G E N E T I C ECOLOGIC

Date de contact: Coordonator curs: Lector Dr. Csilla Iuliana Bra e-mail: csiulia@yahoo.com Tutore: Lector Dr. Csilla Iuliana Bra e-mail: csiulia@yahoo.com

Obligatii minimale ale studentilor in vederea promovarii examenului la disciplina GENETICA ECOLOGIC

Parcurgerea ntregii materii incluse n suportul de curs; Definirea principalelor noiuni de genetic i caracterizarea ultastructural functional a materialului genetic nelegerea proceselelor i fenomenelor prezentate n suportul de curs; Comunicarea permanenta cu tutorele disciplinei n vederea elucidarii unor aspecte particulare i a nelegerii generale a materiei de curs; Prezena direct la toate orele de lucrri practice de laborator; nsuirea principiilor de baz i a scopului metodelor de laborator; nsuirea etapelor de lucru ale metodelor de laborator parcurse; Dobndirea unei experiene generale practice de laborator; Corelarea cunotinelor dobndite din suportul de curs cu aplicaiile practice de laborator.

Modul de stabilire a notei finale Nota finala la disciplina Genetica ecologic va fi acordata astfel: evaluarea activitatii desfasurate in cadrul orelor de lucrari practice: 30% colocviul de laborator: 20% examenul final la disciplina: 50%

Teme de licen ce pot fi abordate la disciplina GENETICA GENERALA

1. Studii asupra efectelor unor mutageni fizici si/sau chimici asupra materialului genetic, la diferite organisme model. 2. Capacitatea radioprotectoare a diferite substane cu rol antioxidant.

3. Studiul frecventei grupelor de sange intr-un lot reprezentativ din populatia unei anumite zone.
4. . Studiul efectelor poluarii asupra materialului genetic la diferite organisme model.

G E N E T I C A ECOLOGIC
Suport de curs

Unitatea de invatare 1

INTRODUCERE

Genetica ramura cea mai dinamic a biologiei, nscut n secolul XIX prin magistrala oper a lui Johan Gregor Mendel (Versuche ueber Pflanzen Hybriden publicat n 1865), a aprut ca tiin la nceputul secolului trecut (a devenit domeniu de sine stttor n anul 1900) i n doar cteva decenii a revoluionat ntreaga biologie, explicnd geneza ntregii diversiti a lumii organice la nivel cromosomial i cu ajutorul biochimiei la nivel molecular, ajungnd punct de reper n biologie, medicin, agronomie etc. Genetica, termen provenit din grecescul gennao = "a nate", este perceput drept disciplina biologic ce se preocup cu studiul ereditii, variabilitii i determinismului caracterelor. Ereditatea, din latinescul hereditas = "motenire", reprezint o calitate intrinsec a sistemelor biologice din nivelul individual de organizare i integrare a materiei vii, care asigur transmiterea nealterat, n irul de generaii, a bagajului informaional specific. Variabilitatea, din latinescul variare = "a se schimba", reprezint calitatea sistemelor biologice individuale, care permite schimbarea coninutului informaiei ereditare, n irul de generaii. Prin urmare, ereditatea i variabilitatea vizeaz comportamentul organismelor (procariote i eucariote, vegetale i animale) sub aspectul etalrii caracterelor specifice n succesiunea de generaii, ntr-un echilibru dinamic al stabilitii i schimbrii, care s permit att meninerea nealterat a speciilor pe o perioad nedeterminat de timp, ct i evoluia i adaptarea lor la scara timpului geologic. Evident, caracterele respective au un substrat, un suport material. Etalarea coninutului informaional specific al unui caracter, presupune o succesiune de procese de nalt precizie i finee, procese ce se constituie n determinismul caracterelor. Determinismul caracterelor presupune, n succesiune, procesele de transcripie i translaie, n conexiune indisolubil cu factorii mediului intern i extern, procese care duc la etalarea potenelor ereditare (morfo-anatomice, biochimice, fiziologice, comportamentale etc.), ntre anumite limite, procese care asigur manifestarea unui anumit fenotip. Cu mult nainte ca oamenii s nceap s fie preocupai de mecanismele genetice ale transferului informaiei biologice de la celul la celul, de la prini la urmai sau de la generaie la generaie, ei au realizat selecia empiric a caracterelor, intervenind n sensul acumulrii de beneficii pentru societatea uman (creterea calitativ i cantitativ a produciei de lapte, ou, carne, ln, orez, bumbac, fiind doar cteva exemple). Printre primele dovezi rmase de-a lungul timpului, sunt cele aparinnd epocii cultivatorilor de plante, a trecerii de la cules i vnat la cultivarea plantelor. Astfel, de la populaiile din Orientul Mijlociu, au rmas documente n piatr ce au condus la concluzia c erau relativ comune lucrrile de selecie i ameliorare la animale, ct i polenizarea artificial. Mrturii de o deosebit profunzime despre fenomenul ereditii ne parvin i de la civilizaia Greciei Antice, India, China, Roma Antic. A urmat apoi n Evul Mediu o perioad de stagnare a descoperirilor n biologie. Dupa Evul Mediu, toate acumulrile de pn atunci, combinate cu noile date furnizate de dezvoltarea fr precedent a agriculturii, a industriei au fundamentat noua concepie tiinific, noua poziie a omului n cadrul naturii. Figuri proeminente pentru avntul cercetrilor biologice au fost P. Belon (1517-1564), Conrad Gesner (1516-1565), Ulise Aldrovandi (1522-1605), Gaspar Bauhin (1550-1625) etc.. n

anul 1651, W. Harwey, a descoperit i a descris circulaia sngelui, n 1665, n premier mondial, R. Hooke (1635-1703) descrie celula. Simultan, Antony van Leeuwenhoeck (1632-1723) descoper i descrie multe microorganisme i spermatozoizii de om, cine i iepure, iar n 1694 R.J. Cammerarius (Cammerer) descoper i descrie sexele la plante. n 1735, apare opera suedezului Carol Linn (1707-1778), Systema nature, oper fundamental pentru teoreticieni i practicieni ntruct, n numai 12 pagini, oferea criterii clare de delimitare i caracterizare a speciilor, obiectul concret de lucru pentru cei ce investigau anatomia, fiziologia, reproducerea i comportamentul organismelor vegetale i animale. Un punct nodal n demersurile pentru o concepie biologic modern l reprezint descrierea nucleului celular de ctre Schneider, Schwann, Schleiden, Virchow. Mai precizm c dac diviziunea celulei animale fusese observat n 1827, iar cea a celulei vegetale (la o alg) n 1832, meioza a fost descris abia n 1870. Dar, pentru o istorie a geneticii, este obligatorie prezentarea descoperirilor efectuate de Ch. Naudin care, n anul 1859, a publicat lucrarea Nouvelles recherches sur l'hibridit dans les vegetaux. n respectiva lucrare, Naudin sublinia aspecte importante ale transmiterii caracterelor ereditare, i anume: uniformitatea hibrizilor din prima generaie, diversitatea lor n generaiile urmtoare, segregarea "esenelor" (aa numete Naudin factorii ereditari), revenirea la fo rmele parentale etc. Naudin a lucrat cu specii ale genurilor Papaver, Primula, Datura, Nicotiana. Din pcate, el nu a reuit s surprind i s enune legitile transmiterii caracterelor, legitile ereditii. Acest merit i va reveni lui Mendel. 1. LEGITILE EREDITII 1.1. Experimentele lui Mendel

Pregtit de o multitudine de descoperiri, observaii i experimente, momentul naterii geneticii ca tiin este momentul Mendel, mai precis, anul 1865, an n care opera sa Versuche ber Pflanzenhybriden (Experiene asupra hibrizilor la plante, tradus i la noi, abia n 1945, de A. Piescu, n Buletinul Cultivrii i Fermentrii Tutunului) a primit bun de tipar i a fost publicat ntr-o modest revist provincial - "Revista Naturalitilor din Brnn. Gregor Mendel (1822-1884), a experimentat pe diverse specii de plante aparinnd genurilor Hieracium, Phaseolus i n special Pisum, atenie deosebit acordnd mazrii (Pisum sativum). Mendel nu a fost primul care a efectuat experimente de ncruciare, dar a fost unul dintre primii care a fcut observaii referitoare la cte un singur caracter. Predecesorii lui au urmrit ntregul organism, cu trsturi complexe, putnd s observe apariia similaritilor i diferenelor dintre prini i urmai. Pe baza interpretrii matematice a rezultatele obinute, Mendel a formulat ipoteze, a prezis i verificat transmiterea caracterelor de-a lungul generaiilor, fr a cunoate ns mecanismele biologice implicate n acest proces. Se cuvin dou remarci eseniale pentru a nelege ce l-a detaat pe Mendel de predecesorii si, ajutndu-l s precizeze fr echivoc legitile ereditii (Bra, 1999). n primul rnd a ales ca obiect de studiu o specie autogam, Pisum sativum, putnd urmri n descenden comportarea hibrizilor i n al doilea rnd a verificat puritatea genetic a plantelor luate n studiu, timp de 3 -4 generaii. Alegerea mazrii drept obiect de studiu prezint i alte avantaje, printre care: perioada de vegetaie scurt, trsturi fenotipice distincte i contrastante, existena a numeroase soiuri ce dau natere la hibrizi fertili. n 1900, lucrarea lui Mendel a fost descoperit (mai degrab citit i neleas) simultan de 3 botaniti Hugo de Vries n Olanda, Carl Correns din Germania i Eric von Tschermak din Austria. ncrucirile au fost fcute cu mare atenie. Pentru a preveni autopolenizarea, n florile test ale plantelor mam, anterele au fost ndeprtate naintea maturrii complete a gineceului, castrarea relativ uar reprezentnd un alt avantaj. Polenizarea artificial s-a realizat cu polen provenit de la planta tat. Deci plantele ce au fost supuse castrrii i polenizrii artificiale, reprezint generaia parental, iar boabele aprute pe ele n urma dublei fecundri prin care a luat natere embrionul (diploid) i endospermul (triploid), reprezint generaia filial, hibrid. n cazul urmririi trsturilor precum culoarea tegumentului boabelor, clasificrile pot fi fcute imediat, n

timp ce caractere precum nlimea tulpinii pot fi analizate abia dup plantarea seminelor i ajungerea la maturitate a indivizilor aparinnd generaiei filiale. Au fost efectuate experimente de hibridare pe parcursul a mai multor generaii precum i retroncruciri ntre hibrizi i plante de tip parental, pure din punct de vedere genetic. Oservaiile lui Mendel arat clar c temperatura mediului nconjurtor, umiditatea solului i cea atmosferic influeneaz creterea plantelor, dar c principalul factor determinator n exprimarea caracterelor rmne ereditatea.

1.1.1. Monohibridarea Monohibridarea reprezint procesul de ncruciare (hibridare) a doi indivizi aparinnd aceleiai specii, puri din punct de vedere genotipic (homozigoi), deosebii ntre ei prin manifestarea fenotipic a unui singur caracter. J.Gr. Mendel a utilizat, pentru monohibridare, dou soiuri de mazre, pure din punct de vedere genotipic, ce prezentau caractere stabile i care se deosebeau prin culoarea tegumentului la boabe: unul cu boabe de culoare galben i altul cu boabe de culoare verde. n prima generaie hibrid, notat cu F1 (adic prima generaie filial - n latin filius, filia = fiu, fiic), a obinut numai plante cu boabe de o singur culoare - galben, n experimentul de acest tip. Plantele ce reprezint generaia parental (desemnat n tabele i grafice cu simbolul P), sunt cele ce au fost supuse castrrii i polenizrii artificiale, iar boabele aprute pe ele reprezint generaia filial, hibrid (desemnat prin F1). O prim constatare a lui Mendel a fost c toi hibrizii din F1 (prima generaie) aveau o singur culoare a boabelor. Experimentnd pe aceeai specie cu alt caracter, de pild forma boabelor (netede i zbrcite), a constatat c n F1 toi indivizii aveau boabe netede. Pe baza acestui experiment, Mendel a enunat principiul uniformitii hibrizilor n F1. Perpetund respectivii hibrizi prin autofecundare, n de-a doua generaie, Mendel a constatat reapariia fenotipurilor parentale (reapariia expresiilor fenotipice etalate de cei doi prini), n raport de aproximativ 3:1. n consecin, a fost enunat cel de-al doilea principiu segregarea hibrizilor n F2. Mendel a precizat c n F1 se manifest fenomenul de dominan i recesivitate, n sensul c este etalat doar caracterul dominant, cel recesiv rmnnd ascuns. Prin simboluri, experimentul efectuat de Mendel poate fi reprezentat astfel: Prinii Gameii F1 Gameii F2 Segregare fenotipic Segregare genotipic Galben() () x x Galben() () i () () i () 1 galben ()+2 galben ()+1 verde() 3:1 1:2:1
Tab. 1. Dinamica fenotipurilor i genotipurilor n monohibridare

Verde() ()

Hibridare

Autofecundare

Prin bulinele negre s-a redat factorul ereditar dominant (care determin culoarea galben a bobului), iar prin bulinele albe s-a redat factorul ereditar recesiv (care determin culoarea verde a boabelor) Mendel a ncercat s interpreteze i s-i explice rezultatele obinute. ntruct, la acea vreme, nu se cunotea nimic despre cromosomi i gene (substratul material al informaiei ereditare), Mendel a folosit termenul de factori ereditari i a presupus, cu o extraordinar intuiie, c n fiecare celul a organismului factorul ereditar determinant al unui caracter se afl n doz dubl, n timp ce n celulele sexuale se afl n doz simpl. Schematic: Prinii Gameii F1 Gamei Produi n F1 F2 Segregare genotipic Segregare fenotipic Aa AA 1 2Aa 2 3:1 AA A X X aa a

Autofecundare sau hibridare de tipul frate x sor A i a A i a aa 1

Tab. 2. Dinamica factorilor ereditari n gamei i n hibrizi

Prin A se desemneaz factorul ereditar dominant i prin a factorul ereditar recesiv. Apoi Mendel a precizat c, dup fecundare i formarea zigotului, factorii ereditari nu se contopesc, ci doar se altur. n consecin, cnd se formeaz din nou gameii, ei se vor despri, fiecare trecnd ntr-un gamet. Astfel, conchide Mendel, gameii sunt puri din punct de vedere genetic. Aceasta este considerat prima lege elaborat de Mendel, supranumit: LEGEA PURITII GAMEILOR. 1.1.2. Dihibridarea Mendel a recurs i la ncruciarea de indivizi care se deosebeau prin expresia fenotipic a dou caractere - culoarea i respectiv forma boabelor. El a ncruciat mazre cu boabe netede i galbene cu mazre cu boabe zbrcite i verzi. n F1, ca i la monohibridare, toi indivizii au fost uniformi, avnd boabe netede i galbene. S-au manifestat fenomenele de dominan i recesivitate. n F2 a avut loc segregarea independent a caracterelor, fiind posibil recombinarea acestora i apariia de noi fenotipuri. Att forma ct i culoarea boabelor a segregat n raport de 3:1. n plus, au aprut i noi combinaii de caractere- boabe netede i verzi, pe de o parte, i boabe zbrcite i galbene, pe de alt parte. Iat cum poate fi redat, schematic, procesul: Prin A i B, s-au redat factorii ereditari dominani (determinani ai culorii galbene i ai formei netede a bobului), iar prin a i b, s-au redat factorii ereditari recesivi (determinani ai culorii verzi i ai formei zbrcite a bobului). Examinnd tabelul, constatm c pe diagonala stnga sus - dreapta jos sunt plasai numai indivizi homozigoi (dominani n ambele caractere, recesivi n ambele caractere sau dominani ntrun caracter i recesivi n cellalt).

Prinii Gameii F1 Gameii hibrizilor din F1 AB Ab aB ab AaBb AB

AABB AB

X X

aabb ab

Autofecundare sau hibridare de tipul frate x sor Ab aB ab

AABB AABb AaBB AaBb

AABb AAbb AaBb Aabb

AaBB AaBb aaBB aaBb

AaBb Aabb aaBb aabb

Hibrizii din F2 care segreg, fenotipic, n raportul 9:3:3:1 i genotipic n raportul 1:1:2:2:4:2:2:1:1
Tab. 3. Dinamica genotipurilor i fenotipurilor, n F1 i F2, n dihibridare

Pe diagonala stnga jos dreapta sus sunt plasai numai indivizi heterozigoi (n ambele caractere), pe diagonalele mici avem heterozigoi ntr-un singur caracter (de fiecare dat altul fiind homozigotul dominant i altul homozigotul recesiv) etc.. Prin urmare, din punct de vedere al constituiei ereditare, n hibridare, prin autofecundarea hibrizilor din generaia F1, ntlnirea probabilistic a celor patru categorii (tipuri) diferite de gamei, asigur formarea a 16 descendeni, a cror constituie genetic este de 9 tipuri i anume: 1/16 dublu homozigot dominant, 1/16 dublu homozigot recesiv, 2/16 homozigoi dominani pentru caracterul culoare i heterozigoi pentru form, 2/16 cu acelai raport de homozigoie/heterozigoie dar pentru cellalt caracter, 4/16 indivizi heterozigoi n ambele caractere, 1/16 homozigoi n ambele caractere dar unul recesiv, cellalt dominant, 1/16 cu cellat caracter dominant (ambele homozigote), 2/16 indivizi heterozigoi pentru culoare i homozigoi recesivi pentru form i 2/16 indivizi homozigoi recesivi pentru culoare i heterozigoi pentru form. Sub aspect fenotipic, situaia se prezint astfel: 9/16 indivizi dominani (cu boabe galbene i netede), 3/16 dominani ntr-un caracter (boabe galbene i zbrcite), 3/16 dominani n cellalt caracter (boabe netede i verzi) i 1/16 indivizi recesivi n ambele caractere (boabe verzi i zbrcite), cum ester redat n tabelul urmtor: Fenotipul Galben i neted Genotipul AABB AABb AaBB AaBb Galben i zbrcit Aabb Aabb Verde i neted aaBB aaBb Verde i zbrcit aabb Rata genotipurilor 1 2 2 4 1 2 1 2 1 1 3 3 Rata fenotipurilor 9

Tab. 4. Rata fenotipurilor i rata genotipurilor, n dihibridare, la mazre.

Se impune, deci, o concluzie: n dihibridare, caracterele segreg independent unul de altul. Aceasta este, de fapt, cea de-a doua legitate stabilit de Mendel LEGEA SEGREGRII INDEPENDENTE A CARACTERELOR.. Trebuie specificat c tipurile parentale de gamei sunt dependente de numrul de factori ereditari implicai n hibridare. Vor aprea 2n tipuri de gamei, n fiind din numrul de factori ereditari aflai n stare heterozigot. Spre exemplu, dac avem un factor ereditar pentru culoarea galben i unul pentru cea verde, n=2/2 =1. Deci, 21=2, vom avea 2 tipuri de gamei. Recurgnd la o simbolistic universal, n care notm determinantul unui caracter cu A pentru expresia dominant i a pentru cea recesiv, cellalt determinant cu B i b etc., conform relaiei matematice precizate situaia se va prezenta astfel: - n cazul monohibridrii, prinii vor fi AA i aa, cu gameii A i respectiv, a. Hibridul va fi Aa, cu gameii A i a. - n cazul dihibridrii, prinii AABB i aabb vor avea gamei de tipul AB i ab, hibridul fiind AaBb. De data aceasta ns, avnd n vedere legea segregrii independente a caracterelor, gameii vor fi AB, ab, Ab i aB (deci, 2n=22=4 tipuri de gamei).

1.2.

Universalitatea legitilor descoperite de Mendel

Cercetri similare celor efectuate de Mendel au vizat i alte specii, inclusiv omul. Un exemplu n acest sens l constituie ncrucirile dintre cobai de culoare diferit: tipul slbatic, de culoare gri i tipul albinos (aprut prin mutaie). n hibridarea dintre o femel de tip albinos (cu blana de culoare alb), cu un mascul slbatic (cu blana de culoare gri), indivizii din generaia F1 (puii din prima generaie) aveau n totalitate blana de culoare gri. Indivizii din F1, ncruciai ntre ei, au dat generaia F2, n care s-a produs segregarea celor dou fenotipuri n raportul de 3 gri: 1 alb, adic 3: 1. n F1 s-au manifestat dominana i recesivitatea. n consecin hibrizii erau uniformi (sub aspect fenotipic). n F2 s-a produs segregarea, fenotipic, n raportul de 3 dominant la 1 recesiv Evident, ca i la mazre, fenomenul a fost explicat pe baza legii puritii gameilor. n concluzie, legile descoperite de Mendel au caracter de universalitate, fiind aplicabile i deci valabile, pentru plante i animale, inclusiv pentru om. 1.3. Interpretarea matematic a legilor descoperite de Mendel

Fiind i matematician, Mendel a aplicat teoria i calculul probabilistic pentru interpretarea rezultatelor experimentelor sale, preocupat fiind de estimarea probabilitii obinerii de rezultate similare n cazul repetrii experimentelor. n cazul ncrucirii a dou soiuri diferite ntre ele prin expresia fenotipic a unui caracter, n prima generaie hibrid se obin exclusiv heterozigoi: AA x aa = Aa. Dei fenotipic indivizii sunt uniformi i manifest trstura dominant, genotipic ei conin ambii factori ereditari (de aici numele de heterozigoi). n descenden, aceste organisme heterozigote produc dou categorii de gamei (A i a), n proporie egal. ntlnirea probabilistic a celor dou tipuri de gamei duce la apariia a dou categorii de fenotipuri (dominant si recesiv) i a trei categorii de genotipuri ( 25% AA homozigot dominant, 25% aa homozigot recesiv i 50% Aa heterozigot cu manifestare dominant). Genotipic deci, raportul este de 1: 2: 1. Fenotipic, innd cont de faptul c AA i Aa au aceeai manifestare, raportul de segregare este de 3: 1, conform tabelului 5. Gameii A=50% A=50% A=50% AA=25% Aa=25% a=50% Aa=25% aa=25%

Tab.5. . Probabilitatea apariiei genotipurilor i fenotipurilor n monohibridare.

n cazul dihibridrii, Mendel a constatat c n F2, pentru caracterul forma bobului, din boabe erau fenotipic dominante (n experimental efectuat de el, 432 din 556 erau netede) i erau fenotipic recesive (adic 133 din 556 erau zbrcite). Pentru caracterul culoare a obinut aproximativ aceleai raporturi adic 416 din 556 erau galbene i 140 din 556 erau verzi. Fenotipurile reprezentnd cele dou caractere(neted i zbrcit pentru form, galben i verde pentru culoare) segreg independent. Pe baza rezultatelor obinute, conform modelului matematic ce ia n calcul ansa combinrii a dou fenomene independente, egal cu produsul probabilitilor lor separate (3/4+1/4)(3/4+1/4), Mendel a estimat c 9/16 din boabe vor fi netede i galbene (adic x = 9/16), 3/16 vor fi netede i verzi (3/4 x = 3/16), 3/16 zbrcite i galbene (3/4 x = 3/16) i 1/16 zbrcite i verzi (1/4 x = 1/16). Prin urmare, segregarea n F2 ar trebui s se produc n raportul 9:3:3:1. n realitate, Mendel a constatat prezenta urmtoarelor proporii numerice (pe tipuri de boabe) n cadrul celor 556 de boabe recoltate: 315 netede i galbene, 108 netede i verzi, 101 zbrcite i galbene, 32 zbrcite i verzi. Comparnd distribuia teoretic a fenomenelor cu cea obinut experimental, folosindu-ne de testul 2 (hi ptrat), putem demostra c ipoteza de la care s-a plecat este just. Pe de alta parte, se poate verifica dac segragarea are caracter ntmpltor sau reprezint o legitate. Netede i Galbene Observate Calculate (e) Diferena (d) d2 d2 / e
2

Datele

Numr de boabe Netede i verzi 108 104,75 -3,25 14,06 0,134

Zbrcite i Galbene 101 104,75 +3,75 10,56 0,100

Zbrcite i Verzi 32 34,75 +2,75 7,56 0,217

315 312,75 -2,25 5,06 0,016

2

= d2/e)

=0,47
2

Tab.6. Aplicarea testului la experimentele efectuate de Mendel.

Formula pentru estimarea valorii hi ptrat este urmtoarea: 2 = (d2/e) d = diferena ntre valoarea calculat i cea observat; e = valoarea estimat; = semnul de nsumare. Iat cum pot fi evaluate rezultatele experimentelor lui Mendel, cu ajutorul lui 2. Probabilitatea de repetare a unui fenomen poate fi estimat i pe baza tabelului elaborat de R.A. Fisher. Tabelul se utilizeaz in urmtorul mod: Gradele de libertate reprezint numrul de clase independente, minus unu. n experimentul lui Mendel, au aprut (prin segregare) patru clase de indivizi. Deci, numrul gradelor de libertate este 3. Valoarea lui 2, calculat de noi, este 0,47. Plasat n tabelul lui Fisher, ea se situeaz ntre valorile de 0,35 i 0,58, ceea ce corespunde probabilitilor P = 0,95 i P = 0,90. Cu alte cuvinte, putem afirma c dac se va repeta experimentul se vor obine rezultate similare (fenomenul se va repeta) n 90-95% dintre cazuri.

Nu mr grade de libertate 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10.

Valorile lui P 0,99 0,95 0,90 0,80 0,70 0,50 0,30 0,10 0,05 0,01

0,002 0,02 0,12 0,30 0,55 0,87 1,24 1,65 2,09 2,56

0,00 4 0,10 0,35 0,71 1,14 1,63 2,17 2,73 3,32 3,94

0,01 6 0,21 0,58 1,06 1,61 2,20 2,83 3,49 4,17 4,87

0,06 4 0,45 1,01 1,65 2,34 3,07 3,82 4,59 5,38 6,18

0,15 0,71 1,42 2,20 3,00 3,83 4,67 5,53 6,39 7,27

0,46 1,39 2,37 3,36 4,35 5,35 6,35 7,34 8,34 9,34

1,1 2,4 3,7 4,9 6,1 7,2 8,4 9,5 10,6 11,8

2,7 4,6 6,3 7,8 9,2 10,6 12,0 13,4 14,7 16,0

3,8 6,0 7,8 9,5 11,1 12,6 14,1 15,5 16,9 18,3 2

6,6 9,2 11,3 13,3 15,1 16,8 18,5 10,1 21,7 23,2

Tab. 7. Estimarea probabilitii de repetare a unui fenomen pe baza valorilor coeficientului

O alt problem ce-i poate gsi rezolvarea prin calcule matematice este aceea a noilor combinaii de gene la hibrizi. Pentru facilitarea nelegerii celor ce vor fi prezentate n continuare, relum unele precizri anterioare. n dihibridare, trihibridare etc., se produc recombinri de factori ereditari, pe baza apariiei gameilor recombinai. Astfel, hibridarea dintre un individ AABB i unul aabb determin (n F1) apariia heterozigoilor AaBb. Acetia vor da 4 tipuri de gamei, i anume: AB i ab de tip parental i Ab, aB de tip recombinat. Dac se noteaz cu p procentul de recombinare, nseamn c gameii Ab i aB au, fiecare n parte, frecvena de p/2. Implicit, fiecrui tip de gamei nerecombinai i revine frecvena de (1-p)/2. n consecin, se poate calcula frecvena celor patru tipuri de descendeni, adic frecvena recombinrilor. Gameii AB (1-p)/2 (1-p)2/4 AABB AB (1 p)/2 Ab p/2 aB p/2 ab (1-p)/2
Tab. 8. Calculul frecvenei recombinrii genice.

