Spectrul de Absorbție

identificarea derivaților hemoglobinei

Ce este spectrul de absorbție?

Spectrul de absorbție al unui material este fracțiunea de

radiație incidentă absorbită de material într-o gamă de
frecvențe. Spectrul de absorbție este determinat în primul
rând de compoziția atomică și moleculară a materialului.
 Principiul metodei:
Hemoglobina este o proteină compusă dintr-o fracțiune pigmentară care contine fier (
numită hern), combinată cu o proteină - globina. Fierul
globina se găseşte în stare feroasă
Fe3+ permițând o combinație labilă a hemoglobinei cu oxigenul — oxi-hemoglobina
- responsabilă de transportul oxigenului în sânge. Alături de oxihemoglobină
(compus fiziologic) în unele stări patologice pot apare şi compuşi anormali, cum ar
fi:
Hemoglobină
 hemoglobina redusă
redusă
 carbohemoglobina
Methemoglobină
 Carboxihemoglobina
 cianhemo-globina.
Aceşti compuşi nocivi ai organismului pot fi detectați calitativ prin analiza
spectrală de absorbție, prin evidențierea spectrelor de absorbție caracteristice
acestora prin intermediul spectroscopului liniar.
 Materiale necesare:
1. Spectroscop liniar cu scala etalonată în lungimi de undă:
 respectă schema generală de alcătuire a spectroscoapelor, în
care elementul dispersiv, denumit prisma Amici şi constituit
dintr-un sistem de trei prisme, având drept scop mărirea
puterii de rezoluție cromatică (ce defineşte calitatea unui
spectroscop).
  Pentru functionarea spectroscopului sunt
necesare două surse de lumină :
S1, - sursa de lumina cu spectru continuu
situată lateral, realizând un spectru de control;
S2 - cu spectru continuu aşezată în dreptul
eprubetei cu solutia de cercetat, serveşte la
realizarea spectrului de absorbție al acesteia.
Prisma Amici
2. Stativ cu suport pentru
eprubete
3. Sânge heparinat
distilată
4. Apă distilată
Stockes
5. Soluţie Stockes
6. Soluţie de ferocianură de
potasiu sau clorat de potasiu
7. Dispozitiv special pentru
barbotarea gazului metan în
solutia de sânge (numai pentru
obtinerea
carboxihemoglobinei).
8. Receptor=ochiul.
Etapele de lucru:
I. Reglarea Spectroscopului

1. Se conectează spectroscopul la rețea

2. Se examinează lumina unei lămpiLămpi de sodiu

de sodiu

3. Se verifică corespondenţa liniei spectrale a sodiului, apărută în

câmpul ocularului, cu valoarea cunoscută din tabel, deplasându-
se eventual scala gradată până la realizarea corespondenţei.
 II. Realizarea spectrelor de absorbție
caracteristice hemoglobinei și derivațiilor săi.

1. Se realizează o soluţie de sânge hemolizat: câteva picături de sânge

heparinat sunt introduse într-un volum mare de apă distilată (aprox.
50 ml).
2. Se realizează succesiv soluţii de oxihemoglobină, hemoglobină
redusă, methemoglobină şi se aşează în stativul special construit,
observându-se, pe rând, intervalele de lungimi de undă
corespunzătoare spectrelor de absorbtie ale fiecarei soluții.
A. Spectrul Oxihemoglobinei

Spectru: oxihemoglobina prezintă două benzi întunecate

(de absorbție) caracteristice:
 în regiunea verde
verde (552-527 nm, max. la 542 nm)

 în regiunea galbenă (587-568 nm, max. la 578 nm)

B. Spectrul Hemoglobinei reduse
Oxihemoglobina fiind un compus foarte
foarte instabil poate ceda în
instabil
anumite condiții o parte din oxigen => hemoglobina redusă.
Culoarea sângelui devine în acest caz mai inchisă, cu o nuanta
albăstruie.
albăstruie

Spectru: este format dintr-o singură banda întunecoasă (banda lui

Stockes)
Stockes ce ocupă locul celor două benzi ale oxihemoglobinei.
C. Spectrul Methemoglobinei

Methemoglobina apare în sângele subiecților intoxicați

cu anumite medicamente ca: nitrați, clorați, sulfați,
acetanilidă, subnitrat de bismut, compuşi nitrobenzenici,
precum şi în methemoglobinemiile congenitale.
În cazul prezentei sale -> sângele este mai
maideschis
deschis

la culoare.
Spectru: methemoglobina prezinta patru benzi de
absorbtie, dintre care o bandă caracteristică situata
în roşu între 642-624 nm, cu max. la 633 nm
D. Spectrul Carboxihemoglobinei
Carboxihemoglobina apare în sângele celor intoxicati cu oxid de
carbon.
Spectru: prezintă două benzi
2 de absorbtie sensibile
apropiate celor caracteristice oxihemoglobinei galben şi
verde, (cu max la 570 nm şi respectiv la 539 nm).
Diferenta dintre oxihemoglobină şi carboxihemoglobină
se evindențiază cu reactivul Stockes: oxihemoglobina se
reduce în prezența acestuia la hemoglobină redusă, în
timp ce în cazul carboxihemoglobinei nu apare nici o
modificare de spectru. Hemoglobină redusă
 Vă mulțumesc!

Bibliografie: “Lucrări practice și demonstrații de Biofizică și Fizică medicală”, Editura

“Gr.T.Popa” , UMF Iași.