Genetic bacterian

studiaz ereditatea i variabilitatea la bacterii;

suportul material al ereditii este reprezentat de
genomul bacterian, reprezentat de suma genelor
unui microorganism;
gena constituie unitatea funcional de baz a
informaiei genetice;
Genetica bacterian
genomul bacterian este reprezentat de
- ADN cromosomal (include gene eseniale), iar
EXTRACROMOSOMAL:
- ADN plasmidic (conine gene care codific
caractere de tulpin);
- episomi (form particular de plasmid);
genotip = totalitatea informaiei nscris n
genomul bacterian;
fenotip = suma caracterelor observabile,
consecutiv interaciunii genotipului cu mediul
ambiant.
 Dogma geneticii

DNA ----- RNA ----sinteza de proteine

transcriere translatie
 De exemplu, cromozomul de Escherichia coli este
format dintr-o:
molecul circular dublu spiralat de ADN ce reprezint
80% din greutatea lui;

component proteic: ARN-polimeraza (reprezint 10% din

greutatea sa);

ARNm i ARNr n curs de sintetizare (10% din greutatea sa).

Elemente extracromozomale

Plasmidele informaie genetic extracromozomal

Episomii o form particular de plasmid, care este
o unitate de material genetic, neesenial pentru
genom, dar care se poate integra singur n
genomul ADN al unei bacterii; rmne mult timp
stabil, se replic o dat cu cromozomul bacterian i
devine o component a acestuia (ex. episomul care
codific pilii sexuali sau cel care codific gene de rezisten
la antibiotice).
Bacteriofagii implicai n transducie; virusul
infectant transfer material genetic al unei bacterii.
 Plasmidele pot fi:
- conjugative, care se pot transfera singure la alte
bacterii, ca de exemplu plasmidele de rezisten la
antibiotice, plasmide R,
- neconjugative, care nu pot prsi singure bacteria
de origine, ci numai prin intermediul unui alt
plasmid conjugativ sau al unui bacteriofag (de
exemplu plasmidul care codifica secreia de beta-lactamaz,
la S.aureus);
- episomi, care se pot integra prin recombinare n
cromozomul bacterian, pierzndu-i astfel
autonomia de replicare (un exemplu de episom este
factorul de sex F (plasmidul F) sau factorul de fertilitate).
 Plasmidele de virulen poart determinanii
genetici ai unor factori de virulen la bacterii, ca
de exemplu:
- secreia de enterotoxine (termolabil i termostabil) i
factorii de colonizare, la Escherichia coli,
- hemolizina, la Staphylococcus aureus, Enterococcus
faecalis i E.coli,
- exfoliatina, la S. aureus,
- gena de invazivitate, la Shigella etc.
 Plasmidele R (de rezisten) la chimioterapice (Factorul
R) sunt molecule circulare de ADN care constau din dou
regiuni genetice distincte:
- genele care codifica rezistena la antibiotice "R", care pot fi unice
sau multiple i
- genele care confer plasmidului capacitatea de a se transfera
"FTRA (factorul de transfer).
Rezistenta la peste 90% dintre tulpinile de spital este de
natura plasmidic.
Plasmidul F
 Plasmide care codific sinteza unor enzime
implicate n ci metabolice particulare.
Plasmide care codific sinteza unor subtane
antimicrobiene (bacteriocine, unele antibio-
tice).
Plasmide criptice nu tim ce codific.
Not: bacteriocine, produi primari de metabolism care acioneaz doar asupra tulpinilor
speciei care le-a produs sau a unora nrudite; antibiotice: produi de metabolism secundar,
cu spexctru i asupra altor specii). De regula, se utilizeaza termenul de bacteriocine pentru
toate substantele antimicrobiene produse de bacterii. Colicine, produse de E. coli, mutacine,
produse de Streptococcus mutans.
Variaia fenotipic:
- indus de interaciunea genomului cu factori de
mediu;
- este reversibil i nu se transmite ereditar;
- are la baz controlul transcripiei genelor n ARNm
i traducerii n sinteza proteinelor, prin inducia sau
represia acestora.
Fenomenul de variabilitate genotipic
- modificare brusc, transmisibil la descendeni a
unuia sau a mai multor caractere prin dou
mecanisme:
mutaia;
transferul de ADN de la un donor la un
acceptor.
Mutaia:
reprezint o modificare n secvena nucleoti-
delor ntr-o gen, datorit unei erori n cursul
replicrii;
eveniment rar, spontan i imprevizibil;
mutaiile acumulate de-alungul a miliarde de
ani, sub efectul seleciei naturale, explic
evoluia speciilor;
Mutaia:
noile gene aprute prin mutaie se numesc alele
i ocup acelai locus genetic ca gena de origine;
mecanisme moleculare ale mutaiei:
- substituia unei perechi de baze printr-o alt
pereche, cu nlocuirea unui codon printr-un alt
codon; (not: 3 nucleotide, formeaz un codon);
- inversia;
- inseria (informaie genetic nou achiziionat) sau
deleia, pierderea uneia sau a mai multor baze,
cu decalarea citirii mesajului genetic
(frameshift mutation).
 Rata mutaiei = probabilitatea de apariie
spontan a unei mutaii ntr-o populaie bacterian;
rata mutaiei este foarte sczut (10-7 10-9), dar
poate crete n prezena unor ageni mutageni
(chimici sau fizici).
Frecvena mutaiei = proporia unui anumit
mutant ntr-o populaie bacterian;
frecvena mutantului poate crete ca urmare a
seleciei:
- relative (mutantul are un timp de generaie mai scurt)
- absolute (prin prezena unui factor de mediu favorabil
mutantului, dar defavorabil restului populaiei).
 Exemple de mutaii

