GRUPAREA BACTERIILOR Dup multiplicarea bacteriilor -cele mai multe se separ complet rezultnd indivizi izolai (celule izolate)

-la unele specii dup diviziune celulele rmn ataate una de alta formnd grupri caracteristice cu mare valoare taxonomic De menionat ns c rareori toate celulele speciei sunt grupate tipic - caracteristic este modul de grupare predominant Modul de grupare a celulelor dup diviziune este n funcie de: -numrul planurilor de diviziune -raportul geometric dintre diferitele planuri succesive de diviziune, -tendina celulelor fiice de a rmne unite
1

MODALITATI DE GRUPARE LA COCI In funcie de dispunerea celulelor fiice dup diviziune cocii prezint urmtoarele 6 tipuri de grupare: -coc simplu sau celul izolat, celulele fiice rezultate din diviziune rmn independente -diplococi la care celulele rezultate rmn grupate cte dou (ex. Diplococcus pneumoniae) -streptococi la care gruparea n lan a celulelor are aspect de irag de mrgele (ex. Str. pyogenes, Str. agalactiae, Str. equi)
2

-tetrada (tetracocul) ca urmare a unor diviziuni perpendiculare unele pe altele rezult formaiuni a cte 4 elemente (ex. Microccocus tetragenes) -sarcina aspect de cub sau pachete de 8-16 elemente, planurile de diviiune sunt orientate n 3 direcii diferite, perpendiculare unul pe altul, al doilea pe primul i al treilea pe primele dou (ex. Sarcina flava, S. aurantica) -stafilococii cu aspect de ciorchine, planurile suucesive de diviziune sunt dispuse n cteva direcii, iar celulele rezultate se aranjeaz n grupri neregulate (ex. Stf. aureus, Str.hycus)

Ipoteze-dup Prevat: -la bacteriile sferice -planuri diferite de diviziune -gruparea s-ar datora unei substane vscoase, gomoase -sintetizat de celula bacterian i dispus >pericelular >difuz pe toat suprafaa celulei, >localizat n anumite regiuni -determinnd tipuri de polarizare a celulelor -radiar simpl la diplococ -diametral simpl la strptococ -biradiar la tetracoc -bidiametral la sarcin -circumferenial la stafilococ
5

Schema modului de grupare la bacteriile sferice n funcie de poziia planurilor de diviziune

MODALITATI DE GRUPARE LA BACILI Bacilii pot s se prezinte sub urmtoarele aspecte: -bacili izolai observat la numeroase bacterii cilindrice sau cocobacilare (ex. E. coli, Salmonella, Proteus) -diplobacili din dou elemente dispuse cap la cap sau V (ex. Moraxella bovis, Listeria monocytogenes, Erysipelothrix) -streptobacili mai multe elemente aezate cap la cap alctuind un lan de lungimi variabile (ex. B. anthracis, Streptobacillus moniliformis) -palisada dat de aezarea celulelor una lng alta n sensul axului lor lung asemntor scndurilor dintr-un gard (ex. Corynebacterium pyogenes)
7

ALTE MODALITATI DE GRUPARE -Gruparea n stea sau n rozet ntlnit la: -actinomicete (ex. Actynomices bovis, Actinobacillus ligniersi) -agrobacterii (ex. Agrobacterium stellatum) Gruparea cu aspect de mrci potale ntlnit la: -bacteriile ptrate formeaz placarde de 8-16 ptrate la care se vd net planurile de diviziune Trihomul forma unui filament multicelular, uniseriat -rezultat din diviziune n care celulele adiacente sunt meninute ntr-un nveli parietal comun, -se ntlnete la bacterii care triesc n ape sulfuroase, nmoloase, ape poluate, orneti (ex. Leucothrix, Beggiatoa).
9

Modaliti de grupare la bacterii: 1,2,3-diplococi; 10-streptobacili; 4-streptococi; 11-gruparea n palisad; 5-tetrad; 12-gruparea n litere chinezeti; 6-sarcina; 13-filament; 7-stafilococi; 14-ramificaii; 8-diplobacili; 15-gruparea cu aspect de mrci potale; 9-diplobacili in forma literei V; 16-trihomul. 10

In general ntre modul de grupare al bacteriilor i caracterele de cretere pe mediile de cultur exist o relaie evident. - Aceast corelaie este redat n tabelul de mai jos.
Modul de grupare al Caracterul de cretere n Aspectul coloniilor pe bacteriilor medii lichide (bulion medii solide (agar nutritiv) nclinat sau n plci)

