Virusurile. Bacteriofagul.

Caractere morfobiologice.
Utilizarea practic a
bacteriofagilor


1.

2.
3.

4.

5.
6.
7.

Particularitile virusurilor
Reprezint structuri acelulare cu potenial
infecios
Dimensiuni de rangul nm (20-400 nm)
Genomul viral este constituit dintr-un singur tip de
AN (ADN sau ARN)
Sunt lipsite de metabolism propriu, fiind parazii
obligai intracelulari
Nu cresc i nu se divid, se reproduc n celule vii
Nu pot fi cultivate pe medii artificiale
Rezisten natural la antibiotice

CLASIFICAREA VIRUSURILOR

Dup tipul AN (cu genom ARN/ADN)

Dup dimensiuni (mici 20-50 nm, medii
50-150 nm, mari peste 150 nm)
Dup tipul de simetrie a capsidei
(helicoidal, cubic, mixt)
Dup compozitia chimic (simple,
complexe)
Dup gazd (om, animal, insect, bacterie)
Dup sensibilitatea n mediul extern,
substane chimice, etc

Ordin (-virales)
Familie (-viridae)
Subfamilie (-virinae)
Gen (-virus)
Specie (Virusul gripal,
poliomielitic, al hepatitei B,
etc)

COMPOZIIA CHIMIC I STRUCTURA

VIRIONULUI

Virion unitate structural infecioas

a virusului

Virusurile simple acid nucleic (AN) i

nveli proteic capsida (ansamblu numit
nucleocapsid)
Virusurile complexe nucleocapsid i un
nveli extern, lipoglicoproteic
(supercapsid, peplos)

Acidul Nucleic ADN sau ARN, mono- sau

bicatenar, liniar, circular sau
fragmentat.
ARN monocatenar : ARN+ (caten cu sens,
funcie de ARNm) sau ARN- (caten
fr sens, este necesar prezena
enzimei polimeraza)
Funcia AN asigurarea replicrii AN i
expresia genomului pentru sinteza
proteinelor virale

Capsida format din uniti proteice, capsomere,

aranjate simetric.
1.
Simetrie helicoidal capsomerele se fixeaz
pe catena de AN, form de bastona
2.
Simetrie cubic (icosaedric) capsomerele se
aranjeaz n jurul AN, formnd un icosaedru
(poliedru regulat cu 20 fee triunghiulare i 12
vrfuri), eikos=20
3.
Simetrie mixt (bacteriofagii, poxvirusurile)
Funcia capsidei protecia AN, rol antigenic,
adeziune

Supercapsida structur glucido-lipido-proteic,

derivat din membrana celulei gazd. Lipidele
provin din membrana celular, iar glicoproteinele
sunt de origine viral (ex.: hemaglutinina,
neuraminidaza)
Funcie protecie, antigene de suprafa, adeziune
Unele virusuri conin enzime polimeraze,
transcriptaze, etc.
Aciunea factorilor fizici, chimici
Virusurile sunt foarte sensibile la cldur, desicare,
raze UV. Detergenii i solvenii inactiveaz
virusurile cu supercapsid.
Pot fi conservate prin liofilizare sau la -80C

Proprietatile biologice ale

bacteriofagului

Bacteriofagii sunt virusuri ce infecteaz

bacteriile. Este un microorganism (o unitate
genetic) care nu are structur celular, nu
posed metabolism propriu i este capabil s
se reproduc doar n celula-gazd.

Bacteriofagii sunt parazii intracelulari

obligatorii ale celulelor bacteriene. Toate
bacteriile pot fi infectate de ctre
bacteriofagi. In majoritatea cazurilor, un
fag anume infecteaz doar celulele unui
singur gen, unei anumite specii sau a unei
tulpini (specificitatea fagului). Aceast
specificitate de infecie este determinat
de prezena receptorilor pentru acest fag
la suprafaa bacteriei-gazd.

