Microbiologie, Toxicologie Si Studii Sanitare (2005)

sursa de energie reziduuri din catabolism energie pentru deplasare catabolism
nutrieni
anabolism
reziduuri
Editura AcademicDirect 2005
componeni celulari
energie pentru cretere
nutrieni pentru cretere
Lorentz JNTSCHI
Lorentz JNTSCHI Nscut la 8 Ianuarie 1973 n Fgra, Braov. Absolvent n anul 1991 al Liceului Teoretic Radu Negru Fgra al seciei cu profil Mecanic, Liceniat n Informatic (1995), Chimie i Fizic (1997), Doctor n tiine Exacte, Specializarea Chimie Organic i Computaional (2000) la Universitatea Babe-Bolyai Cluj-Napoca, Master n Ameliorarea Plantelor i Controlul Calitii Seminelor i Materialului Sditor la Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar din Cluj-Napoca (2002). ef de lucrri la Universitatea Tehnic Cluj-Napoca. http://lori.academicdirect.ro
Editura AcademicDirect
Muncii 103-105, 400020, Cluj-Napoca Tel. 0264 401775, Fax 0264 592055 Redactor ef: Dr. Lorentz JNTSCHI Copyright 2005 dr. Lorentz JNTSCHI
Toate drepturile asupra lucrrii aparin autorului. Reproducerea integral sau parial a textului sau ilustraiilor este posibil numai cu acordul prealabil scris al autorului.
Colecia Didactica
Microbiologie, Toxicologie i Studii Fitosanitare
Prefa
Lucrarea Microbiologie, Toxicologie, i Studii Fitosanitare este organizat pe trei seciuni, aa cum rezult de altfel i din titlu. Primele dou seciuni, cele de microbiologie i toxicologie prezint conceptele i instrumentele specifice domeniilor biologie celular i microbiologie i respectiv biochimie i toxicologie, domenii de interfa ntre biologie, informatic, chimie i fizic. Progresul realizat n ultimii 100 de ani, cnd practic s-au cldit aceaste discipline, justific pe deplin apariia acestui material, care face o sintez a celor mai noi tehnologii i sisteme de investigare celular. Lucrarea este bine ilustrat, numai n aceast seciune a sa avnd 88 de figuri. Se pune accent pe dezvoltarea capacitilor intuitive, deductive i inductive n domeniu. A doua parte a acestei lucrri o reprezint contribuia personal a autorului n acest domeniu, cu referine directe la publicaiile personale. Aceast seciune refer lucrrile autorului de Doctorat n Chimie Organic susinut la Universitatea Babe-Bolyai din Cluj-Napoca n anul 2000 i de Masterat n Inginerie Agricol susinut la Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar din Cluj-Napoca n anul 2002. Trimiterile la literatura de specialitate sunt bine reprezentate, cu precdere n aceast a doua seciune, care refer rezultate comparative ale multor autori. Lucrarea conine, pe capitole, noiuni de Biogeochimie, Microbiologie, Biochimie, Toxicologie i Studii Fitosanitare. In anexa lucrrii este redat un mic (62 de termeni) dicionar englez-romn de termeni tehnici specifici domeniului tratat, pe care autorul i-a cules i folosit pe parcursul documentrii necesare realizrii prezentului material. Cluj-Napoca, 08.01.2005 Lorentz JNTSCHI
Lorentz JNTSCHI
Cuprins
1. Introducere ............................................................................................................................5 2. Biogeochimie ........................................................................................................................8 2.1. Biosfera..........................................................................................................................8 2.2. Biomasa i Biosfera .......................................................................................................9 2.3. Migrarea Elementelor ..................................................................................................10 2.4. Circuitul Substanelor n Natur ..................................................................................10 2.5. Ciclurile Biogeochimice ..............................................................................................11 2.6. Biocenoza.....................................................................................................................12 2.7. Ecologia Omului ..........................................................................................................12 3. Microbiologie......................................................................................................................17 3.1. Microbiologia i Biologia Celular..............................................................................17 3.2. Legturile Chimice ......................................................................................................19 3.3. Biologia Celulei ...........................................................................................................26 3.4. Genetic i Inginerie Genetic.....................................................................................29 3.5. Microbiologie Industrial ............................................................................................32 3.6. Ecologia Microbian....................................................................................................38 4. Biochimie ............................................................................................................................40 4.1. Chimia Celulei Vii .......................................................................................................40 4.2. Biomolecule .................................................................................................................41 4.3. Circuitul Informaiei ....................................................................................................42 4.4. Proteine ........................................................................................................................42 4.5. Metode de Analiz a Proteinelor .................................................................................43 4.6. Carbohidrai .................................................................................................................45 5. Toxicologie .........................................................................................................................46 5.1. Imunologie ...................................................................................................................46 5.2. Imunologie Clinic i Diagnostic Microbiologic.........................................................47 6. Studii Fitosanitare ...............................................................................................................48 6.1. Introducere ...................................................................................................................48 6.2. Aspecte de Sntate Public ........................................................................................49 6.3. Agrochimia Pesticidelor ..............................................................................................50 6.4. Chimia Pesticidelor......................................................................................................51 6.5. Proprietile Fizico-Chimice ale Pesticidelor ..............................................................52 6.6. Activitatea Biologic a Pesticidelor.............................................................................56 6.7. Metode Moderne n Studiul QSAR/QSPR ..................................................................57 6.8. Utilizarea Pesticidelor n Cultur Exemplu Aplicativ ..............................................61 6.9. Biotehnologiile i Agricultura .....................................................................................64 7. Anexa. Dicionar de Termeni Tehnici Englez-Romn........................................................69 8. Referine..............................................................................................................................71
1. Introducere
1.1. Organismul i Mediul Organismele ntrein un schimb permanent cu mediul nconjurtor iar legitile ce apar la interaciunea organismelor cu mediul sunt studiate de ecologie. Elementele mediului nconjurtor care exercit o anumit aciune asupra organismelor sunt numite factori de mediu: abiotici, biotici i antropogeni (in de particularitile mediului, prezena omului i activitatea lui de munc). Unii dintre factori au importan vital; acetia sunt factori limit. Factorii abiotici au ca surs evoluia. Astfel, n procesul dezvoltrii evolutive fiecare organism (specie) s-a adaptat la anumite condiii abiotice i anume: forma corpului le permite anumitor organisme deplasarea n ap, aer, sol; compoziia chimic a mediului este un factor determinant, i anume exist plante care cresc cu predilecie pe soluri saline iar altele au nevoie de foarte mult ap; temperatura mediului determin existena vieii i anume avem plante tropicale, plante de clim temperat i plante care cresc la temperaturi sczute (diferii arbuti); La aciunea acestor factori limit fiecare specie i are limitele extreme ale toleranei (minim, maxim, i optim). De exemplu oule de ascarid au tolerana de 12C (minim), 40C (maxim) i optim la 25C, alga arctic Sphaerella nivalis poate crete la temperatura de 34C iar alte alge cianofile vieuiesc n apa ghezerelor au temperatura de 85 sau mai mult. Unele organisme pot suporta schimbri considerabile din mediul nconjurtor numite euritopice, altele exist numai n limite restrnse de oscilaie a lor (valena ecologic diferit), numite stenotopice. Organismele care suport schimbri considerabile n ceea ce privete temperaturile se numesc euritermice iar cele care nu suport variaii considerabile de temperatur se numesc stenotermice. Relativ la rezistena la sruri, avem organisme eurigalice i respectiv stenogalice. Multe exemple de organisme stenotermice gsim printre animalele nevertebrate marine care suport ridicarea temperaturii pn pe la 30C i mai rar pn la 38C. Dintre speciile euritermice se pot meniona animalele de ap dulce care suport att nghearea bazinului i nclzirea la 41C-44C. Relativ la comportarea organismelor fa de lumin, de exemplu oul viermelui parazit fasciola larva lui miradiciu se poate forma numai la o iluminare puternic iar pentru oule de broasc lumina nu este o condiie necesar, dei accelereaz procesul de dezvoltare n timp ce oul unor specii de molute se segmenteaz numai la ntuneric, i lumina frneaz acest proces. Prezena oxigenului pentru organismele aerobe e condiia obligatorie de existen n timp ce pentru cele anaerobe este obligatorie lipsa lui. Atitudinea fa de condiiile externe se poate schima la unul i acelai organism n cursul existenei sale: oule de ascarid pentru dezvoltare necesit oxigen, ns pentru ascarida matur el este toxic iar larvele narilor se dezvolt n ap iar narii maturi (imago) triesc pe uscat. Temperatura la care se desfoare procesele activitii vitale la majoritatea organismelor este n limitele de la 40C la 45C i aa se explic caracterul srccios al vieii n regiunile arctice i n condiii aride. Pentru multe specii de animale i plante foarte important este ciclul anual de dezvoltare fotoperiodism (durata zilei lumin i regimul de temperatur). Supravieuirea la condiii nefavorabile (reducerea umiditii, temperatura nalt sau joas, lipsa hranei) la unele organisme are ca manifestare amorirea (imobilitate, ncetarea alimentrii, ncetinirea schimbului de gaze, scderea brusc a altor procese fiziologice). Astfel, temperatura ce provoac amorirea se ntlnete la unele insecte, peti i amfibii la care amorirea se instaleaz la coborrea temperaturii mai jos de +15C, la altele la +10C iar la unele doar n jurul lui 0C. Alte animale n stare de amorire nghea i la dezgheare se rentorc la activitatea vital. Cea mai profund amorire are loc n caz de anabioz. Anabioza este o stare a organismului n care procesele vitale sunt att de ncetinite nct lipsesc toate manifestrile vizibile ale vieii i se 5
Lorentz JNTSCHI
instaleaz la schimbarea temperaturii sau a umiditii. De remarcat c n stare de anabioz sporete rezistena organismului i la ali factori nefavorabili (hipoxie, aciunea substanelor toxice, a radiaiei ionizante). Factorii biotici ai mediului stabilesc relaii interspecifice i intraspecifice care sunt exprimate prin legturi de nutriie (lanurile trofice), concuren, antibioz i simbioz. Relaiile reciproce dintre organisme ce in de nutriie duc la formarea lanurilor trofice. Deoarece sursa de energie ce asigur existena tuturor organismelor este Soarele, prima verig a oricrui lan trofic este transformarea n procesul fotosintezei a energiei luminoase n energie chimic i formarea compuilor organici. Astfel, 0.1% din energia solar primit de pmnt e utilizat n fotosintez, trecnd n energie potenial a substanelor organice. Animalele erbivore disperseaz o parte considerabil a energiei i numai o parte din ea este folosit la construirea protoplasmei. Mai departe, animalele rpitoare se hrnesc cu cele erbivore. Dou exemple de lanuri trofice sunt: alge de plancton animale de plancton crustacee peti psri i mamifere piscivore; plante insecte psri insectivore psrile rpitoare; Fiecare lan trofic cuprinde de regul nu mai mult de 4-5 verigi, deoarece datorit pierderii de energie biomasa total a fiecreia din verigile urmtoare este de aproximativ 10 ori mai mic dect a celei precedente; aceast legitate se numete regula piramidei ecologice. Concurena i antibioza sunt dou noiuni des ntlnite n studiile ce privesc relaiile ce se stabilesc ntre organismele vii. Concuren se numesc relaiile ce se stabilesc ntre organismele aceleiai sau diferitelor specii care coexist n codiii identice ale mediului. De exemplu acridienii, roztoarele i copitalele ce se hrnesc cu ierburi i ntre ele se stabilesc relaii de concuren, n timp ce la plante apare concurena pentru lumin i umiditate. Antibioza este rezultatul aciunii inhibitoare a unui organism asupra altuia, de cele mai multe ori n urma eliminrii unor substane speciale de natur chimic divers cum sunt antibioticele. Sunt cunoscute antibioticele produse de ciuperci, bacterii i alte organisme. Productori activi de antibiotice s-au dovedit a fi ciupercile de mucegai, de exemplu Penicillinum care elimin penicilina, nociv pentru multe bacterii. Seria de derivai ai penicilinei, cu efect antibiotic este prezentat n figura urmtoare. OCH3 HO H H CH3 S H3C CH3(CH2)3SCH2CONH C CH3 H2C O N COOH O O Penicillic Acid Penicillin BT H2N H H H H CH3 S CH3 S CH(CH2)3CONH CH2CONH CH3 CH3 HOOC N N O COOH O COOK Penicillin N (Cephalosporin N, Adicillin) Penicillin G Potassium (Potassium penicillin G)
H H OCH2CONH O N S CH3 CH3 COOH
CH2CONH O N H H S CH3 CH2C6H5
Penicillin V (Penicillin phenoxymethyl, Phenoxymethylpenicillin, Phenoxymethylpenicillinic acid

H H CH2 CHCH2SCH2CONH O N S CH3
H2N CH3 CH2CH2C6H5 COO
Penicillin G (Benethamine, Benethamine penicillin G, Benetolin)

Cl CH3C CHCH2SCH2CONH O H H S CH3 CH3 N COOK
CH3 COOH
Penicillin O (Penicillin AT) 6
Penicillin S Potassium (Potassium penicillin S)
La antibioticele obinute din ciupercile de mucegai i bacterii se refer gramicidina, streptomicina, biomicina, tetraciclina i altele. Structurile i denumirile antibioticelor uzuale sunt redate mai jos: O
H3C OH H3C
CO N CH3 Cl
CH3 OH OH H3C O CH3 O CH3 O
H3C HO N O
CH3 CH3
O CH2 O CH3
OCH3 CH3 OH
CH3O CH2COOH Indomethacin (Argun, Artracin, Artrivia, Catolep, Confortid, Dolcidium, Durametacin, Elmetacin, Indacin)
CH3 CH3 HO H3C CH3COO H3C CH3O O O CH3 O OH OH O CH3 OH OH CH3 NH CH N N N CH3
CH3 Erythromycin (Erythromycin A, Abomacetin, Eritrocina, Staticin, Stiemycin Torlamicina)

H H HO CHCONH NH2 O N S CH3 CH3 COOH
Amoxicillin (Amoxycillin, Amocilline)

