metabolismul microorganismelor reprezint totalitatea reaciilor biochimice
implicate n activitatea lor biologic, prin intermediul crora energia i elementele biogene
sunt preluate din mediu i utilizate pentru biosintez, degradare i cretere, ca i pentru
activiti fiziologice secundare (mobilitate, luminescen etc.). Ca urmare a acestor reacii
substanele din mediu sunt transformate n constitueni celulari, energie i produi de
metabolism.
Diferitele reacii ale metabolismului ndeplinesc patru funcii eseniale pentru viaa
celulei:
eliberarea de energie i stocarea ei sub form de ATP i ali compui
macroergici.
producerea subunitilor folosite pentru construcia constituenilor celulari,
pornind de la substanele nutritive.
activarea subunitilor de construcie monomere, pe seama energiei de legtur
din compuii macroergici i formarea constituenilor celulari macromoleculari,
prin asamblarea monomerilor.
formarea i degradarea biomoleculelor necesare anumitor funcii specializate
ale celulei.
Aceste funcii sunt realizate printr-o reea complex i variat de ci metabolice, care
funcioneaz perfect coordonat datorit interveniei unor reacii speciale (pace marker
reactions, Krebs i Kornberg, 1957).
Cile metabolice sunt secvene de reacii chimice, catalizate enzimatic, care permit
organismelor vii s obin din nutrieni, att compuii necesari pentru sinteza constituenilor
celulari, ct i energia necesar pentru aceste sinteze, ca i pentru alte procese care necesit
consum de energie.
Au fost descrise patru tipuri de ci metabolice:
cile catabolice;
cile anabolice;
cile amfibolice;
cile anaplerotice.

4.1. Cile catabolice

Procesele biochimice implicate n degradarea diferiilor compui nutritivi din mediu
i eliberarea de energie n celul sunt reunite sub denumirea de catabolism, iar reaciile
enzimatice implicate n degradare sunt numite reacii catabolice.
Ca regul general procesele de catabolism evolueaz n trei faze succesive
(Kornberg, 1965):
Faza I corespunde degradrii macromoleculelor la unitile mici constitutive.
Ex.: proteinele sunt degradate la aminoacizi, glucidele la hexoze, lipidele
la glicerol i acizi grai.
Se elibereaz ~1% din energia total a macromoleculelor, care se pierde sub form de
cldur.
Faza II corespunde etapei n care diferitele micromolecule rezultate n faza precedent
sunt degradate incomplet, elibernd ~1/3 din energia total cu producerea n afar de CO2 i
H2O a unui numr relativ mic de produi diferii, numii intermediari metabolici ai cilor
metabolice centrale.

27

Ex.: hexozele pot fi metabolizate pe ci diferite (calea glicolizei, calea

Entner-Doudoroff sau cale hexozomonofosfatului), dar produii obinui
final nu sunt foarte diferii, reprezentnd, cu excepia CO2, intermediari
ai cilor metabolice centrale sau precursori ai lor.
Aminoacizii pot fi utilizai pe ci diferite, dar catabolismul lor duce la
formarea de acetil-CoA sau intermediari ai ciclului acizilor tricarboxilici
(ciclul Krebs).
Caracteristica esenial a acestei faze decurge din faptul c dei exist o mare varietate
de ci catabolice, acestea conduc transformarea surselor primare de carbon la un numr redus
(~12) de intermediari ai cilor metabolice centrale.
Faza a III-a are o evoluie diferit n funcie de natura microorganismului studiat.
n cazul microorganismelor aerobe, care pot metaboliza substraturile nutritive integral
(pn la CO2 i H2O), calea major de desfurare a acestei faze i eliberare de energie este
cea a ciclului acizilor tricarboxilici (ciclul Krebs), cuplat cu fosforilarea oxidativ.
Microorganismele care nu pot efectua conversia complet a surselor de C la CO2 i
H2O realizeaz aceast faz prin reacii de fermentaie (alcoolic, lactic, butiric, propionic,
acetonobutilic etc.), n care produii cilor catabolice servesc direct sau indirect - ca
donori, respectiv acceptori de H, n secvene de reacii de oxidoreducere cuplate. n aceste
cazuri, cantitatea de energie util pentru celul este mult mai sczut, n raport cu cea
eliberat n cursul respiraiei aerobe, prin mecanismul fosforilrii oxidative (Kornberg, 1965).

4.2. Cile anabolice

Procesele de asimilare, corespunznd anabolismului, se realizeaz prin secvene de
reacii enzimatice, care asigur folosirea intermediarilor cilor centrale ale metabolismului
pentru sinteza blocurilor de construcie, componente ale macromoleculelor. Cile anabolice
au ca punct de plecare, de multe ori, intermediari ai cilor centrale, foarte diferii de cei care
rezult din catabolismul compusului respectiv.
Cile catabolice i anabolice pentru dou substraturi chimice date nu sunt complet
reversibile i sunt numai parial comune. Spre exemplu, degradarea glicogenului la acid lactic
este catalizat de 12 enzime, dintre care numai 9 catalizeaz reacii reversibile; pentru
celelalte trei ci, din considerente energetice, se folosesc ci ocolite, care implic enzime
diferite i intermediari diferii.
Ca i procesele de catabolism, reaciile de biosintez, corespunznd reaciilor
anabolice, se realizeaz tot n trei faze succesive, prin utilizarea micromoleculelor precursoare
produse n faza a III-a a catabolismului i conversia lor la molecule mai mari blocuri de
construcie (faza a II-a), care n final sunt asamblate n macromolecule de proteine, glucide i
lipide.
Spre deosebire de cile catabolice, ale cror nceputuri sunt multiple, dar definite ca
punct de plecare (pornind de la mai multe proteine, glucide i lipide diferite), pentru ca s
evolueze convergent spre anumite ci finale comune, cile anabolismului au ca punct de
plecare un numr foarte limitat de molecule precursoare simple, de la care evolueaz
divergent i ramificat pentru a realiza gama larg de molecule ce caracterizeaz celulele vii.

4.3. Cile amfibolice

Denumirea generic de ci amfibolice (gr. amfi = dou) pentru a desemna cile
metabolice centrale, care ndeplinesc, n acelai timp, funcia de eliberare de energie i de
furnizare a unor precursori pentru biosinteze, a fost propus de Davis, n 1961.

28

 Cile catabolice i cele anabolice funcioneaz simultan n celule, sub forma unor
secvene de reacii catalizate de enzime i nsoite, la fiecare treapt, de o modificare
caracteristic, energetic. n felul acesta, de exemplu, ntre catabolismul unui substrat organic
i procesele de biosintez se stabilesc, la modul general, dou legturi biochimice distincte:
1. n anumite trepte specifice ale cilor catabolice se elibereaz o parte din energia
chimic a metaboliilor pentru a fi conservat sub form de ATP, n timp ce n anumite
trepte ale anabolismului, energia din ATP este utilizat pentru biosinteze.
2. Produii cilor de catabolism funcioneaz nu numai ca intermediari n eliberarea
treptat de energie, ci sunt punctul de plecare al unor reacii de biosintez n care
reprezint precursori ai componenilor celulari. n felul acesta, calea de catabolism al
unui substrat organic funcioneaz, cel puin parial, ca o cale de iniiere a unor reacii
de biosintez.
Ciclul Krebs, spere exemplu, reprezint nu numai o cale de oxidare total a acetil
CoA, ci, n acelai timp, i o surs important de intermediari (-cetoglutarat, oxalilacetat,
succinat) pentru cile de biosintez. Datorit acestui fapt, el nu funcioneaz, niciodat, n
ciclu nchis, deoarece anumii intermediari trec direct n cile de biosintez.

4.4. Cile anapleurotice

Deoarece intermediarii cilor centrale amfibolice sunt n permanen ndeprtai, pe
de o parte, n cursul fazei a III-a a catabolismului, cu eliberare de energie, i, pe de alt parte,
prin utilizarea lor n diferite biosinteze, funcionarea multor cicluri este condiionat de
asigurarea unei reaprovizionri permanente cu intermediarii utilizai, ncetul cu ncetul, pe
parcursul desfurrii lor. Aceast funcie este asigurat de o serie de ci metabolice auxiliare
cile anapleurotice diferite de cele ale catabolismului, reprezentate de una sau mai multe
etape catalizate enzimatic, care asigur completarea acestui deficit prin introducerea unor
metabolii n anumite cicluri metabolice eseniale.
Funcionarea i interaciunile celor patru tipuri de ci metabolice au loc n mod
perfect coordonat, datorit mecanismelor complexe care asigur reglarea activitii lor, i
adaptat la nevoile microorganismelor, determinate, n mare msur, de compoziia mediului
n care triesc.
Evoluia cilor metabolice sub forma unor reacii secveniale multiple confer
metabolismului o mai mare flexibilitate i diversitate, asigurnd, n acelai timp, eliberarea
treptat a energiei i efectuarea interconexiunilor cu alte reacii ale metabolismului i n
special cu cele de biosintez.

4.5. Particularitile generale ale metabolismului microorganismelor

Natura i diversitatea nutrienilor folosii. Considerate n ansamblu,
microorganismele sunt organismele cele mai tipic omnivore dintre toate cele cunoscute,
deoarece i pot realiza metabolismul folosind foarte numeroase i diferite surse de substane
nutritive, de la N molecular, CO2, So pn la substanele organice complexe. Teoretic, aproape
orice substan din mediu, organic sau anorganic, din care se poate obine energie, este
accesibil metabolismului bacterian.
n lumea bacteriilor exist ns i mari diferene individuale sub raportul potenialului
biochimic n sensul c, unele specii, ca de exemplu cele din genul Pseudomonas pot utiliza ca
surs de C i energie 70-200 de substane chimice diferite, n timp ce altele sunt foarte
specializate, utiliznd un numr foarte limitat de nutrieni. Astfel, bacteriile metilotrofe
utilizeaz numai metanul i metanolul, bacteriile celulozolitice, numai celuloza, Nitrosomonas
numai NH3 i O2, iar Bacillus fastidiosus numai acidul uric i compuii purinici nrudii.