Ab p/2 p(1-p)/4 AABb

aB p/2 p(1-p)/4 AaBB

ab (1-p)/2 (1-p)2/4 AaBb

p(1-p)/4 AABb

p2/4 AAbb

p2/4 AaBb

p(1-p)/4 Aabb

p(1-p)/4 AaBB

p2/4 AaBb

p2/4 aaBB

p(1-p)/4 aaBb

(1-p)2/4 AaBb

p(1-p)/4 Aabb

p(1-p)/4 aaBb

(1-p)2/4 aabb

n continuare, se poate calcula frecvena fiecrui fenotip recombinat. Spre exemplu, fenotipul Ab va avea frecvena: p2/4 + p(1-p)/4 + p(1-p)/4 = (2p-p2)/4 = p(2-p)/4. Pe de alt parte, dac se cunoate frecvena recombinrii se poate calcula frecvena fenotipurilor parentale. De pild, dac frecvena recombinrii este de 20%, adic p=0,2, fenotipul Ab fiind p(2-p)/4, rezult 0,09 adic 9%. 1.4. Abateri de la principiul dominanei i recesivitii din F1 i de la raportul de segregare de tip mendelian din F2 Aa cum am precizat i demonstrat n paginile anterioare, pe baza experimentelor de hibridare ntre diferite soiuri ale speciei Pisum sativum L., Mendel a demonstrat existena uniformitii hibrizilor n F1 , segregarea caracterelor n descendena hibrizilor de F1 i segregarea independent a caracterelor (n cazul hibrizilor pentru mai mult dect un caracter). Ulterior, prin experimente i observaii efectuate n hibridri la alte specii de plante sau animale, s-a ajuns la concluzia c exist abateri de la principiul dominanei i recesivitii fenotipurilor parentale n F1 i de la raportul de segregare din F2 sau, altfel spus, c exist alte tipuri de segregare (fa de tipul mendelian). Este evident c abaterile de la tipul mendelian de segregare se datoreaz manifestrii altor tipuri i raporturi de dominan/recesivitate. n mod normal, determinismul profund al unui caracter se datoreaz activitii unei gene. Dar, sub impactul factorilor de mediu, o gen se poate transforma ntr-o alel (prin mutaie). De obicei, genele domin asupra alelelor, n sensul c la heterozigoi se manifest fenotipul datorat genei, i numai la homozigoii recesivi, la haploizi i n cazul hemizigoiei se manifest fenotipul determinat de alela recesiv. Abaterile de la aceste reguli induc modificri ale fenomenului dominan/recesivitate i schimbri n raporturile de segregare. 1.4.1. Dominana incomplet (semidominana) Recurgnd la o simbolistic general i unificatoare, putem nota o gen oarecare cu A i alela ei, rezultat prin mutaie, cu a. n cazul hibridrii AA x aa va rezulta individul Aa, heterozigot. Aa cum precizam, de obicei A domin pe a, fenotipul heterozigotului Aa fiind identic celui al homozigotului AA. Sunt ns i cazuri n care AA Aa. Un exemplu, devenit clasic de acum, este cel al hibrizilor dintre varieti de Mirabilis jalapa, observat n experimentele efectuate de C. Correns (n 1912). ncrucind varietatea cu floare de culoare roie, cu varietatea avnd flori de culoare alb, n F1 s-au obinut indivizi uniformi dar toi cu flori roz. ncrucind aceti indivizi ntre ei, n F2 s-au obinut indivizi cu flori roii (25%), cu flori roz (50%) i cu flori albe (25%) (deci un raport de segregare de 1:2:1, heterozigoii fiind fenotipic diferii de ambii homozigoi). n F3 indivizii din F2 care aveau flori roii, interncruciai, au dat doar descendeni cu flori roii, cei cu flori albe, doar descendeni cu flori albe, iar descendena celor cu florile roz a segregat n continua re, n raportul de 1:2:1. R x R R + 25% R 100% A x r

r+ A 50% R 25% r 50% A 25%

25% A 100%

R = rou r = roz A = alb

n acest caz (al motenirii culorii florii), absena dominanei este explicat prin mecanismele metabolice ale formrii pigmentului rou. Pigmentul se formeaz printr -o succesiune de reacii enzimatice. Exemple de manifestare a semidominanei pot fi date pentru multe alte specii de plante sau animale. De pild, n ncruciri ntre soiuri de Zea mays cu bob albastru i cu bob galben, n F1 rezult indivizi cu bob violaceu. n F2 segregarea este de 1 albastru: 2 violet: 1 galben. n literatura de specialitate, pentru segregarea de acest fel se folosete expresia "segregare de tip Zea" (1:2:1), tocmai spre a o deosebi de segregarea tipic (tip Pisum, 3:1). n lumea animal, un exemplu bine cunoscut de semidominan este cel referitor la rezultatul hibridrii ntre o ras de gini cu penajul negru i o ras cu penajul alb, hibridare n urma creia rezult tipul Andaluzia, cu penajul de culoare albstruie. n F2, din ncruciarea ntre indivizi ai tipului Andaluzia, iau natere indivizi cu penaj negru (25%), indivizi tip Andaluzia (50%) i indivizi cu penaj alb (25%). Evident, tipul Andaluzia nefiind constant, nu se poate vorbi de rasa Andaluzia (rasele la animale i soiurile la plante trebuie s fie stabile ereditar). 1.4.2. Codominana Codominana reprezint un fenomen genetic complex datorat n esen, polialeliei. Cel mai elocvent exemplu este furnizat de situaia grupelor sanguine umane, mai ales cele din sistemele AB0 i MN. n codominan se constat un comportament difereniat al alelelor, n sensul c unele dintre ele se afl n raport de dominan i recesivitate, n timp ce altele sunt codominante, n sensul c au "trie" egal i contribuie n mod egal la fenotipizarea unui nou caracter. Cunoaterea grupei sanguine a unui individ este extrem de important, din dou considerente - medical i juridic. Sub aspect medical, cunoaterea grupelor sanguine este obligatorie n cazul transfuziilor. Dac ne referim la sistemul AB0, oamenii aparin la patru grupe sanguine, notate cu A, B, AB i 0 (zero). Grupele de snge din sistemul AB0 pot fi redate schematic, astfel: Fenotip Genotip Antigen (polizaharid de pe globulele roii) A IAIA i IAI0 sau LALA i LAl B IBIB i IBI0 sau LBLB i LBl AB 0 IAIB sau LALB I0I0 sau ll A+B anti A()+anti B() B Anti A () A Anticorp (proteina din serul sanguin) Anti B ()

Tab.9. Grupele de snge din sistemul ABO

n situaia n care antigenul A vine n contact cu anticorpul (adic, globulele roii de la un individ din grupa A cu serul sanguin al unui individ din grupa B), anticorpul (proteina) se leag la antigen (polizaharid) i l inactiveaz. Concomitent, se produce agregarea (aglutinarea) globulelor roii. n consecin, transfuziile de snge pot fi efectuate doar n sensul:

00 / \ AA BB

\ / AB AB

Grupa 0 este donator universal, iar grupa AB este primitor universal. Grupa A poate dona grupei A i AB i poate primi de la A i 0. Grupa B poate primi de la B i 0 i poate dona grupei B i AB. Fiind genic determinate, evident, grupele sanguine sunt ereditare. Cele trei alele LA, LB i l ocup acelai locus pe cromosomii omologi. Alela LA prezint mai multe mutaii, dou dintre ele fiind mai frecvente - LA1 i LA2, ntre ele fiind un raport de dominan (LA1 domin pe LA2). n consecin, fenotipic, grupele sanguine din sistemul AB0 sunt A1, A2, B, A1B, A2B i 0, conform tabelului:

Fenotip A1 A2 B A1B A2B 0

Genotip LA1LA1, LA1LA2, LA1l LA2LA2, LA2l LBLB, LBl LA1LB LA2LB Ll

Tab.10. Raportul de dominan/recesivitate ntre alelele determinante ale grupelor sanguine

Tot n cazul speciei umane mai exist un sistem de grupe sanguine i anume sistemul M N, cu grupele M, N i MN. Fr ndoial, innd cont de raportul de dominan, codominan i recesivitate dintre alelele precizate, este simplu s se prevad grupele de snge posibile ale descendenilor. n cazul n care se cunosc grupele sanguine ale prinilor (i invers), se pot stabili relaiile de paternitate i filiaie, cu repercusiuni pentru demersuri medico-legale i juridice. De pild, doi prini cu fenotipul 0 nu vor putea da natere dect la copii cu acelai fenotip (ll x ll = ll). Doi prini din grupa B, dac vor fi heterozigoi, vor putea da natere la copii din grupele B sau 0 (LBl x LBl = LBLB, LBl i ll) etc.. 1.4.3. Supradominana Reprezint fenomenul datorit cruia heterozigoii depesc ambii prini n fenotipizarea unor caractere (mai ales cantitative, cum ar fi habitusul, productivitatea etc., inclusiv viabilitatea), ca o component a capacitii de a da rspunsuri adecvate la presiunea seleciei. Schematic, supradominana poate fi redat astfel: AA < Aa > aa

10 8 6 4 2 0 AA Aa aa

Fig.1. Fenotipizarea hibridului Aa intermediar comparativ cu prinii

Se apreciaz c n supradominan sunt implicate mai multe gene cu caliti aditive. n mod frecvent, supradominana reprezint rezultanta interaciunii a dou alele, rezultant ce face ca heterozigoii s se situeze n afara amplitudinii de variabilitate a fiecruia dintre cei doi homozigoi. n condiii normale de dominan i recesivitate, cel mai bun genotip este homozigotul dominant, toi indivizii unei populaii putnd fi adui, prin selecie, n stare homozigot.

15 10 5 0 AA Aa aa

Fig.2. Fenotipizarea hibridului Aa n supradominan

1.4.4. Gene letale O alt cauz a modificrii raportului mendelian de segregare n descendena hibrizilor din F1 o constituie prezena genelor letale. Noiunea de de gen letal a fost introdus de L. Cunot (1911). El a observat c ncrucind oareci de culoare galben, ntotdeauna n descenden rezult un amestec de indivizi de culoare galben i de alt culoare, n raport de 2: 1. Rezultatele au impus dou concluzii. n primul rnd, faptul c descendena segreg nseamn c oarecii galbeni sunt heterozigoi. n al doilea rnd, segregarea fiind continuu n raport de 2: 1 i descendena indivizilor de culoare galben segregnd mereu, nseamn c o parte dintre descendenii indivizilor de culoare galben i anume cei homozigoi (a cror descenden ar trebui s nu segrege), nu iau natere. Prin urmare, gena dominant n stare homozigot este letal. Aceasta a fost presupunerea lui Cun ot. Sacrificarea femelelor gestante a confirmat aceast presupunere, deoarece s-au identificat embrioni mori care corespundeau ca numr procentului indivizilor necesari pentru asigurarea raportului de segregare 3: 1. Dac notm gena pentru culoarea normal a blnii cu a i mutanta care determin apariia culorii galbene cu Ay (Y de la cuvntul englezesc yellow = galben), situaia se va prezenta astfel: - indivizi galbeni heterozigoi au genotipul Aya. Prin ncruciarea lor rezult: Aya x Aya = AyAy (25%) + 2Aya (50%) + aa (25%)

nseamn c, n mod continuu, indivizii AyAy mor n stare embrionar. Genele letale pot fi identificate dup gradul manifestrii lor (n genetic se folosete termenul de penetran) i anume: a. gene letale propriu-zise, cu penetran de 100%, care produc moartea tuturor descendenilor; b. gene semiletale, cu penetran de 50%, avnd ca rezultat moartea a circa 50% dintre indivizi; c. gene subvitale, cu penetran de 30% i procent similar de inducere a letalitii. O alt clasificare a acestor gene se face pe criteriul stadiului ontogenetic n care i instaleaz efectul. Din acest punct de vedere, ele pot fi: a. gene letale gametice sau haplofazice, care determin moartea gameilor; b. gene letale zigotice sau diplofazice, care determin dispariia zigotului (deci fecundarea are loc, dar zigotul nu este viabil); n funcie de cromosomii pe care sunt plasate, genele letale pot fi: a. autosomale (plasate pe autosomi); b. heterosomale (plasate pe heterosomi, adic pe cromosomii sexului). Fenomenul letalitii genice nu este caracteristic doar animalelor, ci a fost descris i la plante. Spre exemplu, la Zea mays (porumb) s-au identificat 15 gene diferite care, n stare homozigot, blocheaz formarea clorofilei i, n final, fotosinteza. Plantele de acest tip ajung albinotice i, fiind incapabile de asimilaie, pier. Evident, dac am dori s ncadrm aceste gene n una din clasificrile anterioare, le-am plasa n categoria genelor subletale, deoarece provoac dispariia organismului purttor abia anterior atingerii stadiului de maturitate sexual.

1.4.5. Interaciunea genelor Este un alt fenomen care determin modificarea raportului de segregare i chiar apariia de noi fenotipuri n descendena hibrizilor din F1. Interaciunea genelor a fost constatat la ncruciarea dintre dou rase de gini, ambele albe: Leghorn i Wyandotte. Prin experimente i observaii multiple s-a demonstrat c la rasa Leghorn culoarea alb este dominant, n timp ce la rasa Wyandotte este recesiv. n consecin, dac rasa Leghorn este ncruciat cu o ras de culoare nchis, F1 va fi de culoare alb. Dac se ncrucieaz indivizi ai rasei Wyandotte cu indivizii unei rase colorate, indivizii din F1 vor fi, n totalitate, colorai. Prin urmare, la cele dou rase, Leghorn i Wyandotte, culoarea alb a penajului este determinat de gene diferite, nealele. Se consider c Leghorn la origine avea penajul colorat (CC; C = simbolul pentru gena determinant a culorii, de la cuvntul englezesc colour = culoare). Exprimarea genelor determinante ale culorii este blocat ns de alt gen inhibitoare (II; I = simbolul pentru respectiva gen, de la cuvntul englezesc inhibitory = inhibitor). Deci, genotipic, rasa Leghorn este CCII. Rasa Wyandotte de culoare alb (ca i rasele White, Plymonth etc.) dar recesiv, are genotipul ccii. Prin ncruciarea dintre cele dou rase CCII x ccii, rezult hibrizii din F1, de culoare alb, cu genotipul CcIi. Acetia formeaz gameii CI, cI, Ci, ci i prin ncruciare dau hibrizii din F2, conform tabelului. Prin urmare, raportul de apariie a indivizilor cu penaj colorat este de 3/16. Genotipul lor conine gena inhibitoare n stare recesiv homozigot, iar gena pentru culoare, n stare dominant, homozigot sau heterozigot. Fenomenul se numete epistazie, iar gena inhibitoare, a crei aciune mpiedic manifestarea aciunii genei pentru culoare, se numete epistatic. Gena inhibat se numete hipostatic.

Gam e-ii CI

CI CCII Alb

Ci CCIi Alb CCii Colorat CcIi Alb Ccii Colorat

cI CcII Alb CcIi Alb CcII Alb CcIi Alb

ci CcIi Alb Ccii Colorat ccIi Alb ccii Alb

Ci

CCIi Alb

cI

CcII Alb

ci

CcIi Alb

Tab.11. Segregarea culorii, n F2, la hibrizii obinui ntre rasele de gini Leghorn i Wyandotte

x Ras neagr Rasa Leghorn

= F1

x Ras neagr Rasa Wyandotte

= F1

x Rasa Leghorn

= Rasa Wyandotte

F1

+
Fig.3. . Rezultatele ncrucirilor dintre o ras cu penaj de culoare neagr i rasele Leghorn i Wyandotte, precum i ale ncrucirii dintre Leghorn i Wyandotte

F2

1.4.6. Polialelia sau alelia multipl Gena, care este responsabil de determinarea unui caracter, ocup o poziie bine definit pe un cromosom (ocup un locus). Orice gen, pe parcursul existenei ei, a putut suferi una sau mai multe mutaii. n consecin, pentru o gen au putut aprea una sau mai multe alele (n limba greac, alelon = altul). Rezult deci, cu claritate, c o alel sau o serie de alele ale unei gene sunt implicate n determinismul aceluiai caracter (evident, asigurndu-i fenotipizri diferite) i ocup acelai locus n cromosomul omolog (adic, n poziia din cromosomul n care se gsete gena). Evident, din acest punct de vedere, o gen poate avea o alel sau mai multe ( A poate avea alelele a1,a2,..,an), dar un individ nu poate avea dect 3 stri posibile (AA, Aa sau aa, sau alte combinaii care s desemneze statutul de homozigot recesiv sau heterozigot). ntr -o populaie ns, genotipic i, bineneles, fenotipic, poate exista o multitudine de indivizi,cu o multitudine de combinaii,att ntre gena slbatic i alelele ei, ct i ntre alele. Noiunea (termenul) de alel a fost introdus n tiin de W. Johannsen n anul 1909. Prin experiene de hibridare de tip mendelian se pot identifica alelele, se poate stabili raportul de segregare i se poate stabili tipul de relaii ntre o gen i alelele ei, adic, dac este dominan complet, semidominan etc.. Prin urmare, relund i analiznd n detaliu problema, rezult c ntr-o populaie, pentru o anumit gen, pot exista mai multe alele. Aa cum am precizat, acestea provin prin mutaii succesive, fie ale genei normale, fie ale uneia sau unora dintre alele. ntruct notaia alelelor poate duce la confuzii, este bine s redm cteva dintre modalitile de desemnare (notare) a lor. La modul general, gena slbatic se noteaz cu A, iar alelele cu a1, a2, a3...an. Dar gena normal (slbatic) se mai poate nota i cu prima, primele sau un grup de litere din denumirea n englez a primei mutante (care a fost descoperit i descris) pentru caracterul respectiv, nsoit de indicele +, alelele fiind notate cu aceleai indicative, dar fr indicele +. O alt notaie prevede folosirea unei singure abrevieri, rezultat de la denumirea primei mutante, cu indicele + pentru gena slbatic i a aceleiai abrevieri, avnd mereu alt indice format din literele ce desemneaz mutantele decelate ulterior, pentru restul alelelor. S exemplificm. Culoarea normal a ochiului la Drosophila melanogaster este roie. Mutanta cu ochi albi se noteaz cu w (de la cuvntul englezesc white = alb). Gena salbatic, n acest caz, se noteaz cu w+. Alelele mutante, altele dect white, se noteaz cu we (eosin), wa (apricot), wch (cherry), wco (corai). Prin urmare, culoarea ochilor la drosofila cuprinde o gam larg de mutante ntre alb i rou. Fiecare nuan se datoreaz unei alele, fapt pentru care se consider c, la aceast musculi, exist un sistem polialelic, o serie alelomorf. n aceast serie alelomorf fenotipul slbatic este dominant, toate fenotipurile mutante fiind recesive. i ntre alelele mutante exist raporturi de dominan i recesivitate. Ordinea dominanei este determinat de intensitatea culorii ochilor, pe care o confer o alel. Prin urmare, alela w, care determin culoarea alb a ochilor (deci, lipsa complet a pigmentului) este recesiv, n raport cu toate celelalte alele. n final, referitor la polialelie putem sublinia cteva particulariti, i anume: - polialelele ocup acelai locus n cadrul unui cromosom (grup de linkage); - polialelele fiind, de fapt, mutante ale unei singure gene, afecteaz ntotdeauna acelai caracter. n ncruciare ntotdeauna domin gena slbatic. Concomitent, unele alele sunt dominante fa de altele. De aceea, cnd se ncrucieaz doi indivizi alelici, n F1 nu apare tipul slbatic, ci domin unul dintre genitori. Sunt i situaii n care una dintre alele domin asupra tipului slbatic. Este cazul animalelor agouti i al unor culori sau forme de ochi la Drosophila melanogaster. 1.4.7. Poligenia sau polimeria Vizeaz mai ales expresia fenotipic a caracterelor cantitative (nlime, greutate, producie de fructe sau semine, producie de alcaloizi, vitamine, uleiuri etc.). nc din secolul XVIII, prin experimentele sale de hibridare, J. Klreuter a constatat c hibrizii din F1 rezultai din ncruciarea ntre Nicotiana tabacum pitic i Nicotiana tabacum nalt, aveau nlimea intermediar. n F2

aprea o segregare gradual, n sensul c se identific o adevrat scar a indivizilor, de la cel pitic, pn la cel nalt. Cercetrile efectuate de suedezul H. Nilson Ehle pe gru i americanul E. M. East pe porumb, ntre anii 1910-1913, au permis descoperirea fenomenului poligeniei. n urma acestor cercetri s-a conchis c determinismul caracterelor cantitative este poligenic, n sensul c ele sunt determinate de mai multe gene nealele. Segregarea genelor nealele este independent (ca i caracterele independente), doar efectul lor fiind cumulativ. Un exemplu tipic de efect cumulativ ni-l furnizeaz manifestarea culorii pielii la om. Culoarea pielii n cazul omului este determinat de coninutul de melanin, care variaz ntre 0 11% pentru rasa alb, 12 - 25% la mulatrii deschii, 25 - 40% la mulatrii adevrai, 41 - 55% la mulatrii de culoare nchis, 56 - 78% la rasa negroid. Prin cstoria ntre un individ din rasa alb (europoid) i unul din rasa neagr (african), n F1 rezult indivizi de tip mulatru (relativ uniformitate). Prin cstoria nt re mulatri, n F2 se obine o segregare de 1 alb: 4 mulatri deschis: 6 mulatri propriu-zis: 4 mulatri nchis: 1 negru. Pentru a explica acest raport, C.B. Davenport, care a studiat problema (mai ales, n Jamaica i insulele Bermude), a considerat c n apariia culorii pielii sunt implicate dou perechi de gene cu alelele lor - P1p1 i P2p2. Negrii au genotipul P1P1P2P2, iar albii p1p1p2p2. Din cstoria alb x negru, rezult: P1P1P2P2 x p1p1p2p2 F1 P1p1P2p2 Cstoria ntre mulatri induce apariia a mai multe tipuri de indivizi n F2, i anume:

Gameii P1P2

P1P2 P1P1P2P2 Negru

P1p2 P1P1P2p2 Mulatru nchis P1P1p2p2 Mulatru P1p1P2p2 Mulatru P1p1p2p2 Mulatru deschis

p1P2 P1p1P2P2 Mulatru nchis P1p1P2p2 Mulatru p1p1P2P2 Mulatru p1p1P2p2 Mulatru deschis

p1p2 P1p1P2p2 Mulatru P1p1p2p2 Mulatru deschis p1p1P2p2 Mulatru deschis p1p1p2p2 Alb

P1p2

P1P1P2p2 Mulatru nchis

p1P2

P1p1P2P2 Mulatru nchis

p1p2

P1p1P2p2 Mulatru

Tab.12. Fenotipurile i genotipurile aprute prin cstoria ntre mulatri.

Dac se face un back-cross ntre un alb p1p1p2p2 i un mulatru P1p1P2p2, descendenii vor fi: 25% P1p1P2p2; 25% p1p1p2p2 i 50% mulatri, intermediari ntre prini (adic P1p1p2p2 i p1p1P2p2). Retroncruciarea unui negru P1P1P2P2 cu un mulatru P1p1P2p2 induce apariia a 25% negri, 50% mulatri nchii, intermediari ntre cei doi prini i 25% mulatri.

Davenport a conchis c acumularea cantitativ a pigmentului n piele este determinat de efectul cumulat al genelor P1 i P2 i al alelelor. Astfel, negrii au genele n stare homozigot, mulatrii nchii au o gen homozigot i celelalte n stare heterozigot ( P1p1P2P2, P1P1p2P2), mulatrii propriu-zii sunt heterozigoi pentru ambele gene sau homozogoi pentru ambele, dar una n stare dominant i cealalt n stare recesiv (P1p1P2p2; P1P1p2p2; p1p1P2P2), mulatrii deschii au o singur gen dominant n stare heterozigot (P1p1p2p2 sau p1p1p2P2). INTREBRI DE VERIFICARE 1. Definiti termenii: hibridare, fenotip, genotip 2. Enuntati legea puritii gameilor 3. Intocmiti schema monohibridarii 4. Intocmiti schema dihibridarii 5. Care sunt cauzele aparitiei abaterilor de la raporturile de segregare stabilite de Mendel 6. Definii semidominanta si supradominanta 7. Care este determinismul genetic al grupelor de snge la om 8. Cum se defineste fenomenul de poligenie 9. Ce reprezinta epistazia 10. Intocmiti schema unei hibridari intre doua persoane apartinand tipului mulatru propriu-zis

Unitatea de invare 2

2 Structura i functiile suportului material al ereditii, variabilitii i determinismului caracterelor

2.1. CROMOSOMII SEIFUL INFORMAIEI EREDITARE
2.1.1. Materialul genetic al virusurilor, viroizilor si plasmidelor Primele forme de via aprute pe Terra erau, probabil, de tip acelular fiind reprezentate de macromolecule de ARN si apoi de ADN i aveau capacitatea de autoreplicare, autoreglare i autodezvoltare. Apariia primelor gene, alctuitela nceput din ARN i apoi din ADN, a insemnat trecerea de la evoluia chimic la cea biologic. Desigur c primele forme de via cuprindeau in programul lor genetic un numr foarte redus de gene. n care era codificat informaia necesar realizrii structurilor i funciilor caracteristice acestor organisme primitive. Studiul organismelor procariote acelulare actuale, cum sunt virusurile, viroizii i plasmidele a facut posibil cunoaterea mai aprofundat a proceselor care au dus la apariia vieii, deoarece ele sunt extrem de simple ca organizare structural si ca funcii, fiind oarecum similare cu protobionii aprui in negura timpurilor. Materialul genetic al virusurilor este reprezentat de un singur molecul de acid nucleic n care sunt dispuse, in ordine liniar, un numr variabil de gene. Virusurile cu genom ADN, numite si dezoxiribovirusuri, prezint apte tipuri principale de structur i anume:

cu genom ADN mono-catenar. liniar cu genom ADN mono-catenar circular cu genom ADN dublu-catenar liniar repetitiv cu genom ADN dublu-catenar liniar repetitiv terminal cu genom ADN dublu-catenar liniar redundant terminal, permutat circular cu genom ADN dublu-catenar liniar, cu extremiti monocatenare complementare cu genom ADN dublu-catenar circular inchis covalent

