GENETICA BACTERIAN

Ereditatea: nsuirea tuturor vieuitoarelor de a

transmite caracterele specifice speciei la urmai

Variabilitatea: apariia unor caractere diferite de
cele ale genitorilor.

Suportul material al ereditii: ADN.
Structura i replicarea acestuia este similiar cu
cea de la celulele eucariote.

Proporia de baze complementare este constant n
cadrul unei specii. Raportul adenin-timin/guanin-
citozin (AT/GC) servete drept criteriu taxonomic de baz
n clasificarea modern a bacteriilor.
I. Organizarea materialului genetic
la bacterii
Repliconi = formaiuni genetice ce se replic
independent

cromozomul bacterian

elementele genetice extracromozomiale
plasmidele
genomul bacteriofagilor

elementele genetice transpozabile
fragmentele de inserie
transpozonii).

1. Cromozomul bacterian haploid =
echivalent nuclear

codific informaiile absolut necesare
supravieuirii speciei n condiii normale

organizarea supercoil sau supertwist a
ADN (dublu spiralat spre dreapta i
suprahelicat spre stnga) asigur
mpachetarea economic a ADN i o
configuraie optim activitii funcinale a
ADN (replicare, transcripie, recombinare).

2. Formaiunile genetice
extracromozomiale
2.1 Plasmidele : molecule circulare de ADN
autonome, libere n citoplasm care se replic
independent de cromozom

conjugative - se pot transfera singure la alte bacterii
(plasmidele R)

neconjugative - care nu pot prsi ele nsi bacteria
de origine, ci numai prin intermediul unui alt plasmid
conjugativ sau a unui bacteriofag (de exemplu
plasmidul care codific secreia de beta-lactamaz la
S.aureus)

episomi, care se pot integra prin recombinare n
cromozomul bacterian, pierzndu-i autonomia de
replicare (plasmidul F sau factorul de fertilitate).

determinanii genetici eseniali ai
plasmidelor codific informaiile legate
de replicarea lor autonom
determinanii accesori codific caractere
fenotipice neeseniale supravieuirii
celulei bacteriene n condiii naturale
gene de transfer (tra),
gene de rezisten la antibiotice
(factorul R),
gene de secreie a unor toxine etc.

Plasmide de interes medical
A. Plasmidele de virulen poart determinanii
genetici ai unor factori de virulen
secreia de enterotoxina (termolabil i
termostabil)
factorul de colonizare la Escherichia coli,
hemolizina la Staphylococcus aureus,
Streptococcus faecalis i E.coli
exfoliantina la S. aureus
gena de invazivitate la Shigella
B. Plasmidele R -de rezisten (Factorul R) sunt
molecule circulare de ADN care constau n esen
din dou regiuni genetice:

genele care codific rezistena la antibiotice
R, unice sau multiple (prin aglomerarea mai
multor gene de rezisten R, pe acelai plasmid,
prin fenomenul transpoziiei repetate de
material genetic)

genele FTR care confer
plasmidului capacitatea
de a se transfera


RTF
R determinant
Peste 90% din tulpinile de spital prezint o
rezisten de tip plasmidic:
familia Enterobacteriaceae,
genurile:Escherichia, Salmonella, Shigella,
Proteus, Providencia, Klebsiella, Serratia
genurile Pseudomonas, Acinetobacter, Vibrio,
Yersinia, Pasteurella, Campylobacter,
Haemophilus, Neisseria, Bacteroides,
Staphylococcus, Streptococcus, Bacillus,
Clostridium, i Corynebacterium.
Plasmidele prezente la bacilii gram-negativi
sunt mai mari dect cele evideniate la
bacteriile gram-pozitive.
C. Plasmidul F plasmid de de sex factor de
fertilitate i conine genele de transfertra
-se pot transmite prin conjugare-
mediaz transferul de gene de la o celul donor
la una receptor
-n funcie de prezena factorului
bacterii F- lipsite de factorul F, denumite
celule femele i care sunt receptoare de
material genetic,
bacterii F+, masculine, care au factorul
F+, autonom, ca plasmid n citoplasm i
care sunt celule donoare,
bacterii Hfr care au factorul F+ integrat
n cromozom, de asemenea masculine,
bacterii F care au factorul F+ ca
plasmid autonom, dup ce acesta a fost
integrat n cromozom i l-a prsit rupnd
un fragment ADN din cromozom.
2.2 Bacteriofagii