Celule izolate

Tulbur uniform datorit Colonii circulare repartizrii egale n coloana suprafa neted de mediu lucioas

cu i

Bacterii grupate n Constituie un depozit Colonii cu margini lanuri i formele granular sau floconos ca neregulate, suprafa filamentoase urmare a sedimentrii rugoas i mat lanurilor
11

DENSITATEA BACTERIILOR Densitatea bacteriilor este -n general peste 1 -rareori sub 1 Un coninut crescut n lipide -scade densitatea bacteriilor Un coninut mare de proteine i sruri -crete densitatea bacteriilor Acest caracter constituie o particularitate de specie. Exist o relaie evident ntre densitatea bacteriilor i necesitile lor de oxigen.
12

Caracterul considerat

Particulariti existente n raport densitatea Densitatea peste 1 Densitatea sub 1

cu

Dezvoltarea n medii Cresc n toat masa i lichide tulbur uniform bulionul Tipul respirator Sunt aerobe i facultativ anaerobe Constituieni lipidici n cantitate redus

Cresc la suprafa formnd membran sau pelicul Sunt obligatoriu aerobe sau dependente de oxigen n cantitate mare

13

STRUCTURA CELULEI BACTERIENE Definirea constituienilor structurali a fost posibil datorit perfecionrii tehnicilor de studiu: -tehnici citochimice -microscopie electronic Lund ca reper peretele celular -constituienii celulei bacteriene pot fi grupai n 2 mari categorii:
PERETELE CELULAR

Constituieni intraparietali: -membrana citoplasmatic -citoplasma -nucleoidul i plasmidele -mezozomii -ribozomii -incluziile -vacuolele

Constituieni extraparietali: -capsula -stratul mucos -glicocalixul -spinii -flagelii (cilii) -fimbriile (pilii)
14

Structura ipotetic a unei celule bacteriene cu componentele ei (adaptat dup http://www.ablog.ro/img)

15

PERETELE CELULAR (P.C) Celula bacterian este delimitat de un perete celular -bine definit structural, -cu consistena rigid, Existena peretelui celular a fost bnuit de Conn nc din 1872. Evidenierea lui este posibil prin: -colorare selectiv -prin examinare la microscopul electronic La celulele tinere care au citoplasma bogat, compact i omogen, peretele celular ader intim la coninutul celular. La celulele btrne sau n curs de liz peretele celular devine evident, fiind deprtat de citoplasm.
16

Peretele celular poate fi apreciat i prin metode selective de studiu: direct -prin izolarea lui ca structur intact complet, -fie prin modificarea raporturilor sale cu citoplasma -se poate obine pe calea dezintegrrii celulare >prin ultrasonare >agitare cu perle de sticl >evidenierea cu ajutorul tehnicii de microdisecie >prin provocarea unui oc osmotic sau a autolizei celulare indirect -prin degradarea lui pe cale enzimatic sub aciunea lizozimului, enzim care atac mucopolizaharidele din structura peretelui -prin cultivarea bacteriilor n medii cu diferite adaosuri (ex. 17 penicilin n doze subinhibitoare)

Examinat la microscopul electronic -are aspect de sac gol -care conserv forma bacteriei din care provine Structural, peretele celular are o constituie - asemntoare ochiurilor unei plase, -cu tram regulat -apare ca fiind format din fascicole de fibre paralele, -cu dispunere n planuri diferite care se ncrucieaz. Grosimea peretelui celular este variabil -fiind n general cuprins ntre 10-35 nm putnd s ajung la 80 nm, -reprezint cam 30% din ntreaga celula bacterian, -este n general mai subire la celulele tinere care cresc rapid.
18

Sunt propuse 4 diviziuni n cadrul regnului Procaryotae n funcie de prezena i particularitile de structur:
1. Firmicutes (firmus- tare, cutis piele) -care au pertete celular gros, rigid, lipsit de membran extern -intr bacteriile Gram pozitive 2. Gracilicutes (gracilis subire) -au perete celular n mod obinuit subire avnd n structura sa membrana extern, -intr bacteriile Gram negative 3. Mollicutes (mollis moale, delicat) -sunt lipsite de perete celular uniform, -grupeaz o categorie aparte de bacterii 4. Mendosicutes sunt ncadrate microorganismele din clasa Archaebacteria, - prezint perete celular de consisten i compoziie divers, din care lipsete peptidoglicanul.
19