Virusurile ARN, care au genomul reprezentat de o macromolecul de ARN, sunt numite ribovirusuri i prezint patru tipuri principale de structuri: cu genom ARN mono-catenar liniar cu genom ARN mono-catenar intens pliat cu genom ARN mono-catenar circular cu genom ARN dublu-catenar divizat Cromosomul viral, constituit din ADN sau ARN, conine toat informaia ereditar necesar pentru formarea particulei virale. Dar, informaia ereditar a virusurilor devine activ numai atunci cnd ADN-ul sau ARN-ul lor se afl in sistemul celulei gazd. Teoretic, acizii nucleici virali, dac nu sunt degradai de nucleaze se pot replica in orice celul n care au ptruns. O form acelular de organizare, mai simpl dect virusurile i de dimensiuni incomparabil mai mici, este reprezentat de viroizi. Denumirea lor le arat inrudirea cu virusurile, ei fiind in esen molecule mici de acid nucleic neprotejat de inveli proteic (de capsid) i nici de inveliul exterior ce conine lipide i proteine, asa cum este cazul la unele virusuri. S-a constatat c viroizii sunt localizai n nucleul celulelor, unde se replic cu ajutorul unei enzime de tipul replicazelor din celula-gazd. La plante s-au identificat secvene de nucleotide din ADN-ul nuclear complementare cu ARN-ul viroizilor, dar se pare c replicaia viroizilor nu se realizeaz prin intermediul ADN. Date experimentale de ultim or arat c n celulele vegetale exist o multitudine de enzime care pot asigura replicarea moleculelor de ARN, folosind ca matri chiar moleculele de ARN ale viroidului. Originea viroizilor nu este prea bine cunoscut. Pornindu-se de la observaia c genele plantelor si animalelor sunt alctuite din regiuni informaionale, denumite exoni si regiuni noninformaionale, denumite introni, care sunt eliminai in procesul de activare a genelor, s-a emis ipoteza c viroizii ar fi introni nedegradai. Caracterul patogen al viroizilor se datoreaz interreaciei lor cu genomul celulei-gazd, probabil prin perturbarea mecanismelor de reglaj genetic al acesteia. Ca urmare, se consider c viroizii sunt la limita inferioar a vieii, fiind sisteme autoreplicative, care posed un program genetic puternic redus. In anul 1952, J. Lederberg, laureat al premiului Nobel, a descoperit plasmidele din celulele bacteriene. Acestea sunt nite minicromosomi de form circular sau linear, alcatuii din ADN bicatenar care se replic independent de cromosomul bacteriei gazd i posed un mic numr de gene. In celula bacterian se gsesc ntre 10 i 200 de copii ale unei anumite plasmide, regula fiind urmtoarea: plasmidele de dimensiuni mici se pot gsi intr-un numr mai mare de copii, iar cele mari intr-un numr mic de copii. Ulterior s-au descoperit plasmide i in celulele eucariote, asociate cu nucleul sau cu organitele celulare (mitocondrii i cloroplaste). Plasmidele sunt mai simple ca organizare dect virusurile, fiind alctuite dintr -o molecul de ADN cu capacitate autoreplicativ. Ele se gsesc la toate speciile de bacterii dar prezena lor nu este obligatorie. Pn n prezent au fost identificate peste 1000 de tipuri , dintre care 269 numai la bacteria Escherichia coli. De regul, ADN-ul plasmidial reprezint 1-3% din cantitatea total de material genetic vbacterian. Plasmidele au un rol foarte important n celula bacterian. Unele dintre ele sunt capabile s determine conjugarea bacteriilor. Astfel plasmidul denumit factor de fertilitate (F), se poate gsi n celula bacterian sub form liber i atunci celula este notat F+, sau poate fi integrat n cromosomul bacterian, celula respectiv fiind notat Hfr (high frequency of recombination), sau poate fi absent, situaie n care celula se noteaz F- . Bacteriile de tip Hfr sunt capabile s realizeze recombinarea genetic, adic transferul unui segment cromosomial de la celula mascul (F+) la

cea femel (F-), cu o mare frecven. Exist i plasmide F care au inclus un segment din cromosomul bacterian, fapt pentru care acest tip de factor de fertilitate este considerat recombinat genetic. Plasmida F este reprezentat de o macromolecul de ADN alcatuit din cca. 100.000 perechi de nucleotide. Un alt tip de plasmide bacteriene este constituit de plasmidele pentru rezisten (R). Ele sunt alctuite dintr-o macromolecul circular de ADN, pe care se gsesc gene ce determin rezistena la compuii toxici ai unor metale grele (mercurul, cadmiul, bismutul, antimoniul etc.), rezistena la unele insecticide i la unele produse petroliere etc. Plasmidele R pot trece de la o bacterie la alta, cu ajutorul virusurilor bacteriene, printr-un fenomen denumit transducie. Plasmidele F si R fac parte din grupa plasmidelor conjugative: favorizeaz transferul de material genetic, posednd capacitatea de a induce n celulele bacteriene formarea de structuri necesare conjugrii (pili de sex). Plasmidele Col (factorii colicinogenici) sunt un alt tip de plasmide, care posed gene ce determin sinteza unei clase de proteine ce se numesc colinice sau bacteriocine. Acestea, secretate n mediu, au aciune bactericid asupra altor bacterii, care sunt lipsite de astfel de plasmide. Astfel, bacteria Escherichia coli produce colicine, Bacillus subtilis produce subtilizine, Pseudomonas aeruginosa produce pyocine. Fiecare tip de bacteriocin este codificat intr-un anumit segment de ADN din plasmidul respectiv. Plasmidele sunt cromosomi in miniatur, alctuii din ADN dublu-catenar, circular nchis. Circularitatea este o condiie esenial pentru supravieuirea plasmidei in celula gazd deoarece altfel ADN-ul plasmidial ar fi cu usurin atacat de nucleaze. Plasmidele au cteva proprieti distincte: - dimensiunea mic a moleculei: reprezinta 1-2% din mrimea cromosomului bacterian; - secvena de baze azotate difer de cea a ADN-ului cromosomului bacterian; - prezint proprieti structurale aparte; - reprezint informaie ereditar accesorie, fr importan vital pentru bacterie; bacteriile pot s piard plasmidele; - reprezint repliconi - structuri capabile de replicare independent dar, in general, corelat i controlat de cromosomul bacterian. ADN-ul plasmidial poate exista sub mai multe forme: a. covalent nchis, circular i superrsucit. Aceast stare faciliteaz izolarea plasmidelor prin centrifugare in gradient de densitate; b. circular deschis; c. ADN multimer. In ultima vreme au fost identificate plasmide i n celulele eucariotelor, unele asociate cu nucleul i altele cu mitocondriile i cloroplastele. Plasmidele din celula eucariot, asociate cu nucleul sau mitocondriile i cloroplastele, sunt componente normale ale genomului celular i sunt foarte variate ca structur i greutate molecular. Ele contribuie la mrirea variabilitaii genotipice i flexibilitii acestor sisteme genetice. Se sper c va fi posibil utilizarea lor ca vectori n programele de ameliorare a plantelor, prin transfer de gene. 2.1.2. Structura cromosomului bacterian Celula bacterian, spre deosebire de celulele organismelor eucariote, nu are un nucleu adevrat ci un nucleu cu o organizare primitiv, fiind lipsit de membran i inclus direct in citoplasm, n partea central a celulei. Genomul bacterian este alctuit din dou categorii de gene: gene eseniale eucromosomale, localizate n cromosomul bacterian si gene accesorii, prezente in plasmide, elemente genetice transpozabile (SI si TN) si n unii fagi (Campbell, 1981) Cromosomul bacterian are form circular i este alctuit dintr-o singur molecula de ADN bicatenar, cu o lungime de 1400 m i un diametru de 2,5 nanometri (nm), corespunznd diametrului moleculei de ADN dublu catenar, o lungime de cca. 1360 m si o mas molecular de cca. 2,5 0,3x109 Daltoni A.Worcel i E.Burgi, n 1972 i Pettijohn in 1974, au reuit s studieze structura cromosomului la Escherichia coli. S-a demonstrat c el const din 40-50 bucle care i pstreaz structura cu ajutorul ARN. Fiecare bucl este bogat n ARN i poate funciona relativ independent

de altele. Cele 40-50 de bucle mari au superrsuciri secundare alctuite din cca. 400 perechi de nucleotide. Meninerea acestor bucle de mrimi diferite, se pare c se face nu numai cu ajutorul ARN, ci i cu ajutorul unor proteine i enzime de tipul endonucleazelor. Aceste enzime sunt capabile s determine rupturi n una dintre catenele ADN-ului, fapt care impiedic (blocheaz) dersucirea buclelor superrsucite. In acest fel structura cromosomial este stabil, iar cromosomul bacterian si pstreaz continuitatea. Enzimele de tipul ribonucleazelor pot hidroliza unele molecule de ARN, fapt care duce la ruperea legturilor dintre dou bucle succesive. Una dintre enzimele care joac un rol esenial n replicarea ADN bacterian i este responsabil de suprarsucirea sa, este aa-numita ADN-giraza. Dac ntr-o cultur de E. coli se adaug, n mediu, coumeromicina, un antibiotic cu rol de inhibitor al funciei ADN-girazei, cromosomul celulei respective i va pierde constituia superhelical. n mod normal, bacteriile aflate n faza de repaus, n culturi staionare i vechi, au un singur cromosom, fiind uninucleate. n faza de cretere activ, n culturi tinere meninute pe medii optime, ele apar ca multinucleate, avnd 2-4 cromosomi, care sunt ns identici, deoarece provin prin replicare dintr-un singur cromosom parental. Deci, cromosomul bacterian poart n structura sa toat informaia ereditar necesar pentru existena unei celule, adic poart toate genele (genomul) necesare pentru desfurarea metabolismului i pentru reglarea activitii celulare. Cromosomul bacterian determin i arhitectura celulei care-l conine, ereditatea i capacitatea ei de evoluie. n prezent nu se cunoaste exact mecanismul molecular prin care cromosomul bacterian, mai lung de 100-400 de ori dect lungimea celulei bacteriene, este mpachetat ntr -un volum att de mic, cum este cel al nucleoidului n care se afl. Dac mpachetarea s-ar face la ntmplare, s-ar produce inevitabil ncurcarea moleculei de ADN, o parte din informaia ereditar ar fi prins n zonele mai ascunse i ar deveni inaccesibil pentru transcripie. Fong (1967) a propus un mecanism de mpachetare prin suprarsucire. Ulterior, Pettijhon i Hecht (1974) au elaborat un model de mpachetare a ADN cromosomial, bazat pe un proces dublu de pliere i formare de superelice, n care structura condensat a ADN ar fi meninut prin aciunea asociat a ARN i a proteinelor din nucleoid.

2.1.3. Cromosomii la eucariote 2.1.3.1. Morfologia cromosomilor eucariotelor Morfologia cromosomilor este variabil, att n funcie de faza din ciclul diviziunii celulare, ct i n funcie de specia la care aparin indivizii (plante sau animale) analizai. Cromosomii reprezint un caracter de diagnoz, de delimitare a speciei asemenea oricrui alt caracter de natur morfo-anatomic, fiziologo-biochimic, fenologic sau reproductiv. n acest sens, trebuie precizat c cromosomii fiecrei specii eucariote, de plante sau de animale, au particulariti morfologice i numerice caracteristice speciei. nc o precizare, extrem de important, este aceea n conformitate cu care cromosomii eucariotelor sunt cu totul altfel structurai n comparaie cu cei ai procariotelor. Centromerul nu se coloreaz cu colorani bazici. Poziia acestuia n cromosom este variabil, mprind cromosomul n dou brae. n funcie de lungimea real a braelor i, apoi, a raportului dintre ele, se stabilete tipul cromosomului. Dac centromerul este situat exact n centrul cromosomului, delimitnd dou brae perfect egale (raportul dintre brae - r - fiind 1), cromosomul este metacentric (prescurtat se noteaz cu M). Cnd centromerul mparte cromosomul n dou brae inegale, cu r avnd valori cuprinse ntre 1 i 1,7 , cromosomul este median (m), iar cnd r are valori cuprinse ntre 1,7 i 3, cromosomul este submedian (sm). Cnd raportul braelor este cuprins ntre 3 i 7 cromosomul este subtelocentric (st), iar cnd raportul este mai mare dect 7 (r > 7) cromosomul este telocentric ( T) (Fig.3). n ceea ce privete poziia terminal a centromerului (adic n ceea ce privete posibilitatea existenei cromosomilor telocentrici) prerile sunt contradictorii. Unii autori afirm c centromerul nu se poate gsi niciodat n poziie terminal, n timp ce ali autori admit aceast posibilitate.

Pe lng constricia primar, determinant a poziiei centromerului, cromosomii au i constricii secundare, cu rol n formarea nucleolului, fapt pentru care au primit i denumirea de organizatori nucleolari. Uneori, cromosomii au la unul din capete o constricie secundar prin care se delimiteaz un segment numit satelit (trabant). Asemenea cromosomi se ntlnesc la speciile Secale cereale (2n=14 - cromosomii perechii a VII-a), i Zea mays (cromosomii perechii a VI-a). Numrul nucleolilor dintr-un nucleu este egal cu numrul cromosomilor cu satelit. Cele dou specii menionate mai sus au, deci, cte doi nucleoli n nucleu. Centromerul are rolul de a fixa cromosomul pe fibra fusului acromatic, n timpul diviziunii celulare. Prin diviziunea sa, care precede diviziunea cromosomului i separarea cromatidelor, n mitoz sau n cea de-a doua diviziune meiotic, se asigur partiia cromosomului n cele dou cromatide surori. n cazurile n care, din diverse motive, cromosomul se rupe, fragmentele fr centromer (numite acentrice) nu se pot reface i se resorb.

Fig. 4. Tipurile de cromosomi. 1 - cromosom M (metacentric); 2 - cromosom m (median); 3 - cromosom sm (submedian); 4 - cromosom st (subterminal = subtelocentric); 5 - cromosom T (telocentric). Prin culoarea gri a coloanei se red zona n care se poate gsi centromerul. Desigur, braul de sus se scurteaz cu poriunea cu care se alungete cel de jos, n aa fel nct raportul dintre ele s se situeze ntre limitele precizate anterior (dup Bra, 1999)

Un fragment acentric se pstreaz doar atunci cnd se ataeaz de un cromosom cu Luzula) n care unii cromosomi, extrem de scuri, ndeplinesc funcii centromerice n totalitate sau pe mare parte din lungimea lor. De fapt aceti cromosomi au centromerul difuz i poart denumirea de cromosomi policentrici. Ei sunt api, ns, de a se fixa pe toat lungimea lor de fibrele fusului acromatic. La capetele cromosomilor exist o zon (o poriune) care le mpiedic unirea. Respectiva poriune poart numele de telomer (telomere). Dincolo de rolul de a mpiedica unirea cromosomilor prin capetele lor, telomerele au i un rol, din ce n ce mai bine definit, n determinismul longevitii organismelor. Fiind zone heterocromatice ale cromosomilor, telomerele au acidul dezoxiribonucleic super condensat (super rsucit). S-a constatat c, la diverse specii, lungimea telomerelor este foarte diferit i c numrul de diviziuni succesive ale unei celule este n relaie de direct proporionalitate cu lungimea telomerelor. Cnd, n succesiunea de diviziuni, telomerul dispare, cromosomul se autolizeaz iar celulele se distrug. Schematic (Fig.4), deci, un cromosom apare astfel: telomer, satelit, constricie secundar, bra scurt, centromer (constricie primar), bra lung, telomer (vezi schema anterioar). Fiecare bra este alctuit din dou cromatide, fiecare cromatid coninnd dou cromoneme. Regiunea cromosomial din vecintatea centromerului poart numele de regiune proximal, iar cea de la capetele braelor poart numele de regiune distal. Aa cum am precizat anterior, cromomerele sunt, de fapt, nite artefacte. n ultimul timp (detaliile vor fi date n paginile urmtoare) este contestat i realitatea cromonemei. Precizam anterior c tipul cromosomilor reprezint un caracter de diagnoz, o caracteristic a speciei. Fr a contrazice aceast afirmaie, se cuvine precizat c tipul (forma) cromosomilor poate varia ntre anumite limite, n funcie de specializarea i starea fiziologic a

celulei. Uneori, n cadrul aceluiai individ, se constat i o variabilitate numeric a cromosomilor, tot n corelaie cu structura i funciile anumitor esuturi. De regul, cel mai propice stadiu pentru investigarea numrului i tipului cromosomilor l reprezint metafaza diviziunii mitotice. Puternic spiralizai, ataai de fibrele fusului n zona ecuatorial, n aceast faz cromosomii etaleaz conformaia lor specific, form caracteristic speciei creia i aparine individul (pot avea form de bastona sau forma literelor V, J ,I ,O etc.)

Fig. 5. Reprezentarea schematic a morfologiei i organizriii cromosomului la eucariote (prelucrare dup Tudose, 1992)

2.1..3.2. Mrimea cromosomilor eucariotelor Este o caracteristic de specie, dei poate varia destul de mult n cadrul unei populaii, n cadrul unui individ i chiar n aceeai celul, n funcie de faza de diviziune n care se afl aceasta din urm. Lungimea cromosomilor variaz i n funcie de biotopul pe care-l ocup o populaie n cadrul arealului speciei, fiind influenat de temperatur, anumite substane chimice etc.. n general, mrimea cromosomilor variaz ntre 1 i 50 microni pentru lungime i ntre 0,1 i 2 microni pentru diametru. n principiu se admite c lungimea cromosomilor este direct proporional cu numrul de gene pe care le conin. Realitatea este, ns, mult mai complicat. 2.1.3.3. Numrul cromosomilor la eucariote Este un alt caracter de diagnoz, dei cunoate i el o amplitudine de variabilitate suficient de larg. n lumea vie numrul de cromosomi variaz ntre 2, la Ascaris megalocephala i cteva sute, la Amoeba proteus. Pentru caracterizarea unei specii, sub aspectul numrului de cromosomi, se folosesc simbolurile: x, n, 2n i NF.

- 2n reprezint numrul de cromosomi din celulele somatice ale indivizilor oricrei specii eucariote; - prin n se desemneaz numrul haploid de cromosomi, caracteristic celulelor gametice (sexuale) ale indivizilor speciilor eucariote; De regul, n cadrul unui gen, totalitatea speciilor provine dintr-o specie ancestral, prin evoluie divergent. Procesul a implicat, printre altele i modificarea numrului de cromosomi, prin autopoliploidizare, pseudopoliploidizare, aneuploidizare, amfipoliploidizare etc.. Numrul cromosomial de la care s-a plecat, n cazul unei serii poliploide de pild, reprezint numrul cromosomial de baz, notat cu x. La diploidul de origine, numrul de baz coincide cu numrul haploid (x = n). Evident, x rmne acelai pentru triploid, tetraploid etc., n modificndu-se n concordan cu 2n. Spre exemplu, n genul Papaver, secia Oxytona exist speciile Papaver bracteatum (2n = 14, n = 7, x = 7), Papaver orientale (2n = 28, n = 14, x = 7) i Papaver pseodoorientale (2n = 42, n = 21, x = 7). Este clar c n variaz n funcie de 2n, n timp ce x (numrul fundamental de cromosomi) rmne acelai, cele trei specii fiind 2x, 4x i 6x. Alteori, o serie poliploid nu provine printr-o poliploidizare real, ci prin pseudopoliploidie. De exemplu, dac o specie are 2n = 8 cromosomi metacentrici, mediani, submediani sau subterminali, prin fisionarea cromosomilor dintr-o pereche, dou, trei sau toate perechile, vor rezulta 2n = 10, 2n = 12, 2n = 14, sau 2n = 16 cromosomi. Dac, ns, se va determina cantitatea de ADN per nucleu, se va constata c rmne constant, la toate aceste numere de cromosomi. Pe de alt parte, dac se vor numra braele cromosomiale, din cariotipurile efectuate pe baza numerelor menionate, se va constata c cifra este aceeai 16. Prin urmare NF (numrul fundamental de brae) a rmas constant, sugernd c speciile din respectiva serie nu sunt aneuploizi sau poliploizi adevrai ci pseudoaneuploizi sau pseudopoliploizi. 2.1.3.4. Structura intern a cromosomilor la eucariote Realizri remarcabile n descifrarea infrastructurii cromosomilor se datoresc cercetrilor efectuate de Hewish & Brugoyne (1973) care au constatat c prin tratarea cromatinei cu endonucleaze activate cu Ca++ i prin supunerea produselor rezultate la electroforez, se obineau repetiii de fragmente de ADN de aproximativ 200 pb (perechi de baze), repetiii ce s-au dovedit a fi un constituient permanent i ubiquitar al cromosomilor, cunoscut sub numele de nucleosom. Pe de alt parte, prin microscopie electronic s-au identificat bobie elipsoidale de aproximativ 11 nm n diametru i 6 nm n nlime, legate ntre ele prin fire subiri de acid dezoxiribonucleic. Aceste bobie nu sunt altceva dect nucleosomii. Pe de alt parte, digestia cromatinei cu nucleaze a evideniat existena unor formaiuni de aproximativ 146 pb care nu sunt disociate prin digestie. Mai mult dect att, uneori, un set de asemenea formaiuni rmne intact. Conform datelor de microscopie electronic, aceste seturi sunt asociaii de nucleosomi. Nucleosomul este considerat, deocamdat, structura de baz a cromosomului. Analizele cu raze X au dovedit c nucleosomii sunt legai ntre ei prin ADN neasociat cu histone (n unele manuale de specialitate sunt i alt tip de afirmaii), fiind sub forma unei fibrile de cca 10 nm grosime. Aceast fibril se continu de la un capt la altul al cromosomului, pliat (mpachetat) foarte compact. Cromosomii sunt, deci, cromatin suprastructurat. Cromatina este numele conferit substanei totale din care sunt alctuii cromosomii. n ciclul mitotic sau meiotic, cromatina se coloreaz rapid i este uor vizualizat. n interfaz este vizibil doar heterocromatina, partea vizibil n timpul diviziunii primind numele de eucromatin (ambele noiuni vor fi analizate, pe larg, ulterior). Regiunile heterocromatice ale cromosomilor sunt considerate ca fiind heteropicnotice (n limba greac pycnosis =dens). Intensitatea colorrii lor poate varia de la o etap a ciclului celular la alta. Fiecare cromosom dintr-o celul eucariot, conine o macromolecul lung de ADN, care se ntinde de la un capt al cromosomului la cellalt, prin centromer. Aceast macromolecul gigantic este supermpachetat, n cromosom, n numai civa microni. La om de exemplu, cel

mai mare cromosom conine o macromolecul de ADN de aproximativ 85 mm (85.000 m sau 8,5 x 107 nm). Aceast macromolecul gigantic este mpachetat ntr-un spaiu care atinge, n metafaz, 0,5 m n diametru i 10 m n lungime, adic o mpachetare de aproxomativ 104 ori. Nucleosomii reprezint peste 95% din greutatea cromatinei i sunt considerai a fi unitile structurale de baz ale cromatinei. Structura lor poate fi redat schematic (Fig.5). n celulele eucariotelor cu organizare superioar, nucleosomii conin aproximativ 195 - 200 pb de ADN, un octamer histonic alctuit din cte dou molecule de H2A, H2B, H3 i H4 i o molecul de H1. Acesta nu este ns un nucleosom complet deoarece n figur nu este precizat i un fragment de 27 pb, fragment care nu este direct asociat cu octamerul histonic. Acest fragment conecteaz, ntre ei, doi nucleosomi consecutivi. n majoritatea cazurilor ns, octamerul histonic are n jurul lui aproximativ 1,7 ture de ADN (adic 146 pb). Octamerul histonic mpreun cu cele 146 perechi de nucleotide alctuiesc miezul, smburele, particula central a nucleosomului, cunoscut sub numele de nucleosomal sau histone core particle (Richmond et al., 1984). Acesta este modelul nucleosomal propus pe baza determinrilor efectuate n soluie cu dispersie de neutroni, dar i pe baza analizelor efectuate prin difracia razelor X (Bradbury & Baldwin, 1966; Klug et al., 1985; Burlingame et al,1985). (Fig.7). Rezumnd, putem preciza c exist trei etape n structurarea unui nucleosom i anume: 1. inima nucleosomului, alctuit din 146 pb i octamerul histonic (cte 2 molecule de H2A, H2B, H3 i H4); 2. inima plus nc 22 pb, dnd un total de 168 pb, plus histona H1, alctuiete cromatosomul; 3. cromatosomul plus nc aproximativ 32 pb (ajungndu-se la un total de aproximativ 200 pb.), formeaz nucleosomul.

Fig.6 Diagrama unui nucleosom n jurul cruia se nfoar ADN pe aproximativ dou ture ( model propus de Brandbury, 1992)

Fig.7 Modelul structurii miezului octameric, cu aranjarea probabil a histonelor. a - ADN-ul reacioneaz cu tetramerii H3, H4 i formeaz smburele discului nucleosomal, b - discul cu histonele H2A i H2B, asociate n exteriorul discului nucleosomal (dup Wagner, Maguire & Stallings, 1993)

Fig.8. Diagrama solenoidului. Sunt 6 nucleosomi per tur. Nucleosomii au o nlime de 5,7 nm i un diametru de 11 nm. ADN-ul se continu de la un nucleosom la altul (linia ntrerupt) (dup Widom & Klug, 1985)

Nucleosomii mpreun cu acidul dezoxiribonucleic linker alctuiesc o fibr cromatic de 11 nm grosime care se spiralizeaz, la rndul ei, dnd un solenoid de 30 nm grosime. Cercetrile nu au dat nc un rspuns clar i definitiv relativ la structurarea solenoidului de 30 nm grosime (Fig.8). ADN-ul din componena solenoidului este, la rndul lui, constituit din dou pri - o parte ataat la miezul histonic i o alt parte cu rol spaiator (ali autori consider, dimpotriv, c are rol de linker), care asambleaz nucleosomii n solenoid. Aa cum precizam mai sus, segmentele spaiatoare (sau linkeri) sunt de lungimi variabile. Structurarea ulterioar a cromatinei (organizarea solenoidului), pentru a forma cromosomii vizibili n metafaz (sau regiunile cromosomiale heteropicnotice vizibile i n interfaz) (Fig.8), este suficient de bine cunoscut i explicat. Prerile, ca i argumentele, celor mai muli cercettori converg ctre concluzia n conformitate cu care fibra cromatic de 30 nm grosime se pliaz i formeaz bucle (lauri), asigurnd astrfel structurarea cromosomilor. Prin urmare, ntrebarea care se pune este urmtoarea: cum se ajunge de la o lungime de 3,7 x 104 m la una de 23 m? Cele mai multe imagini, obinute la microscopul electronic cu scanare, relev situaia compactrii fibrei de ADN. Se observ plieri i contorsionri ale fibrei de cromatin, care explic acceptabil scurtarea cromosomilor. Cromosomii metafazici reprezint condensarea cromatic maxim (observat la cromosomii eucariotelor). Rolul acestor formaiuni este acela de a organiza i mpacheta macromolecula gigantic de ADN, permind segregarea ctre nuclei celulelor fiice. 2.1.3.5. Eucromatina i heterocromatina Examinnd cu atenie cromosomii, pe lungimea lor, constatm c nu sunt uniformi sub aspectele chimice, fizice i genetice. n primul rnd, difer reacia lor la tratamentul cu colorani bazici, n sensul c unele segmente se coloreaz slab, cunoscute fiind sub numele de eucromatice, iar altele se coloreaz mult mai intens i au fost desemnate cu numele de heterocromatice. Interesant i important de consemnat este faptul c zonele heterocromatice nu conin gene n stare funcional, fiind considerate genetic inerte. Eucromatina reprezint materialul normal, izopicnotic, deintorul informaiei genetice, cu comportament tipic n cazul diviziunii celulare (se spiralizeaz, se condenseaz, se decondenseaz i se coloreaz). La rndul ei, eucromatina este de dou tipuri: eucromatina activ i eucromatina permisiv. Eucromatina activ conine genele ce vor fi transcrise n ARNm. Eucromatina permisiv este reprezentat de acea poriune din eucromatin care devine activ doar dup ce accept (permite) semnale declanatoare (din categoria hormonilor, enzimelor etc.). Procesul autoreplicrii semiconservative a ADN-ului, n faza S din ciclul diviziunii celulare, ncepe la nivelul eucromatinei. n consecin, replicarea eucromatinei este mult mai timpurie, n comparaie cu cea a heterocromatinei. Heterocromatina reprezint materialul unor regiuni (uneori al unor ntregi cromosomi) heteropicnotice, caracterizate prin structur dens i compact, inclusiv n telofaz, interfaz i profaza timpurie. Din aceste cauze, heterocromatina se coloreaz intens i este vizibil i n interfaza ciclului celular (n nucleii celulelor n interfaz). Zonele heterocromatice sunt rspndite pe ntreaga lungime a cromosomului, dar mai ales n jurul centromerului, unde formeaz heterocromatina centromeric. Destul de frecvent este localizat i n apropierea organizatorilor nucleolari i spre capetele cromosomilor. Cu aceast ocazie se poate meniona faptul c n aceste zone cromosomiale (heterocromatice) au loc cele mai frecvente ruperi ale cromosomilor. Heterocromatina este componenta preferenial a cromosomilor sexuali i a celor suplimentari (cromosomii B). Sunt unele specii (broatele estoase, unii viermi) la care ntregul set cromosomial este heterocromatic. Replicarea ADN-ului, n zonele eucromatice i heterocromatice, se desfoar asincron. n ceea ce privete heterocromatina, ns, apar i unele aspecte deosebit de interesante. De pild, n stadiile timpurii de dezvoltare embrionar, heterocromatina lipsete. Deci, ca o concluzie fireasc, se poate accepta c ea nu se transmite de la o generaie la alta, ci se formeaz ntr-un anumit stadiu al ontogeniei. Dup ultimele observaii i experimente, se pare c orice

regiune a cromosomului poate deveni, la un moment dat, heterocromatic. n consecin, heterocromatina i eucromatina trebuiesc privite nu ca uniti distincte i discontinue ale cromosomilor, ci stri ale cromatinei, dinamice att n timp ct i n spaiu. O alt clasificare a tipurilor de heterocromatin a fost propus de Brown, n 1965. n conformitate cu aceast clasificare, heterocromatina poate fi constitutiv i facultativ. Heterocromatina constitutiv este identificat n cromosomul Y de la Drosophila melanogaster sau de la alte specii i are ca trstur definitorie faptul c se constituie nc de la nceputul vieii individului i rmne n aceast stare (genetic inactiv) pe tot parcursul dezvoltrii individuale. Heterocromatina constitutiv poate fi prezent i n ali cromosomi, fiind localizat (de obicei) de ambele pri ale centromerului. Heterocromatina facultativ este considerat cea din unul dintre cei doi cromosomi X, de la femelele de mamifere de pild, care devine genetic inactiv i se evideniaz n nucleul interfazic sub forma unui corpuscul intens colorat, cunoscut sub numele de cromatin sexual sau corpuscul Bar, bastonaul de tob (drum-stick) etc. n acest context, unul dintre cromosomii X devine nefuncional, asigurndu-se astfel egalitatea ntre cele dou sexe. Fenomenul este cunoscut sub numele de compensaie de doz. Important este faptul c heterocromatina facultativ are capaciti reversibile, astfel nct, n momentul n care cromosomul X inactivat de la femel ajunge s fie unicul cromosom X de la mascul, el devine funcional. Dar el devine activ i n ovulul n care, din ntmplare, nimerete. Apoi, dac prin fecundarea respectivului ovul se ajunge din nou la un zigot femel, iniial, acesta va avea ambii cromosomi X funcionali. n stadiul de blastocist, unul dintre ei devine nefuncional - capt statutul de cromatin sexual pentru ntreg ciclul ontogenetic. Iniial se considera c zonele heterocromatice nu conin gene funcionale. Dar, prin studii efectuate pe tomate, n 1961, s-a demonstrat c n heterocromatin exist gene funcionale - n heterocromatina centromeric. Heterocromatina poate aprea supercondensat, n unele regiuni cromosomiale, cum este cazul la Zea mays. Aici apar un fel de noduli, denumii knobi, n care activitatea genic este complet blocat. Numrul i topografia knobilor sunt constante pentru anumii cromosomi. Deocamdat nu se cunoate rolul concret al knobilor i nici dac au sau nu gene cantonate pe ei. Sunt doar, presupuneri cu privire la rolul lor n procesele de gametogenez. 2.1.3.6. Categorii de cromosomi a. Cromosomii principali. Sunt cromosomii cu cea mai larg rspndire, altfel spus, cromosomii a cror prezen este considerat normal pentru celulele somatice i pentru cele sexuale normale i sunt grupai n dou clase: cromosomii A i cromosomii B. I. Cromosomii A sunt cromosomii tipici, normali ai complementului cromosomial ce definete o specie. Ei se comport constant (de obicei) att sub aspect tipologic (M, m, sm, st i T), ct i sub aspect numeric. II. Cromosomii B, supranumii i cromosomi accesorii sau suplimentari, sunt cromosomii aflai n exces, putnd fi n numr variabil, att la plante, ct i la animale. Un exemplu tipic de plant cu cromosomi B este Zea mays. Numrul cromosomilor B este extrem de variabil, nu numai de la individ la individ, ci i n tre esuturile aceluiai individ. Cromosomii B nu manifest fenomenul de omologie, nici ntre ei i nici cu cromosomii A. Sunt, de obicei, heterocromatici, mici i ineri din punct de vedere informaional. n diviziunea celular, distribuia lor nu este egal ctre celulele fiice.Nu li se cunoate originea, ci se presupune doar c au aprut din regiunile centrale ale unor cromosomi A, prin pierderea de ctre acetia a extremitilor (extremiti ce s-au putut ataa la ali cromosomi A, modificndu-le constituia i, deci, coninutul informaional). n context, trebuie menionat c nu li se cunoate nici rolul, deoarece lipsa lor (parial sau total) nu perturb existena individului purttor. Dimpotriv, uneori, prezena lor este duntoare. b. Cromosomii secundari, adic acei cromosomi care coexist cu cromosomii A i B, numai n anumite celule.