29

Bacteriile sulfatreductoare (Desulfovibrio desulfuricans) nu utilizeaz ca surs de C dect un

numr limitat de compui organici (lactat, piruvat i acizi dicarboxilici cu C4) i spre
deosebire de majoritatea bacteriilor, nu metabolizeaz nici un glucid i nici un aminoacid, cu
excepia cisteinei.
Diferitele grupuri sistematice de bacterii se caracterizeaz deci prin anumite
particulariti metabolice, n aa fel nct, n afara unor substane folosite de toate
microorganismele (ap, CO2, sruri minerale etc.), unele specii sau grupuri fiziologice de
specii au nevoie i de anumite substane nutritive specifice, indispensabile pentru realizarea
metabolismului celular.
Plasticitatea metabolismului microorganismelor este o alt particularitate,
decurgnd din capacitatea acestora de a se adapta la tipul i cantitatea de nutrieni diferii,
prezeni n mediu. E. coli, de exemplu, utilizeaz nu numai glucoza i NH3 ca surs de C i N,
ci i o gam larg de nutrieni, incluznd diferite alte glucide, glicerol, etanol, acetat etc.,
respectiv purine, pirimidine, aminoacizi, datorit echipamentului enzimatic complex, care
asigur conversia tuturor acestor substane n compui care pot intra n cile metabolice
centrale.
Diversitatea mecanismelor enzimatice i a produilor. Microorganismele pot
utiliza acelai substrat nutritiv pe mai multe ci distincte sau parial intricate, fiecare dintre ele
putnd s duc, n funcie de natura microorganismului, la formarea de produi diferii.
Diferitele ci metabolice pot coexista n acelai microorganism i se pot substitui una
celeilalte, n funcie de condiiile fiziologice i/sau de mediu.
Intensitatea metabolismului bacterian. Una din caracteristicile distinctive ale
activitilor metabolice microbiene este intensitatea lor excepional comparativ cu aceea a
activitilor omologe ale organismelor superioare. Astfel, activitatea respiratorie a unui gram
(raportat la greutatea uscat) de bacterii aerobe este de cteva sute de ori mai intens dect
aceea a omului, iar potenialul metabolic al microorganismelor din 25 cm superficiali ai
solului, pe o suprafa de un hectar, este echivalent cu cel la ctorva zeci de mii de oameni.
Un gram de bacterii lactice hidrolizeaz circa 178-14 890 g lactoz pe or. Pentru a atinge un
asemenea nivel de activitate metabolic organismul uman ar avea nevoie de mai multe mii de
tone de alimente pe or.
O celul de E. coli, care se divide la un interval de o or, sintetizeaz pe secund 4 000
de molecule de lipide, aproximativ 1 000 tipuri de proteine (fiecare avnd 300 de aminoacizi)
i 4 molecule de ARN (Nester, 1973).

30

5. NUTRIIA MICROORGANISMELOR
Microorganismele, ca toate organismele vii, au nevoie pentru cretere i multiplicare,
ca i pentru toate celelalte manifestri ale activitii lor biologice, de prezena n mediul
nconjurtor a unor substane nutritive, care s conin, pe de o parte, elementele chimice
necesare pentru sinteza constituenilor celulari, pentru activitatea enzimelor i sistemelor de
transport, iar, pe de alt parte, s le furnizeze substanele necesare pentru producerea de
energie biologic util.
Din cauza caracterului foarte heterogen al mediilor naturale i dificultilor de a pune
la punct tehnici de identificare i dozare a diferitelor substane prezente n jurul celulelor
bacteriene se cunosc foarte puine date referitoare la procesele lor de nutriie n natur.
Mediile de cultur utilizate n practic conin, ntr-o form adecvat tipului de
nutriie al fiecrui microorganism, nutrienii eseniali pentru sinteza de material celular i
pentru producerea de energie in vitro, care condiioneaz procesul de cretere i multiplicare.
Ele includ n mod obligatoriu, pe lng o serie de ioni anorganici, diferii compui ai C, H, O,
N, P, S etc.

5.1. Bioelementele
Microorganismele au nevoie pentru cretere de aceleai bioelemente ntlnite n
structura oricrui sistem biologic.
Bioelementele majore (macroelementele) i anume C, O, H, S, P, K, Mg, Ca i Fe,
sunt necesare n concentraii relativ mari (> 10-4 M).
Dintre acestea C, O, H, N, S i P formeaz ~95% din greutatea celular uscat a
bacteriilor i reprezint, ca atare, constituenii majori ai biomasei celulare a
microorganismelor.
Macroelementele ndeplinesc funcii cu semnificaie esenial n metabolism i, n
general, n viaa microorganismelor.
Astfel, sulful este necesar pentru sinteza unor aminoacizi (cistein i metionin) i a
unui numr de coenzime; fosforul intr n structura acizilor nucleici, a fosfolipidelor, a
acizilor teichoici, precum i n structura unor nucleotide ca ATP, GTP, NAD+ i FAD.
K, Mg, Ca, i Fe sunt ioni metalici necesari pentru activitatea enzimelor sau intr, ca
elemente, n compoziia complexelor metalice. Spre exemplu, fosfolipidele peretelui celular
bacterian sunt chelate cu ioni de magneziu. Calciul intr n structura unor coenzime; ionii
feros i feric fac parte din structura unor purttori redox, cum sunt citocromii i proteinele
FeS.
Bioelementele minore (microelementele sau micronutrienii, trace elements)
Zn, Mn, Na, Cl, Mo, Se, Co, Cu, W, i Ni sunt necesare n cantiti foarte mici, unele (Zn i
Mn) ca elemente eseniale pentru toate microorganismele, n timp ce altele (Se, Mo, Co, Cu,
i W) numai pentru unele activiti metabolice speciale:
zincul este necesar pentru c ADN-polimerazele i ARN-polimerazele sunt
metaloproteide cu zinc;
molibdenul intr n constituia nitrogenazei, enzim esenial pentru procesul de
fixare biologic a azotului;
cobaltul particip la efectuarea reaciilor metabolice dependente de vitamina B12;
cuprul intr n structura unor enzime care transfer electroni de la nivelul unui
substrat la oxigen.
Nevoia de ioni minerali variaz cantitativ i calitativ de la un microorganism la altul, n
primul rnd, datorit diferenelor de constituie enzimatic i de eficacitatea mecanismelor de
concentrare activ a lor din mediu.

31

5.2. Sursa de carbon

n funcie de natura sursei de carbon folosit pentru cretere i multiplicare,
microorganismele formeaz dou mari grupuri:
microorganismele autotrofe, care folosesc CO2 ca unic sau ca principal
surs de C celular;
microorganismele heterotrofe sau organotrofe, la care substanele organice
servesc, n acelai timp, ca surs de C pentru biosinteze i producere de
energie.
Marea varietate a tipurilor nutriionale ntlnite la microorganisme nu poate fi ns
exprimat numai n funcie de sursei de C.
Se iau n considerare criterii suplimentare ca:
natura sursei de energie;
natura substanelor folosite ca donatori de hidrogen (sau de electroni).
n cazul microorganismelor care folosesc diferite substane organice, rolul de surs
de energie este asigurat prin faptul c oxidarea sau dezasimilarea lor se face cu eliberare de
energie util pentru celul i eliberarea unei mari varieti de produi de metabolism, de
exemplu CO2 (produsul major al metabolismului respirator) sau ca un amestec de CO2 i
compui organici (n cazul metabolismului fermentativ). n acelai timp, compuii organici
utilizai ca nutrieni sunt folosii ca punct de plecare pentru sinteza celor cteva mii de
substane organice constitutive, care sunt ncorporate prin reacii consumatoare de energie n
structura celulelor.
Exist mari diferene n ceea ce privete natura i numrul compuilor care pot fi
folosii ca surs de C.
Nutriia heterotrof poate fi:
simpl, ca la E. coli, care poate fi cultivat pe medii de cultur ce conin numai
glucoz i sruri minerale;
complex, ca la Lactobacillus sp., care are nevoie de o serie de compui
organici, inclusiv vitamine.
Heterotrofia implic incapacitatea de sintez a unor metabolii eseniali i necesitatea de
a-i gsi ca substane preformate n mediu, spre deosebire de autotrofe, care sunt capabile s
sintetizeze constitueni organici, pornind de la compui anorganici simpli.
Unele microorganisme heterotrofe au nevoi foarte specifice i nu se pot dezvolta
dect n prezena unui singur compus organic:
Bacillus fastidiosus utilizeaz numai acidul uric;
microorganismele celulozolitice utilizeaz numai celuloza;
bacteriile metilotrofe folosesc numai metanul, metanolul i dimetileterii.
Alte microorganisme, ca, de exemplu, bacteriile din genul Pseudomonas, folosesc o
gam foarte larg, de peste 100 de compui organici cu C, pe care nu sunt capabile s i
sintetizeze (carbohidrai, polialcooli, acizi grai, acizi aminai, hidrocarburi, acizi aromatici etc.).
Este probabil c toate microorganismele heterotrofe au nevoie i de CO2 n cantiti
foarte mici pentru diferite reacii biosintetice. Dovada o constituie faptul c ndeprtarea
complet a CO2 mpiedic sau inhib creterea microorganismelor respective n medii
organice.
Cel mai adesea, nevoile de CO2 sunt acoperite de nsui metabolismul normal al
substanelor organice, care produce cantiti importante de CO2. Exist i excepii,
reprezentate de unele bacterii i fungi microscopici a cror dezvoltare heterotrof este
condiionat de prezena unei atmosfere bogate n CO2 (5-10%).

