BIOLOGIE CELULARA SI MOLECULARA

LP 4
PREPARATE MICROSCOPICE SI COLORATII

prof. Dr. Cristiana Tanase

PREPARAREA MATERIALELOR BIOLOGICE PENTRU

TEHNICILE DE MICROSCOPIE

Etape necesare pentru o examinare precisa:

1.FIXARE - celulele i celelalte elemente
prezente n esuturi sunt pstrate n condiii
ct mai apropiate de condiiile lor naturale
2.COLORARE - componentele preparatului
sunt colorate diferit pentru o vizualizare
optima

Microscopie optica

TIPURI DE PREPARATE

- SECIUNI - structuri/organisme mici suficient de subiri pentru a fi

ntinse pe o lam
- FROTIURI celule suspendate in fluid
- ZDROBIRE pentru examinarea continutului celulei
- CULTURI CELULARE

PREPARATUL MICROSCOPIC PERMANENT

Modalitatea de examinare a unor celule, fragmente de
esut sau organ, crora li s-au suprimat procesele vitale prin
fixare
Permite examinarea la microscopul optic a principalelor
caracteristici ale celulelor i a modului lor de organizare
SCOPUL REALIZRII de a conserva structurile celulare
i raporturile dintre ele pe un timp nelimitat

PREPARATUL MICROSCOPIC PERMANENT ETAPELE DE OBTINERE:

1. RECOLTARE
2. FIXARE
3. INCLUDERE
4. SECTIONARE
5. COLORARE
6. MONTARE INTRE LAMA SI LAMELA

1. RECOLTAREA
- operaia prin care fragmentul de esut/organ este prelevat
- dimensiunea pieselor s nu depeasc 5 mm
- instrumentele bine ascuite pentru a evita zdrenuirea i
pierderea paralelismului dintre planuri
- adecvat n funcie de tipul organului; se vor evita
modificrile de volum, form i relief

2. FIXAREA
-etapa esentiala pentru obtinerea unui preparat bun
-proces prin care sunt oprite rapid procesele celulare,
cu alterari minime ale preparatului
Prin fixare se urmareste:
1. Conservarea esuturilor
2. Prevenirea pierderii de constitueni celulari
3. Creterea diferenierii optice a structurilor celulare
4. Mrirea consistenei esuturilor n scopul de a facilita
trecerea lor prin celelalte etape i mai ales pentru
secionare

3. INCLUDEREA
-Etapa care asigura conditii optime pentru sectionarea pieselor
-Este precedata de deshidratare in solutii de alcool de concentratii crescande
-IN MICROSCOPIA OPTICA cea mai folosita masa de incluziune este
parafina

4. SECTIONAREA
- Cu microtomul (aprox. 5m)

5. COLORAREA
-Cresterea contrastului intre elementele tisulare sau celulare cu ajutorul
colorantilor
-Se realizeaza prin metode compatibile cu metoda de fixare
-Exista coloratii universale (HEMATOXILINA-EOZINA) sau coloratii
specifice (ex. Coloratia NISSL)

6. MONTAREA
-Intre lama si lamela
-Permite conservarea preparatelor pe termen lung
-Protejeaza sectiunile fragile de eventuale deteriorari
-Conservarea coloratiei si asigurarea unui mediu optic omogen si
transparent necesar examinarii microscopice

TIPURI DE COLORATII
- COLORATII UZUALE:

Hematoxilina-eozina (HE)
Albastru de toluidina

- COLORATII TRICROME: Masson , Azan , Van Gieson

- PENTRU FIBRE: (colagen - col. tricrome)
- elastice: Orcein
- reticulin: Impregnare argentic
- PENTRU GLUCIDE: PAS (acid periodic+R. Schiff)
Carmin amoniacal (Best)
- PENTRU LIPIDE: Sudan
- COLORATII CITOLOGICE: - aparatul Golgi: Cajal/da Fano
- mitocondrii: HF Regaud
- PENTRU ENZIME: SDH: Pearse
PA: Gmry
- PENTRU SANGE: May Grnwald Giemsa (MGG sau Pappenheim)

COLORATIA HEMATOXILINA-EOZINA
- este cea mai utilizata coloratie
- foloseste 2 colorani: - Hematoxilin (bazic, va colora nucleul)
- Eozin (acid, va colora citoplasma)

Nucleul: violet-albastru
Citoplasma: roz

COLORATIA HEMATOXILINA-EOZINA

COLORAIA CU ALBASTRU DE TOLUIDIN

- granulaiile din mastocite

prin coloraie metacromatic
n rou violet

COLORATIA MASSON
Coloratie tricrom:
1. hematoxilin feric
2. soluia colorant A ce conine fuxin acid
3. soluia colorant B ce conine albastru de anilin

- nucleul - violet intens,

- citoplasma - nuane de gri
sau albastru palid,
- fibrele musculare - rou,
- fibrele colagene - albastru


ional al c
n ro
COLORATIA VAN GIESON

Coloratie tricrom:
1. hematoxilina feric
2. acidul picric
3. fuxina acid

- Nuclei negri
- Citoplasma galben
- Fibre de colagen rou intens

IMPREGNAREA ARGENTICA

- evidentierea interstiiului dintre

celulele epiteliului din seroase
- limitele intercelulare apar net
n culoarea neagr

COLORATIA CU ORCEINA
- METODA PENTRU EXAMINAREA FIBRELOR CONJUNCTIVE

Fibrele elastice: cafeniu - roscate

COLORATIA CAJAL / DA FANO

- Este o coloratie citologica
- Evidentiaza aparatul Golgi

- Nuclei necolorai
- Aparatul Golgi reea perinuclear
de culoare neagr
- Citoplasma aurie