virusuri care pazariteaz bacteriile
Morfologie.
un cap hexagonal alctuit dintr-un nveli
proteic caracteristic virusurilor (capsida) i
adpostete ADN
un gt
o prelungire numit picior (coad). Coada este un
cilindru rigid nvelit ntr-un manon proteic
asemntor miozinei i se termin cu o plac
hexagonal ce conine o enzim de tipul
lizozimului. De placa bazal se aprind 6 fibre cu
rol n fixarea bacteriofagului pe suprafaa
bacteriei.
Structura
bacteriofagului
Coa
d
Fibrele
Placa
bazal
Cap, capsid
Manon
contractil
Infecia celulei gazd cu bacteriofag
Ataarea
ireveversibil-prin
existena unor receptori de
perete specifici
Adsorbia fagului
Injectarea
acidului nucleic
Contracia
manonului
Tipuri de bacteriofagi
Genomul fagic ptruns n celul duce la sinteza
unor bacteriofagi identici cu cei din care a
provenit ADN.
ADN-ul se replic ribozomii bacterieni vor
sintetiza proteinele capsidale i ale cozii
Asamblarea noilor componente bacteriofagul
prsete celula=
bacteriofagi litici sau viruleni fagi care se
multiplic n interiorul celulei gazd, lizeaz
celula i elibereaz fagii progeni=ciclu litic
lizogeni sau temperai: fagi care se integreaz
n cromozomul celulei gazd dar care pot
iniia oricnd un ciclu litic, expresia
majoritii genelor fagice fiind reprimat :
profag sau fag lizogen
Consecinele lizogeniei
profagul codific el nsui unele caractere pe
care le dobndete bacteria lizogen.
toxigeneza la bacilul difteric care este
codificat de un profag ce se afl n
cromozomul bacterian. Tulpinile de bacili
difterici care nu sunt lizogenizate de acest
profag, nu sunt capabile s secrete toxina i
sunt, deci, nepatogene,
transducia- transmiterea de material
genetic prin intermediul bacteriofagilor
2.3 Elemente genetice transpozabile
Barbara Mc Clintock, 1931, 1952, 1983(gene
sltree)
Fragmentele de inserie (IS)


