Fiziologia Sistemului Imun

I. Definitii
Imunitatea se poate defini prin: (1) condiie n care organismul, n contact cu un agent patogen (microbian sau de alt natur) nu contracteaz n mod specific starea patologic (boala) indus de agentul patogen respectiv; (2) totalitatea mecanismelor de aparare impotriva microorganismelor invazive (bacterii, virusuri,paraziti) si a structurilor non-self. Imunitatea innascuta nespecifica este reprezentata de structuri si mecanisme cu rol protector (tegumente, mucoase, enzime din secretii exocrine lizozimul, bactericidina, pH-ul secretiei gastrice, temperatura corpului) ce ofera conditii precare de dezvoltare microorganismelor. Alte mecanisme sunt reprezentate de: presiunea mare a oxigenului in alveolele pulmonare ce inhiba dezvoltarea germenilor anaerobi sau nivelul cortizolemiei ce influenteaza raspunsul inflamator si rezistenta la infectii. Imunitatea innascuta specifica este acea rezistenta prezenta inca de la nastere, care protejeaza un anumit organism de anumiti agenti microbieni. Prin aceste caracteristici de rezistenta, acel organism se poate diferentia de alte organisme din aceeasi populatie sau specie, sensibile la actiunea acelor germeni. Atunci cnd rezistena caracterizeaz toi membrii unei specii, aceasta nu este o condiie de imunitate, ci o lipsa de susceptibilitate a speciei, sau lips de agresivitate a agentului microbian. Imunitatea dobandita - condiia organismului care prezint o stare de rezisten specific fa de un anumit agent patogen microbian. Aceast rezisten se poate instala activ, prin: Imunizare naturala organismul intra in contact cu diverse microorganisme si capata o imunitate naturala Imunizare artificiala organismul intra in contact cu diverse antigene (e.g vaccin) si produce anti el insusi anticorpi

Imunitatea poate fi dobandita si in mod pasiv, prin: Imunizare naturala apare consecutiv trecerii anticorpilor materni la fat Imunizare artificala apare atunci cand se administreaza seruri imune sau anticopri preformati

Antigenul este orice molecula de origine endogen sau exogen, recunoscuta de un organism ca non-self, impotriva careia se declanseaza raspuns imun specific umoral (productie de anticorpi) sau

celular (clone de celule specifice efectorii). Definirea unei molecule de antigen implica si capacitatea sa de a interactiona specific cu efectorii raspunsului imun: anticorpi sau celule efectorii. Moleculele cel mai bine recunoscute ca antigene sunt proteinele cu masa moleculara relativ mare (Mr > 10000D), dar pot functiona ca Ag si polipeptide de mici dimensiuni si chiar molecule de sinteza cu Mr< 1000D. Ca antigene pot functiona deasemenea si moleculele polizaharidice, lipidice, acizi nucleici sau moleculele organice de sinteza. In cazul in care anumite molecule din organism nu mai sunt recunoscute ca fiind proprii organismulul (deci devin non-self) se poate instala un raspuns imun cu productie de anticorpi specifici, acestea reprezentand un raspuns autoimun (e.g. lupus eritematos sistemic). Raspunsul imun implic n mod absolut necesar stimularea i proliferarea limfocitelor antigenspecifice i sinteza unor molecule de recunoatere a antigenului, reprezentate de anticorpi i/sau receptori membranari. O substan este antigenic dac ea declaneaz un rspuns imun i reacioneaz specific cu anticorpii sau receptorii membranari aprui n timpul rspunsului imun. Rspunsul imun se deruleaz n trei secvene: (1) Selecia clonal este etapa n care sunt selectate de ctre antigen doar acele limfocite capabile s recunoasca antigenul, denumite limfocite antigen-specifice. Clon limfocitar este o populaie de limfocite capabil s recunoasca un singur tip de antigen, datorit prezenei pe suprafaa membranei celulare a unui singur tip de receptor pentru antigen (2) Activarea clonal: activarea metabolismului intermediar al limfocitelor selectate (3) Expansiunea clonal: proliferarea celulelor selectate i activate metabolica avand ca si consecin creterea numrului limfocitelor din clona stimulat de antigen. Pentru intelegerea conceputlui de antigen se definesc doi termeni: Specificitatea antigenica este proprietatea unui antigen de a interactiona cu anumit anticorp specific. Acesti anticopri poat aparea sub forma de: Receptor membranar anticorpii aflati initial pe membrana limfocitelor B Anticorp solubil eliberat de plasmocite dupa expansiunea clonala Imunogenicitatea antigenica este calitatea complementara specificitatii capacitatea unui antigen de a declansa un reactie corespunzatoare (raspuns imun)

II.

Clasificarea antigenelor
Antigenele se mpart n dou categorii: (1) Antigenele complete sau imunogenele (2) Antigenele incomplete sau haptenele

Antigenele complete se caracterizeaza prin imunogenicitate si specificitate, iar din prisma raspunsului imun pe care il pot declansa se impart in: Antigene complete timodependente in principiu declanseaza un raspuns imun de tip celular cu implicarea limfocitelor T helper, dar pot declansa si un raspun imun de tip umoral. Majoritatea antigenelor fac parte din aceasta categorie si sunt de natura proteica. Antigenele complete timoindependente sunt capabile sa declanseze doar un raspuns imun umoral pe calea limfocitelor B, independent de prezenta limfocitelor T helper. Aceasta categorie antigenica este minoritara.

