3,4. Peretele bacterian Peretele bacterian nconjoar membrana citoplasmatic. Lipsete la bacteriile din genul Mycoplasma.

Are o grosime de circa 15-30 nm. Bacteriile Gram-pozitive conin aproximativ 80-90% murein (peptidoglican, glicopeptid parietal). Mureina este un heteropolimer al crui schelet este format din lanuri polizaharidice. Aceste lanuri sunt formate prin polimerizarea, alternant, a 2 structuri zaharidice: - acidul N-acetil-muramic (NAM) i - N-acetil-glucozamina (NAG). Fiecare molecul de NAM are substituit un tetrapeptid alctuit din D i L-aminoacizi. Se consider c aminoacizii n form D confer un grad de protecie fa de enzimele proteolitice. ntre tetrapeptidele substituite, la lanurile polizaharidice alturate, se stabilesc legturi peptidice prin gruparea terminal COOH a unui tetrapeptid i grupri terminale libere ale tetrapeptidului vecin. Astfel se formeaz structuri bidimensionale, destul de complicate, sub forma unor straturi care nconjoar ntreaga celul bacterian. Bacteriile Gram-pozitive rein violetul de metil (violet de genian n coloraia clasic) i au culoare violet pe frotiul colorat Gram. La unele bacterii, reeaua de baz este acoperit de reele suplimentare cu specificitate antigenic, alctuite de exemplu din acid teichoic (polimer de ribitol fosfat i glicerol fosfat), legat de regul covalent la peptidoglican. n cazul n care structurile fosfat se gsesc n cantiti limitate sau nu pot fi sintetizate, la nivelul peretelui bacterian putem ntlni acidul teichuronic. Dintre bacteriile Gram-pozitive se pot aminti stafilococul, streptococul, enterococul, bacilul difteric, bacilul listeriozei, actinomicetele, bacilul antraxului, clostridiile etc. n cazul bacteriilor Gram-negative se descrie un perete celular n general mai subire dar mult mai complex. Peretele este alctuit dintr-un strat fin de peptidoglican (circa 10-20% din structura peretelui) care este acoperit de o membran extern. Spaiul dintre membrana citoplasmatic i membrana extern (include peptidoglicanul) reprezint spaiul periplasmic. Din punct de vedere chimic, membrana extern este alctuit din fosfolipide, proteine i cantiti variabile de lipopolizaharide. Alte proteine importante care se afl la acest nivel sunt porinele. Lipopolizaharidul (endotoxina) are n componen dou structuri eseniale: lipidul A i polizaharidul O. Bacteriile Gram-negative se decoloreaz cu alcool-aceton i se recoloreaz cu fucsin diluat (au culoare roie la coloraia Gram). Dintre bacteriile Gramnegative am putea aminti meningococul, gonococul, enterobacteriile, vibrionul holeric, bacilul piocianic, cocobacilii Gram-negativi (ex. Haemophilus influenzae, Bordetella pertussis, Brucella abortus) etc. Bacteriile acid-alcool rezistente (de exemplu, mycobacteriile sau nocardiile) conin o cantitate substanial de lipide la nivel parietal. Rezist decolorrii cu acid-alcool (au culoare roie pe fond albastru la coloraia Ziehl-Neelsen); aceast coloraie continu s reprezinte o etap esenial n diagnosticul bacteriologic al tuberculozei, indiferent de cele mai recente descoperiri privind tehnicile moderne de laborator (inclusiv utilizarea sondelor nucleotidice sau amplificarea genetic). n afar de mycobacterii (n special M. tuberculosis, dar i numeroase mycobacterii atipice (non-tuberculous mycobacteria, NTM), ex. M. avium, M. intracellulare, M. kansasii), exist i alte specii bacteriene care pot aprea colorate asemntor dup utilizarea metodei Ziehl-Neelsen, spre exemplu bacilul difteric (C. diphteriae). Rolurile peretelui bacterian: - prin rigiditate asigur forma caracteristic bacteriei (coci, bacili etc); - asigur rezistena bacteriei (de exemplu la variaii ale presiunii osmotice i la presiuni interioare care pot ajunge pn la 20 atm.);
1

- flexibilitatea peretelui celular la unele bacterii (ex. spirochete) poate fi explicat att prin flexibilitatea membranei ct i prin grosimea redus a peptidoglicanului; - are rol antigenic (carbohidratul C la streptococ, antigenul O - polizaharidic, n cazul bacteriilor Gram-negative etc); - prezint receptori, de exemplu pentru bacteriofagi; - are rol n diviziunea bacterian participnd la formarea septului transversal; - la nivelul lui pot aciona unele antibiotice (exemplu beta-lactaminele, vancomicina, Dcicloserina); - la bacteriile Gram-negative este asociat cu numeroase enzime (situate n spaiul periplasmic i la nivelul membranei externe). Protoplastul (form rotund nconjurat de membrana citoplasmatic) reprezint bacteria Gram-pozitiv dup ndeprtarea complet a peretelui, de exemplu sub aciunea lizozimului care lizeaz mureina. n medii hipotone protoplastul se lizeaz. Este o structur care nu se poate multiplica. Sferoplastul reprezint bacteria Gram-negativ dup degradarea parial a peretelui (conine o cantitate mai mic de murein). Lizozimul poate aciona asupra peptidoglicanului numai dup alterarea membranei externe (ex. dup tratare cu EDTA). n medii hipotone sferoplastul se lizeaz. Spre deosebire de protoplast, se poate multiplica. Anumite bacterii produc autolizine (enzime hidrolitice care degradeaz peptidoglicanul, spre exemplu glicozidaze, amidaze, peptidaze). Este probabil ca aceste substane s aib un rol n creterea i multiplicarea bacterian. Formele L n 1935 s-a observat prezena unor germeni modificai structural. Au fost numite forme L, dup numele Institutului Dr. Lister unde au fost descoperite. Nu sunt microorganisme noi, ci variante ale unor microorganisme cu peretele bacterian modificat. Utilizndu-se lizozim sau penicilin ca ageni inductori s-au putut obine forme L de la majoritatea bacteriilor. Este posibil ca aceste forme L s explice, prin prezena lor n organism, anumite infecii cronice (de exemplu infecii ale aparatului urinar). 7. Ribozomii: structur, rol Ribozomii au form aproximativ sferic, pot fi vzui la microscopul electronic. Mrimea lor (circa 10-20 nm) depinde de concentraia ionilor Mg2+ i K+. Unii ribozomi sunt liberi n citoplasm, n timp ce alii apar legai de faa intern a membranei citoplasmatice. Din punct de vedere chimic conin circa 65% ARNr (ribozomal). Au constanta de sedimentare de 70 uniti Swedberg dar sunt constituii din dou subuniti de cte 30S i respectiv 50S. n subunitatea mic intr o singur molecul de ARNr, 16S i 21 de tipuri de proteine ribozomale. n subunitatea mare intr mai multe tipuri de molecule de ARNr (ex. ARNr 23S). ntre cele dou subuniti se formeaz canalul prin care trec moleculele de ARNm (mesager) n cursul sintezei proteice. Se apreciaz c ntr-o bacterie cu dimensiuni medii, aflat n faza de cretere activ, se sintetizeaz circa 500 ribozomi / minut, metabolismul bacterian fiind foarte intens. Ribozomii au rol esenial n procesul de biosintez proteic. Au tendina de a se grupa n polisomi (poliribozomi) cu eficien sporit n biosinteza proteic. n aceste condiii, la un moment dat pe aceeai molecul de ARNm se afl n scopul traducerii mesajului genetic mai muli ribozomi, care constituie un ansamblu care poart numele de polisom. Biosinteza proteic Biosinteza proteinelor are loc la nivelul ribozomilor. Cu toate c secvena de aminoacizi din structurile proteice este dictat de secvena de baze azotate din ADN, pentru c nu exist afinitate i posibilitate de cuplare ntre ADN i
2

