4.

Metoda de obţinere
a coloraţiei optime
- progresive – prin imersări succesive
până se ajunge la momentul optim de
colorare (ex. H.E.)

- regresive – prin acţiunea prelungită a

colorantului, până la obţinerea unei
supracolorări, apoi se acţionează cu un
agent chimic decolorant (diferenţiator):
ex. coloraţia Nissl
21
colorație progresiva:
COLORAŢIA HEMALAUN-EOZINĂ (HE)
cea mai utilizată colorație

Foloseşte 2 coloranţi:
1. hemalaunul – colorant
bazic
2 . eozina – colorant acid

REZULTATE
nucleu: albastru – violet
citoplasma: roz – roşu
22
http://www.cram.com/flashcards/epithelial-tissue-2440529
 4. Metoda de obţinere a coloraţiei optime

colorații progresive colorații regresive

Colorație H.E. Colorație Nissl- corpii
Nissl
se colorează în violet
(SN)

https://www.mcgill.ca/endocrinology/ www.studyblue.com

23
5. Rezultatul colorării
versus culoarea colorantului
- ortocromatică – substratul se colorează
în aceeaşi culoare ca şi cea a
colorantului (majoritatea)

- metacromatică – substratul se
colorează în altă culoare decât cea a
colorantului (ex. albastru de toluidină)

24
 Colorație ortocromatică – VAN
GIESON (colorație tricromă)
folosită în anatomia patologică

1. hematoxilină ferică
2. acid picric
3. fuxină acidă

REZULTATE

1 Nucleii – negri
.
2. Citoplasma – galben http://gym-fourn.sam.sch.gr/physics/img/tiss/sw.jpg

3. Fibrele de colagen – rou intens

25
 METACROMAZIA

Capacitatea unui substrat de a se colora

într-o altă culoare decât cea a
colorantului
PRINCIPIU:
- existenţa unor grupări funcţionale plasate
regulat, la o distanţă suficient de mică una de
alta
- colorantul se dispune ordonat şi foarte
aproape moleculă de moleculă permiţând
reaşezări ale electronilor la alte nivele
energetice şi absorbţia de alte lungimi de
undă din spectrul vizibil

26
 Colorație metacromatică –
ALBASTRU DE TOLUIDINĂ

granulaţiile din mastocite se colorează

metacromatic în roşu – violet

27
http://www.iupui.edu/~anatd502/Labs.f04/blood%20lab/mouse%20pinna%20x40%20AcTB%20a.jpg
 IMPREGNĂRILE METALICE
PRINCIPIU: precipitat de metal redus, după ce
se leagă în formă ionică pe diferitele elemente
din ţesuturi, evidenţiind structuri care în mod
obişnuit nu se colorează.
(cele mai folosite sunt impregnările cu săruri de
Ag, Au, Os, Hg)

- IMPREGNAREA ARGENTICĂ – folosită

pentru evidenţierea elementelor din
ţesutul epitelial sau conjunctiv şi în
studierea sistemului nervos (structurile
vizate apar brun-
negre)
28
 IMPREGNARE ARGENTICĂ
Fibrele de reticulină Evidenţierea
prelungirilor

apar colorate în negru neuronale în negru

29
©2009 CMM
http://gym-fourn.sam.sch.gr/physics/tissues.html
COLORAŢII TOPOGRAFICE
- utilizate pentru evidențierea
celulelor
în ansamblul țesutului
(cele prezentate pană acum)

COLORATII CITOLOGICE
- utilizate pentru evidențierea
anumitor organite /
structuri celulare
30
 METODA CAJAL DA FANO
evidenţierea complexului Golgi

REZULTATE

Nucleii: necoloraţi

Aparatul Golgi – reţea

perinucleară de
culoare neagră

Citoplasma –

aurie
 31
www.studyblue.com
 METODA REGAUD
(HEMATOXILINĂ FERICĂ)
- evidenţierea mitocondriilor

REZULTATE

Nucleii – necoloraţi

Nucleolul – gri

Mitocondriile
– granulaţii
negre
http://www.anatomyatlases.org/MicroscopicAnatomy/Section01/Plate0106.shtml
32
 METODA FROTIURILOR
se realizează întinderea
celulelor în monostrat, pe o
lamă de sticlă
Pot fi examinate :
1. celulele sangvine
2. celulele epiteliale
descuamate sau exfoliate
3. sedimentele celulare
4. amprente de ţesuturi sau
organe parenchimatoase
33
 Calitățile unui bun frotiu:
subţire – cu un singur strat de celule
•
întins uniform
ambele margini pe lamă
•
se termină în franjuri pe lamă
• (ocupând cca. 2/3 din lungimea
acesteia)
•
 •(la marginea liberă se scrie
numele pacientului sau un
număr de ordine)