n aceast categorie intr cromosomii uriai sau politenici din glandele salivare de la Drosophila melanogaster, Chironomidae i alte insecte, cromosomii lampbrush (perie de sticl de lamp) prezeni n oocitele vertebratelor, n profaza meiozei etc. 1. Politenicii sau cromosomii uriai au fost descoperii de ctre E. Balbiani (citolog italian), n 1881, n glandele salivare de Chironomus. Ca dimensiune, ei depesc de 100-200 ori lungimea cromosomilor normali, coninnd de peste 1000 de ori mai multe cromoneme. Cromosomii politenici au fost depistai i n unele celule somatice ale larvelor de diptere - cum ar fi tubul digestiv, tubulii lui Malpighi etc., fiind prezeni chiar i la unele plante (n sinergide) i la alte specii de nevertebrate. Evident, din considerente didactice, cromosomii politenici tipici sunt exemplificai prin cei din glandele salivare de Drosophilla melanogaster. Cauza apariiei acestor cromosomi este relativ simpl - celula n care ei se gsesc, nu se divide, ci doar i mrete dimensiunile. Nucleul respectivelor celule se gsete ntr -o perpetu stare de interfaz (pe ntreaga durat a stadiului larvar). Pe de alt parte, fenomenul are i o alt cauz. Cromosomii perechi se apropie i se unesc. Este fenomenul cunoscut sub numele de conjugare somatic. Concomitent cu creterea larvei, fiecare cromosom se mrete, prin replicarea cromatidelor i, implicit, a cromonemelor, fr migrarea lor la polii celulari. n final, fiecare cromosom ia aspectul unui fascicul de filamente (filamentele reprezentnd cromonemele), de unde i numele lor de politenici. n esen, avem un fenomen tipic de endomitoz - adic reduplicarea cromosomilor fr separarea i migrarea lor. Cromosomii uriai de la Drosophila melanogaster formeaz o figur tipic, fiind constituii din cinci brae lungi i unul mai scurt. La punctul de ntretiere formeaz cromocentrul. Unul dintre braele lungi se noteaz cu X i reprezint cromosomii X, altele dou sunt notate cu 2S i 2D, celelalte cu 3S i 3D, iar braul scurt cu 4. 2. Cromosomii lampbrush sunt tot cromosomi uriai. Forma lor se datoreaz conjugrii cromosomilor omologi ntr-un singur complex. n plus, cromosomii sunt puternic despiralizai i formeaz bucle simetrice cu orientare perpendicular pe axul complexului. Cromosomii de tip lampbrush sunt prezeni n oocitele amfibienilor, molutelor, echimodermelor, petilor, reptilelor, la unele mamifere i chiar la ceap. O asemenea conformaie se gsete i la cromosomul Y de la Drosophila melanogaster. La unele specii, aceti cromosomi ating lungimea de peste 1000, fiind considerai cei mai lungi cromosomi. Diametrul lor ns este foarte mic, uneori fiind att de subiri nct se situeaz la limita de rezoluie a microscopului optic. 2.1.3.7. Cariotipul i idiograma Cnd am prezentat categoriile de cromosomi, am precizat c se are n vedere existena unei categorii de cromosomi principali, grupai n clasa A, reprezentnd cromosomii cu cea mai frecvent i normal prezen n celulele somatice i sexuale ale tuturor speciilor. Detaliind, precizm c la speciile care posed un determinism cromosomial al sexelor, cromosomii pot fi sbmprii n dou grupe - autosomi i heterosomi (sau alosomi, gonosomi, cromosomi ai sexului etc.). Evident, majoritatea membrilor complementului cromosomial sunt autosomi. De obicei exist doi heterosomi, excepie fcnd speciile al cror determinism cromosomial al sexelor este asigurat de heterosomi multipli i cele cu determinism sexual numeri c cromosomial. Cariotipul, n concordan cu raportul Conferinei Internaionale de la Denver (din 1960), ntrunit pentru standardizarea cromosomilor umani, poate fi definit astfel: ordonarea perechilor de cromosomi omologi, provenind dintr-o singur metafaz mitotic, n ordinea descrescnd a lungimii lor, cu centromerul plasat pe o linie imaginar (Fig.9, 10). Idiograma reprezint redarea grafic a lungimilor medii ale cromosomilor fiecrei perechi de omologi, obinute pe baza a cel puin 10 metafaze, din celule diferite provenite de

la indivizi diferii (Fig.11). Se nelege c idiograma este mult mai reprezentativ pentru caracterizarea cromosomologic a unei specii. n stabilirea corect a perechilor de cromosomi omologi, constriciile secundare pot j uca un rol definitoriu. De obicei, constriciile secundare nu afecteaz aceleai regiuni la diverii cromosomi. n plus, s-a constatat c aceste constricii secundare sunt mult mai uor observabile dac se administreaz cromosomilor unele tratamente speciale (cu ageni chimici, fizici sau biologici, cum ar fi: hidrazida maleic, 5-bromdezoxiuridina, virusul SV40sau al herpesului, dac se cultiv celulele pe mediu fr calciu, dac se asigur temperaturi sczute etc.). Mai recent s-au elaborat i alte metode de identificare exact a cromosomilor. Una dintre acestea este cea a bandrii. Prin bandare, fiecare regiune a unui anumit cromosom etaleaz un model caracteristic de benzi transversale, ceea ce permite identificarea cu mare siguran a cromosomilor, facilitnd observarea i cuantificarea diferitelor aberaii structurale sau numerice. O alt tehnic, extrem de modern, presupune determinarea coninutului de ADN n lungul unui cromosom. n acest sens, se recurge la microspectrofotometrie.

Fig. 9. Metafaz la Salmo gairdneri Rich (dup Minciu i Bra, 1986)

Fig.10. Cariotipul speciei Salmo gairdneri Rich., efectuat pe baza metafazei anterioare (dup Minciu i Bra, 1986)

Fig.11. Idiograma speciei Salmo gairdneri Rich (dup Minciu i Bra, 1986)

INTREBARI DE VERIFICARE 1. Definii cromosomul 2. Precizarea caracteristicilor materialului genetic al virusurilor si viroizilor 3. Caracterizarea cromosomului bacterian si a modului sau de impachetare 4. Cromosomul la eucariote structura 5. Nucleosomul 6. Tipuri de cromosomi 7. Cariotipul si idiograma

TEME PENTRU EXAMINAREA FINALA 1. Intelegerea notiunii de cromosom 2. Prezentarea diferentelor in privinta materialului genetic intre procariote si eucariote 3. Aprofundarea aspectelor legate de structura, ultrastructura si functiile cromosomilor la eucariote 4. Nucleosomii, eucromatina si heterocromatina 5. Tipuri de cromosomi, cariotipul si idiograma

Unitatea de invatare 3

3. Teoria cromosomiala a ereditatii (morganismul) Profesor la Universitatea Columbia, din New York, Thomas Hunt Morgan (1866-1945) a sintetizat ntr-o teorie unitar multitudinea cercetrilor din domeniul geneticii, elabornd ceea ce a rmas n tiin sub denumirea de "TEORIA CROMOSOMIAL A EREDITII". Morgan a fost primul care a introdus Drosophila melanogaster ca model experimental n genetic, fapt ce s-a dovedit a fi o alegere deosebit de inspirat. Ea crete uor n condiii de laborator, pe medii ieftine, n recipiente de mici dimensiuni, iar timpul necesar pentru o nou generaie este de circa 10 zile, la temperatura de 25oC i, n plus, este extrem de prolific. La nivelul multor esuturi ale larvelor de D. melanogaster exist un tip special de cromosomi, numii cromosomi uriai sau cromosomi politeni, care pot fi observai cu uurin la microscopul optic. 3.1. Obiectul studiului

Fr a intra n prea multe detalii, unele dintre ele fiind pe larg analizate n cadrul lucrrilor de laborator, reamintim cteva trsturi ale musculiei de oet, care au "recomandat-o" ca material optim pentru investigaiile de citogenetic. Aceast specie a fost descris la mijlocul secolului al XIX-lea sub numele de Drosophila ampelophila, ceea ce nseamn iubitoare de vi de vie (grecescul ampelos = vi de vie, philos = iubitor). Ulterior i s-a dat numele de Drosophila melanogaster, adic iubitoare de rou, cu abdomenul negru (grecescul drosos = rou, ap, lichid; philos = iubitor; melas = negru; gastris = stomac). Conform lucrrii An introduction to the Study of Insects ediia din 1964 revizuit de D. J. Borror i de D. M. De Long, specia Drosophila melanogaster aparine genului Drosophila din Familia Drosophilidae, Grupul Acalyptratae, Seciunea Schizophora, Subordinul Cyclorrhapha; Ordinul Diptera, Diviziunea Endopterigota (Holometabola), Subclasa Pterygota, Clasa Insecta (Hexapoda), ncrengtura Artropoda. Drosophila melanogaster are aproximativ 2 mm lungime, corpul de culoare gri-glbuie i doi ochi compui mari, de culoare roie-crmizie (la tipul slbatic). n regiunea capului mai prezint trei ochi simpli numii oceli i dou antene mici, aristate, formate din cte trei segme nte; pe cel deal treilea segment antenal aflndu-se arista. Aparatul bucal este adaptat pentru lins i supt, Drosophila consum hran lichid sau lichefiat, n prealabil, cu ajutorul secreie glandelor salivare. Ca toate Dipterele, musculia de oet prezint dou aripi mari, mezotoracice, aripile de pe metatorace fiind transformate n haltere (organe de echilibru). Pe fiecare segment toracic se afl cte o pereche de picioare adaptate la mers. Numrul segmentelor abdominale vizibile este diferit la cele dou sexe apte la femel i cinci-ase la mascul. Acest numr mic de segmente la masculi este consecina fenomenului de telescopare a ultimelor segmente abdominale. Adulii de Drosophila melanogaster prezint dimorfism sexual, manifestat att prin diferene dimensionale, ct i morfologice. Femelele sunt mai mari dect masculii. Au abdomenul oval cu extremitatea posterioar puin ascuit. La masculi vrful abdomenului este rotunjit i colorat n maron-negru. Numrul de omatidii ce intr n alctuirea ochiului complex este diferit le cele dou sexe, i anume: 780 la femel, respectiv, 740 la mascul. Masculii prezint aa numitul pieptene sexual care servete la imobilizarea femelei n timpul acuplrii. Acesta este format din zece periori negri, rigizi, ce se gsesc pe primul articol tarsal al picioarelor anterioare (perechea I), mai precis n apropierea articulaiei dintre tibie i tars. Evident c diferenele cele mai nsemnate dintre mascul i femel in de organizarea intern, mai ales de anatomia sistemului reproductor. Sexul larvelor se determin innd cont de poziia i mrimea gonadelor. Acestea sunt localizate n partea postero-lateral a larvei, n corpii grai. Testiculele sunt mult mai mari dect ovarele (de trei ori mai mari) i au o form oval. Ele pot fi observate cu ochiul liber datorit transparenei tegumentului larvei.

Ca toate dipterele, Drosophila melanogaster prezint metamorfoz complet (este o insect holometabolic), ciclul su vital parcurgnd stadiile de ou, larv, pup i adult. Durata ontogeniei variaz n funcie de temperatur, umiditate, compoziia mediului nutritiv etc. Stadiul de ou. Este cuprins ntre momentul depunerii oului de ctre femela adult i cel al apariiei larvei corespunztoare. n partea anterioar, dorsal, oul prezint o pereche de filamente (apofize) cu rolul de a mpiedica scufundarea sa n mediul lichid. Stadiile larvare la Drosophila melanogaster sunt n numr de trei, fiind separate ntre ele prin dou nprliri. Larva de stadiul I prsete oul prin micropil, este mic, foarte mobil i se hrnete cu mare repeziciune. Este o larv de tip apod (fr apendici), acefal (capsula cefalic este nfundat complet n torace). Aparatul bucal de tip primitiv (adaptat pentru rupt i mestecat) prezint mandibule puternice, ca nite crlige, cu ajutorul crora larva ptrunde n materialul nutitiv. Acest prim stadiu larval dureaz aproximativ 24 ore. Pe msur ce larva crete, cuticula sa chitinoas devine nencptoare, astfel, c larva o prsete i i sintetizeaz o nou cuticul (nprlete). Larva de stadiul II apare n urma primei nprliri. Aceasta este mai mare i continu s se hrneasc timp de aproximativ 24 ore, dup care sufer nc o nprlire. Larva de stadiul III apare dup cea de-a doua nprlire (dup aproximativ ase zile de la fertilizare). Aceasta pote atinge 4,5 5 mm lungime i se dezvolt pe parcursul a 48 ore. Stadiul de pup are o durat variabil, fiind profund influenat de temperatur. La Drosophila melanogaster pupa este de tip coarctat pup butoia, o variant a pupei adectice (cu mandibule nesclerificate) de tip liber, caracterizat prin aceea c larva din stadiul III mpupeaz n interiorul ultimei exuvii larvare. La nceput nveliul pupal chitinos este alb i moale. Odat cu scurtarea corpului larvei el se ntrete i se nchide la culoare, fiind numit i puparium. Are form oval, msoar 2,5 3 mm i prezint n partea anterioar dou prelungiri ce corespund spiraculelor evaginate ale fostei larve. Stadiul de imago. n urma transformrilor ce au loc n interiorul nveliului pupal, se formeaz adultul care eclozeaz printr-o deschidere circular din regiunea anterioar a pupariumului. La nceput insecta este foarte lung, cu aripile nedesfcute, lipite de corp i are o culoare deschis. Aceste caracteristici ale adulilor nou eclozai constituie criteriile care i deosebesc de insectele btrne. Indivizii speciei Drosophila melanogaster sun frecvent ntlnii n natur, pe fructe care au nceput s fermenteze (mere, pere, prune, struguri etc.). n laborator, musculia de oet poate fi cultivat pe medii artificiale care conin zahr i drojdie componente ce mijlocesc procesul de fermentaie. Compoziia mediului are influene asupra ciclulului vital, viabilitii i prolificitii insectei. Musculia de oet prezint o prolificitate ridicat. n cursul vieii, o femel depune cteva sute de ou. In majoritatea cazurilor numrul oulor depuse este de 200-300. Bridges precizeaz c ameliorarea condiiilor de via determin o cretere a numrului de ou depuse, uneori acesta ajungnd pn la 2000. In medie o pereche de insecte d natere la aproximativ la 170 descendeni. Adulii de Drosophila melanogaster, n condiii de laborator, triesc aproximativ 3-4 saptamni. Longevitatea depinde de condiiile n care sunt crescute insectele i anume: temperatura, umiditatea, compoziia mediului nutritiv, densitatea populaiei, prezena n mediu a paraziilor etc. n condiii optime indivizii de Drosophila pot supravieui chiar 22 de sptmni (153 de zile). Exista unele mutante care au o viabilitate mult mai mare dect a tipului slbatic ns, de obicei, mutantele sunt mai puin viabile. n concluzie, putem afirma c sunt argumente care recomand aceast specie pentru studii de genetic i anume: a. Rapiditatea succesiunii generaiilor (circa 10-15 zile pentru un ciclu ontogenetic complet, la 24oC). b. Prolificitate crescut (circa 200 ou/femel). c. Pretenii sczute fa de condiiile de cretere (se dezvolt bine n condiii artificiale). d. Numr mic de cromosomi (2n=8) uor identificabili. Astfel, perechea I este alctuit din cromosomi n form de bastonae drepte la femel i unul n form de bastona drept i altul ndoit la un capt, n cazul masculului. A se reine acest aspect, ca argument pentru fundamentarea

ipotezei plasrii genelor pe cromosomi i pentru considerarea respectivei perechi ca reprezentnd cromosomii sexului (pentru femel, sunt notai cu XX, iar pentru mascul, cu XY). Cromosomii din perechile II i III sunt de forma literei "V". iar cei ai perechii IV sunt punctiformi. Dac cromosomii sexului mai poart i numele de heterosomi, restul sunt denumii autosomi. Principala caracteristic a drosofilei care, pe lng calitile amintite anterior, o recomand drept un material extrem de adecvat pentru investigaii genetice, o constituie mutabilitatea ei ridicat (rata relativ nalt de apariie a mutaiilor, att n mod spontan, ct i sub impactul anumitor tratamente). Practic, pentru fiecare dintre caracterele morfo-anatomice s-au identificat i descris mutaii. Sunt stabilite i caracterizate, pn n prezent, peste 500 mutaii, viznd culoarea ochilor, forma ochilor i a aripilor, culoarea corpului, pilozitatea i forma periorilor etc. Pentru Morgan, mutaiile au constituit un excelent mijloc de a studia legitile transmiterii ereditare a caracterelor i de a stabili mecanismele cromosomiale ale procesului. n principiu, s-a pstrat metodologia mendelian a notrii genelor (factorii ereditari, n concepia lui Mendel), dar s-a introdus o inovaie. n loc s se foloseasc, n mod aleatoriu, literele alfabetului latin pentru desemnarea fiecrei gene, se folosete prima liter, primele litere sau un grup de litere din cuvntul englezesc ce denumete prima mutant descoperit pentru caracterul respectiv. Cel mai utilizat exemplu este acela referitor la culoarea ochilor. n mod normal, drosofila are ochii de culoare roie. Prima mutant identificat, pentru acest caracter a fost cea cu ochi albi. n consecin, ea a primit numele white, notarea ei convenional fiind w. Evident, pentru forma cu ochi normali, dominant n ncrucirile cu mutantele, se putea recurge la desemnarea prin W. S-a preferat, ns, utilizarea simbolului w+, ntruct exist i cazuri de mutante dominante, a cror desemnare se face prin liter mare. Dar, a aprut o nou complicaie. n cazul unor gene (vezi tabelul 4.2) exist o serie alelic (polialelia). Referindu -ne tot la culoarea ochilor, menionm mutantele: sepia, eosin, ivory, vermillon, apricot etc. Desemnarea lor ar putea fi fcut prin litere de la respectivele cuvinte ( sp, e, i, v, a), dar, n acest caz, desemnarea tipului slbatic ar avea mai multe simboluri (sp+, e+, i+, v+, a+ etc.) i ar putea duce la confuzii. n consecin, s-a recurs la un alt sistem, n care la prima mutaie se adaug indicativele celor ulterior descoperite (wsp, we, wi, wv, wa), situaie n care, pentru desemnarea tipului slbatic, se recurge constant la o singur notaie - w+(Fig.12). Cromosomii din perechea I y, yellow (0,0) mutant ce prezint corp de culoare galben intens, perii fiind cafenii cu vrful galben; pn, prune (0,8) mutant cu ochi de culoarea prunei; w, white (1-1,5) mutant cu ochi de culoare alb, ocelii fiind incolori, ca i tuburile lui Malpighi. A fost prima mutant descoperit (n 1910, de Lilian Morgan). Prezint numeroase alele; wa, apricot (1-1,5) prezint ochi de culoare trandafirie-glbuie la masculi i ceva mai galbeni la femele. Combinaia wa/wa;bw/bw are ochii mai deschii la culoare dect mutanta apricot (wa/wa;bw+/bw+); N, Notch (3,1) mutant cu aripile zimate; cx, curlex (13,6) mutant cu aripile ndoite n sus; ct, cut (20,0) mutant cu aripile reduse (tiate); ras, raspberry (32,8) mutant cu ochi de culoarea zmeurei; v, vermilion (33,0) mutant ce prezint ochi de culoare roie foarte vie, ocelii fiind incolori. Combinaia v/v;bw/bw prezint ochi albi. Viabilitatea este satisfctoare; m, miniature (36,1) aripile sunt mici, depind cu puin abdomenul; f, forked (56,6) prezint peri scuri i ndoii, bifurcai la vrf; B, Bar (57,0) mutant dominant, ce prezint ochi redui la un segment; Bx, Beadex (59,4) mutant cu aripi zimate; car, carnation (62,5) mutant cu ochi de culoare rubinie-nchis. Cromosomii din perechea II-a al, aristaless (0,0) mutant fr ariste; S, Star (1,3) mutant cu ochi n form de stea;

 Cy, Curly (8,5) prezint aripile ndoite n sus. n stare homozigot (Cy/Cy), aceast gen este letal; dp, dumpy (13,0) mutant cu aripile tiate i reduse la aproximativ 2 3 din lungimea aripilor de latipulul slbatic; b, black (48,5) prezint corp de culoare neagr; pr, purple (54,5) mutant cu ochi purpurii; ap, apterous (55,4) nu prezint aripi; cn, cinnabar (57,5) mutant cu ochi de culoare roie aprins, ce se nchide odat cu vrsta; vg, vestigial (67) prezint aripile sub forma unor rudimente (vestigii), de unde a primit i denumirea; sf, safranin (71,5) prezint ochi de culoarea ciocolatei; L, Lobe (72,0) prezint ochi redui ca mrime. n stare homozigot (L/L) determin o reducere accentuat a ochilor i scderea viabilitii, poate fi letal; c, curved (75,5) mutant cu aripi subiri, deprtate i rsucite; bw, brown (104,5) culoarea ochilor este cafenie deschis la natere i se nchide dup mai multe zile. Este afectat i culoarea organelor interne. Vasele i testiculele sunt incolore, iar tuburile lui Malpighi sunt mai deschise la culoare dect la tipul slbatic; Cromosomii din perechea III-a dv, divergent (20,0) mutant cu aripile ndeprtate; se, sepia (26,0) prezint ochi de culoare roie-cafenie, transpareni la natere, nchizndu-se, cu timpul, pn la sepia (pot deveni chiar negri); rs, rose (35,0) mutant cu ochi de culoare roz; D, Dichaete (40,4) prezint cte doi periori mpreun; p, pink (48,0) mutant cu ochi de culoare rubinie; ma, maroon (49,7) prezint ochi de culoare castanie; dw, dwarf (50,0) mutant pitic; ss, scinelles (58,0) mutant caracterizat prin absena periorilor; bx, bithorax (58,5) mutant cu mezotoracele dublat; e, ebony (70,7) prezint corp de culoare neagr strlucitoare, mult mai nchis dect la Wild type. Viabilitatea acestei mutante este 80% din cea a tipului slbatic; det, detachet (72,5) mutant cu ochi sticloi; ro, rough (91,1) prezint ochi micorai, cu suprafa neregulat. Cromosomii din perechea IV-a M4, Minute 4 (0,0) mutant cu periori subiri; bt, bent (0,0) mutant cu aripile ndoite n jos; sv, shaven (0,1) prezint peri abdominali rari, mai puini dect la tipul slbatic; ey, eyeless (0,2) mutant cu ochi redui la jumtate sau la un sfert din mrimea celor de la tipul salbatic. Uneori ochii lipsesc complet; Cat, Cataract (6,7) prezint ochi cu suprafaa neregulat; spa, sparkling (93,0) mutant cu ochi proemineni, ce au suprafaa neregulat.
Fig. 12. Mutante de Drosophila melanogaster

3.2. ARGUMENTE PENTRU PLASAREA GENELOR (FACTORILOR EREDITARI) PE CROMOSOMI

Comportamentul cromosomilor s-a demonstrat a fi similar cu dinamica factorilor ereditari descris de Mendel. Argumentul imbatabil pentru considerarea cromosomului drept suport material al factorilor ereditari (pentru plasarea genelor pe cromosomi) l-au furnizat experimentele efectuate cu drosofila. S prezentm doar unul dintre ele. n experimentele efectuate de Mendel, utiliznd mazrea cu bobul galben i cea cu bobul verde, segregarea n F2 era aceeai, indiferent de culoarea printelui ales ca mascul i a celui ales ca femel. Nu acelai lucru se constat, ns, cnd se fac ncruciri reciproce ntre indivizii w+ i w de drosofila. Situaia a condus la concluzia c gena responsabil de manifestarea respectivului caracter este cantonat pe unul dintre cromosomii sexuali. Iat care sunt rezultatele n cele dou tipuri de ncruciare: P F1 w+w+ w+w X 50% + cu ochi de culoare roie w+w+ F2 25% 100% cu ochi roii; 25% 25% 25% 50% ochi roii;50% ochi albi w +y w+w wy X wy w +y 50%

Tab. 13. Dinamica genotipurilor i fenotipurilor n ncruciri reciproce.

n ncruciarea reciproc:

P F1

ww ww+

x x

w +y wy 50%

50% cu ochi roii; ww F2 25% 25% 25% w+w cu ochi albi wy

w +y 25%

50% cu ochi roii;50% cu ochi albi 50% cu ochi roii;50% cu ochi albi
Tab. 14. Dinamica genotipurilor i fenotipurilor n ncruciri reciproce

ntruct att masculii ct i femelele au trei perechi identice de autosomi, diferenele constnd n prezena heterosomilor pereche (XX) la femele sau nepereche (XY) la masculi, rezult c respectiva gen este plasat pe unul dintre cromosomii sexului i anume pe cromosomul X, deoarece femelele heterozigote se comport (fenotipic) asemenea celor homozigote dominante, n timp ce masculii (fiind hemizigoi) se manifest recesiv sau dominant, n funcie de tipul cromosomului X pe care l-au primit (cu gena slbatic sau cu alela mutant plasat pe el). Fenomenul, cunoscut i sub numele de sex linkage, se constituie n cauz pentru abaterea de la tipul mendelian de segregare. Un alt exemplu, care confirm ipoteza plasrii genelor pe cromosomi, l constituie asocierea dintre lipsa unui cromosom din perechea IV i lipsa ochilor, la aceeai insect. Prin urmare, pe un cromosom, ntr-un anumit loc, numit locus, se afl plasat o gen. Pe cromosomul omolog, n aceeai poziie, adic n acelai locus, se afl plasat aceeai gen sau una dintre alelele ei. 3.3. PLASAREA LINIAR A GENELOR PE CROMOSOMI n paginile anterioare am demonstrat, fr dubii, c genele sunt plasate pe cromosomi. Dar, un calcul extrem de simplu ne arat c numrul de cromosomi este mult mai mic, fa de numrul caracterelor etalate de un individ. La Drosophila melanogaster de pild, s-au identificat mai multe sute de caractere i numai 8 cromosomi. innd cont de omologia cromosomilor, n fapt exist patru perechi i, avnd n vedere raportul de alelism al genelor, putem vorbi doar de 4 grupe de linkage ca entiti diferite. Deci, genele responsabile pentru cele cteva sute de caractere sunt cantonate n patru cromosomi, ntr-un cromosom existnd mai multe gene. Dar cum sunt ele plasate, n mod concret, ntr-un cromosom? i ce dovezi avem, totui, c mai multe gene sunt plasate n acelai cromosom? Argumentele pentru plasarea mai multor gene pe acelai cromosom aparin tot colii lui T.H. Morgan i au fost susinute de experimente extrem de simple i clare, totodat. ncruciarea s-a derulat dup urmtoarea schem:

P G F1 G F2

pr+ vg+ pr+ vg+ pr+ vg+ X X X pr vg X pr+vg+ prvg pr+vg+ pr+vg+ pr+vg+ pr vg

pr vg pr vg pr vg

pr+ vg+

pr+vg+ pr vg

pr+ vg+ pr vg pr+vg+ prvg pr vg pr vg

Tab. 15. Dihibridare, implicnd gene linkate, la Drosophila melanogaster

Segregare genotipic: 25% homozigot dominant + 50% heterozigot, + 25% homozigot, recesiv Segregare fenotipic: 75% dominant + 25% recesiv S-a efectuat o experien de hibridare (tip dihibridare), ntre indivizi de D. melanogaster ce difereau ntre ei prin culoarea ochilor i forma aripilor. Femela era fenotipic normal

(pr+pr+vg+vg+), iar masculul dublu mutant - avea ochii purpurii (prpr) i aripile vestigiale (vgvg). n F1 s-au obinut doar indivizi fenotipic normali. Prin ncruciarea lor, n F2, n loc s se obin segregarea de tip mendelian, de 9:3:3:1, s-au obinut doar dou categorii de fenotipuri - 75% de tip parental dominant i 25% de tip parental recesiv. Deci, un raport tipic monohibridrii (adic 3 : 1). Prin urmare, se impune o prim concluzie. Cele dou caractere nu segreg independent. De aici supoziia c ele sunt plasate (genele ce le determin) pe acelai cromosom. Adic, pentru individul normal vom avea pr+ vg+, i pr wg pentru cel mutant. + + pr vg pr wg Pentru a elimina confuziile, precizm c cele dou gene sunt cantonate pe cromosomii perechii a II-a. Indicativul "pr" red mutanta purple (purpuriu, n englez). Prin urmare cele dou gene sunt localizate pe acelai cromosom i se transmit mpreun. Fenomenul este cunoscut, n genetic, sub numele de linkage (nlnuire, legare). Este, n fond, nu numai o abatere, ci o completare a legii segregrii independente a caracterelor, demonstrat de Mendel.