aminoacizi este necesar ca o alt structur s permit poziionarea aminoacizilor n lanul viitoarei proteine. Iniial are loc transcrierea informaiei genetice pe ARNm (mesager), care va transporta aceast informaie de la genom la nivelul ribozomilor, sub forma unei copii complementare. Gena este segmentul de ADN care deine informaia genetic pentru sinteza unei proteine. Segmentul de ADN care controleaz sinteza unui polipeptid poart numele de cistron. ARNm care deine informaia genetic pentu sinteza unei singure catene de polipeptid poart numele de ARNm monocistronic. La bacterii, de obicei, o molecul de ARNm trebuie s poarte informaia necesar pentru sinteza mai multor catene diferite i n acest caz ARNm poart numele de ARNm policistronic. Aceast situaia particular este datorat dimensiunii mici a acestor procariote precum i metabolismului intens care are loc n cursul procesului de cretere i multiplicare. Spre exemplu, la E. coli, pentru metabolizarea lactozei sunt necesare potenial 3 enzime diferite, iar mesajul genetic pentru sinteza acestora se afl deinut de o singur molecul de ARNm policistronic. De regul, numai o caten de ADN este folosit drept matri pentru ARNm. Transcrierea mesajului genetic este selectiv (se desfoar ntre promotor i semnalul de terminare) i este controlat de ARN polimeraza ADN-dependent. Pentru traducerea mesajului genetic este necesar intervenia la nivel ribozomal a moleculelor de ARNt (de transfer). Acestea au o dubl specificitate (pentru fiecare dintre cei 20 de aminoacizi exist una sau mai multe molecule de ARNt; n acelai timp exist enzime specifice fiecrui tip de aminoacid care controleaz legarea corect a aminoacizilor activai pe ARNt corespunztor). La nivelul fiecrui ARNt exist trei nucleotide (anticodon) complementar codonului care corespunde aminoacidului. ARNt nu are niciodat la anticodon succesiunea UUA, CUA sau ACU i n aceste condiii ne putem explica motivul pentru care codonii UAA, UAG i UGA sunt codoni stop. Succesiunea specific a nucleotidelor este transpus ntr-o secven specific de aminoacizi care intr n constituia lanului polipeptidic din proteina n curs de formare. 8. Flagelii: structur, rol, localizare Cilii sau flagelii confer mobilitate bacteriilor. Mobilitatea poate fi evideniat n preparatul proaspt (ntre lam i lamel) sau pe anumite medii speciale (ex. MIU). Mobilitatea germenilor din genul Proteus este observat pe orice mediu de cultur solid pe care acest microorganism foarte mobil se dezvolt (fenomenul de invazie). Flagelii sunt formaiuni fine, alungite, flexibile, cu origine la nivelul corpusculului bazal. Acesta este alctuit (de ex. la majoritatea bacteriilor Gram-negative) din patru discuri aranjate ca dou perechi pe o structur care trece prin mijlocul lor. Corpusculul bazal este plasat n perete i membrana citoplasmatic. Din punct de vedere chimic flagelul este de natur proteic (flagelina). Roluri: - n mobilitate (cu o vitez de circa 50 m / secund); cilul are o micare de rotaie, asemntoare unei nurubri n mediu i ca atare corpul bacterian este mpins n direcia opus; motorul rotaiei e reprezentat de corpusculul bazal iar energia este obinut din ATP; - antigenic (datorit structurii proteice - antigenul H, specific de tip); - n clasificarea bacteriilor (prin numr i distribuie), bacteriile putnd fi - monotriche (cu un flagel dispus la o extremitate), de exemplu Vibrio cholerae, Pseudomonas aeruginosa;
3

- lofotriche (cu un mnunchi de flageli dispus la o extremitate); - peritriche (cu mai muli flageli dispui de-a lungul suprafeei bacteriene), de exemplu E. coli, Proteus mirabilis, Salmonella typhi. 9. Sporii: structur, compoziie chimic, rol, localizare Fenomenul de sporogenez este mai des ntlnit la Bacillaceae (genurile Clostridium i Bacillus). Pe sol, n condiii de uscciune, la adpost de lumina solar direct, endosporii persist zeci i poate sute de ani. Materialul genetic este concentrat i, mpreun cu apa legat, lipide, Ca++, Mg++, este nconjurat de un strat protector (membrana sporal, cortexul sporal, nveliurile sporale). Smburele sporal mpreun cu membrana citoplasmatic formeaz protoplastul sporal. Roluri: - form de rezisten i conservare a speciei (n condiii favorabile un spor se poate transforma ntr-o bacterie / forma vegetativ; procesul de formare a sporului ar putea fi considerat una dintre cele mai primitive forme de difereniere, dar nu este un proces de reproducere celular aa cum se ntmpl la fungi sau parazii); - rezist la cldur, uscciune, la anumite substane chimice i antibiotice, raze UV etc. Sporul poate fi localizat: - central sau subterminal, mai mic dect celula (ex. la Bacillus anthracis); - central sau subterminal, mai mare dect celula (ex. la Clostridium hystoliticum etc); - terminal (ex. la Clostridium tetani, cu aspectul de b de chibrit). Poate fi evideniat prin coloraii speciale (de exemplu verde malachit) sau prin coloraia Gram (locul sporului rmne necolorat). Este sensibil la formol, propiolacton etc. Este distrus prin autoclavare.
10. Nutriia bacterian

