COMPARTIMENTAREA

CELULARĂ și
TRAFICUL VEZICULAR

Cursul de azi este bazat pe

Chapter 15 - Intracellular Compartments and Protein Transport,
.
Essential Cell Biology, Alberts et al, 5th ed

- ORGANITE DELIMITATE DE MEMBRANĂ

- SORTAREA PROTEINELOR
- TRANSPORTUL NUCLEAR
- TRAFICUL VEZICULAR

1
Bibliografie
• Chapter 15 – Essential Cell biology, Alberts et al., 5th Ed.
• Figurile și Tabelele se regăsesc în Chapter 15 – Essential Cell biology, Alberts et al., 5th
Ed, sau sunt imagini originale, dacă altă sursă nu este indicată.

• https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK26907/
• https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK21045/
• https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK26859/

Ce este un organit?
Ce tipuri de organite cunoașteți?
Cine face sinteza proteinelor?
Unde începe sinteza proteinelor?
Cum definim o membrană?
Cum clasificăm transportul membranar?

2
Cunoștințe anterioare
1. Citoplasma celulelor eucariote conține organite delimitate de
endomembrane.
2. Sinteza proteinelor este un proces care are loc în ribozomi și începe în
citosol pentru toate proteinele produse de o celulă la un moment dat.
3. O membrană este o barieră hidrofobă, semi-permeabilă, caracterizată
prin fluiditate, asimetrie și eterogenitate.
4. Există două tipuri mari de transport membranar:
 prin membrană,
 cu membrană (transport vezicular).

Organite delimitate de endomembrane

TEM
NUCLEU

ap. Golgi
lizozom
endozom

mitocondrie

RE

3
Organite delimitate de endomembrane

Fiecare organit (d.e.)

conține una sau două
endomembrane care
delimitează lumen matrice
- un lumen (apare ca
un spațiu clar pe
imaginile TEM) sau
- o matrice (o
ultrastructură mai
electronodensă)

Organite delimitate de endomembrane

Fiecare organit(de)
conține una sau două
endomembrane care
matrice
delimitează
- un lumen (apare ca
matrice
un spațiu clar pe
imaginile TEM) sau
- o matrice (o
ultrastructură mai matrice
electronodensă)

4
Organite delimitate de endomembrane

Fiecare organit(de)
conține una sau două
endomembrane care
delimitează
- un lumen (apare ca matrice
un spațiu clar pe
imaginile TEM) sau
- o matrice (o
ultrastructură mai
electronodensă) lumen

Organite delimitate de endomembrane

- Fiecare conține un set specific de molecule mari (în mare parte

proteine) și mici și îndeplinește funcții specializate; ele sunt
separate prin endomembrane de restul citosolului.
- Proteinele specifice unui organit sunt fie membranare, fie
lumenale/matriceale.
- Morfologia organitului și buna lui funcționare depind de
localizarea corectă a proteinelor specifice, deși toate proteinele
sunt produse în același loc în celulă (în ribozomi), iar inițierea
biosintezei se face în citosol.

5
 Principalele funcții ale compartimentelor delimitate de membrane
din celula eucariotă
COMPARTIMENT FUNCȚIE PRINCIPALĂ
CITOSOL conține multe căi metabolice; sinteza proteinelor; citoscheletul

NUCLEU conține cea mai mare parte a genomului; sinteza ADN-ului și ARN-ului

RETICUL sinteza majorității lipidelor; sinteza proteinelor necesare altor organite sau
ENDOPLASMATIC membranei celulare
APARAT GOLGI modificarea, sortarea și împachetarea proteinelor și lipidelor fie pentru
secreție, fie pentru livrare către alte organite
LIZOZOMI digestia intracelulară
ENDOZOMI sortarea materialului endocitat
MITOCONDRII sinteza ATP prin fosforilare oxidativă
PEROXIZOMI degradarea oxidativă a moleculelor toxice

Essential Cell Biology, Alberts et al., 5th Ed. Tabel 15-1.

6
Secvențiere
ARNr

LUCA

Pollard, 2017. Fig. 2.4B

Alberts, 2017. Fig. 12-3

7
 22% 9%
54%

6% 6%

Fiecare organit are o morfologie specifică

m L
m
m
m
m
m
L
NC
m m

m
m

8
SORTAREA PROTEINELOR

SORTAREA PROTEINELOR

Stă la baza livrării proteinelor nou sintetizate către destinațiile lor

corecte:
- direct din citosol → pentru mitocondrii, nucleu și peroxizomi)
- prin intermediul RE → pentru Golgi, lizozomi, endozomi, unele
proteine peroxizomale membranare, membrana celulară, export
extracelular

9
 SORTAREA PROTEINELOR secvență
semnal
PEPTIDE SEMNAL – secvență specifică de 5 ÷ 30 aa care asigură
translocarea (co– sau post– traducere) a proteinelor către organitele țintă. semnal
conformațional
Proteinele care nu au secvență semnal rămân în citosol.