Haptenele snt substane cu greutate molecular mic sau foarte mic, incapabile s declaneze un rspuns imun n lipsa cuplrii cu o macromolecul complex i intens imunogen, denumit purttor sau carrier. Haptenele au numai specificitate, nu i imunogenitate. Un antigen complet este alctuit dintr-o component haptenic, responsabil de specificitatea antigenului, denumit determinant antigenic i de o componenta carrier, ntreg ansamblul hapten-carrier fiind responsabil de imunogenitatea antigenului. Exista mai multi factori care pot determina antigenicitatea acestia sunt numiti determinanti antigenici. Din punct de vedere morfologic, acestia sunt: (1) Liniari sau secveniali - snt alctuii din lanuri scurte de aminoacizi (8-12), dispui succesiv n lanul peptidic i recunoscui doar de limfocitele T, dup prelucrarea antigenelor integrale de ctre celulele prezentatoare de antigen (CPA). (2) Conformaionali - snt alctuii din grupuri de 8-12 aminoacizi ce aparin unor regiuni diferite ale lanului peptidic sau chiar unor lanuri diferite, aflai n proximitate datorit unor puni disulfurice sau unor legturi necovalente. Ei snt recunoscui doar de limfocitele B (LB) i de anticorpi. Din punct de vedere functional, acestia sunt: (1) De tip efector pot fi de mai multe feluri: - Determinani antigenici B sunt de tip conformaional, cnd snt recunoscui numai de limfocitele B i declaneaz RIU - Determinani antigenici C sunt de tip liniar sau secvenial, cnd snt recunoscui de limfocitele T citotoxice (LTC) i induc RIC (2) De tip imunoreglator - sunt implicai n controlul intensitii rspunsului imun declanat. Dupa tipul de reactie si componentele implicate se clasifica: - Determinanti antigenici H recunoscuti de limofoctie T helper care amplifica raspunsul imun - Determinanti antigenici S - limiteaz sau chiar sisteaz raspunsul imun declanat. 3

Antigenele alctuite predominent din determinani efectori (B sau C) i determinani reglatori H se comport ca imunogene, iar antigenele alctuite predominent din determinani antigenici S au comportament tolerogen, fiind implicate in procesul de toleranta imuna. O a treia caracteristica a antigenelor, alaturi de imunogenicitate si specificate este imunomodularea, proprietate prin care antigenul este implicat in decizia asupra tipului de raspuns imun indus i a intensitii acestuia. Determinanii antigenici efectori snt recunoscui de limfocite extrem de mult diversificate (zeci de milioane de clone limfocitare diferite). Determinanii antigenici imunoregulatori snt implicai n supravegherea rspunsului imun indus. Aceast categorie include determinanii antigenici H, care snt recunoscui de ctre limfocitele T helper cu rol de amplificare a rspunsului imun declanat i determinanii antigenici S, care snt recunoscui de catre limfocitele T supresoare, cu rol de limitare sau chiar sistare a rspunsului imun. Pentru a fi imunogen, antigenul trebuie s fie o substan nonself sau strin. Cel mai frecvent, antigenele sunt percepute ca nonself dac provin din organisme diferite pe scar filogenetic. Antigenul este cu att mai imunogen cu ct are o structur mai complex i este prelucrat de ctre CPA. Tipul de rspuns imun indus de un imunogen i amploarea acestuia snt condiionate genetic de haplotipul de gene MHC motenite. Ptrunse n organism, antigenele complete tranziteaz esuturile, sectorul circulant i organele limfoide secundare (splina i ganglionii limfatici). Antigenele T independente ajunse n splin i ganglionii limfatici declaneaz RIU, ca urmare a activrii directe a limfocitelor B. Antigenele T dependente snt captate la nivel tisular de diferite CPA. Acestea le transport preponderant pe cale limfatic la organele limfoide secundare (splin, ganglionii limfatici, esutul limfoid). Aici, ele snt prezentate sub forma unor fragmente ale determinanilor antigenici (denumite epitopi) limfocitelor B sau T, rspunsul imun indus putnd fi de natur umoral sau celular, n funcie de natura imunogenului.

III.

Organizarea sistemului imun

Sistemul imun cuprinde dou compartimente central si periferic. Compartimentul central (organe limfoide primare) - alctuit din mduva hematogen (unde se produc i matureaz limfocitele B i se produc limfocitele T) i din timus, sediul maturrii limfocitelor T. In aceste organe are loc instruirea primara a celulor limfoide in absenta antigenului Compartimentul periferic (organe limfoide secundare) - In acest compartiment vor migra limfocitele B si T dupa diferentierea lor in organele limfoide primare, iar aici se vor cantona devenind antigen-reactive. Este reprezentat de esutul limfoid 1) capsulat i 2) necapsulat: 4

1) Splina i ganglionii limfatici alctuiesc esutul limfoid capsulat i reprezint sediul derulrii celei mai mari pri a rspunsului imun. Ariile timodependente ale organelor limfoide secundare capsulate, populate de limfocite T, sunt: paracortexul ganglionar si stratul limfoid periarteriolar intern al splinei. Ariile bursodependente, populate de limfocite B, ale acestor structuri sunt: cortexul ganglionar si stratul periarteriolar extern al splinei. Celulele B sint dispuse in aglomerari denumite foliculi. 2) esutul limfoid necapsulat este localizat la nivelul epiteliului digestiv, bronic i la nivel cutanat. (Placi Peyer, MALT, GALT, BALT)

IV.