Nutriia bacterian reprezint suma proceselor metabolice care conduc la producerea de materiale convertibile n energie i n diferite componente celulare. Nutrienii sunt substane ale cror soluii pot traversa membrana citoplasmatic pentru a fi antrenai n reaciile metabolice care asigur creterea i multiplicarea celular. n raport cu sursa de energie, bacteriile se mpart n: bacterii care folosesc energie luminoas i triesc la lumin (photobacterii) i bacterii care i procur energia prin procese de oxidoreducere catalizate enzimatic i triesc la ntuneric (scotobacterii, chimiosintetizante). n raport cu sursele folosite ca material de sintez n ambele diviziuni se difereniaz: bacterii autotrofe, capabile s-i sintetizeze toi compuii organici din materie anorganic i bacterii heterotrofe, dependente de prezena unor compui organici. Nutriia principalelor bacterii studiate Majoritatea bacteriilor comensale, condiionat patogene sau patogene importante pentru om, sunt chimiosintetizante, heterotrofe. Se difereniaz n funcie de tipul respirator. Exist i bacteriile paratrofe, a cror energie trebuie oferit de gazd. Bacteriile paratrofe sunt parazite strict intracelular (de exemplu microorganismele din genurile Rickettsia i Chlamydia, care depind nutriional de o gazd vie). Creterea microbian necesit polimerizarea unor substane mai simple pentru a forma: proteine, acizi nucleici, polizaharide i lipide. Aceste substane se obin fie din mediul de
4

cultur, fie sunt sintetizate de ctre celulele n cretere (sunt necesare diferite coenzime i legturi macroergice de tipul celor din ATP). Substanele necesare i coenzimele implicate se pot obine dintr-un numr relativ redus de precursori metabolici. Dac o celul bacterian primete substanele necesare, va sintetiza diferite macromolecule, iar secvena aranjrii componentelor n aceste macromolecule este determinat fie dup un model ADN-ADN (pentru acizii nucleici) sau ADN-ARN (pentru proteine), fie cu un determinism enzimatic pentru carbohidrai i lipide. Dup ce moleculele au fost sintetizate, ele se autoansambleaz, formnd structuri supramoleculare: ribozomi, perete, flageli, pili etc. Rata sintezei macromoleculelor i activitatea cilor metabolice sunt foarte bine reglate (exist o permanent balan a biosintezei). Microorganismele reprezint un grup de celule vii care utilizeaz o mare diversitate de ci metabolice; de exemplu, mai multe ci diferite pot fi utilizate pentru asimilarea unui singur compus simplu, benzoatul, iar o singur cale metabolic pentru benzoat poate fi reglat de mai multe sisteme de control. Principiul determinant pentru cile metabolice este acela al organizrii unui numr relativ mic de tipuri de reacii biochimice, ntr-o ordine specific. Multe dintre cile biosintetice se pot deduce avnd n vedere structura chimic de la care se pornete, produsul final i eventual unul sau doi metabolii intermediari. Principiul determinant al reglrii metabolismului este acela c enzimele par a fi chemate n joc numai cnd activitatea lor este necesar. Activitatea unei enzime poate fi modificat variind fie cantitatea ei, fie cea a substratului pe care acioneaz. n unele cazuri activitatea enzimelor poate fi diminuat prin cuplarea unor efectori specifici (metabolii care moduleaz activitatea enzimatic). De multe ori, activitatea unei enzime care catalizeaz o etap metabolic iniial este (poate fi) inhibat de produsul final al cii respective. O astfel de inhibiie nu poate depinde de competiia pentru situsul de legare al enzimei la nivelul substratului. Inhibiia depinde de faptul c enzimele reglatoare sunt allosterice. Fiecare enzim are att un situs catalitic de legare cu substratul, ct i unul sau mai multe alte situsuri de legare cu mici molecule reglatoare (numite efectori). Legarea unui efector de situsul su duce la o modificare conformaional a enzimei, astfel nct afinitatea situsului catalitic scade (inhibiie allosteric) sau crete (activare allosteric). Cnd o bacterie peritriche se mic, flagelii se asociaz i se mic mpreun, rezultnd o deplasare liniar. La diferite intervale de timp, bacteria i schimb direcia (flagelii se dau peste cap). Acest comportament face posibil chemotaxia: o celul care se ndeprteaz de sursa atractantului chimic i schimb sensul de micare mult mai frecvent n comparaie cu una care se apropie de atractant i ca o nsumare, bacteria se va deplasa nspre atractant. Spre exemplu, prezena unui zahar sau a unui aminoacid este sesizat de receptori specifici localizai pe membrana celular (de multe ori acelai receptor particip i la transportul membranar al acelei substane). Celula bacterian este prea mic pentru a fi capabil s detecteze existena unui gradient chimic (n spaiu), dar s-a demonstrat experimental c detecteaz gradienii n timp (de exemplu, concentraia unei substane scade n timp ce bacteria se ndeprteaz de surs i crete n timp ce aceasta se apropie de surs). Anumii compui acioneaz ca respingtori (R), iar alii ca atractani (A). Un mecanism care ar explica rspunsul celulei fa de A/R ar implica metilarea i respectiv demetilarea unei proteine specifice din membran, care depinde de GMPc. Atractanii produc o inhibiie tranzitorie a demetilrii acestei proteine. Respingtorii stimuleaz demetilarea. Mecanismul prin care o modificare n comportamentul celular se produce ca rspuns la o modificare de mediu poart numele de transducie senzorial. Aceasta pare s fie responsabil de: chemotaxie;
5

aerotaxie (deplasarea ctre concentraia optim de O2); fototaxie (deplasarea bacteriei fototrofe ctre lumin); deplasarea spre acceptorul de electroni etc.

11. n funcie de temperatura de dezvoltare, bacteriile pot fi: - mezofile, cu temperatura optim de 30-37C; - psichrofile, cu temperatura optim n jur de 20C (unele acceptnd temperaturi apropiate de 0C; Listeria spp. poate supravieui sau se poate chiar i multiplica la temperatura din frigider). Ele sunt adaptate la acest mediu prin numrul mare de acizi grai nesaturai coninui de membrana plasmatic. Gradul de nesaturare al unui acid gras se coreleaz cu timpul de solidificare sau stadiul de tranziie termic (temperatura la care se topete sau se solidific lipidul). Acizii grai nesaturai rmn n faz lichid la temperaturi joase, dar sunt denaturai la temperaturi moderate. Fie c acizii grai din membran se afl n faz lichid sau solid, ei afecteaz fluiditatea membranei, care afecteaz n mod direct capacitatea de a funciona. - termofile, cu temperatura optim de 50-60C (unele putnd s se multiplice i la temperaturi apropiate de 95C, ca de ex. Thermus aquaticus). Bacteriile termofile sunt adaptate s reziste la temperaturi de peste 60C printr-o varietate de modaliti. Acizii grai din membrana bacteriilor termofile sunt acizi grai saturai, permind membranelor s rmn stabile i funcionale la temperaturi ridicate. - extrem termofile sau hipertermofile, cu temperatura optim de 80C sau mai mare i o temperatur de dezvoltare maxim de 115C. (2) Nu sunt patogene. Bacteriile studiate de microbiologia medical sunt n marea lor majoritate mezofile.