H H CHCONH NH2 O N S CH3 CH3 COOH
Rifampicin (Rifampin, Rifaldazine, Rifamycin AMP, Rifaprodin, Rifobac, Riforal, Rifoldin, Rifoldine, Rimactan)
HO HO CH2NH2 O H2N O O HOH2C HO HO O NH2 O CH2NH2 H H O H OH H HO NH2 NH2
Ampicillin (Ay 6108, Adobacillin, Alpen, Ampicina, Ampilar, Ampimed, Austrapen, Bonapicillin)
HO
CH3 H
N(CH3)2 OH CONH2
Neomycin (Mycifradin, Myacyne, Fradiomycin, Neomin, Neolate, Pimavecort, Vonamycin Powder V)
OH O OH Tetracycline (Deschlorobiomycin, Tsiklomitsin, Abricycline, Achromycin, Agromicina, Ambramicina, Ambramycin, Bio-Tetra, Cyclomycin, Hostacyclin)
OH
Lorentz JNTSCHI
CH2CONH2 H NH2COCH2 N H3C NH2COCH2CH2 CH3 H NH2COCH2 H H3C CH3 NC + Co N H3C CH3 CH2 CH2 N CO CH3 O O H H CH2OH N CH3 N N H CH2CH2CONH2 CH3 H CH3
CH2CH2CONH2
Cl HO
CH3
N(CH3)2 H OH CONH2
NH CH2
OH
OH O P
O H3C CH OH O OH Duodecibin (Dodecavite, Dodecabee, Embiol, Emociclina, Biomycin (Chlortetracycline, 7Fresmin, Hepavis, Hemomin, Hepagon, Hepcovite, Chlorotetracycline, Biomitsin) Megabion (Indian), Megalovel) Relaiile intraspecifice (ntre membrii populaiei) pot fi pozitive (provoac atracia reciproc i cooperarea), negative (agresive, ce condiioneaz dispersarea) i indiferente. n cadrul aceleiai populaii, divizarea duce la separarea pe subuniti, i anume individul, familia, reuniunea ntmpltoare a indivizilor i comunitatea. Iat cteva exemple n cazul vertebratelor: bancuri de peti, haite de lupi, turme de cerbi, colonii de psri. n comunitate n urma ciocnirilor se stabilete individul dominant i rangul fiecruia din subalterni.
OH
2. Biogeochimie
2.1. Biosfera Biosfera reprezint o parte a nveliurilor globului pmntesc (atmosfera, hidrosfera, litosfera) populat i transformat de fiinele vii. Biosfera este format din totalitatea organismelor vii mpreun cu habitatele lor. Biosfera este un nveli termodinamic cu temperatura de la +50C pn la -50C i presiunea n jurul unei atmosfere (101325 Pa); aceste condiii constituie limita vieii pentru majoritatea organismelor; limita superioar a biosferei este la 22 km deasupra nivelului mrii; n oceane, limita inferioar a vieii o constituie la adncimea de 10 km; n scoara terestr dur (litosfer) limita vieii este determinat de temperatura nalt i organismele ptrund pn la 4-5 km. Viaa n biosfer se menine datorit fluxului de energie radiant folosit de plantele verzi n fotosintez, cnd energia luminoas se transform n energie chimic. Transformrile complicate ale substanelor n organismele vii pe contul energiei chimice acumulate n procesul de fotosintez sunt de natur de natur biochimic i biogeochimic; practic toate substanele scoarei terestre n cantiti diferite i cu o diferit intensitate sunt antrenate n circuitul substanelor n natur i trec prin organismele vii. Structura elementar a biosferei o constituie biocenoza, i anume organisme cu diferite tipuri de schimb de substane. Bio(geo)cenozele ncorporeaz productorii de substane organice (fotosinteticii i hemosinteticii), consumatorii (care exist pe contul substanelor organice) i 8
reductorii (ce mineralizeaz substanele organice). n aceste procese se realizeaz transformarea energiei luminoase n diferite alte tipuri de energie. Transformarea substanelor, energiei i informaiei n biogeocenoze i n biosfer n ansamblu decurge continuu din momentul apariiei vieii, ceea ce a modificat esenial aspectul planetei. Studiul principiilor organizrii i reglrii transformrii substanelor, energiei i informaiei n natura vie este obiectivul ciberneticii biosferei. Toate organismele vii formeaz biomasa planetei. Ea constituie cca. 0.01% din masa scoarei terestre ns n pofida masei mici, rolul acestora n procesele ce se desfoar n biosfer este enorm. Organismele vii au transformat radical alte nveliuri ale planetei. Activitatea organismelor vii condiioneaz compoziia chimic a atmosferei, concentraia srurilor n hidrosfer, formarea unor roci i distrugerea altora n litosfer, formarea nveliurilor de sol i altele. 2.2. Biomasa i Biosfera n cadrul litosferei, organismele vii contribuie la crearea rocilor. Origine organogenic au: calcarurile ce se formeaz n mri din scheletele organismelor; diatomitul din resturile algelor monocelulare; crbunele, isturile combustibile, petrolul din resturile de esuturi moi de plante i animale, supuse transformrilor chimice; rezervele de substan organic din scoara terestr depesc de cteva ori cantitatea de substan organic vie; Organismele vii contribuie direct i indirect i la distrugerea rocilor: lichenii distrug direct stncile chimic (cu ajutorul fermenilor) i mecanic (rupnd buci de roci); apele naturale ce conin n stare dizolvat oxigen i bioxid de carbon de origine biogen i ali compui organici; datorit acestei compoziii capacitatea de dizolvare a apei naturale sporete cu mult i astfel se distrug multe roci; Materialele iniiale pentru formarea solului sunt straturile superficiale de roci iar sub aciunea microorganismelor, plantelor i animalelor se formeaz nveliul de sol. n compoziia organismelor se concentreaz elementele biogene; dup moartea plantelor i animalelor i descompunerea acestora aceste elemente trec n compoziia solului; ca rezultat n sol se acumuleaz elemente biogene i alte substane organice nedescompuse complet. n sol se gsete un numr colosal de microorganisme; ntr-o ton de cernoziom numrul de microorganisme se ridic la cifra de 25102, deci solul are o origine biogen. n sol sunt compui organici, anorganici i organisme vii i apariia i existena solului n absena biosferei este imposibil. Solul este habitatul multor organisme; din el plantele absorb substane nutritive i ap. Compoziia chimic a atmosferei este reglat de activitatea organismelor vii. Aerul uscat din stratul atmosferei de la suprafaa pmntului conine Azot (7810-2 g/l), Oxigen (0.210-2 g/l), Argon (910-3 g/l), i Bioxid de carbon (3310-5 g/l). Din cele 4 gaze care alctuiesc atmosfera numai argonul nu ine de activitatea vital a organismelor; consumul i furnizarea oxigenului, azotului i bioxidului de carbon este reglat de organisme. n straturile superioare ale troposferei din oxigen se formeaz ozonul; moleculele de ozon absorb razele ultraviolete care sunt nocive pentru via. Datorit stratului de ozon, care este rezultatul aciunii vitale a organismelor este posibil existena vieii pe uscat i n straturile superioare ale apelor oceanelor. n concluzie, viaa singur i-a creat mediul su de via. n cadrul hidrosferei, compoziia chimic a apelor naturale se formeaz direct i indirect sub aciunea organismelor. De asemenea, organismele vii i produsele activitii lor vitale contribuie la splarea unui ir de substane; aceste substane, apoi dizolvate n apele rurilor i apoi n apele marine se concentreaz de ctre multe organisme. De exemplu fierul ajunge n mare sub form de compui cu substanele organice; o parte din acest fier se depune pe cale biogen: se acumuleaz n scheletele echinodermelor, sarcodinelor i n algele marine. n concluzie biosfera include: 9
Lorentz JNTSCHI
Substana vie (totalitatea organismelor vii); Substana biogen ce se formeaz ca rezultat al activitii organismelor vii: o Gazele din atmosfer; o Rocile de origine organic: crbunele, petrolul, calcarul, etc; o Substana inert (aprut fr participarea organismelor vii) cum ar fi rocile expulzate i meteoriii.
2.3. Migrarea Elementelor Fiinele vii realizeaz migrarea elementelor n litosfer, hidrosfer i sol, schimbul de elemente ntre hidrosfer, sol i atmosfer, dintre uscat i mare, circuitul apei, carbonului, oxigenului i altor elemente ce intr n compoziia substanei vii. Pe suprafaa terestr nu-i o alt for chimic care s-ar caracteriza printr-o aciune mai continu (de zeci de milioane de ani) i de aceea mai puternic (dup rezultatele finale) dect organismele vii, luate n ansamblu. Anual pe pmnt se formeaz 41011 tone de substan organic. n biosfer practic atomii tuturor elementelor au trecut prin starea de substan vie. Elemente ca iodul, fosforul, sulful, potasiul aproape complet sunt concentrate n substana vie, circulnd continuu n organismele vii. Oxigenul i azotul atmosferei, tot acidul carbonic sunt de origine organogen. Rolul organismelor vii n biosfer este determinat de capacitatea lor de acumulare i transformare a energiei solare, de a se reproduce, asigurnd continuitatea activitii i acumularea i de a efectua reacii chimice cu o aa vitez care de cteva ori depete viteza reaciilor din natura nevie. 2.4. Circuitul Substanelor n Biosfer Toate organismele n procesul activitii lor vitale consum substanele din mediul nconjurtor. Fiecare specie de organisme le prelucreaz n felul su i le ntoarce n mediu n alt form. n aceast form substana nu poate fi folosit de indivizii aceleiai specii sau de organismele altor specii cu schimb de substane identic. Produsele activitii vitale a unor organisme se consum de altele care au caracter diferit al metabolismului i n cele din urm n lanul metabolic sunt antrenate toate speciile. Ca rezultat aceeai substan este folosit multiplu pentru formarea materiei vii. Un astfel de exemplu este faptul c nutriia organismelor heterotrofe depinde de cele autotrofe i necesitatea tuturor aerobilor de oxigen subliniaz dependena acestora de plantele verzi. Nici organismele autotrofe nu pot exista fr organismele heterotrofe cci cantitatea de substan neorganic necesar pentru sinteza substanelor organice de pe Tera este nelimitat. Drept surs de noi sinteze organice servesc produsele descompunerii substanelor organice sintetizate anterior. Aceste sinteze sunt realizate de unele organisme heterotrofe n principal de bacterii astfel c plantele verzi pentru sinteza amidonului necesit CO2 expirat n atmosfer de organismele vii. n concluzie rezult c n atmosfer se stabilete un echilibru ntre organismele heterotrofe i autotrofe. Mai mult, nutriia organismelor heterotrofe este ntotdeauna n dependen de alte organisme, ceea ce condiioneaz apariia unor lanuri trofice complexe. Astfel: Animalele i omul consum substanele organice sintetizate de plante; Plantele verzi n procesul fotosintezei utilizeaz bioxidul de carbon expirat de organismele vii; Bacteriile i fungiile descompun substanele organice. Toate organismele vii sunt antrenate n circuitul substanelor n natur. Produsele activitii vitale a unor organisme sunt necesare pentru existena altora. Astfel se creeaz unitatea continu a naturii vii i nevii. Procesul continuu de trecere a elementelor chimice dintr-un compus n altul din componena scoarei terestre n organismele vii, scindarea lor ulterioar n compui neorganici i elemente chimice i din nou trecerea n componena scoarei terestre se numete circuitul substanei i energiei. 10
Pe parcursul existenei biosferei componena specific a animalelor, plantelor i microorganismelor ce nfptuiesc acest circuit continuu s-a schimbat n repetate rnduri. ns ntotdeauna activitatea lor n comun meninea regimul biogeochimic necesar pentru existena vieii. Din totalitatea de elemente chimice cunoscute circa 40 sunt antrenate de organismele vii n circuitul activ. Aceste elemente sunt numite ciclice sau biogene. Pentru organismele vii o importan mai mare o prezint circuitul carbonului, azotului, oxigenului, hidrogenului, fierului, fosforului, sulfului, potasiului, calciului, manganului, siliciului ns dou cicluri identice ale aceluiai element nu exist. n fiecare ciclu nou apar cteva schimbri. 2.5. Ciclurile Biogeochimice Carbonul intr n compoziia tuturor compuilor organici. n scoara terestr coninutul lui nu depete 0.5%, n atmosfer dup mas este doar 0.008%, ns n masa uscat a animalelor se gsete circa 20% iar n cea a plantelor pn la 45%. De aceea substana organismelor vii la temperatur nalt se carbonizeaz. n aerul atmosferic exist permanent bioxidul de carbon eliminat de organisme n procesul activitii vitale. Furnizorii principali de CO2 n atmosfer sunt vulcanii i apele freatice saturate cu carbonai. Coninutul total de CO2 n atmosfer este de 2.11012 tone. Apa de mare conine circa 50 cm3 CO2 n fiecare litru, deci n oceanul planetar coninutul lui este de 161015 tone, de 8 ori mai mult dect n atmosfer. n procesul de fotosintez plantele verzi asimileaz carbonul pe care frunzele l primesc din aer sub form de bioxid de carbon i formeaz glucidele. n procesul respiraiei plantelor o parte din glucide se oxideaz i bioxidul de carbon nimerete din nou n atmosfer. Cea mai mare parte din glucide se acumuleaz n plante, n care se mai formeaz de asemenea proteine, grsimi, vitamine. Plantele sunt mncate de animalele erbivore i om. Astfel carbonul trece n organismul animalelor i omului. n timpul respiraiei glucidele se oxideaz. Pe contul energiei eliberate se desfoar toate procesele vitale iar bioxidul de carbon se elimin n atmosfer. Putrefacia se desfoar cu participarea bacteriilor de putrefacie. n urma acestui proces de asemenea are loc oxidarea carbonului cu formarea de CO2 ce se elimin n atmosfer. La descompunerea organismelor n lipsa oxigenului adic fr oxidare (de exemplu pe fundul bazinelor) se formeaz turba, crbunele de pmnt, petrolul i isturile. Omul le folosete drept surs de energie iar bioxidul de carbon eliberat nimerete din nou n atmosfer. Astfel un cerc se ncheie i ncepe un nou ciclu de antrenare a carbonului n compui organici, sintetizai de plante.
Ciclul sulfului n atmosfer ([1]) Azotul este un element obligatoriu din compoziia proteinelor. Masa principal de azot este coninut n atmosfer. ns plantele nu pot asimila azotul liber. El este trecut n compui organici 11
Lorentz JNTSCHI
de ctre bacteriile azotofixatoare. Compuii cu sulf existeni n atmosfer cuprind n principal H2S, SO2, SO3 i sulfai [2]. Ei intr n atmosfer pe o mare ntindere, prin activiti umane. Se estimeaz c aproximativ 65 milioane de tone de sulf pe an intr n atmosfer prin activiti antropologice, n principal la arderea combustibililor [3]. Principalele aspecte ale ciclului global al sulfului n atmosfer sunt redate n figura de mai sus. 2.6. Biocenoza Animalele vii nu sunt uniform repartizate pe suprafaa planetei. Exist ns anumite sectoare omogene n ceea ce privete repartiia speciilor. Un sector omogen conine o serie de biotipuri ale speciilor iar comunitatea de populaii ce formeaz un biotip se numete biocenoz. O biocenoz conine cteva specii care sunt factorii regulatori principali. Astfel, biocenozele terestre au ca specii regulatori principali plantele. Pe lng comembrii biocenozei (plante, animale, microorganisme) natura nevie ce le nconjoar (sol, ape subterane, straturile inferioare ale troposferei) formeaz biogeocenoza. Biogeocenoza este un sistem unic, dinamic si stabil. Dimensiunile unei biogeocenoze pot varia de la civa metrii pn la civa km i fiecare biogeocenoz se caracterizeaz prin: circuit specific al substanelor; transformarea energiei solare; productivitatea biomasei. n biogeocenoze exist 3 grupe de comembrii: sintetizatorii (productorii de substane organice) organisme autotrofe; consumatorii (transform substanele organice); distrugtorii (mineralizeaz substanele organice). O biogeocenoz este un sistem deschis i ntre toi componenii biogeocenozei se stabilete un echilibru dinamic homeostaza ecologic. Evoluia fiecrei specii de organisme se desfoar n condiiile unei anumite biogeocenoze i ca rezultat a aprut adaptarea reciproc a speciilor. Productivitatea biologic a biogeocenozei este un element important n caracterizarea sa. Se definete productivitatea primar ca biomasa plantelor ce se formeaz ntr-o unitate de timp. Omul creeaz agrobiocenozele artificiale (cpiile, ogoare, puni, livezi, plantaii forestiere, rezervoare de ap). Acestea sunt cu mult mai productive dar nu pot exista fr ngrijirea omului. Mai mult, spre deosebire de biogeocenozele naturale, agrobiocenozele artificiale se caracterizeaz prin omogenitatea componenei specifice. Este important de reinut c folosirea neraional a resurselor naturale duce de multe ori la dereglarea echilibrului n comunitile biologice. 2.7. Ecologia omului n cadrul ecologiei omului se studiaz relaiile cu mediul nconjurtor (condiiile biotice, abiotice i sociale). Aciunea mediului natural asupra omului este mai mult sau mai puin estompat prin folosirea de mbrcminte, foc i construcia de locuine. Mediul nconjurtor din imediata vecintate este modificat prin construcii locative, gospodreti, industriale, plantaii de arbori, terenuri agricole, funcionarea ntreprinderilor industriale i agricole i transportului. Spre deosebire de orice alt organism viu, ce populeaz doar un anumit areal, ce ine seama de anumite condiii naturale, omul s-a stabilit cu traiul pe toat planeta, avnd astfel cel mai ntins areal cosmopolit. Interaciunea omului cu factorii biogeografici i antropogeni ai mediului se face la diferite moduri de organizare: organismic, populaional, specific, biocenotic, i biosferic. La nivelul organismic se desfoar procese ontogenetice i fiziologice; pentru realizarea lor omul necesit anumite condiii de hran, ap, lumin, temperatur. 12
Reaciile individuale ale organismului la factorii mediului se evideniaz n condiiile provinciilor geochimice (n care se constat insuficiena sau surplusul unor elemente chimice, ce provoac boli endemice (locale). De exemplu, insuficiena de Co se rsfrnge negativ asupra sintezei cianocobalaminei (vitamina B12); are ca efect diminuarea metabolismului nucleic i micorarea capacitilor de adaptare la factorii nefavorabili ai mediului. Alt exemplu, insuficiena de Cu duce la diminuarea metabolismului lipidic i ncetinirea maturizrii eritrocitelor n timp ce surplusul de Mo favorizeaz dereglarea metabolismului purinic, de care este legat sinteza acidului uric; acesta, fiind un compus puin solubil se depune n articulaii provocnd o boal asemntoare cu podagra, denumit podagr endemic molibdenic. La un surplus de Sr se poate declana condrodistrofia, ce duce la nanism, picioare i mini scurte, brahidactilie iar n provinciile cu insuficien de iod este rspndit gua endemic, ce ine de mrirea glandei tiroide. Reacia individual a organismului se manifest cel mai bine la schimbarea mediului de trai, i mai ales atunci cnd omul nimerete n condiii extreme de mediu. Adaptarea (aclimatizarea) este condiionat de rezervele fiziologice ale organismului. Astfel, la schimbarea temperaturii mediului ncep s funcioneze mecanismele de termoregulare. La trecerea ntr-o nou zon orar sau la urcarea n muni pentru aclimatizare se cer uneori cteva zile iar mutarea n alte condiii climatice uneori sptmni sau chiar luni sau s nu se stabileasc deloc. La nivel populaional specific se poate spune c n epoca paleolitului superior (n zorii istoriei umane) s-au format principalele trsturi de ras, ce poart un caracter adaptiv.
Era paleozoic i cenozoic
Caricaturi ale evoluiei umane (Vanity Fair Newspaper, 1920) Astfel, pielea ntunecat a rasei ecuatoriale mpiedic trecerea radiaiei UV, prul crlionat prin neaderarea lui strns la pielea capului servete drept barier pentru razele solare, buzele subiri, tietura ngust a ochilor, epicantusul rasei mongoloide s-au format drept adaptare la clima rece i uscat a stepelor i pustiurilor de N-V, unde praful i frigul pot vtma membrana mucoas a ochiului, forma plat a feei (din experiment) micoreaz pericolul suprarcirii n timp ce pielea 13
Lorentz JNTSCHI
alb a rasei europoide s-a format n rezultatul acomodrii la clima nordic unde insuficiena de calciferol n hran duce la rahitism. Sub aciunea razelor solare, aceast vitamin se poate sintetiza n grosimea pielii, ns nu e necesar ca pielea s fie aprat de pigment ntunecat. Trsturile adaptive sunt reaciile care apar convergent n diferite populaii ce se gsesc n condiii de trai identice independent de rudenia lor genetic sau apartenena la ras. Astfel, un complex apropiat de trsturi caracteristice pentru zona tropical se observ la populaia europoid din India, aborigenii din Australia i negroizii din Africa i analog, un tip adaptiv arctic ntlnim la saami europoizi, nenii mongoloizi, ciuccia, eschimoii. Dac trsturile de ras s-au format n zorii istoriei umane, tipurile adaptive se formeaz pe tot parcursul istoriei umanitii. La nivelul biocenotic, ca parte a biocenozei, omul intr n anumite relaii cu alte organisme. Cu unele specii ntreine o legtur permanent i strns ntruct el singur reprezint o biocenoz, n care vieuiesc bacterii-simbioni (bacilul coli componentul florei intestinale normale) i endo- i ectoparazii. Tot mediul ce nconjoar pe om constituie practic fie cenoze (biocenoze) artificiale create de om fie biogeocenoze naturale modificate ntr-o oarecare msur de activitatea omului iar biogeocenoze absolut neschimbate nu mai exist practic pe planet. n aceste biogeocenoze (numite i antropobiogeocenoze) decurge viaa, desfoar activitatea gospodreasc i de toate zilele, de acestea in factorii de sntate i restabilire a capacitii de munc. Din punct de vedere medicobiologic biogeocenozele se mpart n 3 grupe: biocenoze naturale, nc puin supuse aciunii omului, comuniti steti, i comuniti oreneti i industriale.
Biocenoz natural Biocenozele naturale se caracterizeaz printr-o varietate mai mare de plante i animale i se ntlnesc n diferite zone landaftogeografice i n aceast privin reprezint o mare varietate (pustiuri arctice, tundra, silvotundra, taigaua, pdurile mixte i de foioase, stepa, semipustiurile, pdurile subtropicale, pdurile musonice i mixte. De acestea ine existena bolilor cu focalitate natural; aceste focare puteau s existe n natur pe parcursul mai multor secole independent de om, ns intervenia omului n focarele strvechi ale bolilor este deseori cauza izbucnirii morbiditii. Transformarea naturii poate duce la stingerea i lichidarea focarelor, propagarea infeciei n afara focarelor primare, sau la apariia focarelor noi, ce in de activitatea omului. Astfel au fost lichidate focarele naturale ale pestei n Europa i Transbaicalia, focarele leishmaniozei n Turcmenia; pe de alt parte nlocuirea landafului de pdure n zona central a Rusiei prin lanaft de fnee de cmp a generat modificarea componenei roztoarelor murine i apariia unor noi focare 14
de tularemie. n Africa lrgirea reelei anurilor de irigare a dus la apariia unor noi focare de schistomiaz, deoarece s-a mrit suprafaa biotipurilor populate de molute, care sunt gazdele intermediare ale trematodului; pe teritoriile pustiurilor din trecut n-au fost nregistrate mbolnviri locale de ascaridoz ntruct din cauza insuficienei de umiditate din sol oule de ascarid nu supravieuiau; n rezultatul construciei sistemelor de irigare clima n aceste locuri s-a schimbat, apropiindu-se de cea subtropical umed, i concomitent au aprut focarele locale de ascaridoz. Febra galben se ntlnea iniial doar n Africa Central i de Vest, unde era boala primatelor, transmis de narii ce vieuiau n jungl; ulterior, cnd una din speciile de nari de transmiteau virusul febrei galbene, Aedes Aegypti, a nceput s trisc n apropierea locuinelor omeneti, devenind n rezultat o specie sinatrop (din greac: sin = mpreun, antropos = om). Astfel au aprut focare intraoreneti de febr galben. Odat cu Europenii i robii negri au ptruns n america tropical agentul patogen al febrei galbene i narul Aedes Aegypti, ceea ce a generat izbucnirea mai nti a focarelor intraoreneti iar apoi i a celor secundare suburbane; n cele secundare gazde ale agentului patogen s-au dovedit a fi maimuele americane (cu nasul lat), iar vectori speciile americane de nari. Comunitile steti (agrocenozele) se caracterizeaz prin resturi nensemnate de plante i animale slbatice, teritorii imense ocupate de plante de cultur, un numr mare de animale domestice (componena specific a acestora este limitat). Componena specific i particularitile activitii gospodreti contribuie la rspndirea unor specii de zoonoze (echinococoza i tularemia) i altele. n rile cu clim cald i agricultur irigat contribuie la rspndirea biohelmiilor (schistosomozelor). Activitatea gospodreasc n aceste cenoze are ca scop sporirea recoltei culturilor agricole i a productivitii animalelor domestice.
Agrocenoz Ocrotirea mediului nconjurtor trebuie s se orienteze la folosirea raional a ngrmintelor chimice, pesticidelor, efectuarea msurilor profilactice pentru ntmpinarea zoonozelor i helmiilor. Cenozele oreneti i industriale (urbanocenozele) se caracterizeaz prin aglomerri mari de oameni, suprafee nensemnate de vegetaie plantat artificial, faun srccioas, poluarea frecvent a mediului ambiant cu deeuri industriale i de transport. Poluarea mediului i factorii industriali pot fi cauza bolilor profesionale i alergice i a traumatismelor; promiscuitatea, factorii profogeni, ritmul ncordat al vieii oreneti, hipodinamia creeaz premisele pentru bolile de nervi, psihice i cardiovasculare. Sarcina medicosanitar n urbanocenoze const n prentmpinarea polurii mediului nconjurtor, introducerea n producie a circuitelor nchise, fr deeuri, combaterea zgomotului, traumatismului rutier i de producie, crearea zonelor verzi n orae i n jurul lor, propagarea modului de via sntos, culturii fizice i sportului. 15
Lorentz JNTSCHI
Urbanocenoz Cosmocenozele sunt un tip special de biocenoze, care a aprut odat cu navele cosmice. Biologia cosmic este cea mai tnr ramur a tiinelor biologice, care studiaz aciunea factorilor spaiului cosmic asupra organismelor terestre. Una din sarcinile biologiei cosmice este i studierea formelor posibile de via extraterestre.
Instalarea primei structuri (din 4) n interiorul laboratorului U. S. A. de pe Staia Spaial Internaional (10 Decembrie 1997) Problema principal este crearea sistemelor nchise ce asigur existena omului n spaiul cosmic. Posibilitatea principal de creare a unui spaiu nchis se bazeaz pe constatarea c substanele consumate de organismele mature sunt eliminate n mediul nconjurtor n strict conformitate cu cantitatea consumat. ntrebarea principal este aici cum pot fi reintroduse n circuit produsele activitii vitale. 16
n condiiile biocenozelor terestre circuitul substanelor se realizeaz datorit activitii a 3 grupe de organisme (productori, consumatori, distrugtorii). Sarcina habitatului ntr-un sistem artificial nchis se reduce la crearea unui circuit asemntor al substanelor; ntruct la baza circuitului substanelor stau dou procese diametral opuse (sinteza autotrof a substanelor organice i scindarea acestor substane). Revenind la cosmobiocenoze, n nava cosmic pe lng om mai trebuiesc introduse i aceste dou grupe de organisme; sinteza substanelor organice cu acumularea n ele a energiei poate fi nfptuit de organismele fotoautotrofe (plantele superioare, algele unicelulare). Hrana animal (aminoacizii metioninei i cistinei) poate fi asigurat prin introducerea crustaceelor de plancton (artemiile, dafniile) sau a speciilor de molute fr cochilie. La baza metodei biologice de mineralizare a deeurilor organice pot fi puse procesele de oxidare aerob n reactoarele utilizate pentru purificarea apelor de menaj. n prezent se creeaz noi metode de mineralizare, ntruct astfel de produse finale s corespund mai bine necesitilor plantelor. n timpul zborului cosmic omul suport aciunea diferiilor factori: vibraii, suprasarcini, imponderabilitate. Unul dintre efectele nedorite ale zborului care trebuiesc compensate este c n stare de imponderabilitate greutatea corpului este nul, presiunea hidrostatic a sngelui n vase se niveleaz, sngele este repartizat uniform n toate prile corpului i starea de repleiune sangvin a prii superioare a trunchiului este mai mare i se intensific procesul de eliminare a lichidelor din organism precum i a ionilor de Na+ i Ca2+.
3. Microbiologie
3.1. Microbiologia i Biologia Celular Toate organismele vii sunt compuse din celule. Cele cinci caracteristici importante ale celulelor sunt: auto-hrnirea sau nutriia (funcia main); auto-replicarea sau creterea (funcia de codificare); divizarea (formarea unei noi celule iar sporificarea este parte a propriului su mod de via);
Spor Divizare Autoreplicare (cretere)
Mediu
Celula
Auto-hrnire (nutriie)
Comunicarea cu alte celule prin semnale chimice 17
Lorentz JNTSCHI
Celula originar Nou cod Evoluie (apariia de modificare n codul genetic) transmiterea de semnale chimice (comunicarea cu alte celule); evoluia (schimbri care duc la apariia unor noi proprieti biologice). Aparent, celulele par a nu respecta legile fizicii fiind structuri cu grad nalt de ordine ntr-o lume n care trendul general este de a deveni mai puin ordonat n timp. ntrebarea care se pune este "Cum reuesc acestea s menin ordinea?" i rspunsul: prin generarea continu de energie i o parte din aceasta este folosit pentru a menine structura celulei. Generarea energiei este o caracteristic important a metabolismului. Alte caracteristici ale metabolismului sunt reaciile chimice prin care se sintetizeaz compui i se formeaz structura celulei. Reaciile chimice sunt catalizate de ctre molecule de proteine numite enzime. Enzimele trebuie s posede o anumit structur pentru a funciona; astfel, ele trebuie s nglobeze un set de informaii (gene) care codific structura fiecrei proteine din celul. Setul de instruciuni este codificat n DNA, materialul genetic al celulei. Exist de asemenea un sistem de transformare, RNA, care convertete informaia codificat n DNA n proteine. Cteva tipuri de molecule RNA (RNA mesager, RNA ribozom i RNA de transfer) sunt eseniale pentru acest proces. Rezultatul biosintezei este creterea celulei. Pentru ca celula s se replice, ea trebuie s sintetizeze mai mult de 1000 de molecule diferite de proteine. Celulele au informaie genetic pentru a produce aproximativ 3000 de proteine diferite iar genele pe care aceasta le conin sunt cele care sunt capabile s codifice proteinele cele mai utile pentru supravieuire i cretere n condiiile de mediu existente. Celula trebuie de asemenea s i copieze fidel informaia genetic atunci cnd o pune ntr-o nou celul. Greelile n copiere sunt fcute ocazional; aceste mutaii sunt n general duntoare i ucid celula. Oricum, ele asigur un mecanism prin care celula achiziioneaz noi proprieti. Acest fenomen apare dac proteina codat de gena mutant catalizeaz o reacie diferit fa de proteina originar. n condiii favorabile de mediu, aceast celul mutant poate avea un avantaj selectiv (care const n faptul c se poate replica mai rapid dect competitorii). Principiul seleciei naturale este subliniat de teoria evoluiei a lui Darwin. Sunt dou tipuri structurale de celule: celulele procariote sunt relativ simple n structur; eucatiotele n schimb sunt mai complexe n sensul n care conin organite, care sunt compartimente pentru funcii metabolice speciale. Aceste organite includ un nucleu adevrat, mitocondrii i cloroplasma. n plus, biologii opereaz cu viruii, care sunt entiti necelulare care folosesc instrumentul metabolic al celulelor pentru a se replica. 18
Dihotomia ntre tipurile structurale de celule nu red cu fidelitate evoluia relaiilor dintre organisme. Analiza secvenelor de nucleotide ale RNA ribozom au artat c exist dou grupuri de procariote: Archaea i Bacteria. Aceste grupuri nu mai sunt acum apropiate unul fa de altul aa cum sunt ele apropiate de Eucaria. Microorganismele triesc n habitate n care creterea lor este afectat de interaciunile cu populaiile altor microbi ca i de proprietile fizico-chimice ale mediului. nelegerea interaciunilor ecologice n comunitile microbiene este esenial n stabilirea rolului microbilor n natur. Este dificil de studiat microbii n natur. De aceea, tot ceea ce cunoatem despre microbi s-a nvat de la culturile pure. Originea vieii
Archaea Eucaria Bacteria
Plante i animale
Evoluia relaiilor dintre organisme Cteva specii de microbi pot avea efecte devastatoare asupra omului, cauzndu-i boli infecioase. Un mare succes al microbiologiei a fost controlul bolilor infecioase letale n rile n curs de dezvoltare. Oricum, aceste boli sunt nc importante cauze de deces n zonele mai puin dezvoltate ale lumii. Lsnd aceste aprecieri asupra anumitor specii, cea mai mare parte a microorganismelor sunt benefice. Funcionarea corespunztoare a biosferei i a solului depinde de activitatea acestora. De mult mai mare impact asupra oamenilor se bucur industria productoare de antibiotice, de produse alimentare, compui organici i biomas. O descoperire recent o reprezint industria biotehnologiilor care folosete microbii ca fabrici pentru a produce proteine din gene de plante i animale prin introducerea lor n bacterii ADN. Microbii sunt de asemenea importani n agricultur i biodegradarea alimentelor. Microbii au fost descoperii acum 300 de ani de microscopistul van Leeuwenhoek dar cea mai mare parte a descoperirilor din microbiologie au fost fcui n ultimii 100 de ani. Louis Pasteur i Robert Koch sunt doi lideri n dezvoltarea disciplinei. Printre alte multe realizri, Pasteur a contrazis teoria generaiilor spontane definitiv. Foate important este demonstraia c experimentele cu microbi sunt reproductibile i nu este o consecin a apariiei unei noi viei. Koch a descoperit criterii ferme pentru a demonstra c o boal specific este cauzat de o bacterie specific (postulatele lui Koch). Obinerea culturilor pure a fost esenial pentru succesul criteriilor lui Koch i utilizarea culturilor pure rmne i azi un instrument esenial n studierea bolilor infecioase. 3.2. Legturile Chimice Toate formele de via conin tipuri similare de molecule i muli dintre aceti compui biochimici nu sunt gsii n materialele care nu sunt de natur biologic. Chiar dac ele sunt unice, moleculele celulare respect legile fizicii i chimiei. Aceste molecule sunt compuse din atomi ai a 92 de elemente naturale de pe pmnt i doar 6 dintre acestea sunt componente majore ale biomasei (H, C, N, O, P, S). Carbonul este cel mai important dintre acestea. El poate stabili legturi chimice cu ali atomi n mai multe moduri pentru a produce molecule complexe i diverse. Atomul const dintr-un nucleu care conine protoni ncrcai pozitiv i neutorni i un numr de electroni ncrcai negativ care orbiteaz n jurul nucleului. Punerea n comun de electroni constituie o legtur chimic. Dac electronii sunt pui n comun n mod egal, legtura este covalent i este una relativ puternic. Legturile covalente pot fi formate sau rupte n celule doar de reacii specifice catalizate de enzime. Cteva alte interaciuni necovalente sunt de asemenea biologic importante n determinarea formei moleculelor, sau n legarea macromoleculelor de ali compui. 19
Lorentz JNTSCHI
Legturile de hidrogen sunt formate prin atracia spontan a atomilor ncrcai slab pozitiv de atomii ncrcai slab negativ din molecule.
CH2 HC
C O H N
H H O H H O O H O H H
N H O C CH2 CH2 C O H N N H O C CH H2C
H Legturi de hidrogen ntre aminoacizi n lanurile proteice Legturi de hidrogen ntre molecule de ap O legtur simpl de hidrogen este mult mai slab dect o legtur covalent, dar cnd un mare numr de legturi de hidrogen sunt formate n sau ntre molecule, acestea pot avea un efect semnificativ. n legturile hidrofobe molecule care intr n contact cu apa formeaz o asociere. H H N H O N O H N N N N H N N H N N N H N H O H N N N H O H H
Guanin Timin Adenin Legturi de hidrogen ntre bazele din DNA Natura vieii pe pmnt este determinat nu numai de chimia atomului de carbon ci i de proprietile de solvent ale apei. Cea mai mare parte a greutii unei celule (70 - 90%) este format de ap, i reaciile biochimice nu au loca dac nu exist o cantitate suficient de ap. Moleculele de ap sunt slab polare (tendina ca sarcinile + i s se separe n molecule).
Citozin
O H H
Molecula de ap Consecinele acestei polariti sunt: moleculele biochimice polare importante (ca proteine, acizi nucleici, moleculele mici folosite ca nutrieni i elemente de construcie) sunt solubile n ap; moleculele nepolare (ca lipidele) nu sunt solubile n ap i formeaz agregate sau se aglomereaz. Agregatele de lipide formeaz bariere ca membranele i afecteaz micarea moleculelor polare nspre sau n afara celulelor. Macromoleculele formeaz structura celulei, catalizeaz reaciile metabolice i conin codul informaiei de replicare a celulei. Sunt 4 tipuri importante de macromolecule celulare: acizi nucleici, proteine, polizaharide i lipide. Fiecare molecul este un polimer compus dintr-o secven de blocuri constructive legate prin legturi covalente. Este important de cunoscut caracteristicile fiecrui bloc constructiv pentru fiecare tip de macromolecul. 20
n funcie de natura lanului macromolecular polimerii se mpart n: carbocatenari (cu lan alctuit numai din atomi de carbon: policlorur de vinil, polietilen, polibutadien); heterocatenari (lan alctuit i din ali atomi: oxigen, azot, sulf, siliciu pe lng cei de carbon: poliamide, poliuretani, poliesteri, polizaharide). Dup tipul reaciilor prin care se obin polimerii sintetici, ei se clasific n: polimeri obinui prin reacii de policondensare; polimeri obinui prin reacii de poliadiie. Polimerizarea a dou specii diferite A i B se numete copolimerizare i se poate efectua dup una din schemele: alternativ: ABABABABABAB ntmpltor: ABBAABBBABAAB bloc: AAAAAABBBB B B
A A A A A A A A B B B B
B ramificat: Polimerul obinut prin copolimerizare prezint numai n cazuri rare o alternare regulat a celor doi monomeri i, mai mult, raportul de monomeri n caten nu corespunde de obicei cu raportul de monomeri din amestecul de reacie. Din acest caz copolimerii sunt n general substane amorfe. n acizii nucleici i proteine secvena blocului constructiv variaz de la o molecul la alta; aceast secven este cea care determin activitatea biologic a macromoleculei n celul. Polizaharidele sunt lanuri de carbohidrai variind n lungime de la 100 la cteva mii de uniti. Carbohidraii coninnd 4-7 atomi sunt cei mai frecveni n celule. Molecule diferite de carbohidrai pot fi formate prin substituia gruprilor chimice de pe structura de baz a moleculei de zaharoz i de asemenea prin stereoizomerism, care este obinut prin variaia spaial a gruprilor OH n lanul carbonic. Unitile de zaharoz n polizaharide sunt legate ntre ele prin legturi glicozidice. Molecule diferite de polizaharide pot fi formate prin variaia orientrii legturii glicozidice, variaia monomerului carbohidrat sau prin folosirea a 2 sau mai muli monomeri ntr-o polizaharid. Cele mai importante polizaharide sunt celuloza, glicogenul, amidonul i peptidoglicolul.
CH2OH H O H OH H H OH OH H
CH2OH H HO O H OH H
H OH Celobioza, structura repetitiv n molecula de celuloz
Parte din structura glicogenului (G glicogenina, A, B, C izomeri de structur ai glucozei) primele 5 inele din totalul de 12 [4] 21
Lorentz JNTSCHI
Glicogenina (proteina situat n centrul structurii de glicogen) CH2OH CH2OH