Mutaiile punctiforme afecteaz un singur nucleotid

n cadrul unei gene i sunt reversibile.
Consecine:
- nlocuirea unui codon cu altul duce la nlocuirea unui
aminoacid cu altul n structura unui polipeptid.
Aceste mutaii sunt numite mutaii n sens greit
(missens mutation);
- apariia unui codon nonsens (mutaii
nonsens).
Mutaia nonsens mpiedic sinteza n
continuare a unui polipeptid (se formeaz
un codon stop UAA, UAG, UGA)
consecinte majore (scurtarea unei proteine,
uneori importanta)
Dac mutaia nonsens se produce la ncepu-
tul genei care codific un polipeptid, se
numete mutaie polar i acel polipeptid
nu se va mai sintetiza deloc.
Mutaii bacteriene observate n laborator:
mutaii privind morfologia coloniei bacteriene
(variaia S R; coloniile netede, smooth, devin R rough);
mutaii nutriionale (mutani auxotrofi - pierd capacitatea
de a sintetiza unul sau mai muli metabolii de care devin dependeni; sunt
factori de cretere indispensabili, care trebuie oferii n mediul de cultur);
mutaii care duc la pierderea unor factori de
patogenitate (mutani aviruleni la S.pneumoniae care i-
au pierdut capsula);
mutaii care conduc la apariia fenomenului de
rezisten la antibiotice (att ADN cromozomal, ct i
cel plasmidic poate fi sediul unor asemenea mutaii).
Transferul genetic

se realileaz n sens unic, de la o bacterie donor la

una receptor;
exogenot = materialul genetic transferat;
endogenot = materialul genetic propriu;
Transferul genetic
evoluia exogenotului n celula receptor:
- recombinare: alinierea secvenelor cu omologie structural,
urmat de substiutirea uneia sau mai multor gene ntre exo- i
endogenot;
- integrare n genomul bacteriei receptor (transpozoni, fagi);
- meninerea n poziie extracromozomal dac este un
replicon (plasmide, fagi);
- supus aciunii endonucleazelor de restricie
(informaie genetic pierdut).