32

5.3. Sursa de azot

Azotul este necesar n cantiti mari deoarece reprezint ~10% din greutatea uscat a
celulei bacteriene, n care este ncorporat n general, sub form redus, ca grupri NH2.
Azotul este prezent n mod natural ca N2 sau n diferite combinaii ca NH3, nitrat, nitrit sau
compui organici. Sursa preferat de N pare s fie NH3, care este utilizat practic de toate
microorganismele.
n cazul microorganismelor fixatoare de N2, acesta este redus iniial la NH3, nainte
de a fi ncorporat n compui organici. mod similar, microorganismele care folosesc nitraii
sau cele care utilizeaz N organic i convertesc iniial la NH3, form accesibil pentru
biosinteze.

5.4. Factorii de cretere

n anul 1901, Wildiers a observat c levurile nu se pot dezvolta pe medii de cultur
sintetice, formate exclusiv din substane minerale ca surse de N i C, dect dac li se adaug
culturi vechi sau omorte de levuri sau extracte de levuri, cultivate pe medii complexe sau pe
diverse produse de origine biologic. Mediul sintetic nu satisface deci nevoile metabolice ale
levurii. Adugarea de levuri omorte l mbogesc cu un factor care stimuleaz creterea.
Substanele nedefinite prezente n aceste preparate au fost numite factorul bios.
S-a demonstrat c factorul bios este un amestec de vitamine, i aminoacizi ca:
mezoinozitol, acid pantotenic, piridoxin, acid nicotinic, biotin, aneurin, -alanin, L-leucin etc.
Cercetrile au demonstrat c unele microorganisme au nevoie nu numai de surse de
energie, de C i de N, ci i de anumite substane organice oligodinamice, eseniale pentru
metabolismul lor, numite factori de cretere.
Factorii de cretere ai unui microorganism sunt acele substane pe care
microorganismul dat este incapabil s la sintetizeze n cursul metabolismului su i n absena
crora multiplicarea lui este imposibil (Lwoff, 1943).
La unele microorganisme factorii de cretere sunt de origine endogen, fiind
elaborai prin biosintez n cursul metabolismului celular, astfel c prezena lor ca substane
preformate n mediu nu este necesar. n schimb, microorganismele care nu au capacitatea de
a sintetiza unul sau mai muli dintre aceti metabolii eseniali nu pot tri dect dac mediul
lor este suplimentat cu factorul sau factorii de cretere pentru a cror sintez facultile lor
metabolice sunt deficitare.
n funcie de natura lor chimic, factorii de cretere pot fi grupai n trei categorii:
aminoacizi necesari pentru sinteza proteinelor;
purine i pirimidine utilizate pentru sinteza ARN, ADN i a unor coenzime;
vitamine care funcioneaz ca grupri prostetice ale unor enzime, ale unor
proteine-purttor sau cu funcie de coenzime.
n raport cu celelalte categorii de nutrieni, care folosesc pentru formarea
constituenilor celulari, factorii de cretere sunt necesari n cantiti mici, deoarece cei mai
muli ndeplinesc funcii specifice n biosinteze.

5.5. Oxigenul
Oxigenul este furnizat microorganismelor, n primul rnd, de diferii nutrieni i de
apa din constituia mediilor de cultur. Din cauza solubilitii sale sczute, oxigenul aflat n
soluie este utilizat foarte repede de bacteriile aerobe, chiar n cazul unor populaii puin
numeroase. De aceea, frecvent, densitatea atins de o cultur este adesea limitat de rata de
difuzie a O2 prin interfaa aer-ap, chiar cnd culturile sunt bine aerate.

33

 n culturile aerate prin simpla rotaie a flacoanelor creterea unor bacterii aerobe este
adesea limitat la ~1-2 mg greutate uscat/ml.
Creterea mai abundent necesit tehnici speciale, care mresc aria interfeei lichidaer, ca, de exemplu, barbotarea rapid cu aer printr-un filtru poros, sau prin recircularea culturii.
Pentru necesiti de ordin practic, pe baza efectului pe care oxigenul l exercit
asupra creterii i metabolismului, microorganismele pot fi grupate n patru categorii:
1. Microorganismele strict sau obligatoriu aerobe (de exemplu, Bacillus anthracis, B.
subtilis, Mycobacterium tuberculosis), care au nevoie absolut de prezena oxigenului
molecular i sunt incapabile s triasc n anaerobioz.
2. Microorganismele strict sau obligatoriu anaerobe (de exemplu, Clostridium tetani, C.
botulinum, Welchia perfringens etc.), care nu se pot dezvolta n prezena oxigenului molecular
i, ca urmare, pot fi cultivate numai n medii srcite n O2, deoarece chiar la presiuni joase,
de ordinul a 10-5 atm, pot avea efect inhibitor.
n practic, se folosesc nglobri n medii ale unor substane care favorizeaz creterea
bacteriilor anaerobe, de exemplu tioglicolatul de sodiu 0,1%, care reduce O2 din mediu.
Alte procedee: adugarea unui strat de ulei de parafin; utilizarea de agar semisolid (0,20,3%), pentru a diminua difuzia O2; cultivarea n recipiente (anaerostate) din care oxigenul a
fost ndeprtat sau nlocuit cu un amestec controlat de alte gaze.
3. Microorganismele microaerofile (de exemplu, Spirochaetales, Thiobacteriales etc.)
cresc cel mai bine la presiuni de oxigen mai mici (~0,2 atm) dect n aerul atmosferic.
Aceast particularitate reflect prezena unor enzime care sunt inactivate n condiii de
oxidare puternic i pot fi meninute n stare funcional numai la presiuni joase de O2.
4. Microorganismele anaerobe, facultativ aerobe (E. coli, Staphylococcus, Streptococcus
etc.) au capacitatea de a se dezvolta deopotriv n prezena sau n absena O2. unele dintre ele
(de exemplu bacteriile lactice) desfoar n esen un metabolism de tip fermentativ, chiar n
prezena aerului, fr a fi sensibile la O2. Altele, cum sunt levurile, E. coli i
Enterobacteriaceae-le, n general, sunt capabile s-i orienteze metabolismul spre respiraie
sau spre fermentaie, n funcie de condiiile de mediu, respectiv de disponibilitile de O2.
n esen nevoia de O2 reflect mecanismul molecular prin care microorganismele i
satisfac nevoile energetice.

34

6. AUTOTROFIA
n concepia clasic, autotrofia reprezint tipul de metabolism caracteristic
organismelor capabile s creasc n absena oricrui compus organic. Microorganismele
autotrofe utilizeaz CO2 ca surs unic sau major de carbon celular i N sub form de NH3,
nitrat sau chiar N molecular, diferite sruri minerale i apa, de la care i construiesc
numeroasele substane organice caracteristice organismelor vii. Microorganismele autotrofe
folosesc aceeai surs de C, adic CO2. Ele se deosebesc, n raport cu natura sursei de energie
care asigur creterea, putnd fi difereniate n:
o fotoautotrofe, care pot obine toat energia necesar pentru cretere de la lumin,
oxidnd compui anorganici compui ai sulfului sau So;
o chimioautotrofe, care i obin energia necesar din oxidarea unor compui anorganici
redui ca NH3, nitrii, compui ai S, Fe sau H2.
Sub raportul capacitii lor de biosintez, autotrofele pot fi considerate ca microorganisme
complete, deoarece posed sistemele enzimatice cele mai complexe, care asigur producerea
tuturor componenilor celulari de la CO2, pe seama oxidrii unor substane anorganice.
Au fost descrise urmtoarele categorii de microorganisme autotrofe:
Microorganisme autotrofe obligate, care fixeaz CO2 ca principal surs de C, pe
calea Benson-Calvin (calea ribulozodifosfatului), utiliznd o substan anorganic redus ca
surs de energie, sau, dac sunt fototrofe, ca donator de electroni.
Ele sunt de dou tipuri:
1. microorganisme chemolitotrofe obligate, obin toat energia necesar pentru
cretere i pentru asimilarea C prin oxidarea specific (n absena luminii) a unor
compui anorganici ai S, ai ionilor NH4+, nitrit i fier feros sau a H molecular;
2. microorganisme fotolitotrofe obligate, utilizeaz energia luminoas, asociat
cu oxidarea compuilor redui ai S sau H2.
Microorganisme autotrofe facultative, care au o mult mai mare adaptabilitate
metabolic, incluznd specii (Acidithiobacillus novelus, Hydrogenomonas etc.) ale cror
particulariti fiziologice merg de la capacitatea de a se dezvolta autotrof, pn la cea de
cretere heterotrof. Chemolitotrofele facultative pot crete fie autotrof (n medii cu sruri
minerale, utiliznd substane anorganice ca surs de C i energie), fie heterotrof, folosind
substane organice.