CH2OH H H O O H OH H H O H
H H O O H OH H H H H3C O H HC O O C OH H O H OH H H H O H
HN C O
HN C O
CH3 CH3 H H Glucoza, structura repetitiv n molecula de glicogen i amidon [5], i acizii N-acetil glucozamin i N-acetil muramic ce intr n componena peptidoglicolului membran de lipide peptidoglican citoplasm O NH O NH Membrana celular i Uracil, a patra baz n RNA Lipidele sunt componeni ai membranelor, bariera permeabil a celulelor. Natura lor chimic le recomand pentru aceast folosin. Acizii grai pe care acestea i conin au n componen grupri hidrofobe care previn ca moleculele ncrcate electric sa traverseze membrana. Sunt dou tipuri de acizi nucleici (DNA i RNA). Amndou sunt compuse din blocuri constructive de nucleotide. Unele nucleotide au de asemenea i alte funcii n metabolismul energetic (ATP). Toate nucleotidele conin un zahar (glucoz, fructoz, .a.), un fosfat, i o baz azotat. Cei doi acizi nucleici difer unul de cellalt prin zaharul din blocul constructiv. n amndoi, polimerul se formeaz prin legturi covalente ntre zahar i gruprile fosfat ntre nucleotidele adiacente. Acest cuplaj zahar-fosfat este regula general pentru toate moleculele de acizi nucleici. Trei baze sunt comune pentru RNA i DNA: adenina, guanina i citozina. A patra baz n RNA este uracil iar n DNA este timina. DNA conine puni duble zahar-fosfat care sunt legate ntre ele prin legturi de hidrogen ntre baze prin perechi de puni. Aici exist preferin pentru perechi de baze n formarea legturilor
22
de hidrogen. Cele 4 baze se combin i compuii rezultai se mpart n dou clase: purine i pirimidine. Purina este format din asocierea adeninei i timinei n timp ce pirimidina se formeaz din guanin i citozin. Dou puni de DNA au o secven complementar. Dac se tie o punte, se poate construi secvena celeilalte prin respectarea regulii de perechi. Acest principiu furnizeaz celulei o cale comod pentru a copia cu acuratee secvena DNA, care este informaia genetic. RNA difer de DNA prin faptul c sunt n mod obinuit formate din puni simple. Mai mult, moleculele de RNA au cel mult cteva mii de nucleotide, n timp ce DNA poate conine milioane de nucleotide. Sunt 3 clase de RNA, care sunt importante n conversia secvenei de nucleotide DNA din gen n secven de aminoacizi n protein. Proteinele sunt iruri de aminoacizi legate prin legturi peptidice covalente. Legturile se formeaz ntre o grupare amino a unui aminoacid i o grupare carboxil a unui alt aminoacid. Sunt 20 de aminoacizi, care difer prin proprietile chimice ale lanurilor lor (tabelul 1). Caracteristicile prilor de molecul de protein (de exemplu hidrofobicitatea i hidrofilicitatea) sunt determinate de tipurile de aminoacizi care se afl n acea parte de molecul. Diversitatea de proprieti n ceea ce privete aminoacizii este realizat practic de un numr nelimitat de proteine care pot fi construite prin variaia secvenei de aminoacizi. Tabelul 1. Cei 20 de aminoacizi eseniali hidrofob hidrofob
moderat hidrofil carbohidratul poate fi legat covalent de gruparea sa NH
hidrofob
hidrofob
23
Lorentz JNTSCHI
gruparea liber amino face ca el s fie bazic i hidrofil
puternic bazic i hidrofil
gruparea liber carboxil l face acid i hidrofil gruparea liber carboxil l face acid i hidrofil
hidrofob
oxidarea gruprii sale sulfhidril (-SH) poate lega dou Cys (S-S)
Bazic i hidrofil provoac torsiuni n lan
24
absent n cea mai mare parte a proteinelor din plante
foarte mic i amfil, poate exista n orice vecintate
gruparea OH l face moderat hidrofil foarte hidrofob
carbohidratul se poate lega covalent cu gruparea sa -OH carbohidratul se poate lega covalent cu gruparea sa -OH
Proteinele nu exist ca polimeri liniari. Mai mult, ele capt forme foarte diferite. Biochimitii definesc 4 nivele ale structurii proteice. Structura primar este dat de secvena de aminoacizi. Structura secundar refer formarea unei spirale sau a unei foi de irul de polipeptide ca rezultat al legturilor de hidrogen ntre atomi. O pliere i mai mare care este realizat de legturile covalente sau necovalente (-SH) se numete structura teriar. n cele din urm, mai multe polipeptide se pot asocia pentru a forma o protein funcional. Aceste aranjamente formeaz structura cuaternar. Proprietile de pliere sunt eseniale n stabilirea formei proteinei i selecia moleculelor care pot ataa prin legturi covalente sau necovalente de aceasta. Demonstraia acestui fapt se face pe cale experimental, cnd prin deplierea structurii teriare, folosind cldura, acizi sau baze (denaturarea unei proteine) proprietile sale originare (n special activitatea biologic) sunt diminuate sau eliminate. Astfel, aceasta i pierde calitatea de a cataliza o anumit reacie sau capacitatea de a forma structura celulei. 25
Lorentz JNTSCHI
Cnd 4 entiti diferite sunt legate de un atom de carbon, acele molecule pot exista ca stereoizomeri. Aceste molecule au aceeai formul structural dar una este imaginea n oglind a celeilalte. La zaharuri i aminoacizi, aceste forme se numesc D i L (de la dextrogir - rotete planul de polarizare al luminii spre dreapta i levogir - rotete planul de polarizare al luminii la stnga). Zaharurile D predomin n sistemele biologice iar formele L predomin n aminoacizi.
Rotaia luminii polarizate de ctre stereoizomeri 3.3. Biologia Celulei Celulele microbilor sunt prea mici pentru a fi vzute direct. n consecin, pentru studiul morfologiei celulare, sunt utilizate microscoapele.
Microscop optic Microscop electronic Microscoapele optice sunt utilizate frecvent pentru a determina morfologia celulei. O varietate de tehnici optice (cmp luminos, fluorescen de contrast de faz) au fost perfecionate pentru aplicaii specifice i sunt folosii marcheri pentru sporirea vizibilitii i mrirea contrastului unor structuri anume ale celulei. Limita de rezoluie pentru microscopul optic este de circa 0.2 m. Cea mai important tehnic de marcare este marcarea Gram, deoarece difereniaz organismele pe baza structurii peretelui celular. Rezult astfel dou grupuri de bacterii: Grampozitive i Gram-negative. Detaliile fine ale structurii celulare se pot decela cu ajutorul microscopului electronic. Att celulele de Bacteria ct i cele de Archaea pot fi descompuse ntr-un numr de structuri care efectueaz funcii specifice. Este important de tiut funciile acestor structuri i compoziia lor 26
chimic. Cteva structuri de baz se regsesc n toate celulele procariote i eucariote. Acestea sunt membrana citoplasmatic, ribozomii i genomul. Cteva forme de bacterii sunt frecvente: forma sferic (coccus), cilindric (rod) i elicoidal (spirilla). n contrast cu celulele procariote, celulele eucariote sunt mult mai mari i mult mai complexe. Nucleele lor se afl n interiorul unei membrane i sunt organizate n molecule de DNA distincte numite cromozomi. De asemenea n celulele eucariote conin o structur secundar numit organele. spaiu periplasmic plasmid cromozom peretele celular
racem
membrana citoplasmatic Structura celulei
ribozom
perior
Forme de bacterii (coccus, rod, spirilla) Aceste organele includ mitocondrii i cloroplastul (n organismele fotosintetice). Dimensiunea mic a microbilor are cteva implicaii. Dimensiunea bacteriilor variaz de la 0.1-0.2 m pn la 50 m n diametru. n general, celulele mici cresc mai rapid dect celulele mari. Aceasta este o consecina a faptului c un raport suprafa / volum mare le permite un schimb rapid cu mediul exterior i a faptului c nutrienii care sunt supui metabolismului n citoplasm trebuie s fie traversai prin membrana celular. Raportul suprafa / volum este o msur a ct suprafa de membran este disponibil pentru a asigura nutrieni pentru proteinele din unitatea de volum de citoplasm. Odat cu creterea dimensiunii celulei, volumul crete mai repede dect suprafaa. Membrana citoplasmatic este o barier selectiv n separarea citoplasmei de mediul exterior. Pentru ca s existe ordine, trebuie ca s fie meninut controlul asupra la cine intr i cine iese din celul. Aceasta este de fapt funcia membranei celulare. Bariera pentru traversarea necontrolat a membranei este asigurat de un strat dublu de fosfolipide. Gruprile hidrofile de glicerol ale lipidelor sunt aliniate la periferia membranei n timp ce acizii grai hidrofobi sunt plasai n interior. Interiorul hidrofob previne ca moleculele ncrcate pozitiv sau negativ s traverseze membrana. Aceste molecule pot traversa membrana numai cu ajutorul unor proteine transmembran specifice care sunt nglobate i divid matricea lipidei. Elementul important este c celulele pot tipurile i activitile de transport a proteinelor de control care la rndul lor controleaz micarea moleculelor nspre i dinspre celul. Dei toate celulele au membrane plasmatice formate din lipide, tipul lipidelor difer. Eucariote i steroli se regsesc n membrane. Una din calitile Archaea-ei, comparat cu Bacteria sau Eukaria o reprezint legturile eterice ntre glicerol i regiunea hidrofob a lanului lipidic comparativ cu legturile esterice prezente n alte organisme. Ca rezultat, lipidele archae-lei au regiuni de lan compuse din lanuri de legturi de izopren. Membrana lipidic este o barier pentru traversarea moleculelor dinspre i nspre celul. Membrana de proteine citoplasmatice este responsabil pentru activitile metabolice asociate membranei. Exteriorul membranei este asociat cu transportul nutrientelor n timp ce transportul electronic prin membran este iniiat de faa interioar. Membrana exterioar este mult mai permeabil dect membrana 27
Lorentz JNTSCHI
plasmatic interioar. Ea conine peri, proteine care formeaz mici guri n membran. oricum, macromoleculele nu pot ncape prin aceste guri. Existena membranelor celulare se justific i altfel; concentraia de solut este n general mult mai mare n interiorul celulei dect n exteriorul membranei plasmatice. Dezechilibrul se corecteaz prin traversarea apei prin membran spre celul (osmoz). Oricum, prea mult ap poate provoca blocajul celulei. Tria mecanic a pereilor celulei rezist ns presiunii osmotice. Acest fapt este atestat de didroliza peptidoglicanului de ctre enzima numit lizozim. Multe bacterii mobile au un sistem de echilibru care le permite s-i regleze deplasarea n funcie de concentraia atractanilor chimici. Senzorii care regleaz acest echilibru sunt numii chemoreceptori. Trei importante organele prezente n celulele eucariote sunt mitocondrii, cloroplastele i nucleul. Toate 3 sunt nconjurate de membrane de lipide dar n toate cazurile, membranele acestora sunt mult mai permeabile dect membrana plasmatic. Nucleul conine materialul genetic al eucariotelor. Genomul este coninut ntr-un numr de molecule de DNA numite cromozomi. Mitocondrii sunt sursele de energie. Moleculele cu mas mic pot uor traversa membrana mitocondriilor. Exist de asemeni nite membrane interne numite cristai, care sunt implicate n conversia energiei. Matricea mitocondriilor conine enzime care metabolizeaz compuii organici. Cloroplastele conin la rndul lor membrane interioare (tilacoizi) bazate pe pigmeni i proteine necesare pentru transportul enegiei fotosintetice capturate. Energia i puterea de reducere generate de fotosintez sunt folosite n esuturile de legtur pentru conversia CO2 la carbon organic. Mitocondriile i cloroplastele sunt de dimensiunea celulelor procariote, i din acest motiv se justific explicaia c aceste organele apar cnd celulele procariote invadeaz celulele mai mari i devin simbioi ai acestora. Microorganismele sunt mprite n clase metabolice n funcie de sursa lor de energie. Fototropele i obin energia din lumin, n timp ce chemotropele i obin energia pe cale chimic. Chemoorganotropele folosesc compui organici n timp ce chemolitotrofele folosesc compui anorganici. Compoziia chimic a celulei este un element important de analiz. Celulele sunt bogate n proteine i n instrumente de producere a acestora (ribozomii). Astfel, proteinele i acizii nucleici sunt cantitativ cele mai importante componente. La asigurarea unui nutrient pentru creterea unei celule trebuie s se in seama de ponderea elementelor chimice n celule. Heterotrofele necesit carbon organic pentru susinerea biosintezelor de lanuri carbonice i necesarul de energie de sintez. Azotul, cel mai frecvent asimilat sub form de amoniac, este constituentul esenial al proteinelor i acizilor nucleici. Fosfaii sunt utilizai uzual ca surse de fosfor pentru sinteza acizilor nucleici i a fosfolipidelor. Sulful, asimilat sub form de sulfai, este esenial pentru sinteza a 2 aminoacizi. Prin convenie, nutrienii sunt mprii n macronutrieni (C, H, O, N, P, S, K, Mg, Na, Ca i Fe) i micronutrieni (Cr, Co, Cu, Mn, Mo, Ni, Se, W, V i Zn). Metabolism este termenul care cuprinde toate reaciile chimice din celul. Se pot mpri aceste reacii n reacii care sintetizeaz nou material celular (anabolism) i reacii al cror scop este asigurarea energiei din energie chimic (catabolism). Aceste dou categorii de reacii sunt legate ntre ele, n sensul n care reaciile catabolice asigur energia necesar pentru desfurarea reaciilor anabolice de cretere. Celulele au pus la punct un mecanism prin care captureaz energia eliberat cnd substanele sunt oxidate n timpul catabolismului. Energia se definete n acest caz ca abilitatea de a efectua lucru. Cantitatea de energie (lucru) eliberat este cuantificat ca schimbare n energia liber (G). Dac este eliberat energie ntr-o reacie, atunci G calculat ca energia liber din produi minus energia liber din reactani este mai mic ca 0, deci o variaie de energie liber negativ. Aceasta este natura reaciilor catabolice. n reaciile de biosintez (anabolice), variaia de energie liber este mai mare dect 0 i celula trebuie s contribuie cu energie pentru ca reacia s decurg n sensul dorit. Oricum, reaciile controlate termodinamic nu au loc totdeauna imediat ce reactanii sunt amestecai. Legturile trebuie rupte pentru ca moleculele s se recombine, i aceasta necesit o energie de activare. Aceast energie poate fi asigurat prin nclzirea reactanilor, dar aceasta nu 28
este posibil n celule. n celule, enzimele funcioneaz ca i catalizatori diminund energia de activare a reaciei pn la punctul la care aceasta decurge la temperatur normal. Catalizatorul (enzima) rmne neschimbat de reacie.
sursa de energie reziduuri din catabolism energie pentru deplasare catabolism anabolism reziduuri nutrieni
Metabolismul celular
E(J) ? EaC R*,C R E aC R*
Ea
componeni celulari
energie pentru cretere
nutrieni pentru cretere
t(s)
Tunelarea energetic cu ajutorul catalizatorilor enzimatici Enzimele sunt catalizatori biologici; ele sunt foarte specifice i pot avea efect spectaculos asupra reaciilor pe care le controleaz. Energia de activare pentru hidroliza acid a zaharozei este de 107 kJmol-1; n prezena enzimei zaharaz energia se reduce la 36 kJmol-1 i procesul de hidroliz este accelerat de 1012 ori la temperatura corpului (310 K). 3.4. Genetic i Inginerie Genetic Chiar dac genomul celulei posed toate instruciunile necesare pentru construcia multor proteine, nu toate acestea se exprim n acelai timp. Mai mult, cnd o enzim este prezent n celul, poate s nu fie activ datorit condiiilor de mediu prezente n celul. Chiar dac multe reacii enzimatice au loc ntr-un singur ciclu al celulei, nu toate au aceeai amploare. Unii compui sunt necesari n cantiti mari, n timp ce alii sunt necesari, dar n cantiti mici. Mai mult, unele proteine sunt necesare n cantiti mari n anumite condiii, n timp ce altele n cantiti mai mici, iar la altele trebuie asigurat o cantitate constant i acesta este cazul celor mai 29
Lorentz JNTSCHI
multe dintre procesele de cretere. Deoarece celula trebuie s foloseasc la maxim resursele sale, aceste procese trebuiesc regulate. Cile biosintetice pot fi controlate cu ajutorul inhibiiei de reacie invers, ceea ce nseamn c produsul final al ntregului lan metabolic inhib activitatea primei enzime din lan (nu din gen). Dac prima reacie nu mai are loc, enzimele urmtoare sunt "nfometate" de substrat, i produsul final nu mai este sintetizat. Produsul final se aeaz pe prima enzim ntr-o cavitate diferit de cavitatea activ. Aceast a doua regiune se numete cavitate alosteric. Aezarea efectorului alosteric schimb structura tridimensional a proteinei i n special conformaia cavitii active. Astfel, substratul nu se mai poate aeza n cavitatea activ i reacia enzimatic este inhibat pn cnd inhibitorul de reacie invers nu prsete cavitatea alosteric.
Enzima Cavitatea alosteric Efector alosteric Datorit schimbrii conformaionale a cavitii active reacia enzimatic este inhibat Cavitatea activ Substrat Are loc reacia enzimatic Legarea substratului Absena reaciei enzimatice Reacia enzimatic
Nu se poate lega substratul
Mecanismul enzimatic celular A doua modalitate de a altera activitatea enzimei este prin modificare covalent. O enzim modificator catalizeaz adiia (prin legtur covalent) a unei grupri fosfat, metil sau a unei nucleotide la o enzim biosintetizatoare. Aceast adiie altereaz conformaia cavitii active a enzimei biosintetice i prin aceasta i activitatea ei. Gruparea modificatoare poate apoi fi extras cu ajutorul altei enzime modificator i astfel se restaureaz activitatea iniial a enzimei biosintetice. Viruii sunt elemente genetice necelulare care conin acid nucleic nconjurat de un scut proteic. Ei sunt mai mici dect celula i dimensiunile acestora variaz de la 0.02 m la 0.03 m. Spaiul dintre scutul proteic i virus este metabolic inert iar forma "dezbrcat" a virusului (de peretele proteic) se numete virion. Deoarece viruii nu posed instrument metabolic, aceste elemente genetice trebuie s invadeze (infecteze) celulele i s foloseasc ribozomii, enzimele i potenialul catabolic al celulei gazd pentru a se putea reproduce. Bacteriile, animalele i plantele sunt susceptibile la anumii virui. Genomul viral este mult mai mic dect sistemele bacteriene. Unul dintre cei mai mari genomi virali are 190 de kilobaze comparativ cu 590 de kilobaze, ct are cel mai mic sistem bacterian.1
1
Kilobaz unitate de lungime pentru fragmente de DNA egal cu 1000 de nucleotide; Nucleotid subunitate de DNA sau RNA format dintr-o baz azotat (purin, adenin, guanin, pirimidin, timin, citozin, uracil i o molecul de zahar (dezoxiriboz sau riboz); 30
Viruii nu sunt restricionai la prezena lanurilor duble de DNA ca material genetic. DNAul viruilor poate fi un lan simplu n timp ce RNA, ca lan simplu sau dublu poate servi ca material genetic. Materialul genetic viral este localizat n interiorul unei proteine numite nucleocapsid. Aceast form neobinuit de material genetic creeaz probleme unice n replicarea genomului i producerea de mRNA. Genomul poate de asemenea s fie segmentat n mai multe molecule n interiorul cutii proteice. Cuca proteic const dintr-un numr de subuniti proteice (capsomere) care fiecare formeaz cte o spiral sau o structur cu 20 de fee (icosaedru) n jurul acidului nucleic. Aceste aranjamente sunt cele mai eficiente din punct de vedere geometric deoarece minimizeaz numrul de capsomere necesare pentru a acoperi genomul i permit ca s aib loc interaciuni similare cu interaciunile protein-protein ntre subunitile proteice identice i de aceea se pot autoasambla. capside
nucleocapside acid nucleic nveli proteic
virus gol
virus nvelit
capsomer Structura unui virus Acestea sunt elementele minimale pentru un virion. Unii virui pot avea alte structuri, cum ar fi cozi sau periori, care sunt importante n infecia celulelor. Alii, cu precdere civa virui animali, au anvelope membranoase care nconjoar nucleocapsida. Acestea sunt adugate ca particule florale pe membrana celular. Astfel, aceste lipide din anvelop sunt derivate din celul, dar proteinele pot avea cod de virus nglobat n ele pe perioada multiplicrii virusului. Obiectivul programului de inginerie genetic este de a izola i purifica gene ntr-un proces numit clonare de gene. Strategia urmrit n clonare este de a izola i recupera gene specifice de la un genom mare i complex i de a-l insera ntr-o gen simpl i uor de manipulat. t-DNA (total) este izolat de la un organism i este decupat n piese mai mici folosind o endonuleaz de restricie specific. Enzima de restricie realizeaz o tiere a lanului dublu de DNA ntr-o secven specific (palindrom). Astfel, la sfritul tierii moleculei, se obin secvene simplu nlnuite. Dac aceast preparare a fragmentelor de restricie este amestecat cu un vector de clonare i tierea se face cu aceeai enzim de restricie, moleculele hibride se obin dintr-un fragment de origine DNA inserat ntr-un vector de clonare DNA. Amestecul de molecule recombinate este introdus ntr-o bacterie gazd pentru a genera librria DNA. Aceasta nseamn c clonele bacteriene individuale conin molecule de r-DNA (recombinant). Dac vom examina suficiente clone, probabilitatea ca s gsim toate fragmentele de restricie n sursa de DNA exist. Proiectul Genomul Uman, un efort de a colecta i secvenializa ntregul genom uman a dus la crearea primului cromozom artificial (YAC). Vectorul YAC este de aproximativ 10 kilobaze i accept de la 200 la 800 de kilobaze pereche de DNA i a fost construit n prim faz la fel cu un cromozom eucariotic obinuit. Cea mai studiat gazd de microorganisme pentru r-DNA este Esterichia coli (E. coli). Potenialul su de patogenez uman aduce cteva neajunsuri n producia industrial, iar inabilitatea sa de a secreta enzime face ca metodele de purificare s fie greu de aplicat la scar industrial. Domeniile principale de interes comercial pentru tehnologia de sintetizare de r-DNA este pentru producerea de:
31
Lorentz JNTSCHI
produi microbieni ca antibioticele; vaccinuri care protejeaz mpotriva viruilor; proteine mamaliene; plante i animale transgenice. Aceste tehnici sunt de asemenea folosite pentru studiul bacteriilor care produc degradarea poluanilor mediului ca o metod de a trata bolile genetice. Multe proteine mamaliene care au importan medical sunt produse numai n cantiti mici, deoarece este dificil de a fi obinute. Prin clonarea acestor gene, bacteriile pot fi uor utilizate pentru a obine largi cantiti din acestea. Insulina uman, factorul uman de cretere, hormonul paratiroidei i atriopeptina sunt exemple de aceste tipuri de proteine. Tehnologia de producere a insulinei ilustreaz c n afara problemelor ridicare de exprimarea genei i ali pai trebuie considerai cu atenie pentru a produce un produs biologic funcional. Alte produse mamaliene obinute prin inginerie genetic sunt: esutul activator plasminogen (utilizat pentru a dizolva coagulrile din snge), eritropoietina (stimuleaz producerea de celule roii), un numr considerabil de interferoni (compui antivirali) i interleucina (stimuleaz limfocitele T), pentru a meniona doar civa dintre acetia. Vaccinurile virale sunt imperfecte deoarece constau din virui mori. Dac nu toi viruii sunt mori, inocularea vaccinului poate cauza infecie. Sistemul nostru imunitar rspunde doar la schelete proteice. Astfel, dac clonm gena proteic viral i producem doar aceast protein, riscul infeciei de pe urma vaccinului poate fi evitat. n unele cazuri, un vaccin efectiv poate fi obinut prin producerea proteinei virale n bacterii. Oricum, n alte cazuri, este ineficient deoarece proteina viral este modificat chimic (de exemplu prin adiia de zaharuri) dup producerea ribozomilor lor. Acest proces nu apare ns n gazde bacteriene. Pentru aceste cazuri, este produs o subunitate de vaccin, n care gena pentru esutul proteic al virusului patogenic este clonat ntr-un virus inofensiv, cum ar fi vaccinia. Tehnicile de recombinare a DNA sunt utilizate pentru a produce modificri n plante (plante transgenice). Un DNA strin poate fi introdus n plant prin metode fizice, ca electroforeza sau tunul cu particule sau pe cale biologic cu ajutorul bacteriei Agrobacterium tumefaciens. Cest patogen de plant induce formarea tumorii n plante prin inserarea prii sale de plasmid Ti DNA n cromozomii plantei. Plasmidul Ti poate apoi servi ca vector pentru inserarea lui DNA strin n celula plantei. La unele specii, celulele plantei crescute n cultur pot fi utilizate pentru regenerarea ntregii plante. Animalele transgenice pot fi produse prin injectarea lui r-DNA n ou fertilizate. Noile descoperiri n cercetarea biomedical se ateapt ca s fie fcute prin aceast tehnic. n plus, aceasta poate avea aplicaii comerciale, deoarece proteinele umane produse prin introducerea de gene clonate n animale poate ntrzia procesul care are loc dup translaie, n timp ce aceste modificri nu apar cnd gena este format n bacterii. Terapia genetic este o metod terapeutic care permite modificarea unei gene disfuncionale direct la pacient. Prima boal care a fost tratat pe aceast cale a fost deficiena de deaminaz adenozinic. 3.5. Microbiologie Industrial n ultimii 100 de ani, culturile pure de microbi au fost utilizate pentru a se obine produi cu valoare comercial. Termenul de ferment, cnd este folosit n contextul microbiologiei industriale desemneaz o gam variat de procese microbiene desfurate n condiii aeroba sau anaerobe. Mai recent, bacteriile produse pe calea ingineriei genetice au fost crescute la scar industrial pentru a produce substane care acestea nu le produc n mod uzual. De notat c microbiologii folosesc termenul de fermentaie n dou contexte diferite. n contextul metabolismului fermentarea refer creterea n absena unui receptor electronic extern, n timp ce n contextul microbiologiei industriale, acest termen refer creterea unor mari cantiti de 32
celule. Microorganismele industriale sunt selectate iniial din probe naturale sau luate dintr-o colecie de cultur deoarece ele nu arat capacitatea de a sintetiza produsul dorit. Oricum, conformaia este modificat pentru a mrii randamentul produsului. Aceasta presupune un ntreg lan de mutaii, cu selecia atent a clonelor rare care sintetizeaz un mai mult sau mai bun produs. Conformaia aleas este puin probabil s supravieuiasc n natur, deoarece procesul de selecie a alterat controlul regulator al celulei pentru a produce dezechilibrul metabolic. Caracteristicile urmrite sunt: cretere rapid; stabilitate genetic; absena toxicitii umane; dimensiune mare a celulei, pentru extragere simpl din mediul de cultur. Exist cteva colecii de culturi importante care depoziteaz i menin material genetic de la cele mai importante microorganisme. n Statele Unite, American Type Culture Collection (ATCC) este probabil cea mai cunoscut, ns de asemenea Northern Regional Research Laboratory (NRRL) este de asemenea bine cunoscut. n Romnia exist de asemenea o banc de gene la Suceava (Suceava Gene Bank), specializat n depozitarea i conservarea de gene de plante. Microbiologii din industrie trebuie s fie capabili s produc masa microbian propriu zis, enzime specifice, i metabolii.
Depozitarea genelor la Banca de Gene din Suceava (aprilie 2001) Metaboliii pot fi produsele majore ale catabolismului sau compui produi normal n cantiti mici de speciile naturale. Industria microbiologic depinde de scara la care se practic. Altfel, microbiologii din industrie cultiv organismele n multe moduri, la fel ca i ceilali microbiologi, iar obiectivul este de a produce cantiti foarte mari, uneori msurate n milioane de litrii odat. Industria farmaceutic este un important utilizator de microbi. Pentru muli ani, antibioticele i hormonii steroizi au fost produi de microbi. Ingineria genetic a fcut posibil ca bacteriile s produc o mare varietate de substane mamaliene care sunt importante din punct de vedere medical. n agricultur bacteria din genul Rizobium a fost adugat seminelor de legume unde, urmnd formarea nodulilor din planta gazd, ea captureaz sau fixeaz azotul atmosferic i astfel reduce cantitatea de ngrminte pe baz de azot necesare pentru plant. Cteva substane speciale sunt mult mai economicos de produs de microbi. Acestea includ civa aminoacizi i vitamine. Banca de Gene din Suceava (aprilie 2001)
CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 H3C CH3 CH3 CH3
CH2OH O HCOH O
HO
OH
-Carotene (Provatene, Carotaben, Solatene)
Vitamin C (Ascorbic Acid, Cevitamic Acid, Testascorbic) 33
Lorentz JNTSCHI
H3C
CH3
CH3
CH3 OH
CH3 H3C H3C CH3 CH3
CH3 Vitamin A (Biosterol, Acon, Afaxin, Apostavit, Atav) O CH3
H CH2
O Vitamin K3 (Menadione, Vitamin K2(0), Panosine) CH2OH HO CH2OH H3C N Vitamin B6 (Pyridoxine)
CH2CONH2 H H3C CH3 N N NC Co+ N H3C CH3 CH2 CH2 N CO NH CH2 H3C CH O OH O O H H CH2OH CH3 N CH3 H CH2CH2CONH2 CH3 N H CH3
HO
Vitamin D2 (Calciferol, Ergocalciferol, Radsterin)
NH2COCH2 H3C NH2COCH2CH2 CH3 H NH2COCH2 H
CH2CH2CONH2
OH P O
Vitamin B12 (Cyanocobalamin, Antipernicious anemia principle) Solvenii industriali, cum sunt alcoolii i acetona se pot produce prin fermentaie microbian. Oricum, n prezent este mai ieftin s se obin acestea pe baz chimic din petrol. Muli dintre cei mai importani metabolii industriali sunt metabolii secundari, produi n faza staionar a culturii dup ce producia de biomas a fost epuizat. Aceti compui nu sunt eseniali pentru creterea microbului. Sinteza lor este n mod obinuit n mare msur regulat de celul. n consecin, pentru a obine randamente mari, condiiile de mediu care afecteaz 34
mecanismele regulatoare ca inhibiia de represiune i de reacie invers trebuie s fie evitate. n plus, descendenii mutanii care asigur o producie superioar a compusului sunt selectai. n metabolismul secundar, se pot distinge 2 faze: trofofaza2 i idiofaza3. Trofofaza este faza de cretere a culturii iar idiofaza este timpul n care metaboliii secundari se formeaz. Succesul idiofazei depinde de trofofaz.
creterea substratului
celule
metabolitul primar
Celulele i metabolitul sunt produse (aproape) simultan

