CONSTITUIENTII EXTRAPARIETALI

Din acestea fac parte o serie de formaiuni -care se constituie la exteriorul peretelui celular Unele formatiunii -sunt prezente la toate bacteriile -altele sunt prezente numai la anumite bacterii CAPSULA SI STRATUL MUCOS -este o formaiune prezent numai la anumite bacterii -constituit dintr-un material macromolecular, cu caracter vscos gelatinos
1

CAPSULA SI STRATUL MUCOS

In funcie de consistena i capacitatea de includere a unor particule fine, poate fi: Capsula rigid -capsula compact care nu include particule fine ca tuul de China Capsula flexibil, mucoid, deformabil, capabil s includ astfel de particule In funcie de grosime i raporturile sale cu celula bacterian: Microcapsula -cu o grosime de sub 0,2 m -un strat foarte fin n jurul celulei bacteriene -se poate decela prin metode imunologice, nu prin cele microscopie
2

CAPSULA SI STRATUL MUCOS

Macrocapsula sau capsula propriu-zis -o formaiune morfologic distinct -care nvelete de jur mprejur fiecare celul sau pereche de celule -are o grosime mai mare de 0,2 m -se poate evidenia prin diferite tehnici de colorare devenind vizibil la MO Stratul mucos -apare ca o mas amorf neorganizat -componentele vscoase se dispun fr o anumit ordine n jurul celulei bacteriene -difuzeaz n mediu imprimnd mediilor un anumit grad de vscozitate Zoogleea sau masa zoogleic -n care stratul mucos include mai multe celule -alctuiete adevrate colonii mucilaginoase
3

CAPSULA SI STRATUL MUCOS

a. b. c. d.

Microcapsula Capsula propriu-zisa Substanta mucoasa capsulara Zooglee

CAPSULA SI STRATUL MUCOS

Microcapsula: evidentiere la ME

CAPSULA SI STRATUL MUCOS

Substanta mucoasa capsulara

CAPSULA SI STRATUL MUCOS

Aspectul substantei capsulare la ME

7

CAPSULA SI STRATUL MUCOS

Din punct de vedere chimic capsula este constituit din: -ap n proportie de 99% -iar restul de substane de alt natur -ex. polizaharide la pneumococi -polipeptide la B. anthracis (polimeri de acid D-glutamic) -un amestec de polizaharide i polipeptide la B.megaterium Evidenierea capsulei se poate realiza prin: -tehnici de colorare -coloraia Giemsa -coloraia indirect cu tu de China -metode imunologice cum ar fi gonflarea capsulei

CAPSULA SI STRATUL MUCOS

Bacillus anthracis evidentierea capsulei prin coloratia Giemsa

CAPSULA SI STRATUL MUCOS

Bacillus anthracis evidentierea capsulei prin coloratia negativa cu tus de China

10

CAPSULA SI STRATUL MUCOS

Modificri induse de capsul pe medii de cultur -pe medii lichide prezena stratului mucos i a capsulei -imprima culturilor un caracter vscos, siropos -datorit difuzrii n mediu a unora din substanele capsulare -coloniile -au un asptect umed, lucios -mucoid, consistena mucoas Rolul capsulei capsula nu este o structur esenial cele mai multe bacterii capsulogene nu capsuleaz ntotdeauna in vitro pe medii obinuite pot s capsuleze dac mediilor li se adaug snge, ser, lichid ascitic
11

CAPSULA SI STRATUL MUCOS

Aspectul mucos la coloniile bacteriilor capsulogene

12

CAPSULA SI STRATUL MUCOS

ele capsuleaz ntotdeauna cnd ajung n organism in vivo joaca un rol esenial n supravieuirea bacteriilor

anihileaz factorii umorali i celulari de rezisten ai organismului -fie direct mpiedicnd adeziunea la suprafaa leucocitului -fie negativ prin efect chemotactic negativ la suprafaa leucocitului Datorit acestui fapt, bacteriile patogene se pot multiplica nestingherit, sunt capabile s produc starea de boal. uneori, compoziia chimic a capsulei este corelat cu specificitatea antigenic permitand diferenierea lor serologic n scop de diagnostic.
13