fragmente mici de ADN (fac parte in mod
normal din plasmid/cromozom)
cu limite structurale bine precizate
se pot integra repetat n mai multe situsuri
dintr-un genom.
Transpozoni (Tn)
Constau in 2 IS
conin i alte gene dect cele ce codifica
transpoziia
Transpozaz
ABCDEFG GFEDCBA
IS IS
Gene de rezisten
IS IS
Gene de rezisten
II. Variabilitatea la bacterii
Este o latur a geneticii -important
n medicina practic
Mutaia
Transfer de material genetic
Transformare
Transducie
Conjugare
Transpoziie
1. Mutaia
Modificri spontane ale genomului (modificri
ale secvenei de nucleotide din gen)produse de :
raze X, UV, ageni alchilani, etc.
Punctiform afecteaz 1 nucleotid
Inseria (adugare a sute de nucleotide)
Deleia (pierdere )
Asigur:
rezistena la chimioterapice,
structur antigenic modificat,
pierderea unor receptori specifici pentru bacteriofagi,
pierderea capacitii de sintez a unui metabolit
Dpdv medical:
one-step:rezistena brusc la AB
multi-step:bacteria devine rezistent prin mutaii
succesive
2. Transferul de material genetic
2.1 Transformarea
Reprezint transferul de material genetic de la o celul
donor la una receptor sub forma de ADN pur, eliberat fie
prin liza celulei donor, fie prin extracie chimic
1928 - Fred Griffith.
Streptococcus, Haemophilus, Bacillus, Neisseria,
Salmonella
se petrece nu numai ntre tulpinile aceleiai specii, ci i
ntre specii diferite
stare de competen - se modific structura peretelui
celular, care devine mai poros, ncrcat electropozitiv,
favoriznd legarea ADN-lui strin
are loc n medii unde triesc mai multe specii
bacteriene(colon) i sunt puse n libertate cantiti mai
mari de de ADN
Se practic azi n tehnici de inginerie genetic
2.2 Transducia :
transfer de gene cromozomiale de la o celul
bacterian la alta, mediat de bacteriofagi
Transducia generalizat
este mediat de fagii viruleni, litici, care dup
ptrunderea n celula bacterian se multiplic i
determin liza celulei gazd.
n timpul lizei celulei bacteriene cromozomul
acesteia se fragmenteaz
ocazional: un fragment cu o dimensiune
apropiat de cea a genomului fagic se integreaz
n capsida bacteriofagului, n locul genomului
fagic.
aceti fagi pot ptrunde n alte celule bacteriene
injectndu-le ADN-ul, ce provine de fapt din
genomul celulei donoare. ADN-ul se va integra n
cromozomul celulei receptoare prin recombinare,
conferindu-i acesteia caractere noi:
rezistena la chimioterapice,
proprieti ce in de patogenitatea bacteriei etc
Transducia specializat:
mediat de fagii temperai.
Dup ptrunderea n celula bacterian a ADN-lui
bacteriofagului temperat, acesta se inser n
cromozom prin recombinare sub forma de profag
n anumite condiii are loc un proces de
derepresie i genomul bacteriofagic prsete
cromozomul bacterian devenind din nou autonom
si iniiaz un ciclu litic
cnd prsete cromozomul bacterian poate detaa
din acesta un fragment de ADN care va rmne
legat de genomul bacteriofagic
bacteriofagul va putea intra n alt celul
integrndu-se n cromozomul acesteia tot sub forma
de profag.
Fragmentul provenit de la prima celul bacterian
poate s codifice diferite caractere
rezistena la antibiotice,
secreia unor enzime, toxine etc., ce se vor
manifesta fenotipic la noua bacterie gazd.
2.3 Conjugarea
transferul de material genetic de la o
bacterie donoare la una receptoare
printr-un proces de mperechere, ce se
realizeaz prin contactul direct dintre
cele dou celule.
Prin conjugare se pot transmite plasmide,
precum i gene cromozomiale (prin
intermediul factorului F+)

Factorul F+ poate fi situat pe:
plasmid transfer conditionat de existenta
genelor tra, responsabile de sinteza sex-pilului
si transferul plasmidului
sau pe cromozom-transfer de gene
cromozomale. Aceste celule , care au factorul F
integrat in cromozom, numite Hfr (frecenta
mare a recombinarii genelor de la celula
donoare cu cele de la celula receptoare).

Conjugarea la BGN

F+
F
+
Hfr
F
+

F
-

F
+

F
-

F
+

F
+

F
+

F
+

Hf
r
F
-

Hf
r
F
-

Hf
r
F
-
Hf
r
F
-

Transferul prin conjugare a plasmidelor
la bacilii gram negativi-
condiionat de prezena genelor de
transfer tra
incepe cu sinteza sex-pilului care va
adera de receptori specifici prezeni pe
peretele celular al bacteriei receptoare
apoi - replicarea de transfer a
plasmidului
o caten parental de ADN va rmne n
celula donor, iar a doua va trece n
celula receptoare, pe tiparul lor
sintetizndu-se catene complementare.