3.4. TRANSMITEREA NLNUIT A TUTUROR GENELOR PLASATE PE UN CROMOSOM (LINKAGE)

Autenticitatea linkage-ului a fost confirmat i prin retroncruciarea de tipul Test-cross (FT). Adic, un individ din F1 (un mascul) se ncrucieaz cu unul dublu mutant (o femel). Se obin dou clase fenotipice i anume: 50% indivizi normali i 50% indivizi dublu mutani. Precizm c este obligatorie respectarea sexelor indicate, deoarece masculul nu prezint fenomenul de crossing-over i, n consecin, rezultatele experimentului sunt constante.

P(F1) G

pr+ vg+ x pr vg x pr+ vg+, pr vg pr+ vg+

pr vg pr vg pr vg pr vg pr vg 50%

FT

pr vg 50% Heterozigoi cu fenotip normal (dominant)

Homozigoi cu fenotip recesiv(dublu mutant)

Tab. 16. Rezultatele retroncrucirii

Deci, att genotipic (Sg), ct i fenotipic (Sf), segregarea este de 1:1. n consecin, cele 500 de gene identificate la Drosophila melanogaster au fost repartizate n patru grupe de linkage, corespunztoare celor patru perechi de cromosomi omologi. Se cuvine menionat faptul c mrimea unei grupe de linkage sau, altfel spus, numrul genelor plasate ntr -o grup este n concordan cu mrimea cromosomului. Astfel, grupa a IV-a de linkage, fiind plasat pe cromosomii perechii a IV-a (punctiformi), conine doar 12 gene. Ca o concluzie, general, menionm c la fiecare specie, numrul grupelor de linkage este identic cu numrul cromosomilor unui set haploid (genom).

In conformitate cu teoria linkage-ului, atunci cnd dou gene segreg mpreun, nseamn c fac parte din aceeasi grup de linkage, iar cnd segreg independent (dup modelul mendelian) nseamn c fac parte din grupe diferite de linkage - adic sunt plasate pe cromosomi diferii. La Drosophila melanogaster a fost posibil i localizarea concret a fiecrei gene ntr-un anumit cromosom. Evident, au fost necesare nenumrate experimente de hibridare, n care se luau, succesiv, tot alte perechi de caractere (gene) i se nota cu meticulozitate comportamentul lor (dac segregau independent sau nu).

3.5. SEX-LINKAGE (TRANSMITEREA NLNUIT A GENELOR PLASATE PE HETEROSOMI) Aa cum am precizat deja, specia Drosophila melanogaster are patru grupe de linkage, adic are patru perechi de cromosomi. Mai exact drosofila are trei perechi de autosomi i doi heterosomi identici la femele (notai XX) i diferii la masculi (notai XY). Prin experimente proiectate i efectuate cu deosebit grij, T.H.Morgan i grupul su de cercettori au reuit s demonstreze c una dintre genele responsabile pentru determinismul culorii ochilor este plasat pe heterosomul X (vezi harta genetic), rezultatele ncrucirilor ntre indivizi normali i indivizi mutani depinznd, ntotdeauna, de sexul mutantului.

3.6. CROSSING-OVER (SCHIMBUL RECIPROC DE GENE) Aa cum precizam n rndurile anterioare, nu ntotdeauna genele aparinnd aceluiai grup de linkage, se transmit mpreun. S-au constatat nenumrate excepii. n tentativa de a da explicaii adecvate abaterilor de la regul, Morgan i echipa sa au constatat c ntre cromosomii omologi poate avea loc un schimb reciproc de gene. Fenomenul a primit numele de crossingover. Pentru genetic, au rmas clasice experimentele efectuate de Morgan i coala sa, n demonstrarea realitii i autenticitii schimbului reciproc de gene.

3.6.1. Crossing-over ntre cromosomii sexului Prin ncruciarea unei femele de Drosophila melanogaster, dublu mutant (cu dou mutaii recesive, ale genelor localizate pe cromosomul X, determinnd culoarea galben a corpului i culoarea alb a ochilor), cu un mascul normal, n F1 s-au obinut doar indivizi de dou tipuri - deci, o segregare de 1:1. Femelele erau cu fenotip normal, dar heterozigote i masculii cu fenotipizare mutant, dar hemizigoi genotipic. Fenomenul a primit denumirea de ereditate n cruci (crisscross), deoarece fenotipul mamei se manifest la fii, iar cel al tatlui la fiice. Prin ncruciarea indivizilor femeli i masculi din F1, s-a constatat apariia, n F2, a patru clase de indivizi - dou clase conforme rezultatelor determinate de linkage i alte dou clase cu recombinare de caractere. Proporia era de 49,25% pentru fiecare dintre primele dou clase i de 0,75% pentru fiecare din clasele cu recombinare. Precizm c w reprezint mutanta pentru culoarea ochilor (ochi albi) i y reprezint mutanta pentru corp galben (de la cuvntul englezesc yellow), w+ i, respectiv, y+ reprezentnd genele normale. Deci, plecndu-se de la femele dublu mutante i masculi normali, n F1 s-a obinut o segregare fenotipic (Sf) de 1:1 i una genotipic (Sg) tot de 1:1, femelele fiind heterozigote, cu fenotip normal (dominant) i masculii hemizigoi, cu fenotip recesiv (mutant).

Schematic, ncruciarea este redat astfel:

Prini Gamei F1 nerecombinai recombinai Xyw F2 Xyw

Xyw Xyw Xyw Xyw Xy+w+ Xyw, Xy+w+ Xy+w, Xyw+ Xyw Y Xy+w+ Xyw Xyw+ Y Xy+w Xyw 0,75% Xy+w Y x x

Xy+w+ Y x Xyw Y Xyw, Y Xy+w+, Y

Gamei

Xyw+ Xyw+

Xyw+ Y

49,75%

49,75%

0,75%

Tab. 17. Crossing-ower ntre cromosomii sexului

Teoretic, gameii indivizilor de F1 trebuiau s fie doar de dou tipuri: la femele Xyw i Xy+w+, iar la masculi Xyw i Y. Dar rezultatele ncrucirii indivizilor din F1, dnd un cu totul alt raport de segregare n F2 i, mai ales, dnd o categorie de indivizi cu recombinri de caractere, s -a ajuns la concluzia c a avut loc crossing-overul ntre cromosomii omologi i apariia a dou noi tipuri de gamei n cazul femelelor: Xy+w i Xyw+. Prezena acestor gamei explic apariia indivizilor cu fenotipuri recombinate, n F2. Acetia sunt att masculi, ct i femele, cu corp gri i ochi albi sau cu ochi roii i corp galben. Deci, ntre genele y+ i w+ i alelele lor, situate pe cromosomii X omologi, au avut loc schimburi, rezultnd noi grupe de linkage. Adic, din y+w+ i yw, au rezultat y+w i yw+, alturi de tipurile parentale care s-au meninut.

3.6.2. Crossing-over ntre autosomi

Un alt experiment, efectuat de Morgan i colaboratorii si, a demonstrat existena crossingoverului i ntre autosomi. ncrucind o femel de Drosophila melanogaster cu corpul negru (b - de la black) i aripi normale (vg+) cu un mascul cu corpul gri (b+) i aripi vestigiale (vg), n F1 s-au obinut indivizi heterozigoi b+bvg+vg, cu fenotipul normal. ncrucindu-se indivizii din F1 cu indivizi dublu mutani (ncruciare de analiz genetic), sa constatat c n FT, fenotipul indivizilor difer n funcie de sexul lor. Astfel, dac se efectueaz o retroncruciare ntre un mascul din F1, heterozigot (b+bvg+vg) cu o femel mutant (bbvgvg), n FT se obine segregarea de 1:1, ca n experimentele pentru demonstrarea fenomenului linkage (adic reapar indivizii cu fenotip parental - corp negru i aripi normale i corp gri cu aripi vestigiale). Deci, linkage-ul este total.

b vg+ P G F1 G FT b vg Sf Sg 1 1(bbvg+vg) 1 b vg+ b vg+ b vg+ b+ vg b vg+, b+ vg b vg+ x x x

b+ vg b+ vg b+ vg b vg b vg x b vg b+ vg b vg

1(b+bvgvg)

Tab. 18. Retroncruciarea unui mascul heterozigot , cu o femela dublu mutant

Precizam anterior c, n acest caz, este vorba de autosomi - mai concret, de perechea a IIa de omologi. Atunci, cum se explic diferena de comportament dintre masculi i femele? S-a ajuns la concluzia c, n cazul masculilor de Drosophila melanogaster, cromosomii din perechea a II-a nu prezint fenomenul de crossing-over. Lipsa crossing-overului este valabil i pentru cromosomii sexului (la mascul), n sensul c ntre cromosomii X i Y nu se cunoate existena acestui fenomen. n ncruciarea reciproc (retroncruciare) dintre o femel hibrid de F1 (b+bvg+vg) i un mascul dublu mutant (bbvgvg), n FT, pe lng tipurile parentale (corp negru i aripi normale; corp gri i aripi vestigiale), mai apar nc dou clase fenotipice (care, n mod normal, nu trebuiau s apar: corp gri i aripi normale; corp negru i aripi vestigiale). ntr -o populaie suficient de mare, proporia indivizilor este de 41,5% pentru fiecare dintre tipurile parentale i cte 8,5% pentru fiecare dintre tipurile recombinante. Deci, linkage-ul genelor b+ i vg+ se deregleaz i respectivele gene "segreg", datorit schimbului reciproc de material cromatic ntre cromosomii omologi. Rezult c femelele din F1 pot forma patru tipuri de gamei - dou normale i dou recombinate, primii fiind numii gamei crossing-overi, ceilali fiind gamei necrossing-overi. b vg+ b+ vg P x b vg+ b+ vg G F1 b vg+ b vg+ b+ vg b vg+, b+ vg GF1 i b+ vg+, b vg b vg+ FT b vg 41,5% segregare 83,0 % indivizi necrossing-overi b vg 41,5% b vg 8,5% b vg 8,5% 17,0% indivizi crossing-overi x b+ vg b+ vg+ b vg b vg x b vg x b+ vg b vg

Tab. 19. Tipurile de indivizi aparui, cu i fr crossing-over, n ncruciarea reciproc.

3.6.3. Redarea schematic a crossing-overului Rezumnd cele relatate pn aici, constatm c ntre doi cromosomi omologi, mai precis ntre cte una dintre cromatidele cromosomilor omologi, poate avea loc schimb de material, prin crossing-over simplu, dublu, triplu sau multiplu. Atunci cnd se produce o singur ruptur are loc un singur schimb de gene, in sensul c un segment cromatidic de lungimea uneia sau a mai multor gene i schimb poziia de pe un cromosom pe cellalt. Evident, teoretic, crossing-overul simplu, n functie de zona n care se produce, poate facilita schimbul a dou blocuri de gene, nu numai a unei gene.Dar, ntruct s-a produs doar o singur ruptur, evident este vorba de un crossing-over simplu. Crossing-overul dublu presupune dou rupturi care faciliteaz schimbul a dou gene, a dou blocuri de gene etc. Schematic, situaia poate fi redat astfel: aBCDEF AbCDEF AbCdef AbCdEF ABCDEF abcdef Cromosomii omologi iniiali, redai printr-o singur cromatid Abcdef aBcdef aBcDEF aBcDef

Crossing-over simplu

Crossing-over dublu

Crossing-over triplu

Crossing-over quadruplu

Tab. 20. Tipuri de crossing-over

3.6.4. Mecanismele crossing-overului Pentru explicarea modalitilor concrete prin care se realizeaz crossing-overul s-au emis mai multe ipoteze, care pot fi grupate n dou mari categorii, i anume: I. Cele ce consider c fenomenul se datoreaz ruperii cromatidelor i schimbului reciproc de segmente (breakage theory). II. Cele ce consider drept cauz a fenomenului replicaia selectiv a cromatidelor n timpul dublrii materialului cromosomial (copy-choise theory). Schematic, situaia se red astfel:

I
Fig.13..Schimb reciproc de segmente prin ruperea cromatidelor

II
Fig. 14. Schimb reciproc de segmente cromatidice prin copiere selectiv

INTREBARI DE VERIFICARE 1. Care au fost avantajele folosirii Drosophilei melanogaster in cercetarile de genetica 2. Ce reprezinta linkage-ul 3. Ce reprezinta si cand are loc crossing-overul 4. Intocmiti schemele hibridarilor care sa ilustreze fenomenele de linkage si crossing-over 5. Care sunt mecanismele moleculare care conduc la aparitia crossing-overului

TEME PENTRU EXAMINAREA FINALA 1. Definirea si explicarea fenomenului de linkage. 2. Intelegerea si aprofundarea aspectelor citologice si moleculare in cadrul fenomenului de crossing-over

Unitatea de invatare 4

4.. Mutatiile 4.1. DEFINIRE, CLASIFICAIE, GENERALITI Noiunea de mutaie a fost introdus n tiin de ctre Hugo de Vries (unul dintre descoperitorii legitilor elaborate de Mendel) n anul 1901. Mutaia (de la latinescul mutatio = schimbare, modificare) reprezint o modificare a coninutului informaiei ereditare a unui individ, prin alterri produse la nivel molecular, cromosomial, genomic sau celular, sub impactul unor factori de natur fizic, chimic i biologic sau, pur i simplu, prin hazard. Mutaiile, alturi de recombinrile intra- i intercromosomiale, constituie principala surs de asigurare a variabilitii individuale - cmpul de aciune al seleciei naturale. Dar, n funcie de transmiterea sau nontransmiterea lor n descenden, variaiile produse n coninutul informaiei individuale, mai corect spus, variaiile fenotipizate de individul purttor, sunt de dou categorii: - modificaii; - mutaii propriu-zise. Ca orice alt fenomen sau proces biologic i mutaiile sunt clasificate n funcie de diverse criterii sau interese. Fr a intra n detalii (care pot fi gsite n orice tratat de genetic), reamintim cteva dintre clasificaii: a. Mutaii: - naturale; - artificiale. b. Mutaii produse de factori: - fizici; - chimici; - biologici. Apreciem c cea mai adecvat clasificare, din punctul de vedere al biologului, este cea n care se ine cont de mrimea substratului ereditar afectat, de cantitatea informaiei afectat n surs. n conformitate cu acest criteriu putem vorbi despre mutaii: - genice;

- cromosomiale; - genomice. 4.2. MECANISMELE PRODUCERII MUTAIILOR 4.2.1. Mecanismele mutaiilor genice a) Deleia reprezint pierderea uneia sau mai multor perechi de nucleotide. b) Adiia (adugarea sau inseria) uneia sau mai multor perechi de nucleotide. c) Substituia uneia sau mai multor perechi de nucleotide. d) Inversia unui fragment de ADN cuprinznd cel puin dou perechi de nucleotide. Pentru exemplificarea celor patru mecanisme menionate, imaginm o situaie ipotetic n care redm o succesiune aleatorie de perechi de nucleotide (din catena unei macromolecule de ADN), perechi pe care le numerotm cu cifre arabe. n funcie de tipul mutaiei (n funcie de mecanismul prin care se produce mutaia), vom dubla, vom anula sau vom nlocui cifrele respective. numrul nucleotidelor 1 2 3 nucleotidele unei catene A G C puni de hidrogen II III III nucleotidele complementare T C G Caten (secven) normal 4 G III C 5 6 7 TA G II II III AT C 8 9 T C II III A G 10 G III C

numrul nucleotidelor 1 3 4 5 6 7 nucleotidele unei catene A C G T A G puni de hidrogen II III III II II III nucleotidele complementare T G C A T C Deleia perechii a II-a de nucleotide numrul nucleotidelor nucleotidele unei catene puni de hidrogen nucleotidele complementare 1 A II T 2 C III G 2 G III C

8 T II A

9 C III G

10 G III C

3 4 5 6 7 8 9 10 C G T A G T C G III III II II III II III III G C A T C A G C

Adiia unei perechi (2) de nucleotide numrul nucleotidelor 1 2 3 4 5 6 7 nucleotidele unei catene A C C G T A G puni de hidrogen II III III III II II III nucleotidele complementare T G G C A T C Substituia perechii a 2-a de nucleotide numrul nucleotidelor nucleotidele unei catene puni de hidrogen nucleotidele complementare Inversia secvenei 4 5 6 Deci, se schimb fie numrul, fie ordinea perechilor de nucleotide. n consecin se schimb numrul i tipul (sau ordinea) codonilor, ceea ce nseamn, n fapt, o schimbare a coninutului informaiei ereditare. Transcripia se efectuiaz dup o informaie modificat, translaia avnd ca rezultat sinteza unei biomolecule schimbate (alt numr i alt succesiune a aminoacizilor). e) Mutaiile moleculare (genice) mai pot avea drept cauz i unele erori n procesul de autoreplicare semiconservativ a moleculei de ADN. 1 A II T 2 3 G C III III C G 6 A II T 5 4 7 T G G II III III A C C 8 T II A 9 C III G 10 G III C

8 T II A

9 C III G

10 G III C

Respectivele erori se pot datora fenomenelor: e.1. Tranziie - nlocuirea unei baze purinice sau pirimidinice cu o alt baz, tot purinic sau pirimidinic. A G i T C e.2. Transversie - nlocuirea unei baze purinice cu una pirimidinic i invers. A T i A C G T i G C Schematic, transversiile i tranziiile se pot reda astfel: Tranziie A G

Purinice

Transversie

Transversie

C Pirimidinice Tranziie Judecate prin prisma schimbrilor ce le produc n final (la sfritul procesului de translaie), mutaiile genice pot fi considerate: Nonsens, acele care duc la degenerarea codului genetic i nu se reflect n schimbarea succesiunii aminoacizilor n molecula proteic. Spre exemplu, codonii UAU i UAC codific acelai aminoacid - tirozina. Pe de alt parte, mutaiile survenite n codonii stop (terminatori ai sintezei unei catene proteice) - UAA, UAG i UGA, nu au nici o semnificaie. Mutaii cu sens greit, care transform un codon funcional (din cei 61) ntr-un codon terminator. n acest caz, molecula polipeptidic sintetizat va fi mai scurt. 4.2.2. Mecanismele mutaiilor structural cromosomiale Mutaiile cromosomiale sunt, n fapt, de dou mari categorii - structurale i numerice. Mutaiile structural cromosomiale presupun alterri ale materialului cromosomial, determinate de rupturi i pierderi sau realipiri (n alt ordine i n alte poziii) de segmente cu lungimi variabile. n funcie de localizarea restructurrii, mutaia structural cromosomial poate fi: - intracromosomial; - intercromosomial. Cele intracromosomiale pot fi, la rndul lor, intraradiale i interradiale (adic n cadrul aceluiai bra sau ntre cele dou brae ale cromosomului. Indiferent dac afecteaz un singur bra sau ambele brae cromosomiale, mutaiile intracromosomiale sunt: deleii, duplicaii, inversii, translocaii. Deleiile reprezint o pierdere de material cromosomial. n funcie de zona cromosomial pe care o afecteaz, ele sunt: terminale i intercalare, acestea din urm fiind paracentrice i pericentrice. Deleiile terminale afecteaz captul cromosomului i presupun producerea unei singure rupturi. ntruct producerea unei deleii terminale presupune pierderea regiunii telomerice, repercusiunile ei sunt destul de grave. Deleia terminal determin scurtarea cromosomului i formarea unui segment acentric, care, de obicei, se pierde: ABCDEFGHI AB CDEFGHI segment acentric Deleiile intercalare paracentrice presupun producerea a dou rupturi, urmate de eliminarea unui segment cromosomial acentric (din braul scurt sau lung) i scurtarea cromosomului: ABCDEFGHI GH ABC D E F I Deleiile intercalare pericentrice sunt datorate formrii unui segment cromosomial centric prin producerea a dou rupturi n imediata vecintate a centromerului i a dou (sau unul, n cazul reunirii lor) fragmente acentrice. ABCDEFGHI ABC DE FGHI

Deci, ca rezultat direct al producerii deleiilor, putem avea: - fragmente acentrice; - inele acentrice; - cromosomi inelari; - discontinuiti cromatice pe lungimea cromosomului; - isocromosomi; - micronuclee. Duplicaiile reprezint adugarea (dublarea) uneia sau mai multor gene, la cele existente deja n locusul (locii) respectiv. n funcie de modul concret n care are loc dublarea, duplicaiile pot fi: n tandem direct sau n tandem invers. i unele i celelalte, n funcie de zona cromosomial n care se produc, sunt: terminale i intercalare, acestea din urm fiind: paracentrice i pericentrice. Duplicaiile n tandem direct pot fi reprezentate schematic astfel: A B C D E F G H I cromosomul iniial ABABCDEFGHI terminal ABCBCDEFGHI intercalar paracentric ABCDDEEFGHI intercalar pericentric Duplicaiile n tandem invers pot fi redate schematic astfel A B C D E F G H I cromosomul iniial ABBACDEFGHI terminal ABCCBDEFGHI intercalar paracentric ABCEEDDFGHI intercalar pericentric De obicei, frecvena duplicaiilor este mai mare dect cea a deleiilor i pentru motivul c duplicaiile nu au efecte nocive. Inversiile se datoresc ruperii unui fragment cromosomial, paracentric sau pericentric, rotirii sale cu 180o n planul longitudinal i resudrii capetelor n noua poziie. Evident, avnd n vedere existena telomerului la fiecare capt cromosomial, inversiile terminale sunt imposibile. Pe de alt parte, dac inversiile paracentrice nu produc modificri n morfologia (adic n tipul) cromosomului, inversiile pericentrice pot determina schimbri consistente n lungimea braelor, dac cele dou poriuni, rupte de o parte i de alta a centromerului, nu sunt egale. De aceea, inversiile pericentrice pot fi egale sau inegale. Schematic, situaiile menionate pot fi redate astfel: ABCDEFGHI cromosomul iniial A C B D E F G H I paracentric A B C E D F G H I pericentric egal A E DCB F G H I pericentric inegal Translocatiile reprezint fenomenul prin care o poriune (un fragment), dintr -un cromosom se rupe i se realipete, fie n acelai cromosom (n acelai bra sau n braul cellalt), fie n cromosomul omolog, fie ntr-un cromosom neomolog. Translocaiile (cunoscute i sub numele de transpoziii) pot fi, deci i intracromosomiale (intraradiale i interradiale) i intercromosomiale. Evident i la translocaii se pun aceleai probleme vis vis de captul cromosomului - prezena telomerilor mpiedic producerea de translocaii terminale. Translocaiile intracromosomiale pot fi schematizate dup cum urmeaz: A B C D E F G H I cromosom iniial A B C D E G H F I intraradial A B F C D E G H I interradial n ceea ce privete translocaiile intercromosomiale se cuvin menionate cteva aspecte deosebite implicate de producerea lor. Aa cum aminteam anterior, ele pot viza cromosomii omologi sau neomologi. Evident, dac modalitile concrete de producere (rupere i apoi alipire) sunt identice, rezultatele lor sunt diferite. n cazul n care cei doi cromosomi omologi sunt izogenici (adic nu se afl n raport de alelism), translocaia presupune o duplicaie (dac vizeaz izolocii de pe cei doi cromosomi): ABCDEFGHI ADEFGHI ABCDEFGHI ABCBCDEFGHI Dac cei doi cromosomi sunt n raport de alelism, situaia se prezint astfel: ABCDEFGHI ADEFGHI

abcdefghi aBCbcdefghi Dac translocaia va viza schimbul ntre cele dou brae neomoloage ale cromosomilor omologi, evident c nu vom mai avea duplicaie. n esen (ca mecanism vorbind), fenomenul este similar cu cel al translocaiei ntre doi cromosomi neomologi, cnd vom avea: ABCDEFGHI ADEFGHI MNOPRSTUV MNBCOPRSTUV n cazul translocaiilor intercromosomiale, dac poriunile translocate vor fi intercalare (acetrice), unul dintre cromosomi se scurteaz (donatorul) i cellalt se alungete (primitorul). n situaia n care poriunea translocat este pericentric (adic segmentul translocat conine i centromerul), rezultatul va fi apariia unui cromosom dicentric i a unor fragmente acentrice care se vor resorbi. ABCDEFGHI ABC EGHI MNOPRSTUV MNDEOPRSTUV Procesul se complic i mai mult n cazul n care schimburile de segmente cromosomiale sunt bidirecionale (reciproce). De aceast dat, putem vorbi i despre translocaii terminale. Evident, translocaiile reciproce, fie c sunt terminale sau intercalare (paracentrice sau pericentrice), pot fi simetrice sau asimetrice (adic vizeaz un schimb de segmente egale sau inegale): ABCDEFGHI ABCDEFGUV MNOPRSTUV MNOPRSTHI ABCDEFGHI MNOPRSTUV ABCDESTI MNOPRFGHUV