SECVENȚĂ SEMNAL (exemple) FUNCȚIA

-Pro-Pro-Lys-Lys-Lys-Arg-Lys-Val- import în nucleu

-Met-Glu-Glu-Leu-Ser-Gln-Ala-Leu-Ala-Ser-Ser-Phe- export din nucleu

+H3N-Met-Leu-Ser-Leu-Arg-Gln-Ser-Ile-Arg-Phe-Phe-Lys-Pro-Ala- import în mitocondrie

Thr-Arg-Thr-Leu-Cys-Ser-Ser-Arg-Tyr-Leu-Leu-

-Ser-Lys-Leu-COO– import în peroxizomi

+H3N-Met-Met-Ser-Phe-Val-Ser-Leu-Leu-Leu-Val-Gly-Ile-Leu-Phe- import în reticul endoplasmic
Trp-Ala-Thr-Glu-Ala-Glu-Gln-Leu-Thr-Lys-Cys-Glu-Val-Phe-Gln-

-Lys-Asp-Glu-Leu-COO– returnare în reticul endoplasmic

Alberts_MBC_2016

Mecanismul de transport al proteinelor

1. Proteinele care se deplasează la RE, mitocondrii sunt

transportate în interiorul organitului de complexe de proteine
situate în membrană prin translocare – transmembranar
2. Proteinele care se deplasează din citosol în nucleu sunt
transportate în mod activ cu ajutorul receptorilor specifici, prin
porii nucleari, deschideri care străbat învelișul nuclear, realizând
o cale de comunicare hidrofilă între citoplasmă și nucleu
3. Proteinele care se deplasează de la RE mai departe – și de la
un compartiment al sistemului de endomembranare la altul –
sunt transportate prin vezicule

10
 TRANSPORTUL PROTEINELOR
semnal - receptor

1. TRANSMEMBRANAR
(translocare/receptori specifici)

2. PRIN PORII NUCLEARI – gated

(receptori specifici: importine/exportine)

3. PRIN VEZICULE

1. TRANSPORTUL PRIN
ENDOMEMBRANELE ORGANITELOR
- Transport prin membrana RE – proteinele sunt trimise către RE cu
ajutorul particulei de recunoaștere a semnalului (SRP) – curs RE
- Transport prin membrane mitocondriale – curs Mitocondrie
- Transport prin membranele peroxizomale – curs Lizozomi, peroxizomi

Numitor comun: proteinele specifice organitelor conțin o secvență

semnal (semnal de localizare) recunoscută (direct sau indirect) de
un receptor din membrane organitului țintă

11
 Proteine G mici monomerice
(superfamilia Ras)
• sunt GTP-aze – hidrolizează lent GTP
• schimbă conformația proteinelor partenere → activare/inactivare
• sunt numite comutatoare moleculare, deoarece oscilează între stările
activă și inactivă, activând și dezactivând diferite procese celulare:
• Transportul nuclear (Ran)
• Traficul vezicular (Rab)
• Semnalizarea celulară – diferențiere, proliferare celulară (Ras)
• ....
• pot fi reglate de alte proteine: GAP, GEF (specifice pentru un anumit tip
de proteină G mică)

https://www.youtube.com/watch?v=eohda8jt7KM&ab_channel=CellClipsTutorials

12
 Proteine G mici (superfamilia Ras)
COMUTATOARE MOLECULARE

ON

autoinactivare

OFF

Biorender

Ras Superfamily of
Small GTPases Cele mai cunoscute proteine G
mici monomerice sunt (rol):
- factorii de inițiere și elongare
din traducere (sinteza proteinelor),
- superfamilia Ras
• Ras (cascada de semnalizare a factorilor de
creștere, controlul proliferării și diferențierii / 36
gene - 39 de izoforme),
• Ran (transportul proteinelor și ARN-urilor prin
porii nucleari / 1 genă – 1 izoformă),
• Rab (transportul vezicular pe calea secretorie și
endocitotică / 61 gene- 63 izoforme),
• Arf (formarea veziculelor dependentă de
coatomeri / 27 gene - 30 izoforme),
• Rho/Rac/Cdc42 (ciclul celular, reorganizarea
citoscheletului de actină/ 20 gene - 22
izoforme).
Front. Mol. Neurosci., 21 May 2019 | https://doi.org/10.3389/fnmol.2019.00121