celule
metabolitul primar
celule
metabolitul primar
metabolitul secundar
metabolitul secundar
Dup ce celulele i metabolitul primar sunt produse celulele convertesc metabolitul primar n metabolitul secundar i dup ce celulele i metabolitul primar sunt produse, creterea de substrat este folosit pentru sintetizarea metabolitului secundar Dup ce un microorganism corespunztor a fost identificat din studii de laborator pentru un proces industrial, nc mai sunt un numr de probleme de trecere de la faza de laborator la faza de producie industrial. Acestea includ asigurarea unei aerri corespunztoare ncontinuu n masa din vasul de fermentare. Dificultile sunt implicate de volumul enorm de amestec, de zonele unde amestecarea este mai puin eficient i de coninutul mare de biomas din vasul de fermentare. Biomasa mare este de ateptat s creasc cantitatea de produs format, dar creeaz necesitatea asigurrii unei enorme cantiti de oxigen. n plus, descendentul care a lucrat bine la scar mic poate nu va lucra eficient la scar mare, sub condiiile de mediu diferite din vasul de fermentare.
2
3
trofo-: cu semnificaia "(referitor la) nutriie, hrnire" idio-: cu semnificaia "propriu" 35
Lorentz JNTSCHI
Pentru producia industrial se folosesc vase de fermentare cu capacitate mai mare de 400.000 litrii. Procesul poate fi aerob sau anaerob. n general, procesele aerobe sunt mult mai dificil de realizat, datorit necesitii aerrii unei volum mare de amestec i cu o biomas foarte concentrat. Vasele de fermentare sunt construite din oel inoxidabil i au o cma exterioar prin care se asigur rcirea n timpul fermentrii.
dispozitiv de etanare steril motor regulator de pH
nclzire cu aburi cma de rcire
rezervor i pomp acid/baz evacuare
ieire ap de rcire intrare ap de rcire pulverizator nclzire cu aburi mediul de cultur
aer sterilizat
recoltare
Schema constructiv a unui vas de fermentare Pulverizatoarele i agitatoarele din vas sunt folosite pentru aerarea i amestecarea coninutului. Vasul poate conine diferite instrumente pentru monitorizarea condiiilor de mediu din cultur, astfel nct aceti factori pot fi optimizai pentru a se obine randamente mari de producie. Organismele utilizate n procesele industriale trebuie s fie conservate cu atenie astfel nct calitile genetice s nu fie alterate datorit mutaiei. Se poate recurge la depozitarea n form ngheat n azot lichid sau liofilizarea. Antibioticele sunt de departe cei mai importani compui produi de microbi pe cale industrial. Foarte utili sunt metaboliii secundari produi de fungii filamentari i bacteriile sunt clasificate ca actinomicete. Noile antibiotice sunt descoperite prin vizualizarea microbilor izolai din probe naturale pentru producia de substane care inhib anumite bacterii de test. Bacteriile de test refer patogenii bacterieni. Multe rezultate bune sunt la fel cu cele pe care le dau antibioticele cunoscute pn acum, dar cteva sunt nc nedescoperite. Noile substane sunt testate pentru toxicitate i efect n animale infectate nainte ca producia comercial s se desfoare. Cele mai multe substane noi se dovedesc a fi toxice pentru animale sau relativ ineficiente n omorrea patogenilor din organism. Astfel, o foarte mare cantitate de energie trebuie cheltuit pentru a gsi substanele rare care sunt noi i eficiente. Dup ce se valideaz aceste noi substane, se pune la punct tehnologia de obinere a unui randament ridicat i este stabilit metoda de purificare. Antibioticele sunt sintetizate pe ci biochimice complexe. Un important obiectiv al cercetrii este de a nelege aceste ci, pentru ca apoi s se poat indica cile de selecie ale descendenilor cu productivitate ridicat. Antibioticele lactamice includ peniciline i cefalosporine. Acestea sunt deosebit de utile deoarece inta lor de aciune sunt compuii care nu sunt coninui n eucariote peptidoglicanul din peretele celular. Acetia inhib sinteza sa prin inhibiia reaciei de transpepdidizare. 36
Streptomicina, un antibiotic aminoglicozidic, ilustreaz c chiar dac antibioticele sunt gndite a fi antibacteriene, totui ele pot cauza efecte secundare n animale. Astfel de compui sunt inui n rezerv, pentru a fi utilizai n tratament doar n cazurile n care alte antibiotice eueaz. Tetraciclina este un antibiotic cu spectru larg de aciune efectiv mpotriva speciilor Gram pozitive i Gram negative. Acesta, i antibioticele pe baz de lactam sunt foarte utile medical. Au fost folosite n aplicaii medicale, cum ar fi suplimente pentru animale, dar ele favorizeaz instalarea genelor ncriptate de rezisten la antibiotice i fac terapia cu antibiotice mai puin efectiv. NH NHCNH2 NH H
H2NCNH H H H3C O CHO OH H OH H O CH2OH H CH3NH H H OH H H HO H H OH
O H
OH H Streptomycin (Streptomycin A) Vitaminele i aminoacizii (tab. 1) sunt utilizate ca suplimente n hrana uman i animal. Unii dintre aceti produi sunt sintetizai cel mai economic de ctre bacterii, dac se obin descendeni cu nalt randament i superproducie. n general, aceasta implic inactivarea mecanismelor regulatoare, care in de biosinteza substanelor, n aceeai msur n care celulele i formeaz elementele constructive. Un scop este de a gsi mutanii care cresc n prezena analogilor chimici ai aminocidului. Acestea ofer ns un slab control de ntoarcere al activitii enzimei. n anumite procese industriale microbii sunt utilizai doar pentru a conduce doar anumite reacii biochimice. Mecanismul de formare a produsului respect cu strictee regulile chimice. Un exemplu de acest tip este bioconversia n etape a hormonilor steroidici. Cea mai mare parte a enzimelor microbiene implic prezena enzimelor hidrolitice care diger materialele insolubile. Acestea sunt utilizate pentru industria detergenilor. O serie de trei enzime sunt utilizate pentru producerea ndulcitorilor din amidon. Siropul de cereale cu foarte mare concentraie de fructoz este produs prin hidroliza amidonului la glucoz izomerizarea glucozei ntr-o molecul mai dulce, fructoza. O alt enzim microbian important este renina, care este foarte folosit n producia de brnz. Oetul poate fi produs de bacteria acidului acetic, dac oxigenul este asigurat. Sunt mai multe metode industriale de a realiza reacia aceasta. Acidul citric este produs de fungul Aspergillus niger. Fermentaia industrial a fungilor poate s apar la suprafaa unui lichid sau n masa de lichid. n procesele de suprafa mediul poate fi att solid ct i lichid. Celulele de drojdie4 sunt cei
4
drojdie = orice fungus unicelular al genului Saccharomyces, n special S. cerevisiae, ce se reprodce prin construcia de ascospori i capabil s fermenteze carbohidraii. 37
Lorentz JNTSCHI
mai folosii microbi n industrie. n condiii anaerobe, ei fermenteaz zaharurile la alcool, i sunt la baza industriei vinului i berii. Vinul este sucul fermentat al fructelor, de obicei struguri. Mustul este produs prin strivirea fructelor i drojdia vinului este adugat. Dup tratamentul cu bioxid de sulf, drojdia vinului este omort. Dup aproximativ 2 sptmni fermentarea produce aproximativ 10-12% alcool. Berea este produs din grunele de mal (orz, orzoaic, . a.). Boabele sunt zdrobite, dup care sunt coapte i aruncate n ap. Enzimele din mal convertesc amidonul la zaharuri, care pot fi fermentate de drojdie. Amestecul rezultat este fiert pentru a steriliza soluia.
CH2COOH HOCCOOH CH2COOH
Renina (Chymosin)
Acidul citric
3.6. Ecologia Microbian Microorganismele sunt responsabile pentru multe reacii eseniale pentru buna funcionare a biosferei. n mediul natural, interaciunea microbului cu caracteristicile fizice i chimice ale mediului ct i cu alte organisme i determin succesul de cretere aici. Reciclarea nutrienilor din compui organici n compui anorganici pot fi folosite de organismele fotosintetizatoare este o funcie special important fcut de microbii descompuntori. Ecologia microbian este un mare i variat domeniu, dar este posibil s facem cteva generalizri. Astfel: condiiile fizice i chimice n micromediul n care organismele microscopice se afl poate s difere de ceea ce noi n mod obinuit msurm n unitatea de prob pe care o colectm; exist limite de rat de cretere n cele mai multe medii naturale; mai mult, asigurarea nutrienilor poate s nu fie continu, poate surveni n pulsuri, astfel nct creterea apare numai n anumite momente de timp ntre care sunt perioade de nfometare; cel mai des microbii se gsesc lipii de suprafee deoarece n medii limitate nutriional concentraia nutrientului este mare aici; speciile microbiene concureaz pentru nutrientul din mediu. Speciile de succes sunt acelea care pot crete cel mai rapid cu minim de concentraie de nutrient, atta timp ct un competitor nu produce o substan care s-i inhibe creterea. Producerea materiei organice n habitatele acvatice este fcut n primul rnd de microorganismele fotosintetice, productorii primari. Rata produciei primare este determinat de condiiile fizice din mediu i de resursa de nutrieni anorganici. De exemplu, sunt puini nutrieni disponibili n largul oceanului i producia primar este n general foarte mic n comparaie cu zonele de coast. Mediile acvatice n care apar gradieni de densitate verticali datorit stratificrii termice pot deveni anaerobi n straturile inferioare. materia organic produs prin fotosintez n 38
apele superioare circul ctre adncime, unde bacteriile heterotrofe consum oxigen pentru a o mineraliza. Dac sunt suficiente sedimente de materie organic n adncime, tot oxigenul este consumat de acest proces i viitoarele metabolisme chemoheterotrofe trebuie s foloseasc procese anaerobe. Condiiile anaerobe exclud animalele mari din strat. Formarea solului implic procese fizice, chimice i biologice. Microbii contribuie la acestea prin producerea de materie organic care este convertit la acid carbonic care dizolv mineralele din roci. Formarea solului din roci expuse poate dura sute de ani. Microbii din sol controleaz prezena multor nutrieni pentru plante. Ca rezultat, funciile microbiene n sol este cheia productivitii solului. Activitatea microbilor n sol este limitat de activitatea apei (att n condiii umede ct i n condiii uscate) i de starea nutrienilor. Lucrri recente sugereaz c microbii pot exista la mai multe sute de metrii adncime n sol, ns nu este clar care este nivelul activitii acestora n aceste medii de sub suprafa. Producia primar n largul oceanului este mic. Astfel, doar o mic cantitate de materie organic poate ajunge n adncul oceanului la adncimi mai mari de 1000 de metri. n plus, temperatura n aceste zone este mai mic de 4 C i presiunea hidrostatic depete 100 de atmosfere. n consecin, este foarte puin activitate biologic n aceste regiuni [6]. Exist totui cteva regiuni n adncul oceanului care prezint o nalt activitate biologic. Acestea sunt niele hidrotermale din care se eman ape calde bogate n minerale.
O ni oceanic n erupie i Limpet5 (Clypeosectus Curvus), unul dintre animalele gazd ale bacteriilor chemolitotrofe S-oxidante Apa conine compui de sulf redus care servesc ca surs de energie pentru chemolitotrofii Soxidani. Aceste bacterii autotrofe execut aceleai funcii pe care le ndeplinesc organismele fotosintetice de la suprafaa pmntului, ele fiind astfel productorii primari ai ecosistemului. O mare densitate de animale nevertebrate sunt n vecintatea nielor. Oricum, ele nu mnnc bacteriile de sulf, dar formeaz asociaii simbiotice cu ele. Viermele tub Riftia conine o modificare a tubului intestinal numit trofozom care este umplut cu aceti microbi. Bacteriile oxidatoare de sulf sunt localizate n branhiile scoicilor i midiilor. Animalele pot tri pe excreiile de materie organic i celule bacteriene moarte. Viermii tub conin o hemoglobina neobinuit care poate transporta H2S la bacteriile din trofozom fr s omoare animalul. Din studiile fcute pe sursele de ap din zone n care temperatura poate ajunge la 380 C, rezult c cea mai mare temperatur la care exist organisme vii este de 150 C. Transformrile carbonului conduc ciclul tuturor celorlalte elemente, deoarece toate acestea necesit energie produs prin fotosintez sau catabolismul compuilor organici. Cele mai importante fluxuri de carbon sunt ctre bioxidul de carbon atmosferic
5
limpet: una dintre numeroasele molute marine gasteropode din familiile Acmaeidae i Patellidae, cu un perete conic caracteristic i care ader la rocile din zonele tidale. tidal: o variaie periodic n nivelul suprafeei oceanelor, mrilor, bazinelor, golfurilor i estuarelor cauzat de atracia gravitaional a soarelui i lunii. 39
Lorentz JNTSCHI
i materia organic vie sau nevie. Fixarea dioxidului de carbon prin fotosintez i producerea sa prin respiraie sunt mecanisme prin care aceste fluxuri apar.
Viermi tub (genul Ridgeia Piscesae) Descompunerea anaerob a carbonului organic necesit participarea a 4 grupuri metabolice de bacterii: bacteriile cu hidroliz extracelular rup polimerii cu mas molecular mare ca polizaharidele sau proteinele n constituenii lor monomeri; bacteriile fermeni convertesc aceti monomeri n acizi organici, H2 i CO2; bacteriile oxidatoare cu acizi grai convertesc acizii grai la acetai, H2 i CO2; compuii rezultai sunt folosii ca substrat de ctre bacteriile metanogenice pentru a produce CH4. Oricum, produii finali ai descompunerii anaerobe sunt gazele CO2 i CH4. Bacteria oxidatoare cu acizi grai poate s creasc numai dac hidrogenul pe care ea l produce este consumat ntr-o alt reacie. Aceste organisme depind prin transferul de hidrogen ntre specii de alte bacterii, ca metanogenele care metabolizeaz rapid orice hidrogen pe care acestea l genereaz. Metanogeneza apare n medii de ap dulce, cum sunt sedimentele din lacuri, maluri i mlatini, tot aa cum i n rumen6. 4. Biochimie 4.1. Chimia Celulei Vii Biochimia poate fi mprit n dou nivele de studiu: conformaional: care vizeaz structura i aranjamentele tridimensionale ale moleculelor; informaional: care vizeaz limbajul de comunicare nuntru i n afara celulelor; n 1828 are loc prima sintez organic (biochimic) de ctre Friedrick Wler: NH3 + NCOH NCO-NH4+ (H2N)2CO acid cianic cianat de amoniu uree Se poate porni n studiul biochimiei pe cale fizic i chimic uznd de caracterizarea structural sau din perspectiv biologic prin caracterizarea celulelor i organismelor vii. Oricum aceste dou ci au convers spre acelai punct odat cu caracterizarea DNA de ctre Watson i Crick n 1952. n tabelul 2 sunt redai aceti pai majori fcui n biochimie pn n era biochimiei moderne.
6
rumen: prima diviziune a stomacului animalelor rumegtoare n care cea mai mare parte a mncrii este colectat imediat ce a fost nghiit i din care este mai trziu ntoars n gur pentru o mai ndelungat mestecare. 40
Tabelul 2. Cile ctre biochimia modern Biologie Anii Chimie i Fizic Nucleul celular 1830Sinteza ureeei Teoria celulei 1849 1850Chimia este folosit pentru caracterizarea 1869 biologiei Descoperirea genetic a DNA 18701889 Genetica drosofilei 1890Descrierea fermentaiei 1909 Cristalizarea ureazei Microscopie electronic 1910Caracterizarea glicolizei 1929 Funciile DNA 1930Descrierea ciclului acidului citric 1949 Analiza de raze X a cristalelor de 1950Lanul dublu de DNA protein din enzime de restricie 1969 Codul genetic RNA catalitic 1970DNA recombinant Terapia genetic 1989 Reacia n lan a polimerazei 4.2. Biomolecule Sunt o mare varietate de compui utilizai n sistemele vii. Cteva exemple sunt: carbohidrai: asigur energia celulei, structura i servesc la recunoaterea molecular; lipide: asigur energia celulei, constituent de baz al membranei celulare, intr n compoziia hormonilor; vitamine: amestec de compui care joac multe roluri i sunt pri eseniale ale altor biomolecule; aminoacizi: blocurile constructive din proteine; inele de porfirin: specii ca hemul i clorofila; Hemul are ionul de Fe2+ n centrul su care formeaz un complex cu oxigenul i este folosit de celule pentru transportul oxigenului.
Hemul Dintre polimerii sistemelor vii se pot enumera: acizii nucleici, care stocheaz i transfer informaia i sunt construii din zaharuri, fosfat i baze azotate; proteinele, care asigur transportul, structura i sistemul regulator n celul i sunt construite din aminoacizi; polizaharidele care sunt folosite pentru realizarea structurii, stocarea energiei i sunt construite din simple zaharuri; iar dintre asocierile organizate de macromolecule, numite i ansambluri supramoleculare: membranele celulare, alctuite din lipide i proteine; cromatinul, format din DNA i proteine; 41
Lorentz JNTSCHI
ribozomii, formai din RNA i proteine; citoscheletul, o structur proteic fibroas; viruii, ansambluri de lanuri DNA i RNA mpachetate ntr-o protein. Este foarte important de reinut c nici una dintre cele enumerate mai sus nu sunt considerate vii. 4.3. Circuitul Informaiei Se poate schematiza transferul informaiei biologice prin: DNA RNA Protein Structura i funciile celulei Dintre structurile elementare enunate, cele responsabile cu stocarea i prelucrarea informaiei sunt, DNA care stocheaz informaia, RNA care extrage informaia stocat, i Proteinele care proceseaz informaia. Comunicarea ntre celule se face prin intermediul substanelor. Una sau mai multe substane sunt eliberate n mediu de ctre organismul viu. Alte organisme pot detecta aceste substane chiar i n cantiti foarte mici. Feromonii sunt un astfel de exemplu: CH3 O
CHCH2CH2OCCH3 CH3
O CH3CH2CH=CH(CH2)9CH2OCCH3
Izoamilacetat (alarma albinelor) i Tetradecenilacetat (feromonul sexual al moliei porumbului) 4.4. Proteine Dup cum s-a vzut, proteinele sunt construite din aminoacizi. La formarea unei proteine se elibereaz o molecul de ap: H H HO H
H2NCCOOH + H2NCCOOH H2NC-C- N-CCOOH + H2O R R R H R Formarea proteinelor prin nlnuirea aminoacizilor
Aminoacizi n proteine se leag n succesiuni variate (vezi tabelul 1):