Celule implicate in raspunsul imun

Celulele din sngele periferic implicate n geneza rspunsului imun se regsesc n formula leucocitar astfel: neutrofile 62%, eozinofile 2,3%, bazofile 0,4%, monocite 5,3%, limfocite 30%. Dintre acestea, unele ndeplinesc rol de celule prezentatoare de antigen (CPA), i snt profund implicate n diverse etape ale rspunsului imun, iar altele au rol auxiliar n acest proces, fiind implicate ns n tipuri particulare de rspuns imun, cum este aprarea antiparazitar n cazul eozinofilelor sau reaciile de tip alergic n cazul bazofilelor i mastocitelor. Celulele prezentatoare de antigen se mpart n dou categorii, n funcie de eficacitatea lor: 1) CPA profesionale sunt reprezentate de celulele dendritice, macrofagele i limfocitele B. 2) CPA ocazionale neutrofilele, celulele endoteliale, celulele epiteliale i epidermice. Moleculele prezentatoare de antigen Cele dou tipuri de molecule prezentatoare de antigen, MHCI i MHCII snt sintetizate sub strictul control al unui grup de gene situat pe braul scurt al cromozomului 6. Moleculele MHCI: prezente pe suprafaa tuturor celulelor din organism, cu excepia eritrocitelor. Ele snt specializate n prezentarea antigenelor endogene, fiind recunoscute n decursul cooperrii intercelulare de ctre limfocitele T citotoxice i supresoare, care au pe suprafaa lor molecula CD8 i snt implicate n reacia de respingere a grefei. Moleculele MHCII: prezente numai pe suprafaa celulelor implicate n geneza rspunsului imun, aa cum snt CPA, limfocitele B, limfocitele T. Ele snt specializate n prezentarea antigenelor exogene, fiind recunoscute de molecula CD4 de pe membrana limfocitului T helper.

A. Celulele dendritice (CD)

Sunt celule produse de mduva hematogen, de unde migreaz spre diferite esuturi. Se caracterizeaza prin prezena de pseudopode n stare de repaus cu anumite particularitati: sunt extrem de numeroase, subiri, efilate sau foarte lungi, depind de cteva ori diametrul celulei, fapt ce le confer un aspect asemntor celulelor dendritice din sistemul nervos central.

Aceste celule snt CPA datorit prezenei pe suprafaa lor a receptorilor pentru captare a antigenelor (CR si FcR) i a moleculelor de prezentare a antigenului, mai ales de tip MHCII. Se impart functional in 2 clase: 1) CD propriuzise cu rol de CPA, care proceseaza si prezinta antigenele LT, fiind considerate cele mai importante CPA 2) Celulele dendritice foliculare (CDF), care prezinta pasiv antigenul din complexele imune catre LB in gg.limfatici, fara sa le prelucreze. Celulele dendritice reprezinta o clasa de celule descoperita la inceputul anilor 70, care, morofologic prezinta niste prelungiri digitiforme caracteristice asemanatoare dendritelor neruonale. Desi macrofagele erau considerate a fi principalele celule implicate in prezentarea antigenului, s-a descoperit ca aceasta este principala functie a celulelor dendritice. CD prezinta 3 functii principale: (1) Activarea limfocitelor T naive - celulele dendritice sunt singurele capabile sa initieze un raspuns imun primar prin limfocitele T naive (2) Toleranta imuna este capacitatea organsimului de a nu raspunde la un antigen. Aceasta toleranta implica o selectie facuta in timus pentru celulele T si in maduva pentru celulele B. Astfel se distrug limfocitele care ar putea distruge structurile self. Desi in timus se matureaza foarte multe tipuri de celule, multe din ele sunt distruse (selectiv). CD elibereaza IL-10 care induce apoptoza. (3) Stimulare limfocite B aceste celule care se gasesc in centrii limfatici, secreta limfokine care pot activa celulele B si deasemenea le pot sustine raspunsul. Un caz particular este al celuelor foliculare dendritice (CDF), implicate in memoria imunologica. Acestea nu au un rol la inceputul initierii raspunsului imun insa, dupa initierea acestuia inmagazineaza multe complexe antigen-anticorp. Ele pastreaza aceste complexe o perioada lunga de timp, in caz de nevoie putandu-le afisa celulelor B care la randul lor le vor prezenta celulelor T. Astfel, prin functia de rezervor a CDF se realizeaza memoria imunologica. Localizarea celulelor dendritice este urmatoarea: La nivel cutanat poarta denumirea de celule dendritice Langerhans La nivelul ganglionilor limfatici La nivelul splinei

Originea este medulara, se dezvolta pe linie mieloida (calea monocitara, monocitul stimulat corespunzator poate evolua spre CD). [Cele imature interactioneaza mai ales cu LT Probabil sugereaza ca in procesul de maturare al celulelor dendritice intervin limfocitele T.] Anumite CD, sub influenta unor citokine pot devenii CD Langerhans, care, isi pierd functia de a stimula celule B insa pot stimula celulele T. Acestea migreaza la nivel cutanat, capteaza Ag, le prelucreaza, se intorc in sistemul limfatic si prezinta aceste antigene celulelor T. Fiind celule prezentatoare de antigen, vor avea MHCII pe membrana celulara.

CDF nu deriva din MH, ci au origine mezenchimala. Se gasesc la nivelul foliculilor limftici din ggl.limfatici, in zonele burso-dependente, la nivel splenic si in regiunile MALT. Ele nu migreaza, ci realizeaza o retea stabila prin intermediul unor puternice conexiuni intercelulare, realizate prin desmozomi. Aceste celule sint lipsite de molecule MHC II, dar leaga ag prin receptori pentru complement, care se ataseaza de complementul asociat complexelor imune. Exprima si receptori Fc.

B. MACROFAGELE
Macrofagele snt celule produse la nivelul mduvei hematogene. Forma circulant a acestora e reprezentat de monocite, care dup ce tranziteaz pentru numai 12-24 de ore torentul circulator, ajung n esuturi, prin traversarea peretelui capilar prin diapedez, ele fiind atrase de o serie de factori chemotactici. Maturaia macrofagelor se realizeaz intratisular, la acest nivel ele devenind CPA propriuzise. n aceast calitate, macrofagele capteaz antigenele corpusculare sau particulate (bacterii, virusuri, parazii de mici dimensiuni, diverse celule somatice devenite imunogene), ele neputnd capta antigenele solubile. Macrofagele se ntlnesc n alveolele pulmonare, splin, ganglionii limfatici, mduva hematogen, sinusoidele hepatice (celulele Kupffer), cavitatea sinovial (celulele A sinoviale), esutul conjunctiv (histiocitele), rinichi (celulele mezangiale), creier (celulele microgliale). Dup captare, macrofagele endociteaz antigenele captate n decursul procesului de fagocitoz, proces ce consum energie i necesit apariia unor modificri citoscheletale ce duc la emiterea de pseudopode. Fagocitoza poate fi realizat direct, sau poate fi mult amplificat ca urmare a procesului de opsonizare, proces care implic prezena opsoninelor. Aceste substane snt prezente n plasm i n ser; legate de elementele particulate imunogene ele le confer acestora o mai mare susceptibilitate la fagocitoz. Opsoninele identificate n ser snt: produii de clivare a componentelor complementului (C3b, C5b), imunoglobulinele (IgG1 i IgG3, IgG4, IgG2 i IgA). Macrofagele:

capteaz antigenele corpusculare opsonizate prin componenta C3b a complementului; exprima pe suprafaa membranei receptori pentru complement (CR), antigene
corpusculare opsonizate prin anticorpi de tipul IgG i antigene neopsonizate;

macrofagele au pe membrana lor receptori pentru anumite oligozaharide prezente n

structura peretelui bacterian, aa cum snt manoza i fucoza (F/MR);

in timpul procesului de fagocitoz, realizeaz prelucrarea antigenelor endocitate sub

aciunea echipamentului enzimatic extrem de bogat al lizozomilor; n urma prelucrrii antigenului rezulta fragmente denumite epitopi, singurii conservai dintre acetia fiind cei mai imunogeni, denumii epitopi imunodominani; pstrarea unei mici pri din epitopii selectai i eliberarea lor n etape succesive contribuie la ntreinerea n timp a rspunsurilor imune; cea mai mare parte dintre epitopii selectai snt cuplai cu moleculele complexului major de histocompatibilitate MHCII situate pe membrana macrofagelor i prezentati limfocitelor T, n cadrul unui proces de cooperare intercelular ; un element cheie n derularea acestui proces este constituit de recunoaterea epitopilor prezentai de macrofag n asociere cu moleculele MHCII de ctre limfocitele T helper (TH) din ariile timodependente ale ganglionilor limfatici. 7

Evenimentele metabolice ale procesului de fagocitoz produc o serie de specii reactive ale oxigenului - anionul superoxid (produs prin captarea de ctre oxigenul molecular a unui electron n plus), apa oxigenat, radicalul hidroxil, oxigenul atomic (unul dintre electroni se deplaseaz pe o orbit cu energie mai mare). Toi aceti produi snt foarte instabili i au un puternic efect toxic asupra bacteriilor. Macrofagele secret o serie de substane cu diverse roluri n organism: factorul de necroz tumoral (TNF) pirogeni endogeni - interleukina 1 i interleukina 6 (IL-1 i IL6) componente ale complementului (de la C1 la C5, properdina, factorii B, D, I, H). diferite proteine plasmatice i factori ai coagulrii, -interferon (-IFN), enzime hidrolitice (colagenaze, lipaze, fosfataze), metabolii ai acidului arahidonic

C. Neutrofilele
Neutrofilele reprezint 95% din granulocitele circulante. Au durat de via scurt (2-3 zile), comparativ cu sistemul monocito-macrofagic, ale crui componente pot persista ani i au proprieti asemntoare acestora: marginaia: este procesul de aderare la endoteliul capilar, mediat de receptori ai neutrofilului i liganzi prezeni pe suprafaa celulelor endoteliale i iniiat de chemoatractani ai neutrofilului (factori chemotactici) precum interleukina 8 (IL8); diapedeza este procesul de extravazare prin traversarea capilarului la limita dintre dou celule endoteliale. Dei lipsite de specificitate pentru antigene, neutrofilele joac un rol important n inflamaia acut, intervenind mpreun cu anticorpii i complementul n realizarea proteciei mpotriva microorganismelor.

Agenii chemotactici pentru neutrofile: fragmente ale complementului (C5a), factori derivai din sistemul fibrinolitic i sistemul kininelor, factori derivai din alte tipuri de leucocite, bacterii i trombocite. Neutrofilele conin un ntreg arsenal de proteine stocate n dou tipuri de granulaii lizozomale: granulaiile primare azurofile - conin hidrolaze acide, mieloperoxidaz i lizozim (muramidaz) granulaiile secundare (specifice) - conin lactoferin, lizozim i proteine cu efect antibiotic: defensine, seprocidine, catelicidine i proteina inductoare a permeabilitii bacteriene (BPI bacterial permeability inducing protein).

Neutrofilele au receptori pentru fraciunea Fc a IgG (FcR), prin intermediul crora pot fi activate de complexe imune, intervenind astfel n mecanismul declanrii hipersensibilitii de tip

Neutrofilele au precursor medular comun cu monocitele, CFU-GM (colony-forming-unitgranulocyte macrophage unitate formatoare de colonii pentru granulocite i macrofage), derivat din celula stem pluripotent. Mieloblatii derivai din acest precursor comun devin promielocite i apoi mielocite, care se maturizeaz i ajung n circulaie ca neutrofile mature. Pe parcursul acestor diviziuni i diferenieri celulare, apar modificari ale markerilor de suprafa celulari: CFU-GM exprim molecula MHCII i CD38 pe suprafaa lor, n timp neutrofilul exprim CD13, CD14, CD15. Un element important n activitatea neutrofilului (fagocitoza i chemotaxia) desfurat n prezena opsoninelor este interaciunea direct cu microorganismele sau/i citokinele eliberate n timpul rspunsului imun.

D. Eozinofilele
Eozinofilele sunt celule cu slabe performane fagocitare care reprezint 2 -5% n formula leucocitar a sngelui periferic. Ele snt totui capabile de a distruge microorganisme endocitate i joac un rol important n aprarea antiparazitar. Mecanismul de aciune mpotriva paraziilor implic fenomenul de degranulare a eozinofilelor, proces n urma cruia este eliberat coninutul granulelor n mediul extracelular. Acest proces poate fi declanat i de ali stimuli. Nu snt celule prezentatoare de antigen, eozinofilul fiind implicat n limitarea procesului inflamator i reducerea migrrii neutrofilelor n focarul inflamator datorit eliberrii de histaminaz i aril-sulfataz, inactivatorii substanelor cu efect proinflamator eliberate de mastocite.