Dpdv medical importante sunt plasmidele
conjugative de rezisten R. Proprieti:
spectrul de gazde: circul ntre specii
diferite. Acest transfer are loc i n
laborator i n macroorganism. (s-a descris
transferul de plasmide de la bacilul coli
nepatogen la salmonele sau shigelle. Nu s-a
observat ns transferul plasmidelor de la
bacterii gram-negative la cele gram-
pozitive);
determinanii de rezisten R:
caracteristici pentru plasmidele conjugative
sunt determinanii de rezisten multipli. S-
au evideniat astfel la tulpinile izolate din
spital plasmide ce au factori de rezisten
fa de toate chimioterapicele uzuale
(ampicilina, cefalosporine, streptomicina,
tetraciclina, cloramfenicol, kanamycina,
gentamicina, sulfonamide).
. Conjugarea la bacterii gram-pozitive



procese de mperechere i la bacteriile
gram-pozitive
Streptococcus, Streptomyces,
Clostridium
celula receptoare produce un peptid cu
mol. mic (GM=1000 daltoni) care
determin sinteza unor substane proteice
de agregare de ctre celula donoare cu
afinitate pentru unele substane adezive de
pe suprafaa receptorului
se produce astfel o legtur strns ntre
receptor i donor cu formarea unei puni
intercelulare care permite transferul de
material genetic.
2.4. Transpoziia
integrarea ntr-un genom al unui elemente
genetic transpozabil din aceeai molecul de ADN
sau din alta prezent n aceeai celul .
Clasa I-transpoziia se face pe baza translocrii
conservative(secvena se mut de la donor la
receptor fr reduplicarea Tn)
IS au n jur de 1000 baze i fac parte n mod
normal din cromozom sau plasmide
sunt prezente n mai multe copii i flancate
la cele 2 capete ale aceleiai baze, dar n
ordine invers
Nu confer caracter nou celulei-pot produce
modificri n expresia genelor
Tn compui = 2 Is i delimiteaz determinani
de rezisten sau alte caractere
Clasa II
Clasa III
Inseria oricrei gene ntre dou elemente
transpozabile face posibil transferul ei
prin recombinare neomolog, n aceeai
celul pe o molecul de ADN nenrudit
structural.
Astfel, prin transpoziie se pot produce
deleii, inversii, transpuneri de
determinani genetici de pe un plasmid pe
altul sau chiar fuzionarea stabil a unor
repliconi complei, de pild a dou
plasmide.
Evoluia rezistenei la antibiotice a
bacteriilor nu poate fi conceput astzi fr
fenomenul de transpoziie.
Mecanismele transpoziiei sunt
responsabile de formarea plasmidelor cu
multirezisten, prin inserarea succesiv pe
un plasmid a determinanilor genetici de
rezisten situai ntre dou elemente
transpozabile de pe alte plasmide.
Ingineria genetic
Existena vectorilor (plasmide,
bacteriofagi i n ultimul timp descoperirea
existenei unor transpozoni ce se pot
transmite de la o celul bacterian la alta)
permite transferul de gene celulei
bacteriene, ceea ce consituie baza
ingineriei genetice.
Bacteria preferat a ingineriei genetice
este E.coli, care n mod natural nu este
capabil de transformare, dar creia prin
clonare i s-au introdus n genom cei mai
diveri determinani genetici provenind de
la organisme ndeprtate filogenetic, cum
sunt omul i animalele.
Prin aceast tehnic se introduc n
genomul bacterian gene care codific
sinteza unor substane ca, de exemplu,
interferoni, insulin, STH etc., a cror
obinere pe cale chimic ar fi fie imposibil,
fie foarte costisitoare.
Aplicaiile biotehnologiei
moleculare n diagnosticul
clinic
Au permis apariia unei noi discipline:
diagnosticul molecular reprezentnd
utilizarea probelor de acizi nucleici n
diagnosticul bolilor
boli infecioase,
neoplasme,
boli ereditare
O alt aplicaie : amprenta ADN -
permite diferenierea indivizilor prin
utilizarea unor fragmente minuscule
de esut sau probe de snge