GENETIC

CURS

UNIVERSITATEA DE TIINE AGRONOMICE I MEDICIN VETERINAR

BUCURETI
2015

Curs 1. GENETICA GENERALA

1.1.

Aspecte istorice

De-a lungul timpului oamenii au observat asemnarea dintre prini i copii, dintre pui
i animalele parentale sau ntre generaiile succesive de plante. De asemenea, de secole
oamenii amelioreaz plantele i animalele n scopul obinerii de soiuri i rase care s
corespund anumitor cerine economice sau estetice. Cu toate acestea, principiile ereditii au
fost nelese abia dup a doua jumtate a secolului XIX cnd Gregor Mendel a realizat o serie
de experimente la mazre pe baza crora au fost enunate legile ereditii. Principiile ereditii
au fost redescoperite la nceputul secolului XX, dar lucrrile lui Mendel au constituit
fundamentele geneticii moderne.
Genetica este o tiin relativ tnr, anul ei de natere fiind considerat 1900, cnd au
fost publicate lucrrile olandezului Hugo de Vries, ale germanului Carl Correns i
austriacului Ernst Tschermark: cei trei cercettori au readus n prim plan opera lui Gregor
Mendel. Intre anii 1902-1909 Bateson i Cunot, prin experiene de ncruciare la animale
demonstreaz c legile lui Mendel au valabilitate i pentru animale.
Termenul de genetic a fost propus de cercettorul englez W.Bateson, n anul 1905, la
cea de-a treia Conferin internaional de hibridare i ameliorare a plantelor de la Londra,
prin acesta desemnnd tiina care se ocup cu studiul ereditii i variabilitii organismelor.
Termenul de genetic provine din grecescul gennao care nseamn a da natere. La rndul ei,
ereditatea, este acea parte a geneticii reprezentat de proprietatea fiinelor vii de a poseda o
anumit informaie genetic. Pe baza acesteia i n funcie de condiiile de mediu, sunt
transmise diferite caracteristici de la ascendeni la descendeni. Cuvntul are origine latin:
hereditas = motenire. Caracterele ereditare reprezint acele trsturi morfologice,
fiziologice, biochimice sau de comportament care se transmit cu mare fidelitate de la prini
la urmai; ele confer aspectul continuitii fenomenului ereditar, asigurnd pstrarea
caracterelor de-a lungul generaiilor, n cadrul fiecrei specii.
In anul 1909, danezul Johannsen, care a publicat prima carte de genetic intitulat
Elemente de genetic, introduce noiunile de gen (sinonim pentru factorii ereditari ai lui
Mendel), genotip i fenotip.
Dup ce n anul 1902, americanul Sutton i germanul Boveri, au adus primele dovezi
citologice i genetice prin care se demonstra c substratul citologic i, deci, sediul genelor l
constituie cromosomii, s-au. pus bazele teoriei cromosomiale a ereditii, teorie
fundamentat tiinific i aprofundat ulterior de T.H. Morgan i coala de genetic condus
de el. Sutton i Bovery pot fi considerai drept prinii citogeneticii, domeniu al geneticii
care se ocup cu studiul fenomenului ereditar la nivel celular.
Dup anul 1924 ncep o serie de cercetri asupra efectelor mutagene ale radiaiilor
ionizante (raze X), cel care a contribuit la dezvoltarea domeniului fiind H. Muller, considerat
de altfel ca ntemeietorul radiogeneticii.
Pe baza cercetrilor desfurate de Beadle i Tatum la ciuperca Neurospora crassa se
pun bazele geneticii biochimice, iar principiul enunat de ei devine un aforism genetic: o
gen o enzim: ei au dovedit c mutaia unei gene determin sinteza unei enzime inactive
ce duce la blocarea cii metabolice n care este implicat acea enzim, punndu-se astfel
bazele unei noi ramuri a geneticii genetica molecular (studiul ereditii i variabilitii la
nivel molecular). Aceste cercetri nu ar fi fost ns posibile dac nu s-ar fi descoperit acizii
nucleici, dac nu s-ar fi stabilit rolul lor n transmiterea caracterelor sau dac Watson i Crick
nu ar fi elaborat modelul dublu helical de structur al ADN. Elaborarea modelului de
1

structur al ADN reprezint cea mai mare descoperire din biologia secolului XX. Alturi de
aceasta, n tabelul 1.1. sunt prezentate cele mai importante descoperiri din domeniul geneticii.
Tabelul 1.1. Principalele evenimente din domeniul geneticii
Anul

Autorul (autorii)

1856-1863

Gregor Mendel

1859

Charles Darwin

1866
1868

Gregor Mendel
F.Miescher

1875

O.Hertwig

1882-1885
1900
1902
1902
1903
1905

E.Strasburger,
W.Flemming
Hugo de Vries, Carl
Correns, Erich von
Tschermak
Archibald Garrod
W.Sutton, T.Boveri
W.E.Castle
W.Bateson
W.Bateson, R.C.Punnet
G.H.Hardy, W.Weinberg

1908
H.Nilsson-Ehle
1909
1910

W.Johannsen
E.M.East
Thomas Hunt Morgan

1911
1912
1916

T.H.Morgan
A.Sturtevant
T.H.Morgan

1922

R.A.Fisher

1924-1932
1927

John B.S.Haldane
Herman J.Muller

1928

F.Griffith
R.A.Fisher

1930

1931

S.Wright
H.Creighton,
B.McClintock
Curt Stern

1941

1946

G.Beadle, E.Tatum
O.Avery, C. MacLeod,
Maclyn McCarthy
J.Lederberg, E.Tatum

1950

Barbara McClintock

1952
1953
1957
1958

A.Hershey, M.Chase
J.Watson, F.Crick
H.F.Conrat, B.Singer
M.Meselson, F.Stahl

1944

Evenimentul tiinific
Realizeaz experimente pe mazre i evideniaz fenomenul de segregare
a genelor
Public lucrarea Originea speciilor n care este prezentat teoria
evoluionist
Public o lucrare tiinific n care sunt prezentate legile ereditii
Izoleaz nucleina din nuclei
Arat c nucleul este necesar pentru fecundare i pentru diviziunea
celular
Arat c nucleii conin cromosomi
Obin n mod independent rezultate care confirm principiile mendeliene
ale ereditii
Identific prima boal genetic uman
Propun teoria cromosomal a ereditii
Evideniaz relaia dintre alele i frecvena genotipurilor
Propune numele noii tiine Genetica
Demonstreaz linkage-ul ntre gene
Formuleaz principiile referitoare la relaia matematic ntre frecvena
genotipurilor i cea a genelor alele n populaiile panmictice
Obine dovezi experimentale legate de controlul multigenic al unor
caractere
Introduce noiunea de gen
Elucideaz rolul reproducerii sexuate n evoluie
Identific prima gen sex-linkat, white, care determin culoarea alb a
ochilor la Drosophila melanogaster
Propune explicaia linkage-ul genetic
Realizeaz prima hart genetic
Propune teoria referitoare la mutaie i selecie
Public o lucrare referitoare la examinarea cantitativ a consecinelor
evoluioniste ale ereditii de tip Mendelian
Elaboreaz teoria matematic asupra seleciei naturale i artificiale
Evideniaz faptul c radiaiile X produc mutaii
Descoper transformarea genetic la bacterii i numete agentul
responsabil drept principiu transformant
Public lucrarea Teoria genetic a seleciei naturale
Teorie referitoare la selecia natural i atribuie un rol important driftului
genetic i schimburilor ntmpltoare de gene
Arat c recombinarea genetic la porumb se datoreaz unor schimbri
fizice la nivelul cromosomilor omologi
Arat c recombinarea genetic la D.melanogaster este consecina
modificrilor de la nivelul cromosomilor omologi
Propun ipoteza o gen o enzim
Demonstreaz c principiul transformat al lui Griffith este reprezentat de
ADN
Descoper procesul de conjugare la bacterii
Explic rezultatele obinute n experimentele la porumb prin intervenia
unor elemente genetice transpozabile
Arat c materialul genetic al bacteriofagului T2 este ADN
Propun modelul dublu-helical de structur al ADN
Arat c materialul genetic al virusului mozaicului tutunului este ARN
Dovedesc modelul semiconservativ de replicare al ADN

1965
1966
1972
1973

Arthus Kornberg
Severo Ochoa
S.Brenner, F.Jacob,
M.Meselson
F.Jacob, J.Monod
Robert Holey
M.Nirenberg,H.G.Khorana
Paul Berg
H.Boyer, S.Cohen

1975

E. M.Southern

1959
1961

1977
1983
1986
1989
1990
1994

1996

1997

W.Gilbert, F.Sanger
Phillip Sharp i colab
Frederick Sanger
T.Cech, S.Altman
Kary Mullis i colab.
L-C Tsui, J.Riordan,
F.Collins i colab.
James Watson i numeroi
ali cercettori
M.Skolnick i colab.
Grup internaional de
cercettori
J.Craig Venter
National Institute of
Health SUA
Institutul Roslin
Grup de cercettori
Celera Genomics
Company

1998
Grup de cercettori
1999
2000
2001

Proiectul Genomului
Uman
Colaborare internaional
Colaborare internaional
Proiectul Genomului
Uman

Izoleaz ADN polimeraza I de la E.coli

Descoper prima ARN polimeraz
Descoper ARNm
Modelul operonului pentru reglarea exprimrii genelor la bacterii
Determin pentru prima dat secvena de nucleotide dintr-un ARNt
Descifreaz codul genetic
Realizeaz in vitro prima molecul recombinat de ADN
Utilizeaz pentru prima dat o plasmid pentru a clona ADN
Metod de identificare a genelor clonate, prin transferarea pe un filtru a
fragmentelor de ADN separate electroforetic
Elaboreaz metode de determinare a secvenei nucleotidelor din ADN
Descoper intronii din genele de la eucariote
Obine secvena complet de nucleotide a virusului X174
Descoper fenomenul de splicing la ARN
Elaboreaz tehnologia PCR de amplificare a unor segmente de ADN
Identific i cloneaz gena uman ce determinfibroza chistic
Lanseaz Proiectul Genomului Uman de cartare i secveniere a
genomurilor mai multor specii, inclusiv la om
Cloneaz gena BRCA1 implicat n producerea cancerului de sn
Publicarea primei secvene complete a genomului unui organism
eucariot: Saccharomyces cerevisiae
Secvena complet a genomului arhebacteriei Methanococcus jannaschii
Raporteaz c au fost aprobate 150 de testri n domeniul terapiei genice
Se nate primul mamifer clonat oia Dolly
Este comunicat secvena complet a genomului de la E.coli
Se nfiineaz un grup de cercettori care s secvenieze genomul uman
utiliznd rezultatele de trei ani ale proiectului internaional al Genomului
Uman
Este comunicat secvena complet a genomului de la Caenorhabditis
elegans
Secvenierea complet a cromosomului 22 din genomul uman
Secvena complet a genomului de la D.melanogaster, cel mai mare
genom secveniat pn atunci
Secvena complet a cromosomului 21, cel mai mic cromosom uman
Se anun descifrarea complet a secvenei de nucleotide din genomul
uman

Pe baza acumulrilor teoretice i practice din domeniul geneticii moleculare s-a dezvoltat
o nou ramur a geneticii, ingineria genetic. Anul de natere al inginerie genetice poate fi
considerat 1972 cnd Berg i colab. au creat o plasmid hibrid alctuit din fragmente de ADN
provenite din diferite surse virale i bacteriene. Asemenea plasmide hibride sunt apoi utilizate ca
vectori de clonare a genelor care, n ultimele decenii, au permis transferul i exprimarea eficient
a genelor de interes n gazde foarte variate, reuindu-se clonarea i exprimarea n celulele
bacteriene a unor gene de la eucariote, cum ar fi: gena pentru insulina uman, pentru
somatostatin, pentru anumite tipuri de interferoni, interleukine, etc. Dintre acestea, unele
cunosc deja aplicare industrial (de ex.humulina).
Marile descoperiri din domeniul geneticii sau biologiei moleculare au fost rspltite
de-a lungul timpului prin acordarea Premiului Nobel pentru Medicin i Fiziologie sau pentru
Chimie (tabelul 1.2).

