COLORAREA

Etapa prin care se urmrete creterea contrastului dintre diferitele componente tisulare prin modificarea indicilor de refracie ai substratului morfologic cu ajutorul coloranilor . Tehnica de colorare depinde de natura fixatorului utilizat i de esutul pe care dorim s l examinm. COLORANTUL HISTOLOGIC Substan chimic colorat, de obicei de natur organic, ce poate intra n celul atandu-se la nivelul componentelor celulare i permind astfel diferenierea lor optic. Nu toate substanele colorate sunt colorani! COLORANI - grupri cromofore purttoare de culoare - grupri auxocrome capacitatea de a colora GRUPARILE AUXOCROME 1. Ionizate ( principale ) formeaz legturi electrochimice cu substratul 2. Neionizate ( secundare) formeaz legaturi de hidrogen cu substratul. Acest tip de legatur mrete stabilitatea colorantului. CLASIFICAREA COLORANILOR - natura lor - caracterele chimice Dup natura lor Naturali - vegetali : hematoxilina ,safranina , orceina , turnesolul - animali : carminul Sintetici : albastru de metil CLASIFICAREA COLORANILOR Dupa caracterele chimice CLASIFICAREA COLORANILOR Dupa caracterele chimice Bazici gruparea auxocroma principal ncrcat electric pozitiv , deci se va ataa pe un substrat ncrcat negativ Dupa caracterele chimice Neutri grupri auxocrome principale ncrcate electric pozitiv i negativ, fiind soluii apoase de colorani bazici i acizi ntr-o anumit proporie MECANISMUL COLORRII PROTEINELE - substratul molecular la nivelul crora se fixeaz coloranii prin legturi electrochimice i de hidrogen. MECANISMUL COLORRII

Coloraii i colorani

In funcie de tipul gruprilor ionizabile din structur , proteinele sunt 1 acide 2 bazice 3 neutre MECANISMUL COLORRII Colorant bazic substrat (=proteina) acid (ex: hemalaunul) Nucleul caracter bazofil: albastru-nchis / violet Colorant acid substrat bazic (ex: eozina) Citoplasma caracter acidofil: roz/rou ETAPELE COLORRII METODE DE COLORARE 1.In funcie de momentul colorrii 2. Dupa nr. de coloranti utilizai 3. Dup mecanism 4. Dup metoda de obinere a coloraiei optime 5. In funcie de raportul dintre rezultatul colorrii i culoarea colorantului Momentul colorrii Numr de colorani a Simple folosete un singur colorant b Combinate (policrom) 2 sau mai muli colorani i. Succesiv ii. Simultan, ex . : hemalaun - eozin, azan Mecanism - direct simplu contact dintre colorant si substrat - indirect necesit prezena unui mediator sau MORDANT , ntre colorant i substrat. Acesta fixeaz colorantul de componentele celulare. Metoda de obinere a coloraiei optime - progresive prin adugri succesive pna se ajunge la momentul optim de colorare - regresive - prin aciunea prelungit a colorantului pn la obinerea unei supracolorri , apoi se acioneaz cu un agent chimic decolorant (difereniator) (ex. Coloratia Nissl). Rezultatul colorrii i culoarea colorantului - Ortocromatic substratul se coloreaz n aceeai culoare ca i cea a colorantului - Metacromatic - substratul se coloreaz n alt culoare ca cea a colorantului IMPREGNARI METALICE PRINCIPIU: precipitat de metal care se depune pe diferitele elemente de tesuturi evideniind structuri care n mod obisnuit nu se coloreaz cu colorani. - cele mai folosite sunt : Ag , Au , Os , Hg. IMPREGNARE ARGENTIC - folosit pentru evidenierea elementelor din esutul epitelial, conjunctiv i n cercetarea sistemului nervos.

 Rezultate: structurile vizate sunt colorate n negru. COLORAIA HEMALAUN EOZIN 2 colorani: 1 - hemalaunul colorant bazic 2 - eozina colorant acid REZULTATE - nuclei albastru - violet - citoplasma roz- rosu COLORAIA HEMALAUN EOZINA CU ALBASTRU DE METIL - coloratie tricrom 1. hemalaun 2. eozina 3. albastru de metil REZULTATE 1. Nuclei violet 2. Citoplasma albastru cenusiu 3. Fibrele de colagen albastru intens COLORATIA VAN GIESON - coloratie tricrom 1. hematoxilina feric 2. acidul picric 3. fuxina acid REZULTATE 1. Nuclei negri 2. Citoplasma galben 3. Fibre de colagen rou intens COLORATIA MASSON - coloratie tricrom 1. hematoxilin feric 2. soluia colorant A ce conine fuxin acid 3. soluia colorant B ce conine albastru de anilin REZULTATE 1. Nuclei negru 2. Citoplasma rou violet deschis 3 Fibrele de colagen albastru intens COLORATIA MALLORY Se utilizeaz : 1. fuxin acid 2 albastru Mallory ( contine albastru de anilina i orange G ) REZULTATE 1. Nuclei - rou intens 2. Citoplasma roie

3. Fibre de colagen i reticulin albastru 4. esut muscular neted - violet 5. esut muscular striat - rou portocaliu COLORATIA AZAN - azocarmin C - albastru Heidenhein , cu anilin i orange G REZULTATE Nuclei rou viu Citoplasma rou Fibre de colagen i reticulin albastru deschis esut muscular striat rou , orange sau galben COLORATII CITOLOGICE - utilizate pentru evidenierea anumitor organite celulare METODA CAJAL DA FANO - evidenierea complexului Golgi REZULTATE n Nuclei necolorai n Aparatul Golgi reea perinuclear de culoare neagr n Citoplasma aurie METODA HEMATOXILINA FERICA REGAUD - evidenierea mitocondriilor REZULTATE Nucleu necolorat Nucleol negru Mitocondrii puncte negre TEHNICI DE EXAMINARE A TESUTULUI EPITELIAL IMPREGNAREA ARGENTICA RANVIER - evidentierea interstiiului dintre celulele epiteliului din seroase limitele intercelulare apar net n culoarea neagr TEHNICI SPECIALE DE EXAMINARE A TESUTULUI CONJUNCTIV COLORAIA CU ALBASTRU DE TOLUIDIN - granulaiile din mastocite prin coloraie metacromatic n rou violet TEHNICI SPECIALE DE EXAMINARE A TESUTULUI CONJUNCTIV METODE PENTRU EXAMINAREA FIBRELOR CONJUNCTIVE 1. Fibrele de reticulin se examineaz folosind o metoda electiv - IMPREGNAREA ARGENTICA i apar colorate n negru 2. Fibrele elastice se poate utiliza coloraia cu a. Rezorcin fuxina - albastre b. Orcein cafeniu - roscate

TEHNICI SPECIALE PENTRU EXAMINAREA ESUTULUI MUSCULAR METODA HEIDENHEIN (cu hematoxilina ferica) - evidentiaz structura periodic a miofibrilelor. Se remarc alternana de zone clare i ntunecate. Metode speciale pentru evidenierea esutului nervos - metoda Nissl - impregnare argentic - Evidenierea tecii de mielin prin fixare cu tetraoxid de osmiu