Cromozomul Pilii (fimbriile) Ribozomii

Incluziile Cil (flagel) Capsula Plasmid Citoplasma Membrana celulara Peretele celular
20

In funcie de structur i de compoziia chimic -peretele celular bacterian se coloreaz difereniat, -se clasific din acest punct de vedere n 3 grupe principale Gram pozitive Gram negative Acidorezistente
CONSTITUIENTUL COMUN AL PERETELUI CELULAR LA TOATE TIPURILE DE BACTERII ESTE PEPTIDOGLICANUL SAU MUREINA

Exist ns diferene privind -cantitatea, -aranjamentul structural al proteinelor, polizaharidelor i lipidelor. Pe seciuni ultrafine n structura sa se identific -un strat bazal (comun la toate categoriile de bacterii) -stratul structurilor specifice

21

PERETELE CELULAR LA BACTERIILE GRAM POZITIVE La microscopul electronic apare ca un strat unic relativ omogen. Componentul major este peptidoglicanul (89-90% din greutatea uscat) -apare foarte net dup colorare cu sruri ale metalelor grele i poate fi degradat dup tratare cu lizozim. Peretele celular al bacteriilor Gram pozitive mai conine: -proteine i polizaharide care includ >acizi teicoici, acizi teichuronici, >acizi neteichoici i polizaharide neutre.

22

Structura peretelui la bacteriile Gram pozitive (adaptat dup Kayser, 2005)

23

Pepetidoglicanul (murein, glicopeptid, mucopeptid, mucocomplex) -este un heteropolimer compus dintr-o poriune glicanica i o component peptidic. Poriunea glicanic foarte uniform -are structura unor lanuri lineare, -formate din resturile alternante a dou N-acetilhexozamine: -N-acetil glucozamina i acidul N-acetil muramic -legate ntre ele prin legturi glicozidice. Componenta peptidic conine ca unitate de construcie -un tetrapeptid, -unitile tetrapeptidice sunt la rndul lor legate prin intermediul unor puni interpeptidice -ntre compuii chimici ce intr n structur, -unii care sunt ntlnii numai la bacterii (ex. acidul muramic, D-alanina, acidul D-glutamic i acidul pimelic). 24

1. N-acetil glucozamina (NAG) 2. Acidul N-acetil muramic 3. Tetrapeptid 4. Pentaglicina

25

Sacul peptodoglicanic este n esen -o molecul unic, gigant i rigid -care formeaz n jurul prtoplastului bacterian o reea ca o plas rigid cu ochiuri mici -are o structur de reea tridimensional deoarece legturile ncruciate se fac n dou planuri ale spaiului. Peptidoglicanul poate fi atacat (descompus) de : >lizozim -atac specific legturile glicozidice dintre acidul muramic i resturile glicozaminil >penicilin -inhib treapta terminal n biosinteza mureinei.

26

Peptidoglicanul (reteaua sub forma de plasa rigida)

Fosfolipide Proteine Lipoproteine

27

Acizii teichoici (teichos=zid, perte) -sunt molecule polimere lungi i flexibile, -formate din ribitolfosfat i glicerol-fosfat -localizate exclusiv n peretele celular, membrana plasmatic i structurile capsulare ale bacteriilor -sunt prezeni numai la bacteriile Gram pozitive -confer bacteriilor Gram pozitive o serie de prorieti importante -au rol esenial n mennerea unei concentraii de ioni metalici (Mg2+) -au rol arhitectural contribuind la meninerea structurii tridimensionale a peptidoglicanului -joac rol important n patogenitatea unor bacterii contribuind la inhibarea fagocitozei (acizii teichoici + acizii teichuronici) -acizii lipoteicoici acioneaz ca receptori de fag i de colicine
28

Proteine asociate cu peretele celular

Acizi teicoici

Acizi lipoteicoici

Peptidoglican

Membrana citoplasmatica

Structura peretelui la bacteriile Gram pozitive

29

PERETELE CELULAR LA BACTERIILE GRAM NEGATIVE -este mai subire -are o structur mai complex -este distinct stratificat

De la exterior spre interior este alctuit din urmtoarele componente: -membrana extern -stratul de peptidoglican -spaiul periplasmatic