CAPSULA SI STRATUL MUCOS

exist corelaie ntre capsulogenez i eficacitatea terapeutic a antibioticelor -bacteria capsulat prezint la exterior alte structuri de adezivitate, antigenitate, susceptibilitate la antibiotice este important s fie cunoscut dac o bacterie este acapsulogen sau capsulogen pentru: -mecanismul patogenetic, -pentru diagnostic, imunitate i terapie

14

CILII SAU FLAGELII sunt: -structuri filamentoase -flexibile, fragile -subiri 0,01 0,02 m -cu lungime variabil ce pot ajungfe pn la 80 m Numrul i dispoziia cililor pe suprafaa bacteriei sunt caractere de specie reglate genetic In funcie de aceste caractere, bacteriile se clasific astfel: -bacterii atriche lipsite de cili -bacterii monotriche au un singur cil polar -bacterii amfitriche au cte un cil la fiecare pol -bacterii lophotriche au un smoc de cili la unul sau ambele capete -bacterii peritriche - au cilii dispui pe toat suprafaa 15 celulei

CILII SAU FLAGELII

1. Bacterie atriche 2. Bacterii monotriche 3. Bacterii amfitriche 4. Bacterii lophotriche 5. Bacterii peritriche

16

CILII SAU FLAGELII

La microscopul electronic cili sunt alctuii din 3 componente morfologic distincte 1. Corpusculul bazal se ataeaz la corpul celulei bacteriene Corpusculul este format din discuri: -2 discuri la Gram+ -4 discuri la Gram dispuse paralel notate M, S, P, L -n acord cu presupusa lor ataare de unul din componentele peretelui celular: M: membrana citoplasmatic S: spaiul periplasmatic supramembranos P: strat de peptidoglican L: stratul lipozaharidic din membrana extern
17

CILII SAU FLAGELII

2. Crligul este situat n afara corpului celulei bacteriene -are o form mai mult sau mai puin ndoit -structural este format din subuniti proteice de 30-40 dispuse ntr-un aranjament helical 3. Filamentul flagelar principal reprezint - partea flexibil care se leag de captul distal al crligului -n mediile lichide este bine dezvoltat -depind de cteva ori lungimea corpului bacteriei -de regul sunt rsucii -este destul de fragil i se rupe cu uurin

18

CILII SAU FLAGELII

1. Corpusculul bazal 7. Crligul 8. Filamentul

2. Discul M (membrana citoplasmatic-9) 3. Discul S (spaiul periplasmatic) 4. Discul P (strat de peptidoglican-10) 5. Discul L (stratul lipozaharidic-11) 6. Axul de transmisie
19

CILII SAU FLAGELII

Evidenierea cililor se poate face prin tehnici directe -ME -MO prin tehnici speciale de colorare -de mordansare cu azotat de argint cu scopul de a le mri grosimea n mod indirect -prezena cililor se deduce examinnd mobilitatea bacteriilor
Imobil Mobil

20

CILII SAU FLAGELII

Din punct de vedere chimic -toate componentele cililor sunt de natur proteic -cu importante proprieti antigenice alctuind aa antigene flagelare notate cu H numite i flageline numitele

21

Bacterii ciliate monotrich si peritrich

22

CILII SAU FLAGELII

Rolul cililor Cilii bacterieni au rol de organite locomotoare -acestea realizndu-se printr-o micare de rotaie a filamentului flagelar -este asemntoare unei nurubri n mediu -motorul rotaiei cililor este reprezentat de corpusculul bazal, iar energia necesar este furnizat de ATP -la bacteriile peritriche, rotaia se poate face: -sens orar (n sensul acelor de ceasornic) asigurnd rostogolirea i schimbarea de sens -antiorar, cnd se asigur deplasarea n linie dreapt -in cazul bacteriilor monotriche -deplasrile n linie dreapt sunt ntretiate de scurte micri de recul
23

CILII SAU FLAGELII

Cilii pot fi separai de bacterii -izolai obinnd antigenele flagelare -au aplicaii practice cu importan deosebit n identificarea serologic a bacteriilor