1.

2.

3.

STRUCTURA BACTERIOFAGULUI
Structura fagilor corespunde regulilor
generale ce se refer la structura
virusurilor.
Acid nucleic (ADN sau ARN, mai frecvent
dublucatenar, liniar sau circular).
Inveli proteic numit capsid, cu rol de
protecie a materialului genetic. Prin
receptorii de la suprafa contribuie la
infecia gazdei.
Unii fagi pot conine i enzime (ex.:
lizozim, endolizina).

Capsida este constituit din subuniti

proteice, capsomere, aranjate simetric n
ordine distinct, conferind forma fagului.
Exist 3 forme morfologice principale de
fagi:
Fag icosaedric: are form sferic
constituit din 20 fee triungiulare, 30
muchii i 12 vrfuri (simetrie cubic a
capsidei).
Fag cilindric: reprezint bastonae
proteice formate din capsomere,
asamblate ntr-o structur tubular
(simetrie helicoidal a capsidei).

Fag complex: constituit din cap icosaedric ataat

la o coad helicoidal. Coada este format din
doua tuburi concentrice : un tub intern rigid canalul axial, inconjurat de teaca cozii, un
manon contractil.
Gulerul cozii (colul) se afl la jonciunea capului cu
coada.
La partea distal a cozii se afl o plac
hexagonal, placa bazal, la fiecare apex fiind
ancorate cte un croet i o fibr. Ele reprezent
sistemul de fixare a fagului pe bacteria receptoare
i contribuie la injecia materialului genetic n
celul.
Nu toi fagii au o astfel de morfologie. Unii au
coad lunga i non-contractila, alii - coada scurt,
sau far coad. Exist i fagi filamentoi.

Interaciunea dintre bacteriofag

i celula-gazd

Bacteriofagii exist n stare de virioni

extracelulari, iar la infectarea unei bacterii ei pot
duce la doua tipuri de infecii:
Infecie litic: determinat de fagii viruleni. La
finele ciclului de multiplicare bacteria infectat
este lizat elibernd fagii nou-formati.
Infectie nelitica sau lizogen: determinat de fagii
temperai (moderai). Ei infecteaz bacteriile fr
a le distruge.

INFECTIA LITIC (ciclul biologic al fagului

virulent)
Adsorbia. Dupa o ciocnire intmpltoare,
fagul se fixeaz prin intermediul plcii bazale
(la inceput prin fibrele sale, apoi prin croete)
de un receptor specific la nivelul peretelui
celular bacterian (uneori pili).

Penetrarea. Dup fixarea ireversibil a fagului

pe peretele bacterian, n urma aciunii unei
enzime (ex. lizozim) care perforeaz peretele,
are loc contracia manonului care apropie
capul de placa bazal, canalul axial
penetreaz membrana citoplasmic a bacteriei
i ADN fagic este injectat in bacterie.

Expresia genomului viral (biosinteza

componentelor fagice, maturizarea).
Dup penetrarea ADN viral n bacterie
(fag vegetativ), timp de aproximativ 12
minute, virionul nu este depistat n
bacteria infectat. Aceasta este faza de
eclips. Ea coincide cu sinteza enzimelor
virale care vor asigura ulterior:
replicarea ADN fagic;
sinteza proteinelor fagice;
asamblarea acestor elemente.

Asamblarea fagilor. Odat ce compuii

capsidei i acizii nucleici se sintetizeaz n
cantiti suficiente, are loc asamblarea
spontan a particulelor noi de fagi, prin
incorporarea acidului nucleic n capsid.
Eliberarea. Majoritatea fagilor, dup
maturizare, sunt eliberai n urma lizei peretelui
bacterian cu enzime ale bacteriofagului
(endolizina)
Timpul dintre infectie i eliberare (ciclul de
reproducere) este de 20-60 minute la 37C,
fagii sunt eliberai n valuri de 50-1000 fagi per
celul.