E. Bazofilele si Mastocitele
Bazofilele si mastocitele sunt celule implicate n realizarea rspunsului imun, dar nu snt celule prezentatoare de antigen. Bazofilele snt foarte puin numeroase n sngele periferic, ele reprezentnd numai 0,2% din leucocitele circulante. (Mai devreme zicea 0,4% - ce amuzant, ma intreb ce punem pe grile) Mastocitele snt celule extrem de asemntoare bazofilelor din punct de vedere funcional; se gsesc doar la nivelul mucoaselor i esutului conjunctiv, fiind clasificate din acest motiv n dou categorii: Mastocite ale mucoaselor (MMC mucosa mast cell) - T-dependent Mastocite ale esutului conjunctiv (CTMC conective tissue mast cell) - prolifereaz independent de limfocitele T

Bazofilele i mastocitele conin granulaii bogate n heparin, leucotriene, histamin i factorul eozinofil chemotactic al anafilaxiei (ECF-A). Stimulul degranulrii bazofilelor i mastocitelor este cel mai frecvent un antigen capabil s declaneze reacii alergice, adic un alergen. Pentru declanarea acestui tip de rspuns imun, alergenul interacioneaz prin intermediul IgE situate la suprafaa bazofilelor i mastocitelor care exprim receptori pentru fraciunea Fc a acestor imunoglobuline (FcR). Mediatorii eliberai astfel produc simptomele clinice inflamatorii caracteristice alergiei.

F. Limfocitele
Limfocitele T - reprezint o clas celular foarte heterogen,n cadrul creia se descriu patru subclase de limfocite T: helper, citotoxice, supresoare i contrasupresoare. Aceast clasificare nu corespunde integral realitii, ea bazndu-se pe diferenierea fenotipic a subclaselor limfocitare. Spre exemplu, nu toate limfocitele T CD4 snt helper, unele fiind citotoxice sau chiar supresoare, aa cum nici toate celulele CD8 nu snt exclusiv citotoxice sau supresoare, unele avnd comportament de tip helper, dovedit prin factorii solubili secretai. Limfocitele T: reprezint 60-80% din totalul limfocitelor periferice i au o durat de via mare (ani, zeci de ani), ele fiind intens recirculate. Pe suprafaa lor se disting trei categorii de receptori:

(1) Receptori pentru recunoaterea antigenic, i anume: TCR (T cell receptor); complexul CD3 (CD = clas de difereniere) cu rol n recunoaterea antigenului sau epitopului prezentat de CPA; CD4 sau CD8 care snt co-receptori implicai n recunoaterea moleculelor prezentatoare de antigen MHC; (2) Receptori cu rol accesor n activarea limfocitelor T: CD28, CD45, CD25; (3) Receptori cu rol n adeziunea intercelular: CD2, CD11/CD18. Limfocitele T recunosc antigenul dup structura primar a determinantului antigenic , spre deosebire de limfocitele B i imunoglobuline, care recunosc antigenele dup structura lor spaial. Ele recunosc numai antigenele expuse asociat de moleculele MHC pe suprafaa CPA. Clasificare fenotipica dupa markerii de suprafata: Limfocite TH - helper (CD3+/CD4+/CD28+); limfocite TC citotoxice (CD3+/CD8+/CD28+); limfocite TS supresoare (CD3+/CD8+/CD28-).

Activarea limfocitelor T: este realizat numai de antigenele T dependente, n cadrul unui proces ce necesit n mod obligatoriu participarea CPA. Cooperarea dintre CPA i limfocit este de tip bidirecional, ambele celule activndu-se reciproc: Activarea limfocitului T de ctre CPA este anterograd, ea derulndu-se n sensul prezentrii antigenului. Activarea limfocitului este realizat prin intermediul unor semnale activatoare transmise spre citoplasm. Drept urmare, au loc activarea metabolica, expansiunea clonala precum si producerea de IL (LTH) sau de mediatori implicate in distrugerea imunogenilor (LTC). Activarea retrograda se desfasoara dinspre limfocitul T inspre CPA, care este activat. Ea se desfoar n sens invers fa de prezentarea antigenic. Acest tip de activare se realizeaz prin eliberarea de ctre limfocitul T a IL-4 i/sau a IFN-. Efectul acestor substane este cel de a stimula exprimarea pe suprafaa CPA a moleculelor MHCII, ceea ce sporete capacitatea de prezentare a antigenului. Activarea limfocitelor T se desfoara n dou etape: 10

1) Antigen-independent - are loc stabilirea unor contacte extinse i intime ntre suprafeele membranare ale CPA i limfocitele T. 2) Antigen-dependent - const n stabilirea unor legaturi ntre complexul epitop/MHC de pe suprafaa CPA i binomul TCR/CD4 sau TCR/CD8 de pe suprafaa limfocitului T. O mic parte dintre limfocitele T efectorii snt pstrate n diverse sectoare ale organelor limfoide, ele fiind celule cu memorie. Limfocitele B reprezint 15-20% din totalul limfocitelor periferice. Ele snt puin recirculate i au durat scurt de via. Majoritatea snt distribuite n cortexul ganglionilor limfatici i n pulpa alb a splinei, unde alctuiesc foliculii limfoizi. Pe suprafaa membranei limfocitelor B exist aceleai categorii de receptori, ca i n cazul limfocitelor T: (1) receptori pentru recunoaterea antigenului BCR (B cell receptor) (2) receptori cu rol accesor n activarea metabolic a limfocitelor B, (CD45 i CD25) (3) receptori de adeziune intercelular. Limfocitele B recunosc antigenele solubile dup structura spaial a determinanilor antigenici (structura conformationala). Recunosterea antigenelor se poate face cu ajutorul CPA, dar acest lucru nu este obligatoriu exista antigene timoindependente ce pot stimula direct limfoctiele B. Dup stimularea antigenic, limfocitele B parcurg etapele ciclului celular n mod asemantor cu limfocitele T, devenind limfoblati B, a cror principal caracteristic este prezena unui mare numr de molecule MHCII pe suprafaa membranei celulare, fapt ce le confer posibilitatea de a funciona ca CPA. Celulele rezultate n urma diviziunilor celulare devin limfocite B efective, adic plasmocite, cu direct implicare n derularea i finalizarea rspunsului imun prin sinteza de imunoglobuline; o mic parte dintre ele trec n rezerv ca limfocite B cu memorie, n anumite sectoare din organele limfoide secundare.