24

PILII SI FIMBRIILE -sunt apendici filamentoi -neflagelari -prezeni n numr mare pe suprafaa multor bacterii descrii -mai mult la bacterii Gram negative: E. coli, Pseudomonas, Neisseria, -mai rar la Gram pozitive: Corynebacterium renale, Strep. sanguis, Str. Salivaris) originea lor este la nivelul membranei citoplasmatice, dar spre deosebire de cili nu posed un corpuscul bazal

25

PILII SI FIMBRIILE

Pilii sunt prea subiri pentru a putea fi observai direct la microscoapele optice -pot fi vzui la microscopul electronic -au o structur mai rigid comparativ cu cilii -sunt drepi -mult mai scuri i mai numeroi -au o dispunere peritriche -dimensiunile pililor sunt variabile de la 0,2 la 20 m

26

PILII SI FIMBRIILE

In funcie de: -unele caractere morfologice, de numrul i de funcia biologic pe care o ndeplinesc se deosebesc dou tipuri de pili: -comuni (notati I, II, III, IV) -factori de fertilitate (F) -exist tendina de a departaja din punct de vedere semantic termenii fimbrii tipurile I-IV pilii F pilii de conjugare F ( de sex) -se afl n numr de 1-10 pe suprafaa celulei bacteriene -sunt codificai de plamside transmisibile -sunt implicai n conjugarea bacteriilor -ei reprezint calea efectiv de transfer a informaiei n conjugare -funcioneaz n acelai timp i ca receptori specific de fag
27

PILII SI FIMBRIILE

fimbriile (pilii comuni) -sunt n numr mare ajungnd la ordinul sutelor -sunt determinai de gene cromozomiale -au rol ndeosebi n aderarea bacteriilor la suprafaa celulelor Din punct de vedere chimic pilii/fimbriile -au o structur proteic Fimbrile sunt constituii din molecule de fimbrilin -cu masa moleculr de 16 000 daltoni -cu aranjare helicoidal delimitnd la interior o formaiune tubular Pilii sexuali F sunt alctuii dintr-o: -fosfoglicoprotein numit pilina -cu masa molecular de 118 000 dal Natura proteic a pililor i fimbriilor le confer proprieti antigenice -diferite de cele flagelate -pilii dac sunt ndeprtai mecanic, ei se refac cu uurin
28

PILII SI FIMBRIILE

Aspectul fimbriilor la ME
29

PILII SI FIMBRIILE

Aspectul fimbriilor la ME - aderenta la substraturi

Aspectul fimbriilor la ME - fenomenul de conjugare

30

FUNCTIILE FIMBRIILOR Att pilii de conjugare, ct i fimbriile comune conin receptori pentru bacteriofagi Pilii de conjugare acioneaz -ca nite crlige retractile care aduc n contact bacteriile ce se conjug (donatoare i receptoare) Fimbriile mediaz -aderena bacteriilor la suprafaa celulelor epiteliale favoriznd colonizarea -pot fi luai n considerare ca factori poteniali de virulen -la E. coli s-a constatat c antigenele de natur fimbriar K88 i K89 la gonococi (Neisseria gonoreae) germenii sunt capabili s-i modifice natura pililor i antigenitatea n funcie de mecanismul defensiv al gazdei
31

-la unele bacterii, fimbriile manifest o oarecare specificitate de esut - ex. tulpina de Str.pyogenes ader de esutul faringian, nu ns de celulele intestinale -pilii de la E. coli ader mai pregnant de epiteliul intestinal i cel urinar Pilii se pare c intervin i n rezistena bacteriilor la fagocitoz Pilii se ntreptrund unii cu alii -ducnd la formarea unor pelicule la suprafaa mediilor lichide -favoriznd n natur creterea bacteriilor saprofite au activitate aglutinant n contact cu globulele roii de la anumite specii de animale -tulpinile de E. coli se mpart n mai multe grupe datorit proprietilor antigenice, se poate face caracterizarea RSAR
32

SPINII Spinii sau spiculele bacteriene, apendici pericelulari -rigizi, tubulari -prezeni la anumite bacterii Gram negative. -numrul lor este variabil de la 1 la 15/celul distribuii aparent la ntmplare la microscopul electronic n preparate metalizate apar: -de form dreapt -perpendiculari pe suprafaa bacteriilor -alctuii dintr-un filament cu o structur tubular cu diametrul de 65 nm i o lungime de 1-3 m sunt legai de suprafaa membranei externe a peretelui celular, -au aspect conic la locul de legare se disociaz n subuniti de natur proteic care au o compoziie chimic formata din aminoacizi semnificaia biologic a spinilor nu se cunoate
33