INFECTIA NON LITIC SAU LIZOGEN :

FAGII TEMPERAI

Fagii temperai (moderai) atunci cand infecteaz o

bacterie pot:
- sau induce un ciclu complet de multiplicare, ce duce la
liza bacteriei,
- sau, mai frecvent, dup injectarea ADN-ului, s
integreze acest ADN n cromozomul bacterian prin
recombinare specific (lizogenizare), formnd un
profag
- sau sa ramn n citoplasm sub form de plasmid.
In ultimele dou cazuri bacteria nu moare i, multiplicnduse, replic genomul viral concomitent cu propriul su
genom: bacteria (cultura) este numit lizogen. Ea
posed i transmite descendenilor capacitatea de a
produce fagi n absena infeciei.

Proprietile culturilor lizogene

1. Inducia ciclului litic. Profagul pstreaz
virulena potenial. Meninerea strii de
lizogenie implic sinteza unui represor
proteic, codificat de fag. Dispariia lui duce la
inducia ciclului litic. Inducia se poate
declana spontan la un numar limitat de
celule sau poate fi provocat la majoritatea
celulelor, de ex., la aciunea unor mutageni,
ca razele ultraviolete sau mitomicina C.

Ca urmare, cnd sistemul SOS este activat,

proteina RecA scindeaza represorul
proteic al fagului, permind expresia
ciclului litic. Pentru aceasta profagul trebuie
sa fie excizat - operaie invers integrrii.
Excizia este efectuat de ctre proteina
xis, codificat de fag. Urmeaz replicarea
genomului, sinteza componentelor fagului
i fagii asamblai sunt eliberai prin liza
celulei (profagul - gen potenial letal!).

n timpul replicrii fagului moderat fragmente de

ADN bacterian pot fi ntroduse din eroare n
particulele virale. Aceti fagi pot n continuare
ntroduce n cromosomul altor bacterii ADN
bacterian capturat proces de transfer genetic
numit transducie.
Natura genelor bacteriene transferate poate fi
diferit: gene din apropierea locului de inserie a
fagului (transducie specific) sau fragmente de
ADN bacterian ntroduse din ntmplare n
capsida fagului (transducie generalizat)

2. Imunitate contra suprainfectiei. Bacteriile

lizogene sunt imune la fagul virulent omolog
profagului gzduit. Acest fag se adsoarbe,
injecteaza ADNul, dar fr a se replica sau provoca
liza.
3. Conversie fagic (modificarea fenotipului celulei
cauzat de genele profagului).
Bacteriile infectate cu un fag pot prezenta unele
caractere absente la celulele neinfectate. Aceast
conversie fagic poate fi cauzat de expresia unor
gene ale fagului de ctre celule, sau de inactivarea
unor gene cromozomale la integrarea profagului.
De ex., tulpinile de Corynebacterium diphtheriae
care provoac difteria sunt lizogenizate de un
anumit tip de fagi care codeaza i exprim o toxin
puternic; toxina eritrogen a Streptococcus
pyogenes , etc

APLICAREA PRACTIC A FAGILOR

n domeniul terapeutic
- Tratamentul i profilaxia maladiilor infecioase
n domeniul diagnostic
- Fago-identificarea identificarea tulpinilor
bacteriene necunoscute cu ajutorul fagilor
omologi (metoda Otto, Furt, etc)

Lizotipizarea (fagotipajul). Permite diferenierea

unor tulpini din cadrul aceleeai specii
(subdivizarea speciei n lizotipuri/fagovaruri).

Este utilizat pentru tulpini de Staphylococcus

aureus, Salmonella Typhi, .a.
Lizotipul reprezint un marker epidemiologic.
Fagii reprezint un model de studiu pentru
geneticieni, fagii temperai se utilizeaz n
ingineria genetic (ei pot asigura transferul de
material genetic prin transducie).