PREPARATE MICROSCOPICE SI COLORATII

LP 4
BIOLOGIE CELULARA SI MOLECULARA
 PREPARAREA MATERIALELOR BIOLOGICE PENTRU
TEHNICILE DE MICROSCOPIE

Etape necesare pentru o examinare

precisa:

1. FIXARE - celulele i celelalte

elemente prezente n esuturi sunt
pstrate n condiii ct mai
apropiate de condiiile lor naturale

2. COLORARE - componentele
preparatului sunt colorate diferit
pentru o vizualizare optima

Microscopie optica
 TIPURI DE PREPARATE PENTRU MICROSCOPIE

- SECIUNI - structuri/organisme mici suficient de

subiri pentru a fi ntinse pe o lam

- FROTIURI celule suspendate in fluid

- ZDROBIRE pentru examinarea continutului

celulei

- CULTURI CELULARE
 PREPARATUL MICROSCOPIC PERMANENT

Modalitatea de examinare a unor celule, fragmente de

esut sau organ, crora li s-au suprimat procesele vitale prin
fixare

Permite examinarea la microscopul optic a principalelor

caracteristici ale celulelor i a modului lor de organizare

SCOPUL REALIZRII de a conserva structurile celulare

i raporturile dintre ele pe un timp nelimitat
PREPARATUL MICROSCOPIC PERMANENT
ETAPELE DE OBTINERE:

1. RECOLTARE

2. FIXARE

3. INCLUDERE

4. SECTIONARE

5. COLORARE

6. MONTARE INTRE LAMA SI LAMELA

1. RECOLTAREA

- operaia prin care fragmentul de esut/organ este prelevat

- dimensiunea pieselor s nu depeasc 5 mm

- instrumentele bine ascuite pentru a evita zdrenuirea i

pierderea paralelismului dintre planuri

- adecvat n funcie de tipul organului; se vor evita

modificrile de volum, form i relief
2. FIXAREA

- etapa esentiala pentru obtinerea unui preparat bun

- proces prin care sunt oprite rapid procesele celulare,
cu alterari minime ale preparatului

Prin fixare se urmareste:

1. Conservarea esuturilor
2. Prevenirea pierderii de constitueni celulari
3. Creterea diferenierii optice a structurilor celulare
4. Mrirea consistenei esuturilor n scopul de a facilita
trecerea lor prin celelalte etape i mai ales pentru
secionare
3. INCLUDEREA
- Etapa care asigura conditii optime pentru sectionarea pieselor
- Este precedata de deshidratare in solutii de alcool de concentratii
crescande
- IN MICROSCOPIA OPTICA cea mai folosita masa de incluziune
este parafina

4. SECTIONAREA
- Cu microtomul (aprox. 5m)
5. COLORAREA
- Cresterea contrastului intre elementele tisulare sau celulare cu
ajutorul colorantilor
- Se realizeaza prin metode compatibile cu metoda de fixare
- Exista coloratii universale (HEMATOXILINA-EOZINA) sau
coloratii specifice (ex. Coloratia NISSL)

6. MONTAREA
- Intre lama si lamela
- Permite conservarea preparatelor pe termen lung
- Protejeaza sectiunile fragile de eventuale deteriorari
- Conservarea coloratiei si asigurarea unui mediu optic omogen
si transparent necesar examinarii microscopice
 TIPURI DE COLORATII

- COLORATII UZUALE: Hematoxilina-eozina (HE)

Albastru de toluidina

- COLORATII TRICROME: Masson , Azan , Van Gieson

- PENTRU FIBRE: (colagen - col. tricrome)

- elastice: Orcein
- reticulin: Impregnare argentic

- PENTRU GLUCIDE: PAS (acid periodic+R. Schiff)

Carmin amoniacal (Best)

- PENTRU LIPIDE: Sudan

- COLORATII CITOLOGICE: - aparatul Golgi: Cajal/da Fano

- mitocondrii: HF Regaud
- PENTRU ENZIME: SDH: Pearse
PA: Gmry
- PENTRU SANGE: May Grnwald Giemsa (MGG sau Pappenheim)
 COLORATIA HEMATOXILINA-EOZINA
- este cea mai utilizata coloratie
- foloseste 2 colorani: - Hematoxilin (bazic, va colora nucleul)
- Eozin (acid, va colora citoplasma)

Nucleul: violet-albastru
Citoplasma: roz
COLORATIA HEMATOXILINA-EOZINA
COLORAIA CU ALBASTRU DE TOLUIDIN

- granulaiile din
mastocite prin coloraie
metacromatic n rou
violet
 COLORATIA MASSON
Coloratie tricrom:
1. hematoxilin feric
2. soluia colorant A ce conine fuxin acid
3. soluia colorant B ce conine albastru de anilin

- nucleul - violet intens,

- citoplasma - nuane de gri
sau albastru palid,
- fibrele musculare - rou,
- fibrele colagene - albastru
 COLORATIA VAN GIESON
Coloratie tricrom:
1. hematoxilina feric
2. acidul picric
3. fuxina acid

- Nuclei negri
- Citoplasma galben
- Fibre de colagen rou intens
IMPREGNAREA ARGENTICA

- evidentierea interstiiului
dintre celulele epiteliului din
seroase
- limitele intercelulare apar
net n culoarea neagr
 COLORATIA CU ORCEINA

- METODA PENTRU EXAMINAREA FIBRELOR CONJUNCTIVE

Fibrele elastice: cafeniu - roscate

 COLORATIA CAJAL / DA FANO

- Este o coloratie citologica

- Evidentiaza aparatul Golgi

- Nuclei necolorai
- Aparatul Golgi reea
perinuclear de culoare neagr
- Citoplasma aurie