ala gly pro arg his ser asn ile thr asp leu trp cys lys tyr gln met val glu phe
Secven de lan de aminoacizi ntr-o protein Odat ncorporat n protein, un aminoacid se numete reziduu. O polipeptid se numete un lan format din pn la 100 de reziduuri iar proteina conine mai mult de 100 de reziduuri. Ca ordin de mrime, este de reinut c cele mai multe peptide i proteine izolate de la celule conin de la 2 la 2000 de reziduuri. Dac folosim valoarea masei moleculare medii a aminoacizilor (220 g/mol) rezult pentru proteine o valoare a masei molare cuprins ntre 200 g/mol i 220 kg/mol. Analiza proteinelor a dus la stabilirea structurii acestora. Ca i la acizii nucleici, proteinele se caracterizeaz folosind 4 nivele structurale. Un exemplu interesant este hormonal creterii umane, care originar a fost obinut de la cadavre pentru ca astzi s se produc pe calea ingineriei genetice. Dimensiunile ctorva proteine importante sunt redate n tabelul 3.
42
HO R1
HO H R2
H R3
H2N-C-C-N-C-C- N-C-COOH
Structura primar, secundar, teriar i cuaternar a unei proteine Cteva exemple de proteine sunt regate n figurile de mai jos.
Permeaza, proteina care asist transportul cellular, Insulina uman (51 reziduuri, 3 legturi ncruciate S-S), Hormonul de cretere uman (596 de reziduuri) Tabelul 3. Dimensiuni proteice Protein Mas molar Reziduuri Insulina 6000 51 Citocromul C 16000 104 Hemoglobina 65000 574 Gama globulina 176000 1320 Miosina 800000 6100 4.5. Metode de Analiz a Proteinelor Cromatografia de afinitate dateaz dinainte de anul 1910, iar metoda modern de cromatografie de afinitate a fost publicat prima dat n 1967 de Axen i alii n lucrarea Metoda bromitului de cianogen pentru imobilizarea liganzilor pe agar. Ohlson (1978) a fost primul care a demonstrat eficiena utilizrii unui suport rigid microparticulat i acesta a fost nceputul metodelor instrumentale. Metoda implic interacia dintre un ligand i solutul de interes. Acest fapt poate fi privit asemntor cu cromatografia de schimb ionic. Sunt astfel dou tipuri de liganzi: specifici, cei care leag doar o specie anume (modelul anticorp / antigen); generali, care formeaz legturi cu grupri specifice de specie int; Elementele cromatografiei de afinitate sunt: suportul: materialul pe care ligandul este fixat; ideal este ca acesta s fie rigid, stabil i s aib o suprafa mare; agarul este cel mai cunoscut suport, de asemenea se mai folosete celuloza, dextranul i poliacrilamida; 43
Lorentz JNTSCHI
ligandul, gelul de agaroz este un polimer al D-galactozei i al 3,6-anihidro-L-galactozei i poate fi folosit la o presiune de 1 atm. i ntr-un interval de pH de la 4 la 9; introducerea probei este ilustrat mai jos, cnd trebuie s se aib grij ca coloana s aib capacitatea adecvat;
ligand
spaiator
matrice
Cromatografia de afinitate, eluarea i splarea de impuriti n cromatografia de afinitate Adsorbia se realizeaz utiliznd un debit mic, i eluentul ajut direcionarea moleculelor din prob ctre zonele libere. Odat fixate, se pot spla impuritile prin traversarea unei cantiti de solvent prin coloan. La final, componentul de interes trebuie s fie nlturat i colectat. Aceast operaiune este de fapt regenerarea coloanei. Electroforeza este o metod de separare care ine seama att de dimensiunea ct i de sarcina particulelor. n aceast metod probele sunt supuse unui cmp electric i unde acestea au tendina de migra pe poziii anume n cmp.
Migrarea speciilor ncrcate electric n electroforez Interpretarea unei electroforegrame se face prin comparare cu o prob etalon iar liniile lsate de prob se pot folosi att calitativ (poziia acestor linii dau originea proteinei iar limea benzii indic cantitatea de aminoacizi de unde se obine masa proteinei. Cu electroforeza de gel un polimer ncruciat se comport ca o sit molecular astfel nct moleculele mici se mic mai repede dect cele mai mari.
Etalon
Proba mm
Interpretarea unei electroforegrame
44
4.6. Carbohidrai Carbohidraii sunt compui ce conin C, H i O, i au formula general Cx(H2O)y avnd toi grupri C=O i OH. Se clasific dup: dimensiunea bazei carbonice din ir; numrul de uniti de zahar; localizarea legturii C=O (aldoze, cu legtura C=O la capt de ir i cetoze, cu legtura C=O n mijlocul lanului carbonic); stereochimie. Tipuri de carbohidrai: monozaharide, cu o singur unitate de zahar; dizaharide, cu dou uniti de zahar; oligozaharide, cu de la 2 la 10 uniti de zahar; polizaharide, cu peste 10 uniti de zahar. Legturile se realizeaz prin intermediul atomilor de oxigen O numite legturi glicozidice. Cele mai importante monozaharide sunt: D-gliceraldehida, cel mai simplu zahar; D-glucoza, cel mai important zahar n diet; D-fructoza, cel mai dulce dintre toate zaharurile; D-galactoza, parte a zaharului din lapte; D-riboza, folosit n construcia RNA. Litera D denot faptul c fiecare dintre compui este un D-enantiomer (rsucete lumina polarizat spre dreapta). Au loc frecvent nchideri de ciclu n zaharurile liniare, cum este:
HOH2C OH HC O HOH2C O OH
Ciclicizare intramolecular
-D-glucoza H H C H C OH HO C H H C OH H C OH CH2OH H HO CH2OH O H HO H OH OH H O HO CH2OH O H HO H OH H OH
-D-glucoza Ciclicizarea D-glucozei
45
Lorentz JNTSCHI
Reaciile pe care le dau monozaharidele sunt specifice i cuprind: Oxidoreducerea, necesar pentru descompunerea lor complet:
H C O H C OH CH2OH + 2 Cu2+ + 5 OHOC O H C OH CH2OH O R-O-C-R1 + H2O + 2 Cu2O + 3 H2O
Esterificarea, producere de esteri fosfai: O

R-OH + C-R1 OH
Derivarea aminic, utilizat pentru a produce componeni structurali ca glicoproteinele; Legarea glicozidic, legarea monozaharidelor pentru a forma polizaharide. n tabelul 4 sunt redate calitile gustative ale monozaharidelor: Tabelul 4. Ct de dulci sunt zaharurile Zahar Dulcea relativ la sucroz lactoz 0.16 galactoz 0.32 maltoz 0.33 sucroz 1.00 fructoz 1.73 aspartam 180 zaharin 450 Metabolismul zaharurilor n organism este extrem de esenial pentru via. n figura urmtoare este redat metabolismul glucozei:
Dizaharide Lactat glucogenez
anabolism
anaerobic, n muchi aerobic
Glicogen (animale) Amidon (plante)
Glucoz
Piruvat
Acetil-CoA
catabolism calea fosfogluconatului
glicoliz ATP + NADH + H+
anaerobic, n drojdie
Riboz-5-fosfat + NADPH + H+
Etanol
Metabolismul energetic al glucozei
5. Toxicologie
5.1. Imunologie Imunologia se ocup cu identificarea principiilor care stau la baza funcionrii sistemului imunitar la animalele vertebrate. Rspunsul sistemului imunitar este un sistem sofisticat de a neutraliza i nltura substanele strine din corpul animalelor. Poate s fie unul foarte specific, posed o memorie astfel nct rspunsul este mult mai rapid dup prima experien cu un material strin i poate face distincia ntre moleculele strine i moleculele proprii. 46
Proteina Anticorp
Determinant antigenic
Mecansimul de aciune al anticorpilor Definiiile pentru antigen i anticorp sunt circulare (una este definit n termenii celeilalte). Un antigen (sau mai specific un imunogen) induce un rspuns imunitar care include formarea de anticorpi (proteine serice), activarea de celule T (trombocite) sau ambele. Anticorpii se pot lega la antigen. Doar moleculele mari pot genera un rspuns imun. Proteinele sunt foarte efective n a face asta, dar i alte macromolecule sunt de asemenea imunogenice. n ciuda dimensiunii sale mari, un anticorp specific reacioneaz numai cu o mic parte a moleculei imunogenice. Aceast regiune determinant a antigenului poate conine doar 4-5 aminoacizi. Astfel, o protein poate avea un mare numr de determinani antigenici astfel nct rspunsul imunitar poate consta dintr-un numr mare de anticorpi cu diferite specificiti. 5.2. Imunologie Clinic i Diagnostic Microbiologic Aceast seciune descrie principiile clinice i diagnosticarea microbiologic care sunt folosite la izolarea i identificarea bolilor cauzate de agenii patogeni. Diagnosticul i tratamentul bolilor infecioase pot fi soluionate prin rapida identificare a microbului responsabil. Tehnicile tradiionale de izolare, identificare i testare a susceptibilitii la antibiotice dureaz aproximativ 72 de ore. Oricum, mult mai rapide sunt procedeele moderne care au fost puse la punct n scopul reducerii acestui timp. Probele care sunt colectate de la esutul infectat i fluide trebuie luat ct se poate de aseptic i trebuie analizat prompt pentru a preveni schimbrile chimice sau biologice care pot avea loc n timpul depozitrii. Totdeauna exist posibilitatea ca probele care sunt recoltate din organism s fie contaminate n timpul colectrii. Aceste instane pot fi identificate prin selectarea speciilor care se dorete a fi izolate, prevenind astfel ca ele s fie contaminate cu flor normal. Dac sunt membrii ai florei normale care se afl n esutul care face parte din prob, probabil acesta o contamineaz. Metode speciale sunt folosite pentru a lua probe de snge, urin, materiale fecale i de alte organite sau esuturi. Poate cel mai important instrument n izolarea patogenilor din probe luate de la indivizi infectai este folosirea condiiilor restrictive de cretere. De exemplu, probele incubate n condiii anaerobe n mod evident vor preveni creterea bacteriilor aerobe. Dac anumite caracteristici unice ale patogenului sunt cunoscute, acestea pot fi ncorporate n construcia mediului de incubaie. De exemplu, Martin-Thayer Agar conine cteva antibiotice la care Neisseria gonorroeae este rezistent. Acesta este un exemplu de mediu selectiv care conine compui care inhib microbii nedorii, dar nu i bacteria de interes. Mediile difereniate sunt utile pentru identificarea bacteriilor izolate deoarece acestea permit reacii ca producerea de acid, hemoliza celulelor roii ale sngelui, sau producerea de hidrogen sulfurat. n practica actual multe medii au att proprieti selective ct i difereniate. Pentru a finaliza identificarea unui izolat, o banc de medii difereniate i teste biochimice pot fi folosite. Aceste teste decurg n prezena unei enzime specifice n condiiile de cretere care sunt asigurate. Prin compararea rezultatelor obinute de la un izolat necunoscut i datele de la speciile cunoscute identificarea poate fi fcut. Cele mai utile teste pentru prelevarea patogenilor sunt comercializate n pachete de kituri, astfel nct laboratoarele mici s nu fie obligate s prepare o varietate de medii speciale. 47
Lorentz JNTSCHI
Sensibilitatea unui patogen izolat la un anume tip de antibiotic este stabilit prin metoda Kirby-Bauer. O cultur de bacterii este mprtiat pe o plcu de agar plan i discurile coninnd diferite antibiotice sunt plasate pe platan. Antibioticul difuzeaz pe agar. dac bacteria este rezistent la antibiotic, o serie de descendeni se vor dezvolta pe disc. dac nu, dicul va rmne gol n acea poriune. Dimensiunea zonei "moarte" este proporional cu eficacitatea antibioticului. Concentraia minim de inhibiie a unui antibiotic pentru o specie bacterian este determinat prin inocularea unei serii de tuburi coninnd diferite concentraii de antibiotic i observarea celei mai mici concentraii la care nu are loc creterea. Dac o metod imunologic poate fi utilizat direct pe un specimen clinic, patogenul poate fi identificat fr a fi cultivat. Aceasta necesit prepararea unui antiser de referin mpotriva patogenilor cunoscui. Anticorpii fluoresceni pot fi vizualizai microscopic dup ce se leag de un specimen. Oricum, specificitatea anticorpilor policlonali poate fi o problem. Membrii florei bacteriilor normale pot avea o suprafa a antigenilor similar cu a patogenului i reacioneaz ncruciat cu antiserul de referin. aceast problem poate s apar din nou la utilizarea anticorpilor monoclonali. Dac un anticorp monoclonal reacioneaz numai cu un anumit component de suprafa, el poate detecta un lan particular al bacteriei. n contrast, civa determinatori antigenici au efecte similare pentru specii diferite. Un anticorp monoclonal care reacioneaz cu acest determinant poate fi folosit ntr-un sistem de vizualizare pe ecran. Testul ELISA a devenit popular n diagnosticarea de laborator deoarece poate fi automatizat i utilizat n afiarea programatic a masei. Testul direct ELISA este folosit pentru a detecta antigenii ntr-un specimen pacient n timp ce testele indirecte ELISA detecteaz anticorpii specifici n serul pacientului. Testele de aglutinare pot fi fcute rapid i necostisitor. Prin amestecarea unui antigen sau anticorp, se poate observa imediat reacia pozitiv a acestuia. Tehnica este necostisitoare, i este folosit n special pe scar larg sau n rile n curs de dezvoltare n care aparatura complex este dificil de ntreinut. Specimenele clinice conin un amestec complex de antigeni. Pentru a detecta o protein specific antigenic, estul Western blot poate fi aplicat. n aceast tehnic, proteinele sunt separate pe baza dimensiunii prin electroforez de gel pe poliacrilamid.
6. Studii Fitosanitare
6.1. Introducere Caracterul universal al aplicrii pesticidelor adesea fr cunoaterea suficient a aciunii lor i a modului de asigurare mpotriva efectului lor toxic a influenat n mare msur opinia public. ngrijorarea a crescut datorit, mai ales constatrii c aciunea negativ a pesticidelor asupra mediului i omului se manifest timp ndelungat [7]. Pierderile provocate agriculturii pe plan mondial de diferitele organisme duntoare se ridic anual la 35% din recolte, ceea ce corespunde cu aproximativ 100 miliarde de dolari. Din aceste pierderi, insectelor le revin 13.8%, ciupercilor 11.6%, buruienilor 9.5% i altor organisme 0.1%. Aceste pierderi variaz n diferite regiuni ale lumii n funcie de condiiile climatice i numeroi ali factori ecologici. Astfel, lucrarea [8] trateaz schimbrile din sol datorit climei n depozitele glaciale. Aici se remarc c cronofunciile solului sunt adesea cvasiliniare, dar aceste relaii sunt adesea valabile doar grosier, generalizri fortuite care ignor schimbrile n soluri datorate climei i altor cicluri externe, influene care guverneaz formarea i degradarea solului. Lucrarea prezint aspecte legate de aceste influene asupra munilor Rocky (U.S.A.) i aici analiza solului a permis estimarea anilor de sedimentare. ntr-un detaliat studiu al solurilor din Wind River Range i Wind River Basin s-au relevat caracteristici ale straturilor de suprafa care nu urmeaz trendul anual. Oricum, urmrind compoziia n carbonai a straturilor se obin caracteristici corelate anual. 48
n mare msur pierderile reflect i posibilitile de a controla mrimea produciei agricole pe diferite teritorii. Astfel, pierderile provocate de insecte constituie 5% din producia potenial agricol n Europa, 7% n Oceania, 9% n america de Nord i Central, 10% n America de Sud, Rusia i China, 13% n Africa i 21% n restul Asiei. Cele mai evidente i mai palpabile sunt de obicei pierderile n producia de cereale [9]. Un important aspect al produciei agricole este pentru sntatea public [10]. 6. 2. Aspecte de Sntate Public Numeroase studii i cercetri, finalizate prin conferine tiinifice i articole se fac relativ la influenele pesticidelor i altor tratamente chimice asupra ecosistemului. Astfel, lucrrile conferinei [11] trateaz aspectele legate de efectele asupra sntii umane n ecosistemele din vecintatea Marilor Lacuri i bazinului St. Louis Lawrence River (U.S.A.). S-a relevat o impresionant cantitate de noi cunotine i instrumente de aplicare a acestor cunotine doar n anii 1994-1996, de cnd o ntlnire similar a avut loc n Detroit (U.S.A.). Pentru o analiz corect, trebuiesc luate n considerare parametrii ca aria de expunere, creterea demografic i n general efectele asupra sntii furnizeaz informaii complexe. Se poate spune c n domeniul expunerii sunt informaii linititoare aa cum o dovedesc studiile nivelelor pentru poluanii toxici persisteni care au deczut dramatic, cu precdere din anii 1970 ctre anii 1980, care arat c trendul n timp al acestor poluani a sczut. Acest declin n nivelele de contaminare n U.S.A. reprezint un succes n prevenirea primar, care se coreleaz ns cu aciunile n parteneriat ale ageniilor de mediu, ageniilor de reglementare, care au fcut ca industria s-i adapteze tehnologiile pentru a reduce emisiile n mediu. S-a artat c datele msurate dovedesc c nu este nici o diferen semnificativ n ceea ce privete concentraia poluanilor n bazinul Marilor Lacuri dect n alt parte [12]. Oricum, interpretarea exclusiv pe baza acestor niveluri de poluare ofer o slab nelegere asupra potenialului de toxicitate al poluanilor. n termeni demografici, sunt populaii care sunt expuse la risc datorit unor anume categorii de poluani care se pot decela n mediu. Se pot produce efecte secundare ale expunerii, cum ar fi sensibilizarea psihologic. De exemplu, creterea ftului este n special sensibil la efectele substanelor toxice persistente i ofer o fereastr ctre studii n ceea ce privete efectele acestora pe termen lung, n generaiile urmtoare (transgeneraional). Sunt necesare astfel studii care s-i deplaseze atenia de la efectele pe termen scurt la efectele pe termen lung. Categorii de populaie consumatoare de pete, de exemplu, pot fi expuse la riscuri suplimentare fa de cele relevate de trenduri. Studii n acest sens arat c aceast categorie, de exemplu, este supus la riscuri de 2-3 ori mai mari dect restul populaiei [13] i n acelai sens, copii alptai pot cpta rate de expunere de 40-50 de ori mai mari dect restul populaiei. n termeni de sntate uman, studii arat c funciile neuromotorie i reproductiv sunt cele mai n suferin [14-,15,16]. Ceea ce este de remarcat este c aceste deficiene odat aprute, nu mai pot fi reparate, ca un deficit bugetar, de exemplu. Opiniile sunt mprite n ceea ce privete implicaiile studiilor de sntate obinute prin intermediul analizelor epidemiologice. Diferene sunt remarcate n ceea ce privete concepia studiului care conduce la rezultatele care au fost raportate. Oricum, trebuie s recunoatem remarcabila paralel care ceste studii o relev. Fiecare dintre aceste studii, fie c provin din studii epidemiologice, studii de laborator sau din studii de genetic, ele pot fi comparate cu lentilele unui microscop, i, ca i lentilele microscopului, ele variaz n ceea ce privete puterea de rezolvare i calitatea. Un fir logic care trebuie urmrit este situat dincolo de aceste cutri i relev tentativa de a cuprinde implicaiile pentru sntatea public. Lucrarea [17] caracterizeaz foarte bine acest numitor comun, i anume n ce msur se rspunde la ntrebarea: "Care este expresia cantitativ a implicaiei n sntatea public?", identificnd foarte bine legtura lips ntre tiin i politica n tiin. Este destul de greu deseori de trecut de la tiin la servicii n termenii practici ai sntii publice. Gilbertson sugereaz [17] c motivul pentru care avem aceast dificultate este pentru c ncercm s identificm cauzaliti, cauzaliti care sunt foarte dificil de stabilit. O cantitate 49
Lorentz JNTSCHI
considerabil de informaie [18-,19,20] refer vecintatea domiciliului persoanelor la care se manifest efecte de malformaii congenitale la natere, ca dovad a legturii ntre cauz i efect. Toate acestea vin s ntreasc importana studiului pesticidelor, sub toate aspectele sale, mai ales sub aspectul sntii publice. 6.3. Agrochimia Pesticidelor Pesticidele, n accepiunea general se mpart n: chimice care sunt compui chimici cu efecte nefavorabile asupra insectelor, bolilor sau duntorilor plantelor de cultur; fizice, ca de exemplu iradierea ce provoac sterilitatea la insecte; biologice, ca de exemplu preparatele de Bacillus thuringiens; Pesticidele chimice sunt deci un bun exemplu de compui a cror aplicare este riscant. Totui, principalul beneficiar al acestora este agricultura. Aici ele se aplic n scopul proteciei plantelor n timpul vegetaiei dar i n scopul proteciei plantelor dup recoltare n mijloacele de transport i depozite. Pesticidele se caracterizeaz prin lipsa aciunii selective; ele pot s provoace intoxicaii acute oamenilor, mai ales celor care lucreaz la producia i aplicarea lor. De asemenea, sub influena pesticidelor, pe lng insectele care distrug plantele n timpul vegetaiei i dup recoltare, pot s piar sub influena pesticidelor i albinele folositoare, iar la combaterea buruienilor pot s sufere chiar plantele a cror protecie se urmrete. Asemenea situaii sunt agravate de aplicarea incorect a pesticidelor. Termenul de pesticide cuprinde toate substanele sau amestecurile de substane folosite pentru: prevenirea dezvoltrii sau combaterea oricrui organism vegetal sau animal nedorit; reglarea creterii plantelor, defolierea i uscarea lor. Aplicarea pesticidelor n agricultur, medicina veterinar, diferite industrii (textil), gospodrie casnic i ocrotirea sntii populaiei are ca scop mbuntirea cantitativ i calitativ a alimentelor, nutreurilor i produselor industriale, asigurarea lor n timpul pstrrii fa de duntori i boli, ocrotirea animalelor contra paraziilor precum i distrugerea insectelor i altor transmitori de boli la oameni i animale. Lista acestor boli cuprinde: malaria, tifosul exantematic, ciuma, febra galben, filarioza, afeciuni virotice ale creierului, febrele transmise de pduchi i acarieni, febra de tranee, amoebiazele, leischmaniozele, onchocercozisele, trypanosomiosisele, bolile papataci, frambezia, inflamarea conjunctivitelor, boala lui Chagas, rickettsiozele i tularemia. n lupta cu aceste boli rolul cel mai important l-au avut insecticidele organoclorurate, iar dintre acestea DDT, folosite nc n continuare n anumite ri. n funcie de destinaia pesticidelor, acestea pot fi mprite n urmtoarele grupe: zoocide pentru combaterea duntorilor animali o insecticide: combaterea insectelor; o rodenticide: combaterea roztoarelor; o moluscocide: combaterea molutelor; o nematocide: combaterea nematozilor; o larvicide: combaterea larvelor; o aficide: combaterea afidelor; o acaricide: combaterea acarienilor; o ovicide: distrugerea oulor de insecte i acarieni; fungicide i fungistatice, bactericide i virocide: combaterea ciupercilor i ciupercostaticelor; erbicidele: combaterea buruienilor; regulatori de cretere: mijloace care inhib sau stimuleaz procese de cretere la plante: o defoliante: mijloace de defoliere a plantelor; o desicante: mijloace de uscare a plantelor nainte de recoltare; o deflorante: mijloace de nlturare a cantitii excesive de flori; atractante: mijloace de ademenit; 50
repelente: mijloace pentru respingere. Pesticidele sunt aplicate sub diferite forme: prafuri, pulberi, granule, capsule, soluii, suspensii, aerosoli, spume, gaze, vapori, paste, iar forma de utilizare este dictat de particularitile duntorului combtut, considerentele tehnice i economice ale aplicrii preparatului. 6.4. Chimia Pesticidelor Caracteristica toxicologic a pesticidelor difer n funcie de clasa structural i funcional la care aparin. Cteva clase sunt prezentate n continuare: 6.4.1. Insecticidele Hidrocarburile organoclorurate cuprind compuii ciclodienici: DDT, HCH, lindan, metoxiclor, Keltan, aldrin, dieldrin, clordan, endrin, endosulfan, heptaclor, Kelewan, toxafen. Trstura comun este afinitatea pentru esutul adipos i o mare stabilitate. Ptrund n organismul omului prin piele, tubul digestiv i cile respiratorii. Se acumuleaz n special n esutul adipos, ficat, creier, muchi, rinichi i inim. Aciunea toxic n intoxicaiile acute se manifest printr-o excitare iniial puternic i apoi paralizarea sistemului nervos central. n intoxicaiile subacute apar perturbri ale auzului, dereglarea coordonrii micrilor, atrofia esutului muscular, leziuni ale ficatului i rinichilor. n prezent au fost scoase din uz n multe ri. Compuii organofosforici sunt cel mai frecvent esteri ai acizilor: fosforic, tiono-, tiolo-, tionotiolo-fosforic i pirofosforic. Cea mai larg aplicabilitate o au compuii cu formula general: X R O P R O Y R1 unde X, Y = O, S i R, R1 = radical alchilic cnd: X = Y = O : fosfai (clorfenwinfos, diclorfos, dimefox, fosdrin, fosfamidon, monocrotofos, triclorfon); X = O, Y = S : tiofosfai (demeton-S); X = S, Y = O : tionofosfai (bromofos, demeton, etilpirimifos, metilopirimifos, clortion, diazinon, fention, folition, paration, metiloparation, fenclorfos, fenitrotion); X = Y = S : ditiofosfai (formotion, dimetoat, disulfoton, fostion, gution, malation, tiometon, metidation); X = S, Y = R : tionofosfai (EPN). Toxicitatea acut a acestor compui se msoar n uniti per os LD50 care reprezint doza care a provocat moartea a jumtate din animalele din grupa experimental. Toxicitatea depinde pronunat de structura chimic. Astfel, s-a constat experimental c compuii care conin radicalul metilic (R = CH3) au o toxicitate mai mare dect cei care conin radicalul etilic (R = CH2CH3). Derivaii care conin sulf sunt mai puin toxici dect cei care conin oxigen. Intoxicaiile sunt foarte periculoase, se caracterizeaz printr-o ngreunare accentuat a vorbirii, pierderea capacitii de a coordona micrile, inhibarea reflexelor i com. Moartea intervine n urma paraliziei muchilor respiratorii i oprirea funcionrii inimii. Majoritatea compuilor sunt supui n organism unei activri n prezena oxidazelor microsomale a NADPH2 (nicotinamid adenin dinucleotid fosfat redus) i a oxigenului molecular. Compuii carbamici sunt esteri N-substituii ai acidului carbamic iar cei folosii frecvent sunt carbarilul, cartapul, pirimicarbul, propoxurul, carbofuranul, Temik-ul. Mecanismul de aciune este acelai ca la organofosforici: inhibarea esterazelor, i n special a esterazei acetilcolinei. Complexul enzimo-carbamat este mai instabil ns i se deblocheaz esteraza acetilcolinei si se revine la funciile normale. Cazurile de intoxicaii acute sunt mai rare i au evoluie mai atenuat. Carbarilul s-a dovedit toxic pentru cobai i hrciogi [21]. 6.4.2. Fungicidele Compuii organomercurici cuprind ndeosebi metil mercur cianoguanidina, ptoluensulfonamida etilomercuric i acetatul fenil-mercuric. Ptrund n organism prin tubul digestiv i sistemul respirator, ns n anumite condiii se pot adsoarbe i prin piele. n tubul digestiv metil51
Lorentz JNTSCHI
mercurul este adsorbit n proporie de 95% iar n plmni n proporie de 80%. n intoxicaii, organele critice sunt rinichii i sistemul nervos central i periferic pentru vaporii de mercur i sistemul nervos central pentru metil-mercur. S-a putut constata c 10% din doza de metilmercur se acumuleaz n creier, i dispare din organism extraordinar de ncet: 50% n decurs de 70-90 zile. Ditiocarbamaii sunt derivai ai acidului ditiocarbamic, care nu apare n stare liber i sunt compui ca: Nabam, Maneb, Zineb, Mancozeb, Ziram, Ferbam, Tiram, Polyram. Gruparea activ care condiioneaz aciunea fungicid i toxic este: S N C S
n care azotul aminic este legat cu radicali alifatici iar sulful cu metalul. Ditiocarbamaii pot s acioneze asupra ADN indirect prin transformai metabolic ca N-hidroxicarbamaii.22 Derivaii ditiocarbamici se caracterizeaz prin proprieti puternice de iritare i sensibilizare. Ali compui derivai halogenai ca pentaclorfenolul (PCP), cvintocenul (PcNB), Captanul, Folpetul, Difolatanul influeneaz transportul de electroni n lanul respirator, duce la perturbarea celular a respiraiei. 6.4.3. Erbicidele Se aplic cu succes peste 500 de diferii compui chimici sau combinaii ale acestora n combaterea buruienilor. Dup modul de aciune erbicidele se clasific n: de contact (distrug plantele n urma contactului direct cu ele); sistemice (se adsorb prin frunze i rdcini i sunt transportate n esuturile ntregii plante). Derivaii carboxilici aromatici au aciune variat n funcie de structura chimic i modul de aplicare. Cele mai importante sunt: derivaii acidului fenoxiacetic (2,4-D, 2,4,5-T, MCPA, diclorprop, mecoprop) i derivaii acidului benzoic (Dikamba, 2,3,6-TBA), clase care se denumesc deseori i erbicide auxinice, au efecte secundare de ptrundere n organismul oamenilor i animalelor pe cale digestiv i respiratorie i pot provoca alergii i erupii pe piele i iritarea mucoaselor ochiului. Dioxinele pot lua natere din clorfenoli, materialul iniial n producerea multor pesticide clorurate. Derivaii acizilor alifatici cuprind n principal Dalaponul i acidul tricloracetic. Erbicidele din aceast grup combat buruienile monocotiledonate. Fenolii substituii ca Dinosebul (DNBP), pentaclorfenolul (PCP), DNOC, DNPP acioneaz prin contact asupra buruienilor dicotiledonate i pot fi aplicai ca fungicide sau acaride i insecticide. n afar de PCP toi conin dou grupri nitrice care decid caracterul aciunii toxice. Derivaii azotai heterociclici sunt derivai triazinici i triasolici ca: antrazina, simazina, prometrina, propazina, prometonul, amitrolul i manifest o sfer larg de aciune att n raport cu plantele monocotiledonate ct i dicotiledonate. Toxicitatea acestor compui se manifest n special prin aciunea asupra ficatului. Derivaii azotai alifatici se pot mpri n 3 subgrupe: derivai ai ureei: diuron, linuron, monuron, fluorometuron, clortoluron, cloroxuron; carbamai: IPC, CIPC, barban, diallat; compui amidici: difenamid, cipromid, propanil. Erbicidele pe baz de uree se folosesc la combaterea buruienilor dicotiledonate n plantaiile pomicole i legumicole iar aciunea toxic se manifest prin modificri hematologice. Erbicidele carbamice se aplic pentru distrugerea selectiv a plantelor monocotiledonate din culturile dicotiledonate. Compuii amidici au un caracter mai puin toxic [23]. 6.5. Proprietile Fizico-Chimice ale Pesticidelor Proprietile fizico-chimice ca punctul de fierbere, refracia molar, presiunea critic, viscozitatea i retenia cromatografic sunt cele mai simple proprieti fizico-chimice experimentale ale compuilor chimici. 52
De cele mai multe ori, aceste valori sunt tabelate i pot fi folosite n proiectarea instalaiilor industriale de producere i separare [24]. Sunt ns cazuri n care nu se dispune de date pentru un anumit compus, cazuri n care se apeleaz la studiile de corelaie pentru a regsi valorile dorite [25]. Amestecurile complexe de pesticide pot ridica dificulti n separarea cromatografic [26] O soluie este utilizarea de modele matematice capabile s optimizeze faza mobil pentru a asigura o bun separare [27]. Acestea pot da rezultate superioare altor metode atunci cnd se aplic amestecurilor complexe de compui cu structur asemntoare [28]. n cazul cel mai general se consider funcii de optim cumulat provenit din mai multe modele [29]. Corelarea proprietilor fizico-chimice cu structura este un instrument puternic, capabil de a furniza soluii atunci cnd ne confruntm cu lipsa de date preliminare [30], de a furniza explicaii de natur structural i chiar de a modela proprietatea pe clase de compui, descompunnd-o pe aceasta n elementele sale intrinseci: tipul interaciei intramoleculare predominante, tipul proprietii atomice responsabile de manifestarea proprietii msurabile i modelul descriptorului de proprietate [31]. Iat cteva rezultate de acest tip, pentru modelarea refraciei molare i indicelui de retenie cromatografic la pesticide pe o clas de 10 compui organofosforici, i o clas de 10 erbicide preluate din [30]. Gutman a introdus indicele Szeged ca un indice pur topologic pe baza formulelor (V(G) lista atomilor, D operatorul de distan topologic [32]): SZe = e Ni,(i,j)Nj,(i,j), Ni,(i,j) = | { v V(G), D(i,v) < D(j,v) } |, Nj,(i,j) = | { v V(G), D(i,v) > D(j,v) } |; Rezultatele obinute pentru refracia molar MR i indicele SZe calculat sunt redate n tabelul 5: Tabelul 5. Valori SZe i MR pentru clasa de compui organofosforici n studiu Structur compus Indice Szeged, SZe Refracie molar, MR
O O O O P O
O O P Cl
146
O
35.808
193
40.524
108
34.911
O O P N
186
43.005
O O P
78
Cl
30.030
53
Lorentz JNTSCHI
O O P
290
N
52.029
O O P
360
N
49.971
O O
P
O P O F
108
F
29.222
360
58.323
88
31.636
Modelul matematic al refraciei molare MR i reprezentarea grafic a dependenei sunt redate n figura:
60 55 50 45 40 35 30 25 20 70
y = 0.089x + 23.479 R2 = 0.9192
120
170
220
270
320
370
Ecuaia de regresie ntre MR i SZe pentru clasa de compui organofosforici n studiu Diudea a nlocuit operatorul de cardinalitate din ecuaiile (1b,c) cu operatori specifici de proprietate atomic (mas i electronegativitate), pe baza formulelor [33]: PMi,(i,j) = v M(v), v V(G), D(i,v) < D(j,v), 1 PEi,(i,j) = v E ( v) , v V(G), D(i,v) < D(j,v),
M(v) masa atomului v, E(v) electronegativitatea Sanderson; cnd au rezultat indicii SZeM i SZeE corespunztori. Indicii de retenie cromatografic ICHR i Szeged calculai pe electronegativiti Sanderson SZeE 54
sunt redai n tabelul urmtor: Tabelul 6. Valori ICHR i SZeE pentru clasa de erbicide n studiu Erbicid [24] Structur ICHR SZeE Cl
MCPA
H3C O CH2COOH
11.5 17.620
Cl Cl
2,4,5-T
Cl O CH2COOH
COOH
14.3 20.991
Acid 3,5diclorbenzoic
Cl Cl Cl
7.4
15.956
2,4-DB
Cl O (CH2)3COOH Cl
14.6 20.745
Diclorprop
Cl O CH COOH
11
19.535
CH3
Cl
2,4-D
Cl O CH2COOH
11.8 18.810
55
Lorentz JNTSCHI
Cl
MCPP (Mecoprop)
H3C O CH COOH
10.3 18.373
CH3
O
Bentazon
N NH
Cl
CH(CH3)2
18.5 24.957
SO2
COOH
Dicamba
OCH3 Cl
9.8
18.614
OH Cl Cl
18.324 12.4
pentaclorofenol
Cl Cl Cl
Modelul matematic al indicelui de retenie cromatografic ICHR i reprezentarea grafic a dependenei sunt redate n figura:
25 y = 0.7472x + 10.307 23 21 19 17 15 7 9 11 13 15 17 19
Regresia ntre ICHR i SZeE pentru clasa de erbicide n studiu 6.6. Activitatea Biologic a Pesticidelor n literatura de specialitate este greu de gsit valoarea activitii biologice a unei anumite pesticide pentru un anumit proces biologic. Din acest motiv sunt foarte utile relaiile structur proprietate i activitate proprietate pe clase de compui [34]. Un exemplu de aplicare cu succes a descriptorilor de substituent n predicia activitii erbicide a triazinelor unei clase de 30 de derivai ai 2-difluorometiltio-4,6-bis(monoalchilamino)56
R = 0.8814
1,3,5-triazine cu formula general:

SCHF2 N N
A N B unde A i B sunt substituenii: NH2, NHCH3, NH-i-C3H7, NHC2H5, NHC4H9, NH-i-C4H9, NH-sC4H9, NH-t-C4H9, NH-C5H11, NH-C6H13, NHC7H15, NH-C8H17 este prezentat n lucrarea [35], unde s-au folosit descriptori de substituent ca XLDS (indicele de centrocomplexitate) WS (indice de drumuri calculat pe matricea L3W), volume fragmentale V i numr de atomi N pentru a prezice activitatea erbicid exprimat prin pI50, logaritmul cu semn schimbat al concentraiei necesare pentru inhibiia n procent de 50% a reaciei Hill. Modelarea matematic s-a fcut innd seama de simetria substituenilor i s-au mediat valorile obinute pentru descriptorii de substituent folosind media aritmetic (A), geometric (G) i armonic (H). Cea mai bun ecuaie de regresie n 3 variabile descriptoare pentru modelarea activitii biologice s-a obinut pentru un coeficient de corelaie ntre valoarea calculat i valoarea estimat de r = 0.9807: pI50 = 10.202 119.5(1/V(H)) 0.097X(H) 0.047W(H) medierea armonic (H) dnd cele mai bune rezultate n corelaie.
6.7. Metode Moderne n Studiul QSAR/QSPR n ultima perioad de timp, indicii structurali utilizai studii QSPR/QSAR (quantitative structure-property/activity relationship) sunt tot mai frecvent calculai din considerente sterice (geometrice) i/sau electrostatice (sarcini pariale) [36-,37,38] n comparaie cu vechile consideraii topologice [39]. Sunt preferate calculele structurale semi-empirice i cuantice efectuate de programe ca: Hondo95, Gaussian94, Gamess, Icon08, Tx90, Polyrate, Unichem/Dgauss, Allingers MM3, Mopac93, Mozyme, HyperChem [40]. n analiza de regresie proprietate/indice structural sunt folosite metode clasice de regresie liniar, regresie liniar multipl, regresie neliniar, sau, n cazul bazelor de date mari, sistemele expert sau reelele neuronale [41,42] Ca metod preliminar analizei, unii autori aliniaz setul de molecule [43]. Mai mult, metoda CoMFA [44] introduce un algoritm n 6 pai pentru analiza QSAR [45]: (A) contruiete setul de molecule cu activitate cunoscut i genereaz structura 3D a moleculelor (eventual cu unul din programele: Mopac, Sybyl [46,47], HyperChem [48,49], Alchemy2000 [46] MolConn [46,50]); (B) alege o mettod de suprapunere (suprapunere de fragmente alese din molecule [46,51,52] sau suprapunere grupri farmacofore [53]) i suprapune virtual coordonatele spaiale; (C) construiete o reea de puncte ce nconjoar moleculele suprapuse la (B) n mod standard (grid [44]) sau n form modificat (curbiliniu [54]) i alege un atom de prob pentru interacia cu punctele reelei [55,56]. (D) folosete o metod empiric (Hint [57]), un model specific (suprapunere farmacofor [58]), energia potenial clasic (Lennard-Jones, Coulomb [44]), potenialul legturilor de hidrogen [59], cmpuri generate de orbitalii moleculari [60,61] sau orice alt cmp definit de utilizatorul modelului [55] i calculeaz valorile de interacie ale cmpului indus n reeaua (C) de cmpul de interacie ales cu un atomul de prob (C) plasat n punctele reelei; (E) folosete valorile calculate ale interaciei (D) ntre punctele reelei i atomul de prob i efectueaz predicia QSAR a activitii cunoscute; (F) folosete parametrii QSAR obinui (E) i efectueaz predicia activitii la molecule care se preteaz la acelai tip de suprapunere cu cele ale setului coal (A). 57
Lorentz JNTSCHI
Metoda CoMFA este un instrument bun n predicia unui variat tip de activiti biologice cum sunt: citotoxicitate [62], inhibiie [56,60], proprieti de formare [63,64]. De asemenea, metoda se folosete n modelarea compuilor cu efect farmaceutic [53,65] i analiza inhibitorilor HIV [66]. O important problem n modelarea QSAR este cutarea n moleculele active biologic a substructurilor active care dau cea mai mare parte a rspunsului biologic msurat [67]. Cutarea invarianilor moleculari este deosebit de util n studiul de caz. Metoda WHIM (Weighted Holistic Invariant Molecular) calculeaz n acest sens un set de indici statistici derivai din proprieti sterice i electrostatice ale moleculelor [68-,69,70]. Metoda original a fost modificat i i s-a atribuit numele MS-WIHM (Molecular Surface Weighted Holistic Invariant Molecular) i a fost aplicat cu succes n analiza suprafeei moleculare [71]. MS-WHIM este o colecie de 36 de indici statistici derivai din proprieti sterice i electrostatice i orientai ctre parametrizarea suprafeei moleculare [72]. Jntschi i Diudea propun un nou model structur proprietate bazat pe topologia molecular obinut din formula structural i topografia molecular obinut din calcule cuantice [27,31]. Pentru modelarea molecular este folosit o nou clas de indici: FPIF (fragmental property index family) ce conine un numr de 61440 indici membrii calculai pe baza a: 8 metode de fragmentare topologic denumite MI, MA, SzDi, SzDe, CfDi, CfDe, CjDi, CjDe; 4 modele de interaciune fizic denumite RG, DG, RT, DT; 8 descriptori de proprietate p n funcie de distana d: p, d, 1/p, 1/d, pd, p/d, p/d2, p2/d2; 5 modele de suprapunere a interaciilor fragmentale: S, P, A, G, H; 4 tipuri de indici sumativi pe matricile cu proprieti fragmentale rezultate: P_, P2, E_, E2; 3 operatori de scalare a indicilor: id, 1/, ln; 4 proprieti p implicite: C, M, E, Q i se genereaz ntregul set de 61440 indici pentru o molecul dat pe baza structurii topologice (atomi i legturi) i topografice (coordonate spaiale i sarcini pariale). Nu toi indicii obinui sunt distinci n general. Degenerri apar din degenerarea valorilor proprietilor atomice i ale descriptorilor alei. n urma eliminrii identitilor din ntregul set rmn aproximativ 15000 de indici distinci. Rezultate deosebite se obin la recunoaterea modelelor de proprietate. Construcia indicilor permite n urma seleciei fcute n corelaie s se identifice cauza structural a proprietii macroscopice msurate sau calculate. Un exemplu este analiza QSAR i QSPR a unui set de 17 compui de substituie ai 3(ftalimidoalchil)-pirazolin-5-onei cu activitate inhibitoare asupra Lepidium sativum L. (Creson), rezultate superioare celor obinute n lucrarea [73]. Setul de inhibitori este:
O O H N N O N O
H N N O N O
HO
O O
HO N N O
O O
58
H N N
HO
H N N
O O HO N N
O O N O
O N N
O
O
O
O
N N O O
HO
N N
7
O O H N N O N O H N N O
8
O O
O
HO
HO
N N O O
10
11
12
H HO N N
HO N N
HO
N N
O
N O
O O
13
14
15
59
Lorentz JNTSCHI
O N N O
O O
HO N N N O O N O
16 17 17 compui de substituie ai 3-(ftalimidoalchil)-pirazolin-5-onei Cei 17 compui de substituie ai 3-(ftalimidoalchil)-pirazolin-5-onei cu activitate inhibitoare n soluie de 0.05 g/l asupra Lepidium sativum L. (Creson) au proprietile: Tabelul 6. Sum of One-Electron Energy Calculated at Single Point Semi-Empirical ExtendedHuckel and the Inhibitory Activity on Lepidium sativum L. (Cresson) Molecula Energia Inhibiia nr. (kcal/mol) (%) 1 50978.19 28.4 2 51000.36 28 3 53441.43 30.4 4 53416.95 27.7 5 38604.68 14.3 6 62330.33 68.3 7 64752.65 49.4 8 64751.09 65.2 9 50012.42 46.9 10 53424.19 29.3 11 55729.99 28.9 12 55832.12 32.6 13 41020.54 12.2 14 43473.37 18.2 15 64701.39 71.7 16 67104.64 50.6 17 41057.46 15.1 Indicii de structur au fost generai i sortai dup scorul n corelaia monovariat, dup care li s-a aplicat regresia bivariat. Cele mai bune rezultatele sunt prezentate n tabelul urmtor: Tabelul 7. Scoruri n corelaia structur - proprietate Indice Proprietate Nume indice R Intercepia Pante 1 energie lnDGjDeE_p/d2PE_ 0.9997 5370 3.76e3 492 energie idRTjDeM_p/d2SP_ 0.9999 5.62e4 47.8 1737 (bivariat) 1/RTsDeM_p/d2AP2 -7.1e5 1 inhibiie lnDGsDeC_1/p_SE_ 0.9538 -3.3e2 96.3 4304 inhibiie idDTsDiM_p*d_HP_ 0.9926 -26.8 1.56 7649 (bivariat) idDGjDeE_p/d2SE2 -1.70 Concluziile pentru clasa de compui analizat sunt: Cel mai bun indice n regresia monovariat (lnDGsDeC_1/p_SE_ pe inhibiie) nu furnizeaz cea mai bun corelaie n regresia bivariat; Cea mai bun pereche de indici n corelaia bivariat nu se obine din ortogonalizare aa cum
60
reclam metoda PCA[74,75] sau DCA[76,77] ci se obine prin traversarea ntregii familii i efectuarea de perechi; Suma energiilor de un electron este modelat cel mai bine de perechea de indici (idRTjDeM_p/d2SP_, 1/RTsDeM_p/d2AP2) cu un scor r = 0.9999; aceasta justific dependena Sum of One-Electron Energy, Extended Hckel Model, Single Point Calculation de topologia molecular cum era de ateptat pentru o mrime calculat; n plus, masa se identific n expresia indicilor, cum era de ateptat; superpozarea se face sumativ aa cum se ntmpl de altfel i n calculul energiei; Inhibiia activitii mitodepresive pe soluia de Lepidium sativum 0.05 mg/ml este prezis cel mai bine de perechea (idDTsDiM_p*d_HP_, idDGjDeE_p/d2SE2) cu un scor r = 0.99; prezena electronegativitii E i masei M sugereaz interaciunile de natur electric i impedimentele sterice de mas i volum care au loc la inhibiie; modelul de descriptor de interaciune este p/d2, specific unui cmp electric; prezena descriptorului de interaciune p*d la mas sugereaz forele elastice care apar la oscilaiile armonice n jurul poziiilor de echilibru ale atomilor n structur; Analiza de corelaie Energie Inhibiie demonstreaz c cele dou mrimi sunt slab corelate (r = 0.78) ceea ce demonstreaz c modelul a fost capabil s explice dou mrimi care nu sunt intercorelate. Ulterior, n lucrrile [78,79] a fost testat puterea de predicie a FPIF pe un set de 58 de dipeptide cu activitate inhibitoare a ACE, exprimat n logIC50 (vezi anexa 2), caz n care s-a dovedit nc o dat puterea de discriminare (idDTsDeEp2/d2SP2, idDGjDiPp/dGP_) i corelare (r = 0.89). De asemenea, n lucrarea [80] mai multe seturi de molecule cu activitate biologic inhibitoare au fost considerate. Astfel, 10 derivai de diclorofenil metan inhibitori ai aromatazei (aromatizarea enzimatic a androgenilor este implicat n biosinteza estrogenilor i n bolile cauzate de dependena de estrogen), 90 de compui cu azot, 25 de nitrofenoli cu activitate erbicid. De fiecare dat FPIF a dovedit o abilitate superioar de predicie fa de modelele raportate n literatura de specialitate pe seturile considerate. Astfel, de exemplu pentru cei 10 inhibitori ai aromatazei, lucrarea [81] raporteaz o corelaie de R2 = 0.89 n timp ce membrii clasei FPIF genereaz un model al proprietii care se coreleaz cu mrimea observat cu scorul R2 = 0.9716.
6.8. Utilizarea Pesticidelor n Cultur Exemplu Aplicativ Urmtorul tabel clasific pesticidele prin aciunea lor asupra insectelor duntoare culturii de cartof aprobate pentru folosin n S.U.A. i folosite n cultur n statul Ohio [82]: Tabelul 8. Pesticide i aciunea lor biologic asupra duntorilor n regiunea statului Ohio
gndac Colorado Clasa
Pesticid diazinon (D-Z-N) dimetoat (Cygon) disulfoton (Di-Syston) fonofos (Dyfonate) azinfosmetil (Guthion) fosmet (Imidan)
? ? -
? -
? ? B/S * B/S *
B ? B B
? B ? ? S
afide
Duntor
S B B -
Organofosfai
sfredelit. cereale
viermi tietori
gndac purice
viermi srm
purici frunze
? 61
Lorentz JNTSCHI
Carbamai
malation (Cythion) etoprop (Mocap) metamidofos (Monitor) metil paration (Penncap-M) forat (Thimet) carbofuran (Furadan) metomil (Lannate) carbaril (Sevin) oxamil (Vydate) metoxiclor (Marlate) diclorpropen (Teleone) endosulfan (Thiodan, Phaser) permetrin (Ambrush, Pounce) esfenvalerat (Asana) ciflutrin (Baythorid) imidacloprid (Admire) abamectin (Agri-Mek) pimetrozin(Fulfill) imidacloprid (Provado) piretrine(Pyrenone) spinosad (Spin Tor) bacillus thuringensis caterpillar Strains (DiPel) bacillus thuringensis coleoptera Strains (M-Trak) criolit (Krydocine) azadiractin
B ? ? -
B S B S B B S
NS NS S NS ** S/ NS ** ? NS B/S * B/S * B/S * B/S * B B B ? B S S B -
B B NS B B B B ? ? ? B B B B S -
S B B B ? B B ? S ? S B B B
S B S NS B ? B S S B FB B ? -
B ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
Alte otrvuri nervoase
Piretroizi
Organoclorine
NS ? -
Necunoscut
S -
B B B
S ?
62
(Neem, Azatin) rotenon (Rotenox, Rotacide) Soap (M-Pede)