ABCDEFGHI ABCPRFGHI MNOPRSTUV MNODESTUV Rezumnd, putem conchide c translocaiile sunt: A. Intracromosomiale: - intraradiale; - interradiale. B. Intercromosomiale: - ntre cromosomii omologi: - ntre braele omoloage (duplicaii); - ntre brae neomoloage. - ntre cromosomi neomologi: - extraradiale directe (unidirecionale): - paracentrice; - pericentrice. - extraradiale reciproce (bidirecionale): - terminale simetrice sau asimetrice; - intercalare paracentrice simetrice sau asimetrice; - intercalare pericentrice simetrice sau asimetrice. Fenomenul de fuzionare a cromosomilor telocentrici presupune existena a cel puin doi cromosomi telocentrici. Acetia pot fuziona (prin fuzionarea centromerilor) dnd, astfel, natere unui cromosom cu centromer median (metacentric sau submetacentric, n funcie de lungimea celor doi cromosomi). 4.2.3. Mecanismele mutaiilor genomice Mutaiile genomice presupun o modificare a numrului seturilor cromosomiale fundamentale (de baz), notate n mod convenional cu x. Reamintim ceea ce am descris i elucidat pe deplin n capitolul dedicat structurii i funciilor cromosomilor i anume: x = n numai n cazul speciilor diploide i, mai mult dect att, ntr-un anumit gen, unde avem mai multe numere cromosomiale de baz (adic mai multe valori pentru x), unul a provenit din altul, concomitent cu diversificarea speciilor. Deci, nu ntotdeauna exist echivalen ntre genom (notat cu n) i numrul fundamental de cromosomi (x). Altfel spus, ntre evoluia pe orizontal (diversificarea specific) i

variabilitatea numrului fundamental de cromosomi din cadrul unui gen, se pot stabili interrelaii precise. Muli autori plaseaz aneuploidia n cadrul mutaiilor genomice. Din punctul nostru de vedere, aneuploidia reprezint o mutaie cromosomial i anume, o mutaie numeric cromosomial, ntruct ea afecteaz unul sau doi cromosomi (rareori trei sau patru, aa cum vom preciza la momentul potrivit) dintr-un genom i nu multiplicarea numrului genomurilor sau a numrului fundamental de cromosomi. n consecin, mutaiile genomice includ: haplodia, poliploidiile i pseudopoliploidiile. Haploidia starea fireasc n care se gsete un individ eucariot este starea diploid. Aceast stare se reconstituie n urma fiecrui act de fecundare, act n urma cruia, din fuziunea a doi gamei de sex opus, ia natere un zigot ce ntrunete suma cromosomilor existeni n fiecare din cei doi gamei. Tot prin definiie, gameii sunt haploizi, adic au jumtate din numrul de cromosomi caracteristic prinilor. Deci, n + n = 2n sau . Rezult, cu claritate, c dac (din anumite motive), un viitor individ se va dezvolta avnd ca surs un singur gamet (androgenez sau ginogenez, pseudogamie, embrionie adventiv etc.), n celulele sale se vor gsi n cromosomi i nu 2n. Fenomenul poart numele de haploidie. Prin fuziunea unui gamet cu unul rezult un zigot (punctul de start al noului organism) care poate fi homozigot dominant, recesiv sau heterozigot (AA, aa sau Aa). Fenomenul este imposibil la haploizi, ntruct acetia au un singur set din cromosomii omologi (un singur genom), deci au toate genele ntr-o singur doz (A sau a). Prin urmare, fiind exclus fenomenul de alelism, implicit dominana i recesivitatea, un haploid fenotipizeaz totalitatea genelor pe care le conine. Evident, lipsind dominana i recesivitatea, alelele profund duntoare, mai ales alelele letale, induc moartea indivizilor haploizi. De aceea, la acest nivel, selecia este mult mai dur i mult mai eficient. n acest context, se cuvin menionate i unele avantaje, din punctul de vedere al practicii, oferite de haploidie. Prin dublarea setului haploid de cromosomi (diploidizarea unui haploid) se obin indivizi izogenici (izocromosomici), sau aa zisele linii pure (genetic pure), a cror producere necesit multe eforturi i mult timp pe cile convenionale. Fiind parial sterili, haploizii au o mic inciden n mod natural. Se ntlnesc, pe anumite perioade i n anumite condiii, la grupe de insecte (albine, viespi, afide), reprezint o stare quasinormal la ciupercile cu spori, algele unicelulare, briofite i sunt starea normal a procariotelor. Pe de alt parte, diploidia poate reprezenta o stare normal a unui individ sau poate fi rezultanta unei autopoliplodizri sau alopoliploidizri. Evident, haploizii provenii din cele trei categorii de "diploizi" nu vor avea comportamente similare. De aici i posibilitatea clasificrii haploizilor n: a. monoploizi; b. polihaploizi. a. Monoploizii provin prin dezvoltarea autonom a unei celule sexuale (androgenez sau ginogenez) de la indivizi aflai ntr-o stare de diploidie adevrat. n cazul plantelor, un monoploid se poate obine i n urma dezvoltrii unei alte celule dect cea gametic, dar aparinnd tot fazei haploide (gametofitului), cum ar fi antipodele i sinergidele. Printre modalitile practice de obinere a haploizilor (indiferent de sorgintea i tipul lor) putem meniona: ndeprtarea staminelor (la florile hermafrodite) anterior maturizrii lor, polenizarea cu polen distrus prin iradiere, polenizarea cu polen strin etc. La animale, pentru inducerea partenogenezei ovulelor nefecundate, se utilizeaz spermatozoizi iradiai, tratamente cu ocuri termice, soluii hipotonice i hipertonice etc. b. Polihaploizii provin. prin mecanisme identice celor ce determin apariia monohaploizilor, din poliploizi. Poliploidia, evideniat pentru prima dat de ctre G. Winkler (1916), reprezint mutaia genomic datorat multiplicrii numrului de genomuri (numrului fundamental de cromosomi). Poliploidia reprezint un fenomen cu o inciden destul de mare n natur - 47% dintre angiosperme i 4,6% dintre gimnosperme sunt poliploide. Poliploizii se dovedesc a fi competitori redutabili n condiii aspre de mediu, proporia lor crescnd n biocenoze concomitent cu latitudinea i altitudinea, precum i n paralel cu deteriorarea drastic a condiiilor de habitat (deerturi, soluri srturate etc.).

n funcie de numrul par sau impar al genomurilor ntrunite n noul organism, poliploizii pot fi clasificai n: A. Artioploizi - cu numr par de genomuri (2x, 4x, 6x, 8x, 10x). B. Perisoploizi - cu numr impar de genomuri (3x, 5x, 7x, 9x). n ceea ce privete poliploizii, se cuvin menionate cteva aspecte. Crescnd numrul de seturi cromosomiale per nucleu, evident c va crete i cantitatea de AND per nucleu. Poliploidia este un fenomen larg rspndit la plante, animalele etalnd cu o frecven mult mai mic aceast stare. n acest regn poliploidia este mai frecvent la nevertebrate (protozoare, crustacei, lepidoptere, ortoptere), dar i la unele vertebrate, din clasele petilor i amfibienilor. Menionm n acest sens iparul (Misgurnus fossilis), care este tetraploid n apele noastre (2n=100), n timp ce n apele din Extremul Orient triete o specie diploid (Misgurnus anquillicaudatus)(2n=50). Prezena poliploizilor a fost semnalat i la reptile, psri i chiar mamifere. Desigur poliploizii sunt prezeni i la om dar, n mod firesc, nu sunt viabili. Conform originii lor (modului n care au aprut), poliplozii au fost grupai n: I Autopoliploizi i II Alopoliploizi. I. Autopoliploidia reprezint fenomenul multiplicrii numrului de genomuri (numere cromosomiale de baz) proprii. Autotetraploizii se ntlnesc frecvent la Solanusm tuberosum, Medicago sativa, Arachis hypogea, Coffea arabica, Vitis vinifera etc. n practic sunt deosebit de frecvent utilizai triploizii care, pe lng faptul c manifest heterozis, prezint i avantajul de a nu produce semine. Cei mai des ntlnii i mai frecvent utilizai sunt triploizii bananului, viei de vie, mrului, pepenelui verde, ananasului, plopului etc. II. Alopoliploizii (amfiploizii) reprezint poliploizii a cror apariie presupune, cu necesitate, prezena unui proces anterior de hibridare interspecific. n consecin, la un amfiploid nu putem vorbi de o multiplicare a numrului de genomuri proprii, ci de o multiplicare a unui numr de genomuri aditive. Spre exemplu, dac avem specia A, la care notm genomul cu x1 i specia B, la care notm genomul cu x2, hibridul interspecific AB va vea genotipul x1+x2. Dar acest hibrid nu se va putea reproduce, meioza nefiind posibil. Prin poliploidizarea sa la faza de tetraploid vom avea hibridul AABB, cu genotipul 2x1+2x2, ceea ce nu este tot una cu 4x. Se apreciaz c n natur incidena amfiploizilor este destul de mare. Dintre acetia, menionm: Triticum aestivum (2n=42), Gossipium hirsutum (2n=52), Nicotiana tabacum (2n=48), Medicago sativa (2n=32), Prunus domestica (2n=48), Spartina townsendii (2n=126), Brassica napus (2n=38) etc. Unul din cele mai bine studiate cazuri este acela al speciei Triticum aestivum. Aici avem, n esen, rezultanta a dou hibridri interspecifice, urmate de poliploidizare. Astfel, Triticum monococcum (2n=14) s-a hibridat cu Aegilops speltoides (2n=14). A rezultat Triticum dicoccoides (2n=28). Acesta, ncruciat cu Aegilops squarrosa (2n=14), a dat specia Triticum aestivum (2n=42). Evident, Triticum aestivum este o specie nou, sintetic, fertil i foarte productiv. Se mai cuvine de menionat faptul c, tot la gru, japonezul H. Kihara a reuit s resintetizeze unele specii existente n natur, refcnd astfel drumuri parcurse de procesul speciaiei n genul Triticum. Pe de alt parte, s-a reuit sinteza de novo a unor specii complet necunoscute n natur. Astfel, G.D. Karpecenko, n 1927, a reuit s hibrideze Raphanus sativus (2n=18) cu Brassica oleracea (2n=18) i s obin Raphanobrassica (2n=36). Iniial, hibridul era steril. Dar, dup un timp de vegetaie, pe una din ramuri s-au format cteva semine. Se admite deci c, n mod natural, s-au produs gamei diploizi care au asigurat fertilitatea i perpetuarea hibridului. Noua specie (sintetic) are caractere intermediare celor dou specii genitoare - forma pstilor, de pild, este cea de la ridiche la partea superioar i cea de la varz la partea inferioar. Pseudopoliploidia sau poliploidia fals reprezint fenomenul n care multiplicarea numrului de genomuri se datoreaz unei fisionri a cromosomilor (perpendicular, la nivelul centromerilor) i nu unor dereglri n procesul diviziunii celulare. n consecin, la un pseudopoliploid, mrirea numrului de genomuri nu se regsete n mrirea adecvat a cantitii de ADN. n alt ordine de idei, precizm faptul c, n cadrul cariotipului unei specii, pe lng numrul i tipul cromosomilor, o caracteristic specific o constituie numrul fundamental

de brae (NF). De pild, la o specie cu 2n=10, toi cromosomii fiind metacebtrici, NF=20. n cazul n care o pereche de cromosomi din cei 10 (una din cele cinci perechi) sunt telocentrici, restul fiind metacentrici, NF=18 etc. Evident, n cazurile de pseudopoliploidie, indiferent de numrul de genomuri, NF rmne constant (ca i cantitatea de ADN per celul). De pild, n cazul menionat, diploidul are 2n=10, adic 2x, deci NF=20 (toi cromosomii sunt metacentrici), Prin fisionare la nivelul centromerului, toi cromosomii devin telocentrici. Prin urmare 2n=20, ceea ce ar reprezenta 4x. Dar NF=20, deci este vorba de un 4x fals. Endopoliploidia reprezint fenomenul aa-zisei poliploidii somatice, adic o poliploidizare prin cicluri endomitotice repetate (replicarea cromosomilor n interiorul membranei nucleare). Endopoliploidia nu afecteaz ntregul organism ci, de obicei, anumite celule sau esuturi ale acestuia. Fenomenul a fost constatat i descris, pentru prima oar, de ctre citologul austriac L. Geitler, la insectele acvatice Gerris lateralis i Gerris lacustris, la care s-au identificat celule 512-, 1024- i chiar 2048 ploide, n esutul ovarian. Sunt date n conformitate cu care la specia Chironomus tentans, n glandele salivare, celulele conin 32.768 n. Fenomenul de endopoliploidie a fost observat i la organisme mult mai evoluate, cum ar fi obolanul (Rattus rattus). La angiosperme, endopoliploidia este un fenomen comun. La sfecla de zahr spre exemplu, n endospermul seminelor se ntlnesc celule cu 24.756 n. Aneuploidia (heteropoliploidia) reprezint fenomenul datorat prezenei n plus a 1-2 cromosomi sau lipsei a 1-2 cromosomi dintr-un genotip. Evident, prezena unor cromosomi supranumerari sau lipsa lor, se regsete n augmentarea sau diminuarea coninutului de ADN i n modificarea corespunztoare a numrului fundamental de brae. Dac un individ diploid normal mai poart i numele de disomic (n sensul c fiecare pereche de cromosomi conine doi omologi - unul de origine matern i altul de origine patern), heteroploizii pot fi de dou categorii: hipoploizi i hiperploizi. Hipoploidia se caracterizeaz prin lipsa unuia sau a doi cromosomi din setul diploid. a. Nulisomia (2n 2). n acest caz lipsete una dintre perechile de cromosomi. De exemplu, dac o specie are 2n=10, nulisomicii vor avea 2n=8. n consecin, vom avea o serie de 5 nulisomici diferii (cte unul pentru fiecare pereche: I, II, III, IV i V). b. Monosomia (2n 1). n acest caz, dintr-o pereche de cromosomi lipsete unul. Deci, rmnnd la acelai exemplu, vom avea 10 monosomici diferii (n ideea c cei doi cromosomi ai unei perechi, unul provenit de la mam i unul de la tat, nu sunt identici - unul poate avea genele dominante i cellalt, alelele recesive). c. Dublumonosomia [2n (1+1)]. Semnific lipsa a 2 cromosomi aparinnd la dou perechi diferite. n exemplul nostru, vom avea 40 de dublumonosomici diferii. Hiperploidia reprezint fenomenul datorat unui proces oarecum invers, adic prezena a unul sau doi cromosomi n plus. a. Trisomia (2n+1). La una (n fiecare caz alta) dintre perechile de omologi, n loc de 2 cromosomi vor fi 3. n consecin, vom putea identifica 10 trisomici diferii n cazul n care meninem exemplul speciei cu 2n=10 cromosomi. b. Tetrasomia (2n+2). Presupune dublarea unei perechi de cromosomi (figurat vorbind, reprezint un caz de tetraploidie pentru o pereche de cromosomi). Prin urmare, la 2n=10 vom avea 5 tetrasomici diferii. c. Dublutrisomia [2n+(1+1)]. Reprezint fenomenul invers dublumonosomiei, rezultnd 40 de dublutrisomici diferii, posibili. n contextul acestei problematici precizm faptul c geneticianul E.R. Sears, n anul 1959, a efectuat studii complete i complexe asupra tetrasomiei n cazul speciei Triticum aestivum (2n=42), ocazie cu care a identificat i a descris seria complet de 21 tetrasomici (2n=44). Hipo-hiperploidia (2n ? + ?) reprezint fenomenul rezultat prin combinarea aleatorie a procesului de hipoploidie cu cel de hiperploidie. Adic simultan, la acelai individ, pentru aceeai pereche putem sesiza prezena unui cromosom n plus, n timp ce la o alt pereche un cromosom lipsete etc. Se apreciaz c principala cauz a apariiei aneuploizilor o constituie perturbarea meiozei. n consecin iau natere gamei cu 1-2 cromosomi n plus sau n minus, fenomen ce duce la apariia de indivizi modificai (cu 1-2 cromosomi n plus sau cu 1-2 cromosomi n minus).

Dac la multe vieuitoare, n special la plante, aneuploidia se constituie ntr-o surs important de variabilitate, fiind i unul dintre mecanismele asigurrii apariiei de noi numere cromosomiale de baz (x), la animalele superior organizate, mai precis la om, aneuploidia reprezint o aberaie incompatibil cu viaa normal a individului. Indiferent dac afecteaz autosomii sau heterosomii, aneuploidia reprezint sindroame (boli genetice) deosebit de grave. Spre exemplu, trisomia 21 reprezint sindromul (maladia) Down (cunoscut i sub numele de idioie), indivizii monosomici pentru heterosomi (X0=viabili i Y0=letali) ca i trisomicii (XXX sau XXY) reprezintnd, de asemenea, boli grave (sindromul Turner i, respectiv, Klinefelter). n acest caz, aneuploidia este destul de rspndit n lumea plantelor. Este cunoscut cazul zambilei (Hyacinthus orientalis, 2n=16), introdus n cultur n anul 1560 n Olanda. Pe parcursul timpului, n urma seleciei empirice s-au obinut forme triploide, tetraploide i aneuploide foarte diferite ntre ele din punct de vedere estetic. Cele din urm (cele aneuploide) se multiplic mai ales pe cale vegetativ. 4.2.4. Pseudoaneuploidia Dac la poliploidie sau aneuploidie variabilitatea numeric a genomurilor sau a cromosomilor se regsea ntr-o variabilitate a cantitii de ADN, n pseudoaneuploidie (ca i n pseudopoliploidie) nu se regsete. n consecin, pseudoaneuploidia reprezint un fenomen de fals aneuploidie, datorat fuzionrii sau fisionrii cromosomilor. Spre exemplu, un "monosomic" poate reprezenta, n realitate, rezultanta fuzionrii cromosomilor unei perechi, iar un "nulisomic" poate reflecta rezultanta fuzionrii cromosomilor din dou perechi. n replic, un "trisomic" poate reprezenta, n fond, rezultanta fisionrii unui cromosom, iar un "tetrasomic" poate reflecta rezultanta fisionrii ambilor cromosomi dintr-o pereche sau a 2 cromosomi din dou perechi diferite etc. Desigur, pentru ca cele dou procese antagonice (fisiune i fuziune) s aib o inciden crescut, este important prezena cromosomilor telocentrici (pentru fuziune) sau metacentrici, submediani i subtelocentrici (pentru fisiune). Un element important n stabilirea existenei unei aneuploidii veridice sau a pseudoaneuploidiei, l constituie NF (numrul fundamental de brae). Evident, dac dou specii nrudite au numere diferite de cromosomi dar totalizeaz, n fiecare dintre celule, acelai numr de brae cromosomiale, rezult c ele au luat natere printr-o fals aneuploidie (pseudoaneuploidie). Un exemplu de aneuploidie natural, n cadrul regnului animal, ni-l ofer genul Drosophila. Specia iniial, D. virilis, avea 2n=12. Prin fuziuni cromosomiale succesive, din ea au luat natere speciile: D. pseudoobscura (2n=10), D. melanogaster (2n=8) i D. willistoni (2n=6).

INTREBARI DE VERIFICARE 1. Ce reprezinta mutatiile si care este rolul acestora 2. Care este mecanismul molecular de aparitie al mutatiilor 3. Ce reprezinta mutatiile cromosomiale 4. Care sunt mecanismele de producere a mutatiilor genomice

TEME PENTRU EXAMINAREA FINALA 1. Precizarea rolului si mecanismelor de producere a mutatiilor 2. Clasificarea mutatiilor in functie de cantitatea de material genetic afectata

Unitatea de invatare 5 5. ACIZII NUCLEICI - DETALII STRUCTURALE I FUNCIONALE

5.1.

Acizii dezoxiribonucleici.

Acizii nucleici reprezint punctul nodal n procesul complex al stocrii i perpeturii informaiei ereditare, n succesiunea de generaii, precum i n cascada de procese ce implic exprimarea (fenotipizarea) informaiei genotipice, n fenotipul unui anumit individ. Acizii nucleici sunt macromolecule polinucleotidice. Asamblarea macromoleculelor se efectueaz prin repetiii multiple ale ctorva monomeri care nu sunt altceva dect nucleotizii (mononucleotizii). n funcie de tipurile mononucleotizilor pe seama crora se constituie macromoleculele de acizi nucleici, acetia aparin la una dintre cele dou mari categorii acizii ribonucleici sau acizii dezoxiribonucleici. Dac n privina primei categorii lucrurile sunt clare, n sensul c exist mai multe tipuri de acizi ribonucleici (ARNm, ARNt, ARNr etc), diferite ntre ele att ca structur ct i ca funcii, pentru cea de a doua categorie sunt posibile interpretri i discuii. i iat n ce constau acestea. Macromolecula de acid dezoxiribonucleic, indiferent de origine, are aceeai structur primar i secundar, n sensul c att monocatena ct i dubla elice sunt, mereu, de acelai tip. Difer doar compoziia nucleotidic (ordinea i numrul nucleotidelor), de la o macromolecul la alta. innd cont, ns, de faptul c, chiar n cadrul aceluiai individ, sub raportul lungimii (dat de numrul total de nucleotide) ct i sub aspectul compoziiei nucleotidice concrete (raportul purine: pirimidine, de exemplu), exist diferene de la o macromolecul la alta, se poate folosi i expresia acizi dezoxiribonucleici. 5.1.1. Compoziia acizilor dezoxiribonucleici Indiferent dac este vorba de acizii ribonucleici sau de cei dezoxiribonucleici, la baza constituirii lor stau trei componente (trei molecule) i anume: - un radical al acidului ortofosforic (H3PO4) - o pentoz (riboza pentru ARN, dezoxiriboza pentru ADN) - repetiii variabile (numeric) a patru baze azotate: dou purinice i dou pirimidinice (A, G, T i C pentru ADN, A, G, U i C pentru ARN) Evident, cele trei categorii de componente se asambleaz, n succesiuni diferite, pentru diverse molecule, i formeaz monocatena. n cazul acidului dezoxiribonucleic, dou catene, complementare, se asambleaz n dubla elice, formnd macromolecula definitiv. Succesiunea (ordinea) de asamblare se deruleaz n urmtoarele etape: PENTOZ + BAZ AZOTAT = NUCLEOSID nucleosid + radicalul acidului ortofosforic = nucleotid nucleotid + nucleotid + ......+ nucleotid = caten polinucleotidic Pentoza n componena acidului dezoxiribonucleic intr dezoxiriboza, mai exact D-2 dezoxiriboza. Dezoxiriboza ca i riboza, de altfel, face parte din grupa monozaharidelor cu 5 atomi de carbon n molecul, de unde i numele de pentoze. n constituia acizilor nucleici pentozele se gsesc sub forma furanozic. Inelul furanozic are atomii situai ntr-un singur plan. Numerotarea atomilor de carbon se face de la 1 la 5, spre a se deosebi de numerele 1, 2, 3, 4 etc., utilizate n cazul bazelor azotate purinice i/sau pirimidinice, cu care se asociaz pentoza pentrua forma nucleosidele. Atomul C2 este singurul asimetric i confer posibilitatea apariiei izomerilor levogiri i dextrogiri. Merit subliniat faptul c n acizii nucleici sunt prezeni doar

izomerii dextrogiri. Pe de alt parte, n funcie de poziia gruprii OH de la C1 fa de planul molecular, pentozele sunt de dou tipuri i Diferenele dintre cele dou constau n aceea c gruparea OH se afl deasupra planului molecular (tipul ) sau sub acesta (tipul ).Diferenele dintre cele dou tipuri mai provin i din faptul c intensitatea devierii luminii polarizate este alta la fiecare dintre ele forma are o putere rotatorie mai mare. Precizm, din nou, c n acizii nucleici sunt prezente doar pentozele de tip .

HO
HO CH2 H O H OH

CH2 H OH

O H

OH

OH OH D riboza

- 2 deoxi riboza

Fig.15.. Structura a pentozelor din acizii ribonucleici i dezoxiribonucleici

1
OH
Fig.16. Forma a pentozei

Bazele azotate Att ADN-ul ct i ARN-ul conin, n componena lor, patru baze azotate dou purinice i dou pirimidinice.
N

N
N
N H

Purina

Pirimidina
Fig.17. Nucleul purinic i nucleul pirimidinic.

Bazele azotate purinice care intr n componena acidului dezoxiribonucleic sunt adenina, notat prescurtat prin A (6-aminopurina) i guanina, notat prescurtat prin G (2-amino-6oxipurina) Dintre bazele azotate pirimidinice, n compoziia acidului dezoxiribonucleic intr timina, notat prescurtat prin T (5-metil-dioxipirimidina) i citozina, notat prescurtat prin C (2-oxi-4aminopirimidina). O NH
2

N NH

N N

N NH
Fig.18. Bazele azotate purinice

NH N NH2

Adenina

Guanina

NH2 N NH O

Citozin

O NH NH O H 3C NH NH O O

Uracil

Timin
Fig.19. Bazele azotate pirimidinice

Practic, n componena oricrei macromolecule de acid dezoxiribonucleic intr, obligatoriu, toate cele patru baze azotate menionate, dar n ordine i cantitate dependente de specia creia i aparine individul din celulele s-a extras acidul supus analizei. Alturi de aceste baze, n dezoxiribonucleotizi, se pot gsi (n calitate de agliconi) i alte baze purinice i/sau pirimidinice (aproximativ 50 de tipuri diferite), denumite baze rare (anormale sau minore). Radicalul acidului ortofosforic. Cea de a treia component, prezent att n acizii ribonucleici ct i n cei dezoxiribonucleici, o reprezint radicalul acidului ortofosforic - H3PO4. Acidul ortofosforic are trei radicali i anume : H2PO4-, HPO4- - i PO4- - - i urmtoarea formul structural, care-i confer calitatea de a uni dou molecule adiacente de nucleoside, cu eliberare de molecule de ap (H2O). Acidul fosforic, prezent n catena acizilor nucleici sub form de ortofosfat, i asigur macromoleculei un puternic caracter acid precum i prezena a numeroase sarcini negative. H O O P OH Figura 2.8. Formula structural a acidului ortofosforic O H Nucleosidele Structurarea unei catene de acid dezoxiribonucleic are loc n etape succesive, etape n care componentele primare (bazele azotate, pentoza i radicalul acidului ortofosforic) se unesc ntre ele i dau natere la compui din ce n ce mai compleci. Nucleosidele nu sunt altceva dect rezultanta combinrii unei baze azotate cu pentoza, printr-o legtur N-glucidic. Cu foarte rare excepii, nucleosidele sunt -D-2-dezoxiribofuranozide (-D-ribofuranozide n cazul ARN-ului). Numele nucleosidului deriv din numele bazei azotate. Tot n funcie de baza azotat, nucleosidele pot fi purinice sau pirimidinice.

Legtura de tipul N-glucid, din cadrul nucleosidelor pirimidinice, se formeaz ntre N3 al nucleului pirimidinic i C1, al -pentozei. Este, deci, o legtur N3 - C1, (vezi figura). n cazul nucleosidelor purinice legtura N-glucidic se formeaz ntre N9 al heterociclului purinic i C1, din pentoz. Pe aceast cale iau natere toate dezoxiribonucleosidele: dezoxiadenozina, dezoxiguanozina, dezoxicitidina i dezoxitimidina. Nucleosidele libere, asemenea purinelor sau pirimidinelor libere, se gsesc n cantiti infime n celule, ca produi ai hidrolizei enzimatice sau chimice a compuilor imediat superiori nucleotidele. Nucleosidele sunt mult mai solubile n ap dect bazele azotate pe care le conin. Ele se pot separa i identifica uor, prin metode cromatografice. Asemenea glicozidelor, nucleosidele sunt relativ stabile n soluii alcaline. Nucleosidele purinice sunt destul de uor hidrolizate de acizi, formnd baze libere i pentoze. Nucleosidele pirimidinice sunt rezistente la hidroliza cu acizi. Ambele tipuri de nucleoside sunt, ns, hidrolizate specific de ctre nucleosidaze.
NH2 C NH2 N C CH HC N C N N HC N C C CH C N N

NH2 N1
2 5` 6 5 4

O
O H H
3`

N
1`

HO CH2
4`

HOCH2 O H C C H H C OH CH OH

HOCH2 O H C C H H C OH
2`

OH

2` H OH

CH H

Fig. 20. Legturile N-glucidice din nucleotide. Citidina (citidin-N3-C1-ribofuranozid) n stnga i Adenozina (adenin-N9C1--ribozilfuranozid) la mijloc i n dreapta Dezoxiadenozina (dezoxiribozilfuranozid).