V.

Sistemul complement

Sistemul complement: este un complex de proteine serice cu activitate enzimatic, citolitic i reglatoare care prin activare produc chemotaxie, opsonizare i citoliz a agenilor patogeni. Complementul este alctuit din 25-30 de enzime ce snt activate n cascad, rolurile jucate de acest sistem n cadrul RIU fiind cel de a finaliza aciunea anticorpilor asupra antigenelor i cel de a realiza recunoaterea nespecific a structurilor nonself, aceste roluri putnd fi ndeplinite fie separat, fie complementar. n mediile lichidiene, fiecare factor al complementului se gsete sub form inactiv. Un factor al complementului odat activat, va avea drept substrat un alt factor n form inactiv, pe care l va activa, Conversia enzimatic a fiecrui factor inactiv n forma sa activ este un proces de proteoliz limitat, n urma cruia rezult dou fragmente: un fragment mic, notat cu a i unul mare, notat cu b, acesta din urm putnd funciona n cadrul cascadei de activare a complementului ca enzim, sau cofactor (fixator pe membrana celular a unui alt factor). Factorii complementului snt notai de la C1 la C9. Activarea complementului se face pe mai multe ci. Iniial au fost descrise calea clasic i cea altern de activare, care snt distincte dar au o secven final comun. Evenimentul central al cascadei 11

complementului este constituit de conversia factorului inactiv C3 n forma activ C3b, sub aciunea C3-convertazelor. Calea clasic de activare este declanat episodic de prezena complexelor imune ataate membranelor celulare i reprezint o achiziie filogenetic de dat mai recent. Calea altern funcioneaz continuu, cu o intensitate sczut, care crete atunci cnd pe membranele celulare activatoare (bacteriene, parazitare, ale celulelor infectate viral) se depoziteaz factori ai complementului. Aceast cale de activare este de dat filogenetic mai veche. Calea altern de activare a complementului (sau calea properdinei) implic aciunea unor factori precum factorul B (omologul factorului C2 al cii clasice), factorul D i factorul P sau properdina, care intr n structura C3 convertazei adevrate a cii alterne a complementului. A treia cale de activare a complementului (MBL pathway mannose binding lectin pathway) a fost recent descoperit. MBL este o protein plasmatic din familia collectinelor, ce funcioneaz ca o lectin, fiind singura apt s activeze complementul. Agenii patogeni capabili de a se lega de MBL snt Salmonella, Neisseria, Candida albicans. Concentraia sczut a MBL se asociaz cu deficite de opsonizare ce se pot manifesta clinic prin diaree sever, hepatit cronic de tip B, infecia HIV i boli autoimune. Indiferent de calea de activare a complementului, la finele cascadei enzimatice este generat complexul de atac al membranelor, MAC (C5bC6C7C8C9), o structur complex, tubuliform, care se inser pe membrana int pe care o perforeaz. Ca urmare a crerii de multiple comunicri ntre mediul intra i cel extracelular, are loc alterarea profund a gradientelor de concentraie ionica de o parte i alta a membranei celulare, cu ptrunderea masiv a ionilor de Na n celul, urmat de hiperhidratarea acut celular, n final producndu -se liza osmotic a celulei i moartea acesteia. Reaciile complementului se deruleaz numai pe suprafaa membranelor int i nu pe cele self, acestea fiind protejate anticomplement prin trei categorii de receptori.

VI.

Tipuri de Raspunsuri imune

Raspunsul imun umoral (RIU)

Raspunsurile imune umorale sint: (1) Primare - declansate la primul contact cu antigenul, caracterizate prin elaborarea de IgM; aceasta se datoreaza participarii la generarea RIU la primul contact cu antigenul a limfocitelor THp, care coopereaza cu CPA; limfocitele THp elaboreaza IL2, care nu are efect asupra fenomenului de comutare izotipica, drept urmare limfocitele B stimulate produc IgM. Concentratiile de IgM sint

12

relativ mici, deoarece la acest prim contact antigenic participa clone limfocitare B si TH imature si insuficient expansionate. In plus, timpul de al IgM este redus; (2) Secundare - caracterizate prin elaborarea de IgG, deoarece la contacte repetate cu acelasi antigen, la cooperarea cu CPA participa limfocite TH2, care elaboreaza IL4, care, spre deosebire de IL2 activeaza mecanismul de comutare izotipica: este inhibata productia de IgM si stimulata cea de IgG. IgG au timpul de crescut ceea ce explica persistenta lor mai indelungata in plasma. Controlul RIU consta in activarea limfocitelor T supresoare, care constituie cascada supresoare. Aceasta este declansata abea dupa declansarea productiei de anticorpi, avand rolul de a inhiba secventa de activare (efectorie) a RIU. Cele 2 secvente ale RIU, de activare si retrocontrol sint decalate in timp si echilibrate functional. Caracteristicile RIU: este declanat de antigenele T-dependente; necesit cooperarea a trei categorii celulare: CPA, limfocitele T helper i T supresoare, (cu rol imunoregulator) i limfocitele B efectorii. parcurge dou etape, prima cu efect activator, derulat dinspre CPA spre limfocitele B, care activate devin plasmocite productoare de anticorpi i a doua etap cu efect inhibitor sau de control, care limiteaz rspunsul imun eficient la minimul necesar;cea de a doua etap este realizat prin intermediul unor subclase de imunoglobuline i prin activarea limfocitelor T supresoare care limiteaz participarea limfocitelor B i T la RIU; Meninerea unui echilibru stabil ntre cele dou etape ale RIU reprezint cheia homeostaziei RIU.