Pesticid Clasa Tip tratament
ocazional
? ocazional
B anual
B ocazional
? S
anual
? S
Legend: FB: aciune biologic de combatere foarte bun; B: aciune biologic de combatere bun; S: aciune biologic de combatere satisfctoare; NS: aciune biologic de combatere nesatisfctoare; ?: aciune biologic de combatere necunoscut; -: fr aciune biologic de combatere; *: cteva populaii sunt ns rezistente; **: majoritatea populaiilor sunt ns rezistente. n protecia plantelor mpotriva bolilor, duntorilor i buruienilor se practic din ce n ce mai mult administrarea pesticidelor n amestec din urmtoarele motive: pentru a se combate concomitent mai muli parazii, duntori sau specii de buruieni, cnd se lrgete spectrul de aciune biologic al tratamentului; pentru a se combate simultan bolile i/sau duntorii i/sau buruienile; pentru a se proteja cultura i n acelai timp administra ngrminte foliare i/sau regulatori de cretere; pentru a se preveni formarea de rase rezistente la pesticide. Pentru ca dou sau mai multe pesticide s fie aplicate n amestec acestea trebuie s fie compatibile fizic, chimic i biologic, adic: fizic: n amestec nu produc precipitate, aglomerri de particule, spum persistent, separare de faze, depuneri; chimic: nu reacioneaz ntre ele, adic nu pun n libertate compui de degradare ai substanelor active i variaia n timp a pH-ului este nensemnat; biologic: i pstreaz eficacitatea iniial, nu produc efecte secundare (arsuri sau alte fenomene de fitotoxicitate). Tabelul 9. Extras de catalog pentru cteva pesticide
Denumire Formul Cod LMS Toleran Utilizare
Alte denumiri 9CI: (2naphthalenyloxy)acetic acid ISO: (2-naphthyloxy) acetic acid Other: 2-naphthoxyacetic acid BNOA naphthoxyacetic acid, beta
regulator de cretere
revocat, utilizare extern
(2-naphthyloxy) acetic acid
C12H10O3
334
ocazional ocazional
63
Lorentz JNTSCHI
erbicid, reglator de cretere
180.142, utilizare extern
C8H6Cl2O3
9CI: 2,3,6-trichlorobenzoic acid ISO: 2,3,6-TBA Other: trichlorobenzyl chloride metabolite Trade Benzac, Trysben , Zobar 9CI: (2,4,5trichlorophenoxy) acetic acid ISO: 2,4,5-T Trade: Weedone 9CI: (2,4-dichlorophenoxy) acetic acid ISO: 2,4-D Other: 2,4-DB metabolite Trade: Weed B Gon
utilizare extern
C7H3Cl3O2 C8H5Cl3O3
2,3,6-TBA
erbicid
utilizare extern
2,4,5-T
erbicid
2,4-D
De cele mai multe ori pentru a referi un pesticid nu se folosete denumirea tiinific ci cea uzual sau comercial. n acest caz sunt utile cataloagele de pesticide ce cuprind informaii complete despre acestea, aa cum este cazul [83] care conine peste 1022 de pesticide din care am extras cteva pesticide (tabelul 9). Compatibilitatea pesticidelor este prezentat de regul n tabele. Cel mai simplu caz este al amestecurilor binare. Un exemplu de compatibilitate fizic i biologic a unor pesticide (insecticide cu erbicide) n amestec binar experimentate n protecia grului este [84]: Tabelul 10. Exemplu de interaciune ntre insecticide i erbicide Erbicide 2,4-D (sare Icedin Insecticide DMA 50 LS) forte 33 Carbetox 37 CE Sinoratox 35 CE + + Onefon 80 PS + + Clorofos + +
6.9. Biotehnologiile i Agricultura 6.9.1. Concepte specifice Biotehnologiile constau n utilizarea bacteriilor, levurilor i celulelor animale i vegetale de cultur al cror metabolism i capacitate de biosintez sunt orientate ctre fabricarea substanelor specifice. Aplicate pe scar larg, biotehnologiile cuprind activiti industriale n cadrul crora biotehnologiile pot nlocui tehnologiile folosite n mod curent i activitile industriale n care biotehnologiile au un rol promotor esenial. Utilizeaz biotehnologii industria chimic, sinteza substanelor aromatice i de stimulare a gustului, producia maselor plastice i a produselor pentru industria textil. Sunt implementate biotehnologii n domeniul energiei la producia de etanol, metanol, biogaz i hidrogen, n domeniul biometalurgiei la extracia anumitor metale. n industria alimentar regsim biotehnologii la producia masiv de levuri, alge i bacterii n vederea furnizrii proteinelor, aminoacizilor, vitaminelor i utilizarea enzimelor, iar n domeniul creterii productivittii agricole biotehnologii servesc la clonaj i selecie varietal pornind de la culturi de celule i esuturi, fabricarea de bioinsecticide. 64
026
312
319
Industria farmaceutic utilizeaz biotehnologii la prepararea de vaccinuri, sinteza hormonilor, interferonilor i antibioticelor. Nici protecia mediului nu las biotehnologiile n afara domeniului de preocupare. Astfel, ele se aplic la tratarea apelor uzate i transformarea resturilor menajere, compostarea i fabricarea compuilor biodegradabili. n 1953, structura complet a unei proteine, insulina, era stabilit de Sanger, n timp ce Crick i Watson artau c acidul dezoxiribonucleic (ADN) are o structur dublu elicoidal. n 1963, Niremberg a descifrat codul genetic al crui caracter general se aplic de la bacterie pn la om. Deveneau astfel accesibile mesajul ereditar i semnificaia sa, i anume relaia ntre codul genetic i structura proteinelor. O a doua etap a fost parcurs de-a lungul anilor 60 atunci cnd se determina n mod automat structura proteinelor, ca urmare a ameliorrii tehnicilor de analiz ale lui Sanger i a metodelor de degradare ale lui Edman i Begg (1967). Au fost apoi comercializate aparate capabile s determine secvena aminoacizilor proteinelor. n 1978 secvenele (structura primar) a peste 500 de proteine au fost n felul acesta stabilite i stocate pe ordinator sub forma unui atlas de proteine (Dayhoff i Erk, 1978). Dup proteine, a venit rndul acizilor nucleici iar n 1976, Gilbert i Maxam de la Universitatea Harvard i Sanger au pus la punct o metod rapid de analiz chimic a ADN. Se puteau astfel determina secvene de 1000 de nucleotide pe sptmn cu ajutorul unui manipulator (Gilbert, 1981). Au fost deci puse bazele lansrii pe pia, ntre 1982 i 1985 a unei maini automate de analiz a acizilor nucleici i a genelor. Ca urmare a analizei ADN se putea deduce graie codului genetic secvena proteinelor a cror sintez este guvernat de gene. Perfecionrile aduse analizei proteinelor, datorate punerii la punct a microanalizatorului lui Hood i Hunkapiller, de la Institutul de Tehnologie din California, n 1980 permiteau stabilirea secvenei de 100 pn la 200 de aminoacizi pe zi, pornind de la numai 10 ng de proteine. Dup analiz, a treia etap este sinteza. Studiile lui Merrifield (1963) au fcut posibil construirea i comercializarea primelor maini automate pentru sintetizarea polipeptidelor. Acestea sunt utilizate n laboratoarele de cercetare i n industria farmaceutic. Dup ce determinase secvena i structura ARN-ului de transfer (ARNt) al fenilalaninei, Khorana a reuit s sintetizeze ntre 1970 i 1972 ADN-ul (adic gena) corespunztoare acestui ARNt [85]. S-au fcut apoi progrese n sintetizarea genei precursorului ARNt-ului tirozinei de Esterichia coli [86]. Itakura (City of Hope National Medical Center, Duarte, California) a reuit n 1977 i 1979 s sintetizeze genele somatostatinei i insulinei umane. Aceste gene au fost introduse n celulele de Esterichia coli prin tehnici de recombinare genetic puse la punct de Boyer (Genentech). Aceasta reprezint prima expresie a genelor umane n celule bacteriene. n 1980, Itakura pune la punct primul asamblor de gene iar societatea Bio-Logicals din Toronto pune n vnzare o main capabil s sintetizeze n 6 ore un dodecanucleotid cu ordinea dorit a nucleotidelor. Sinteza de acizi nucleici s-a ameliorat rapid. Dac n 1979 era nevoie de 2 ani pentru sintetizarea unei gene de 120 de nucleotide, n 1981 erau suficiente 3 zile. Dayhoff de la National Biomedical Research Foundation din Washington a realizat un atlas al secvenelor de proteine pe ordinator, care n anul 1980 coninea peste 350000 de secvene de gene (virusuri, bacterii, om) preluate din revistele tiinifice internaionale. Progresele spectaculoase ale biologiei aa cum se exprim ele n realizrile ingineriei genetice sunt strns legate de perfecionarea tehnicilor analitice ca ultracentrifugarea, marcarea moleculelor cu izotopi radioactivi, electroforeza, cromatografia de afinitate (de exemplu a tehnicii separrii moleculelor complexe cu ajutorul anticorpilor monoclonali corespunztori), electrofocalizarea bidimensional (ce permite analiza a peste 50000 de proteine a unei celule), microanaliza. S-au obinut succese notabile prin recombinare genetic, folosirea enzimelor, celulelor i organismelor imobilizate.
65
Lorentz JNTSCHI
ADN recombinat sunt molecule de ADN sintetizate n afara celulelor vii prin legarea unor segmente de ADN natural sau sintetic cu molecule care pot s se replice ntr-o celul vie. Principiul const n a reuni un ADN nativ cu un ADN strin ntr-un vector care este un plasmid bacterian sau genom viral i a-l introduce apoi ntr-o celul gazd, unde se va putea nmuli. Rezultatul este un clon de celule transformate. Unul dintre obiectivele bioindustriei este de a avea la dispoziie celule transformate n stare s exprime mesajul genetic strin pe care ele l-au integrat i deci apte s produc molecule proteice specifice n cantitate mare [87]. Pentru descoperirea enzimelor de restricie n 1972 de ctrea Arber, Smith i Nathans se acord Premiul Nobel n 1978, marcnd astfel importana acestora n dezvoltarea biotehnologiilor. Aceste enzime secioneaz acidul dezoxiribonucleic (ADN) n situsuri specifice i ca urmare a caracterizrii ligazelor care leag fragmentele de ADN i transcriptazei inverse care sintetizeaz ADN-ul pornind de la acidul ribonucleic (ARN) mesager. Enzimele sau endonucleazele de restricie precum i ligazele sunt indispensabile operaiei de inserie a uneia sau mai multor gene n ADN-ul vector care la rndul su servete la introducerea acestei gene n genomul unui microorganism: DNA
vector
endonucleaz de restricie
genom microorganism gen

Ilustrarea mecanismului inseriei de gene n microorganisme Tehnica enzimelor imobilizate (vezi fig.) este folosit cu succes n producia penicilinelor semisintetice, a fructozei plecnd de la amidonul de porumb i n testele biochimice simple. Celulele sau organitele celulare imobilizate au avantajul c ele conin secvene complete de enzime indispensabile sintezei compuilor compleci [88]. La controlul genetic sunt implicate toate tipurile de determinani genetici din genotip i toate tipurile de interaciuni aleice i genice [89]. Astfel, sunt implicate gene majore, gene minore i gene citoplasmatice. 6.9.2. Gene i Interaciunile acestora Genele majore (mendeliene) controleaz caracteristici calitative, practic neinfluenate de condiiile de mediul de cretere al plantei. n controlul caracteristicilor calitative, genele majore pot manifesta: aciune monogenic, univoc (monotrop) sau pleiotrop iar relaiile intragenice heterozigote pot fi de: 1. dominan recesivitate; 2. semidominan; 3. codominan; 4. supradominan. interaciuni genice, digenice sau multigenice cnd se formeaz sisteme seriale de gene, independente sau legate i controleaz etapele succesive dintr-o secven metabolic pentru a produce o caracteristic particular; relaiile intergenice pot fi: 1. reciproce: complementaritatea, epistasia, genele duplicate, triplicate; 2. inhibitoare: gene inhibitoare i gene supresori; 3. modificatoare: gene intensificatori (plus modificatori), gene reductori (minus modificatori). Genele minore controleaz caracteristici cantitative: productivitate, reproductibilitate, adaptabilitate (rata creterii, mrimea i greutatea, capacitatea de a produce o anumit cantitate de 66
semine, fructe, mas vegetativ, substane utile, densitatea pigmentaiei. Aciunea genelor minore este mult influenat de condiiile de mediu. Controlul caracteristicilor cantitative este realizat de 2 sau mai multe gene minore nealele care acioneaz n cadrul unor sisteme de gene numite gene multiple. Un sistem de gene multiple acioneaz asupra dezvoltrii unei singure caracteristici ereditare, cnd efectele locilor minori individuali asupra fenotipului pot fi: aditive, cnd efectele asupra fenotipului sunt: 1. echivalente sau egale; 2. isomerice sau polimerice; 3. anisomerice (neechivalente sau neegale); antagonice (opoziionale) cnd unele gene individuale din sistemul de gene multiple au o aciune n opoziie negativ, scztoare comparativ cu alte gene din sistem care au o aciune aditiv; multiplicative cnd aciunile genelor individuale din sistemul de gene se combin intensificndu-i sau diminundu-i reciproc activitatea; Membrii sau locii sistemelor de gene multiple sunt independeni, fiind situai n cromozomi nehomologi. Ca urmare, aceste gene se comport independent n segregare. Dovada independenei genelor minore este fenomenul de segregare transgresiv. Genele citoplasmatice (plasmidele) sunt secvene de ADN din plastide (plastogene) i din mitocondrii (mitogene). Ele controleaz procesele biochimice implicate n realizarea unei ci metabolice din dezvoltarea componentelor morfofiziologice ale produciei sau nsuirilor de adaptare. Aciunea plasmagenelor poate fi: autonom n realizarea funciilor proprii ale organitelor, pe baza aciunii plasmaalelelor [90] i a interaciunii unor plasmagene care concur sau interfer la formarea unei caracteristici citoplasmatice; corelat, n sisteme de gene nucleare i gene citoplasmatice care determin interaciuni nucleo citoplasmatice (genice plasmagenice).
6.9.3 Informaia Genetic Molecula care stocheaz informaia genetic este acidul dezoxiribonucleic (DNA) iar subunitile sunt nucleotidele care l compun [91]. Acestea sunt de 4 tipuri i conin bazele azotate adenin (A), guanin (G), citozin (C) i timin (T) i ntr-o exprimare plastic sunt literele alfabetului cu care este scris informaia genetic:
DNA i informaia genetic Dintre cei 64 de codoni care constituie codul genetic, 61 codific cei 20 de aminoacizi ai moleculelor proteice, iar 3 sunt semnale stop, care marcheaz sfritul unei informaii. Codul genetic este universal, sistemul de codificare a informaiei genetice fiind acelai la toate vieuitoarele. Dar este ns i degenerat, pentru c exist 61 de codoni i numai 20 de aminoacizi, adic mai muli codoni codific acelai aminoacid. DNA este singura molecul autoreplicativ cunoscut. Ea este format din 2 catene (lanuri) polinucleotidice asociate conform principiului complementaritii, secvena nucleotidelor dintr-o caten dictnd secvena nucleotidelor n cealalt caten. Astfel, adenina se leag totdeauna cu timina iar citozina cu guanina. Rezultatul const n formarea a dou molecule noi alctuite fiecare din cte o caten veche (matria) i o alta nou sintetizat. DNA este o molecul informaional, complementaritatea fcnd posibil conservarea, copierea i transmiterea informaiei la celulele fiice rezultate din diviziunea celular. Cnd DNA se replic, cele dou catene ale sale se separ i servesc ca matrie pentru sintetizarea unor catene complementare. Moleculele noi care vor conine aceeai informaie deoarece 67
Lorentz JNTSCHI
succesiunea identic a bazelor (literelor) va forma ntotdeauna aceeai codoni (cuvinte) care vor constitui aceeai gen (propoziie) aa cum se exemplific n figura de mai jos.
Codul genetic al ARNm Legend: Fen fenilamin; Leu leucin; Ser serin;Cis cistein; Tir tirozin; Trp triptifan; Pro prolin; His histidin; Gli glicin; Arg arginin; Ile izoleucin; Met metionin; Trn treonin; Glu glutamin; Liz lizin; Val valin; Ala alanin; Asp acid aspartic; Asn asparagin.
Replicarea codului DNA 6.9.4. Mutageneza rezistenei la erbicide i insecte Principalul obiectiv al agricultorilor este obinerea de producii mari i de calitate, prin valorificarea deplin a potenialului plantelor cultivate i a resurselor pedoclimatice [92]. Aceasta presupune, nu n ultimul rnd eliminarea concurenei buruienilor. n consecin, erbicidarea a 68
devenit o practic curent n agricultura convenional. Tolerana speciilor cultivate la erbicide nu este un caracter nou, marea majoritate a erbicidelor fiind concepute astfel nct s distrug numai anumite plante. Astfel, exist erbicide care se folosesc n culturile de cereale i acestea distrug buruienile dicotiledonate. Alte erbicide sunt aplicate n cultura speciilor cu frunza lat, cnd distrug buruienile monocotiledonate. Cazuri de toleran a unor specii cultivate sau slbatice la erbicide au aprut uneori n mod spontan, sub presiunea tratamentelor, caz n care s-a efectuat o selecie natural. Amelioratorii uneori obin soiuri de plante tolerante la anumite principii active erbicide prin metode care nu implic manipularea genetic. Logic, nu este nici un motiv s se cread c tolerana la erbicide ar avea un impact mai mic asupra mediului dac este aprut n mod spontan sau dac este obinut prin metode de ameliorare dect atunci cnd este rezultatul unor manipulri genetice. Plantele de interes economic tolerante la erbicide sunt aflate deja n culturi comerciale ce se ntind pe milioane de hectare, n diverse ri. n Romnia sunt nregistrate la Institutul de Stat pentru Testare i nregistrarea Soiurilor: soia Round Ready, produs de compania Monsanto; hibrizii de porumb Liberty Link, produi de compania Pioneer. Varieti transgenice de porumb, cartof i bumbac rezistente la atacurile unor duntori ocup deja suprafee foarte mai de teren n culturi comerciale. Rezistena la atacurile insectelor fitofage este obinut prin intermediul unor gene obinute de la Bacillus thrrigensis (Bt) [93]. Construciile genetice sunt mrci nregistrate (). Compania Monsanto comercializeaz porumb Bt sub denumirea YieldGard, cartof Bt sub denumirea NewLeaf i bumbac Bt sub denumirea BollGard, n timp ce compania Pioneer comercializeaz porumb Bt sub denumirea MaisGard iar compania Novartis comercializeaz linii de porumb sub denumirea de KnockOut i YieldGard. Companiile urmresc o valorificare ct mai larg a construciilor genetice pe care le posed prin realizarea de varieti transgenice la ct mai multe specii n cadrul firmelor productoare de semine pe care le controleaz sau prin concesionarea licenelor de utilizare unor tere firme din ct mai multe ri. Principalul avantaj al cultivrii plantelor rezistente la atacul unor duntori const n reducerea consumului de insecticide, benefic pentru calitatea produciei agricole, mediu i conservarea biodiversitii. Absolut specifice endotoxinele Bt nu ar trebui s aib nici un efect asupra polenizatorilor (bondari, albine) sau altor insecte nevizate (prdtori i parazii ai duntorilor) care ajung n culturile plantelor transgenice [94]. Evident ns c acest risc trebuie practic evaluat de la caz la caz [95]. n Romnia sunt nregistrate la ISTIS i au primit aprobarea pentru introducerea deliberat n mediu cartoful NewLeaf, rezistent la atacul gndacului de Colorado i liniile de hibrizi de porumb MaisGard i YieldGard rezistente la sfredelitorul porumbului.
Anexa. Dicionar de Termeni Tehnici Englez Romn

Cuvintele prezentate n aceast seciune au fost folosite pentru a exprima termenii tehnici din engleza american n romn pe parcursul studiului bibliografic care a fcut obiectul prezentei lucrri. Sunt prezentai termenii cu semnificaii variate n dicionarele uzuale i a cror conotaie contextual a fcut atribuirile de fa. De asemenea, o serie de termeni nu sunt prezeni n dicionarele englez romn uzuale i a fost necesar folosirea de surse alternative, cum ar fi baza de date de sinonime a programului Microsoft Word XP7 (Microsoft), motorul de cutare Google8, The American Heritage Dictionary of the Enlish Language: Fourth Edition (2000)9, Translatorul Online WorldLingo (WorldLingo Inc.)10 dicionarul de neologisme al limbii romne i diferite alte surse de termeni tehnici, cum ar fi glosarul de microbiologie ntreinut de firma Dyer Laboratories Inc.11.
7 8
http://www.microsoft.com http://www.google.com 9 http://www.bartleby.com/61 10 http://www.worldlingo.com 11 http://www.dyerlabs.com/glossary/microbiology