30

1. Membrana extern reprezint stratul exterior. -pe seciune apare triplu stratificat -chimic este alctuit din: -fosfolipide; -proteine; -lipopolizaharide. -sunt componente termostabile, -poate fi izolat i purificat cu uurin, -lipopolizaharidul are proprieti antigenice i activitate endotoxic. 2. Stratul de peptidoglican -este electronodens, -are grosimede 1,5-3 nm, -poate fi ndeprtat prin tratare cu lizozim, -se leag de membrana extern prin intermediul unor molecule globulare de lipoprotein

31

 Are o compoziie chimic asemntoare la toate bacteriile Gram negative. Conine acid N-acetil muramic, N-acetil glucozamin, diaminopimelat, alanin i acid glutamic (glutamat)

3.Spaiul periplasmic -pe seciuni fine apare ca o zon cu densitate electronooptic redus, -cu o lrgime variabil depinznd de -starea fiziologic a celulei -condiiile de cultivare >constituie sediul de depozitare a unui numr mare de enzime i pigmeni.
32

Structura peretelui la bacteriile Gram negative (adaptat dup Kayser, 2005)

33

PERETELE CELULAR LA BACTERII ACIDOACIDOREZISTENTE Micobacteriile au un coninut ridicat n lipide -reprezentnd 20-45% din greutatea uscat a celulei -aflate predominat n peretele celulei microbiene (cca. 60%), -coninutul n lipide este direct proporional cu: -gradul de patogenitate al micobacteriilor -fiind cel mai ridicat la M. leprae, M. tuberculosis, M. bovis; -cel mai sczut la micobacteriile cu cretere rapid (M. phley). Lipidele micobacteriene explic -proprietile tinctoriale (acido-alcoolo-rezisten) -rezistena n mediul exterior.
34

Cele mai importante componente lipidice: 1. Fosfolipidele (cardiolipina) sunt localizate n membrana celular 2. Acizii micolinici -sunt structuri sub forma unei reele insolubile -care nconjoar bacteria, -reea la care contribuie i ali compui macromoleculari nelipidici -n ochiurile reelei se afl lipide libere i glicolipide 3. Micozidele sunt glicolipide i peptido-glico-lipide, din micozide face parte i dimiocolatul de trehaloz numit i factorul cord care se afl n raport direct cu gradul de virulen al unei tulpini 4. Ceara D care este de fapt o peptido-glico-lipid -se afl ntr-o concentraie mai ridicat la M. tuberculosis, -are aciune adjuvant
35

Structura peretelui la bacteriile acido-rezistente (adaptat dup Kayser, 2005)

36

ROLUL PERETELUI CELULAR 1. Reprezint sistemul de susinere mecanic al ntregii arhitecturi celulare 2. Datorit rigiditii sale determin forma caracteristic a celulelor 3. Particip la procesul de cretere i diviziune urmnd membrana citoplasmatic n formarea septurilor de diviziune
Celula in diviziune

Celule fice

4. Asigur protecia fa de ocul osmotic, presiunea osmotic intern este de aproximativ 5-6 atm la E. coli, 20-30 atm. la Stf. aureus fr prezena peretelui celular, membrana plasmatic nu ar rezista acestei presiuni 37

5. Unii constituenti ai peretelui celular au rol de receptori pentru bacteriofagi 6. Acioneaz ca o sit molecular asigurnd -trecerea substanelor nutritive -mpiedicnd n acelai timp -ptrunderea unor substane nocive -sau pierderea unor metabolii necesari 7. Membrana extern la bacteriile Gram negative reine -n spaiul periplasmatic enzimele, -o larg varietate de molecule nutritive 8. Lipopolizaharidele membranei externe poart -un mare numr de determinani antigenici, -confer complexitatea i specificitatea antigenic a antigenelor somatice bacteriene, -ele fixeaz anticorpii i elementele sistemului complement
38

Chestionar 2 1. Cocii pot sa se grupeze: a) Sub forma de tetrada? b) Sub forma de palisada? c) Sub forma de litere chinezesti? 2. Constituientii intraparietali la bacterii sunt: a) Cilii? b) Ribozomii? c) Pilii? 3. Constituientul comun al peretelui celular la toate bacteriile este: a) Acidul teicoic? b) Peptidoglicanul? c) Ceara D? 4. Rolul peretelui celular este : a) De susinere mecanic a ntregii arhitecturi celulare? b) De deplasare in medii lichide? c) De transmitere a informatiei genetice?

39