12. Mediu selectiv, electiv si de imbogatire definitii

Mediul electiv conine ingredientele care convin cel mai bine dezvoltrii unei anumite bacterii (de exemplu mediul Lffler, cu ser coagulat de bou, pentru bacilul difteric). Prin coninutul su n substane antimicrobiene, mediul selectiv inhib dezvoltarea altor bacterii dect cea a crei izolare se urmrete. De exemplu, mediul cu telurit de potasiu pentru izolarea bacilului difteric sau medii n care includem antibiotice (fa de care bacteria care se dorete a fi izolat este rezistent). Mediul de mbogire favorizeaz nmulirea anumitor bacterii patogene, inhibnd dezvoltarea florei de asociaie dintr-un produs patologic. Funcioneaz concomitent ca mediu selectiv i ca mediu electiv.
13. Mediul diferenial conine un indicator de pH i un anumit substrat (de exemplu un zahar) care poate fi sau nu metabolizat, determinnd modificarea pH-ului i a culorii indicatorului sau modificarea aspectului culturii. De exemplu, agarul cu albastru de brom-timol lactozat (AABTL) permite diferenierea bacteriilor lactozo-pozitive (cum este E. coli) de bacteriile lactozo negative (Shigella, Salmonella etc).

Alte exemple: ADCL (agar dezoxicolat citrat lactoz), TSI (3 zaharuri i fier), MIU (mobilitate indol uree).

Sub 16 20. Definiii de baz

Sterilizarea reprezint distrugerea sau ndeprtarea tuturor microorganismelor patogene sau nepatogene, forme vegetative sau spori, de pe o suprafa sau dintr-un mediu (lichid sau solid). Septic nseamn contaminat cu microbi patogeni sau infectat (de exemplu infecia unei plgi). Aseptic nseamn lipsit de microbi, indiferent dac microbii sunt patogeni sau nepatogeni. Asepsia reprezint ansamblul de metode prin care evitm contaminarea mediului ambiant cu germeni microbieni sau prin care putem menine sterilitatea esuturilor, mediilor de cultur, medicamentelor injectabile etc. Dezinfecia reprezint distrugerea formelor vegetative microbiene (uneori i a sporilor) din anumite medii (lichide, solide) sau de pe suprafee. Se realizeaz cu ajutorul unor ageni fizici sau cu ajutorul substanelor dezinfectante. Antisepsia reprezint nlturarea sau distrugerea formelor vegetative microbiene de pe tegumente, mucoase sau din plgi. Se realizeaz cu ajutorul substanelor antiseptice.

Sterilizarea
Toate materialele utilizate n laboratorul de microbiologie trebuie s fie sterile nainte de utilizare. Exist o mare diversitate de materiale care trebuie sterilizate, astfel nct i metodele de sterilizare sunt destul de variate, dup cum urmeaz: 1. Metode de sterilizare prin cldur cldura uscat cldura umed 2. Metode de sterilizare prin filtrare 3. Metode de sterilizare utiliznd radiaiile 4. Metode chimice de sterilizare. Metodele de sterilizare care utilizeaz radiaiile (cu excepia radiaiilor ultraviolete) i metodele chimice de sterilizare (ex. cu oxid de etilen) sunt utilizate rareori n laboratorul de microbiologie. Sterilizarea va fi ntotdeauna precedat de pregtirea materialului care urmeaz s fie sterilizat: splare, uscare, ambalare / n cazul materialelor curate, necontaminate autoclavare, splare, uscare, ambalare / n cazul materialelor contaminate refolosibile Exist o serie de metode pentru a controla eficiena sterilizrii, prin indicatorii fizici (ex. termometru), chimici (ex. floare de sulf, tiouree) sau biologici (ex. spori de Bacillus stearotermophilus).

Sterilizarea prin cldur uscat

Sterilizarea prin cldur uscat are ca mecanism oxidarea sau carbonizarea structurilor bacteriene. 1. Sterilizarea prin nclzire la incandescen (la rou) reprezint introducerea i meninerea n flacra becului Bunsen pn la nroire, pe toat lungimea, a obiectului care urmeaz a fi sterilizat. Se poate aplica pentru ansa bacteriologic (cu bucl sau fir) sau pentru spatul.

Flambarea reprezint trecerea prin flacr (de cteva ori) a unui obiect, fr a se atinge temperatura de incandescen. Flambarea se aplic pentru portans, gtul unui recipient de sticl (tub, eprubet, flacon etc) sau pentru capilarul pipetelor Pasteur. 2. Sterilizarea cu aer cald se realizeaz n etuv (pupinel, cuptor Pasteur). Etuva este o cutie metalic cu perei dubli. Cu ajutorul unor rezistene electrice i a unui termostat se obine i menine temperatura pentru sterilizare. Uniformizarea temperaturii n interiorul aparatului este realizat cu ajutorul unui sistem de ventilaie. Pentru majoritatea materialelor care urmeaz a fi sterilizate, temperatura din etuv trebuie s ating 180C, pentru o durat de 1 or. n unele situaii timpul de sterilizare poate depi 60 de minute (ex. pentru ambalaje de dimensiuni mari). Sterilizarea cu aer cald este indicat pentru obiecte de sticl, obiecte de porelan, pulberi inerte i termostabile, uleiuri anhidre, instrumentar chirurgical (pentru instrumentarul metalic este de menionat faptul c repetarea sterilizrii, n timp, conduce la declirea oelului) etc. Nu se vor steriliza n etuv soluiile apoase, obiectele de plastic, obiectele de cauciuc, vat, bumbac, fibr sintetic, alte materiale termolabile, materiale contaminate din laborator. 3. Incinerarea reprezint arderea pn la obinerea de cenu. Exist anumite reguli stricte privind incinerarea, pentru a preveni diferitele tipuri de poluare. n cazul spitalelor, de multe ori sunt prevzute incineratoare n structura unitii sanitare respective. De regul, n vederea incinerrii se ncheie un contract de prestri servicii cu o firm de profil. Din punctul de vedere al laboratorului de microbiologie ar putea fi supuse incinerrii materiale de unic folosin din plastic, reziduuri organice solide, gunoi, cadavrele animalelor de experien etc.