GLICOCALIXUL Alctuit dintr-o mas de filamente polizaharidice -ataate de lipopolizaharidele de pe suprafaa celulelor -formnd n ansamblu o structur ca o psl pe suprafaa celulei Asigur fixarea ferm a acesteia de alte celule sau suporturi neanimate Glicocalixul este absent n culturile pure de laborator Se formeaz numai la celulele aflate n condiii naturale Formarea glicocalixului a fost studiat la Str. mutans -bacterie implicat n geneza cariilor dentare -sub aciunea unor enzime, glucoza se polimerizeaz sub forma unui lan lung de glucan insolubil n ap -glucanul format ader la smalul dentar, prinzndu-se n aceast reea mai multe bacterii formnd un depozit glbui (placa dentar) la nivelul creia are loc iniierea cariei
34

GLICOCALIXUL

35

Semnificaia biologic la acest nivel se creeaz zone n care acioneaz enzimele i toxinele bacteriene provocnd liza peretelui celular prezena glicocalixului confer proprieti cum ar fi: -meninere n mediile naturale -rezisten mrit la ndeprtare sub aciunea cauzelor mecanice -n concurena cu bacteriile antagonice -atacul bacteriofagilor -mpiedic fagocitoza -la aciunea anticorpilor protectori din organismul infectat

36

PROTOPLASTII SI SFEROPLASTII

Protoplatii -ansamblul structurilor celulare rmase dintr-o bacterie Gram pozitiv sub aciunea lizozimului sau penicilinei -are form sferic i o sensibilitate crescut fa de factorii de mediu Sferoplatii -sunt structuri similare cu protoplastii obinute din bacterii Gram negative -pstreaz unele resturi ale peretelui celular ndeosebi componente lipidice (difer de protoplati)

37

Formarea protoplastilor

38

Tratament chimic Peptidoglican Mb. celulara Gram pozitive Protoplast Pierderea peptidoglicanului Mb. celulara

Mb. externa Mb. externa Peptidoglican Mb. celulara Gram negative Sferoplast Pierderea peptidoglicanului Mb. interna

Formarea protoplastilor si a sferoplastilor

39

ambele formaiuni se menin -n medii izotonice ca formaiuni aproape sferice -pstreaz n general proprietile vitale ale celulei din care provin ei au viabilitate n culturi -chiar capacitate de diviziune i formarea de colonii (Gram-) -protoplastul nu mai este capabil s-i refac peretele celular -asigura multiplicarea fagului al crui acid nuceic se gsea deja n celul n momentul ndeprtrii peretelui celular. -funcia de barier osmotic asigurat de membrana citoplasmatic este mult mai labil

40

FORMELE

L LA BACTERII

Denumirea vine de la Institutut Lister i au fost descrise n 1935 de Klieneberger-Nobel la Streptobacillus moniliformis. Ulterior, au fost descrise i la alte bacterii att Gram negative, ct i Gram pozitive aerobe i anaerobe. Formele L prezint urmtoarele caractere: -absena peretelui celular sensibilitate pronunat la variaiile de presiune osmotic; -au exigene nutritive speciale; -se dezvolt foarte ncet; -nu se coloreaz cu coloranii obinuii; -sunt rezistente la antibiotice, mai ales penicilin; -n cazul cnd deriv din bacterii patogene au n general o patogenitate redus;
41

1. Forme L stabile de tip A -care nu se ntorc niciodat la forma bacterian tipic, -ii datoresc aceast particularitate unei modificri biochimice a peretelui celular 2. Forme L de tip B -care pstreaz elemente ale peretelui celular pe care l pot sintetiza din nou, imediat dup ndeprtarea agentului inductor 3. Forme L de tip C -care pstreaz elemente ale peretelui celular, -pierd progresiv capacitatea de revenire la normal Formele L se pare c au un rol patogenetic n unele infecii cronice. Tratamentele se vor institui cu antibiotice ce acioneaz asupra elementelor din citoplasm sau asupra acidului nucleic, nu cu antibiotice ce acioneaz asupra peretelui celular, acestea fiind total ineficiente. 42

