GENETICA BACTERIANA

OBIECTIVE

Genetica bacterian, ereditatea bacterian, genotip i fenotip.

Cromozomul bacterian, elementele genetice
extracromozomiale. Plasmidele: tipuri i roluri.
Variabilitatea genetic bacterian, mecanisme.

Mutaiile la bacterii, definiie, tipuri.

Transferul de material genetic i recombinarea. Elemente
transpozabile.

Bacteriofagul, relaii fag-bacterie. Ciclul litic i lizogen.

Aplicaii. Elemente practice aplicative privind utilizarea
tehnicilor de biologie molecular n diagnosticul microbiologic
modern.

Ereditatea caracteristica biologica general a

organismelor vii de a transmite caracterele specifice
speciei la urmai
Suportul ereditatii ADN
Variabilitatea - apariia unor caractere diferite de cele ale
genitorilor
Fr modificri genetice toi descendenii bacteriei vor fi identici
ntre ei i cu bacteria mam
In microbiologie: - tulpini mai virulente
- tulpini atenuate
- rezistenta la antimicrobiene (antibiotice, biocide)
- caractere fenotipice diferite
- adaptare mai buna la mediu

GENOMUL BACTERIAN
Suma genelor unui organism
GENOTIP totalitatea informaiei genetice a unui organism

FENOTIP suma caracterelor observabile, specifice unui

organism, produse de genotip n interaciune cu mediul
ambiant

ORGANIZAREA GENOMULUI BACTERIAN

genele eseniale localizate n structura cromozomului
bacterian
genele accesorii
structura
plasmidelor

extracromozomiale

elementelor genetice transpozabile

secvene de inserie IS
transpozoni Tn
bacteriofagi

prezente

CROMOZOM
2000 m lungime
16 x 106 perechi de nucleotide
6000 gene
Controleaza structurarea, cresterea si
multiplicarea celulei

PLASMIDE
ADN extracromozomal, dublu catenar
Exista in 1 sau mai multe copii
Se replica autonom
Circulare (exceptie Borrelia burgdorferi)
Fixate la situsuri membranare de replicare

2 Mbp (mega base pairs)
Dispensabile in economia celulei
Asigura supravietuirea celulei in conditii modificate de mediu
Codifica caractere de TULPINA
Plasmide integrate liniar in cromozomul bacterian se mai
numesc EPISOMI (ca si profagii (fagi temperati)
vezi
LIZOGENIE

Denumirea plasmidelor
INITIAL
R-factor codifica factori de rezistenta la antibiotice / Shigella si
E coli rezistente la antibiotice
ColE1 codifica colicina E1 omoara celulele de E coli care nu au
acest plasmid
Tol - degradarea toluenului

STANDARDIZARE pXYZnnn
p / - precede litere MAJUSCULE
XYZ - litere MAJUSCULE care descriu plasmidul sau initialele
persoanei/elor care l-au izolat sau construit
nnn facultativ - numar alocat pentru a indica plasmidul original si
modificarea acestuia ulterioara
Exemplu pBR322
pBR325

PLASMIDE
Contin:
- Determinanti genetici pentru autoreplicare
- Determinanti pt structuri si molecule exprimate in fenotipul bacterian
- virulenta (hemolizine, enterotoxine, factori de colonizare)
- enzime in cai metabolice particulare degradare hidrocarburi
- agenti antibacterieni (bacteriocine ex. colicine - factor Col,
antibiotice) - se transfera prin conjugare, bacteriofagi, transformare
- rezistenta la UV, antibiotice factor R (gene de rezistenta si gene
de transfer a rezistentei RTF),
se transfera prin conjugare sau prin
bacteriofagi
- Determinanti pt structuri implicate in Conjugare (CONJUGONI) factor F
- Celule F-, F+, HFr, F
- Exista plasmide criptice - nu se stie ce caractere codifica

ELEMENTE GENETICE TRANSPOZABILE

secvene specifice de ADN care i menin integritatea
fizic, structural, genetic, funcional n cursul
translocaiei de la o poziie la alta pe acelai genom sau
pe genomuri diferite
Secvenele de inserie (IS)
nu au nici o gen i nici o alt funcie n afar de cea de inserie
dup inseria lor pot aparea : modificri n expresia unor gene,
modificri n rata incidenei deleiilor n zonele adiacente situsului lor
de inserie

Transpozoni
poart gene care confer bacteriei funcii noi: rezistena la
antibiotice, capacitatea de sintez a unor enzime, enterotoxine,
sinteza antigenelor bacteriene de suprafa etc.