Tabelul 1.2. Laureai ai Premiului Nobel pentru cercetri de genetic sau din domenii nrudite
Anul
1930
1933

Laureai
K.Landsteiner
T.H.Morgan

Domeniul
MF
MF

1946

H.G.Muller

MF

1954

L.Pauling
F.Sanger

Chimie
Chimie

1958

J.Lederberg

MF

G.W.Beadle, E.L.Tatum
A.Kornberg, S.Ochoa
F.H.C.Crick, J.D.Watson,
M.H.F.Wilkins
J.C.Kendrew, M.F.Perutz
J.Jacob, A.M.Lwoff, J.L.Monod
P.F.Rous
H.G.Khrorana, M.W.Nirenberg
R.W.Holley
M.Delbruck, A.D.Hershey,
S.E.Luria
N.Borlaug
G.M.Edelman, R.R.Porter
D.Baltimore, R.Dulbecco,
H.Temin

MF
MF

Descoperirea
Descoperirea grupelor sanguine umane
Elaborarea teoriei cromosomale a geneticii
Inducerea de mutaii la Drosophila melanogaster cu
ajutorul radiaiilor X
Determinarea structurii alfa helicale a proteinelor
Determinarea structurii primare a proteinelor
Descoperirea fenomenului de recombinare genetic la
bacterii
Dovedirea controlului genetic al proceselor biochimice
Sinteza biologic a ADN i ARN

MF

Structura dublu helical a ADN

Chimie
MF
MF
MF
MF

Pace
MF

Structura tridimensional a proteinelor globulare

Reglarea genetic a sintezei enzimelor la bacterii
Inducerea viral a cancerului la gini
Descifrarea codului genetic
Structura i secvena de nucleotide a ARNt
Mecansimul replicrii i structura genetic a
bacteriofagilor
Ameliorarea genetic a grului mexican
Structura chimic a imunoglobulinelor

MF

Genetica molecular a virusurilor tumorale

1959
1962
1965
1966
1968
1969
1970
1972
1975

MF

1976

D.C.Gajdusek

MF

1978

W.Arber, D.Nathans,
H.O.Smith

MF

1980

P.Berg, W.Gilbert, F.Sanger

Chimie

1982

A, Klug

Chimie

1983
1985
1987

B.McClintock
M.S.Brown, J.L.Goldstein
S.Tonegawa
J.M.Bishop, H.E.Varmus
T.R.Cech, S.Altman
R.Roberts, P.Sharp

MF
MF
MF
MF
Chimie
MF

K.Mullis, M.Smith

Chimie

1989
1993

1997

E.B.Lewis, C.NussleinVolhard, E.Wieschaus

S.Prusiner

1999

G.Blobel

MF

2001

L.Hartwell, P.Nurse, T.Hunt

MF

K.Wuthrich

Chimie

S.Brenner, R.H.Horvitz,
J.E.Sulston

MF

2006

R.D. Kornberg

Chimie

2006

A.Z. Fire, C.C. Mello

MF

1995

MF

Controlul genetic al dezvoltrii timpurii la Drosophila

MF

Descoperirea prionilor noi ageni infecioi

Descoperirea proteinelor ce conin secvene codificate
genetic ce le asigur transportul celular
Descoperirea genelor i a moleculelor reglatoare ce
controleaz ciclul celular
Dezvoltarea spectroscopiei de rezonan magnetic
pentru determinarea structurii tridimensionale a
macromoleculelor biologice din soluie
Reglarea genetic a dezvoltrii organelor i moartea
celular programat
Studii legate de bazele moleculare ale transcrierii la
eucariote
Descoperirea fenomenului de sileniere a genelor prin
intermediul ARN dublu catenar

2002

Elucidarea bolilor genetice produse de prioni (kuru i

demena Creutzfeldt-Jacob)
Tehnologia ADN recombinant folosind enzimele de
restricie
Dezvoltarea tehnologiei ADN recombinant i a celei de
secveniere a ADN
Analiza structurii cristaline a unor complexe
semnificative, inclusiv a ARNt i nucleosomilor
Elementele genetice transpozabile de la porumb
Reglarea genetic a metabolismului colesterolului
Bazele genetice ale diversitii anticorpilor
Rolul retrovirusuluilor i a oncogenelor n cancer
Funciile enzimatice ale ARN (ribozime)
Prelucrarea ARN i structura discontinu a genelor
Elaborarea tehnologiei PCR i a mutagenezei la situsspecific

2007

M.R. Capecchi, M.J. Evans,

O.Smithies

O.Shimomura, M.Chalfie,
R.Y.Tsien
2008 F.Barr-Sinoussi, L.Montagnier
V.Ramakrishnan, T.A. Steitz,
2009
A.Y.Yonath
E.H. Blackburn C.W. Greider,
2009
J.W. Szostak
MF = Medicin i Fiziologie
2008

MF

Descoperirea principiilor pentru introducerea unor

modificri specifice n gene prin utilizarea celulelor stem
embrionare
Descoperirea si dezvoltarea proteinei cu fluorescen
verde (GFP)
Descoperirea HIV

Chimie

Structura i funciile ribosomului

MF

descoperirea modului n care cromosomii sunt protejai

de ctre telomere i de enzima telomeraz.

MF
Chimie

1.2. Concepte de baz n genetic

1.2.1. ADN, gene i cromosomi
Materialul genetic al tuturor organismelor vii, fie procariote fie eucariote, este ADN
(acidul deoxiribonucleic). ADN este materialul genetic al unui numr mare de virusuri ce
infecteaz organismele procariote sau eucariote. In cazul ribovirusurilor, materialul genetic
este reprezentat de ARN (acidul ribonucleic).
ADN este alctuit din dou catene polinucleotidice, formate din nucleotide.
Secvenele de nucleotide de la nivelul ADN determin informaia genetic stocat la nivelul
acestei macromolecule. Genele, denumite de Mendel factori ereditari, reprezint secvene
specifice de nucleotide care determin diferitele caracteristici ale unui organism.
La nivel celular, materialul genetic este organizat n structuri numite cromosomi
(corpusculi colorai), al cror numr este caracteristic fiecrei specii n parte. La procariote
exist, de rugul, un singur cromosom, n timp ce la eucariote, n nucleu, exist mai muli
cromosomi lineari. Totalitatea materialului genetic al unui organism formeaz genomul
acestuia. In afara genomului nuclear, n celulele eucariote mai exist i material genetic
extranuclear, reprezentat de ADN cloroplastic i/sau ADN mitocondrial.
1.2.2. Transmiterea informaiei genetice
Experimentele lui Mendel efectuate pe plante de mazre ce prezentau trsturi
specifice, contrastante (forma boabelor, culoare etc) au permis evidenierea modului de
transmitere a acestora de-a lungul generaiilor. Mendel a emis ipoteza c factorii ereditari
(genele, n accepiunea modern) sunt sub form de perechi, de alele, identice sau diferite.
Organismele ce prezint perechi de alele identice se numesc homozigote, iar cele conin
perechi de gene alele diferite se numesc heterozigote. Totalitatea genelor dintr-un organism
formeaz genotipul iar totalitatea nsuirilor determinate de interaciunea genotipului cu
mediul, reprezint fenotipul.
1.2.3. Exprimarea informaiei genetice
Genele controleaz toate aspectele vieii unui organism, codificnd produi care sunt
responsabili pentru dezvoltare, reproducere, metabolism etc. Procesul prin care o gen este
copiat i determin sinteza unui anumit produs poart numele de exprimare a genei:
procesul de copiere a genei din ADN la o molecul de ARN se numete transcriere, iar
convertirea mesajului genetic purtat de ARN la o secven de aminoacizi dintr-o caten
polipeptidic se numete traducere. Sinteza proteinelor se desfoar la nivelul unor organite
citoplasmatice specifice, ribosomi, pe baza succesiunii codonilor din ARNm.
5

1.2.4. Sursele de variabilitate genetic

Genetica permite evidenierea faptului c diferenele dintre diferitele categorii de
organisme se datoreaz diferenelor de la nivelul genelor pe care le conin. Aceste diferene
sunt cauzate de mutaii (modificri ale materialului genetic), recombinare genetic
(schimburile de material genetic dintre cromosomi) i selecie (favorizarea celor mai potrivite
combinaii de gene n anumite condiii de mediu). Aceste trei mecanisme (mutaii,
recombinare genetic i selecie), individual sau mpreun, produc noi variaii genetice care
sunt eseniale pentru evoluie.
1.2.5. Ramurile geneticii
Genetica reprezint ramura biologiei ce studiaz ereditatea organismelor. De obicei,
geneticienii mpart genetica n patru domenii distincte:
genetica clasic studiaz modul n care genele i caracterele genetice sunt
transmise de la o generaie la alta i cum se realizeaz recombinarea genelor;
genetica molecular examineaz structura molecular i funciile genelor;
genetica populaiilor studiaz ereditatea la nivelul grupurilor de indivizi pentru
caractere determinate de una sau cteva gene;
genetica cantitativ se ocup de ereditatea caracterelor determinate simultan de
mai multe gene (caractere cantitative, poligenice) la nivel de grup de indivizi.
1.2.6. Procariote i eucariote
Marea diversitate a lumii vii a fost observat nc din cele mai vechi timpuri, iar
clasificarea organismelor a devenit o necesitate. Sistemele de clasificare elaborate pn n
prezent sunt extrem de variate i nu exist o unanimitate de opinii. In prezent unul dintre cele
mai acceptate sisteme de clasificare a organismelor consider c acestea pot fi mprite n
trei mari grupe: eubacteria, archaea i eucariote. Primele dou categorii aparin grupului
procariotelor (termenul de procariot se refer la absena membranei nucleare - nainte de
nucleu). In afar de absena nucleului, la procariote lipsesc o serie de ali constitueni
celulari, cum ar fi organitele celulare de tipul mitocondriilor, cloroplastelor, reticulului
endoplasmic, aparatului Golgi etc, care exist n mod normal n celulele eucariote. Grupul
archaea (denumit i arhebacterii) cuprinde organisme unicelulare asemntoare eubacteriilor
dar cu proprieti biochimice diferite. Cea mai mare parte a bacteriilor din acest grup triesc
n condiii extreme de mediu (temperaturi foarte nalte, presiune ridicat, concentraii mari de
sruri etc), ele fiind cunoscute i ca extremofile. Unele dintre speciile din acest grup
realizeaz o serie de ci biochimice neobinuite, cum ar fi producerea de metan (bacterii
metanogene).
Eucariotele cuprind organisme foarte variate cum ar fi fungii, plantele i animalele.
Organismele de tip eucariot sunt unicelulare (protozoare sau unele tipuri de alge) sau
pluricelulare (plante superioare sau animale), numele lor derivnd de la existena membranei
nucleare (au nucleu adevrat). Gama de organisme eucariote studiate este destul de larg:
drojdia de bere (Saccharomyces cerevisiae), mucegaiul portocaliu al pinii (Neurospora
crassa), mazrea (Pisum sativum), crucifera Arabidopsis thaliana, nematodul Caenorhabditis
elegans, musculia de oet (Drosophila melanogaster), oarecele (Mus musculus), omul
(Homo sapiens) etc.

1.2.7. Diviziunea celular

In cazul organismelor eucariote materialul genetic este repartizat pe mai muli
cromosomi lineari, localizai la nivelul nucleului. Numeroase eucariote conin n nucleu cte
dou copii ale fiecrui cromosom (perechi de cromosomi), ele fiind diploide, n timp ce altele
au cte un singur exemplar din fiecare cromosom, fiind haploide. Reproducerea eucariotelor
poate fi asexuat sau sexuat, caz n care intervin celule specifice, numite gamei, haploide,
produse ntr-o anumit faz a ciclului de dezvoltare i prin a cror fuziune (fecundare) se
formeaz zigotul diploid.
Complementul cromosomal dintr-un nucleu haploid constituie genomul organismului
respectiv. In celulele diploide cromosomii dintr-o pereche sunt omologi, ei coninnd aceleai
gene, iar cei din perechi diferite i care conin gene diferite se numesc neomologi. La
numeroase organisme eucariote exist cromosomi distinci ce grupeaz genele ce determin
cele dou sexe, numii heterozomi; restul cromosomilor din genom sunt autosomi.
Forma i dimensiunile cromosomilor variaz n cadrul aceluiai set de cromosomi;
fiecare cromosom este alctuit din dou cromatide care prezint o constricie numit
centromer, ce delimiteaz braele cromosomale i determin tipurile morfologice:
metacentrici. Extremitile cromatidelor poart denumirea de telomere i ele au rol n
asigurarea stabilitii cromozomilor (fig.1.1).
Fig.1.1. Elementele structurale
ale unui cromosom metafazic

Un set complet de cromosomi evideniai n cursul metafazei i aranjai n perechi, n

funcie de form i mrime, constituie cariotipul organismului studiat (fig.1.2).