Sterilizarea prin cldur umed

Sterilizarea prin cldur umed este cea mai eficient metod de sterilizare i are ca mecanism coagularea proteinelor i degradarea enzimelor. 1. Autoclavarea este esenial att pentru laboratoarele de microbiologie ct i pentru unitile sanitare n general, indiferent de sistemul public sau privat. Vaporii de ap realizeaz la 0,5 atmosfere o temperatur de 115C, la 1 atmosfer o temperatur de 121C i respectiv 134C la 2 atmosfere. Autoclavul are ca pies principal un cazan cu perei metalici, care se nchide etan cu un capac prevzut cu un sistem special de nchidere i n interiorul cruia, vaporii de ap sunt comprimai la presiunea necesar n vederea sterilizrii. Exist mai multe tipuri de autoclave: autoclave cu perete simplu verticale orizontale autoclave cu manta de aburi verticale orizontale. n continuare, drept exemplu, vom discuta numai despre autoclavul cu perete simplu, vertical, la care vaporii provin din apa aflat n cazanul de presiune i ajung n camera de sterilizare de jos n sus. Presiunea din interiorul cazanului este nregistrat de un manometru. Pentru punerea n funciune a autoclavului, n dotare exist 2 robinete: unul superior (robinetul de aer i vapori, care permite legtura ntre cazan i mediul exterior) i unul inferior (robinetul care permite evacuarea apei din cazan). Pentru a evita accidentele exist o supap de siguran care se deschide i permite evacuarea vaporilor atunci cnd, accidental, presiunea vaporilor depete limita de siguran. n momentul de fa pentru evitarea riscului de a veni n contact cu vapori de ap fierbini aflai sub presiune, autoclavele sunt dotate cu un sistem care nu permite deschiderea capacului pn cnd presiunea din interior nu o egalizeaz pe cea din exterior. Cazanul de presiune este inclus ntr-un perete exterior solid care la partea inferioar are un spaiu n care se afl sursa de cldur.
8

n partea inferioar a cazanului de presiune se afl un suport pe care se aeaz o plac de metal perforat. Pe suport se aeaz materialele care trebuie sterilizate iar faptul c placa este perforat permite trecerea vaporilor de ap produi dup nclzirea apei. n vederea sterilizrii se procedeaz astfel: verificm nivelul apei din partea inferioar a cazanului, care trebuie s fie pn la o distan de 2-3 centimetri de suport; dac nivelul a sczut, se completeaz (recomandabil se va utiliza ap distilat) aezm pe suport obiectele i materialele de sterilizat, ambalate corespunztor nchidem etan capacul, folosind sistemul special de etaneizare cu care este dotat autoclavul pe care l avem la dispoziie conectm sursa de cldur deschidem robinetul pentru evacuarea aerului i vaporilor (dac rmne aer n cazanul cu presiune eficiena sterilizrii va scdea considerabil; vaporii de ap fiind mai uori, vor nclzi n special partea superioar a cazanului n timp ce aerul, care va atinge temperaturi inferioare, fiind mai greu, va rmne n partea inferioar a cazanului) nchidem robinetul dup evacuarea aerului i apariia unui jet continuu de vapori presiunea din cazan ncepe s creasc i este urmrit cu ajutorul manometrului; atunci cnd presiunea atinge valoarea dorit (de ex. 1 atmosfer), reglm sursa de cldur n aa fel nct aceast presiune s fie meninut pentru toat durata sterilizrii (de ex. 30 minute) dup trecerea celor 30 minute ntrerupem sursa de cldur i lsm autoclavul s se rceasc pn cnd presiunea din interior ajunge la nivelul presiunii atmosferice deschidem lent robinetul de vapori deschidem sistemul de etaneizare i capacul autoclavului lsm obiectele i materialele s se rceasc n autoclavul deschis atunci cnd temperatura ajunge la circa 80C putem scoate materialele sterilizate. Prin autoclavare putem steriliza diferite substane n soluie, sticlrie (cu excepia pipetelor i lamelor), materiale contaminate din laborator, instrumentar chirurgical (metalic, de cauciuc sau bumbac), medii de cultur, aparate de filtrat etc. 2. Tindalizarea (sterilizarea fracionat) este o metod de sterilizare prin cldur umed care evit depirea unei temperaturi de 100C. Substanele de sterilizat se menin la 56-100C timp de 30-60 minute, 3 pn la 8 zile succesiv. Astfel, utiliznd medii care permit germinarea, dup prima nclzire timp de 30-60 minute sunt distruse formele vegetative iar dup rcire are loc germinarea sporilor. n ziua urmtoare sunt distruse prin nclzire formele vegetative rezultate din germinarea sporilor iar dup rcire are loc germinarea sporilor care nu au germinat n prima zi etc. Din punct de vedere tehnic pot fi utilizate autoclave la care se va menine permanent deschis robinetul de vapori (i astfel nu se va depi n interior temperatura de 100 C), bi de ap sau bi de nisip. Prin tindalizare se pot steriliza alimente, unele medii de cultur etc. Pasteurizarea i fierberea nu reprezint metode de sterilizare, dar sunt utilizate n anumite situaii. Pasteurizarea folosete cldura umed i are aplicaii n conservarea pentru scurt durat a unor alimente (lapte, bere etc). Exist o pasteurizare joas (30 minute la 56-65C), o pasteurizare medie (15 minute la 65-75C) i o pasteurizare nalt (2-5 minute la 85-90C). Prin pasteurizare sunt distruse bacteriile n form vegetativ dar nu i sporii. Fierberea poate fi utilizat atunci cnd nu dispunem de alte metode eficiente de sterilizare. Fierberea timp de 30 minute distruge bacteriile n form vegetativ, fungii i virusurile, dar nu i sporii bacterieni. Timpul se nregistreaz dup ce apa a nceput s fiarb. Eficiena acestei metode poate fi crescut prin adugarea de carbonat de sodiu 1-2%.

