COLORATII HISTOLOGICE

Bologa Andreea-Bogdana
HISTOLOGIA
• Ştiinţa care se ocupă cu studiul structurii
microscopice a celulelor, ţesuturilor şi
organelor.
• Compartimente: Citologia si Histologia
generală: studiul ţesuturilor.
• Histologia specială: studiul organelor: org.
tubulo-cavitare, org. Parenchimatoase.
ŢESUTURILE
• Structuri supracelulare alcătuite din celule
unite între ele printr-o substanţă intercelulară.
• Celulele îndeplinesc în organism aceeaşi
funcţie sau acelaşi grup de funcţii.
• 4 categorii de ţesuturi: epitelial, conjunctiv,
muscular, nervos.
Metode utilizate în practica clinică
Metode utilizate în cercetare
I. Metode utilizate în practica clinică Coloraţia
uzuală – Hematoxilină-eozină
Coloraţiile speciale
Examenul microscopic extemporaneu
Coloraţiile imunohistochimice.

Preparatul microscopic
Totalitatea obiectelor pregătite pentru a fi
examinate la aparate optice măritoare în
vederea studierii structurii lor.
Componentele:
1. Obiectul
2. Suportul: lama
3. Lamela-sunt de 2 tipuri: extemporanee şi
permanente
Preparatul microscopic II. Fixarea
Piesa e introdusă în fixatori care previn
degradarea enzimatică (autoliza) şi păstrează
intactă structura tridimensională a ţesutului.
Formaldehida-Fixatorii acţionează asupra
proteinelor din ţesuturi prin 3 mecanisme:
denaturare, coagulare şi precipitare.
Preparatul microscopic
III. Spălarea Îndepărtează excesul de fixator
Se face cu apă sau alcool (deshidratarea)
 Decalcificarea Preparatele de os sau dinte;
se face cu acizi şi răşini schimbătoare de ioni
sau prin electroliză.
IV. Includerea în parafină
Piesa e îmbibată şi înglobată într-o substanţă
solidificabilă, denumită masă de includere.
Piesa devine rigidă şi poate fi secţionată în felii
de ordinul µm (5μm).
Preparatul microscopic Includerea în parafină.
Etape
1. Deshidratarea- introducerea în băi de alcool
de concentraţii crescânde → alcoolul va înlocui
apa din ţesut; 2. Clarificarea cu solvenţi
organici (xilen, toluen) miscibili atât în alcool
cât şi în parafină, vor scoate alcoolul din ţesut
3. Îmbibarea cu parafină: parafina topită intră
în celule → ţesutul va fi complet inclus în
parafina care se va întări şi va forma un bloc
solid ce conţine ţesutul;
4. Includerea propriu-zisă.
VI. Colorarea
Evidenţiază elementele structurale
 Coloraţia HE este o Coloraţie uzuală (95% din
lame); e o metodă directă, progresivă,
combinată, succesivă, ortocromatică.
Hematoxilina-colorant bazic- colorează în
ALBASTRU structurile bazofile: acizii nucleici-
ADN-nucleu; ARN - ribozomi Eozina –colorant
acid- colorează în ROŞU structurile acidofile sau
eozinofile: proteinele – în citoplasmă şi în
matricea extracelulară.
Structurile cu conţinut ridicat de substanţe
lipidice (celule adipoase, mielina) rămân optic
vide.
Tehnica de lucru
• 1. Deparafinrea la termostat, 58 grade C, TIMP
DE 30 MINUTE.
• 2. Deparafinarea sectiunilor in doua bai de
benzen, timp de 10 minute fiecare baie.
• 3. Hidratarea sectiunilor folosind bai de alcool
in concentratii descrescatoare 100%, 96%,
80%, 70%, timp de 10 minute fiecare.
• 4. Hidratarea sectiunilor in apa curenta, timp
de 10 minute.
• 5. Colorarea cu HE, timp de 5-10 minute.
• 6. Diferentierea cu apa de robinet timp de 10
minute sub control microscopic.
7. Spalarea cu apa distilata timp de 5-10
minute.
8. Colorarea cu eozina timp de 3-5 minute.
9. Spalare cu apa curenta.
10. Deshidratarea sectiunilor in doua bai de
alcool 100%, timp de 5 minute fiecare.
11. Clarefiere in doua bai de benzen timp de 5
minute fiecare.
12. Montare cu balsam Canada.
Rezultate
Preparatul microscopic Coloraţia HE Celulele:
funcţia biochimică şi distribuţia elementelor
componente. Celulele tinere sau/şi active
metabolic, prezintă nucleii eucromi sau
hipocromi (eucromatina este palidă).
Celulele adulte sau îmbătrânite, cu activitate
metabolică redusă, au nuclei hipercromi
(heterocromatina inactivă se colorează intens
bazofil).
Celulele care sintetizează proteine conţin
numeroşi ribozomi liberi şi prezintă un aspect
bazofil al citoplasmei (H colorează ARN din
ribozomi în albastru)
Celulele implicate în transportul de ioni conţin
numeroase mitocondrii şi prezintă un aspect
eozinofil al citoplasmei (E colorează proteinele
cationice: citocromii în roşu).
Fibrele musculare au aspect intens eozinofil
datorită fixării eozinei pe proteinele
contractile.