Fig.1.2. Cariotip uman normal (sex mascul)

Reproducerea celular la organismele eucariote este un proces ciclic de cretere, de
diviziune nuclear (cariochinez) i celular (citochinez), ele alctuind aa numitul ciclu
celular. Pe parcursul ciclului celular cromosomii prezint variaii n privina numrului de
cromatide din care sunt alctuii i a gradului de condensare.
Ciclul celular mitotic are dou faze distincte: replicativ i distributiv. Faza
replicativ corespunde interfazei i se realizeaz n mai multe etape succesive: faza G1, faza
S i faza G2 (fig.1.3): imediat ce o celul a rezultat din diviziune, ea intr ntr-un stadiu G 1
(gol sintetic) n care nu se sintezeaz ADN, cantitatea de ADN din celul fiind tipic pentru
7

specia respectiv (se noteaz cu 2C, cnd specia este diploid, corespunznd stadiului n care
cromosomii se afl n forma monocromatidic). In faza S a interfazei, ncepe sinteza de
ADN. Cnd cantitatea de ADN a atins nivelul 4C (s-a dublat) intervin mecanisme foarte
exacte de stopare a sintezei. Celula intr n ultimul stadiu al interfazei, al doilea gol sintetic,
G 2 sau stadiu postsintetic. Stadiile S i G 2 corespund trecerii cromosomului despiralizat, de la
structura monocromatidic la cea bicromatidic. Durata acestor stadii este variabil, fiind o
caracteristic de specie. La sfritul fazei G 2 celula este pregtit pentru diviziune, trecnd la
a doua etap a ciclului celular faza distributiv.

Fig.1.3. Reprezentarea schematic a

ciclului celular (dup Watson i col.,
2004)

Mitoza reprezint procesul de diviziune a nucleului celulelor somatice, care asigur

ca cele dou celule fiice s primeasc fiecare cte un complement cromosomal identic cu cel
al celulei iniiale. Pregtirea diviziunii celulare se realizeaz pe parcursul interfazei cnd
cromosomii sunt despiralizai i sunt greu de observat n nucleu. Mitoza presupune
parcurgerea a patru etape succesive, obligatorii:
profaza: cromosomii sufer spiralizare i condensare progresiv, realizndu-se
individualizarea lor ca numr i caracteristici n funcie de specie: cromosomii
devin mai scuri i mai groi ca urmare a spiralizrii lor. In profaza trzie, au loc
trei fenomene: dispar nucleolii; membrana nuclear de dezintegreaz; apare fusul
de diviziune;
metafaza: cromosomii bicromatidici se ataeaz la fibrele fusului de diviziune cu
ajutorul kinetocorului i migreaz spre centrul celulei, formnd placa metafazic.
n metafaz, cromosomii prezint un maxim de condensare, ei putnd fi studiai
mai uor din punct de vedere morfologic i structural;
anafaza: are loc separarea cromatidelor surori prin clivarea longitudinal a
centromerilor i deplasarea lor spre polii opui ai fusului de diviziune; cromosomii
devin monocromatidici;
telofaza: cromosomii monocromatidici ajung la polii opui ai fusului de diviziune;
membrana nuclear se reface n jurul fiecrui grup de cromosomi; fusul de
diviziune dispare, nucleolii se reorganizeaz iar cromosomii se despiralizeaz. In
final, cei doi nuclei rezultai capt aspectul caracteristic din interfaz i celula se
divide (citokineza). Citokineza marcheaz nceputul interfazei unui nou ciclu
celular.
Distribuia echilibrat a materialului genetic n celulele fiice se realizeaz prin
intervenia unui aparat mitotic alctuit din fusul de diviziune, centrozom i kinetocor.

Meioza (gr. meion = a njumti), numit i diviziune reducional, reprezint

diviziunea celulelor germinale sau sexuale (diploide, 2n) n urma creia se formeaz gameii
(haploizi, n). Meioza const din dou diviziuni nucleare succesive: una reducional (meioza
I sau primar) i alta ecuaional (meioza II sau secundar). n meioza I, dintr-o celul
diploid, care are dou garnituri de cromosomi, una de origine matern, cealalt de origine
patern, se formeaz dou celule cu nuclei haploizi. Meioza II este asemntoare cu mitoza
obinuit, dintr-o celul haploid rezult dou celule haploide, dintr-o celul diploid iniial
se obin n final 4 celule hapoide, gameii (fig.1.4).
Meioza I (faza reducional) cuprinde mai multe faze, asemntoare ca succesiune cu
etapele mitozei, cea mai complex etap fiind profaza I.
Profaza I este o faz care dureaz mai multe zile la majoritatea organismelor
superioare i se mparte n urmtoarele subfaze:
leptonem (gr. leptos = subire): nucleul celulei are 2n cromosomi ce apar sub
form de filamente subiri, de-a lungul crora pot fi observate cromomerele, fiecare
cromosom fiind format din dou cromatide (bicromatidici);
zigonem (gr. zygon = jug): cromosomii omologi, unul matern i altul patern, ncep
s se uneasc din loc n loc de-a lungul cromatidelor nesurori, formndu-se perechi
de omologi numii bivaleni; fiecare bivalent conine patru cromatide, ei fiind
ataai de membrana nuclear prin intermediul telomerelor;
pachinem (gr. pachyns = gros): presupune realizarea mperecherii cromosomilor
omologi cu ajutorul complexului sinaptinemal (gr. synapto = unire); legtura
dintre cromosomii bivaleni devine tot mai strns, cromatidele nesurori se unesc
cromomer la cromomer, sinapsa fiind complet, ea permind realizarea
procesului de recombinare genetic intracromosomal (crossing over);
diplonem (gr. diplos = dublu): bivalenii unii prin sinaps ncep s se despart,
rmnnd unii doar la nivelul unor puncte de contact numite chiasme care
reprezint baza citologic a fenomenului de crossing over;
diachineza (gr. dia = divergent): cromosomii se condenseaz i se scurteaz
puternic; bivalenii rmn unii prin una sau dou chiasme pn n anafaza I la
nivelul cromatidelor nesurori i prin centromer la nivelul cromatidelor surori.
Nucleolii se dezorganizeaz i se iniiaz formarea fusului de diviziune, iar
membrana nuclear se dezorganizeaz, cromosomii desprinzndu-se de ea.

Fig.1.4. Comparaie ntre diviziunea mitotic i cea meiotic

Metafaza I: cromosomii bivaleni prezint un maxim de condensare i scurtare; ei se
ataeaz de fibrele fusului de diviziune cu ajutorul kinetocorilor i se plaseaz n zona
ecuatorial a celulei, formnd placa metafazic; orientarea bivalenilor nu ine cont de
originea lor matern sau patern.
Anafaza I: cromosomii omologi ncep s se ndeprteze unul de altul, cromatidele
nesurori se rup la nivelul chiasmelor, realizndu-se schimbul de segmente cromatidice;
cromosomii omologi separai, formai din cte dou cromatide, se deplaseaz spre cei doi poli
opui ai celulei; fiecare nucleu n anafaza I prezint un numr haploid de cromosomi.
Telofaza I: n jurul celor dou grupuri de cromosomi (n) ajuni la capetele fusului de
diviziune se formeaz membrana nuclear, cele dou celulele fiice formnd o diad.
La unele specii cromosomii trec direct de la telofaza I la profaza II fr s se
decondenseze. La alte specii ntre cele dou diviziuni meiotice exist o faz scurt numit
interkinez, n care ns nu are loc replicarea cromosomilor.
Meioza II (ecuaional) este asemntoare ca mod de desfurare cu procesul de
diviziune mitotic. Etapele i evenimentele sunt aceleai ca n cazul mitozei:
profaza II: este scurt i greu de observat la microscop.
metafaza II: membrana nuclear se dezorganizeaz; se formeaz fusul de
diviziune; cromosomii bicromatidici se ataeaz la fibrele fusului de diviziune i
se dispun n planul ecuatorial al celulei.
anafaza II: centromerii fiecrui cromosom se cliveaz longitudinal, astfel
cromatidele surori se separ i cromosomii unicromatidici migreaz spre polii
opui ai celulei.

10

 telofaza II: n jurul fiecrui set de cromosomi cu numr haploid se formeaz

membrana nuclear; se formeaz un grup de patru celule numit tetrada, fiecare
celul coninnd cte un set haploid de cromosomi unicromatidici.
n cadrul primei diviziuni meiotice se desfoar cele mai importante evenimente din
punct de vedere genetic: sinapsa cromosomal, recombinarea genetic intracromosomal
(crossing over), disjuncia independent a perechilor de cromosomi (recombinarea genetic
intercromosomal) i reducerea la jumtate a numrului de cromosomi. Primele dou au loc
n profaza I, al treilea are loc la trecerea din metafaza I n anafaza I, iar ultimul dup prima
diviziune meiotic.

11

Curs 2. STRUCTURA ACIZILOR NUCLEICI

DESCOPERIREA ROLULUI GENETIC AL ACIZILOR NUCLEICI
Materialul responsabil de transmiterea ereditar a caracterelor trebuie s ndeplineasc
trei caracteristici de baz:

s conin ntr-o form stabil informaia necesar pentru determinarea structurii

celulare a organismului, pentru realizarea funciilor, a dezvoltrii i reproducerii;

s se replice cu mare acuratee astfel nct celulele fiice rezultate n urma diviziunii s
conin aceeai informaie ca i celula parental;

s fie capabil s sufere schimbri deoarece, fr modificri la nivelul informaiei

genetice, organismele nu ar fi capabile s supravieuiasc n condiiile variate de
mediu.

Pentru stabilirea faptului ca ADN este substanta ereditara responsabil pentru

caracteristicile ce sunt transmise de la o generaie la alta, au fost necesare mai multe
experimente dintre care 2 au fost mai semnificative:
1. Experientele medicului englez Frederick Griffith, efectuate n 1928 cu
Diplococcus pneumoniae agent infectios ce determina pneumonia.

Aceasta bacterie se prezinta sub forma a 2 tipuri (tulpini) diferite:

Unul virulent notat cu S deoarece pe medii cu agar formeaza colonii netede

(smooth) celula sa fiind inconjurata de o capsula formata din polizaharide astfel
ca pot aparea diferite tipuri de pneumococi notate SI, SII si SIII;

Tipul tipul nevirulent- nu prezinta capsula formand colonii rugoase si a fost

notat cu R (rough=aspru, rugos).

In mod spontan, prin mutatie, tipul virulent S poate deveni cu o frecventa mica tipul
avirulent R (SI- RI, SII RII, SIII - RIII)
Urmarind sa obtina noi tipuri de vaccinuri prin injectare de pneumococi la soareci,
Griffith a realizat diferite variante experimentale in care a injectat cultura de
pneumococi in plamanii soarecilor.
Infectarea oarecilor cu pneumococi s-a realizat n diferite variante:

12

cu tulpini virulente de tip SIII soarecii mor

cu tulpini avirulente de tip RII- soarecii supravietuiesc

cu suspensie bacterian de tip SIII inactivat prin fierbere soarecii supravietuiesc

cu un amestec de bacterii de tip RII cu suspensie bacterian de tip SIII inactivat prin
fierbere- soarecii mor.

In ultima variant experimental rezultatul a fost: moartea oarecilor inoculai i detectarea

bacteriilor virulente de tip S alturi de cele de tip R , desi fiecare in parte nu determina
moartea animalelor.
Acest fapt a condus la concluzia c

anumite proprieti ale bacteriilor de tip S omorte prin tratament termic au

fost transferate bacteriilor avirulente de tip R, acestea devenind capabile de a
produce polizaharide capsulare.

