Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
bioentitati microscopice,
eucariote,
uni- sau pluricelulare,
heterotrofe,
contin chitina in peretele celular.
MORFOLOGIE
Se bazeaza pe:
aspectul si
structura partii asimilatoare a fungului- talul,
permite descrierea a 3 tipuri principale de fungi:
Levuriformi
Filamentosi
Dimorfici
Levuriformi:
microorganisme unicelulare,
de forma rotunda sau alungita,
se multiplica in principal prin burjeonare;
burjeonul- denumit blastospor sau blastoconidie,
fie se poate desprinde de celula-mama printr-un proces de fisiune,
fie ramane atasat la aceasta si genereaza succesiv noi indivizi, sub forma
unor agregate liniare pseudohife.
Filamentosi:
microorganisme pluricelulare,
cu talul alcatuit din filamente
tubulare, septate sau nu, denumite hife;
hifele sunt de obicei ramificate si aglomerate formand miceliul.
. Dimorfici
microorganisme care apar
0
sub forma de levuri in tesuturile organismelor parazitate sau la 37 C in vitro
si
0
sub forma filamentoasa cand sunt cultivate la temperatura camerei sau la 30 C,
pe medii uzuale.
forma,
dimensiunile formatiunilor caracteristice levurilor:
blastospori,
pseudohife,
filamente (hife).
TESTE DE IDENTIFICARE
Algoritmul de identificare a unei tulpini levurice se bazeaza pe o combinatie de:
A-caractere microscopice
B-caractere de cultur
C - caractere biochimice
D - caractere genetice
pe o lama de sticla curata si degresata se etaleaza o picatura de tus in care se suspensioneaza apoi
cu ajutorul unei anse microbiologice un mic fragment din colonia levurii de identificat;
se acopera cu o lamela si se examineaza la microscop cu obiectiv X20 (X40);
observarea unor levuri rotunde sau ovoidale, inconjurate de un halou necolorat, clar, pe fond brun
negru, indica prezenta capsulei.
B)TESTUL DE FILAMENTARE (TESTUL DE BLASTEZA SAU GERM-TUBE TEST) CANDIDA
ca medii pentru blasteza se utilizeaza serul sanguin de cal, serul sanguin uman;
Tehnica:
se prepara suspensia levurica in solutie salina fiziologica, densitatea acesteia ajustandu-se la 0,5
5 6
Mc Farland (cca.10 -10 celule /ml) ;
in fiole cu capacitatea de 2 ml se pun in contact 0,5 ml suspensie levurica si 0,5 ml ser sanguin de
cal;
0
fiolele se mentin apoi in baia de termostatare la 36 C timp de 2h.
TESTUL DE FILAMENTARE
Dupa expirarea celor 2h, fiolele se agita si din fiecare amestec se preleveaza un volum de
25L care se etaleaza apoi intre lama si lamela.
preparatul extemporaneu astfel obtinut se examineaza la microscop in vederea decelarii tubilor
germinativi caracteristici tulpinilor de Candida albicans si Candida dubliniensis-filamente scurte care
emerg din blastospori fara strangulare
TESTUL DE FILAMENTARE
ca martor al filamentarii, se utilizeaza de fiecare data o tulpina tip de Candida albicans;
si alte levuri pot produce formatiuni similar de tipul pseudofilamentelor, insa ele se diferentiaza
de adevaratii tubi germinativi prin existenta unei strangulari la locul de emergenta din blastospor.
TESTE BIOCHIMICE
a)fermentarea zaharurilor
-utilizarea metabolica a zaharurilor este utila in diferentierea diverselor specii apartinand genului Candida
TESTE BIOCHIMICE
c)capacitatea de asimilare a surselor de azot
-important pentru diferentierea levurilor apartinand genurilor Criptococcus si Rhodotorula
d)producerea de ureaza
-pune in evidenta capacitatea levurilor de a produce enzima numita ureaza; de ex., Cryptococcus
e)rezistenta la cicloheximida
-testul se refera la abilitatea levurilor de a se dezvolta pe medii de cultura continand doua concentratii
de cicloheximida- 0,01 %, repectiv 0,1%
f)producerea de fenol-oxidaza
-permite identificarea speciei de Criptococcus neoformans pe baza unei reactii de culoare ce determina
0
o brunificare a mediului in aproximativ 24h de incubare la 30 C
g)producerea altor enzime
-este evidentiabila prin cultivarea levurilor pe medii cromogene
TEHNICI MOLECULARE
in genomul levurilor;
regiunile tinta sunt amplificate prin PCR cu ajutorul a doua secvente nucleotidice cunoscute,
denumite amorse.
CANDIDA, CRYPTOCOCCUS
Descrierea principalelor genuri
de levuri
de interes medical
GENUL CANDIDA
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR
Produsul patologic recoltat: variaz n funcie de localizarea leziunilor.
Recoltarea scuamelor din leziunile cutanate se face cu pensa; din leziunile mucoasei, cu ajutorul
tamponului steril; prelevarea prin raclarea unghiilor la limita dintre zona sntoas i cea
infectat.
Recoltarea sputei, l.c.r., urin se face n recipiente sterile.
Transportul produsului patologic trebuie efectuat rapid (max 1h), datorit multiplicrii rapide a
levurii.
EXAMEN DIRECT
microscopic, se practic:
-n stare proaspt, lam-lamel (materii fecale, urin)
-dup clarificare cu solutie de KOH 20% sau cu solutie cloral-lactofenol (scuame, unghii)
-dup colorare (frotiu, preparate histologice).
Se pot observa:
-Levuri circulare sau rotunde, cu diametrul de 2-6 m, nmugurite.
CULTIVARE
Cultiv sub form de levuri pe mediul Sabouraud (cu antibiotice), formnd colonii albicioase,
dup 24-48 ore.
Temperatura de cultivare este de 26C sau 37C dup localizarea superficial sau
profund a infeciei.
IDENTIFICARE
se face pe baza caracterelor morfologice macro- si microscopice, biochimice si genetice.
Testul de filamentare este pozitiv pentru Candida albicans si
Candida dubliniensis.
Antifungigrama permite stabilirea sensibilitii la antifungice (Fluconazol, Itraconazol,
Amfotericina B, Nistatina, Flucitozina, Ketoconazol, Miconazol, Econazol).
GENUL CRYPTOCOCCUS
Cuprinde levuri capsulate al caror habitat natural este reprezentat de mediul ambiant.
A fost izolat din excrementele psrilor domestice (n special porumbei) i slbatice, precum i
din solul ngrat cu acestea.
Contaminarea este predominant aerogena.
Specia cea mai importanta din punct de vedere a implicarii in aparitia infectiilor criptococice este
C. neoformans,care afecteaza n special, persoanele imunodeficiente (HIV pozitive sau cu
hemopatii maligne), la care produce cel mai frecvent meningite
celelalte specii sunt mai rar semnalate..
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR
Produse patologice: l.c.r., urin, spltur bronho-alveolar, puroi, biopsie.
Examen microscopic: levuri; se evidentiaza capsula. Levuri sferice, nmugurite, cu diametrul de
3-8m, nconjurat de o capsul groas. Nu formeaz filamente sau pseudofilamente.
Cultivare: Cultiv pe mediul Sabouraud, incubat la 37C, n timp de 3-5 zile. Coloniile de C.
neoformans sunt foarte mucoase, de culoare bej.
IDENTIFICAREA
Identificarea se face pe baza caracterelor :
Antifungigrama
- permite stabilirea sensibilitii la antifungice.