Orientri noi asupra conceptului de autotrofie

Iniial definiia autotrofelor a fost legat numai de metabolismul carbonului,
caracteriznd organismele care folosesc energia obinut prin oxidarea unor donatori
anorganici de electroni pentru a fixa CO2, ca prim i indispensabil surs de C.
Schlgel (1975) a considerat cel dinti definiia autotrofiei legat de utilizarea CO2
ca surs major obligatorie de C, ca depit. Dup Schlgel, definitoriu pentru autotrofe este
faptul c un organism este capabil s sintetizeze substanele celulare de la CO2, ca surs
principal de C, deoarece faptul c unele autotrofe sunt facultativ heterotrofe i pot crete
ocazional i pe substane organice este de importan minor.
Cum cele mai multe microorganisme autotrofe nu se ncadreaz n conceptul riguros
clasic stabilit, s-a ncercat s se redefineasc conceptul de autotrofie. Aceste ncercri au ca
suport, printre altele, urmtoarele argumente (Whittenbury i Kelly, 1977):
1. microorganismele autotrofe nu prezint nici un mecanism comun de oxidare a
compuilor anorganici, ceea ce demonstreaz caracterul neuniform al grupului;
diferitele substraturi sunt oxidate de enzime diferite, pe ci diferite;
2. cele mai multe bacterii autotrofe nu sunt inhibate de anumite substane
organice, sau nu sunt singurele organisme inhibate;

35

3. numeroase microorganisme, considerate convenional ca heterotrofe, oxideaz

anumite substane anorganice, ceea ce demonstreaz c oxidarea compuilor
anorganici redui nu este o proprietate limitat la autotrofe i nici un caractercheie obligatoriu pentru autotrofie;
4. exist bacterii care nu cresc n absena luminii sau a unor surse anorganice de
energie; nici una nu este ns autotrof obligat.
Aceste date demonstreaz c principalele categorii de autotrofe descrise n literatura
de specialitate nu acoper toate categoriile nutriionale care pot fi considerate ca autotrofe.
Rezult c este preferabil s se menin o separare net ntre metabolismul energetic i
cel al carbonului, deoarece este evident c producerea de energie de la un substrat anorganic
nu trebuie cuplat obligatoriu cu autotrofia.
n felul acesta, exist posibilitatea clasificrii fiziologice precise:
o n funcie de sursa de energie (litotrof sau organotrof);
o n funcie de tipul de nutriie cu C (autotrof sau heterotrof).
n timp ce termenul clasic de autotrof poate implica sau nu utilizarea unui donator
anorganic de electroni, termenul chemolitoautotrof este precis i nseamn organism care
fixeaz CO2, utiliznd energia eliberat prin reacii chimice din oxidarea unor donatori
anorganici de electroni.
n acest context conceptul de autotrofie include:
1. organismele considerate ca autotrofe i n concepia clasic, organisme care
asimileaz CO2 pe calea circuitului Calvin;
2. organismele care folosesc ali compui de tip C1 i calea
ribulozomonofosfatului, calea serinei sau alte ci specifice.

Cauzele autotrofiei obligate

Nu exist o explicaie valabil pentru toate cazurile de autotrofie. Mai muli factori,
acionnd separat sau n combinaie, pot explica autotrofia unui organism sau a unui grup de
organisme:
1. Permeabilitatea limitat fa de nutrienii organici. S-a demonstrat c bacteria
Acidithiobacillus thiooxidans, adaptat s triasc ntr-un mediu toxic, mpiedic ptrunderea
compuilor organici nocivi n celul prin proprietatea de permeabilitate selectiv. n schimb
A. denitrificans este permeabil pentru anumite substane organice (glicerol), dei nu le
folosesc n metabolism;
2. Incapacitatea de a obine energie suficient de la substratul heterotrof;
3. Prezena unei leziuni metabolice: adic incapacitatea de a crete pe nutrieni organici
datorit lipsei uneia sau mai multor enzime necesare pentru sinteza anumitor metabolii eseniali;
4. Influena patologic a unor nutrieni organici exogeni: la A. neapolitanus
creterea este inhibat de mici cantiti de fenilalanin, metionin i cistein;
5. Autoinhibarea i antrenarea autotrofelor: la creterea heterotrof a fost observat c
anumii nutrieni pot fi metabolizai dar nu permit creterea; de exemplu aspartatul produce
compui toxici cnd este prezent n culturile de A. thiooxidans, care cresc n medii cu S i CO2;
6. Dependena de un anumit produs esenial specific. ntr-un mediu mineral aerob,
suplimentat cu un substrat organic, deci n condiii de heterotrofie, Nitrosomonas oxideaz
preferenial NH3 la nitrit, epuiznd sursa de N necesar pentru scopuri biosintetice.
Au mai fost luai n discuie i ali factori, cum ar fi: capacitatea limitat de a sintetiza
compuii necesari pentru cretere din alte surse diferite de CO2; blocarea biochimic a
creterii n prezena unui exces de nutrieni organici; inhibarea creterii de ctre anumii
produi ai metabolismului compuilor organici; dependena de un anumit intermediar
anorganic al procesului respirator n chemotrofie sau fototrofie, pentru anumite reacii
specifice n celul.
36

6.1. Microorganismele chemolitoautotrofe

Bacteriile chemolitoautotrofe au dou particulariti de metabolism definitorii:
1. capacitatea de a obine energie (ATP) i putere reductoare din oxidarea unor
compui anorganici (H2, CO, NH3, NO2-, Fe2+, So, S2O32- etc.);
2. capacitatea de a utiliza CO2 ca surs unic sau principal de C, pe care l reduc la
aldehid 3-fosfogliceric (fixarea reductiv a CO2) pentru a participa la metabolismul celular
(ciclul Calvin-Barsham).
Unele sunt chemolitotrofe obligate (bacteriile care oxideaz NH3 i NH2 ), altele sunt
facultative (hidrogenbacteriile) deoarece pot crete i chemoorganotrof utiliznd carbonai sau
acizi organici.
Capacitatea de a oxida compui anorganici redui nu este limitat doar la
chemolitotrofe. Unele heterotrofe posed enzimele necesare pentru oxidarea H2, dar nu se pot
dezvolta pe medii complet anorganice, datorit incapacitii de a utiliza CO2 ca unic surs de
C, din lipsa enzimelor ciclului Calvin.
De asemenea, unele bacterii heterotrofe pot oxida cu mai mic eficien compuii redui
ai N (NH3, NH2-), ceea ce demonstreaz c utilizarea acestora nu este o particularitate
exclusiv a chemolitotrofelor.
n raport cu heterotrofele, microorganismele chemolitotrofe prezint o serie de
dezavantaje legate de metabolismul energetic:
o dei realizeaz reacii de oxidare care asigur o conversie energetic global cu o
eficien considerabil, ele cresc slab i produc mai puin ATP, datorit
randamentului energetic molar relativ sczut al substanelor pe care le folosesc;
o fixarea reductiv a CO2, principala surs de C celular, necesit putere reductoare
pentru a aduce C din CO2 la nivelul de oxidare caracteristic glucidelor;
Practic, chemolitotrofele (cu excepia celor care oxideaz hidrogenul) consum 80% din
bugetul lor energetic total pentru conversia CO2 n constitueni celulari.

6.2. Mixotrofia
Mixotrofia este capacitatea microorganismelor chemolitotrofe facultative de a combina
utilizarea surselor de energie i/sau de C autotrofe, cu folosirea substraturilor organice.
Termenul de mixotrofie a fost introdus de Pfeffer (1897) pentru a descrie tipul de
metabolism n care compuii organici sunt fie necesari, fie stimulatori pentru creterea anumitor
plante, iar Pringsheim (1967) l-a utilizat pentru a caracteriza bacteriile (de exemplu, Beggiatoa)
a cror cretere autotrof este mult stimulat de prezena unor compui organici specifici.
n accepiunea actual, mixotrofia implic producerea concomitent de energie, prin
mecanisme alternative, chemolitotrofe i chemoorganotrofe sau utilizarea concomitent de
mecanisme autotrofe i heterotrofe.
Dei nutrienii mixotrofi nu au efect beneficial cnd sunt n exces, pot oferi un
avantaj deosebit n condiii de limitare nutriional.
ntruct n natur condiiile mixotrofe se ntlnesc foarte frecvent, microorganismele
mixotrofe au un avantaj selectiv evident fa de heterotrofe i autotrofe, a cror cretere este
limitat de cantitile insuficiente de substane organice, respectiv anorganice. Datorit acestui
fapt, este probabil c mixotrofia reprezint modul de existen principal al microorganismelor
chemolitotrofe facultative n natur.
Exemplu: La Acidithiobacillus intermedius rata de cretere este mai mare n condiii
de mixotrofie (mediu cu tiosulfat i glucoz), dect n condiii autotrofe sau heterotrofe. La
A.novellus ns nutriia mixotrof (mediu cu tiosulfat i glucoz) nu prezint nici un avantaj,
ba chiar este stnjenitoare, dimiunund rata de utilizare a glucozei, ct i rata de cretere.

37

6.3. Sintrofia
Studiindu-se bacteria Haemophilus influenzae s-a pus n eviden un fenomen general:
microorganismele capabile s-i sintetizeze constituenii celulari de la compui simpli din
mediu excret adesea mici cantiti de vitamine, aminoacizi sau ali factori de cretere, n afara
celulei lor, unde pot fi folosii de alte organisme auxotrofe pentru substanele respective.
Acest fenomen permite dezvoltarea pe medii de cultur solide, n jurul coloniilor
excretoare de substane organice, a unor colonii satelite formate din microorganisme mai
pretenioase (auxotrofe), care gsesc astfel substanele eseniale pentru cretere.
Exemple: H. influenzae pe geloz-snge formeaz colonii mici, punctiforme i
translucide. n vecintatea coloniilor de Staphylococcus, care contamineaz n mod accidental
mediul de cultur, coloniile de H. influenzae devin mai mari, mai voluminoase, deoarece
stafilococul este capabil s fac sinteza de NAD+ pe care n excret n mediu, permind
bacteriei H. influenzae s se dezvolte mult mai abundent dect este posibil n prezena
cantitilor mici de NAD+ coninut n snge.
Bacteriile metanogene nu pot utiliza glucoza ca surs de C i energie, dar pot crete
uor pe seama produilor finali formai prin degradarea glucozei de ctre bacteriile anaerobe,
capabile s fermenteze acest compus.