Griffith descoperea astfel un fenomen biologic nou acela de transformare bacteriana

pe care nu l-a putut explica cauzal. El a realizat doar ca intr-un fel sau altul in prezenta
resturilor de pneumococilor virulenti de tip SIII, omorati prin fierbere, pneumococii vii
nevirulenti RII se transforma in pneumococi de tip SIII.
Iniial, componenta bacterian responsabil de transformare a fost denumit principiu
transformant

2. Experimentele decisive in elucidarea naturii agentului transformant au fost cele

realizate efectuate n 1944 de grupul de cercettori condus de Avery (Oswald Avery,
Collin MacLeod i Maclyn McCarty), s-a demonstrat, fr echivoc, natura acestuia:
acidul dezoxiribonucleic (ADN).

13

In acest caz, cercettorii au utilizat un lizat celular de la pneumococi viruleni de

tip SIII pe care l-au tratat cu diferite tipuri de enzime care au degradat fie proteinele,
fie polizaharidele, fie lipidele, fie acizii nucleici.
Lizatul tratat cu cte un tip de enzim a fost amestecat cu pneumococi aviruleni de tip
RII iar amestecul a fost plasat pe un mediu de cultur corespunztor.
In urma cultivrii diferitelor variante experimentale au fost obinui pneumococi
viruleni de tip SIII, excepie fcnd situaia n care lizatul a fost tratat cu enzimele ce
degradeaz n mod specific ADN.
Concluzia acestor experimente a fost aceea c ADN este purttorul informaiei genetice.

STRUCTURA ACIZILOR NUCLEICI

Descoperirea acizilor nucleici dateaz din anul 1868 cnd chimistul elveian Friedrik
Miescher a izolat din nuclei o substan cu caracter acid pe care a denumit-o nuclein.

ADN i ARN sunt molecule complexe, polinucleotidice, formate prin unirea unui
numr mare de uniti monomere, numite nucleotide.

O nucleotid reprezint unitatea structural fundamental a acizilor nucleici, fiind

alctuit din trei componente:

o baz azotat purinic sau pirimidinic

o molecul de pentoz, riboz, pentru ARN i dezoxiriboz pentru ADN

un rest de fosfat anorganic.

Fiecare tip de acid nucleic conine patru tipuri de nucleotide, care se deosebesc dup
natura bazelor azotate care intr n compoziia lor:

14

adenina (A), guanina (G), timina (T) i citozina (C), n structura ADN, respectiv

adenin (A), guanin (G), uracil (U) si citozina (C), n structura ARN.

Adenina (6-aminopurina) i guanina (2-amino-6-oxipurina) sunt baze purinice.

Timina (5-metil-2,6-dioxipirimidina), citozina (2-oxi-6-aminopirimidina) i uracilul

(2,6- dioxipiri-midina) sunt baze pirimidinice.

n afara acestor baze comune sau obinuite n structura ADN al unor bacteriofagi
au mai fost semnalate baze azotate modificate cum ar fi: 2-aminoadenina, 5hidroximetilcitozina, 5-hidroximetiluracil, 5-hidroxipentiluracil, 5-metilcitozina i
altele.

Pentozele ce intr n alctuirea acizilor nucleici sunt reprezentate de:

deoxiribox, n structura ADN i

riboz n structura ARN.

15

Denumirea celor dou tipuri de acizi nucleici reflect de fapt natura pentozei prezent n
structura lor.

Combinarea dintre o baz azotat i pentoz se realizeaz ntre carbonul 1' al pentozei
i atomul de azot din poziia 9 sau 1 din structura bazelor purinice, respectiv
pirimidinice prin legatura denumit -N-glucozidic. In urma acestei legturi se
formeaz nucleozidele.

Acidul fosforic se afl sub form de ortofosfat conferind moleculei caracterul acid i
numeroase sarcini negative.

16

Datorit acestor sarcini, acizii nucleici sunt molecule puternic ionizate.

In vivo, la eucariote sarcinile negative sunt neutralizate de histone n timp ce la procariote

neutralizarea se face cu ajutorul unor proteine asemntoare histonelor (histone-like
proteins).
Radicalul fosforic se ataeaz la nivelul carbonului 5 al pentozei din nucleozide ceea ce
are ca rezultat formarea nucleotidelor.

STRUCTURA PRIMAR A ADN

rezult din succesiunea celor patru deoxinucleotide specifice care intr n alctuirea
lui i stabilesc legturi fosfodiesterice covalente 3'-5'.

Aceste legturi se stabilesc ntre gruparea OH din poziia 3' a moleculei de

deoxiriboz a unei nucleotide i gruparea OH din poziia 5' a deoxiribozei din
nucleotida adiacent, prin intermediul gruprii fosfat

17

n felul acesta, se formeaz monocatene liniare cu o extremitate 3'-OH i una 5'fosforilat.

Aceast particularitate implic existena unei polariti a catenei polinucleotidice.

Prezena legturilor fosfodiesterice internucleotidice confer catenei un grad

important de flexibilitate care permite realizarea structurilor secundare i teriare ale
moleculelor, cu semnificaie funcional.

STRUCTURA SECUNDAR A MOLECULEI

ADN (MODELUL WATSON-CRICK)

rezult din asamblarea coaxial a dou catene polinucleotidice prin nfurarea lor,
una n jurul celeilalte i cu orientare spre dreapta.

18

Elaborarea modelului structurii secundare a ADN de ctre James Watson i Francis

Crick (1953) este considerat ca unul dintre cele mai importante evenimente care au
stat la baza evoluiei biologiei moleculare.

Modelul de structur propus de Watson i Crick a permis nelegerea mecanismelor

eseniale care asigur transmiterea corect a informaiei genetice.

19

Analizele efectuate de ctre Rosalind Franklin i Maurice Wilkins (fig.13a i b)

asupra moleculelor de ADN cu ajutorul difraciei n raze X, au sugerat existena unei
structuri paracristaline, cu dimensiuni repetate la intervale precis determinate.

Imaginile obinute de Franklin cu diferite tipuri de ADN erau foarte asemntoare, indiferent
de proveniena lor, n felul acesta demonstrndu-se existena unui model molecular unic
pentru macromoleculele de ADN.
Datele obinute a aceasta au reprezentat dovada experimental necesar modelului de
structur al ADN elaborat de Watson i Crick.
Cteva date experimentale anterioare au susinut elaborarea modelului de structur secundar,
dintre care sunt de amintit aa numitele legi ale lui Chargaff:

20

numrul bazelor purinice este egal cu cel al bazelor pirimidinice,

suma bazelor purinice este egal cu cea a bazelor pirimidinice: (A+G)=(T+C)

rapoartele A/T = 1, G/C = 1 i A+G/T+C = 1.

Curs 3. PRINCIPIILE FUNDAMENTALE ALE ADN

n conformitate cu modelul dublu helical al moleculei de ADN, aceast structur are
la baz dou caracteristici sau principii fundamentale:

principiul complementaritii i

cel al antiparalelismului.

Principiul complementaritii
Prin acest principiu se nelege c nu exist nici o restricie n ceea ce privete
succesiunea bazelor azotate de-a lungul uneia dintre catene, dar secvena bazelor din
una dintre catene specific obligatoriu secvena bazelor n catena opus.
Astfel, cele dou catene ale ADN au, n mod obligatoriu, secvene complementare.
La nivel molecular, fenomenul de complementaritate este determinat de faptul c cele
dou catene polinucleotidice sunt meninute mpreun prin legturi de hidrogen
intercatenare, care se stabilesc ntre bazele azotate situate pe cele dou catene numai sub
forma unor perechi riguros specifice.
Spre deosebire de ARN , care este format de regula dintr-o singura catena
polinucleotidica, ADN este alcatuit din 2 catene antiparalele legate intre ele intotdeauna
printr-o legatura intre o baza azotata purinica si una pirimidinica.
Ca urmare in molecula de ADN nu exista decat urmatoarele tipuri de legaturi:

A T ; 2 leg de H

T A ; 2 leg de H

G C ; 3 leg de H

C G . 3 leg de H

Adenina i timina se pot mperechea spaial prin stabilirea a dou legturi de hidrogen, iar
citozina i guanina prin trei legturi de hidrogen.
Datorit acestui fapt legturile G-C sunt mai stabile, ceea ce influeneaz proprietile fizice,
chimice i biologice ale moleculei.
Complementaritatea bazelor reprezint particularitatea cea mai important a moleculei de
ADN.
Ea explic mecanismul de replicare corect a ADN, ct i capacitatea de transmitere fidel a
informaiei genetice.

21

Prin complementaritate se explic i mecanismele transcrierii i traducerii informaiei

genetice.
Ea st la baza unor procese fundamentale cum sunt cele de recombinare genetic i de
reparare a leziunilor ADN produse de factorii de mediu.

Principiul antiparalelismului
A doua caracteristic fundamental a modelului Watson-Crick deriv din modul de
orientare a legturilor fosfodiesterice 3'5' n cele dou catene cu polaritate opus:

ele sunt orientate n direcii opuse, adic sunt antiparalele una fa de cealalt .

Aceast particularitate explic i replicarea ADN a crui sintez ncepe de la

extremitatea liber 5' spre cea 3', pentru fiecare caten, determinnd o cretere a
catenei n formare n direcia 5'3'.

22

Cele dou catene antiparalele (5'3', 3'5') sunt alctuite spre exterior din molecule
de deoxiriboz (componenta hidrofil) legate ntre ele cu grupri fosfat prin legturi
fosfodiesterice.
Bazele azotate (componentele hidrofobe ale nucleotidelor), orientate spre interiorul
dublei elice, de pe cele dou catene sunt legate ntre ele prin legturi de hidrogen i de
moleculele de dezoxiriboz prin legturi -N-glicozidice .
Coloana vertebral a moleculei este alctuit din dou catene polinucleotidice, care
formeaz o dubl elice dirijat spre dreapta, n jurul unui ax imaginar comun. (FIGURA)
23

Cele dou catene, denumite colocvial catena Watson, iar cea complementar caten
Crick, sunt rsucite una fa de cealalt formnd o dubl elice regulat cu diametrul de
2 nm, care prezint o incizur mic de 1,2 nm i o incizur mare de 2,2nm (1nm = 10-9
m). (Figura de sus)
Distana ntre dou nucleotide este de 0,34 nm, iar un tur complet de spir are 3,4 nm.
Molecula de ADN dublu catenar este stabilizat de cel puin trei categorii de fore:

legturile de hidrogen care asigur mperecherea bazelor dei sunt slabe, contribuie la
stabilizarea moleculei datorit numrului lor mare. Se apreciaz c energia necesar
pentru ruperea acestor legturi de hidrogen este de aproximativ 5,6 cal/mol;

interaciunile electronice, respectiv legturile Van der Waals i atraciile dipol-dipol

dintre planurile bazelor suprapuse

- prile hidrofile ale moleculei (pentoza + fosfat) sunt ndreptate spre exteriorul dublei elice,
iar cele hidrofobe (bazele azotate) sunt situate spre interiorul ei, conferind maximum de
stabilitate moleculei.
Studiul difraciei razelor X la trecerea prin soluii de ADN a demonstrat existena unor
tipuri conformaionale, uor diferite, care au fost notate cu A, B, i C.

Conformaia de tip B este cea mai apropiat de modelul Watson-Crick, avnd

pasul elicei de 3,4 nm, 10 pb per tur de elice i planul de orientare al bazelor
perpendicular pe axul dublului helix.

Conformaia de tip A i conformaia de tip C prezint uoare abateri fa de

conformaia de tip B, ele ntlnindu-se la grupuri restrnse de sisteme biologice.

Pe lng conformaiile moleculare menionate, s-a mai descris i o a patra modalitate

de rsucire a catenelor de ADN: conformaia de tip Z. Conformaia Z corespunde
unor molecule de ADN care se abat de la modelul clasic descris de Watson i
Crick .