Secvenial, derularea RIU parcurge urmtorul model: (1) antigenul declanator este preluat de CPA (macrofage sau celule dendritice); (2) transportat n ariile timodependente ale organelor limfoide, este prezentat limfocitelor T helper (TH), care se activeaz i devin limfoblati TH; (3) acetia migreaz n alte domenii ale organelor limfoide, unde urmeaz s ntlneasc limfocitele B cu care coopereaz; (4) simultan, antigenul este transportat pe cale limfatic n zonele bursodependente ale organelor limfoide, unde este recunoscut de limfocitele B antigen specifice, care vor fi activate, tranformndu-se n limfoblati B ce migreaz treptat, venind n contact cu limfoblatii TH, cu care coopereaz (direct, datorit numeroaselor molecule MHCII de pe suprafaa limfoblatilor B sau indirect, prin intermediul IL2 i IL4, eliberate de limfoblastul TH activate); (5) in urma acestei cooperri, limfoblastul B este complet activat, el devenind plasmocit productor de anticorpi specifici eliberai n circulaie. Principalele interleukine implicate in raspunsul imun sunt IL-2, IL-4 si IL-5

13

Raspunsul imun celular (RIC)

Rspunsul imun celular este implicat n trei condiii patologice majore: (1) eliminarea celulelor infectate cu microorganisme cu habitat sau dezvoltare intracelular (micobacterii, virusuri, legionella, brucela), (2) supravegherea i aprarea antitumoral i rejetul grefelor de esuturi sau organe. Prin urmare, RIC joac un rol esenial n recunoaterea i ndeprtarea prin distrugere a dou categorii celulare: celulele proprii sau self devenite antigenice (prin infectare sau degenerare malign) i celulele strine, nonself, provenite prin transplant de esuturi sau organe.

Pentru realizarea acestor funcii, este necesar participarea a trei tipuri de limfocite efectoare: limfocitele T citotoxice (LTC), celulele natural killer (NK) i celulele killer (K). Aceste tipuri celulare recunosc celulele int prin mecanisme diferite, dar le distrug prin mecanism asemntor, de citotoxicitate extracelular. Limfocitele T citotoxice exprim pe suprafaa lor cele trei categorii de receptori: (1) cei de recunoatere antigenic, TCR, care stabilesc conexiuni att cu antigenul expus, ct i cu molecula prezentatoare a acestuia, MHCI sau MHCII; din aceast categorie fac parte receptorii CD3 i CD8. (2) A doua categorie de receptori e reprezentat de cei cu rol accesor n activarea LTC, (CD25, CD28 i CD45). (3) Cea de a treia categorie e reprezentat de receptorii de adeziune intercelular, reprezentat de CD2.

n funcie de anumite particulariti fenotipice i funcionale, LTC se mpart n dou categorii: LTC CD8+, care reprezint peste 90% din totalul acestora i au rol distructiv i LTC CD4+, care reprezint sub 10% din totalul LTC i ndeplinesc rol preponderent imunoreglator, intervenind n maturaia limfocitelor THp care devin LTH1. LTC realizeaz o recunoatere imunologic specific, dependent de structurile MHCI, de tip clonotip, n sensul c fiecare clon de LTC poate recunoate o singur specificitate antigenic datorat precondiionrii genetice (restrictie HLA). Ele pot recunoate o mare varietate de antigene, ntruct exista o mare diversificare clonotipic a acestor celule. Celulele cu cea mai mare implicare n realizarea RIC sunt limfocitele T citotoxice, datorit extremei diversificri clonotipice, ce permite acestor celule recunoaterea oricrei specificiti antigenice. Trstura fundamental a RIC o constituie declanarea acestuia la nivel predominent intraganglionar, desfurarea sa ulterioara fiind realizat la nivel tisular. La baza derulrii RIC st participarea celulelor T cu memorie, dei nu toate limfocitele ce se regsesc n sngele periferic aparin acestei categorii. Astfel, exist: 14

limfocite T naive, inocente, fr nici un contact anterior cu antigenul pentru car e au fost programate genetic limfocite T cu memorie, ce au avut contacte repetate cu antigenul pentru care au fost programate.