SPORUL BACTERIAN Reprezint o form primitiv de difereniere celular const n formarea n celula vegetativ -a unui nou tip de celul, -difereniat structural, chimic i enzimatic de celula formatoare Sporul tipic bacterian numit i ENDOSPOR este o formaiune sferic sau ovalar refringent cu dimensiuni variabile dup specie, dimensiuni medii de 0,5/0,9-1/1,5 m -iar n cadrul aceleai specii, n funcie de vrsta culturii i de condiiile de mediu Este n marea majoritatea a cazurilor unic ntr-o bacterie Excepional, s-au descris cu 2 sau chiar mai muli spori Sporuleaz mai frecvent bacteriile Gram pozitive (gen Bacillus i Clostridium) 43

Formarea sporului poart denumirea de sporogenez este un proces morfogenetic secvenial programat, controlat de cca. 50 de gene dispersate n structura cromozomului. Reglarea sporulrii la bacterii este negativ Celula vegetativ fabric un inhibitor sau represor al sporulrii -utiliznd un ingredient din mediu care mpiedic iniierea sporulrii; -cnd acest ingredient este epuizat, represia nceteaz i celula ncepe s sporuleze; Procesul se realizeaz la sfritul creterii exponeniale -cnd nivelul cataboliilor intracelulari este alterat; -ca urmare gena care dirijeaz sinteza factorului de iniiere a sporulrii este depresat;
44

Morfogeneza sporului
Se disting 3 stadii 1. Stadiul preparativ caracterizat prin detaarea unui segment din cromozomul bacterian i condensarea citoplasmei n jurul su; 2. Stadiul de prespor caracterizat prin formarea septumului de separare constituit pe seama membranei citoplasmatice i delimitarea consecutiv a nveliului sporal; 3. Stadiul de spor matur caracterizat prin reducerea dimensiunilor sporale i prin maturarea sporului.

45

Formarea sporului -Stadiul preparativ 1-2 -Stadiul de prespor 3-5 -Stadiul de spor matur 6-8

46

Odat cu formarea i maturarea sporului, celula i nceteaz funciile biologice putndu-se nregistra dou situaii diferite: persistena formelor vegetative n care sporul este prezent, dar aceasta este inert, neviabil cu afiniti tinctoriale schimbate; dispariia formelor vegetative fie sub influena unor fermeni sporali, fie sub influena unor enzime a cror colaborare este indus de prezena sporului, n acest caz sporii rmn liberi; odat Sporul odat format rmne n stare de repaos numit dormant criptobioz relativ numit i starte dormant sau criptobioz metabolic redus cu activitate metabolic redus.

47

Forma, dimensiunile i localizarea sporului n celula vegetativ (sporangiu) este variabil de la specie la specie. Lund n considerare diametrul sporului -poate fi mai mic ca al formei vegetative i deci nu produce deformarea acesteia; -poate fi mai mare ca al formei vegetative; Lund n considerare amplasarea sporului n forma vegetativ, poate fi: -aezat central ex. B. anthracis; -subterminal la Cl. chauvoei (aspect de fus sau suveic); -terminal ex. Cl. tetani (aspect de b de chibrit sau rachet de tenis).
48

1. 2. 3. 4. 5. 6.

Spor liber; Spor central cu diametru mai mic decat celula vegetativa; Spor central cu diametru mai mare decat celula vegetativa; Spor subterminal; Spor terminal; Spor lateral;

49

Structura sporului Pornind de la exterior spre interior, structura sporului este urmtoarea: 1. Exosporium (prezent numai la unele specii) -reprezint o structur membranoas; -alctuit din lipoproteine i 20% carbohidrai; -nu este esenial pentru supravieuirea sporului. 2. Peretele sporal -cu o structur lamelar; -conine aproximativ 40% din proteina sporal i o cantitate de 4-5 ori mai mare de cistein dect celula vegetativ.