24

In ceea ce privete scrierea secvenei de baze dintr-o anumit molecul de ADN

exist o anumit convenie:

de obicei, se utilizeaz literele corespunztoare bazelor azotate ce alctuiesc

nucleotidele din secvena de interes:
5 C A T G T G C 3
3 G T A C A C G 5

Uneori ns, n notaii se specific i legtura fosfodiesteric prin introducerea literei p

ntre literele ce specific bazele: CpApTpGpTpGpCp etc.
In anumite situaii este necesar s se scrie secvena de nucleotide de pe ambele catene dar, de
cele mai multe ori se noteaz numai succesiunea de nucleotide de o caten tiind c pe
cealalt exist nucleotidele complementare.
25

Notarea ncepe ntotdeauna cu nucleotidele de la captul 5 al ADN (n partea stng),

nefiind necesar specificarea captului 5 i 3.
Astfel, dac secvena de nucleotide precizat mai sus ar reprezenta o parte dintr-o gen, ea ar
putea fi scris direct sub forma: C A T G T G C (Elliott i Elliott, 1997).

Proprietile fizico-chimice ale ADN

Particularitile moleculelor de acizi nucleici, a ADN n special, pot fi determinate prin
utilizarea unor tehnici variate aplicarea acestora depinznd de scopul cercetrilor:

microscopie electronic,

ultracentrifugare,

electroforez, s

pectrofotometrie etc,

Masa molecular i dimensiuni

Sub raportul masei moleculare sunt cele mai mari molecule din sistemele vii, ajungnd
la 107 4 x 109 daltoni.
In cazul ADN viral acesta poate conine cteva sute de perechi de baze, iar ADN al
bacteriei Escherichia coli are aproximativ 4 milioane de perechi de baze.
La om lungimea ADN per complement haploid (genom, n = 23 cromosomi), corespunde
la 3,3 x 109 perechi baze sau 3,3 x 106 Kbaze = 1m lungime.
Dac inem cont c n organismul uman exist aproximativ 1013 celule diploide i se
calculeaz lungimea total a ADN coninut n aceste celule, se poate ajunge la o valoarea
astronomic, de ordinul diametrului sistemului solar (Elliott i Elliott, 1997).
Conformaia molecular a moleculelor poate fi determinat prin utilizarea
electroforezei n gel de agaroz i a microscopiei electronice.
Datorit metodelor brutale de purificare a ADN, lungimea corect a unei molecule se
poate aprecia numai prin corelarea datelor obinute prin dou trei metode, dintre care
sunt de amintit:

26

microscopia electronic,

autoradiografia,

coeficientul de sedimentare,

densitatea de plutire.

Compoziia n baze a ADN i semnificaia acesteia

Absorbia radiaiilor ultraviolete cu lungimea de und de 260 nm, folosit pentru
determinri cantitative de ADN din soluii, nu este aceeai pentru formele
monocatenare i bicatenare ale acestuia.
S-a constatat n mod experimental c absorbia UV este cu 3040 % mai mare n
cazul formelor monocatenare, fa de cele bicatenare la care are loc o mascare a bazelor
azotate (implicate n absorbie) ca efect al structurii sale.
Analiza coninutului n baze azotate din ADN de diferite origini, a artat o
variaie relativ a cantitii acestora n funcie de sursa de provenien a materialului
genetic.
Compoziia n baze se exprim n general n procente de G+C din cantitatea
total de ADN, sau sub forma raportului A+T/G+C.
Dei raportul este variabil de la o specie la alta, la organismele pluricelulare acest
raport este acelai indiferent de natura celulelor sau esutului de origine
Unele dintre proprietile ADN sunt puternic influenate de procentul G+C.
Astfel, densitatea unei soluii de ADN este cu att mai mare cu ct cantitatea de G+C
crete.
Ca urmare, se poate determina acest coninut G+C i indirect n funcie de densitatea de
plutire.
Aprecierea coninutului n G+C se mai poate face i prin determinarea punctului de
topire (Tm = melting point temperature).
Temperatura medie de topire (Tm) este influenat de mai muli factori dintre care cel
mai important este proporia bazelor GC.
Aceste baze azotate, fiind legate prin legturi triple de hidrogen asigur structurii dublu
catenare o mai mare stabilitate, deci ruperea lor necesit o temperatur mai ridicat
(un punct de topire mai ridicat) comparativ cu bazele AT.
Valoarea punctului de topire va da deci indicaii asupra proporiei de baze GC ce intr
n compoziia ADN dublu catenar, variind n funcie de specie i constituind astfel un
criteriu taxonomic, cel puin pentru bacterii.

Denaturarea i renaturarea ADN

Moleculele de ADN dublu catenar pot suferi modificri ale proprietilor lor fizice ca
rezultat al aciunii unor factori fizici sau chimici.

27

Experimental s-a demonstrat c prin nclzirea la temperaturi cuprinse ntre

63C i 100C a soluiilor ce conin ADN, n funcie de natura i proveniena
moleculelor de ADN acestea sufer o rupere a legturilor de hidrogen care leag n mod
normal bazele.
In consecin, cele dou catene ale ADN se separ, moleculele devenind
monocatenare.
Fenomenul se numete denaturare termic, el fiind denumit i topire, deoarece este
nsoit de o fluidizare a soluiei, iar cldura furnizeaz energia necesar pentru ruperea
legturilor de hidrogen.
Fenomenul de denaturare se realizeaz n mai multe etape.

Iniial, cele dou catene se deruleaz parial dar rmn reunite prin anumite
segmente dublu catenare n care bazele continu s formeze perechi.

Cnd temperatura a atins punctul de topire are loc separarea complet a celor
dou catene.

Temperatura de denaturare este influenat de mai muli factori dintre care cel mai
important este proporia de GC.
Cele trei legturi de hidrogen dintre bazele azotate, asigur n mai mare msur
stabilitatea structurii dublu catenare.
Dovada o constituie faptul c topirea termic, derularea i denaturarea ncep n regiuni
bogate n legturi A-T i continu cu cele cu coninut crescut n G-C.
Temperatura de topire este cu att mai mare cu ct procentul GC este mai ridicat.
Efectul hipercromic nsoete procesul de denaturare termic i se manifest printr-o
cretere progresiv a capacitii de absorbie a radiaiilor UV cu lungimea de und de
260 nm.

Aceast cretere este corelat cu coninutul n baze de tipul A-T i va fi n final cu

aproximativ 40% mai mare fa de absorbia moleculelor normale bicatenare.

Dac soluia de ADN denaturat este rcit brusc, catenele complementare rmn separate,
ceea ce nseamn c procesul de denaturare a devenit permanent.
n schimb, dac rcirea este lent, are loc procesul de refacere a legturilor de hidrogen dintre
bazele complementare ale catenelor i deci refacerea moleculelor dublu catenare. Procesul a
fost numit renaturare.
Eficienta procesului se poate prin metode biologice precum scderea puterii de absorbie a
radiaiilor UV (efect hipocromic).
28

Hibridarea molecular
Una dintre cele mai importante aplicaii ale procesului de denaturare renaturare este
hibridarea molecular.
Ea permite renaturarea prin combinarea unor molecule de ADN monocatenare
sau de ADN monocatenar i ARN.
Se formeaz molecule hibride de tip ADN ADN sau ADN ARN, indiferent de
proveniena lor, cu condiia existenei unui grad de nrudire, respectiv de
complementaritate n secvena bazelor.
Detectarea moleculelor hibride se poate face prin microscopie electronic deoarece
regiunile dublu catenare prezint un contur mai gros.
Hibridarea molecular poate fi utilizat pentru a aprecia gradul de similaritate
n secvena bazelor ntre ADN provenit de la dou organisme diferite.
Deoarece ARN este complementar unei catene a moleculei de ADN, de pe care a fost
transcris i identic celeilalte (cu excepia T nlocuit de U n cazul ARN), tehnica hibridrii
moleculare permite s se stabileasc cu precizie regiunea din cromosom de la care s-a
fcut transcrierea.
Tehnica hibridrii ADN permite evidenierea cu acuratee a deleiilor sau a substituiilor
provocate de mutaii i d informaii privind gradul de extindere i poziie a acestora.
Dup denaturarea termic moleculele de ADN provenite dintr-un genom de tip slbatic
i din genomul mutant puse n condiii favorabile pentru renaturare formeaz un
heteroduplex.
Reasocierea este perfect cu excepia regiunii n care nu exist complementaritate.
Moleculele heteroduplex prezint n acest caz o bucl de deleie.

29

Formarea heteroduplexurilor ADN-ADN cu evidenierea prezenei mutaiilor (A) sau

a buclelor D (A), la nivelul unor molecule de ADN obinute de la organisme nrudite.
Studiul hibrizilor ADN-ARN a permis elucidarea unor aspecte legate de funciile
acizilor nucleici, de particularitile de structur ale genelor (de exemplu structura
discontinu a genelor de la eucariote) sau de localizarea unor gene la nivelul ADN (de
exemplu a genelor pentru ARNr 28S, 18S, 5S).
Cercetrile efectuate asupra acestor hibrizi a demonstrat rolul de matri al ADN
pentru sinteza ARNm

30

Curs 4. ORGANIZAREA MATERIALULUI GENETIC

Sistemele biologice cuprind dou tipuri fundamentale de organizare:

- viral (molecular) i
- celular.

La rndul ei organizarea celular cuprinde dou categorii divergente de organizare:

- cea procariot i
- cea eucariot

Organizarea genomului viral

Virusurile se caracterizeaz prin:

Nu au organizare celulara, ele se replica exclusiv in celulele vii pe care le

infecteaza;

Materialul genetic este reprezentat de un singur tip de acid nucleic: fie ADN, fie
ARN, niciodat ambele.

Virusurile nu cresc, nu se divid i nu posed un aparat enzimatic pentru

producere de energie, deci nu au metabolism.

Niciodat o particul viral nu provine n urma diviziunii unei particule

preexistente.

O particula virala rezult din autoasamblarea componentelor sale moleculare

sintetizate de celula gazd pe baza instruciunilor nscrise n acidul nucleic viral.

Ele se deosebesc de sistemele biologice existente n natur dar pot fi considerate

sisteme biologice deoarece prezint caracteristici structurale i dimensiuni
constante, pot suferi mutaii i recombinri.

Virusurile au organizare acelular.

Particula viral matur, numit i virion sau virus infecios matur reprezint o
structur alctuit dintr-un:
- nveli proteic capsid i
- un miez de acid nucleic
Miezul de acid nucleic este constituit din:
-

ADN (dublu catenar sau monocatenar) la deoxiribovirusuri sau

din ARN (dublu catenar sau monocatenar) la ribovirusuri,

ntr-un acelai virion nentlnindu-se niciodat ambele tipuri de acizi nucleici.

31

Reprezentarea schematic a alctuirii unui virion

Virusurile au organizare acelular.
Particula viral matur, numit i virion sau virus infecios matur reprezint o
structur alctuit dintr-un:
- nveli proteic capsid i
- un miez de acid nucleic
Miezul de acid nucleic este constituit din:
-

ADN (dublu catenar sau monocatenar) la deoxiribovirusuri sau

din ARN (dublu catenar sau monocatenar) la ribovirusuri,

ntr-un acelai virion nentlnindu-se niciodat ambele tipuri de acizi nucleici.

Miezul de acid nucleic se numete cromosom viral i conine informaia genetic pentru
planurile arhitecturale ale virusului care sunt reproduse de componentele celulei gazd.
Din acest motiv virusurile sunt parazii obligatoriu intracelular la nivel genetic i
manifest o nalt i strict specificitate de gazd.
n afar de virion, virusul poate s existe i

sub forma virusului vegetativ (corespunde cromosomului viral aflat liber n

citoplasma celulei gazd, n timpul multiplicrii sale) sau

sub form de provirus, cnd este integrat n cromosomul celulei gazd.

n cazul deoxiribovirusurilor,

ADN poate fi dublu catenar (linear sau circular) (T4, SV40) sau monocatenar
(circular) (phiX174).

32

n acest din urm caz devine dublu catenar n timpul replicrii.

De obicei, ADN viral dublu catenar este transcris la ARNm cu ajutorul ARNpolimerazei ce aparine gazdei;

La virusurile cu genom ADN monocatenar sinteza catenei ADN complementare

corespunztoare ca i transcrierea genelor virale se realizeaz cu ajutorul
enzimelor gazdei.