Replicon: cel mai scurt fragment de ADN sau ARN capabil de replicare
independent ntr-o celul.
 Mecanisme de transfer:

- transformarea;
- transducia: generalizat i specializat;
- conjugarea.
Mecanisme de transfer ale exogenotului

I. Transformarea
- bacteria acceptor este capabil s primeasc
ADN exogen provenit din mediu, de la bacterii
moarte (stare de competen);
- exogenotul trebuie s prezinte o structur
bicatenar i s reprezinte maxim 1% din
mrimea genomului bacterian;
- fenomenul a fost descoperit prin experimente pe
oarece, cu tulpini de S.pneumoniae - (Griffith -
1928) i explicat dup dou decenii mai trziu.
 ADN-ul pneumococilor viruleni, capabili
s sintetizeze capsula, s-a transferat la
mutante R, nevirulente, acestea din urma
dobndind capacitatea de a sintetiza
capsula.
Transformarea are loc i ntre specii
diferite.
Bacteria care primete materialul genetic
trebuie s se afle n stare de competen.
II.Transducia

- transfer de ADN bacterian prin intermediul

bacteriofagilor transductori;
- exist dou tipuri de transducie:
generalizat (transfer aleator al unui fragment din
genomul bacterian);
specializat (transfer de gene localizate n cromozomul
bacterian n vecintatea locului de integrare al
profagului).
Profag: exist ca replicon sau episom
Bacteriofag
Morfologie.
Bacteriofagii sunt formai dintr-un cap hexagonal, un gt
i o prelungire numit picior (coad).
Capul este alctuit dintr-un nveli proteic (capsid) i
adpostete genomul ADN.
Coada este un cilindru rigid nvelit ntr-un manon proteic
i se termin cu o placa hexagonal care conine o enzim
de tipul lizozimului.
De placa bazala se aprind 6 fibre cu rol in fixarea
bacteriofagului pe suprafaa bacteriei.
 Ataarea bacteriofagului pe suprafaa
peretelui bacterian este determinat de
existena unor receptori de perete, specifici.
Dup ataare are loc contracia manonului
proteic i bacteriofagul i injecteaz numai
ADN-ul n celula bacterian.
Dup ptrunderea genomului fagic n celula
bacterian, acesta va determina sinteza de
noi bacteriofagi identici cu cel de la care a
provenit ADN.
 Dup asamblarea noilor virusuri ele vor
prsi celula bacteriana care se lizeaz.
Acesta este ciclul litic al bacteriofagilor,
iar ei se numesc fagi viruleni.
 Transductia generalizat este mediat de fagi litici, care, dup
ptrunderea n celula bacterian, se multiplic i determina liza
celulei gazda.
In timpul lizei celulei bacteriene cromozomul acesteia se
fragmenteaz.
Se poate ntmpla ca unul dintre aceste fragmente, cu o dimen-
siune apropiat de cea a genomului fagic, s se integreze n
capsida bacteriofagului, n locul genomului fagic.
Aceti bacteriofagi sunt defectivi i nu se vor mai putea replica,
dar pot ptrunde n alte celule bacteriene, injectndu-le ADN-ul
care provine din cel al celulei donoare.
ADN-ul se va integra n cromozomul celulei receptoare prin
recombinare, rezultnd caractere noi ca: modificri patogenice
bacteriene (noi factori de virulen), rezistena la chimioterapice.
 Dar nu ntotdeauna relaiile bacteriofag-bacterie
evolueaz n acest fel.
Uneori genomul bacteriofagului se va integra n
cromozomul bacterian, ncadrndu-se i funcional
n acesta.
In aceasta situaie el nu se mai replic dect n acelai
timp cu cromozomul bacterian, deci n timpul
diviziunii bacteriene i se numeste profag.
Acest ciclu este ciclul lizogen, iar bacteriofagii se
numesc fagi temperai (nu lizeaz celula bacterian).
 Transducia specializat este mediata de fagii temperai.
O celul bacterian care conine un set de gene fagice se
numete lizogen.
ADN-ul fagic se gsete fie
- integrat n cromosomul bacterian, fie
- n stare autonom (fizic independent).
Lizogenia este consecina blocrii transcrierii i traducerii
informaiei genetice a fagului, a blocrii ciclului su de
multiplicare, urmat de integrarea genomului ca profag, n
cromosomul bacterian.
 Not:
Transcrierea ADN-ului este un proces prin care
are loc transferul informatiei genetice de la ADN
la ARN.
Traducerea/translaia: sinteza de proteine via
ARNr
 Dup ptrunderea n celula bacteriana a ADN ului
bacteriofagului temperat, ADN-ul sufer un proces de
circularizare, dup care se insera n cromozom prin
recombinare sub forma de profag (pe baza homologiei ntre 10
perechi de baze ale ADN fagic i a celui bacterian).
Profagul devine parte integrant a cromozomului
bacterian, se va replica odat cu acesta, deoarece este supus
unui proces de represie din partea genomului gazd.
Concluzie:
Transducia reprezint un transfer de gene
cromozomale de la o celula bacterian la
alta, mediat de bacteriofagi.
Unii bacteriofagi sunt capabili s transfere
orice gen bacterian (transducie genera-
lizat) iar alii numai anumite gene (trans-
ducia specializat).
Transducia generalizat
Transducia specializat
Importana practic: conversia
lizogen
Conversie lizogen = informaie genetic
adiional, de origine fagic, avnd asemnri
cu transducia specializat (toxigeneza tulpinilor
de Corynebacterium diphtheriae, Streptococcus
pyogenes etc).
III. Conjugare