6.4. Microorganismele oligotrofe

Termenul de microorganism oligotrof (sau oligocarbofil) caracterizeaz acele
microorganisme a cror supravieuire i dezvoltare ca populaii vegetative sunt favorizate de
prezena unor concentraii sczute de substane organice n mediu. ncadrarea n aceast
categorie se poate face pe baza capacitii microorganismelor respective de a crete n mod
evident pe medii de cultur care coni numai 5-10 mg C/l.
Microorganismele oligotrofe se deosebesc de microorganismele copitrofe, a cror
cretere este dependent de o aprovizionare abundent cu nutrieni, n medie de o sut de ori
mai mare dect n habitatele oligotrofe.
Din cauza dificultilor de studiu, bacteriile oligotrofe sunt grupate provizoriu n
patru grupuri, pe baza relaiilor lor cu substanele organice din mediu:
1. primul grup cuprinde organisme care se pot dezvolta la prima cultivare n apa
sterilizat a bazinului din care provin, dar care nu se dezvolt n recultivrile ulterioare,
nici pe medii srace i nici pe medii standard bogate. Grupul este format din bacterii
cunoscute numai pe baza morfologiei lor, studiat la microscopul electronic;
2. grupul al doilea este reprezentat de o mare varietate de microorganisme, care nu cresc
deloc sau cresc foarte ncet dac sunt trecute din apa de testat pe medii bogate, dar care
ncep s creasc bine pe medii bogate n nutrieni, dup recultivarea pe ap steril sau
pe agar srac n nutrieni;
3. grupul al treilea include bacterii cu caractere morfologice i fiziologice particulare, care
cresc numai pe medii speciale, uneori fiind nevoie de tehnici particulare de izolare;
4. grupul al patrulea este format din bacterii insuficient studiate i care nu au fost nc
cultivate pe medii artificiale. Multe dintre ele sunt prostecate, ceea ce le ofer un
avantaj adaptativ, nu numai pentru fixare, ci i pentru transportul nutrienilor n celul.

Semnificaia biologic.
Microorganismele oligotrofe acioneaz n natur ca ultimi utilizatori ai substanelor
organice care rmn n urma activitii mineralizatorilor copiotrofi. Inhibarea creterii
bacteriilor oligotrofe n medii bogate n nutrieni pare s fie datorat efectului toxic al
produilor de metabolism i, n special, peroxidului de hidrogen, care se acumuleaz n mediu
i determin liza celulelor.

38

7. DIFUZIA I TRANSPORTUL SUBSTANELOR

PRIN MEMBRANELE CELULARE
Creterea i multiplicarea microorganismelor sunt condiionate de ptrunderea
nutrienilor eseniali prin nveliurile celulare i de eliminare a unor substane rezultate din
catabolism, mpiedicnd ns pierderea din celul a substanelor necesare. Toate
microorganismele au structuri-barier i adevrate pori moleculare care asigur integritatea
lor i limiteaz intrarea i ieirea anumitor compui chimici. Datorit acestor structuri, celula
bacterian, spre exemplu, nu este niciodat ntr-o stare de echilibru n raport cu mediul
nconjurtor n ceea ce privete concentraia diferitelor substane de cele dou pri ale
membranelor celulare.
Unele substane trec liber de cele dou pri ale membranei, dar cele mai multe nu
pot fi transportate numai sub impulsul gradientului de concentraie, n aa fel nct transportul
lor este condiionat de intervenia unor mecanisme speciale.
n funcie de mecanismele fizicochimice care stau la baza lor, modalitile generale
de transport prin membranele biologice ale electroliilor i neelectroliilor sunt: difuzia pasiv,
difuzia facilitat, translocaia de grup, transportul activ i endocitoza (Zarnea, 1984).

Difuzia pasiv
Se realizeaz ca urmare a unui gradient de concentraie, posibil cnd n exteriorul
celulei concentraia este superioar celei din interiorul acesteia.
Difuzia pasiv este procesul de trecere liber a substanelor solubile prin membrana
plasmatic, fr a interaciona cu moleculele din structura acesteia i fr consum de energie.
Moleculele cu grad ridicat de solubilitate n lipidetraverseaz mai uor regiunea hidrofob a
membranei.
Deorece concentraia celor mai muli metabolii este mai mare n interiorul dect n
afara celulei, difuzia pasiv este restrns, pe lng ap, la un mic grup de substane (unele
gaze ca O2 i CO2, acizii grai i substanele liosolubile, anumii ioni).
Difuzia pasiv se produce lent i nespecific i nceteaz cnd compusul respectiv
ajunge n aceeai concentraie att n interiorul, ct i n afara celulei.

Difuzia facilitat
Se realizeaz ca urmare a prezenei n biomembrane a unor proteine receptoare
denumite permeaze, localizate la nivelul plasmalemei sau n spaiul periplasmic. Aceast
difuzie este stereospecific i se realizeaz fa de un gradient de concentraie, iar celula nu
consum energie pentru acest transfer.

Transportul activ
Are urmtoarele particulariti: transportul n celul este asigurat chiar n absena
gradientului de concentraie i se realizeaz cu consum de energie. Acest transport a fost
demonstrat n cazul drojdiilor care pot acumula intracelular o cantitate de glucide i de
aminoacizi mai mare dect cea existent n mediul de cultur. Se admite c o molecultransportor, care consum o cantitate de energie pentru a se activa i a produce o legtur
instabil cu molecula nutrientului printr-o reacie catalizat enzimatic, transfer nutrientul i l
elibereaz n interior. Transportorul se activeaz ca urmare a energiei eliberate prin
transformarea ATP.

Translocaia de grup
Este un transport activ ntlnit la drojdii i mucegaiuri, n care intervine un sistem
enzimatic complex de transferaze i transfosfataze, ce permit ptrunderea glucidelor prin

39

membrane sub forma esterilor fosforici. Astfel, fosfoenol-piruvatul se poate combina cu

molecula de glucid din exteriorul celulei i se transform n piruvat i esterul fosforic al
glucidului transportabil n interior.
n cazul microorganismelor acvatice (protozoare), exist sistemul de endocitoz sau
pinocitoz prin care nutrientul din exterior este nglobat n interior, aprnd stadiul de
pictur suspendat i eliberarea n interiorul celulei.
Numeroase microorganisme, mai ales bacteriile, pot folosi pentru transportul
intracelular aa-numitul gradient protonic" rezultat n urma transportului de protoni i ioni,
care acioneaz permanent n celula vie ca o pomp electrochimic.

Difuzie pasiv

Difuzie facilitat

Transport activ

N-molecul nutrient
E1,2,3 - enzime
T*- transportor activat
Endocitoz

40

8. METABOLISMUL GLUCIDELOR LA MICROORGANISME

Numeroase microorganisme utilizeaz glucidele ca surs de energie i de C celular
pe calea unor secvene metabolice de catabolism i biosintez, care uneori variaz de la o
specie la alta, astfel nct nu pot fi prezentate ntr-o schem unitar.
Cea mai mare parte a rezervei de C din natur se gsete sub form de poliglucide,
care n prealabil sufer un proces de degradare sub aciunea exoenzimelor microbiene la
molecule mici, transportabile prin membranele celulare. Astfel, celuloza, care formeaz cea
mai abundent rezerv de material organic din natur, rennoibil anual prin fotosintez, este
degradat de bacterii, succesiv, la molecule oligoglucidice lungi, sub aciunea unei
endoglucanaze extracelulare, la oligoglucide scurte, de ctre endoglucanazele periplasmice, i
la celobioz i glucoz, de ctre -glucozidazele periplasmice (Ramasamy i Verachtert,
1980).
Sistemele enzimatice celulozolitice ale diferitelor microorganisme sunt diferite, fiind
formate din enzime extracelulare i intracelulare sau legate de suprafa. n general,
degradarea celulozei are loc cel mai eficient prin contact direct ntre microorganisme i
substrat, deoarece prin acest mecanism se realizeaz o concentraie enzimatic local maxim
i o aranjare spaial favorabil (Hofstern, 1975; Tor-Magnus Enari, 1983).
n mod similar, amidonul poliglucid vegetal format prin asocierea a dou specii
macromoleculare distincte, amilopectina (component major formnd ~ 80 %) i amiloza
este degradat sub aciunea -amilazei (la Aspergillus niger, A. oryzae, B. subtilis, B.
stearothermophilus etc.) i de glucoamilaze, enzime exclusiv microbiene (prezente la
Aspergillus, Rhizopus, levuri i bacterii), la moleculele monomere componente de D-glucoz.

Utilizarea glucozei n metabolismul microorganismelor

Forma principal n care glucidele sunt utilizate n metabolismul microorganismelor
este reprezentat de glucoz.
Procesul a fost studiat n detaliu la E. coli, care n condiii aerobe utilizeaz ~ 50 %
din substrat, oxidndu-l la CO2 (C6H12O6 + 6 O2 6 CO2 + H2O; G0' = - 686 kcal) printr-o
serie de reacii din care rezult suficient ATP pentru a asigura conversia restului de substrat (~
50 %) n material celular.
Au fost descrise patru ci principale:
Calea Embden-Meyerhof-Parnas;
Calea hexozomonofosfatului;
Calea Entner-Doudoroff;
Calea fosfocetolazei.
Primele dou sunt funcionale deopotriv n celulele animalelor superioare, ca i la
bacterii i fungi, n timp ce ultimele dou sunt folosite n exclusivitate de bacterii.
Dei transformrile chimice efectuate n reaciile acestor ci la diferite
microorganisme sunt aceleai, sistemele enzimatice efectoare active la un microorganism dat
sunt, adesea, ntructva diferite de cele care acioneaz la alte microorganisme.
n toate aceste ci, piruvatul ocup poziia unui intermediar-cheie, deoarece este
situat la punctul de intersecie metabolic de la care pornesc diferitele ci terminale.