Subiecte 21-23. Bacteriofagul

Bacteriofagii sunt virusuri care paraziteaz bacteriile (de exemplu, bacteriofagii T1-T7 cu specificitate pentru E. coli). Bacteriofagii (fagii) au fost descoperii n 1915. Prof. Mihai Ciuc obine n anul 1921 primele tulpini lizogene. n 1949 se nfiineaz n Romnia un Centru naional pentru bacteriofagi. Fagii au o structur mai complex dect cea a virusurilor obinuite. Se descriu (Figura nr. 14): 1. capul fagului are form de prism hexagonal bipiramidal. Conine ADN dublu catenar helicoidal sau ARN nconjurat de capsida format din capsomere (nveli proteic); fagii ARN pot avea un numr mic de gene (ex. 3) n timp ce fagii ADN pot avea pn la 150 gene; 2. coada fagului are structur proteic, simetrie helicoidal; are rol de adsorbie, ajutnd fagul s penetreze bacteria. Se descriu urmtoarele formaiuni: - cilindrul axial; - teaca cozii; - placa bazal (cu croetele de fixare); - fibrele cozii (formnd un strat n jurul tecii cozii). Toate proteinele fagice pot conduce la apariia de anticorpi, descoperire utilizat n studierea nrudirii dintre diferii bacteriofagi. Relaii bacteriofag-bacterie ntre bacteriofag i bacteria gazd se pot stabili dou tipuri de relaii: - de tip litic sau productiv (Figura nr. 15); - de lizogenizare sau de tip reductiv (Figura nr. 16). Relaiile sunt strict specifice i sunt mediate de receptori.

Ciclul litic are mai multe etape i anume:

1. Adsorbia: Ataarea este specific. Exist receptori strict specifici la nivelul bacteriofagului, ce recunosc receptori de la nivelul bacteriei. Fixarea pe receptori este iniial reversibil (prin fibrele cozii), apoi ireversibil (prin croetele plcii bazale). Adsorbia fagic modific permeabilitatea membranei citoplasmatice bacteriene. 2. Penetrarea: Fagul elibereaz muramidaza care lizeaz mureina din peretele bacterian. Teaca cozii se contract i antreneaz cilindrul axial prin peretele bacterian, ducnd apoi la injectarea ADN-ului fagic n citoplasma bacterian; 3. Multiplicarea: Dup aproximativ 4-5 minute, funcia ADN-ului bacterian este blocat i preluat de ADN-ul fagic ce coordoneaz sinteza componentelor proprii. Se sintetizeaz un numr nsemnat de proteine virale. 4. Maturarea (ansamblarea) fagului 5. Liza bacteriei (ex. datorit sintezei unor enzime asemntoare lizozimului) i eliberarea bacteriofagului matur, virulent. Bacteriile lizosensibile permit adsorbia, penetrarea i multiplicarea fagilor viruleni pn la realizarea lizei celulei bacteriene. Evidenierea ciclului litic la nivelul culturilor bacteriene n mediu lichid (tulbure), inocularea fagului litic corespunztor duce dup cteva zeci de minute (uneori chiar i cteva zile) la limpezirea mediului; pe mediu solid, nsmnat uniform, inocularea fagului litic duce la apariia unei zone de liz, clar, bine circumscris (spotul de bacteriofagie), metod utilizat n lizotipie; dac se amestec o suspensie de fagi cu o pictur de cultur (pur) bacterian, iar tulpina respectiv are receptori potrivii bacteriofagilor i aceast suspensie se amestec cu geloz nclzit putem transfera suspensia ntr-o plac Petri;
10

 bacteriofagii infecteaz bacteriile; dup circa 30 minute bacteriile sunt lizate i elibereaz fagii; acetia difuzeaz prin geloz i infecteaz bacteriile situate n apropiere i ciclul se reia; o parte dintre bacterii (cele care nu au receptori potrivii) nu sunt infectate i n timp se multiplic iar cultura bacterian opacizeaz mediul; dup circa 18-24 de ore putem observa arii cu celule lizate (transparente) pe un fond produs de cultura bacterian (bacterii nelizate), aceste arii numindu-se plaje de bacteriofagie; plajele produse de bacteriofagii viruleni sunt clare, n comparaie cu plajele mai puin clare produse de bacteriofagii temperai (fagii viruleni sunt acei bacteriofagi care nu pot evolua dect n ciclul litic)

Ciclul reductiv (de lizogenizare) are aceleai etape, iniial.

Dup adsorbie i penetrare, ADN-ul fagic: fie se integreaz liniar n cromozomul bacteriei gazd i se replic sincron cu aceasta, fie se circularizeaz i ataat de membrana citoplasmatic se replic sincron cu diviziunea bacteriei. Bacteria a devenit lizogen, se reproduce i transmite descendenilor fagul latent (profag, fag temperat). n anumite condiii profagul poate deveni fag virulent. Fagul temperat cel mai bine studiat este bacteriofagul Lambda specific pentru E. coli capsulat (K12). Proprietile bacteriei lizogene: 1. este imun fa de un fag omolog profagului; 2. pot aprea fenomene importante din punct de vedere genetic: transducia; conversia genetic (cu producerea de exotoxine de ctre unele bacterii lizogenizate, cum ar fi toxina difteric, toxina scarlatinoas, toxina botulinic de tip C etc); recombinarea genetic (atunci cnd o bacterie parazitat de doi fagi diferii, dar nrudii, elibereaz la sfritul ciclului litic pe lng tipurile parentale i tipuri de fagi care nsumeaz unele din proprietile celor doi fagi parentali) etc.; inducia fagic (sub influena unor ageni inductori, de ex. raze UV, sau spontan, profagul i rectig virulena, devine fag virulent, i produce liza bacteriei respective). Bacteriile lizorezistente nu permit infecia cu un fag fie datorit lipsei receptorilor specifici, fie datorit unei stri de imunitate. Bacteriile lizogene sunt imune la fagii viruleni omologi profagului gzduit. Fagul defectiv reprezint profagul care persist indefinit n stare latent (nu se reactiveaz). Aplicaii practice ale fenomenului de bacteriofagie: fagii viruleni sunt un element de echilibru ecologic n mediul natural de via al bacteriilor (n nia ecologic respectiv); fagii temperai pot avea un rol deosebit n reasortarea materialului genetic al bacteriilor, ntruct atunci cnd se detaeaz (inducie) de cromozomul bacterian pot antrena poriuni din ADN-ul bacterian; fagii se pot folosi pentru a descoperi gradul de poluare a apelor (datorit specificitii relaiei fag-bacterie); anumite mutante ale fagilor se folosesc n ingineria genetic drept vectori ai ADN recombinant (ex. fagii Charon Lambda); fagii reprezint un model pentru studii teoretice i practice privind virusurile i oncogeneza, precum i alte aspecte ale biologiei moleculare; s-au evideniat tipuri fagice (lizotipuri) pentru tulpini bacteriene care biochimic i antigenic par identice. Lizotipia (stabilirea sensibilitii la un anumit tip fagic) este una dintre cele mai fine metode de diagnostic bacteriologic i epidemiologic, pentru identificarea lanurilor de transmisie a germenilor i pentru determinarea originii unei epidemii.
11

