BACTERIOLOGIE

CURS 4

Dr.Gurau Gabriela

Genetica bacterian

GENERALITTI
Ereditatea
nsusirea general biologic a tuturor vieuitoarelor de a
transmite caracterele specifice speciei la urmasi

Variabilitatea
apariia unor caractere diferite de cele ale genitorilor
intereseaz medicina n mod deosebit
d nastere unor tulpini bacteriene noi:
virulente
rezistente la chimioterapice
se adapteaz mai bine condiiilor de mediu
nlocuiesc bacteriile mai puin adaptabile.

SUPORTUL EREDITATII
reprezentat de ADN
se transmite la descendeni prin replicare si
diviziune
fr modificri genetice toi descendenii
bacteriei vor fi identici ntre ei si cu bacteria
mam
modificarea materialului genetic prin
ncorporarea unui fragment de material genetic exogen
(recombinare genetic)
mutaie spontan sau indus adugarea, pierderea,
substituirea sau inversarea ordinii unor baze

ADN
macromolecul
format din 2 catene
polinucleotidice,
antiparalele si
complementare,
rsucite n dublu helix
catenele unite prin
puni de hidrogen
ntre bazele azotate
opuse

functiile ADN ca material genetic:

depozitarea informaiei genetice

replicarea
transcrierea si traducerea genetic
protejarea materialului genetic propriu
reglarea activitii celulare
controlul activitii celulare

replicarea ADN
sinteza unor noi
molecule, identice

necesar unitatea de
replicare independent
REPLICON

REPLICON
molecul de ADN bicatenar, circular
caracterizat prin:
o secven nucleotidic specific marcnd
nceperea replicrii
gene care codific sinteza unor proteine
specifice
o secven nucleotidic semnal pentru
terminarea replicrii
exemple de repliconi: cromozomul si plasmidele
bacteriene, genomul bacteriofagilor etc.

GENOM suma genelor unui organism

GENOTIP totalitatea informaiei
genetice a unui organism
FENOTIP suma caracterelor
observabile, specifice unui organism,
produse de genotip n interaciune cu
mediul ambiant

VARIABILITATEA BACTERIAN
modificarea comportamentului celulei
bacteriene sau a descendenilor ei
variante:
VARIABILITATE FENOTIPIC
modificri morfologice sau fiziologice de tip adaptativ;
nu se transmit ereditar;
genomul nu este afectat

VARIABILITATE GENOTIPIC
modificri definitive ale materialului genetic
se transmit descendenilor

MECANISMELE VARIATIEI
GENOTIPICE
mutaie

transfer genetic + recombinare genetic

MUTATIA
modificare accidental n secvena
nucleotidic a unei gene modificri ale
mesajului genetic
apar prin:
substituii la nivelul materialului genetic
inversii
inserii
deleii

MUTATIA
mutaia spontan:
apare n condiii de mediu obisnuite, fr
intervenia unui factor decelabil

mutaia indus:
se produce sub aciunea unor factori fizici sau
chimici = factori mutageni

mutaia punctiform:
alterarea unui singur nucleotid, a unui singur
codon

MUTATIA
mutaia extins:
afecteaz secvene mai mari ale uneia sau mai multor
gene, alterrile depsind limitele unui codon

mutaia regresiv (retromutaie):

afecteaz celule mutante; determin revenirea acestora
la tipul iniial restabilind secvena nucleotidic originar

mutaii supresoare:
permit exprimarea funciei anterioare a genei desi
persist o modificare a secvenei bazelor nucleotidice

MECANISME DE TRANSFER ALE

MATERIALULUI GENETIC
Transformarea
transfer mediat de bacteriofagi (transducia,
conversia lizogenic)
conjugare

TRANSFORMAREA
bacteria accept ADN liber
de la o alt bacterie donor
sau din alte surse
1928 Griffith experiene
referitoare la virulena
pneumococilor fa de
soarecele alb
ADN ptrunde n celul
Recombinare genetic
nlocuirea unei secvene
nucleotidice omologe
Dobndirea unui caracter
genetic nou

TRANSDUCTIA
transferul unui fragment genetic
cromozomal sau extracromozomal prin
intermediul unui bacteriofag
bacteriofagul = transductor
bacteria receptoare = transductant

TRANSDUCTIA
Transductia specializat
(restrictiv)- transfer al
unui numr restrns de
gene din vecintatea
situsului de legare a
profagului n cromozomul
bacterian

Transductia generalizat
(nerestrictiv)
- transfer a oricrei gene indiferent de
pozitia ei n genom, ncorporate
accidental n fag
- realizat de un nr. mare de fagi
neintegrati

TRANSDUCTIA
Infecia donorului
replicarea fagului si degradarea ADN-ului celulei gazd
asamblarea particulelor fagice
eliberarea fagilor
infecia receptorului
recombinare

Conjugarea
transferul de material genetic de la o bacterie
donoare la una receptoare printr-un proces de
mperechere, ce se realizeaz prin contactul direct
dintre cele dou celule.
se pot transmite
plasmide
gene cromozomiale (prin intermediul factorului F+)