41

9. METABOLISMUL ENERGETIC AL MICROORGANISMELOR

Bioenergetica microbian (metabolis mul oxidativ energetic)
Procurarea energiei este o proprietate vital a celulei microbiene, care se realizeaz
prin eliberarea energiei chimice a diferitelor alimente i formarea compuilor macroergici prin
procesul de fosforilare.
n metabolismul energetic, prin procese de oxidare i oxidoreducere pe cale
enzimatic, substratul nutritiv trece n substrat oxidat, cu eliberarea de energie potenial (Q1).
Substratul oxidat rezultat, avnd energia potenial diminuat (Q2), sufer n continuare
transformri pn la produii finali:
E1
E2
Substrat oxidat

CO 2 H 2 O
Substrat nutritiv

Q1

Q2

ADP Pi ATP

ADP Pi ATP

Substratul oxidat poate servi drept precursor sau, dac nu este util celulei, se poate
elimina n mediu sub form de catabolit. Cantitatea de energie obinut prin catabolism poate
fi obinut direct n biosintez, iar energia excedent este stocat n compui macroergici prin
procesul de fosforilare, denumit astfel deoarece componenta macroergic, care stocheaz
energia rezultat, conine grupri fosfat. Se consider compus macroergic un compus capabil
s elibereze o cantitate de energie mai mare sau egal cu 30 kj/mol.
Principalii compui macroergici sunt: ATP-ul, acetil fosfatul (Acetat~P), ADP-ul,
fosfoenolpiruvatul, compui care pot disponibiliza cantiti variabile de energie, prin ruperea
legturii macroergice.
Fosforilarea poate fi de trei tipuri:
fotosintetic, ntlnit la bacteriile din diviziunea Photobacteria care folosesc
energia radiant;
oxidativ, cnd formarea compuilor macroeregi cu fosfor are loc prin
nmagazinarea energiei eliberate prin reacii de oxidare, n procesele de
respiraie aerob sau anaerob;
de substrat, n urma formrii de compui macroergici prin reacii de oxidoreducere, prin care glucidele sunt transformate, prin procese de fermentaie
anaerob, n compui intermediari, acceptorul de H sau electroni fiind un
compus organic.
La fosforilarea oxidativ eliberarea energiei poteniale din diverse substraturi de
natur organic se realizeaz prin procese de oxidare, care se pot desfura astfel:
reacii de oxidare prin pierdere de electroni, caz n care are loc un transfer de
electroni de la substane cu potenial de oxidoreducere negativ (maxim 0,41
pentru hidrogen), la substane cu potenial de oxidoreducere pozitiv (maxim
+0,82 pentru oxigen);
reacii de oxidare prin transfer de hidrogen (electroni i protoni): acest tip de
oxidare este folosit de unele microorganisme anaerobe i aerobe i transferul
este realizat de enzime active la diferite valori ale potenialului de
oxidoreducere. Enzimele implicate n reaciile de oxidoreducere sunt
dehidrogenazele aerobe (aldehid-dehidrogenaza) i anaerobe (alcooldehidrogenazele), care au drept coenzime NAD-ul sau NADP-ul i care preiau
atomii de hidrogen trecnd din forma oxidat (NAD+) n forma redus (NADH
+ H+);

42

reacii de oxidare prin ctig de O2, cnd, n prezena enzimelor care

acioneaz la un potenial de oxidoreducere pozitiv, are loc transferul de H la
O2 provenit din aer i se formeaz apa; aceast reacie de oxidare este
caracteristic microbiotei aerobe.

Respiraia aerob este un metabolism oxidativ dependent de oxigenul din aer,

iar produsele finale sunt CO2 i apa, ntreaga energie a substratului oxidat eliberndu-se prin
produsele finale ale respiraiei.
Respiraia aerob este din punct de vedere energetic foarte avantajoas pentru celula
microbian; de aceea, atunci cnd se urmrete obinerea de celule n cantiti mari (drojdie
comprimat) sau de substane intracelulare, cultivarea se face n condiii de aerare.
Microorganismele aerobe dispun de o caten respiratorie diversificat, n
componena creia intr dehidrogenaze, citocromi, citocrom-oxidaze, oxidaze.
Numeroase bacterii pot oxida hidrogenul (Pseudomonas), amoniacul pn la NO2
(Nitrosomonas), sulful i H2S pn la sulfit (Acidithiobacillus thiooxidans), sau Fe2+ la Fe3+
(Acidithiobacillus ferrooxidans), reacii cu rol important n ciclul natural al elementelor.
Respiraia anaerob este un metabolism oxidativ n care substratul este
transformat pn la CO2, iar electronii sunt cedai prin oxidare unor compui anorganici.
Acest tip de respiraie este ntlnit la bacteriile strict anaerobe.
Astfel, bacteriile denitrificatoare pot transforma NO3 la azot molecular, bacteriile
metanogene pot transforma dioxidul de carbon n metan, bacteriile acetogene ale genului
Clostridium pot transforma dioxidul de carbon n acid acetic.
Aceste bacterii obin o cantitate mic de energie i pot crete n absena oxigenului
molecular, la un potenial de oxidoreducere de 0,2...-0,3 V. innd cont c mediile care vin
n contact cu O2 au un potenial redox de +0,2...+0,4 la un pH= 7, pentru a asigura dezvoltarea
anaerobilor, n mediu se adaug substane cu caracter reductor ca: tioglicolat de sodiu,
cistein-SH, sulfur de sodiu. Substanele reductoare menin un potenial oxidoreductor
sczut, care permite dezvoltarea anaerobilor n plci, chiar cnd mediul vine n contact cu
aerul. Pentru cultivarea anaerobilor se pot folosi i vase speciale numite anaerostate, n care
O2 este legat chimic, sau cultura se menine n atmosfer de gaze inerte (CO2, N2).
Metabolismul oxidativ anaerob poate fi ntlnit i la microorganisme facultativ
anaerobe. Aceste microorganisme au capacitatea de a crete aerob, utiliznd oxigenul din aer
(respitaie aerob), sau anaerob, utiliznd compui organici ca acceptori finali ai electronilor
produi prin catabolism.
n condiii aerobe microorganismele facultativ anaerobe i adapteaz echipamentul
enzimatic pentru procese de oxidare pn la produi finali, utiliznd preferenial oxigenul,
cnd este disponibil, datorit cantitii mai mari de energie rezultat prin respiraie aerob
(36 moli ATP/mol glucoz asimilat, fa de 2-3 moli ATP/mol glucoz fermentat).

Celula microbian prelucreaz nutrienii obinnd energie i diferii compui, iar

produii de catabolism sunt eliminai. n cursul acestor prelucrri metabolice, n funcie de
faza de cretere a celulei, rezult produi de metabolism, care pot fi mprii astfel:
produi primari, care se formeaz n faza de cretere exponenial a celulelor
(trofofaza) i sunt produi eseniali pentru celul;
produi secundari, care sunt formai n faza de declin a crterii celulelor (idiofaz) i
nu sunt eseniali celulei (toxine, alcaloizi).

43

Fermentaii
Fermentaii anaerobe
i produse de fermentaie
Alcoolic
(alcool etilic i CO2)
Lactic
(acid lactic, diacetil)
Propionic
(acid propionic,
acid acetic, CO2)
Butiric
(acid butiric, CO2, H2)

Microorganisme
selecionate
Saccharomyces sp.
Lactobacillus sp.
Lactococcus sp.
Propionibacterium

Clostridium sp.

Fermentaii oxidative
i produse de fermentaie
Acetic
(acid acetic, H2O)
Gluconic
(acid gluconic)
Citric
(acid citric)
Oxalic, fum aric

Microorganisme
selecionate
Acetobacter sp.
Gluconobacter
Aspergillus niger
Aspergillus niger

Aspergillus sp.

Fermentaii anaerobe
Fermentaia alcoolic
Fermentaia alcoolic este un proces anaerob prin care glucidele fermentescibile
sunt metabolizate prin reacii de oxidoreducere, sub aciunea echipamentului enzimatic al
drojdiei, n produi principali (alcool etilic i CO2) i produi secundari (alcooli superiori,
acizi, aldehide ,a.).
Agenii tipici ai fermentaiei sunt drojdiile genului Saccharomyces care, prin
fermentarea glucidelor, pot s produc mai mult de 8o alcool etilic.
Fermentaia alcoolic este un proces ntlnit i la alte microorganisme: Bacillus
macerans, Clostridium acetonoetilicus, Zygomonas mobilis, dar acestea produc prin
fermentare cantiti mai reduse de alcool etilic comparativ cu drojdiile i nu sunt considerate
ageni tipici.
Fermentaia lactic
Fermentaia lactic este un proces anaerob prin care glucide le fermentescibile sunt
metabolizate sub aciunea echipamentului enzimatic al microorganismelor n acid lactic ca produs
principal i produse secundare, cum ar fi: diacetil, aceton, acid acetic, alcool etilic i CO2.
Bacteriile lactice homofermentative: Streptococcus lactis, Pediococcus acidilactici, Lactobacillus
bulgaricus, L.leichmanii, L. casei, L. acidophilus, L. jensenii fermenteaz glucoza la acid lactic, cu
producere numai de urme ale altor produi.
Bacteriile lactice heterofermentative: Leuconostoc mesenteroides, L. lacti, Lactobacillus fermenti,
Lactobacillus brevis produc fermentaie mixt n care numai 1/2 din glucoz este convertit la acid
lactic, restul fiind utilizat cu formare de alcool, formiat, acetat i CO2.

Procese metabolice aerobe (fermentaii oxidative)

Spre deosebire de fermentaiile propriu-zise anaerobe, fermentaiile acetic,
gluconic, citric .a. sunt procese oxidative simple, care se desfoar n condiii aerobe i se
difereniaz de metabolismul oxidativ (respiraie) prin aceea c oxidarea este limitat,
rezultnd n condiii industriale acizi organici cu mare valoare economic.

