Aspartat aminotransferaza (AST) Abbott Clinical Chemistry

Documente de referinta

- standardul SR EN ISO/CEI 17025/2005,

- Manualul calitatii laboratorului,
- Protocolul de lucru al kitului,
- Manualul de utilizare al analizorului.

Utilizare

Se foloseste pentru determinarea cantitatii de AST din ser uman sau plasma.

Introducere

AST face parte dintr-un grup de enzyme care catalizeaza interconversia aminoacizilor si
α cetoacizilor prin transferarea unei grupari amino. AST si ALT se gasesc in mod normal
in fluidele organismului, dar nu in urina exceptand cazurile de leziuni ale rinichilor. AST
se gaseste in cea mai mare concentratie in inima, ficat, muschi si rinichi. Distrugerea
acestor tesuturi poate duce la cresterea nivelului de AST in ser. In urma infarctului
miocardic nivelul de AST incepe sa creasca in 6-8ore de la instalarea durerii, atingand
nivelul maxim in 18-24ore si revenind la normal dupa 4-5 zile. Valorile pot creste de 10-
15ori fata de nivelul normal, iar cresterea este proportionala cu gradul de distrugere al
tesutului.

Principiul procedurii

AST prezent in proba de analizat catalizeaza transferul gruparii amino de la L-aspartat la

α cetoglutarat formand oxaloacetat si L-glutamat. Oxaloacetatul, in prezenta NADH si
malatdehidrogenazei (MDH), este redus la L-malat. In aceasta reactie NADH este oxidat
la NAD. Reactia este monitorizata prin citirea absorbantei la 340nm in timpul oxidarii
NADH la NAD.

Reactivi

Kitul contine 2 reactivi sub forma de solutie gata de folosire :

Reactiv 1 (R1) 10x70mL
Reactiv 2 (R2) 10x21mL
Compozitia reactivilor

Reactivi Concentratie
R1: β NADH 0.16mg/mL
Malat Dehidrogenaza 0.64U/mL
Lactat Dehidrogenaza 0.64U/mL
L-Aspartat 232mmol/L
R2 : α-Cetoglutarat 51.3mmol/L
L-Aspartat 100mmol/L

Manuirea si pastrarea reactivilor

Manuire

Se indeparteaza bulele de aer, daca acestea sunt prezente in recipientul cu reactiv. Pentru
a evita risipirea reactivului, bulele de aer nu se indeparteaza folosind micropipeta ci se
lasa reactivul la temperatura de pastrare. Bulele de aer pot impiedica detectarea corecta a
nivelului de reactiv.

Pastrare

Reactivul nedeschis este stabil pana la data expirarii, daca se pastreaza la 2-80C.
Stabilitatea reactivului este de 30zile, daca acesta se pastreaza desfacut in suportul pentru
reactivi de la nivelul aparatului.

Avertismente si precautii

Precautii pentru utilizatori :

- se foloseste numai pentru diagnosticul in vitro,

- nu se foloseste dupa data expirarii,
- nu se amesteca reactivii din loturi diferite,

Recoltarea probelor

Se utilizeaza serul sau plasma

Serul : sangele se colecteaza in vacuete de sticla sau plastic prin recoltare din vena. Dupa
formarea completa a chiagului serul se separa prin centrifugare. Pentru unele probe, in
special cele provenite de la pacientii care fac tratament cu anticoagulant timpul de
formare a chiagului este mai mare. Daca probele sunt centrifugate inainte de formarea
completa a chiagului, prezenta fibrinei poate duce la rezultate eronate.
Plasma : sangele se recolteaza in eprubete cu anticoagulant. Plasma se separa prin
centrifugare.
Se recomanda ca materialele provenite din surse umane sa fie manuite cu atentie.

Pastrarea probelor

Temperatura ser/plasma
20-250C 4zile
2-80C 7zile
-200C 12saptamani

Probele nu se ingheata pe perioade mai lungi de timp decat cele specificate.

Inainte de a fi testate serul sau plasma trebuie sa atinga temperatura camerei.

Materiale furnizate

Reactivi de AST.

Materiale necesare nefurnizate

 Analizor Aeroset System sau Architect

 Controale
 Solutie salina necesara diluarii probelor , atunci cand este cazul. ( se dilueaza cu
solutie salina probele care se afla in afara limitelor procedurii)

Analizorul are posibilitatea diluarii automate a probelor de analizat. Pentru informatii

suplimentare se consulta sectiunea 2 din manualul de operare al analizorului.

Procedura de lucru

Se respeta modul de lucru al analizorului.

Calibrarea

Calibrarea este stabila 30 zile si se reface in cazul schimbarii lotului de reactiv.

Calibrarea se verifica cu cel putin 2 nivele de control. Daca rezultatele controalelor sunt
in afara limitelor admise se reface calibrarea.
In cazul AST trebuie introdus un factor de calibrare: 8141.
Pentru detalii despre cum se calibreaza un test se consulta sectiunea 6 a manualului de
operare al aparatului.

Controlul calitatii

Se recomanda procesul de control al calitatii pentru a asigura in permanenta calitatea

echipamentului si a reactivilor folositi in laborator, pentru a intreprinde eventuale actiuni
corective si pentru obtinerea unor rezultate corecte in urma analizarii probelor.
- se folosesc 2 nivele de control ( normal si patologic) la fiecare 24ore, odata cu probele
pacientilor,
- daca rezultatele controalelor nu se incadreaza in limite, valorile pacientilor pot fi puse la
indoiala. In acest caz se reface calibrarea.

Valori normale

Ser/plasma Limite normale ( U/L)

Adult 5-34

Se recomanda ca fiecare laborator sa-si stabileasca propriile valori normale bazate pe

particularitatile locale si caracteristicile populatiei.