Ribovirusurile:
Au genomul reprezentat de o macromolecula de ARN si sunt de mai multe categorii:

Cu ARN monocatenar pozitiv (tip +) cum sunt aproape toate virusurile

plantelor, bacteriofagii R17, MS2, virusul poliomielitei, guturaiului etc au un
material genetic care serveste concomitent ca ARNm si pentru replicare.

Dupa ce genomul viral a patruns in celula gazda , ARN viral functioneaza ca ARNm,
realizandu-se astfel sinteza unor proteine necesare replicarii si a unor proteine virale.
Apoi genomul viral incepe replicarea ce consta in sinteza unei catene complementare (-)
pe baza careia se sintetizeaza un numar mare de genomuri virale.

ARN monocatenar pozitiv (tip -) virusul gripei, VMT etc.

In acest caz dupa ce genomul viral patrunde in celula, are loc mai intai sinteza
unei catene de ARN complementara care poate servi ca ARNm pentru sinteza de
enzime si de proteine virale.

Replicarea ribovirusurilor este mediata de enzimele ARN polimeraze care sunt

codificate in genomul viral.
In cazul virusurilor ARN monocatenare negative, enzimele necesare replicarii lor sunt
incorporate in particula virala, astfel ca imediat dupa infectie ele sunt in masura sa
realizeze replicarea ARN viral. In acest caz prezenta enzimei ARN polimerazei in
particula virala este absolut necesara pentru replicarea ARN viral (virusul conine o
ARN polimeraz dependent de ARN).
In unele cazuri, de exemplu virusui gripal, genomul este alctuit din ARN monocatenar
format din 8 fragmente, fiecare cuplata cu enzima necesara pentru replicare (ARN
polimeraza).

Exista ribovirusuri la care genomul viral este reprezentat de o macromolecula de

ARN dublu catenar segmentat la plante si animale sunt cunoscute putine
cazuri.

Ele au genomul segmentat in 10-15 bucati, unele dintre ele avand si o mica cantitate de
ARN monocatenar. Dupa ce patrund in celula cu ajutorul ARN polimerazei are loc
sinteza de ARNm de pe catena negativa , fara ca cealalta catena (pozitiva) sa fie
33

indepartata. Pe baza acestui ARNm are loc sinteza de proteine virale si replicarea
genomului viral.

O categorie aparte de ribovirusuri sunt retrovirusurile sau virusurile ARN

tumorale In aceasta categorie crora este inclus i virusul HIV rspunztor de
producerea SIDA..

Aceste virusuri ARN monocatenare au capacitatea de a se replica prin

intermediul ADN celular si pot induce tumori maligne.

Pentru replicarea lor, genomul viral de tip ARN este copiat in ADN-ul celular cu
ajutorul unei enzime numita revers-transcriptaza. Genomul viral copiat in ADN
este integrat in genomul celular devenind provirus ADN si replicat odata cu
acesta.

Replicarea retovirusurilor are loc in general astfel:

ARN monocatenar viral care infecteaz celulele mamaliene este transcris in ADN cu
ajutorul enzimei revers-transcriptaza, se formeaza mai intai un hibrid ARN-ADN, apoi
se realizeaza sinteza unei molecule de ADNdc, linear sau circular, care este de fapt
provirusul ADN ce se integreaza in genomul celular. Provirusul ADN integrat in
genomul celular poate fi la un moment dat sa fie transcris in ARN monocatenar viral
(de ex. Sub influenta radiatiilor sau substantelor mutagene).

Imagine electronomicroscopica a virusului gripei H1N1

34

Curs 5. ORGANIZAREA CELULAR

Toate organismele actuale prezint o anumit organizare celular. Aceast

organizare a reprezentat o etap esenial n evoluia materiei vii care a deschis
noi perspective de evoluie.

Organizarea celular actual cuprinde dou tipuri principale de organizare

genetic:

procariot i eucariot

Organizarea genomului procariot

Organizarea procariot este ntlnit la bacterii, inclusiv la actinomicete i cianobacterii, i prezint toate atributele organizrii celulare:

autoreproducerea i morfogeneza autonom.

Genomul procariot este alctuit din dou categorii de determinani genetici:

1. gene eseniale, localizate n structura cromosomului i
2. gene accesorii prezente n structura plasmidelor i a elementelor genetice
transpozabile.

Cromosomul circular bacterian este atasat de membrana celulara, si este

reprezentat de o molecula de ANDdc cu lungimea de 700-900 microni.

Elementele genetice extracromosomale conin informaie genetic suplimentar,

accesorie, care permite celulelor procariote o mai bun adaptare la condiii de
mediu noi sau modificate.

Cromosomul bacterian

Este alctuit dintr-o molecul de ADN dublu catenar helical, circular, nchis
covalent.

La bacteria Escherichia coli asupra creia s-au realizat cele mai multe studii,
cromosomul conine 4,1 x 106 perechi de nucleotide, are un diametru de 2,5 nm, o
lungime de aproximativ 1360 m i o mas molecular de, aproximativ, 2,5 x 109
Da.
Molecula respectiv este inclavat direct n citoplasm i formeaz structura
cunoscut sub numele de nucleoid, nucleosom, nucleoplasm, material nuclear sau
nucleu de tip procariot (lipsit de membran nuclear).

35

Cromosomul bacterian ocup o regiune limitat, n general la nivelul zonei

centrale a celulei bacteriene, avnd un aspect mai clar pe electronografii

Regiunea celular ocupat de cromosom este plin de fibrile fine, paralele,

ondulate,

cu

diametrul

de

2-5

nm

care

dispar

dup

digestie

cu

dezoxiribonucleaz (DN-az).

Mrimea i forma nucleoidului bacterian variaz foarte mult n funcie de

natura mediului de cultur i a condiiilor de mediu.

S-a demonstrat c din punct de vedere chimic, nucleoidul este un complex ADNARN-proteine n care ADN reprezint 80% i constituie cromosomul propriuzis.

Componenta proteic reprezint 10% din nucleoid i este format n cea mai
mare parte din enzime cu rol in replicarea materialului genetic numit
polimeraze.

cromosomul bacterian consta din 40-50 de bucle de marimi diferite ale

macromoleculei de AND, care contin mici de ARN si proteine. Fircare bucla
prezinta super-rasuciri secundare.

Aceasta structura a cromozomului circular bacterian este stabila si ii confera

continuitate de-a lungul generatiilor.

36

Elementele genetice accesorii (EGA)

Numite i elemente genetice extracromosomale (EGE) sau elemente ADN

accesorii, EGA sunt reprezentate de: plasmide, secvene de inserie (SI),
transpozoni (Tn) i de unii bacteriofagi.

Comparativ cu informaia genetic cromosomal, EGA prezint anumite

proprieti:

includ informaie genetic accesorie, neesenial pentru reproducerea

organismului purttor, iar unele dintre ele nu confer nici o proprietate

detectabil;

sunt capabile de replicare i chiar suprareplicare independent fa de

cromosomul bacteriei purttoare

Plasmidele

Dintre EGA existente la procariote cele mai importante sunt plasmidele.

37

Ele sunt spaial separate de cromosom, au capacitatea de a se replica autonom

fa de acesta i pot fi perpetuate stabil n aceast stare.

Plasmidele conin informaie genetic neesenial pentru creterea normal a celulelor

gazd, ele putnd fi pierdute sau dobndite fr s afecteze viabilitatea celulei gazd.

Plasmidele pot fi considerate cromosomi miniaturali (reprezint 1-2% din

cromosomul bacterian), ele fiind alctuite din molecule de ADN dublu catenare,
covalent nchise sau, n anumite cazuri, lineare, care conin informaie genetic
suplimentar pentru bacteriile posesoare (Summers, 1996).

Masa molecular a plasmidelor variaz n limite foarte largi: de la 1,5 x 106 Da

pn la 150 x 106 Da sau chiar mai mult la unele plasmide mari.

Cercetri recente au artat c proprietile de nodulare i fixare a azotului la bacteriile

din genul Rhizobium sunt determinate de gene localizate pe plasmide mari
(megaplasmide) ce ajung la 400-450 MDa.

Plasmidele sunt denumite i clasificate n mod curent dup efectul cel mai
evident produs asupra celulelor gazd.

Aceast clasificare este ns nesatisfctoare deoarece multe plasmide au mai

mult de un efect (plasmidele de rezisten pot determina i alte caracteristici
fenotipice, cum ar fi conjugarea bacterian).

n plus, plasmidele pot pierde sau ctiga prin recombinare diferii determinani
genetici care codific proprieti noi.

Pentru a se evita acest neajuns s-a propus clasificarea lor pe criteriul

incompatibilitii, adic al capacitii lor de a exclude alte plasmide de acelai tip
de la coexistena n aceeai celul gazd. Pe acest criteriu au fost descrise la
bacteriile Gram negative peste 30 de grupuri de incompatibilitate, iar la cele
Gram pozitive 18 grupuri de incompatibilitate.

Elementele genetice transpozabile

Identificate iniial la porumb de ctre Barbara McClintock, elementele genetice

transpozabile au fost evideniate i la alte organisme, inclusiv la bacterii, ele fiind
reprezentate de anumite segmente de ADN capabile s-i modifice poziia fie pe
acelai replicon fie pe repliconi diferii.

38

Cu toate c elementele genetice transpozabile (secvene de inserie, transpozoni

etc) sunt larg rspndite n lumea vie (bacterii, fungi, insecte, plante, mamifere),
cele mai studiate au fost cele de la bacterii.

Semnificaia elementelor genetice transpozabile rezid nu numai din faptul c ele

se pot integra n diferite situsuri ale unui replicon sau la nivelul unor repliconi
diferii, mrind cantitatea de material genetic, ci i din faptul c ele pot produce
modificri n funcionarea genelor (activeaz gene silenioase sau inactiveaz
gene normal funcionale).

Curs 6. Genomul eucariot

Cromozomii eucariotelor au o structura mai complexa fiind alcatuiti din ADN,

ARN, proteine histonice si non-histonice, ioni de Mg si de Ca.

Deoarece materialul genetic de la eucariote, prin localizarea sa n nucleu, este

separat de sediul sintezei proteice, transcrierea genetic nu mai este cuplat cu
traducerea: primul fenomen se desfoar n nucleu, iar cel de-al doilea se
realizeaz n citoplasm, unde se gsesc i ribozomii.

La eucariote complexarea permanent a ADN cromosomal cu anumite proteine

bazice (histonele) face ca substana nuclear (cromatina) s prezinte la nivel
ultrastructural un aspect fibros, unitatea structural a cromosomilor fiind fibra
de cromatin.

Tipuri de cromatin

se poate gsi, la nivelul cromosomilor, n dou stri interconvertibile:

eucromatin i heterocromatin.

Eucromatina sufer o condensare intens n diviziune i decondensare puternic

n interfaz;

ea apare sub form dispersat la nivelul nucleului interfazic.

Heterocromatina este condensat pe tot parcursul ciclului celular, aprnd mai

intens colorat dect eucromatina;

ea se localizeaz, de obicei, la nivelul anumitor regiuni cromosomale.

Starea difuz a cromatinei este propice funcionrii sale n transcriere i replicare.

39

Regiunile eucromatice ale cromosomilor prezint replicare timpurie, pe cnd cele

heterocromatice se replic, de regul, trziu, spre sfritul fazei de sintez (S).

Diferitele tipuri de celule specializate prezint o distribuie specific a

eucromatinei i heterocromatinei n funcie de starea lor funcional.

Heterocromatina este adesea asociat cu membrana intern a nveliului nuclear,

implicat n schimburile materiale, energetice i informaionale nucleu citoplasm.

In lucrrile recente (Lewin, 1997) se apreciaz c la nivelul cromosomilor exist

dou tipuri de heterocromatin:

heterocromatina constitutiv format din regiuni care nu sunt exprimate

(transcrise).

heterocromatina facultativ care ia forma unor cromosomi ntregi n anumite

tipuri celulare.

Cel mai cunoscut exemplu este cromatina sexual ce reprezint unul dintre cromosomii
X de la femelele de mamifere care se inactiveaz permanent, randomic, prin
heterocromatinizare.