CONJUGAREA
legarea a 2 celule prin pili de sex
conjugare efectiv:

- punte specific de conjugare donor - acceptor

transfer:
endonucleaza cliveaz o caten a ADN circular d.c. ntr-un specific
transferul catenei n celula
receptor

sinteza:
pe ambele catene de AND (rmas si transferat) se sintetizeaz prin
complementaritate structura dublu catenar

- celula receptor = transconjugant

ORGANIZAREA GENOMULUI
BACTERIAN
2 categorii de determinani genetici:
genele eseniale localizate n structura
cromozomului bacterian
genele accesorii extracromozomiale prezente n
structura
plasmidelor
elementelor genetice transpozabile

PLASMIDELE
elemente genetice extracromozomiale capabile
de replicare independent de cromozom
(replicon)
conin informaie genetic neesenial pentru
viaa bacteriei
pot exista:
indefinit numai n stare autonom (libere n citoplasm)
factor R, Col
alternativ n stare autonom sau integrate n
cromozomul celulei gazd

PLASMIDELE
clasificare dup caracterele exprimate
fenotipic plasmide care codific:
rezistena la ageni antibacterieni
sinteza unor ageni antimicrobieni
sinteza de hemolizine, enterotoxine, factori de
colonizare etc. (patogenitate)
enzime ale unor ci metabolice particulare
plasmide criptice nu se cunosc caracterele
somatice exprimate

FACTORUL F
(factorul de sex, factorul de fertilitate)
controleaz capacitatea unor bacterii de a
fi donatoare de material genetic
codific structurile (pilul F) si enzimele
necesare transferului de ADN
au caracter de mascul donatoare de
material genetic (factorul F)

Donor

Recipient

FACTORUL F
(factorul de sex, factorul de fertilitate)
bacterii F- fr factor F
celule femele
receptoare de material
genetic
bacterii F+ - cu factor F
autonom n citoplasm
celule mascule
donatoare de material
genetic
Celul mascul F+
factor F autonom n citoplasm

FACTORUL F
(factorul de sex, factorul de fertilitate)
bacterii Hfr
(high frequency of recombination)
au factor F integrat n cromozomul bacterian
donatoare de material genetic cu mare frecven de
conjugare si recombinare;
transferul unui numr variabilde gene cromozomale mai rar
chiar transferul factorului F

F+

Hfr

FACTORUL F
(factorul de sex, factorul de fertilitate)
bacterii F
au o structur plasmidic de tip special = factor
de fertilitate recombinant

a fost anterior integrat ntr-un cromozom, s-a

desprins ncorpornd unele gene cromozomale
caracterul ncrucisrii Fcu FF- devine F
F rmne F

Hfr

Mecanismul de transfer al materialului genetic

ntre bacterii F+ si F-

realizarea de puni de conjugare

transferul ADN
caracterul ncrucisrii F+ cu FF- devine F+
F+ rmne F+

Transfer sczut al genelor cromozomale ale donorului

F+

F+

F-

F+

F+

F-

F+

F+

Mecanismul de transfer al materialului genetic

ntre bacterii Hfr si F-

realizarea de puni de conjugare

transferul ADN
recombinare homolog
caracterul ncrucisrii Hfr cu FF- rar devine Hfr
Hfr rmne Hfr

Transfer crescut al unor gene cromozomale ale donorului

Hfr

Hfr

F-

F-

Hfr

Hfr

F-

F-

F-

F-

PLASMIDELE R
(de rezistent la antibiotice)
confer rezisten simultan la 1-8
antibiotice
alctuite din:

RT
F

gene de rezisten
determinant de rezisten = r
gene care formeaz factor de
transfer al rezistenei RTF

RTF plasmid de conjugare

transfer de gene
-cele 2 tipuri de elemente pot
exista independent sau se pot
asocia
- transferul plasmidelor R
prin conjugare
- prin transducie mediat de fagi

R
determinant

PLASMIDELE Col
codific proprietatea unor bacterii de a
sintetiza bacteriocine
sunt transferabile de la tulpinile Col+ la
cele Col- prin:
transformare genetic
transducie fagic
conjugare

ELEMENTE GENETICE
TRANSPOZABILE
secven specific de ADN care si
menineintegritatea fizic, structural,
genetic,funcional n cursul translocaiei
de la o poziie la alta pe acelasi genom
sau pe genomuri diferite
3 categorii:
secvene de inserie IS
transpozoni Tn
bacteriofagi

Secventele de insertie
nu au nici o gen si nici
o alt funcie n afar de
cea de inserie
dup inseria lor pot
apare :
modificri n expresia
unor gene
IS
modificri n rata
IS
incidenei deleiilor n
zonele adiacente situsului
lor de inserie

Resistance Gene(s)

IS

Resistance Gene(s)

IS

Transpozoni
poart gene care confer
bacteriei funcii noi:
rezistena la antibiotice
capacitatea de sintez a
unor enzime
ABCDEFG
producere de enterotoxine
sinteza antigenelor
bacteriene de suprafa,etc.