Nucleotidele Nucleotidele (nucleotizii - dup ali autori), a doua etap n asamblarea componentelor acizilor nucleici, sunt esteri ai acidului ortofosforic cu nucleosidele, aa cum reiese din figura urmtoare. n funcie de nucleosidul care este esterificat, nucleotidele pot fi ribonucleotide sau dezoxiribonucleotide. De asemenea, pe aceleai considerente, ele pot fi clasificate n purinice sau pirimidinice. Nucleotidele pot fi obinute prin hidroliza chimic sau enzimatic a acizilor nucleici, cu condiia ca s nu fie afectat gruparea fosfomonoester. Nucleotizii pirofosforici sunt de prim importan n metabolismul organismelor animale i/sau vegetale. Rolul lor este esenial n respiraie deoarece au calitatea de acumulatori de energie i donatori de resturi fosforice, fiind nelipsii i n procesele de fosforosintez precum i n cel de fosforoliz. Dar principalul lor rol este n constituirea acizilor nucleici, acizi pentru care reprezint unitile primordiale, pietrele de construcie.
OH HO P O O CH2 H H OH
Fig. 21. . Nucleosid 5 fosfat

OH HO P O O CH2 H H O HO P OH O O O H H baz

O H

baz H OH

Fig.22. Nucleosid 3, 5 difosfat

Tab. 21. Componentele acizilor nucleici n ordinea complicrii compoziiei lor

Acidul nucleic

Bazele azotate Purinice Adenina (A) Guanina (G)

Pentozele

Nucleosidele

Nucleotidele Acidul dezoxiadenilic (dAMP) Acidul dezoxiguanilic (d GMP) Acidul dezoxicitidilic (dCMP) Acidul dezoxitimidilic (dTMP)

Dezoxiadenozina Dezoxiguanozina Dezoxiriboza Dezoxitimidina Dezoxicitidina

AND

Pirimidinice Timina (T) Citozina (C)

Purinice Adenina (A) ARN Guanina (G) Pirimidinice Uracilul (U) Riboza

Adenozina Guanozina

Uridina

Citozina (C)

Citidina

Acidul adenilic (AMP) Acidul guanilic (GMP) Acidul uridilic (UMP) Acidul citidilic (CMP)

In condiii naturale, sunt prezente doar nucleotidele de tipul 5, fapt pentru care, spre deosebire de ali autori, am menionat continuu c asamblarea nucleotidelor n monocatena acidului nucleic are loc, ntotdeauna, n direcia 5 3 . Ribonucleotidele i dezoxiribonucleotidele, libere, se gsesc n celulele eucariote n cantiti destul de nsemnate. Structurarea monocatenei (structura primar a ADN-ului). Acizii nucleici sunt polinucleotide rezultate prin stabilirea de legturi covalente ntre nucleotidele ce se succed n lan. Gruparea 5, - hidroxi a unui nucleotid se leag la gruparea 3, - hidroxi a nucleotidului urmtor, prin legtur fosfat diesteric, aa cum este redat n figura urmtoare Trebuie remarcat i menionat faptul c orice caten polinucleotidic are o polaritate (o direcie) specific, n sensul c toate legturile internucleotidice au aceeai orientare n lungul catenei. n consecin, fiecare caten polinucleotidic va avea dou capete : captul 5,, la care gruparea -OH de la C5, este liber i captul 3, la care gruparea -OH de la C3, nu este angajat ntr-o legtur internucleotidic.

Fig. 23. Reprezentarea schematic a unui fragment din monocatena de ADN

n mod pur convenional, structura unei catene polinucleotidice este redat, ntotdeauna, cu captul 5, n stnga i cu cel 3, n dreapta. De exemplu, succesiunea ACGAC semnific faptul c adenina are grupa 5, - OH neangajat n legtura cu alt nucleotid, n timp ce citozina are liber gruparea 3, - OH. Dou lanuri polinucleotidice sunt antiparalele (poziia normal a catenelor n ADN) atunci cnd unul are nucleotidele orientate n direcia 5, 3,, iar cellalt n direcia 3,5, Structura secundar (bicatenar) a ADN-ului. Aa cum am anticipat n rndurile anterioare, explicnd ce nseamn catene antiparalele, precizm c, cu rare excepii, ADN-ul are structur bicatenar. La definirea acestui mod de organizare, propus i argumentat de ctre Watson i Crick, nu s-a ajuns instantaneu ci pe baza acumulrii i elucidrii unui lung ir de fapte. Reamintim, n primul rnd, regula lui Chargraff, regul n conformitate cu care n macromolecula acidului dezoxiribonucleic rata purine/pirimidine este ntotdeauna egal cu 1. Apoi, n cadrul aceluiai tip de baze, purinice sau pirimidinice, rata bazelor poate varia deosebit de puternic (n cazul bazelor purinice, de pild, coninutul de adenin poate s fie foarte diferit de cel de guanin, iar n cazul bazelor pirimidinice, coninutul n timin poate fi foarte diferit de cel n citozin). S-a constatat existena unei echivalene reale ntre bazele ce au gruparea amino n poziia C6 i cele ce au gruparea ceto n poziia C6. Pe de alt parte, analizndu-se ADN-ul extras din aceeai surs, s-a constatat c raportul AT/GC rmne mereu acelai, suferind variaii mari n cazul acizilor dezoxiribonucleici extrai din surse diferite. Toate aceste fapte au fost exploatate i interpretate, ca atare, de Watson i Crick, atunci cnd au elaborat conceptul structurrii secundare dublu-elicoidale a ADN-ului (double strand structure). n conformitate cu aceast concepie, macromolecula de ADN este alctuit din dou catene, cu structur primar, unite ntr-o molecul unic, dublucatenar, prin legturi de hidrogen (vezi figura anterioar) ntre o baz purinic dintr-o caten i una pirimidinic din cealalt caten. n esen, structura secundar a ADN-ului se nate prin asamblarea a dou catene polinucleotidice, cu rsucire spre dreapta, orientate antiparalel Conceptul dublei elice, fundamentat de Watson i Crick, se bazeaz pe dou caracteristici fundamentale i anume: - complementaritatea celor dou catene i - orientarea n sens opus a legturilor 5, - 3, n cele dou catene. Prin urmare, n spaiu, cele dou catene sunt dispuse astfel nct legturile chimice ale uneia sunt n direcie opus fa de cele ale celeilalte. Spre exemplu, dac lanul din stnga are grupele fosfat esterificate la C5,din nucleotidul inferior i la C3, din nucleotidul adiacent superior, lanul din dreapta va fi orientat complet invers.

Fig. 24 Punile de H ntre monocatenele din cadrul ADN bicatenar

Dup Anfinsen, 1959 (citat de Moraru i Antohi, 1966) Complementaritatea celor dou catene sugereaz faptul c nu exist restricii pentru ordinea (succesiunea) i numrul nucleotidelor pe una dintre catene dar c, pe cealalt, att ordinea ct i numrul nucleotidelor sunt determinate, strict, de cele ale primei catene. n consecin, cele dou catene au, n mod obligatoriu, acelai numr de nucleotide complementare. Este evident c cele dou catene sunt meninute mpreun prin fora punilor de hidrogen - cte dou ntre adenin i timin i cte trei ntre guanin i citozin (aa cum este specificat n figura precedent). Pe de alt parte, datorit "constrngerilor" stereochimice, purinelor de pe o caten le corespund, n mod obligatoriu, pirimidine pe catena complementar. Astfel, coninutul n A al unei catene este egal cu coninutul n T al catenei complementare, coninutul n G al celei dinti fiind, la rndul su, egal cu coninutul n C al celei de a doua . De aici rezult c numrul bazelor purinice (A+G) este egal cu numrul bazelor pirimidnice (C+T). Rezult c suma A+C este egal cu suma G+T i c rapoartele A/T i G/C sunt egale cu 1, raportul A+G/T+C fiind, de asemenea, egal cu 1. Catenele complementare nu sunt, deci, identice din punctul de vedere al bazelor pe care le conin. De exemplu, dac o caten are secvena de baze GCTGCCAAT, cealalt caten va avea, n mod obligatoriu, secvena CGACGGTTA . Fiind triple, legturile dintre guanin i citozin sunt mult mai stabile conferind, totodat, o mai mare stabilitate dublului helix i influeneaz proprietile fizice, chimice i biologice ale macromoleculei. n situaia normal (A-T i G-C) distanele interatomice i unghiurile de nclinare ale bazelor sunt aproximativ aceleai, dei n perechea GC bazele sunt puin mai apropiate dect cele din perechea A=T, apropiere care nu influeneaz ansamblul macromoleculei.

Figura 25. Dispunerea antiparalel a catenelor i formarea punilor de hidrogen ntre catenele complementare de ADN

Figura 26. Structura paranemial (stnga) i plectonemial (dreapta). A i B = catenele complementare Dup Moraru i Antohi, 1966

Structura dublu helicoidal mai este cunoscut i sub numele de structur plectonemial (n grecete plecto = "mpletire" i nema = "fir"). Relund i sintetiznd datele prezentate pn aici, rezult c "scheletul" ("coloana vertebral", backbone n limba englez) este alctuit din dou catene polinucleotidice, care se rsucesc spre dreapta (right handed), n jurul unui ax comun (imaginar). Prin urmare dublul helix este dextru. Cele dou catene, denumite catena Watson i catena Crick sunt rsucite n mod plectonemial (adic sunt mpletite, sunt inseparabile) i formeaz dubla elice regulat, cu un diametru de 2,0 nm, care prezint dou tipuri de adncituri - unele mari (deep grove sau major grove) i altele mici, adic mai puin adnci (minor grove sau shallow grove). O adncitur mare are 2,2 nm , iar una mic are 1,2 nm. n cadrul fiecrei catene, planul suprafeei bazelor azotate este perpendicular pe axul macromoleculei. Distana dintre planurile a dou baze adiacente este de 0,34 nm.ntr-o tur a helixului se ncadreaz 10 perechi de baze, fapt pentru care pasul helixului este de 3,4 nm..Deoarece fiecare pereche de baze este rotit cu 360 (o tur de helix are 3600) n raport cu perechile adiacente, n redarea schematic perechile succesive apar sub forma unor linii de lungimi diferite. Macromolecula de ADN se caracterizeaz printr-o nalt stabilitate. Specialitii sunt de prere c aceast stabilitate este datorat la cel puin trei categorii de cauze i anume: legturile de hidrogen dintre nucleotidele complementare, legturile van der Waals i atracia dipol-dipol dintre planurile bazelor adiacente (suprapuse, n cadrul aceleiai catene) i orientarea componentelor hidrofile ale catenei (scheletul glucido-fosforic) ctre exterior i a celor hidrofobe ctre interiorul helixului. Orientarea scheletului glucido-fosforic spre exterior (spre ap) i orientarea bazelor spre interiorul dublului helix, confer un maximum de stabilitate pentru macromoleculele de acid dezoxiribonucleic. Greutatea molecular a ADN-ului Analize detaliate, efectuate pe ADN-ul provenit din diverse surse, au demonstrat c greutatea molecular a acestui acid variaz n funcie de : - specia creia i aparin indivizii de la care s-au prelevat probele, - metoda de extracie utilizat, - metoda prin care s-a determinat greutatea molecular. Prin urmare, n funcie de origine, macromoleculele de ADN sunt diferite, adic ADN-ul este heterogen sub aspectul greutii moleculare.

Caracteristici chimice ale ADN-ului Avnd n vedere imensitatea macromoleculei, faptul c n ap toate gruprile fosfat din scheletul glucidofosforic ionizeaz i dau o ncrctur electronegativ ridicat, n mod practic ADN-ul este insolubil n apa pur. Adugarea de NaCl determin saturarea rapid a sarcinilor electrice ale ADN-ului i interaciunile intermoleculare dispar. Din aceast cauz dizolvarea ADNului este posibil numai n soluiile apoase saline. Pe de alt parte ns, creterea concentraiei saline peste anumite valori determin o scdere a solubilitii ADN-ului. n UV soluia de ADN prezint o band de absorbie de 2600 . Structura dublu helical a ADN-ului manifest un grad destul de ridicat de instabilitate n soluii acide diluate sau n soluii alcaline i este uor distrus prin nclzire, la pH neutru. Denaturarea i renaturarea ADN-ului Denaturarea ADN-ului Temperaturile nalte (cuprinse ntre 63 i 1000C), scderea constantei dielectrice a mediului, modificarea pH-ului, prezena acizilor, alcoolilor sau cetonelor n soluie etc., determin ruperi ale legturilor de hidrogen dintre nucleotidele complementare (ceea ce duce la separarea celor dou catene), precum i la fragmentri ale macromoleculei. Denaturarea prin ruperea legturilor de hidrogen dintre cele dou catene este consemnt n literatura de specialitate prin termenul englezesc melting, ceea ce (n traducere) nseamn "topire". Procesul denaturrii decurge astfel. La nceput, cele dou catene care alctuiesc dublul helix se deruleaz pe anumite poriuni i rmn reunite pe altele. Poriunile derulate iau conformaii ntmpltoare care se modific permanent. Apoi se produce ruperea legturilor (punilor) de hidrogen dintre cele dou catene derulate. Temperatura la care cel puin jumtate dintre moleculele de ADN sunt denaturate poart numele de temperatur medie de topire (n englez melting midpoint), temperatur de tranziie (Tt) sau temperatur de echilibru ntre ADN-ul dublu catenar i ADN-ul monocatenar. Convenional i universal este, ns, notaia Tm. Valoarea temperaturii medii de topire este dependent de numrul perechilor GC, n sensul c majorarea numrului acestor perechi de nucleotide induce o cretere a stabilitii macromoleculei i, implicit, o cretere a temperaturii medii de topire. Dinamica procesului denaturrii termice poate fi pus n eviden i prin capacitatea de absorbie a radiaiilor UV, capacitate care se msoar la lungimea de und de 260 nm i care crete corelativ cu coninutul macromoleculei de ADN n perechi de baze de tipul A=T, putnd ajunge pn la valoarea de 40%. Creterea capacitii de absorbie poart numele de efect hipercromic i se poate ajunge la punctul n care se constat un echilibru ntre absorbia datorat moleculelor de ADN complet denaturat i absorbia datorat unui numr echivalent de nucleotide libere. Efectul hipercromic presupune i alte modificri ale ADN-ului, dintre care reamintim: diminuarea vscozitii, diminuarea masei moleculare cu aproximativ 50% etc.

Figura 27.. Curba de topire a ADN-ului n funcie de temperatur ( Tm ) i sugerarea formelor i mrimilor posibile ale fragmentelor moleculare aprute prin denaturare Dup Hartl, Freifelder & Snyder, 1988

Renaturarea ADN-ului. Comportarea ADN-ului denaturat, n continuare, depinde aproape n totalitate de tratamentele la care va fi supus soluia n care se afl. Astfel, dac se procedeaz la o rcire brusc, catenele separate prin nclzirea anterioar rmn separate - adic denaturarea devine ireversibil. Dimpotriv, dac se procedeaz la o rcire lent, scznd temperatura cu cca 200C fa de cea la care a avut loc "topirea", se constat refacerea unor conexiuni ntre cele dou catene, adic se refac legturile ntre bazele complementere i., n consecin, se reface structura dublu catenar. Acest proces este cunoscut sub numele de renaturare (reannealing n limba englez) Procesul renaturrii se deruleaz n dou etape: - asamblarea n perechi a unui numr mic de nucleotide, avnd ca rezultat formarea unor secvene dublu catenare scurte i - accelerarea asamblrii dublu helixului, prin legarea succesiv a nucleotidelor complementare n perechi. Ne putem imagina procesul, n ntregul su, ca pe cel al nchiderii unui fermoar. Un fenomen deosebit de interesant i cu profunde conotaii teoretice i practice, legat de procesele denaturrii i renaturrii, este acela al hibridrii ADN-ADN (de proveniene diferite), precum i acela al hibridrii ADN-ARN (probleme asupra crora vom reveni). n primul caz se pot stabili gradele de nrudire ntre dou specii, n cel de al doilea se poate evidenia corespondena ADN-ARNm, coresponden cu implicaii deosebite pentru descifrarea secvenei genice, pentru estimarea procesului reverstranscripiei etc. Pentru ca procesul renaturrii s aib loc (s se declaneze), sunt necesare cteva condiii i anume: - salinitatea soluiei s fie suficient de mare (> 0,25 M), pentru a neutraliza ncrcturile negative ale gruprilor fosfat care pot provoca reacii de respingere ntre catenele complementare i - temperatura trebuie s rmn suficient de ridicat pentru a rupe legturile de hidrogen care pot aprea, ntmpltor, ntre secvene scurte de baze, n interiorul aceleiai catene, dar nu prea mare pentru a nu destabiliza legturile dintre bazele situate pe catenele complementare. De aceea, temperatura optim pentru renaturare este socotit a fi aceea care este mai sczut cu cca. 200C fa de Tm. Viteza de renaturare a unei macromolecule de ADN depinde, ntr-o mare msur, de corectitudinea refacerii primelor perechi de nucleotide complementare. Aceasta este influenat, la rndul ei, de concentraia ADN-ului n soluie. Prin testele de renaturare se poate stabili, cu destul exactitate, o hart a deleiilor, duplicaiilor, translocaiilor, substituiilor sau inversiilor - toate avnd ca rezultant un fenotip mutant. n mod concret se procedeaz astfel. Se denatureaz i apoi se renatureaz un amestec de ADN de la fenotipurile slbatic i mutant. Prin renaturare se formeaz un heteroduplex. Adic, reasocirea catenelor complementare este perfect n cazul zonelor "slbatice", dar lipsete n zonele n care, pe una dintre catene exist mutaii. n acest caz, heteroduplexul prezint una sau mai multe bucle (n limba englez loop).

Replicarea ADN Macromolecula de ADN conine, codificat (aa cum vom vedea i vom demonstra ulterior), informaia ereditar caracteristic indivizilor unei anumite specii. Prin urmare, pentru ca aceast informaie ereditar s poat fi etalat, trebuie s aib posibilitatea de a circula, de a fi transmis att n succesiunea de generaii celulare n cadrul unui individ, ct i n succesiunea de generaii de indivizi, n cadrul populaiei unei specii. Procesul circulaiei informaiei ereditare, pe canalul genetic, este dependent de procesul autoreplicrii ADN-ului, suportul material al mesajului informaional. Autoreplicarea semiconservativ presupune c fiecare caten, din cadrul dublului helix, servete drept matri pentru asamblarea unei noi catene. n consecin, dintr-o macromolecul ADN i din nucleotidele libere (neasamblate) existente n celul, rezult dou macromolecule noi, identice ntre ele i cu macromolecula de origine, macromolecule n care una

dintre catene este veche (adic provine de la ADN-ul parental i una este nou, adic asamblat de novo, din nucleotidele libere existente n celul, pe principiul complementaritii bazelor, utiliznd ca matri catena veche). Procesul autoreplicrii este destul de complex, pe parcursul lui aprnd o multitudine de aspecte privitoare la geometria macromoleculei, la enzimele implicate etc. Dar, prima condiie pe care trebuie s o respecte un model propus pentru replicarea ADN-ului, este aceea a asigurrii duplicrii (dublrii) secvenei de nucleotide din fiecare caten parental. n respectiva duplicare se impune respectarea specificitii mperecherilor: A=T i GC O alt condiie, de care trebuie s se in seama, este aceea a prezenei ADN-polimerazei, enzima care asigur creterea catenei prin adiia (la captul crescnd al catenei) monomerilor. Producerea de molecule "fiice", pe baza unei molecule "parentale" genereaz probleme de topologie, care decurg din organizarea helicoidal, circularizarea (uneori) i mrimea considerabil a macromoleculei de ADN. Modalitatea semiconservativ de autoreplicare presupune, ca o condiie sine qua non, funcionarea catenelor vechi drept matrie (template n limba englez) pentru catenele complementare ce se vor forma de novo. Fiecare nou caten este "legat", la catena veche, pr in puni de hidrogen. Mai exact, fiecare nou nucleotid, adugat la noua caten, este legat prin puni de hidrogen la nucleotida complementar (de pe catena complementar), care-i "dicteaz" poziia n care va fi inserat, i prin legturi fosfo-esterice la nucleotida adiacent de pe catena n formare.

Figura 28. Redarea schematic a autoreplicrii macromoleculei de ADN. Partea de jos, cu rsucirea spre dreapta = macromolecula parental. Prile de sus ( stnga + dreapta ) = macromoleculele fiice, n formare, cu o caten veche i o caten nou, n cretere.

5.2.

Acizii ribonucleici

La nceputul capitolului dedicat noiunilor de genetic molecular, precizam c acizii nucleici sunt de dou mari categorii i anume: acizi dezoxiribonucleici i acizi ribonucleiici. Reamintim c, sub aspectele compoziiei i structurii, deosebirile dintre cele dou categorii sunt clare - acizii dezoxiribonucleici au dezoxiriboz i bazele azotate A,G,T i C n nucleotidele lor, avnd, totodat, structurare bicatenar (uneori monocatenar); acizii ribonucleici sunt, de obicei, monocatenari i au, n componena nucleotidelor lor, riboza i bazele azotate A,G,C i U. Aceste diferene, de compoziie, structur i conformaie, determin diferene funcionale marcante ntre cele dou categorii de acizi nucleici, diferene ce le asigur roluri complementare n procesele vitale. Pentru a surprinde i a explica rolul acestor dou categorii de acizi nucleici, n fluxul de

procese prin care se asigur manifestarea informaiei ereditare profunde la nivelul individului ce o deine, ntre graniele de variabilitate caracteristice speciei din care face parte individul, este necesar detalierea unor aspecte ale structurrii i funcionalitii acizilor ribonucleici, precum i o detaliere a mecanismelor implicrii lor n procesul complex al sintezei proteice etc. Acidul ribonucleic mesager (ARNm) Acidul ribonucleic mesager deine unul dintre rolurile cheie n procesul circulaiei informaiei ereditare, pe canalul genetic (mai exact spus n circulaia informaiei ereditare, n frocesul fenotipizrii genotipului, n contextul dezvoltrii ontogenetice). ARNm este ubiquitar (n lumea vie) i are, oriunde s-ar gsi, acelai rol, aceleai caliti funcionale. Compoziia i organizarea macromoleculei de ARNm Cnd vorbim despre organizarea acidului ribonucleic mesager ne referim la conformaia catenei, compoziia ei n nucleotide (secvena bazic) fiind cea precizat anterior - copie complementar a catenei de ADN pe care s-a asamblat. ARNm mai este cunoscut i sub numele de ARN informaional sau ARN translocator deoarece, aa cum vom vedea n continuare, are rolul de a prelua i a transfera informaia ereditar, de la ADN ctre proteine. Compoziia nucleotidic (secvena bazelor azotate n macromolecul) a macromoleculelor de acid ribonucleic mesager, ca a oricrui alt tip de acid ribonucleic de altfel (vezi tabelul 25) este deosebit de variabil, nu numai n funcie de sursa din care este extras i purificat, ci i n cadrul aceleiai surse, n funcie de secvena nucleotidic din ADN, pe care o copie (pe principiul complementaritii) la un moment dat. Singura certitudine, relativ la componena nucleotidic a acestui tip de acid ribonucleic, este aceea c nucleotidele din care se asambleaz catena sunt: A, G, C i U. Mai exact spus, n procesul asamblrii, pe matria constituit dintr-o caten de ADN, pe principiul complementaritii bazelor, n dreptul A se va cupla U, n dreptul T se va cupla A, n dreptul G se va cupla C i n dreptul C se va cupla G. Prin urmare, dac secvena nucleotidic a catenei ADN va fi ..AAATCGTTGGACAGCA.., secvena nucleotidic complementar a ARN mesager va fiUUUAGCAACCUGUCGU.., procesul concret al transcripiei fiind sugerat n figura care urmeaz. ARN, asemenea ADN, este alctuit din nucleotide. Macromolecula sa este lung (de dimensiuni variabile), ne ramificat i se formeaz prin legturi fosfodiesterice de tipul 3 5 Se mai impune nc o precizare. Nucleotidele din care se constituie ARN-ul, indiferent de tip (mesager, transportor sau ribosomal), sunt ribonucleotide, adic au pentoza sub form de riboz, n componena lor. n rest, radicalul fosforic este acelai ca la ADN (radicalul acidului ortofosforic), bazele azotate fiind cele precizate anterior.

Figura 29. Asamblarea macromoleculei de ARNm pe principiul complementaritii baz elor, pe catena de ADN, care servete ca matri

ARNm reprezint, sub aspect cantitativ, cca 3% (ntre 2,5% i 5%) din totalul ARN-ului celular. Locul sintezei sale, spre deosebire de ali acizi ribonucleici, este n nucleul celular (n nucleu se afl cromosomii, principalii deintori de ADN i este normal ca ARNm, a crui sintez este dependent de matria ADN, s fie sintetizat n nucleu). n catena de ARN, ribonucleotidele se leag, una de alta, prin puni fosfat Bineneles, legarea ribonucleotidelor ntre ele, prin puni fosfodiesterice, se realizeaz sub aciunea catalizatoare a enzimei specifice (polimeraza ARN dependent de ADN care catalizeaz sinteza de ARN n prezena ADN), aa cum este redat n figur. Monocatena care s-a format, n condiiile precizate, reprezint structura primar a ARNm. Studiul i caracterizarea acestei structuri sunt relativ dificile, deoarece, pe de o parte, sinteza propriu-zis se desfoar cu o vitez destul de mare i, pe de alt parte, durata existenei (perioada de njumtire) a macromoleculei este deosebit de scurt (ntre 2,5 minute, la microorganisme i cel mult cteva zile, la reticulocitele anucleate). Ambii parametri (viteza de sintez i timpul de existen) sunt dependeni (sau corelai cu) de durata ciclului celular i de rata diferenierii celulare, n ontogenie. Dei are o existen destul de efemer, acidul ribonucleic mesager este, de obicei, asociat cu o protein protectoare, numit informozom (care-l protejeaz mpotriva degradrii enzimatice). ARNm este produs (sintetizat) n celul, n timpul interfazei (din ciclul celular), sub form monocatenar. Existena sa temporal este scurt. Exist, ns, corelaii clare ntre prezena ARNm i procesul sintezei proteice, att n sisteme acelulare ct i (mai ales) n celula vie. ARNm reprezint matria pe care se asambleaz lanul polipeptidic.
NH2 N N

Adenin

O O P OH O O P OO OH O H

NH2

O H H N

Citozin
O O

O H H O O P OH O O P OO OH O H OH H H

NH

Guanin
N N O NH2

O H H N

NH

O H H O O P OOOH H H

Uracil

Figura 30. Un fragment dintr-o macromolecul de ARN. Punile fosforice sunt n zona haurat. Dup Watson & co, 1987

Dac am ncerca s rezumm principalele caracteristic ale macromoleculei de ARNm, ar trebui s menionm, obligatoriu, urmtoarele: - metabolizarea sa extrem de rapid, n cadrul celulei; - compoziia nucleotidic identic uneia dintre catenele de ADN (dar complementar celeilalte) care provine (a fost extras) din aceeai surs (din celulele aceluiai individ); - greutate molecular extrem de heterogen (cuprins ntre 105 i 4 x 106); - capacitate a de a stimula sinteza de proteine, proces n care ndeplinete rolul de matri pe care se ataeaz uniti ribosomale (formndu-se polisomi). Ulterior, prin cercetri adecvate, s-a demonstrat c ARNm ndeplinete rolul de matri numai atunci cnd este ataat de ribosomi. De obicei (vezi concluziile anterioare) ARNm se ataeaz la cel puin doi ribosomi (de obicei la mai muli) simultan i formeaz un c omplex care rezist la dezintegrarea datorat scderii concentraiei ionilor de magneziu. Acest complex

poliribosomic sedimenteaz, la ultracentrifugare, mai rapid dect ribosomii singulari. S -a mai constatat c, sub aspectul sintezei proteice, agregatele poliribosomice (polisomice) sunt mai active dect agregatele de ARNm cu unul sau doi ribosomi.

Figura 31. Redarea schematic a unui complex polisom - ARNs. Dup Moraru i Antohi, 1966

Compoziia i organizarea moleculei de ARNs Acidul ribonucleic solubil, cunoscut i sub numele de acid ribonucleic transportor (ARNt), este mai puin variabil, ca greutate molecular i ca numr de nucleotide, dect ARNm . n genere, moleculele de ARNs sunt alctuite din 67 de nucleotide. n plus, acidul ribonucleic solubil (transportor) are o structurare secundar, nu rmne monocatenar liniar, cum este acidul ribonucleic mesager. Prin urmare, dei n principiu sunt monocatenare, moleculele de acizi ribonucleici au configuraie tipic macromolecular, ceea ce presupune i existena unei structuri secundare Acidul ribonucleic solubil, sau de transport (transfer), are rolul de a transporta acizii aminici (aminoacizii) la locul sintezei proteice (la complexul polisomic), de aici provenindu-i numele. ARNt reprezint 10-15% din totalul ARN-ului dintr-o celul. Pentru fiecare dintre cei 20 de aminoacizi existeni n lumea vie exist o molecul de ARNs, diferenele dintre moleculele reprezentnd diferii aminoacizi fiind date de o triplet nucleotidic, plasat mereu n acelai situs, cunoscut sub numele de anticodon sau nodoc. Toate cele peste 20 de tipuri de ARNt, indiferent de proveniena lor, au gruprile terminale, ale lanului polinucleotidic, identice. Aminoacizii sunt ataai la ARNt prin legturi nalt energetice stabilite ntre gruparea carboxil a aminoacidului i hidroxilul terminal 3' al acidului ribonucleic transportor. ARNt este activat i legat cu aminoacidul n dou etape succesive, ambele catalizate de aceeai enzim aminoacil-ARNt-sintetaza (pentru fiecare dintre cei 20 de aminoacizi). n prima etap a procesului este activat aminoacidul, utilizndu-se energia furnizat de ATP.