Bacteriofagi
virusuri care paraziteaz bacteriile
se cunosc 6 grupe morfologice de bacteriofagi

STRUCTURA ADN
(acid dezoxiribonucleic)
James Dewey Watson
Francis Harry Compton Crick
Maurice Hugh Frederick Wilkins
The Nobel Prize in Physiology or Medicine
1962
"for their discoveries concerning the molecular
structure of nucleic acids and its significance for
information transfer in living material"

STRUCTURA ADN

James Watson and Francis Crick with their DNA model at the Cavendish
Laboratories in 1953. Photograph by C. Barrington Brown. Courtesy C. Barrington
Brown. To request permission to use this photo, please visit the Science Photo
Library Web site at www.sciencephoto.com.

STRUCTURA ADN

Macromolecula
- 2 catene polinucleotidice
- Antiparalele
- Complementare
- Rasucite in dublu helix

STRUCTURA ADN
2 nm
Macromolecula
- 2 catene polinucleotidice
- Antiparalele
- Complementare
- Rasucite in dublu helix

- 10 perechi nucleotide
- 3,4 nm

NUCLEOTID
BAZA AZOTATA

FOSFAT
DEZOXIRIBOZA

Baza azotata
purinica - Adenina A
- Guanina G
pirimidinica
- Timina - T
- Citozina C
Pentoza (dezoxiriboza)
Acid fosforic

BAZE AZOTATE
ADENINA

GUANINA

PURINE

A+T
G+C

Raportul difera
de la specie la specie

PIRIMIDINE
CITOZINA

TIMINA

BAZE AZOTATE
Legaturi de H
2 A si T
3 C si G
- Stabile pana la 65oC
- Denaturare
completa la 90oC
Rezulta 2 catene
complementare

Funciile ADN ca material genetic

depozitarea informaiei genetice
replicarea
REPLICON unitata genetica discreta (molecula ADN) care se replica ;
Caracteristici:
- o secven nucleotidic specific marcnd nceperea replicrii
- gene care codific sinteza unor proteine specifice
- o secven nucleotidic semnal pentru terminarea replicrii
- exemple de repliconi: cromozomul, plasmidele bacteriene, genomul
bacteriofagilor

transcrierea i traducerea genetic

protejarea materialului genetic propriu
reglarea activitii celulare
controlul activitii celulare

PROPRIETATI ADN
REPLICON unitata genetica discreta (molecula ADN)
care se replica
Ex. Cromozom, plasmid,
AUTOREPLICARE CONSERVAREA INFORMATIEI SI
TRANSMITERE : EREDITATE si VARIABILITATE
TRANSCRIERE (urmata de TRANSLATIE)
EXPRIMAREA INFORMATIEI: ADN


ARNm
PROTEINE

REPLICAREA
SEMICONSERVATIVA

AUTORADIOGRAFIE
Replicare cromozom E. coli
Cairns, J.P.: Cold Spring
Harbor Symposia
on Quantitative Biology
28:44, 1963

MECANISME DE VARIABILITATE
VARIABILITATE FENOTIPIC
modificri morfologice sau fiziologice de tip adaptativ;
nu se transmit ereditar;
genomul nu este afectat

VARIABILITATE GENOTIPIC
modificri definitive ale materialului genetic
se transmit descendenilor

MECANISME DE VARIABILITATE GENOTIPICA

MUTATII
SUBSTITUTII
INVERSII
INSERTII
DELETII
SPONTANE
INDUSE
PUNCTIFORME
EXTINSE
RETROMUTATII
TRANSFER si RECOMBINARE GENETICA
TRANSFORMARE
TRANSDUCTIE (BACTERIOFAGI)
SPECIALIZATA
GENERALIZATA
CONVERSIA LIZOGENICA
CONJUGARE

MUTATIA
Modificare in secventa nucleotidica a unei gene in cursul
replicarii
GENA ALELA ocupa acelasi locus genetic ca
si gena originara
EROARE DE REPLICARE
Eveniment
RAR
rata mutatiei 10-6 10-9 , creste sub
actiunea agentilor mutageni (radiatii, s. chimice)
IMPREVIZIBIL
SPECIFIC
INDEPENDENT
DISCONTINUU
STABIL (exceptie retromutatiile)

3 NUCLEOTIDE = 1 CODON = 1 Aminoacid

SUBSTITUTII SI INVERSII
- afecteaza 1 codon
sunt punctiforme
- Apare un codon sinonim
lant polipeptidic nemodificat
- Apare un codon nou
alt aminoacid