Cele dou categorii de limfocite T se difereniaz fenotipic, parcurg ci diferite i au distribuii (hominguri) diferite la nivelul organelor limfoide secundare. Limfocitele T naive parcurg un traseu predominent intracirculator: snge limf -snge i au un homing intraganglionar, cu rol de a spori ansele acestor celule de a ntlni antigenul specific transportat la acest nivel de CPA. Limfocitele T cu memorie au un trafic i homing predominent intratisular. Etapele Raspunsului Imun Celular: Prima etap a RIC este cea de inducie, iniiat n focarul antigenic, dar derulat mai ales intraganglionar. La finele acestei etape, are loc apariia celulelor T cu memorie i creterea expresiei receptorilor de adeziune intercelular la nivelul celulelor din acest focar. Aceast prim etap este iniiat de ptrunderea intratisular a antigenului, care este captat imunologic nespecific de CPA, n special de macrofagele rezidente la acest nivel. O parte dintre macrofagele implicate n acest proces rmn la nivel intratisular, participnd la declanarea unui proces inflamator. O alt parte dintre macrofage migreaz pe calea limfaticelor aferente i transport intraganglionar antigenul captat la nivel tisular. Ele se stabilesc ulterior n corticala ganglionar, unde prezint antigenul transportat celulelor T naive, aflate n permanent trafic la acest nivel. Celulele care vor recunoate epitopii prezentai pe membranele CPA se vor activa, devenind n final limfocite T cu memorie. Cea de a doua etap a RIC se deruleaz intratisular i implic aderarea limfocitelor T cu memorie la endoteliul vascular, traversarea prin diapedez a capilarului i cooperarea la nivelul focarului antigenic cu macrofagele rmase intratisular. Rezultatul final al acestei etape este distrugerea complet i ndeprtarea antigenului declanator.Celulele implicate n aceat etap snt: macrofagele, limfocitele TH1, limfocitele TC CD8+ i limfocitele TC CD4+. Limfocitele TC, celulele NK si K distrug celulele tinta printr-un proces de citotoxicitate extracelulara, prin eliberare de mediatori solubili. Astfel sint eliminate celule singenice (infectate sau metaplaziate) si allogenice (din transplant de tesut sau organ). Liza celulelor tinta este realizata prin lezarea membranelor tinta sub actiunea perforinei si a granzimelor si prin alterari nucleare, fragmentarea ADN fiind cea mai frecventa (apoptoza). Granzimele sint omologii proteazelor si catepsinelor mastocitare si ale neutrofilelor, ce contribuie la distrugerea membranelor tinta.

15

IMUNOGLOBULINELE
Imunoglobulinele sunt glicoproteine identificate n plasm, lichidele interstiiale i secreiile organismului, care au proprieti de anticorpi, ele combinndu-se specific cu antigenele inductoare de rspuns imun. Structural, imunoglobulinele (Ig) snt alctuite din dou perechi de lanuri, unele cu greutate molecular mare, denumite heavy, (H) (de tip , , , i ) i altele cu greutate molecular mic, denumite light (L) (de tip sau ). Ambele tipuri de lanuri au secvene variabile, notate cu VH i VL i pri constante, notate cu CH i CL. Secvenele variabile VH i VL formeaz mpreuna situsul de recunoatere a antigenului, cu care acesta stabilete legturi, denumit paratop. O molecul de Ig conine dou situsuri de legare a antigenului identice, capabile s recunoasc o unic structur antigenic, prin urmare anticorpii snt structuri monospecifice. Secvenele constante ale Ig snt responsabile de celelalte funcii ale acestora: (1) activarea complementului pe calea clasic; (2) ataarea la suprafaa unor celule; (3) traversarea barierei feto-placentare. Fragmentul ce conine situsul de legare a antigenului este denumit Fab, cel responsabil de funciile efectoare ale moleculei de Ig este denumit Fc. La limita acestora exista puni disulfidice, plasate ntre lanurile grele in zona denumit balama. Molecula de Ig are o variabilitate izotipic, allotipica i idiotipic. Variabilitatea izotipic - diferentiaza membrii apartinind unor specii diferite; Variabilitatea allotipic - se datoreaz diferenelor genetice intraspecie; variabilitatea idiotipic - se datoreaz prezenei anumitor secvene de aminoacizi din regiunea variabil a moleculei de Ig, ce determin capacitatea de legare a antigenului. Variabilitatea idiotipic se coreleaz cu cea a situsului de legare a antigenului. Zona variabila din structura Ig, (denumita si idiotip) implicata in legarea antigenului (Fab) poate functiona concomitent si drept determinant antigenic. Acesti determinanti antigenici imunoglobulinici, aparuti in cantitate mare in timpul RIU determina la rindul lor aparitia de Ig anti-idiotip. Acest proces se deruleaza in 3-5 valuri succesive, astfel realizindu-se o retea idiotip-antiidiotip, implicata in stimularea sau inhibarea RIU.

Imunoglobulinele se mpart n 5 clase (izotipuri), n funcie de particularitile secvenelor constante ale lanurilor grele (CH), care snt de tip , ,,, i . IgG se regsesc n concentraiile cele mai mari, ele reprezentnd 75% din totalul Ig circulant e. Durata persistenei lor n lichidele organismului poate ajunge la trei sptmni, ceea ce le confer un grad nalt al valorii funcionale. Exist mai multe subclase de IgG, n funcie de numrul de puni disulfurice dintre lanurile H: IgG1, IgG2, IgG3 i IgG4. Funcional, molecula de IgG conine dou zone distincte: poriunea Fab, care este situsul combinativ al moleculei de IgG i este implicat strict n recunoaterea antigenic i poriunea Fc, denumit fragment constant sau cristalizabil, responsabil de aciunile biologice ale moleculei. 16

1) IgG1 reprezint subclasa dominant a IgG. Au rol important n activarea complementului pe calea clasic, n realizarea imunitii pasive a nou-nscutului. 2) IgG2 este un slab activator al complementului. 3) IgG3 este cel mai puternic activator al complementului pe calea clasic, iar IgG4 nu este activator de complement. IgG snt implicai n geneza RIU secundar, ce apare ncepnd cu al doilea contact cu antigenul declanator.

IgM au o durat de via mai scurt, de 10 zile. Ele snt alctuite din cinci structuri asemantoare celei aparinnd moleculei de IgG, fiind, deci, un pentamer. Ele snt implicate n RIU primar, declanat la primul contact cu antigenul i snt cele mai active imunoglobuline n activar ea complementului pe calea clasic. Au aciune aglutinant asupra bacteriilor i virusurilor. IgA se gsete n ser sub form de monomeri, sau este secretat la nivelul mucoaselor sau n lapte sub form de dimeri. Au fost identificate dou subtipuri de IgA, ce difer prin structura lanurilor (1 i 2). IgD este prezent n ser cantit in cantiti foarte mici. Ea apare frecvent asociat cu IgM, ndeplinind funcia de receptor pentru antigen. IgE (reagine) sunt prezente in ser in cantitati foarte mici, sunt implicate in declansearea reactiilor de hipesrsensibilitate imediata.

17