24. Mutaia
Mutaia reprezint o modificare accidental n secvena nucleotidic a unei gene, ducnd la modificri ale mesajului genetic. Mutaiile pot aprea la nivelul materialului genetic prin: - substituii; - inversii; - inserii; - deleii. Mutaia spontan Mutaiile care apar n condiii de mediu obinuite i fr intervenia unui factor decelabil se numesc mutaii spontane. Mutaia indus Mutaiile care se produc sub aciunea unor factori fizici (de exemplu raze UV, radiaii ionizante etc.) sau chimici (de exemplu agenii alchilani), care acioneaz ca ageni mutageni, se numesc mutaii induse. Rata mutaiilor induse este semnificativ mai mare dect rata mutaiilor spontane. Mutaia punctiform are ca substrat alterarea unui singur nucleotid, respectiv a unui singur codon. Mutaiile extinse reprezint alterri care depesc limitele unui codon, putnd afecta secvene mai mari ale uneia sau mai multor gene (mutaie poligenic). Mutaiile regresive (retromutaii) afecteaz celule mutante, determinnd revenirea acestora la tipul iniial, restabilind secvena nucleotidic originar. Mutaiile supresoare permit exprimarea funciei anterioare a genei, dei o modificare a secvenei bazelor nucleotidice persist.

25. Conjugarea bacterian

Reprezint transferul de material genetic de la o bacterie donatoare la una receptoare, realizat prin intermediul unei legturi intercelulare directe i condiionat de prezena n celula receptoare a unui element genetic specializat, cu funcie de plasmid desex sau conjugon.Conjugarea este un mecanism de transfer de material genetic frecvent ntlnit la bacteriile Gram negative ( Escherichia, Salmonella, Shigella) i mai puin frecvent la celeGram pozitive. Fazele procesului de conjugare bacterian: -faza de formare a cuplurilor de perechi specific, vizibile la microscopul electronic,instabile la o agitare uoar; faza implic legarea extremitii libere a pilului de sex dela celula donatoare F+ (de tip ) de un receptor celular situat pe suprafaa bacterieiacceptoare F- (); -n a doua faz cele dou celule sunt aduse ntr-un contact strns perete la perete, dar iacest contact este fragil i se desface prin fore uoare de agitare; - faza de formare a unor contacte stabile ntre pereii celor dou celule, cu formarea de perechi eficiente, rezistente la agitri uoare. Conjugarea ntre bacterii F+ i bacterii FDup formarea cuplului de conjugare apare o incizie monocatenar n structura plasmidei F de sex, produs de o endonucleaz. Semnalul care declaneaz aceast incizie este determinat de interaciunea dintre extremitatea liber a pilului i suprafaaliber a celulei receptoare. ADN-ul este transferat n form monocatenar, ncepnd cuextremitatea 5. Prin sintez se reface plasmida cu ADN dublu catenar att n celuladonoare, ct i n cea receptoare. Proporia de celule F- scade rapid ntr-o popuzlaie bacterian.
12

26. Clasificarea substantelor antimicrobiene dup mecanismul de aciune a). ageni antimicrobieni care acioneaz prin inhibarea sintezei peretelui celular; au efect bactericid i sunt reprezentai de antibioticele beta-lactamice (peniciline, cefalosporine, carbapeneme etc), glicopeptidele (vancomicina, teicoplanina), bacitracina, cicloserina, fosfomicina, izoniazida etc; b). ageni antimicrobieni care acioneaz prin inhibarea funciei membranei celulare; au efect bactericid i sunt reprezentai de polimixine (polimixin B, colistin), gramicidin, tirocidin, imidazoli, nistatin, amfotericin B etc (ultimele trei fiind medicamente antifungice); c). ageni antimicrobieni care acioneaz prin inhibarea sintezei proteice la nivelul ribozomilor; de exemplu aminoglicozidele, tetraciclinele, cloramfenicolul, macrolidele, lincosamidele (lincomicina, clindamicina), acidul fusidic, streptograminele etc; d). ageni antimicrobieni care acioneaz prin inhibarea sintezei acizilor nucleici, de exemplu rifampicina, chinolonele, sulfonamidele, trimetoprimul, pirimetamina, novobiocina etc.
29. Simbioza, comensalism, parazitism

Cu o parte din microorganismele ntlnite organismul stabilete relaii de simbioz, convieuirea fiind folositoare pentru ambii parteneri (de exemplu sinteza de vitamine la care particip unii coliformi intestinali). Foarte multe din microorganismele care alctuiesc microflora normal se afl n relaii de comensualism cu organismul, germenii depinznd nutriional de gazd, creia nu i creeaz prejudicii. Aceast convieuire exprim ns un echilibru instabil, care poate fi uor tulburat. Diferii factori (ai gazdei, din mediul extern sau biologici intrinseci ai germenilor) pot modifica aceste relaii, astfel nct unele microorganisme din flora normal pot manifesta aspecte patogene - este vorba de microorganismele condiionat patogene. Relaia de parazitism tipic apare ns doar atunci cnd microorganismele se dezvolt n detrimentul gazdei, cu manifestri clinice mai mult sau mai puin evidente. Astfel, n cazuri extreme unele bacterii sunt obligatoriu parazite, nu se pot dezvolta dect n organismul gazdei (de exemplu Mycobacterium leprae, Treponema pallidum, Chlamydia pneumoniae etc). Alte bacterii sunt facultativ parazite, putnd tri i libere n natur, dar o dat ptrunse n organism stabilesc cu acesta relaii de parazitism (de exemplu Clostridium tetani, Clostridiile gangrenei gazoase, Salmonella typhi etc).
31. Exo, endo, anti, ana toxina. Def, exemeple.

Germenii se multiplic la poarta de intrare i elaboreaz exotoxine care produc alterri celulare i distrucii tisulare la distan, prin inhibarea metabolismului celulei eucariote i prin functio laesa (toxikon era otrava n care erau nmuiate sgeile lupttorilor greci). Din punct de vedere didactic trebuie menionate urmtoarele noiuni: 9. 2. 2. 1. Exotoxinele Exotoxinele sunt elaborate n general de microbi Gram-pozitivi lizogenizai (de exemplu bacilul difteric, streptococul beta hemolitic de grup A, Clostridium botulinum) sau codificat
13