13
 2. TRANSPORTUL PROTEINELOR
PRIN ÎNVELIȘUL NUCLEAR

NUCLEU –
ULTRASTRUCTURĂ
Înveliș nuclear
Membrana externă
Membrana internă
Lamina nucleară
Porii nucleari

Cromatina
Matrice
Nucleol

14
LAMINA NUCLEARĂ
lamina nucleară formată din
lamine (filamente intermediare
nucleare) - defosforilate

29
Ross MH, Pawlina W. A text and atlas, with correlated cell and molecular biology. Lippincott
Williams & Wilkins. 2015

PORI NUCLEARI

15
PORUL NUCLEAR

Membranele nucleare se unesc la nivelul

complexului por, alcătuit din: 8
subunităţi multiproteice (NUCLEOPORINE)
- inel citoplasmatic cu 8 prelungiri fibrilare subţiri
- complex central – 8 x proteine columnare, 8x
proteine anulare și proteine lumenale/rețea
filamentară centrală (secvențe repetitive FG)
- inel nucleoplasmatic cu 8 fibrile lungi, unite distal
(inelul distal) – coș nuclear

PORUL NUCLEAR

Structură octamerică
formată de nucleoporine
Filamente proteice spre
citoplasmă și nucleu

FG – fenilalanină-glicină
NTF – nuclear trasnpor factor 32

16
TRANSPORT SELECTIV PRIN PORII NUCLEARI
Necesită:
• o peptidă-semnal: semnal de localizare nucleară (NLS) sau
semnal de export nuclear (NES)
• toate proteinele sunt sintetizate în citoplasmă, dar unele sunt necesare în nucleu (de
exemplu: ARN polimeraze) – importate în nucleu
• unele proteine sunt transportate înainte și înapoi între citoplasmă și nucleu (de exemplu,
factori speciali de transcriere)

• proteine de transport = receptori/transportori = importine / exportine

• proteine G mici (Ran-GTP), care schimbă conformația
transportatorilor, ducând la legarea sau eliberarea proteinei care
urmează să fie transportate

Importul de proteine în nucleu

CITOSOL
Molecule mici hidrofile (5000Da)
= transport pasiv

NUCLEU

Molecule mari = transport activ

controlat de proteine G mici

17
Importul de proteine în nucleu

SEMNAL DE LOCALIZARE NUCLEARĂ

NUCLEAR LOCALISATION SIGNAL - NLS

+ + + + +

Importul de proteine în nucleu

Signal peptide – Nuclear Location Signal = NLS

18
 proteină semnal de
„nucleară” localizare
nucleară
4 Ran hidrolizează GTP,
Ran-GDP disociază de
receptor (readus în citosol) 1 Proteina se leagă
de receptor

Ran-GAP por nuclear

CITOSOL

NUCLEU
Ran-GEF

Proteina este 2 Ran-GTP se leagă

3
eliberată în nucleu de receptor

Alberts, 2014. Fig. 15-10

receptor de
receptor de export nuclear Proteină exportată
Proteină cu semnal de
import (cargo) import nuclear

Ran-GDP disociază de
receptor (importină)

fibrile
citosolice
CITOSOL
Ran-GTP

NUCLEU

importină + exportină+
Ran-GTP Ran-GTP+
cargo
Ran-GTP se leagă de
Proteină receptor (exportină) Proteină cu semnal
importată de export (cargo)

IMPORT NUCLEAR EXPORT NUCLEAR

Alberts, 2016. Fig. 12-13

19
 Receptor propriu pentru transportul
Ran-GDP înapoi în nucleu
(NTF2 – nuclear transport factor)

CITOSOL Ran-GTP → Ran-GDP

NTF2

NUCLEU Ran-GDP → Ran-GTP

cromatină

Alberts, 2016. Fig. 12-12

Transportul prin porii nucleari

• https://www.youtube.com/watch?v=ZGPpKk-6-K0&ab_channel=Kasa0161
• https://www.youtube.com/watch?v=rjaudsjiGV8&ab_channel=NeuralAcademy

20
 3. TRANSPORTUL VEZICULAR

Transport vezicular
- specific proteinelor membranare (membrana celulară sau membranele anumitor
organite) și
- proteinelor secretate (de exemplu hormoni, proteine de matrice extracelulară)