Transposase

GFEDCBA

Bacteriofagi
virusuri care paraziteaz
bacteriile
se cunosc 6 grupe
morfologice de
bacteriofagi
cei mai bine studiai bacteriofagii T ai
bacilului coli.
bacteriofag T normal

bacteriofag dup injectarea

ADN n celula gazd; capsida
goal; coada contractat

Bacteriofagi
formai din:
cap hexagonal

alctuit dintr-un nvelis

proteic caracteristic
virusurilor (capsida)
adposteste acidul nucleic
un gt
prelungire numit
picior(coad)
cilindru rigid nvelit ntr-un
manson proteic asemntor
miozinei
se termin cu o plac
hexagonal ce conine o
enzim de tipul lizozimului.
de placa bazal se prind 6
fibre cu rol n fixarea
bacteriofagului pe suprafaa
bacteriei.

Replicarea bacteriofagului
CICLUL LITIC al bacteriofagilor fagi
viruleni
atasare
contracie manson
ptrundere acid nucleic n celul
sinteza componeni fagici
asamblare
iesire din celul

Ciclul replicativ al bacteriofagului

1. Atasarea bacteriofagului pe suprafaa
peretelui bacterian
-prin receptori de perete, specifici.
-Aceast specificitate este de tip enzimatic st la baza lizotipiei
2. Contracia mansonului proteic; bacteriofagul
si injecteaz numai ADN n celula bacterian

Ciclul replicativ al bacteriofagului

3. Genomul fagic va determina sinteza de noi
bacteriofagi identici cu cel de la care a provenit
ADN
ADN se replic prin replicare semiconservativ
ribozomii bacterieni vor sintetiza proteinele
capsidale si ale cozii.
4. Asamblarea noilor bacteriofagi
5. Iesirea vor prsi celula bacterian care se
lizeaz

Replicarea bacteriofagului
CICLUL LIZOGEN al bacteriofagilor
fagi temperai
uneori genomul bacteriofagului se va
integra n cromozomul bacterian
ncadrndu-se si funcional n acesta.
el nu se mai replic dect n acelasi timp
cu cromozomul bacterian, deci n timpul
diviziunii bacteriene si se numeste profag

Lizogenie

consecintele lizogeniei pentru bacterie

bacteria lizogenizat este imun la infecia cu acelasi
bacteriofag, dar nu pentru ali bacteriofagi
profagul codific el nsusi unele caractere pe care le
dobndeste astfel bacteria lizogen.
exemplu clasic n acest sens este toxigeneza la bacilul difteric
care este codificat de un profag ce se afl n cromozomul
bacterian.
Tulpinile de bacili difterici care nu sunt lizogenizate de acest
profag, nu sunt capabile s secrete toxina si sunt, deci
nepatogene,

transducia, mecanism de transfer genetic de la o

bacterie la alta, mediat de bacteriofagi

Importanta practic a bacteriofagilor

Cercetri biologice
utilizai ca model n studiul proceselor
biologice fundamentale:
replicarea ADN
funciile genelor
morfogeneza viral

Studii de inginerie genetic

vectori pentru clonare genetic
adjuvani n procesele de secvenare

Importanta practic a bacteriofagilor

Terapie si prevenie
administrarea unei mixturi de bacteriofagi
pentru tratarea si prevenirea infeciilor
intestinale
concept vechi, azi studiat cu atenie
animale fagi care atac doar EHEC

Importanta practic a bacteriofagilor

Epidemiologie
tipizare bacterian LIZOTIPIE
LIZOTIP = FAGOVAR
n epidemii identificarea sursei de infecie, cii de
transmitere
pentru

Salmonella Typhi
Salmonella Paratyphi
Staphylococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa etc.

Recombinarea secventelor de ADN

Indiferent care este mecanismul prin care are
loc transferul sau transpoziia de material
genetic inserarea ADN la noul sediu are loc
prin recombinare
recombinare = formarea de noi combinaii
genetice ntr-un genom se poate petrece prin
schimb de segmente homologe
integrare suplimentar de ADN

Recombinarea secventelor de ADN

Recombinarea legitim sau homolog
are loc atunci cnd un fragment de ADN provenit de la celula donoare,
sauchiar din alt molecul de ADN se inser ntr-o regiune a ADN
receptor ce se aseamn din punct de vedere chimic cu cea a ADN-ului
donor, deci prezint o homologie de baze
este ntlnit n transformare
n unele forme de transducie si conjugare
implicate mai multe enzime dintre care recA-proteina si recBC nucleaza
recombinarea legitim se mai numeste recA-dependent

Recombinarea nelegitim sau heterolog

const n integrarea de ADN suplimentar ntr-un replicon
este recA-independent
exemple de recombinare heterolog sunt
integrarea plasmidului F
integrarea unor profagi n cromozom
transpoziia elementelor genetice mobile