plasmidic (Clostridium tetani, Bacillus anthracis), dar i de bacili Gram-negativi, prin mecanism cromozomial (V. cholerae, Bordetella pertussis, Shigella shiga, Pseudomonas aeruginosa) sau sub control plasmidic (unele tulpini de E. coli). (Tabelul nr. 2) Au structur proteic, fiind formate dintr-un domeniu B (bind) obligatoriu, necesar legrii de receptorii celulei gazd i internalizrii ulterioare a poriuni enzimatice A (active). Exotoxina nu i exercit efectele toxice dect dup ce poriunea A este eliberat din structura iniial. Sunt secretate n timpul vieii germenilor. Sunt difuzibile la distan. Toxicitatea lor este foarte mare, doza letal fiind de circa 0,1 g/kg corp (pn la 1 ng/kg corp n cazul toxinei botulinice). Au afinitate diferit n funcie de specia care le-a elaborat (de exemplu pentru miocard, SNC, rinichi n cazul bacilului difteric). Manifestrile clinice apar dup o perioad de laten (cnd toxina este deja fixat pe celulele int). Multe din bolile produse pot fi considerate toxiinfecii i reprezint urgene medicale, toxina putnd fi neutralizat numai dac este liber n circulaie. Au putere antigenic mare, fa de ele aprnd anticorpi antitoxin. Un alt exemplu important privind exotoxinele se refer la Tcd A i Tcd B, produse de Clostridium difficile i care acioneaz asupra celulelor intestinului gros, fiind responsabile de o boal diareic uoar, pn la colit fulminant. Ele produc la acest nivel leziuni microscopice, dar i leziuni mari, asemntoare unor plgi; endoscopic, se vor identifica noduli. Prin degradarea proteinelor Rho, Rac i Cdc 42, responsabile de reglarea proceselor structurale dependente de polimerizarea actinei, se poate observa la microscopul electronic alterarea microfilamentelor de actin, rezultnd marginalizarea nucleului, schimbri n morfologia citoscheletului, dar i alte modificri (alterarea suprafeei celulare i rearanjarea microvililor). (Figura nr. 5) Astfel, modificrile produse de toxinele Tcd A i Tcd B sunt: inflamaia, creterea permeabilitii esutului epitelial intestinal, stimularea producerii de chemokine i citokine, acumularea de neutrofile, producerea intermediarilor reactivi ai oxigenului, activarea mastocitelor, producerea substanei P, distrugerea direct a mucoasei intestinale, ruperea jonciunilor strnse (Zonula occludens), degradarea actinei F. Substana P este responsabil de: activarea neuronilor din submucoas, eliberarea TNF-, activarea macrofagelor din lamina propria; este implicat n diareea inflamatorie. 9. 2. 2. 2. Antitoxinele Avnd structur proteic, exotoxinele sunt imunogene i determin apariia de anticorpi specifici (antitoxine) care pot neutraliza in vitro sau in vivo activitatea toxic prin cuplare specific cu toxina. (Tabelul nr. 3) Se pot obine astfel seruri imune utile n seroterapia specific. De regul aceste seruri sunt preparate pe cal i sunt utile n neutralizarea exotoxinelor (ex. n tratamentul difteriei, tetanosului, botulismului). Administrarea antitoxinelor trebuie fcut cu precauie datorit faptului c anticorpii preparai pe cal reprezint n acelai timp i antigene pentru gazda uman, dar n acelai timp ct mai curnd posibil. Tratamentul acestor entiti clinice este complex i nu reprezint subiectul acestui manual. Administrarea antitoxinelor trebuie fcut dup o testare a unei eventuale hipersensibiliti i n cazul c aceasta exist se recurge la desensibilizare i abia ulterior la seroterapie (administrarea de antitoxin). O alternativ ar fi administrarea de imunoglobuline umane specifice, dac acestea sunt disponibile. 9. 2. 2. 3. Anatoxinele Exotoxinele pot fi detoxifiate ntr-un anumit interval de timp sub aciunea conjugat a temperaturii i formolului. Prin acest procedeu i pierd puterea toxic, dar i menin puterea imunogen i devin anatoxine. Anatoxinele se utilizeaz n profilaxia bolilor produse de
14

germenii respectivi (n cadrul vaccinurilor DTP, DT, dT, ATPA, ADPA etc), precum i pentru hiperimunizarea animalelor n scopul obinerii de seruri antitoxice (antidifteric, antitetanic, antibotulinic etc). 9. 2. 2. 4. Endotoxinele Endotoxinele au fost evideniate la germenii Gram-negativi, la nivelul membranei externe. Sunt elaborate de acetia i apoi incluse n peretele bacterian, eliberndu-se n urma distrugerii germenilor. Au structur lipopolizaharidic (LPZ sau LOZ), n constituia lor intrnd acizi grai, un lipid A i lanuri de polizaharide. (Figura nr. 6) Au efecte toxice la nivelul celulelor majoritii mamiferelor; aceste efecte sunt similare indiferent de specia bacterian care le elibereaz. Toxicitatea lor este ceva mai redus (n comparaie cu exotoxinele), dar pot aciona la mai multe nivele inducnd apariia febrei, leucopeniei, hiperpermeabilitii vasculare, hipotensiunii arteriale pn la colaps, sindromului de coagulare intravascular diseminat etc. Sunt implicate ntre altele n apariia ocului endotoxic (se elibereaz o cantitate de endotoxin proporional cu numrul germenilor distrui). Studiile arat c mortalitatea n ocul endotoxic este n relaie destul de direct cu cantitatea de endotoxin / ml, fiind de circa 80% la cazurile la care se identific 100 uniti endotoxin / ml de plasm. Aa cum am menionat n capitolul privind structura bacterian, componenta toxic este reprezentat de lipidul A; totui, i polizaharidul O (structur antigenic) contribuie la patogenitate s-a dovedit c bacteriile de la care s-a extras polizaharidul O sunt mai uor distruse prin mecanisme care implic sistemul complement. LPZ aflat n circulaie se cupleaz cu proteine plasmatice (LPS-binding plasma proteins) i apoi este recunoscut prin intermediul receptorilor CD14 de ctre monocite i macrofage. Se activeaz rspunsul inflamator, coagularea intravascular, apariia de hemoragii i n final poate rezulta ocul. Sunt implicate mai multe citokine, de ex. IL-1, IL-6, IL-8 i TNF- care la rndul lor stimuleaz cutia Pandorei i respectiv producia de leucotriene i prostaglandine (cu efect de cretere a fenomenelor inflamaiei). Sunt activate att sistemele de coagulare ct i sistemul complement iar cascadele de reacii care apar sunt rareori reversibile n urma tratamentului. Puterea antigenic i imunogen este mai redus fa de exotoxine. LPZ n calitate de mitogen stimuleaz o activare policlonal a LB, cu secreia de IgG i IgM. n afara LPZ sau LOZ, mai sunt i alte endotoxine, prezente la bacteriile Gram-pozitive: - delta endotoxina prezent la Bacillus thuringiensis, toxin care nu afecteaz omul, deoarece acesta nu prezint enzime i receptori care s o proceseze; - Listeria monocytogenes produce o substan endotoxin-like etc.

15