- transfer genetic consecutiv contactului fizic ntre

dou bacterii cu polaritate sexual diferit;
La gram negativi:
- bacteria donor (sex masculin) posed un
plasmid conjugativ (factorul F+) cu gene care
codific sinteza de pili sexuali, prin care se
ataeaz la receptori specifici de pe suprafaa
unei celule receptor ( F-, de sex feminin);
Pil sexual
Pil sexual (E. coli)
Pil sexual
III. Conjugare

- (a) retragerea pililor aduce cele dou celule n

contact, prin puntea citoplasmatic care se
stabilete, urmnd s fie transferat ADN ul
plasmidic;
- consecutiv acestui tip de conjugare rezult
dou celule F(+) ;
- plasmidul F poate purta gene adiionale (ex. gene
de R la antibiotice) care pot fi transferate;
III. Conjugare
- (b) plasmidul F integrat n cromozom poate
conduce la transfer de gene cromozomale (ntre o
bacterie Hfr -high frequency of recombination - i
una F(-));
- transferul ncepe din vecintatea locului de inserie
al plasmidului F, care este ultimul transferat;
- cel mai frecvent bacteria receptor ramne F(-)
deoarece nu se transfer i factorul F (timp insuficient);
Transferul de ADN la bacterii gram-pozitive este
controlat de feromoni sexuali (molecule de supra-
fa prin care celulele bacteriene ader ntre ele).
Elemente genetice transpozabile

reprezint segmente de ADN capabile s se

excizeze i apoi s se insere n acelai
replicon (cromozom sau plasmid) sau n unul
diferit, putnd determina blocarea expresiei
unei gene n care se inser (factor mutagen);
are loc cu intervenia unei enzime, transpo-
zaza, fr s fie necesar omologia genetic.
 Elementele genetice transpozabile sunt
fragmentele/secvenele de inserie (IS -
inserted sequences) i transpozonii (Tn).
Elemente genetice transpozabile

Tipuri de elemente transpozabile:

secvenele de inserie (SI) constituite din
gena care codific transpozaza, flancat
de repetri inversate, a 20-40 perechi de
baze;
transpozonii, care posed n regiunea
central una sau mai multe gene care
codific anumite caractere (ex. rezistena
la antibiotice), flancate de SI.
 Transpoziia presupune integrarea ntr-un genom
a unui element genetic transpozabil din aceeai
molecul de ADN sau din alt molecul prezent n
aceeai celul.
Inseria oricrei gene ntre doua elemente transpo-
zabile face posibil transferul ei prin recombinare
neomolog, n aceeai celul, pe o molecul de
ADN nenrudit structural.
Astfel, prin transpoziie se pot produce deleii,
inversii, transpuneri de determinani genetici de pe
un plasmid pe altul sau chiar fuzionarea stabil a
unor repliconi complei, de pild a doua plasmide.
 Evolutia rezistenei la antibiotice a
bacteriilor nu poate fi conceputa astzi
fr fenomenul de transpoziie.
Mecanismele transpoziiei sunt responsa-
bile de formarea plasmidelor cu multirezis-
ten, prin inserarea succesiv pe un
plasmid a determinanilor genetici de
rezisten situai ntre doua elemente
transpozabile de pe alte plasmide.