Heterocromatinizarea cromatinei i a unor cromosomi ntregi reprezint unul

dintre mecanismele principale de reglare a activitii genetice la eucariote.

Diferitele tipuri de heterocromatin constitutiv pot fi evideniate prin metodele

de bandare cromosomal, prin care apar, colorate difereniat, sub forma unor
benzi transversale pe lungimea cromosomului. Modelul lor este specie specific
i identic n condiii normale pentru ambii cromosomi din pereche (la
organismele diploide).

Intre eucromatin i heterocromatin apar diferenieri i la nivelul structurilor

fizice.

Eucromatina are elemente ultrastructurale predominante fibrele nucleohistonice

de 100 nm diametru, n timp ce

heterocromatina are fibre nucleohistonice de 250 nm diametru, acestea aprnd

mai condensate i dnd o reacie Feulgen pozitiv mai intens.

Dac

eucromatina

cuprinde

genele

majore,

funcionale,

structurale,

heterocromatina prezint mai ales funcii reglatoare, modificnd n mod specific

aciunea unor gene.

Rolul structural al heterocromatinei este legat de stabilizarea structurii

centromerice i a capetelor cromosomilor (telomere) n mperecherea
cromosomilor n meioz i n recombinarea intracromosomal.

40

Rolul funcional este legat de controlul diferenierii celulare, inactivarea

activitii genice n mecanismul compensaiei de doz la genele X-linkate
(lionizare).

Compoziia cromosomilor eucariotelor

n privina compoziiei chimice, cromosomii la eucariote sunt constituii din

ADN (1315%), ARN (12-13%), proteine histonice i nonhistonice (68-72%),
mici cantiti de lipide, ioni de Ca2+ i Mg2+, unele poliamine (spermina i
spermidina).

Cantitatea acestor componente la nivelul nucleului i al cromosomilor la

eucariote este variabil n funcie de specie, tip morfofuncional de celul, etap
ontogenetic sau treapt filogenetic.

Cantitatea de ADN n celula eucariot este foarte mare comparativ cu celulele

bacteriene.

La om, de exemplu, cantitatea de ADN este de 1000 de ori mai mare dect la
E.coli.

ADN cromosomal formeaz componenta esenial a cromosomului eucariot fiind

stabilit faptul c n fiecare cromosom exist o molecul de ADN asociat cu
proteine spre a forma fibra nucleohistonic sau fibra de cromatin.

Plierea determin n final structura morfogenetic denumit cromosom

(corpuscul colorat conform denumirii pe care Waldeyer le-a atribuit-o n
1888).

Ca i n cazul procariotelor, lungimea extrem de mare a moleculei de ADN este

redus printr-o mpachetare specific realizat, de aceast dat, n urma
complexrii ADN cu alte componente moleculare i, n primul rnd, cu proteine
bazice denumite histone. Fiecare cromosom interfazic conine o singur molecul
linear de ADN dublu catenar (aceasta corespunde unei cromatide) (Darnell i
colab., 1986).

Cromosomul replicat este bicromatidic, fiind alctuit din dou molecule identice
de ADN i se prezint ntr-o stare mult mai condensat (de 5-10 ori) comparativ
cu cel interfazic.

Clasele de secven din ADN eucariot. Tehnicile biochimice i biofizice care implic
secvenierea (stabilirea ordinii nucleotidelor n molecula de ADN), stabilirea
41

punctului de topire ca i ultracentrifugarea n gradient de clorur de cesiu au pus n

eviden mai multe benzi;

benzile mai mici au cptat denumirea de ADN satelit. El reprezint, de regul,

secvene simple dar repetate de foarte multe ori.

Aceste secvene sunt localizate n special la nivelul unor anumite regiuni ale
cromatinei (la nivelul heterocromatinei).

Datorit repetrii de foarte multe ori a acestor secvene simple ADN satelit se
mai numete i ADN repetitiv

S-a stabilit c exist trei tipuri distincte de secvene n ADN eucariot (Gavril, 2003):

secvene unice sau nerepetate, prezente ntr-o singur copie n genom: ele
corespund genelor structurale ce codific sinteza catenelor polipeptidice i a
genelor reglatoare adiacente.

Aceste secvene sunt localizate la nivelul eucromatinei, existnd ns i secvene

necodificatoare care nu se repet;

secvene moderat repetate: sunt secvene simple cu lungimea de 100-150 pb

repetate de 102-105 ori n genom; ele reprezint aproximativ 30-60% din ADN
total. Secvenele menionate formeaz hibrizi cu ARN, ceea ce nseamn c ADN
este parial transcris. Se consider c unele secvene de ADN moderat repetate
reprezint genele pentru ARNr, ARNt sau pentru histone, ele fiind localizate la
nivelul regiunilor de eucromatin;

secvene nalt repetate: constituie o parte important a ADN care se mai numete
i ADN satelit.

Unitatea de repetiie este format dintr-un numr mic de nucleotide care sunt
repetate de pn la un milion de ori per genom haploid; la aceste secvene
renaturarea este foarte rapid.

Aceste secvene sunt localizate mai ales la nivelul heterocromatinei din regiunea
centromerului, a telomerelor i a constriciilor secundare.

Dac aceste secvene sunt alctuite din cteva zeci de nucleotide repetate sub
form tandemic se vorbete despre microsatelii.

42

Proteinele histonice

ADN eucariot cu localizare nuclear este asociat n permanen cu proteine

bazice denumite histone.

Aceste proteine au ncrctur pozitiv i interacioneaz cu gruprile fosfat ale

ADN. Complexul nucleohistonic rezultat se numete cromatin.

Histonele au un rol structural n meninerea i controlul conformaiei

cromosomului i, pe de alt parte, asigur reglarea genic grosier.

Histonele acioneaz ca represori ai activitii genetice, deoarece prin

condensarea cromatinei i superspiralizarea ADN determin inhibiia steric a
transcrierii, starea condensat a ADN nefiind propice pentru transcriere.

La eucariotele superioare, au fost descrise 5 tipuri de histone, notate H1, H2A,

H2B, H3 i H4 care se pot separa prin cromatografie pe schimbtori de ioni.

Cu excepia histonei H1, toate celelalte histone se afl n raport echimolar cu

ADN.

Legarea histonelor la ADN se realizeaz prin intermediul unor legturi ionice

ntre gruprile fosfat (PO4) ale ADN i gruprile amino (NH2) ale histonelor.

Legarea histonelor la ADN nu are specificitate de secven dar exist anumite

preferine de legare a resturilor de lizin la perechile A-T i de arginin la G-C.

Asocierea ADN histone este realizat n egal msur la nivelul eucromatinei i

heterocromatinei, a secvenelor unice sau repetitive din ADN.

Prin clonarea genelor pentru histone de la ariciul de mare n E.coli s-a

demonstrat faptul c aceste gene pentru histone sunt linkate, fiind localizate pe
acelai segment de ADN (de aproximativ 7000 pb).

Astfel, a fost stabilit ordinea acestor gene: H1 H4 - H2B H3 H2A, acest

tandem repetndu-se de aproximativ 1000 ori, iar regiunile codificatoare sunt
separate de secvene spaiatoare (necodificatoare) intergenice.

Genele pentru histone nu prezint introni ci au doar secvene informaionale

(exoni).

Sinteza histonelor se desfoar n citoplasm i odat sintetizate ele sunt

transferate rapid n nucleu.

Cnd sinteza ADN este blocat, producerea de histone scade i ea rapid.

43

Activarea acestor gene se realizeaz prin interaciunea respectivelor segmente de

ADN cu proteine nonhistonice fosforilate care au probabil capacitatea de a
recunoate specific aceste gene.

Proteinele nonhistonice

In afara histonelor, n structura cromatinei nucleare, intim asociate cu ADN, mai

intr un grup heterogen de proteine numite proteine nonhistonice sau hertone.

Acestea sunt bogate n aminoacizi cu caracter acid aa cum sunt triptofanul i

acidul aspartic.

Grupul de proteine nonhistonice este foarte heterogen i numeros, cu peste 120

tipuri diferite, cu greuti moleculare cuprinse ntre 10.000 i 150.000 Da.

Ele au specificitate de specie dar mai ales de esut, variind calitativ i cantitativ
n funcie de intensitatea proceselor metabolice ale esuturilor respective.

Proteinele nonhistonice sunt implicate n reglajul fin al activitii genelor,

asigurnd prin interaciunea lor cu histonele activarea specific a genelor care
trebuie s funcioneze la un moment dat.

Activarea genelor se realizeaz n special prin fosforilare.

Nonhistonele cuprind o serie de enzime ale metabolismului nuclear, cum ar fi:

ADN-polimeraze,

ARN-polimeraze,

NAD-sintetaze,

nucleozid-trifosfataza,

metilaze, fosfokinaze, proteine cu caracter contractil de tipul miozinei, actinei,

tubulinei (proteine implicate n micrile cromosomilor).

Ca i proteinele histonice, proteinele nonhistonice sunt sintetizate n citoplasm

i apoi transferate n nucleu.

Activitatea lor presupune interaciuni complexe att cu histonele ct i cu ADN i

ARN.

Organizarea molecular a fibrei de cromatin

ADN asociat cu histonele formeaza fibra de cromatina.

Cromatina eucariotelor este alcatuita din unitati ce se repeta denumite

nucleosomi.

Cea mai corect definiie a nucleosomului este cea prin care el reprezint un
corpuscul histonic asociat cu un segment de ADN de 146 pb, partea intern
corespunznd miezului globular histonic.

44

Nucleosomii au forma aproximativ sferic cu un diametru de 11 nm.

Miezul globular histonic prezint dou zone: una bazal, tetramer constituit
din 2H3 i 2H4, deasupra creia este localizat cealalt parte tetrameric
constituit din 2H2A i 2H2B.

Fibra fundamental de cromatin, cu diametrul de 100 nm, se spiralizeaz ntr-o

structur cu 3-6 nucleosomi per tur de spir, numit solenoid, avnd diametrul
de 30nm i nlimea pasului de 11 nm. Helixul poate avea att sens dextral ct i
senestru. n cadrul solenoidului nucleosomii sunt astfel aezai nct histonele H1
se dispun n centrul helixului.

La rndul ei, fibra de cromatin sufer alte condensri n spire cu configuraii

helicale de ordin superior.

45

Modelul general de asociere al histonelor cu molecula de ADN cu formarea

nucleosomilor, evideniindu-se modul n care fibra de cromatin sufer
suprarsuciri i condensri succesive

Structura cromosomilor eucariotelor

Cromosomii eucariotelor reprezint entiti genetice ale genomului eucariot,

purttori ai genelor, fiind deci genoforii acestora.

Programul genetic al unei celule eucariote este distribuit pe mai multe genomuri:
nuclear, mitocondrial i plastidial.

Cromosomii sunt structuri n care se organizeaz cromatina nucleului interfazic

la debutul diviziunii nucleului, n urma unor procese de spiralizare i condensare
progresiv a fibrelor de cromatin.

Aceasta nseamn c structurile cromosomale sunt stri fizice diferite ale fibrei
de cromatin ce apar n dinamica acestei fibre. Structurile fibroase interfazice
care reprezint cromosomi despiralizai s-au mai numit cromoneme sau
genoneme.

Conversia cromosomilor de la structura monocromatidic (din anafaz pn la

stadiul S al interfazei) la structura bicromatidic (de la sfritul fazei S pn la
sfritul metafazei) i revenirea la structura unicromatidic se realizeaz prin
mecanisme replicative complexe, urmate de mecanisme distributive cu
intervenia aparatului mitotic (fusul de diviziune) care asigur o repartizare
echilibrat a produilor de replicare.

Fiecrei cromatide din cromosomul eucariot i corespunde o singur fibr de

cromatin, pliat transversal i longitudinal dup un model care red morfologia
cromosomului metafazic.

La nivelul constriciei primare (centromer) cele dou fibre nucleohistonice ale

cromosomilor metafazici bicromatidici interfer.

Centromerul este o regiune specific a cromosomilor de la eucariote care devine

vizibil ca o entitate morfologic distinct n cursul condensrii; el este responsabil
de deplasarea cromosomilor n cursul diviziunii mitotice sau meiotice deoarece la
nivelul su se gsete kinetocorul (o structur proteic trilamelar) i fibrele
kinetocorului prin intermediul crora cromosomii se fixeaz la fibrele fusului de
diviziune.