Mutatie muta
Functie modificata sau pierduta

- Apare un codon nonsens
polipeptid incomplet

INSERTII SI DELETII (I/D)

- un nucleotid (micro-I/D)
proteina modificata
- mai multe (macro-I/D)
pierdere functie sau letale

TRANSFER si RECOMBINARE
GENETICA
1. TRANSFORMARE
2. CONJUGARE
3. TRANSDUCTIE (BACTERIOFAGI)
SPECIALIZATA
GENERALIZATA
CONVERSIA LIZOGENICA

TRANSFORMARE
Transfer prin acceptarea de ADN liber provenit de la
bacteria donor
Griffith, 1928, pneumococi virulenti la soareci
Conditii:
celula acceptor sa fie competenta (sinteza molecule proteice
de legare si translocare membranara a ADN)
ADN transformant bicatenar, 1% din genom

Rezulta TRANSFORMANT

CONJUGARE
Transfer prin contact fizic intre 2 bacterii cu polarizare sexuala
sens unic, de la bacteria donor la cea acceptor
bacteria donor ramane viabila
DONORUL are plasmide conjugative ce contin genele tra operon
Replicare de transfer
pili sexuali (la bacterii gram negative) factor F

se transfera conjugonul, alte plasmide neconjugative si gene

cromozomale (donorii HFr)
rezulta TRANSCONJUGANT
FACTORUL F
(factorul de sex, factorul de fertilitate)
controleaz capacitatea unor bacterii de a fi donatoare de material
genetic
codific structurile (pilul F) i enzimele necesare transferului de ADN
au caracter de mascul donatoare de material genetic (factorul F)

CONJUGARE
bacterii F- : fr factor F
- celule femele receptoare de material genetic

bacterii F+ : cu factor F
- celule mascule donatoare de material genetic
- factor F autonom in celula
bacterii Hfr (high frequency of recombination)
au factor F integrat n cromozomul bacterian
donatoare de material genetic cu mare frecven de conjugare i
recombinare; transferul unui numr variabil de gene cromozomale, mai
rar chiar transferul factorului F
bacterii F
au o structur plasmidic de tip special = factor de fertilitate
recombinant
a fost anterior integrat ntr-un cromozom, s-a desprins ncorpornd
unele gene cromozomale

caracterul ncrucirii F cu F-: F- devine F si F rmne F

CONJUGARE
- caracterul ncrucirii F cu F-:
F- devine F
F rmne F

- caracterul ncrucirii F+ cu FF- devine F+

F+ rmne F+

- caracterul ncrucirii Hfr cu FF- rar devine Hfr

Hfr rmne Hfr

TRANSDUCTIE
Transfer ADN prin intermediul unui bacteriofag
in general fagi temperati, care includ in cursul
morfogenezei capsidei alaturi de ADN fagic si ADN
cromozomal (2%) sau plasmidic al bacteriei donatoare
Rezulta TRANSDUCTANT
ADN-ul transferat se integreaza in cromozomul celulei
acceptoare lizogenizare (conversie lizogenica) apare
un caracter nou codificat de gene fagice nereprimate; ex
tox difterica, Ag O Salmonella

RECOMBINAREA GENETICA
recombinare = formarea de noi combinaii genetice ntr-un
genom prin :
schimb de segmente homologe
integrare suplimentar de ADN
Recombinarea legitim sau homolog (recA-dependent)
are loc atunci cnd un fragment de ADN provenit de la celula donoare, sau
chiar din alt molecul de ADN se inser ntr-o regiune a ADN receptor ce
se aseamn din punct de vedere chimic cu cea a ADN-ului donor, deci
prezint o homologie de baze
este ntlnit n transformare, n unele forme de transducie i conjugare
implicate mai multe enzime dintre care recA-proteina si recBC nucleaza
Recombinarea nelegitim sau heterolog (recA-independent)
const n integrarea de ADN suplimentar ntr-un replicon
exemple de recombinare heterolog sunt:
integrarea plasmidului F
integrarea unor profagi n cromozom
transpoziia elementelor genetice mobile

APLICATII
HIBRIDIZAREA se demonstreaza inrudirea sau
identitatea a doua microorganisme pe baza omologiei
secventelor nucleotidice
taxonomia bacteriana cu
sonde de acizi nucleici marcati radioactiv
AMPLIFICAREA GENICA
PCR (Kary B. Mullis)
INGINERIA GENETICA :
CLONAREA GENELOR
recombinare nelegitim genetic in vitro
SECVENTIEREA GENOMULUI

MICROBIOM (totalitatea genomurilor speciilor microbiene
existente intr-un situs microbiota)

Kary B. Mullis