ETAPE:
1 – transportul ribozomilor care sintetizează proteinele respective (lanț polipeptidic în
curs de formare/alungire) la reticulul endoplasmic (RE) și atașarea ribozomilor la
membrana RE
2 – RE preia proteina și o împachetează, plasând-o în vezicule pe care le transmite
aparatului Golgi
3 – veziculele sunt transportate la destinație folosind componente ale citoscheletului
(un organit fără endomembrană), care asigură suport pentru traficul intracelular

21
 RE

ERGIC

AG

AG

TRANSPORT VEZICULAR
Veziculele se desprind continuu dintr-un compartiment cu endomembrană (donor) și
fuzionează cu altul (acceptor sau țintă), transportând componente ale membranei și
molecule solubile denumite cargo (încărcătură ce trebuie trasnportată)

CITOSOL
COMPARTIMENT
DONOR
fuziune

înmugurire
COMPARTIMENT
ACCEPTOR/ȚINTĂ

Figure 13-2 Vesicular transport Alberts et al., MBC 4th ed.

22
 BIDIRECȚIONAL

TRANSPORT VEZICULAR – FORMAREA VEZICULELOR

clatrină

vezicule în veziculă
formare
(înmugurire) acoperită
de clatrină

clatrină
adaptină
receptor membrana
veziculă
specific plasmatică
neacoperită
dinamină CITOSOL
spațiu extracelular
molecule - cargo

selectarea cargoului înmugurire formarea veziculei dezvelirea veziculei

Fig. 15-21 Clathrin-coated vesicles transport selected molecules. Essential Cell Biology, 5th Ed.

23
 COATOMERI

Clatrină

Ross 2020 Pollard 2017 COP – coat protein

TRANSPORT VEZICULAR – FUZIUNEA CU MEMBRANA ȚINTĂ

proteină cargo

v-SNARE • Proteinele Rab,

• proteinele de ancorare și
LEGARE
Rab • proteinele v-SNARE-t-SNARE
ajută la direcționarea transportului
vezicular la membranele țintă.
ANCORARE
proteină de ancorare

FUZIUNE

CITOSOL v-SNARE

t-SNARE SNARE - Soluble N-ethylmaleimide-

Ca2+ Ca2+
membrana țintă t-SNARE Ca2+ Ca2+ sensitive factor [NSF] Attachment
protein REceptors
proteină cargo
livrată

Fig. 15-22. Essential Cell Biology, Alberts et al., 5th Ed.

24
 TRANSPORT VEZICULAR

înmugurire

ancorare fuziune
transport

legare

https://doi.org/10.3389/fendo.2011.00001

Rab – GTP-aze din superfamila Ras

- controlează traficul vezicular intracelular prin recrutarea moleculelor efectoare
- sunt limitate specific în anumite domenii ale membranei unui organit (60 Rab diferite)
INACTIV ACTIV

TRAFIC
GEF - Guanosin Exchange Factor VEZICULAR

efectori

GAP - GTPase Activating Protein

Proteinele G mici hidrolizează GTP lent.

25
 Rab (GTP-aze)
asigură specificitate și
direcționalitatea
livrării veziculei către
compartimentul țintă

Int. J. Mol. Sci. 2021, 22(14), 7679; https://doi.org/10.3390/ijms22147679

Ross 2020

26
Căi celulare care implică transportul vezicular
compartiment endolizozomal
Clatrină

A
N
R T
E E
T R
R O
O G
G R compartiment ERGIC
R A
A D
D

Ross 2020 Pollard 2017 COP – coat protein

Rezumat
● Celulele eucariote conțin multe organite delimitate de membrane: nucleu, reticul
endoplasmatic, aparat Golgi, lizozomi, endozomi, mitocondrii, peroxizomi, care
formează ceea ce numim sistemul de endomembrane.
● Cele mai multe proteine de la nivelul organitelor sunt sintetizate sau încep să fie
produse în citosol și transportate către organitele țintă unde își îndeplinesc funcțiile.
● Semnalele de sortare din secvența de aminoacizi ghidează proteinele către organitul
țintă corect.
● Proteinele nucleare conțin semnale de localizare nucleară, care ajută la transportul
activ din citosol în nucleu prin porii nucleari. Proteinele sunt transportate în
conformație împachetată. Unele sunt transportate dus-întors.
● Transportul de proteine membranare și secretorii este mediat de veziculele de
transport care înmuguresc continuu și fuzionează cu o membrană țintă, proces numit
transport vezicular.

27
TRANSPORTUL PROTEINELOR

1. TRANSMEMBRANAR
2. CONTROLAT PRIN PORII NUCLEARI
3. PRIN VEZICULE

28