50

3. Citoplasma sporal sau sporoplasma -se afl n cantitate redus; -este delimitat de o membran citoplasmatic; -n interiorul citoplasmei se afl particule de cca. 10,0 nm corespunznd probabil ribozomilor. 4. Componenta central sau smburele -este constituit din AND n care este nmagazinat informaia genetic sporal; -el se gsete ntr-un nalt stadiu de deshidratare i nu conine ARN-m; -smburele conine o substan specific numit acid dipicolinic sub form de sare de calciu; -aceast sare are rol important n rezistena sporului la cldur; -n meninerea strii de criptobioz i n procesul germinrii.
51

Structura sporului: 1- inima sporului; 2- nucleoplasm (ADN); 3- sporoplasma; 4-ribozomi; 5-cortexul; 6-nveliurile sporale externe; 7-exosporium

52

53

54

Proteinele nveliurilor sporale se deosebesc de cele ale celulelor vegetative prin: -proporia de aminoacizi; -reactivitatea imunologic; -sporul are un coninut mai bogat n ioni de Ca++ i Mg; -are un procent mai sczut de ap, sruri de fosfor i potasiu; -sunt absente incluziile de poli- hidroxibutirat, enzimele ciclului Krebbs; Germinarea este procesul de transformare a sporului n forma vegetativ acest lucru se realizeaz n situatia n care sporii ajung n condiii prielnice de hran, umiditate, pH i temperatur; se realizeaz ntr-o succesiune de faze care se deruleaz ntr-un interval de cca. 90 minute (1 ora i ).
55

Faza de activare au loc unele modificri n structurile macromoleculare; activitatea indus este reversibil n sensul c, dup activare nu sunt asigurate n continuare condiii de germinare, ei revin la starea dormant. propriu-zis Faza de germinare propriu-zis este faza n care sporul este angajat ireversibil n procesul de transformare n form vegetativ; are loc un proces de umflare i alungire a sporului; pierderea refringenei i eliberarea n mediu a unor substane de origine sporal (peptide, dipicolinat de calciu, peptidoglican); stadiul de laten nceteaz, activitatea metabolic crete, iar rezistena la agenii fizici i chimici dispare
56

Faza de degradare a nveliurilor sporale i ieirea unei noi forme vegetative se realizeaz prin sinteza de novo a proteinelor i constituienilor structurali ai celulei vegetative.

Rolul sporilor Sporul bacterian reprezint o form obligatorie de conservare a speciei i nu de reproducere, aa cum sunt sporii ciupercilor microscopice. prin conservarea fondului genetic o lung perioad se asigur astfel perpetuarea speciilor bacteriene; au o rezisten remarcabil la condiiile de mediu (radiaii, uscciune, cldur) conservndu-se ani de zile; persistena surselor de infecie (ex. B. chovei si B. anthracis 70 de ani, 114 ani o bacterie saprofit);
57

 au o rezisten mare la cldur de cteva minute la 1200C; suport contactul ndelungat cu unele substane antibacteriene rmnnd i o sptmn n formol 5% i mai multe sptmni n alcool; de aici deriv importana folosirii unor substane dezinfectante puternice pentru a putea fi distrui; unele bacterii sporulate sintetizeaz diferite produse extracelulare (antibiotice polimoxina B. brevis, bacitracina B. licheniformis, gramicidina B. subtilis) exist unele vaccinuri preparate cu spori (sporovaccinuri) ex. vaccinul anticrbunos preparat dintr-o suspensie de spori ai tulpinii de Bacillus anthracis 1190 R Stamatin
58

Chestionar

1. Protoplatii reprezinta: a. ansamblul structurilor celulare rmase dintr-o bacterie Gram negativ; b. ansamblul structurilor celulare rmase dintr-o bacterie Gram pozitiv; c. structuri extracelulare bacteriene. 2. Germinarea este: a. procesul de transformare a formei vegetative in spor; b. procesul prin care bacteriile dobandesc rezistenta la conditiile de mediu; c. procesul de transformare a sporului n forma vegetativ. 3. Sporul bacterian reprezint: a. o form obligatorie de conservare a speciei bacteriene; b. o form de multiplicare a speciei bacteriene; c. o form mai sensibila la condiatiile de mediu a bacteriilor.
59