34
METODA PANOPTICĂ PAPPENHEIM
( M.G.G.) – colorație topografică
• pentru colorarea frotiului sangvin

1. soluţia May-Grünwald – conţine

EOZINAT DE
ALBASTRU DE METILEN solubilizat în
amestec de alcool metilic şi glicerină
neutră
2. soluţia Giemsa – conţine EOZINAT DE
AZUR DE METILEN solubilizat în
 amestec de alcool metilic şi glicerină
neutră
35
Paşii executării unui frotiu sangvin

recoltare
întindere (se folosesc două lame de sticlă)
- lama portobiect – cea pe
care se efectuează frotiul
- lama executoare – cu care
se întinde frotiul, prin
glisare la un unghi de
45°
uscare (fixare fizică)
 36
http://www.ronaldschulte.nl/human-blood-cells.html
colorare - FROTIUL SANGVIN- coloraţie M.G.G.
Rezultate:
granulocite agranulocite
Nucleu: violet Nucleu: violet
Citoplasma – roz Citoplasma –
albastru

Granulaţii:
- neutrofile : roşu-violet
- bazofile : albastru închis
spre negru
- eozinofile: roşu-portocaliu

37
www.studyblue.com
HISTOCHIMIA – Modalitate de
evidenţiere specifică a unor biomolecule
în ţesuturi
HISTOCHIMIA GLUCIDELOR – permite evidenţierea:
- structurilor glucidice de pe proteine (glicoproteine,
proteoglicani) şi de pe lipide (glicolipide)
- polizaharidelor (glicogen)
N.B. Mono- sau di-zaharidele nu se pot evideţnia
deoarece sunt solubile şi se pierd în timpul pregătirii
probelor

• METODA PAS (periodic acid-Schiff)

• METODA CU CARMIN AMONIACAL
• BEST BAZOFILIA (pentru cele încărcate
• negativ) METACROMAZIA
38
 HISTOCHIMIA GLUCIDELOR
METODA PAS – CARMIN AMONIACAL
evidenţierea BEST evidenţierea
glicoproteinelor glicogenului (celule
(celule hepatice)
caliciforme din
mucoasa
intestinală)
 39
https://www.slideshare.net/catedraticoshisto/copia-de-intestino-delgado-y-grueso www.studyblue.com
HISTOCHIMIA LIPIDELOR
PRINCIPIU:
colorantul este mai solubil în lipide decât în
propriul solvent, acumulându-se în incluziunile
lipidice

SUDANOFILIA

• Coloranţi Sudan :
– III – roşu-portocaliu

– IV – roşu

– B – negru

– BB – albastru
 celule adipoase în 40

mezenter
http://slideplayer.pl/slide/10370173/
 HISTOENZIMOLOGIA:
evidenţiază
localizarea enzimelor pe baza activităţii
lor
ETAPELE OBŢINERII UNUI PREPARAT CITOENZIMOLOGIC

• recoltarea

• fixarea – prin congelarea rapidă la temperaturi foarte

joase
•

secţionarea
• incubarea cu substratul – într-un mediu care oferă
enzimei
condiţii cât mai apropiate de cele în
vivo.

• montarea – se realizează în mediu hidrosolubil – glicerină

sau sirop Apathy 41
 HISTOENZIMOLOGIE
METODA PEARSE: METODA GÖMÖRY:
captură fosfat de plumb (
evidenţiază
incolor) care se transformă
dehidrogenazele
în sulfură de plumb
(succinatdehidrogenaza- (neagră) – evid. activităţii
SDH fosfatazelor
enzima marker a -pol apical al
mitocondriilor) nefrocitelor -
- celule musculare
striate-
 42
Junqueira’s Basic Histology: Text and Atlas, 12th Ed
http://neuromuscular.wustl.edu/pathol/melas.htm
 Concluzii
Aţi luat cunoştinţă de numai o parte
dintre posibilităţile de studiere a
celulelor la microscopul optic prin
folosirea coloranţilor

Metodele sunt specifice histologiei şi

citologiei
43