Fermentaia acetic
Fermentaia acetic este un proces aerob prin care substratul (alcoolul etilic) este
oxidat n prezena oxigenului din aer, sub aciunea echipamentului enzimatic al bacteriilor
actice, n acid acetic ca produs principal al fermentaiei.

44

 Caracterele morfologice i fiziologice ale bacteriilor acetice. Bacteriile acetice sunt

bacterii strict aerobe, sub form de bastonae, gram-negative, grupate n perechi sau lanuri,
cu dimensiuni variabile (0,5-0,8)x(80,9-4,2) m. Pot fi imobile sau mobile, cu cili polari sau
peritrichi. n mediu acid, n timp, pot aprea forme de involuie, ramificate, care i pierd
capacitatea de reproducere.
n medii lichide (staionar) se dezvolt sub forma unui voat fragil care, cu creterea
n dimensiuni, ascensioneaz pe pereii vasului (Acetobacter ascendens, A. aceti). Alte specii,
A.xylinum, A. xilinoides formeaz, n vin oeit sau n oet, un strat gelatinos de natur -glucanic
(coloidal i fibros).
o
Bacteriile acetice sunt mezofile (temperatura optim 30 C) i produc fermentaia
o
acetic ntr-un domeniu larg de temperaturi, 0...35 C. Au o termorezisten sczut n mediu
lichid cu pH acid, inactivitatea lor avnd loc la 60 oC ntr-un minut, n timp ce bacteriile
reinute pe suporturi solide (doage de lemn) sunt inactivate la temperaturi mai ridicate (100 oC).

Fermentaia gluconic
Fermentaia gluconic este un proces oxidativ simplu prin care glucoza, n prezena
oxigenului din aer i a sistemului enzimatic al microorganismelor selecionate, este
transformat n acid gluconic ca produs principal.
Agenii tipici ai fermentaiei gluconice sunt bacteriile din genurile Gluconobacter
(Acetomonas) i Moraxella i mucegaiurile din genurile Aspergillus (A. niger, A. phoenicis,
A.Wentii) i Penicillium (P. chrysogenum, P. luteum).

Fermentaia citric
Fermentaia citric este un proces oxidativ complex prin care substratul glucidic
(zaharoza) este metabolizat la compui intermediari de oxidare, cu acumulare n mediu a
acidului citric ca produs principal.
Ageni tipici ai fermentaiei citrice sunt tulpinile selecionate ale speciei Aspergillus
niger care produc activ citrat sintetaz. Acidul citric se poate obine cu un bun randament (52
g/dm3) i prin cultivarea tulpinilor de drojdii din specia Candida oleophilla pe medii cu
parafine.

Transformri microbiene ale compuilor organici macromoleculari

Se apreciaz c prin fotosintez, energia radiaiilor solare care cad anual pe pmnt
(echivalen cu 3x1024 J) este convertit n energia chimic a combinaiilor organice, cu
acumularea a 2x1011 tone C/an. Din aceast biomas vegetal, cea mai mare parte o constituie
celuloza, substanele pectice, amidonul i n cantiti mai reduse, lipidele, acizii nucleici .a.
n condiii naturale dup moartea vieuitoarelor vegetale i animale, n diferitele
habitaturi (sol, ap) se produc degradri microbiene specifice, cu formare de:
produi intermediari (condiii de anaerobioz);
produi finali, ca CO2 i H2O (condiii de aerobioz).
n afar de substraturile direct fermentescibile (glucoz, zaharoz, lactoz, acizi
organici) microorganismele pot aciona i asupra altor compui organici, fie n condiii
dirijate, cnd se obin produse cu valoare economic, fie n condiii naturale, cnd au loc
procese complexe cu rol vital n circuitul natural al elementelor (C, N, O, S, P) i meninerea
vieii pe Pmnt.

45

Descompunerea amidonului i a glicogenului

Descompunerea acestor polioze au loc datorit unor microorganisme ce produc
enzime extracelulare, care produc hidroliza acestor compui macromoleculari la molecule
simple (glucoz, maltoz) transportabile prin membran i folosite n nutriie.
Dintre enzimele microbiene care hidrolizeaz amidonul fac parte: -amilaza, amilaza i glucoamilaza, enzime extracelulare elaborate de bacterii, mucegaiuri i drojdii.
Bacteriile
genului Bacillus (B.subtilis, B.subtilis var. amyloliquefaciens,
B.licheniformis, B.macerans, B.sthearothermophillus sunt productoare de -amilaz, enzim
zaharogen care, prin hidroliza legturilor 1-4 glucozidice, elibereaz molecule de maltoz.
Mucegaiurile Aspergillus, Mucor, Rhizopus produc mai ales -amilaz i
glucoamilaz.
Aspergillus niger i A. oryzae produc -amilaze.
Mucegaiurile A.awamori, A.usami, A.niger i Rhizopus delemar produc
glucoamilaz.
Se cunosc peste 100 de specii de drojdii care produc -amilaz i glucoamilaz,
dintre care mai importante sunt cele din genurile Saccharomycopsis (S.bispora, S.fibuligera),
Schwanniomyces, Trichosporon i Candida.
Hidroliza enzimatic a amidonului cu enzime vegetale (din mal) sau cu enzime
microbiene, cu formare de glucide fermentescibile, este folosit n biotehnologia spirtului, a
berii, a panificaiei sau pentru obinerea siropurilor dulci, a dextrinelor, a maltozei, a glucozei
cristalizate .a.

Descompunerea celulozei i hemicelulozei

Celuloza este un poliglucid rspndit n materiile prime de origine vegetal
(aproximativ 1/3) i n structura pereilor celulari ai fungilor. Celuloza ajuns n sol i n ape
este transformat n timp, sub aciunea microorganismelor care produc enzime celulozolitice:
micromicete-ageni ai putrezirii, bacterii aerobe i anaerobe.
Produii intermedieari de hidroliz sunt metabolizai n mod difereniat, n funcie de
natura microorganismelor i de prezena/absena oxigenului din aer.
Degradarea aerob a celulozei se caracterizeaz prin formarea din celobioz sau
glucoz, n prima etap, a hidroxiacizilordin care, prin oxidare, se elibereaz CO2 i H2O.
Dintre bacteriile aerobe care asimileaz celuloza fac parte bacterii cu forme spiralate
aparinnd genurilor: Cytofaga, Cellvibrio, Cellulomonas.
Importan industrial o au bacteriile din genul Cellulomonas, care pot fi cultivate aerob pe
deeuri vegetale, pe hrtie .a., iar biomasa rezultat prin nmulire este valoroas prin
coninutul ridicat n proteine (46,2%).
Dintre micromicete au activitate celulozolitic superioar specii ale genurilor:
Botryotinia, Fusarium, Mucor, Rhizopus, Trichoderma i Tricothecium.
Tulpini selecionate de micromicete ale genurilor Trichoderma i Aspergillus sunt
bune productoare de celulaze i sunt folosite industrial ca surse de enzime.
Degradarea anaerob a celulozei are loc permanent n sedimente i n mlul apelor,
la fermentarea compostului, n rumenul ierbivorelor, n profunzimea solului, n soluri
inundate, lacuri termale.
n transformarea celulozei se pot distinge trei etape, n funcie de natura produselor
de fermentaie.
Dup hidroliza celulozei la compui simpli, sub aciunea unei microbiote heterogene
alctuite din bacterii anaerobe i facultativ anaerobe din familiile Enterobacteriaceae,
Bacillaceae (genul Clostridium), se acumuleaz alcooli, acizi, CO2 i H2.
Produsele rezultate n acest stadiu sunt folosite de bacteriile acetogene productoare
de acid acetic pe cale anaerob, n a doua etap.

46

 n etapa a treia, denumit metanogen, sunt active bacteriile metanogene strict

anaerobe din genul Methanobacterium cu speciile M.ruminantium, M.formicicum, M.mobilis,
M.farkeri .a.
Bacteriile anaerobe pot folosi acidul acetic ca surs energetic i produc metan. Se
apreciaz c 73% din metan dezult din acidul acetic format n faza acetogen:
Methanosarcina bar ker i
CH3-COOH

CH4 + CO2

Methanobacteriile pot forma metan prin reacia:

thermoautotrophicum
4CO + 2H2O Methanosar
cina

CH4 + 3CO2
n afara acestor procese naturale, care explic formarea zcmintelor de metan, n
ultimele decenii a luat amploare metanogeneza dirijat n scopul obinerii de biogaz, prin
prelucrarea microbiologic a dejeciilor animale, cnd se realizeaz concomitent protecia
mediului i valorificarea energetic a metanului i a hidrogenului.

47

9. DINAMICA MULTIPLICRII BACTERIILOR N CULTURI

n general microorganismele sunt cultivate pentru mai multe scopuri:
- izolarea i identificarea lor;
- meninerea n stare viabil, n colecii, fr pierderea funciilor importante;
- studiul structurii i funciei lor;
- studierea rolului n natur;
- obinerea de produi rezultai din biomasa celular, biosintez, fermentaii, bioconversii etc.
n prezent se cunosc puine date n legtur cu dinamica multiplicrii populaiilor
bacteriene n natur. Procesul este ns destul de bine cunoscut raportat la multiplicarea n
condiii experimentale, de laborator, sau industriale.
Exist dou tipuri principale de culturi bacteriene:
culturi discontinue (n mediu de cultur nerennoit), care se pot realiza n dou
variante
o asincrone;
o sincrone.
culturi continue, n medii de cultur rennoite continuu.

