Microbiologie l.p.

EXAMENUL MICROSCOPIC

I. Preparatul nativ (umed, ntre lam i lamel)

Permite studierea:
- mobilitii germenilor
- morfologiei bacteriene
Tehnica de lucru: se realizeaz o suspensie de germeni vii ntre lam i lamel
Examinarea se face cu:
- microscopul optic, cu obiective uscate, condensator cobort.
- microscopul cu fond ntunecat
- microscop cu contrast de faz

II. Coloraia negativ

Permite studierea:
- germenilor greu colorabili (Leptospira, Treponema)
- germenilor cu capsul (Klebsiella, pneumococ)
Colorani: suspensii coloidale (colargol, tu de China, tu de India)
Tehnica de lucru: germenii se suspensioneaz ntr-o pictur de colorant, care se ntinde cu o alt
lam pe toat lama. Uscare.
Examinare: cu microscopul optic, cu imersie
Se coloreaz fondul preparatului, bacteriile rmn necolorate

III. Preparate colorate

Permite studierea:
- morfologia germenilor
- dispoziia germenilor
- afinitatea tinctorial (colorabilitatea)
Etapele realizrii frotiurilor:
- etalarea
- uscarea la temperatura camerei
- fixarea (la flacr sau chimic)
Coloraii:
1. coloraii simple
- se folosete un singur colorant
2. coloraii compuse:
a. Coloraia Gram
Difereniaz bacteriile Gram pozitive de cele negative

Etape Gram + Gram-

violet de geniana 2 min.
mordantare (lugol) 2 min.
splare cu ap de robinet
decolorare cu alcool 96
splare cu ap de robinet
recolorare fuxin 2 min
splare cu ap de robinet
uscare
 Gram + Gram -
coci stafilococi, streptococi meningococ, gonococ
bacili Clostridii, antrax, bacilul difteric enterobacterii, Pseudomonas

b. Coloraia Ziehl-Neelsen
Se utilizeaz pentru evidenierea germenilor acido-alcoolo-rezisteni (ex. Mycobacterium,
Nocardia)
Etapele coloraiei:
1. fucsin fenicat (carbol fucsina) 2 min
2. splare
3. decolorare: alcool-acid 3x1 min
4. splare
5. recolorare cu albastru de metilen 4 min
6. splare, uscare
Examinare: cu obiectiv de imersie
Rezultatul coloraiei: pe fondul albastru al frotiului se observa bacili acido-alcoolo-rezisteni
3. Coloraii speciale
Coloraia Neisser
Se evideniaz corpusculii metacromatici Babe-Ernst la Corynebacterium spp.
Tehnica:
1. colorare cu amestec de colorani preparat extemporaneu (2 pri colorant Neisser A + 1 parte
colorant Neisser B) timp de 8- 10 minute
2. splare cu ap distilat
3. colorare cu crizoidin 5-10 secunde
4. uscare fr splare
Examinare: cu obiectiv de imersie
Rezultatul coloraiei: bacili cu corp bacterian colorat n galben, cu corpusculi colorati albastru si
cu dispozitie caracteristica