Fig 32. Redarea schematic a secvenei nucleotidice i a configuraiei sub form de frunz de trifoi,pentru ARNt de la Saccharomyces cerevisiae, care transport alanina, la locul sintezei proteice. n caset sunt menionate nucleosidele modificate

Dup Snustad, Simmons & Jenkins, 1997

Aminoacil sintetaza Aminoacid + ATP Aminoacid AMP + PP Complexul AA AMP nu este eliberat de ctre enzim nainte de a se derula i cea de a doua etap, aceea a legrii ARNt . Aminoacil sintetaza AA AMP + ARNt AA ARNt + AMP Complexul AA ARNt reprezint substratul pentru sinteza polipeptidic, n polisomi. Fiecare ARNt activat este capabil s fie recunoscut la nivelul ribosomului. Compoziia i organizarea ARNr Aa cum am artat, ADN-ul care codific ordinea i numrul nucleotidelor din ARNr, reprezint acea parte din genom care este format din secvene moderat repetate. Celulele eucariote conin milioane de ribosomi, fiecare dintre acetia posednd cteva molecule de ARNr, alturi de zeci de proteine ribosomale. Pentru a putea furniza, celulelor, o att de mare cantitate de transcripte, ADN-ul care deine informaia pentru ARNr se gsete n genom n sute de copii. Acest ADN, denumit i ADNr, este plasat n regiuni specifice din genom. n celulele aflate n interfaz, de exemplu, clusterii ADNr formeaz mpreun o structur nuclear cu form neregulat, numit nucleol (plural, nucleoli), care are drept funcie producerea de ribosomi. Nucleolii dispar pe parcursul mitozei i reapar n nucleii celulelor fiice rezultate n urma diviziunii. Regiunea din cromosom care conine ADNr a primit denumirea de organizator nucleolar. Studii multiple i diverse au artat c ribosomii eucariotelor conin patru tipuri diferite de ARNr, trei dintre acestea fiind plasate la nivelul subunitii mari, iar una n subunitatea mic. Nucleolul nu este doar situsul sintezei ARNr, ci i locul de asamblare a celor dou subuniti ribosomale. Pe parcursul producerii moleculelor ARN, exist dou tipuri de proteine care se asociaz cu acestea: un tip de proteine care vor rmne ataate de moleculele ARNr, intrnd, astfel n structura subunitilor ribosomale i un tip de proteine aparinnd de fapt nucleolului i care vor avea relaii temporare cu intermediarii ARNr, proteine necesare doar pe parcursul procesrii ARNr. INTREBARI DE VERIFICARE 1. Care sunt componentele chimice ale acizilor nucleici 2. Structura si functiile genei 3. ARN-ul structura si functii 4. Exprimarea informatiei genetice transcriptia si translatia (sinteza) proteinelor

TEME PENTRU EXAMINAREA FINALA 1. Structura si functiile acizilor nucleici 2. Notiunea de gena 2. Exprimarea informariei genetice transcriptia si translatia

Unitatea de invatare 6 6. ELEMENTE DE GENETICA POPULAIILOR

6.1. LEGEA (PRINCIPIUL) HARDY-WEINBERG (AL ECHILIBRULUI )

n anul 1908, matematicianul englez G.H. Hardy i medicul german W. Weinberg, studiind n mod independent frecvena genelor i a genotipurilor ntr-o populaie panmictic, au ncercat s dea un rspuns la ntrebarea ce se ntmpl cu frecvena acestora n generaia descendent, n absena forelor evolutive, punnd astfel bazele geneticii populaiilor. Conform Legii Hardy Weinberg, ntr-o populaie panmictic aflat n echilibru i avnd un efectiv numeros, frecvena genelor i a genotipurilor se menine constant de-a lungul generaiilor. Cu alte cuvinte, frecvena alelelor dintr-o populaie se menine constant n diferite generaii, n absena influenei factorilor evolutivi externi sau interni. O populaie poate crete sau se poate micora prin migraia indivizilor sau prin modificarea natalitii i a mortalitii. Legea Hardy-Weinberg face abstracie de efectele mutaiei, migraiei i seleciei la nivelul unei populaii, referindu -se la un caz ipotetic, practic inexistent n natur, deoarece nu exist populaii n echilibru perfect. Se consider o populaie panmictic mare i nchis (fr migraii), n cadrul creia nu au loc mutaii i nu opereaz selecia, care cuprinde indivizi homozigoi dominani ( AA) i recesivi (aa), aflai n procent egal. Se pot realiza pe baz de probabilitate urmtoarele tipuri de ncruciri (Tab.20): AA 50% AA 50% aa 50% AA 25% Aa 25% aa 50% Aa 25% aa 25%

Tab. 20Repartiia indivizilor n F1 la ncruciarea ntre organisme homozigote avnd aceeai frecven.

n urma panmixiei, n generaia F1, din punct de vedere genotipic vor exista indivizi heterozigoi Aa pe lng cei homozigoi dominani AA i recesivi aa. Din punct de vedere fenotipic, n F1, 75% dintre indivizi prezint caracterul dominant A, iar 25% pe cel recesiv a, segregarea fiind n raport de 3:1. Dac se consider c organismele din F1 vor da natere la un numr egal de gamei n urma diviziunii meiotice, pentru fiecare printe Aa, jumtate dintre gamei vor conine doar gena A, iar cealalt jumtate doar gena a, atunci frecvena genelor va fi i ea egal, fiecare dintre cele dou gene A i a, fiind prezent n procentaj egal (50% A sau 0.5A si 50% a sau 0.5a), indivizii de tip AA dnd natere doar la gamei purttori ai genei A, n timp ce homozigoii recesivi aa vor forma doar gamei ce conin gena a. INDIVIZI AA 25% Aa 50% aa 25% Total
Tab. 21.Frecvena genotipurilor i genelor n F1

GAMEI A 25% A 25% a 25% a 25% A 50% ; a 50%

Prin combinarea acestor gamei, se obine n F2 o segregare mendelian de: 25% indivizi homozigoi AA, 50% indivizi heterozigoi Aa i 25% indivizi homozigoi aa.

adic o frecven a genotipurilor identic cu cea din F1. 0.5 A 0.5 A 0.5 a 0.25 AA 0.25 Aa 0.5 a 0.25 Aa 0.25 aa

Tab. 22. Frecvena genotipurilor n F2

n ceea ce privete fenotipurile, ele sunt de asemenea identice cu cele din F1, adic: 75%A i 25%a. Frecvena celor dou gene nu este ntotdeauna n procentaj egal n populaie. Cazul n care ntr-o populaie frecvena genelor alele este egal, se ntlnete foarte rar. Astfel, dac se consider cazul unei populaii n care 80%dintre indivizi sunt AA (80% din totalul gameilor poart alela A) iar restul de 20% dintre indivizi sunt aa (20% din totalul gameilor poart alela recesiv a), n urma mperecherii ntmpltoare a gameilor, pe baz de probabilitate se obine repartiia indivizilor n F1: 64% homozigoi dominani (AA) 32%heterozigoi Aa 4%homozigoi recesivi aa Adic 96% dintre indivizi vor avea fenotipul A, caracterul recesiv a fiind ntlnit doar la 4% dintre indivizi. 0.8 A 0.8 A 0.2 a 0.64 AA 0.16 Aa 0.2 a 0.16 Aa 0.04 aa
Tab. 23.

Dac se urmrete repartizarea genelor n aceast generaie se constat c frecvena genei A este de 80%, iar a genei a, de 20%. INDIVIZI AA 64% Aa 32% aa 4% Total GAMEI A 64% A 16% a 16% a 4% A 80% ; a 20%
Tab. 24. Frecvena genotipurilor i genelor n F1

Matematic, rezultatele studiului populaiilor efectuate de G.Hardy i W.Weinberg, pot fi generalizate astfel: dac frecvena gameilor A este p i a gameilor a este q. Distribuia binomial a genotipurilor conform legii Hardy-Weinberg A p A p a q AA p2 Aa pq a q Aa pq Aa q2

Distribuia fenotipurilor n descenden este de p2 AA+2pq Aa + q2 aa , reprezentnd o distribuie binomial, adic (p+q)2 = p2+ 2pq+q2=constant Dar p+q =1 ceea ce nseamn c q = 1-p , putnd fi nlocuit i rezultnd : p 2 AA+ 2 p(1-p) Aa + (1-p) 2 aa Frecvena genotipurilor AA, Aa, aa se pstreaz constant de-a lungul generaiilor, la fel i frecvena genelor. De exemplu gena A va avea frecvena: p 2 + p(1-p) = p 2 + p p 2 = p Iar a are frecvena p(1-p) + (1-p)2 = p-p 2 + 1-2p +p 2= 1-p Cunoscnd frecvena genei A (q = 80% = 0,8) i a alelei a (p = 20% = 0,2) se poate determina frecvena genotipurilor i fenotipurilor descendenei : AA= q2= 64% aa = (1-q)2= 4% 2Aa = 32% Fenotipic , 96% dintre indivizi manifest caracterul dominant i 4% caracterul recesiv. Invers, dac se tie c ntr-o populaie frecvena fenotipului A este de 96% i cea a lui a de 4%, se poate calcula frecvena genei dominante A i a alelei recesive a, astfel: aa = 4% = 0,04 a = 0,04 = 0,2 = 20% A = 100 - 20 = 80% De asemenea se poate calcula ci dintre indivizii cu fenotipul dominant sunt homozigii (AA) sau heterozigoi (Aa): AA = q2 = 64% Aa = 2(1-q) = 2x 0,8x0,2 = 32%
6.2. FRECVENELE GENOTIPURILOR N POPULAII

n studiul oricrei populaii, un prim pas l reprezint examinarea fenotipurilor indivizilor ce o alctuiesc, urmnd determinarea naturii genetice a anumitor caractere, stabilirea modului de transmitere a acestora (descrierea populaiei n termeni genetici). Populaia poate fi caracterizat prin numrul de genotipuri (faza diploid) sau prin numrul de alele (faza haploid). De exemplu, n cazul unui locus autosomal unic, pentru o gen autosomal A i alela ei a, n lipsa fenomenului de dominan, n descenden, indivizii, avnd genotipuri aparinnd uneia din cele trei clase : AA, Aa, aa, sunt i fenotipic distinci. Numrul indivizilor cu unul din cele trei genotipuri, este echivalent cu numrul indivizilor din cele trei clase fenotipice, adic, fiecare genotip este fenotipic distinct. Dac N este numrul total de indivizi din populaie, iar n1, n2 i n3 numrul indivizilor avnd genotipurile AA, Aa i respectiv aa, atunci n1+ n2+ n3 = N Proporiile sau procentele genotipurilor AA, Aa i aa pot fi notate simbolic prin x,y,z i sunt denumite frecvene genotipice. n1 / N= frecvena genotipului AA =x n2 / N= frecvena genotipului Aa =y n3 /N = frecvena genotipului aa =z x+y +z = 100% (sau unitatea, 1).

6.3.

FRECVENELE GENELOR N POPULAII

N - Numrul total de indivizi diploizi (2n) din populaie, s-a format dintr-un numr de 2N gamei produi n generaia precedent, dintre care o parte conin gena A, iar cealalt parte alela a. Numrul de indivizi homozigoi cu genotip AA (n1), s-a format prin unirea unui numr dublu, 2n1 de gamei ce aveau cte o singur gen de tipul A. Heterozigoii Aa, n numr de n2 s-au format din 2 n2 gamei, jumtate dintre acetia coninnd gena A i cealalt jumtate alela a. Deci, numrul total de gamei purttori ai alelei A implicai n formarea indivizilor diploizi, este tocmai suma 2n1 + n 2. Proporia acestor gamei din totalul celor din populaie, notat cu p, este :

(2n1 n2 ) 2N

(n1

1 n2 ) 2 N

Numrul de indivizi homozigoi cu genotip aa (n3) s-au format din 2 n3 gamei, fiecare avnd o singur alel : a n mod similar, proporia q a gameilor purttori ai alelei a poate fi determinat din numrul de gamei care au participat la constituirea genotipului heterozigot Aa precum i a celor care au participat la constituirea celuilalt genotip homozigot aa.

1 ( n2 n3 ) (n 2n3 ) p 2 2 2N N
Aceste proporii , p i q sunt denumite frecvene genice. Deoarece A i a sunt considerate singurele gene alele posibile n locusul A, avem:

pq

(n1

1 1 n2 ) ( n2 n3 ) (n n2 n3 ) 2 2 1 1 N N N

p = frecvena genic a alelei A q = frecvena genic a alelei a Frecvenele pot fi determinate i pe baza frecvenei genotipice.

(n1

1 1 n2 ) n2 n 1 2 1 2 x y N N N 2

Similar,

1 1 ( n 2 n3 ) n2 n 1 q 2 2 3 y z. N N N 2
x= frecvena genotipic a genotipului AA y= frecvena genotipic a genotipului Aa z= frecvena genotipic a genotipului aa

ntr-o formulare mai simpl: frecvena genic a alelei A se afl adugnd jumtate din procentajul heterozigoilor la procentajul homozigoilor AA iar frecvena genic a alelei a se afl adugnd jumtate din procentajul heterozigoilor la procentajul homozigoilor aa. Pentru a ilustra calculul frecvenelor genice se folosete exemplul grupelor de snge M-N la om. Grupele de snge M-N la om sunt determinate de o pereche de alele LM i LN, plasate ntrun locus autosomal unic. Cele 3 tipuri sangvine M; MN; N se disting net i corespund genotipurilor LMLM , LM LN , LNLN Cu alte cuvinte se disting 3 fenotipuri (M, MN, N) i 3 genotipuri (LMLM , LM LN , LNLN ). De exemplu, frecvenele genice ale alelelor LM i LN ntr-o prob de 730 btinai din Australia, unde 22 aparin grupei M, 216 aparin grupei MN i 492 aparin grupei N, sunt: p- frecvena genei LM q-frecvena genei LN Calculnd : p= (22+ 216/2)/ 730 = 0,178 q = (216/2 + 492)/ 730 = 0,822 Exprimat n procente: 22 din 730= 3,01% = 0,0301 aparin grupei M 216 din 730= 29,59% = 0,2959 aparin grupei MN 492 din 730= 67,40% = 0,6740 aparin grupei N Cu alte cuvinte: p2 = 0,0301 2pq= 0,2959 q2 = 0,6740 Calculnd, se obine p= 0,178 q= 0,822 INTREBARI DE VERIFICARE
1. S se enune Principiul Hardy-weinberg 2. Care sunt condiiile pe care trebuie s le ndeplineasc o populaie pentru a putea fi considerat ca fiind n echilibru. 3. Definii noiunea de populaie panmictic

TEME PENTRU EXAMINAREA FINALA

1. Calculai frecvena genotipurilor dintr-o populaie n echilibru, cunoscnd frecvena genelor n populaie respectiv.

BIBLIOGRAFIE

Alberts, B., Bray, D., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K., Watson, J.D., 1994. Molecular Biology of the Cell. Garland Publishing Inc., New York, London. Bra, I.I., 1996. Vademecum in genetic. Editura CORSON, Iai. Bra, I.I., 1999. Genetica. Editura CORSON, Iai. Brown, D.D., David, I., 1968. Specific gene amplification in oocytes. Science, 160, 272. Buctaru, N., 1993. Genetic. Editura Universitas, Chiinu. Butnaru, G., Nicolae, I., Tma, E., 1999. Genetic molecular. Editura MIRTON, Timioara Callan, H.G., 1955. Recent work on the structure of cell nuclei. Symposium on the Fine Structure of Cells.IUBS Publ. Series B., 21, 89. Gavril, L., 1986. Genetica. I. Principii de ereditate. Editura Universitii Bucureti. Ghiorghi, G., 1999. Bazele geneticii. Editura Alma Mater Bacu. Klug, W.S., Cummings, M.R., 1986. Concepts of Genetics. Merill Publishing Company. A Bell & Howell Company, Columbus-Toronto-London-Sydney. Knippers, R., 1997. Molekulare Genetik. Georg Thieme Verlag, Stuttgart, New York.

Latchman, D.S., 1998.Eukaryotic Transcription Factors. Third Edition. Academic Press, San Diego, London, Boston, New York, Sydney, Tokyo, Toronto. Lewin, B., 1997. Genes, VI. Oxford University Press, Inc., New York, USA. Miller, O.L., Hamkalo, B.A., 1972. Visualization of RNA synthesis on chromosomes. Int. Rev .Cytol., 33,1. Moraru, I., Antohi, t., 1966. Introducere n genetica molecular. Ediia II-a. Editura Medical, Bucureti. Raicu, P., 1997. Genetic general i uman. Editura Humanitas, Bucureti. Snustad, D.P., Simmons, M.J., Jenkins, J.B., 1997. Principles of Genetics. John Wiley & Sons, Inc., New York, Chichester, Brisbane, Toronto, Singapore, Weinheim. Tamarin, R., 1991. Principles of Genetics. WCB (Wm. C. Brown) Publishers. Toma, O., Bra, I.I., 1996. La sorgintea vieii aminoacizi, proteine si acizi nucleici, Vol.1. Editura Corson, Iai. Tudose, I., 1992-1993. Genetic. Editura Universitii Al.I.Cuza, Iai. Voicule, N., Puiu, L., 1997. Biologia molecular a celulei. Grupul editorial ALL. Watson, J.D., Hopkins, N.H., Roberts, J.W., Steitz, J.A., Weiner, A.W., 1987. Molecular Biology of the Gene. The Benjamin/Cummings Publishing Company, Inc. Menlo Park, California. Reading, Massachusetts. DonMills, Ontario Wokingham, U.K. Amsterdam. Sydney. Singapore. Tokyo. Madrid. Bogota. Santiago. San Juan. Bra, i.i., 1973. Studiu asupra biologiei populaiilor unor specii apomictice i sexuate nrudite.Tez de doctorat, Facultatea de Biologie, Universitatea Bucureti. Bra, I.I., Ghiorghi, g., 1980. Din enigmele evoluiei (Apomixia i rolul ei n evoluie) . Editura tiinific i Enciclopedic, Bucureti. Bra I., Corneanu G.(sub redacia), Fraley l., Gottschalk W., Imreh St., Lazanyi A., Nedelcu C., Whicker W., 1989. Elemente de radiobiologie vegetal. Ed. Ceres, Bucureti. Bra, I.I., 1989. Reproducerea, factor al evoluiei plantelor. Editura Academiei, Bucureti Bra, I.I., 1999. Genetica. Editura Corson, Iai Beggs C., Schneider-Ziebert U., Wellmann E., 1986. UV-B Radiation and Adaptativ Mechanisms in Plants. Stratospheric Ozone Reduction, Solar Ultraviolet Radiation and Plant Life (Edited by R. C. Worrest and M..M. Caldwell), NATO ASI Series, Vol. G.8, Springer-Verlag Berlin Heidelberg, 235-251. Brookes P., Lawley P., 1961. The reaction of mono- and difunctional alchilating agents with nucleic acids. Biochem J, . 80, 496-502. Buican, D., 1997. Mendel i genetica de ieri i de astzi. Editura ALL, Bucureti. Butnaru, Gallia, Nicolae,I., Tma, Elena, 1999. Genetic molecular. Editura Mirton, Timioara. Cavalli-Sforza, l.l., Bodmer, W.F.,1971. The Genetics of Human Populations. Freeman, San Francisco. Charlesworth, B., 1996. The evolution of chromosomal sex determination and dosage compensation. Curr. Biol., 6, 149-162. Ciobotari, Ghe. V., Bra, I.I., 2000. Frecvena crossing-overului ntre cromosomii X, la femelele hibride de Drosophila melanogaster obinute prin ncruciarea ntre mutanta Muller 5 i indivizi din trei populaii naturale. Genetic i Evoluionism (sub redacia Ion I. Bra, Csilla Iuliana Surugiu, Mirela Cmpeanu, Marilena Maniu), Editura Corson, Iai, 53-78 Ciobotari, G.V., Bra, I.I., 2000. Efecte ale tratamentului cu nicotin, n diferite concentraii, aplicate indivizilor de Drosophila melanogaster dintr-o populaie reversmutant. Genetic i Evoluionism (sub redacia Ion I. Bra, Csilla Iuliana Surugiu, Mirela Cmpeanu, Marilena Maniu), Editura Corson, Iai, 79-84. Ciupercescu d. , 1986. Curs de Genetic si Eredopatologie, Tipo Agronomia, Cluj-Napoca. Ciupercescu, D.D., Vereskens, J., Mouras, A., Y, D., Briquet, M., Negruiu, I., 1990. Karyotyping Melandrium album, a dioecious plant with heteromorphic sex chromosomes. Genome, 33, 556562. Cmpeanu, M.M., Cmpeanu, C.S., Bra,I.I., 2000. ADN recombinant. Editura Corson, Iai. Cmpeanu, Mirela M., Maniu, Marilena, Surugiu, Iuliana C., 2002. Genetica metode de studiu. Editura Corson, Iai. Coohill Th ., 1989. Ultraviolet Action Spectra (280 to 380 nm) and Solar Effectiveness Spectra for Higher Plants. Photochem. Photobiol., 50 ,4 , Printed in Great Britain, 451-457. Cook, l.M., 1976. Population Genetics. Chapman and Hall, A Halsted Press Book London, John Wiley & Sons, Inc., New York Corneanu, Mihaela, 2001. Genetica. Editura Sitech, Craiova. Creed, E.R., 1971. Ecological Genetics and Evolution. Essays in Honour of E.B. Ford.Blackwell, Oxford. Crow, J.F., Kimura, M., 1970. An Introduction to Population Genetic Theory. Harper and Row, New York.

Crow, J.F., 1972. The dilemma of nearly neutral mutations :How important are they for evolution and human welfare ? J. Heredity, 63, 306-316 Darwin, Ch., Wallace, A.R., 1958. Evolution by natural selection. Cambridge University Press Deering R., 1962. Ultraviolet radiation and nucleic acid, in Organic chemistry of life. Editors: Calvin M., Pryor A., Freeman and Company, San Francisco, 377-382. Dellaporta, S.L., Calderon-Urrea, A, 1993. Sex determination in flowering plants. Planta Cell, 5, 1241-1251. Dobzhansky, T., 1970. Genetics of the evolutionary process. Columbia University Press, New York. Drake J., 1970. The molecular basis of Mutation, Holden Day, San Francisco, Dumitru, I.F., 2001. Nouti n biotehnologie. Editura ILEX, Bucureti Dumitru, I.F., Toma, N. (coordonatori volum), 2001. Progrese n Biotehnologie. Universitatea Bucureti, Centrul de Cercetri n Enzimologie, Biotehnologii i Bioanaliz. Fairbanks, D.J., Andersen, R.W., 1999. Genetics. The continuity of life. Brooks/Cole Publishing Company. Wadsworth Publishing company. ITPR an International Thomson Publishing Company. New York, Scottsdale AZ, Singapore, Tokyo, Toronto Falconer, D.S., 1960. Introduction to quantitative Genetics. Oliver and Boyd, Edinburgh. Fernandez, J.M., Hoeffler, J.P., 1999. Gene expression Systems. Using Nature for the Art of Expression. Academic Press, San Diego, London, Boston, New York, Sydney, Tokyo, Toronto. Floria F., 1979. Studiu comparativ asupra comportrii unor specii de plante superioare in tratamentul cu ageni mutagenici chimici alchilani, Teza de doctorat, Univ. Al.I.Cuza, Iai, 1974. Floria F., Gille E., Popescu T., 1984. Influence of the treatmens with alchilating agents and gamma rays on the cardenolides content of Digitalis lanata, Ehrn. Rev. Roum. Biochim. 21,3, 177-180. Flondor, P., Ionescu, C. (ediie ngrijit de), 1998. Introducere n algoritmi genetici. Editura ALL, Bucureti. Ford, E. B., 1964. Ecological Genetics. New York, John Wiley & Sons. Ford, E.B., 1975. Ecological Genetics, 4th Edition. Chapman and Hall, London. Friedberg, E.C.,Walker, G.C., Siede, W., 1995. DNA Repair and Mutagenesis. ASM Press, Washington D.C. Fristrom, J.W., Clegg, M.T., 1988. Principles of Genetics (Second edition). Freeman & co., New York. Gardner, E., Simmons, M., Snustad, D., 1991. Principles of Genetics. John Wiley & Sons, Inc., 288-308. Gavril, L., 1986. Genetica principii de ereditate, vol. I. Tipografia Universitii, Bucureti. Ghiorghi, G., Toth, E., Gille, E., 1984. Some cytogenetic physiological, and biochemical effect induced by single and combined treatments with gamma rays and ethylmethansulfonate in tworow barley and wheat. Rev. Rum. Biol., Biol. Veget., v. 29,2, 137-145. Ghiorghi, G.I., 1999. Bazele geneticii.Editura Alma Mater, Bacu. Ghiorghi, G.I., Corneanu, G., 2002. Radiobiologie. Editura ALMA MATER, Bacu. Glick, B.R., Pasternak, J.J., 1994. Molecular Biotechnology. Principles and Applications of Recombinant DNA. ASM Press, Washington D.C. Hartl, D., Freifelder, D., Snyder, L., 1988. Basic genetics. Johns and Bartlett Publishers, Boston. Jiang, J., Gill, B.S., 1994. Different species-specific chromosome translocations in Triticum timopheevii and T. turgidum support the diphyletic origin of polyploid wheats. Chromosome research, Oxford & New York, vol. 2, nr. 1, 59-64. Kihara, H., Ono, T., 1923. Cytological studies on Rumex L. Bot. Mag., 37, 84-90. Kimura, M., 1968. Evolutionary rate at the molecular level. Nature, 217, 624-626. Kimura, M., 1968. Genetic variability maintained in a finite population due to mutational production of neutral and nearly neutral isoalleles. Genet. Res., 247, 11. Klug, W., Cummings, M., 1986. Concepts of genetics, Second edition. Merrill Publishing Company, 177, 197-2000, 306-312. Lewin, B., 2001. Genes VII. Oxford University Press, Oxford Malling, H., de Serres, F., 1970. Genetic effects of N-methyl N-nitrosoguanidine in Neurospora Crassa.- Molec. Gen. Genetics, v. 106, 165 Manna, G., 1971. Chromosome aberrations induced by living mutagens. Natl. Acad. Sci. Sect. Biol. Sci., 1-15. Morton, N.E., 1991. Parameters of the human genome. Proc. Natl. Acad. Sci. Usa, 88, 74747476 Pelling, C., Allen, T.D., 1993. Scanning electron microscopy of polytene chromosomes (I). Chromosome research, Oxford & New York, vol. 1, nr. 4, 221-237.

Raicu, P., Stoian, V., Nicolaescu, M., 1974. Mutaiile si evoluia. Editura Enciclopedic, Bucuresti. Raicu, P., Gorenflot, R., 1980. Cytogntique et volution. Editura Academiei Romne, Bucureti. Snustad, P.D., Simmons, M.J., Jenkins, J.B., 1997. Principles of Genetics.John Wiley & Sons, Inc., New York, Chichester, Brisbane, Toronto,Singapor,Weinheim. Socaciu, C., 1996. Mutageneza chimic. Editura Genesis, Cluj-Napoca, p. 76-84. Soll, D., Rajbhandary, U.L.(edited by), 1995. tRNA Structure, Biosynthesis and Function. ASM Press, Washington D.C. Toma, N., Gavril, L., 2000. Ereditatea extranuclear. Editura Universitii din Bucureti. Trachsel, H. (edited by), 1991. Translation in Eukaryotes. CRC Press, Boca Raton, Ann. Arbor, Boston, London Tudose, I., 1992-1993. Genetica vol. I, II, Ed. Univ. Al. I. Cuza, Iai.