Insamantarea produselor patologice

Izolarea unui agent patogen infectios este hotaritoare in diagnosticul bacteriologic. Insamantarea se face pe medii adecvate lichide sau solide. Prin insamantare urmarim:
Obtinerea

O colonie este o populatie bacteriana omogena provenind dintr-o singura celula. Genetic acasta populatie reprezinta o clona.

propus Prevenirea contaminarii produsului cercetat cu alte microorganisme Izolarea fiecarei tulpini microbiene urmarite in cazul unui produs plurimicrobian in culturi microbiene denumite culturi pure Obtinerea de colonii izolate.

unei populatii microbiene suficiente cantitativ pentru scopul

Insamantarea

Trecerea unei singure colonii de pe un mediu de cultura pe un alt mediu adecvat se numeste REPICARE. Prin repicare se obtine Cultura Pura care poate fi studiata asupra caracterelor morfotinctoriale, biochimice, antigenice si de patogenitate si astfel poate fi identificata.

Tehnici de insamantare

Tehnica insamantarii prin epuizarea inoculului pe suprafata unui mediu solid turnat in placi Petri este metoda de electie pentru obtinerea de colonii izolate. Inoculul se depune pe un sector limitat al placii= sector A, apoi cu ansa se disperseaza pe un sector B in striuri paralele. Se sterilizeaza ansa si se repeta operatiunea pana la epuizarea intregii suprafete a placii.

Insamantarea prin epuizarea inoculuil

Tehnica pentagonului deschis:
Pe prima latura se va obtine cea mai importanta cantitate de cultura (cultura microbiana confluenta), pe urmatoarele laturi se va remarca scaderea cantitativa a culturii iar cel putin pe ultima latura a pentagonului deschis se vor obtine colonii izolate.

Insamantarea prin dilutii succesive

Se folosesc tuburi cu bulion in care se fac dilutii succesive din produsul patologic. Din ele se fac treceri pe mediul solid . Din dilutiile cele mai mari vom obtine colonii izolate.

Insamantarea in profunzimea mediilor solide

Se face prin -inteparea mediului - incorporare in toata masa mediului.

Studiul caracterelor de cultura

In mediul lichid urmarim: Turbiditatea( majoritatea tulpinilor tulbura uniform bulionul) Formarea sedimentului ( ex Streptococul se depune la fundul tubului formand un sediment si lasa coloana de mediu limpede.) Pelicula Ex. Mycobacteriile formeaza un val la suprafata mediului.

Studiul caracterelor de cultura

Elaborarea unor pigmenti: ex bacilul Piocianic elaboreaza pigment verde, Degajarea de mirosuri caracteristice Ex B. Piocianic degaja un miros aromat de floare de tei.

Studiul caracterelor de cultura

Pe medii solide Urmarim: Relieful coloniilor, care poate fi bombat, turtit, cu suprafata neteda sau rugoasa Conturul coloniilor bine delimitat, circular sau festonat cu prelungiri. Marimea: coloniile de streptococi au diametrul mic, Klebsiella formeaza colonii cu diametrul mare

Studiul caracterelor de cultura

Producerea de pigment: Stafilococul produce pigment auriu, Serratia produce pigment rosu Consistenta poate fi untoasa, cremoasa, mucoasa, apoasa. Coloniile pot fi transparente sau opace Coloniile pot fi emulsionabile sau nu in ser fiziologic

Studiul caracterelor de cultura

In functie de aceste caracteristici deosebim doua tipuri de colonii pe mediile solise: Colonii de tip S (Smooth=netede) cu suprafata bombata, neteda, lucioasa, cu contur bine delimitat si consistenta cremoasa.

Studiul caracterelor de cultura

Colonii de tip R ( rough=rugoase) Cu suprafata turtita, neregulata, cu contur crenelat, festonat, uscate si aderente. Majoritatea speciilor la izolarea dintr-un produs patologic se dezvolta sub forma de colonii de tip S Exceptie : Bacilul carbunos, bacilul difteric, bacilul tuberculos

Colonii de tip S

Colonii de tip R