69
Lorentz JNTSCHI
Dicionar de termeni tehnici englez (american) romn aphids afide bait ademenitor bare suprateran barley orz beetle gndac bin loader ncrctor blight tiere blossom nflorire broadleaf frunz mare broad-spectrum spectru larg bruising lovirea burlap mase plastice chlorosis nglbenire clots coagulat conveyor transportor cooked copt crop recolt decay mbtrnire dried umed drop oprirea feedback reacie invers fermentor vas de fermentare flamer arztor flea purice frost nghe fumigation ardere greening nverzire handling manipulare harvesting recoltare hilling movilire impeller agitator (mecanic) injury stricciune issue of scale scara la care se practic leafhopper purici de frunze malt mal marsh mal mist pulbere moisture noroios organelles organite pilus perior racking separarea vinului de drojdie (pritocire) ragellum racem reared crescut residual instalare rot putrezire scale-up trecere de la laborator la producie seed smn seedling puiet shout rsrire 70
slime slug spore sprout stain starch strain strain vacuum vine vinegar weed yeast
noroi limax spori vegetaie marker amidon conformaie descendent aspirator tulpin oet buruian drojdie
Referine
[1] Unguresan Mihaela, Delia Dicu, Lorentz Jntschi, Desulfuration of Gases. Chemical Methods, Oradea University Annals, Chemistry Fascicle, 2001, VIII, 19-24, ISSN 1224-7626. [2] Atanasova P., Lopez R., Palacios J., Agudo A., Journal of Catalysis, 328-338, 1999. [3] Manahan S. E., Environmental Chemistry, 327-336, 1992. [4] E. Melndez-Hevia, R. Melndez and E. I. Canela, Glycogen Structure: an Evolutionary View, p. 319326 in Technological and Medical Implications of Metabolic Control Analysis, ed. A. Cornish-Bowden and M. L. Crdenas, Kluwer Academic Publishers, Dordrecht, 2000. [5] Harvey Lodish, Arnold Berk, Lawrence S. Zipursky, Paul Matsudaira, David Baltimore, James Darnell, Molecular Cell Biology (Fourth Edition), W. H. Freeman and Company, New York (USA) and Houndsmills (UK), ISBN 0-7167-3136-3. [6] German C. R., Parson L. M. and Mills R. A., Mid-Ocean Ridges and Hydrothermal Activity, 152-164, in Oceanography, Eds. C. P. Summerhayes and S. A. Thorpe, John Wiley & Sons, New York, 1996. [7] Maksym Nikonorow, Pesticidele n lumina toxicologiei mediului, Praca zbiorowa, Varovia, 1979. [8] Robert D. Hall, Effects of Climate Change on Soils in Glacial Deposits, Wind River Basin, Wyoming, Quaternary Research, Vol. 51, No. 3, p. 248-261, May 1999. [9] H. H. Cramer, Plant protection and world crop production, Pflanzenschutz-Nahr., Berlin, 1, 1, 1967. [10] Barry L. Johnson and Christopher T. De Rosa, Public Health Implications, Environmental Research Section A, 80, S246S248, 1999. [11] Z. A. Rosemond, C. T. De Rosa, W. Cibulas, and H. E. Hicks, Proceedings of the Great Lakes Human Health Effects Research Symposium, Toxicol. Ind. Health, 12(3/4), 814-823, 1996. [12] M. J. DeVito, L. S. Birnbaum, W. H. Farland, and T. A. Gaslewicz, Comparisons of estimated human body burdens of dioxin-like chemicals and TCDD body burdens in experimentally exposed animals, Environ. Health Perspect, 103(9), 820831, 1995. [13] S. L. Schantz, A. M. Sweeney, J. C. Gardiner, Neuropsychological assessment of an aging population of Great Lakes fisheaters, Toxicol. Ind. Health, 12(3/4), 403417, 1996. [14] T. Darvill, E. Lonky, J. Reihman, and P. Stewart, Effect of recency of maternal consumption of Lake Ontario sport fish on neonatal coping behavior and infant temperament, Environ. Res., 81(3), S316-326, 1999. [15] J. A. Dellinger, S. L. Gerstenberger, L. K. Hansen, and L. L. Malek, Ojibwa health study: Assessing the health risks from consuming contaminated Great Lakes fish, Environ. Res., 83(5), S514-S520, 1999.
71
Lorentz JNTSCHI
[16] J. E. Vena, G. M. Buck, P. Kostyniak, The New York Angler Cohort Study: Exposure characterization and reproductive and developmental health, Toxicol. Ind. Health, 12(3/4), 327 334, 1996. [17] M. Gilbertson, Guest commentary. Great Lakes Res. Rev., 1(2), 34, 1995. [18] M. Berry, and F. Bove, Birth weight reduction associated with residence near a hazardous waste landfill, Environ. Health Perspect., 105(8), 856861, 1997. [19] L. A. Croen, G. M. Shaw, L. Sanbonmatsu, S. Selvin, P. A. Buffler, Maternal residential proximity to hazardous waste sites and risk for elected congenital malformations, Epidemiology, 8(4), 347354, 1997. [20] B. L. Johnson, Hazardous waste: Human health effects, J. Clean Tech. Environ. Tox. Occupat. Med., 7, 351375, 1998. [21] J. F. Robens, Teratologic Studies of Carbaryl, Diazinon, Norea, Disulfiram and Thiram in Small Laboratory Animals, Toxicol. Appl. Pharmacol., 15, 152-156, 1970. [22] ***, Report of the secretarys commission on pesticides and their relationship to environmental health, U. S. Dept. of Health Education and Welfare, 1969. [23] G. T. Brooks, T. R. Roberts, Pesticide Chemistry and BioScience: The Food-Environment Challenge, The Royal Society of Chemistry, Cambridge, U.K., 438 p., 1999, ISBN 0-85404-709-3. [24] ***, 1995/1996 HP Environmental Solutions Catalog. [25] Costel Srbu, Lorentz Jntschi, Validarea i Evaluarea Statistic a Metodelor Analitice prin Studii Comparative. I. Validarea Metodelor Analitice folosind Analiza de Regresie, Revista de Chimie, Bucureti, p. 19-24, 49(1), 1998. [26] A. Garrido Frenich, J. L. Martnez Vidal, and M. Martnez Galera, Use of the Cross-Section Technique Linked with Multivariate Calibration Methods To Resolve Complex Pesticide Mixtures, Anal. Chem., 71, p. 4844-4850, 1999. [27] Lorentz Jntschi, Predicia proprietilor fizico-chimice i biologice cu ajutorul descriptorilor matematici, Tez de doctorat, Univ. Babe-Bolyai Cluj-Napoca, 2000. [28] Claudia Cimpoiu, Lorentz Jntschi, Teodor Hodian, A New Method for Mobile Phase Optimization in High-Performance Thin-Layer Chromatography (HPTLC), Journal of Planar Chromatography, 11(May/June), p. 191-194, 1998. [29] Claudia Cimpoiu, Lorentz Jntschi, Teodor Hodian, A New Mathematical Model for the Optimization of the Mobile Phase Composition in HPTLC and the Comparision with Other Models, J. Liq. Chrom. & Rel. Technol., 22(10), p. 1429-1441, 1999. [30] Lorentz Jntschi, Simona Murean, Mircea Diudea, Modeling molar refraction and chromatographic retention by Szeged indices, Studia Universitatis Babe-Bolyai, Chemia, XLV, 12, 313-319, 2000. [31] Diudea Mircea, Gutman Ivan, Jntschi Lorentz, Molecular Topology, Nova Science, Huntington, New York, 332 p., 2001, ISBN 1-56072-957-0, http://www.nexusworld .com/nova/1271.htm. [32] Ivan Gutman, A Formula for the Wiener Number of Trees and Its Extension to Graphs Containing Cycles, Graph Theory Notes of New York, 27, p. 9-15, 1994. [33] Mircea Diudea, Bazil Prv, Mihai Topan, Derived Szeged and Cluj Indices, J. Serb. Chem. Soc., 62, 235-239, 1997. [34] Diudea Mircea (Ed.), QSAR/QSPR Studies by Molecular Descriptors, Nova Science, Huntington, New York, 438 p., 2001. [35] Mircea Diudea, Lorentz Jntschi, Ovidiu Ivanciuc, L. Pejov, D. Plavic, D. Viki-Topi, Topological Substituent Descriptors, Croat. Chem. Acta., submitted, 2001. [36] M. Filizola, G. Rosell, A. Guerrero, J. J. Prez, Conformational Requirements for Inhibition of the Pheromone Catabolism in Spodoptera Littoralis, QSAR, 17(3), 205-210, 1998. [37] E. Lozoya, M. Berges, J. Rodrguez, F. Sanz, M. I. Loza, V. M. Moldes, C. F. Masauer, Comparison of Electrostatic Similarity Approaches Applied to a Series of Kentaserin Analogues with 5-HT2A Antagonistic Activity, QSAR, 17(3), 199-204, 1998.
72
[38] D. A. Winkler, F. R. Burden, Holographic QSAR of Benzodiazepines, QSAR, 17(3), 224-231, 1998. [39] D. A. Wikler, F. R. Burden, A. J. R. Watkins, Atomistic Topological Indices Applied to Benzodiazepines using Various Regression Methods, QSAR, 17(1), 14-19, 1998. [40] Jackson State University, Sixth Conference on Current Trends On Computational Chemistry, Vicksburg, Mississippi, Nov 7-8, 2-178, 1997. [41] J. H. Wikel, E. R. Dow, M. Heathman, Interpretative Neural Networks for QSAR, Network Science, 1996, Jan, http://www.netsci.org/Science/ Combichem/feature02.html. [42] Valery Golender, Boris Vesterman, Erich Vorpagel; APEX-3D Expert System for Drug Design, Network Science, http://www.netsci.org/Science/ Compchem/feature09.html. [43] P. Zbinden, M. Dobler, G. Folkers, A. Vedani, PrGen: Pseudoreceptor Modeling Using Receptor-mediated Ligand Alignment and Pharmacophore Equilibration, QSAR, 17(2), 122-130, 1998. [44] R. D. Cramer III, D. E. Patterson, J. D. Bunce, Comparative Molecular Field Analysis (COMFA). 1. Effect of Shape on Binding of Steroids to Carrier Proteins, J. Am. Chem. Soc., 110(18), 5959-67, 1988. [45] Simon Seamus, CoMFA: A Field of Dreams?, Nova Science, Jan, http://www.netsci.org/Science/Compchem/ feature11.html, 1996. [46] ***, Unity Program for SIMCA (Soft Independent Modeling Class Analogy), Tripos Associates, St. Louis, MO. [47] Alfred Merz, Didier Rognan, Gerd Folkers, 3D QSAR Study of N2-phenylguanines as Inhibitors of Herpes Simplex Virus Thymide Kinase, Antiviral and Antitumor Research, http://www.pharma.ethz.ch /text/research/tk/qsar.html. [48] P. E. Gurba, M. E. Parham, J. R. Voltano, Comparison of QSAR Models Developed for Acute Oral Toxicity (LD50) by Regression and Neural Network Techniques, Conference on Computational Methods in Toxicology April, 1998, Holiday Inn/I-675, Dayton, Ohio, USA, abstract available at http://www.ccl.net /ccl/toxicology/abstracts/abs9.html. [49] ***, HyperChem, Molecular Modelling System, Hypercube Inc. [50] ***, Molconn-Z, http://www.eslc.vabiotech.com/ molconn. [51] C. L. Waller, S. D. Wyrick, H. M. Park, W. E. Kemp, F. T. Smith, Conformational Analysis, Molecular Modeling, and Quantitative Structure-Activity Relationship Studies of Agents for the Inhibition of Astrocytic Chloride Transport, Pharm. Res., 11(1), 47-53, 1994. [52] J. P. Horwitz, I. Massova, T. Wiese, J. Wozniak, T. H. Corbett, J. S. Sebolt-Leopold, D. B. Capps, W. R. Leopold, Comparative Molecular Field Analysis of in Vitro Growth Inhibition of L1210 and HCT-8 Cells by Some Pyrazoloacridines, J. Med. Chem., 36(23), 3511-3516, 1993. [53] G. B. McGaughey, R. E. MewShaw, Molecular Modeling and the Design of Dopamine D2 Partial Agonists, (presented at the Charleston Conference; march; 1998), sumitted may 1998, Network Science, http://www.netsci.org/ Science/Compchem/feature20.html. [54] H. Chuman, M. Karasawa, T. Fujita, A Novel Three-Dimensional QSAR Procedure: Voronoi Field Analysis, QSAR, 17(4), 313-326, 1998. [55] C. L. Walter, G. E. Kellogg, Adding Chemical Information of CoMFA Models with Alternative 3D QSAR Fields, Network Science, http://www.netsci.org/Science/ Compchem/feature10.htm, Jan, 1996. [56] A. Merz, D. Rognan, G. Folkers, 3D QSAR Study of N2-phenylguanines as Inhibitors of Herpes Simplex Virus Thymide Kinase, Antiviral and Antitumoral Research, http://www.pharma.ethz.ch /text/research/tk/qsar.html. [57] G. E. Kellogg, S. F. Semus, D. J. Abraham, HINT: a new method of empirical hydrophobic field calculation for CoMFA, J. Comput.-Aided Mol. Des., 5(6), 545-552, 1991. [58] A. M. Myers, P. S. Charifson, C. E. Owens, N. S. Kula, A. T. McPhail, R. J. Baldessarini, R. G. Booth, S. D. Wyrick, Conformational Analysis, Pharmacophore Identification, and Comparative
73
Lorentz JNTSCHI
Molecular Field Analysis of Ligands for the Neuromodulatory .sigma.3 Receptor, J. Med. Chem., 37(24), 4109-4117, 1994. [59] K. H. Kim, Use of the hydrogen-bond potential function in comparative molecular field analysis (CoMFA): An extension of CoMFA, Quant. Struct. Act. Relat., 12, 232-238, 1993. [60] G. L. Durst, Comparative Molecular Field Analysis (CoMFA) of Herbicidal Protoporphyrinogen Oxidase Inhibitors using Standard Steric and Electrostatic Fields and an Alternative LUMO Field, Quant. Struct. Act. Relat., 17, 419-426, 1998. [61] C.L. Waller, G. R. Marshall, Three-Dimensional Quantitative Structure-Activity Relationship of Angiotensin-Converting Enzyme and Thermolysin Inhibitors. II. A Comparision of CoMFA Models Incorporating Molecular Orbital Fields and Desolvation Free Energy Based on ActiveAnalog and Complementary-Receptor-Field Alignment Rules, J. Med. Chem., 36, 2390-2403, 1993. [62] M. Wiese, I. L. Pajeva, A Comparative Molecular Field Analysis of Propafenone-type Modulators of Cancer Multidrug Resistance, Quant. Struct.-Act. Relat., 17(4), 301-312, 1998. [63] G. Klebe; U. Abraham, On the Prediction of Binding Properties of Drug Molecules by Comparative Molecular Field Analysis, J. Med. Chem., 36(1), 70-80, 1993. [64] K.-H. A. Czaplinski, G. L. Grunewald, A Comparative Molecular Field Analysis Derived Model of Binding of Taxol Analogs to Microtubes, Bioorg. Med. Chem. Lett., 4(18), 2211-2216, 1994. [65] T. Akagi, Exhaustive Conformational Searches for Superimposition and Three-Dimensional Drug Design of Pyrethroids, QSAR, 17(6), 565-570, 1998. [66] C. L. Waller, T. I. Oprea, A. Giolitti, G. R. Marshall; Three-Dimensional QSAR of Human Immunodeficiency Virus. (I) Protease Inhibitors. 1. A determined Alignment Rules, J. Med. Chem., 36(26), 4152-4160, 1993. [67] E. Thompson, The Use of Substructure Search and Relational Databases for Examining the Carcinogenic Potential of Chemicals, Conference on Computational Methods in Toxicology April, 1998, Holiday Inn/I-675, Dayton, Ohio, USA, abstract available at http://www.ccl.net /ccl/toxicology/abstracts/tabs6.html. [68] R. Todeschini, M. Lasagni, E. Marengo, New Molecular Descriptors for 2D and 3D Structures. Theory, J. Chemometrics, 8, 263-272, 1994. [69] R. Todeschini, P. Gramatica, R. Provenzani, E. Marengo, Weighted Holistic Invariant Molecular (WHIM) descriptors. Part2. There Development and Application on Modeling Physicochemical Properties of Polyaromatic Hydrocarbons; Chemometrics and Intelligent Laboratory Systems, 27, 221-229, 1995. [70] R. Todeschini, M. Vighi, R. Provenzani, A. Finizio, P. Gramatica, Modeling and Prediction by Using WHIM Descriptors in QSAR Studies: Toxicity of Heterogeneous Chemicals on Daphnia Magna, Chemosphere, 8; 1527-1533, 1996. [71] A. Zaliani, E. Gancia, MS-WHIM Scores for Amino Acids: A New 3D-Description for Peptide QSAR and QSPR Studies, J. Chem. Inf. Comput. Sci., 39(3), 525-533, 1999. [72] G. Bravi, E. Gancia, P. Mascagni, M. Pegna, R. Todeschini, A. Zaliani, MS-WHIM. New 3D Theoretical Descriptors Derived from Molecular Surface Properties: A Comparative 3D QSAR Study in a Series of Steroids, J. Comput.-Aided Mol. Des., 11, 79-92, 1997. [73] Sonia Nikoli, M. Medi-Sari, J. Matijevi-Sosa, A QSAR Study of 3-(Phtalimidoalkyl)pyrazolyn-5-ones, Croat. Chem. Acta, 66, 151-160, 1993. [74] L. L. Thurstone, Multiple Factor Analysis, Psychological Review, 38, 406-427, 1931. [75] L. L. Thurstone, Multiple Factor Analysis, University Chicago Press, Chicago, 1947. [76] Milan Randi, Search for Optimal Molecular Descriptors, Croat. Chem. Acta, 64, 43-54, 1991. [77] Milan Randi, Resolution of Ambiguities in Structure Property Studies by Use of Orthogonal Descriptors, J. Chem. Inf. Comput. Sci., 31, 311-320, 1991. [78] Lorentz Jntschi, Romeo Chira, Chimia i Biochimia Poluanilor. Lucrri practice, U. T. Pres, 2000, ISBN 973-9471-46-3. 74
[79] Dorina Opris, Mircea Diudea, Peptide Property Modeling by Cluj Indices, SAR/QSAR Environ. Res., 12, 159-179, 2001. [80] Lorentz Jntschi, Gabriel Katona, Diudea Mircea, Modeling Molecular Properties by Cluj Indices, Comun. Math. Comp. Chem., 41, 151-188, 2000, ISSN 0340-6253, Bayreuth, Germany. [81] P.I. Nagy, J. Tokarski, A. J. Hopfinger, Molecular shape and QSAR analysis of a family of substituted dichlorodiphenyl aromatase inhibitors, J. Chem. Inf. Comput. Chem., 1994, 34, 11901197. [82] ***, Date obinute prin amabilitatea Ministerului Agriculturii din Canada, PDF, http source. [83] Bernadette McMahon, Ann Marie Poulsen, John J. Jennings, Jr., Carolyn Makov, Glosary of Pesticide Chemicals, FDA Division of Pesticides and Industrial Chemicals, HFS-337, 200 C Street SW, Washington, U.S.A., PDF http source, Creator: Adobe for Macintosh, Version: October 2001. [84] A. Pucau, M. Baltac, Al. Al. Alexandri, T. Baicu, I. Miric, M. Costache, Compatibilitatea Pesticidelor, Ministerul Agriculturii, Bucureti, 1987. [85] H. G. Khorana, Total synthesis of a gene, Science, Washington, 203, 4381, 614-625, 1979. [86] R. Toule, Les gnes artificiels, La recherch, Paris, 13, 131, 340-347, 1982. [87] J. Abelson, E. Butz, Recombinant DNA, Science, Washington, 209, 4463, 1317-1438, 1980. [88] A. Sasson, Biotehnologiile: sfidare i promisiuni, Ed. Tehnic, Bucureti, 1988, dup Les biotechnologies: Dfis et promosses, Presses Universitaires de France, Vendme, UNESCO, 1983. [89] T. Crciun, Geniul Genetic i Ameliorarea Plantelor, Ed. Ceres, Craiova, 1987. [90] T. Crciun, M. Ptracu, Perspective de utilizare a culturilor de celule i a protoplatilor, Lucrile celui de-al doilea Simpozion de Genetic, Piatra Neam, 1979. [91] V. Diaconu, Plante transgenice, Raport al Comisiei Naionale Pentru Securitate Biologic, Bucureti, 2000. [92] H. G. Baker, The evolution of weeds, Ann. Rev. of Ecol. and System, 5, 1-24, 1974. [93] J. L. Dunwell, Transgenic crops: the next generation, or an example of 2020 vision, Ann. of Bot., 84, 269-277, 1999. [94] J. L. Tynan, M. K. Williams, A. J. Conner, Low frequency of pollen dispersal from a field of transgenic potatoes, J. of Genet. and Breed., 44, 303-306, 1990. [95] P. J. Dale, The release of transgenic plants into agriculture, J. of Agric. Sci., 120, 1-5, 1993.
Editura AcademicDirect
http://ph.academicdirect.ro Colectia Didactica
ISBN 973-86211-8-6
75

Microbiologie, Toxicologie Si Studii Sanitare (2005)

Încărcat de

Informații document

Titlu original

Drepturi de autor

Formate disponibile

Partajați acest document

Partajați sau inserați document

Opțiuni de partajare

Vi se pare util acest document?

Este necorespunzător acest conținut?

Drepturi de autor:

Formate disponibile

Microbiologie, Toxicologie Si Studii Sanitare (2005)

Încărcat de

Drepturi de autor:

Formate disponibile

sursa de energie reziduuri din catabolism energie pentru deplasare catabolism

Editura AcademicDirect 2005

energie pentru cretere

nutrieni pentru cretere

Microbiologie, Toxicologie i Studii Fitosanitare

Microbiologie, Toxicologie i Studii Fitosanitare

Penicillin V (Penicillin phenoxymethyl, Phenoxymethylpenicillin, Phenoxymethylpenicillinic acid

H2N CH3 CH2CH2C6H5 COO

Penicillin G (Benethamine, Benethamine penicillin G, Benetolin)

Penicillin O (Penicillin AT) 6

Penicillin S Potassium (Potassium penicillin S)

Microbiologie, Toxicologie i Studii Fitosanitare

CH3 OH OH H3C O CH3 O CH3 O

CH3 Erythromycin (Erythromycin A, Abomacetin, Eritrocina, Staticin, Stiemycin Torlamicina)

Amoxicillin (Amoxycillin, Amocilline)

Neomycin (Mycifradin, Myacyne, Fradiomycin, Neomin, Neolate, Pimavecort, Vonamycin Powder V)

Microbiologie, Toxicologie i Studii Fitosanitare

Microbiologie, Toxicologie i Studii Fitosanitare

Microbiologie, Toxicologie i Studii Fitosanitare

Era paleozoic i cenozoic

Microbiologie, Toxicologie i Studii Fitosanitare

Microbiologie, Toxicologie i Studii Fitosanitare

Spor Divizare Autoreplicare (cretere)

Comunicarea cu alte celule prin semnale chimice 17

Microbiologie, Toxicologie i Studii Fitosanitare

N H O C CH2 CH2 C O H N N H O C CH H2C

Microbiologie, Toxicologie i Studii Fitosanitare

H OH Celobioza, structura repetitiv n molecula de celuloz

Glicogenina (proteina situat n centrul structurii de glicogen) CH2OH CH2OH

Microbiologie, Toxicologie i Studii Fitosanitare

moderat hidrofil carbohidratul poate fi legat covalent de gruparea sa NH

gruparea liber amino face ca el s fie bazic i hidrofil

puternic bazic i hidrofil

Bazic i hidrofil provoac torsiuni n lan

Microbiologie, Toxicologie i Studii Fitosanitare

absent n cea mai mare parte a proteinelor din plante

foarte mic i amfil, poate exista n orice vecintate

gruparea OH l face moderat hidrofil foarte hidrofob

Microbiologie, Toxicologie i Studii Fitosanitare

membrana citoplasmatic Structura celulei

Microbiologie, Toxicologie i Studii Fitosanitare

energie pentru cretere

nutrieni pentru cretere

Nu se poate lega substratul

Microbiologie, Toxicologie i Studii Fitosanitare

Microbiologie, Toxicologie i Studii Fitosanitare

-Carotene (Provatene, Carotaben, Solatene)

Vitamin C (Ascorbic Acid, Cevitamic Acid, Testascorbic) 33

CH3 H3C H3C CH3 CH3

CH3 Vitamin A (Biosterol, Acon, Afaxin, Apostavit, Atav) O CH3

Vitamin D2 (Calciferol, Ergocalciferol, Radsterin)

NH2COCH2 H3C NH2COCH2CH2 CH3 H NH2COCH2 H

Microbiologie, Toxicologie i Studii Fitosanitare

Celulele i metabolitul sunt produse (aproape) simultan

trofo-: cu semnificaia "(referitor la) nutriie, hrnire" idio-: cu semnificaia "propriu" 35

nclzire cu aburi cma de rcire

rezervor i pomp acid/baz evacuare

ieire ap de rcire intrare ap de rcire pulverizator nclzire cu aburi mediul de cultur

Microbiologie, Toxicologie i Studii Fitosanitare

CH2COOH HOCCOOH CH2COOH

Microbiologie, Toxicologie i Studii Fitosanitare

Microbiologie, Toxicologie i Studii Fitosanitare

Aminoacizi n proteine se leag n succesiuni variate (vezi tabelul 1):

NS NS S NS S/ NS ? NS B/S * B/S * B/S * B/S * B B B ? B S S B -