Culturi discontinue asincrone

Aceste culturi corespund cultivrii n sisteme nchise, n care un anumit volum de
mediu corespunztor este nsmnat cu bacteriile respective (batch-culture, eng. batch =
arj, lot). n aceste condiii, creterea este limitat la un volum fix de mediu, care nu este
rennoit i care de multe ori este modificat de acumularea produilor de metabolism, putnd
deveni la un moment dat necorespunztor pentru cretere. Acest mod de cultivare este folosit
frecvent n laborator, dei are o serie de dezavantaje de care trebuie inut seama: numrul
bacteriilor variaz continuu, ritmul de cretere este impus de compoziia chimic a mediului
care variaz de la un moment la altul, vrsta bacteriilor individuale este variabil, numrul de
generaii posibile este limitat.
Prin inocularea de celule, aparinnd unei culturi pure, ntr-un mediu nutritiv steril se
poate stabili dinamica de cretere prin studiul vitezei de acumulare a biomasei sau prin
creterea numrului de celule raportat la unitatea de volum a mediului. n timp ce la
mucegaiurile inferioare, la care prin cretere are loc prin diviziunea nucleilor i nu a celulei
coenocitice, creterea se apreciaz prin determinarea masic a biomasei formate, la alte
microorganisme, la care concomitent cu diviziunea nuclear are loc i diviziunea celular
(nmugurirea la drojdii, sciziune la bacterii, formare de perei despritori la mucegaiurile
superioare), creterea se apreciaz fie prin acumularea de biomas fie prin determinarea
numrului de celule.
Pentru a aprecia dinamica multiplicrii, la intervale regulate se recolteaz probe mici
de cultur, care sunt analizate, iar valorile logaritmice ale numrului de celule sunt nscrise pe
curbe ale cror modificri arat tranziia de la o faz de cretere la alta. n general, se folosesc
logaritmi n baza 2, deoarece fiecare unitate pe ordonat reprezint o dublare a populaiei
bacteriene respective. n aceste condiii procesul evolueaz n ase faze succesive, n funcie
de rata de cretere (notat cu r sau ): faza de lag, faza de accelerare, faza de cretere
exponenial, faza de ncetinire i faza de declin.
o
Faza de lag (eng. to lag = a ntrzia), numit i de laten, sau de cretere zero, (=0)
n care nu se constat o cretere a numrului de celule, numrul celulelor din inocul rmne
neschimbat, sau chiar scade temporar. n aceast faz are loc o adaptare a celulelor la
condiiile de mediu, biosinteza de ADN/ARN i o activizare a sistemelor enzimatice i
elaborarea de enzime induse. n cazul drojdiilor, aceast faz poate dura 1-2 ore, durat ce

48

depinde de compoziia mediului i de capacitatea de reglare a metabolismului propriu. Durata

fazei de lag poate fi redus la limite imperceptibile n cazurile n care se folosete un
inoculum mare de cultur n faz logaritmic, iar transplantarea se face ntr-un mediu de
cultur bogat, identic cu cel n care au fost cultivate bacteriile din inoculum.
o
Faza de iniiere a creterii, sau faza de accelerare a ritmului de cretere ( ), cnd
are loc o cretere n dimensiuni a celulelor prin mrirea mai rapid a volumului n raport cu
suprafaa celular, ceea ce favorizeaz declanarea procesului de diviziune;
o
Faza de cretere logaritmic sau de multiplicare exponenial, care reprezint faza
n care creterea masei de celule poate fi determinat cantitativ prin dublarea numrului de
celule n unitatea de timp (pentru drojdii i bacterii), sau ca dublare a biomasei / t pentru
microorganismele filamentoase (streptomicete i fungi). Prin exprimarea acestor valori pe o
scar semilogaritmic rezult o dreapt. Dac unghiul pantei acestei drepte este mic aceasta se
datoreaz condiiilor de cretere, care nu sunt din cele mai favorabile. Dei celulele produc o
modificare a mediului de cultur prin asimilare de compui nutritivi i eliberarea compuilor
de catabolism, n faza logaritmic, rata de cretere rmne constant.
Rata de cretere este independent de concentraia n nutrieni atta timp ct acetia se
afl n exces. Rata de cretere n biomas X(g x dm-3) este corelat cu rata specific de
cretere , n timp ce rata de cretere a numrului de celule este corelat cu rata specific de
cretere i densitatea celulelor N.
Rata specific de cretere , este dependent de trei parametri:
- concentraia substratului limitativ S;
- rata maxim de cretere m;
- constanta specific dependent de substrat Ks,
conform ecuaiei stabilit de Jaques Monod:
= m S
Ks + S

Constanta Ks este concentraia substratului la care se obine din rata specific maxim
de cretere ( = 0,5 m ) i este echivalent cu constanta Michaelis n cinetica enzimatic.
Dac exist un exces al tuturor nutrienilor, atunci = m i cultura se afl deci n faza
logaritmic la rata maxim de cretere.
Dac unul dintre nutrienii preferai, de exemplu glucoza, s-a epuizat, n prezena altor
surse de carbon se observ aa-numitul fenomen de diauxie cnd se poate, dup o nou faz
lag, s aib loc metabolizarea noului substrat i creterea exponenial a celulelor.
La sfritul fazei logaritmice se acumuleaz o cantitate maxim de biomas, substratul
este rapid epuizat i cultura trece n faza staionar de cretere. Rata specific de cretere
maxim m, are o importan considerabil n procesele industriale n care se urmrete
obinerea de celule i este dependent de natura microorganismului i de condiiile de
cultivare. De exemplu, pentru mucegaiuri, aceasta poate s varieze ntre 0,090 i 0,61 h-1.
La cultivarea lui Aspergillus niger pe un mediu cu glucoz la 30oC s-au obinut o rat
maxim de cretere m = 0,2 i un timp de dublare al biomasei de 3,46 h.
Bacteriile aflate n faza logaritmic au o citoplasm omogen, nu conin substane de
rezerv i au o mare afinitate pentru coloranii bazici, datorit coninutului lor mare de ARN.
Mrimea lor este constant, depind ns dimensiunile caracteristice speciei.
o
Faza de ncetinire a creterii corespunde perioadei n care, ca urmare a epuizrii
treptate a nutrienilor, reducerea concentraiei n oxigen i acumularea de compui de
catabolism ce pot avea efect inhibitor asupra celulelor, creterea ia toate valorile intermediare
ntre creterea cu o rat maxim i 0.
o
Faza staionar de cretere, cnd se stabilete un echilibru ntre numrul de celule
care se formeaz prin reproducere i cel al celulelor care se autolizeaz. Cantitatea de biomas

49

poate rmne constant, dei se schimb compoziia celulelor. Datorit lizei unor celule se
elibereaz noi substraturi care vor servi drept nutrieni pentru celulele viabile. Aceast faz
poate fi prelungit atunci cnd urmrim pstrarea culturii pure, prin modificarea unor factori
care scad viteza de metabolism celular;
o
Faza de declin sau curba de distrugere i inactivare metabolic a celulelor, are loc
ca urmare a urmtorilor factori:
o lipsa surselor de nutriie i energie;
o denaturarea componentelor celulare n prezena substanelor acumulate
(alcooli, acizi, .a.);
o procentului de celule autolizate.
Consecina acestor aciuni conduce, n final, la sterilizarea mediului i, deci, la
moartea tuturor celulelor, respectiv la pierderea culturii.

Culturi discontinue sincrone

n cazul culturilor bacteriene obinuite diviziunile celulelor individuale urmeaz
ritmuri proprii, n aa fel nct rezult o populaie eterogen, format din indivizi aflai, practic,
n toate fazele ciclului lor de cretere i multiplicare. Chiar n cazuri speciale, n care pornim de
la o singur celul, se constat c la descendenii acesteia, dup o perioad de diviziune sincron
apar diferene decurgnd din timpul diferit dnecesar celulelor progene sa se divid.
Culturile cu cretere sincron sunt selecionate din culturi asincrone i conin
organisme foarte asemntoare deoarece aparin aceleiai categorii de vrst i/sau de
dimensiune i ca urmare se divid aproape simultan.
Procesul de diviziune sincron dureaz numai cteva generaii (2-3) deoarece
diferenele individuale determin procese de defazare n ritmul de cretere, chiar ntre
descendenii unei singure celule.
Tehnicile de obinere ale culturilor sincrone pot fi grupate n dou categorii:
A. Tehnici bazate pe selecie dup dimensiuni de vrst:
filtrarea prin teanc de hrtii de filtru suprapuse;
separarea prin centrifugare n gradieni de densitate nemetabolizabili de
microorganismul studiat;
separarea prin filtrare pe filtre de membran.
B. Tehnici bazate pe modificri ale mediului, pot fi utilizate n numerase variante:
expunerea microorganismelor auxotrofe la o perioad de nfometare, n medii
fr n factor de cretere esenial, nainte de a fi trecute ntr-un mediu complet;
expunerea la doze subletale de radiaii;
expunerea la aciunea unui antibiotic care inhib sinteza proteinelor;
expunerea microorganismelor fotosintetizante alternativ la ntuneric i
lumin;
expunerea alternativ, unic sau repetat, la temperaturi optimale i suprasau suboptimale pentru cretere.

Culturi continue
Anumite procese experimentale de laborator sau de producie industrial necesit
prezena unor bacterii n faz exponenial de cretere, ceea ce nu se poate realiza timp
ndelungat n condiiile obinuite de cultivare, ntr-in spaiu nchis, respectiv ntr-un volum fix
de mediu nerennoit, n care faza exponenial are un numr limitat de generaii, iar unele
condiii de mediu devin limitante.
Obinera culturilor continue se realizeaz cu ajutorulunui dispozitiv numit chemostat
baza pe principiul diluiei ontinue n volum constant.

50