46

Telomerele reprezint de fapt secvenele terminale ale cromosomilor conferind

moleculelor lineare (i deci cromosomilor la nivelul crora se gsesc) stabilitate.
Recent, s-a dovedit c lungimea telomerelor variaz n cursul existenei unei
celule, telomerele scurtndu-se pe msur ce respectivele celule mbtrnesc.
Telomerele sunt alctuite de obicei din scurte secvene de ADN repetitiv, bogate
n G, care sunt repetate de sute de ori (uneori chiar de mii de ori) i care sunt
complexate cu proteine specifice. S-a observat c, n cursul diviziunii mitotice a
celulelor mamaliene are loc o scurtare progresiv a telomerelor deoarece ADNpolimeraza care asigur replicarea nu este capabil s replice complet
extremitile moleculei lineare de ADN cromosomal. Aceast pierdere de
secvene nucleotidice este compensat n cazul celulelor sexuale i a celulelor
canceroase de aciunea unei enzime numit telomeraza. Aceasta este un complex
ribonucleoproteic, format din mai multe subuniti
TIPURI DE CROMOSOMI

Cromosomii politeni (uriasi)

In anumite condiii anormale sau sub aciunea unor factori mutageni care
afecteaz funciile celulare, replicarea cromosomilor nu este urmat de
replicarea nucleului i de diviziunea celular ceea ce are drept consecin
formarea diplocromosomilor, care nu se separ.

Acest proces determin dublarea, triplarea, multiplicarea cantitii iniiale de

ADN fenomen cunoscut sub numele de endociclu.

Dac cromosomii pstreaz morfologia tipic cromosomilor metafazici, un

asemenea endociclu poart numele de endomitoz.

De exemplu, endocicluri apar la neparea plantelor de ctre unele insecte sau n

cazul infeciilor virale sau cu micoplasme, urmate de formarea galelor sau a
altor malformaii.

Unele endocicluri sunt legate de procese normale de citodifereniere.

Aa este cazul glandelor salivare de la larvele de diptere ca i n cazul glandelor

sericigene de la viermele de mtase, endociclurile respective ducnd la formarea
cromosomilor uriai sau politeni.

Cercetrile de citogenetic efectuate la Drosophila melanogaster au evideniat

faptul c, n celulele glandelor salivare ale larvelor exist un tip special de
cromosomi ce au primit denumirea de cromosomi politeni. Acetia reprezint
47

forma interfazic sub care apar cromosomii obinuii atunci cnd la nivelul lor
se desfoar numeroase runde de replicare care nu sunt urmate de separarea
produilor. Aceasta se datoreaz faptului c, dup formare, glandele salivare
trec la un endociclu urmat de intense sinteze celulare.

la nivelul fiecrui cromosom politen, prin colorare specific pot fi observate

numeroase benzi ntunecate, separate de benzi mai clare (fig.

Zonele mai puternic condensate (cromomerele) sunt dispuse la acelai nivel

constituind benzi mai ntunecate.

Benzile ntunecate alterneaz cu cele clare ntr-un model ce are specificitate de

specie.

La D.melanogaster, la nivelul cromosomilor politeni au fost identificate 5.000

asemenea benzi, pe baza aspectului lor fiind alctuit aa numita hart
citologic.

Aspect microscopic al unui cromosom politen (dup Russel, 2002). Sgeata indic
poziia cromocentrului
Fiecare cromosom politen se formeaz n cursul unui proces ce presupune mai multe
evenimente (Hartl i col., 1987; Darnell i col., 1986):

fiecare cromosom este supus unui ciclu de replicri (9 cicluri), cromatidele

rezultate neseparndu-se deoarece nici celulele n care se desfoar fenomenul

48

(celulele glandelor salivare) nu se mai divid (nu are loc cariochineza); fenomenul
de acest tip se numete endoreduplicare.

cromosomii omologi se asociaz ntr-un mod similar mperecherii ce se

realizeaz n cursul procesului de meioz, de aceea fenomenul a fost denumit
mperechere somatic.

mperecherea somatic a cromosomilor omologi n cursul desfurrii procesului

de politenie, conduce i la reducerea la jumtate a numrului de cromosomi fa
de complementul normal diploid;

perechile de cromosomi se unesc ntre ele prin intermediul centromerilor; zona

de fuziune formeaz cromocentrul.

Examinarea cromosomilor politeni a permis evidenierea creterii diametrului unor

anumite regiuni ale acestora i un aspect lax al acestora.

Explicaia ar fi urmtoarea: cnd genele de la nivelul unor cromomere sunt

activate (trebuie s fie transcrise) are loc o despiralizare localizat a
cromomerelor; procesul confer aspectul difuz al fibrelor de cromatin care
apar ca nite funde de jur mprejurul cromosomilor constituind pufele.

Cnd pufele sunt de dimensiuni mai mari ele se numesc inelele Balbiani. Aceste
zone reprezint sediul unor bogate sinteze de ARN, astfel c pufele i inelele
Balbiani reprezint sediul transcrierii genetice la nivelul cromosomilor politeni.

In cursul dezvoltrii larvare, pufele apar i dispar ntr-un mod caracteristic,

specific de stadiul larvar i de esut. De asemenea, formarea lor poate fi indus
experimental .

Cromosomi politeni au mai fost descrii la unele plante angiosperme, la

protozoare i chiar n celule maligne.

Cromosomii perie de lamp (lampbrush) reprezint un alt tip particular de

organizare a cromosomilor la eucariote.

Ei apar n timpul meiozei desfurate n ovogeneza multor grupe de vertebrate,

mai ales la amfibienii urodeli, dar i la unele nevertebrate i au fost denumii
astfel dup forma lor particular asemntoare unei perii de curat sticla de
lamp.

Ei au mai fost denumii i cromosomi plumoi i sunt caracteristici stadiului de

diploten prelungit al meiozei.

49

Forma lor este reversibil n stadiul urmtor, diakineza, revenind la forma

obinuit a cromosomilor meiotici.

Cromosomul lampbrush este un bivalent meiotic format din dou perechi de

cromatide surori; fiecare pereche de cromatide formeaz o serie de cromomere
elipsoidale, cu un diametru de 1-2 m, care sunt conectate la un ax central.

De la nivelul cromomerelor de dimensiuni i forme diferite emerg lateral,

simetric, bucle filiforme de diferite dimensiuni.

Prin urmare, axul principal al fiecrui cromosom de acest tip este format din
dou filamente longitudinale care reprezint cele patru cromatide ale
filamentului.

Buclele laterale pornesc simetric din aceste cromatide de la nivelul cromomerelor

omoloage prezentndu-se ca un filament subire care se ngroa progresiv pe msur
ce bucla revine n cromomer, ntr-un punct adiacent celui de ieire.
Buclele respective reprezint zone despiralizate ale fibrei de cromatin la nivelul crora
ADN este supus unui proces activ de transcriere.
Morfologia i funcia buclelor laterale ale cromosomilor lampbrush sunt echivalente
celor ale pufelor i inelelor Balbiani din sistemul politen, ele fiind implicate n
optimizarea eficienei transcrierii genice.

50

Reprezentarea schematic a cromosomilor de tip lampbrush

Deosebirea dintre cromosomii politeni i cei lampbrush este c prima categorie este
ireversibil (ei nu mai revin niciodat la forma iniial), pe cnd cei lampbrush sunt
structuri reversibile: dup ce i ndeplinesc funcia de sinteza intens de ARNr sau alte
tipuri de ARN revin la forma normal de bivaleni.

51

Curs 7. GENELE SI STRUCTURA LOR MOLECULARA

Noiunea de gen a fost introdus n 1909 de ctre geneticianul olandez W.
Johannsen, ea nlocuind-o pe cea de factor ereditar folosit de G. Mendel elaborata in a 2
a jumatate a secolului 19.
In conceptia clasica, gena reprezint unitatea de baz a ereditii, ea fiind
plasat pe cromosom, ntr-un singur exemplar n cazul organismelor haploide (n)
sau sub form de pereche (alele) la cele diploide (2n).

Pe baza localizarii lor in cromosomi, genele pot fi autosomale sau heterosomale.

In functie de pozitia lor in celula, la organismele eucariote genele pot fi:

- nucleare localizate in nucleu, ele manifestandu-se la descendenti dupa tipul

mendelian;
- extranucleare- plasate in organitele celulare (mitocondrii si cloroplaste), prezentand
un mod de transmitere nonmendelian.

In conceptia clasica genele prezentau 3 caracteristici de baza:

1.

Unitate functionala determina producerea unui anumit fenotip;

2. Unitate mutationala prin care gena normala (tipul salbatic) se transforma prin
mutatie in alela sau alelele sale care afecteaza acelasi caracter;
3. Unitate de recombinare genetica prin care genele de pe un cromosom se pot
transfera pe cromosomul sau pereche prin fenomenul de crossing- over.
G.W. Beadle si E.L. Tatum (1941) au elaborat pe baza unor cercetari experimentale ipoteza
o gena o enzima conform careia fiecare enzima, implicata intr-un proces metabolic, de
afla sub control genetic in ceea ce priveste sinteza si functionarea sa.
In conceptia actuala, gena poate fi definita drept un segment de ADN sau ARN
(n cazul ribovirusurilor) format dintr-o anumita secventa de nucleotide, care conine
informaia genetic ce determin ordinea de succesiune a nucleotidelor intr-o molecula
de ARNm (transcriptie genetica), respectiv a aminoacizilor dintr-o caten polipeptidic
(traducere genetica) sau sinteza altor biomolecule (ARNr, ARNt, ARNsn etc).

52

Dimensiunile genelor variaz n funcie de cantitatea de informaie genetic pe care o conin.

In medie, o gen este alctuit din 1000-2000 pb.

Exemple:

La bacteriofagul T4 al crui genom conine 200.000 pb exist 100 de gene;

la E.coli exist 3000-4000 gene (localizate pe o molecul de ADN cromosomal

format din 4,7 x 106 pb);

La bacterii s-a calculat de ex ca in medie o gena este formata dintr-o secventa de ~

1200 de nucleotide, fiecare aminoacid fiind controlat genetic de o tripleta de
nucleotide denumita codon.

Daca o proteina este alcatuita dintr-o singura catena polipeptidica sau din mai multe
dar identice, ea este codificata de o singura gena.

In cazul in care molecula este formata din mai multe catene polipeptidice dar
neidentice, ea e codificata de mai multe gene.

De ex.

Hemoglobina umana A este alcatuita din 4 catene polipeptidice identice, 2 cate 2, ( si ) ea

fiind codificata de deci de 2 gene diferite.
Astfel , in ceea ce priveste structura genei, F. Crick a emis inca din 1958 ipoteza ca secventa
nucleotidelor in ADN determina secventa aminoacizilor in catena polipeptidica.

53

In cazul majoritii bacteriilor (procariote), cu excepia arhebacteriilor, genele au o

structur continu, ceea ce nseamn c genele sunt alcatuite dintr-o secventa de codoni ce
codifica succesiunea (secventa) aminoacizilor intr-o catena polipeptidica.
La eucariote genele au o lungime mai mare iar numrul acestora nu mai este corelat cu
lungimea moleculei de ADN (Gavril, 2003).

La eucariote, genele sunt mai complexe, prezentnd n structura lor att secvene
informaionale (a cror succesiune de codoni se regsete n ordinea aminoacizilor
prin polipeptidul codificat) ct i secvene noninformaionale.

In acest fel, genele eucariotelor au o structur discontinu sau n mozaic.

Descoperirea acestei structuri a genei de la eucariote a fost precedat de evidenierea

faptului c genele de la anumite virusuri animale conin secvene de nucleotide care
nu sunt exprimate n secvena de aminoacizi din proteinele codificate (Roberts, Sharp
i Berger, 1977).

Ulterior, acelai fenomen a fost evideniat i n cazul genelor eucariotelor.

Astfel, experimentele efectuate de Chambon n 1977 asupra genei ce codific

ovalbumina din albuul de ou de gin au evideniat c lungimea ARNm este mai
mic dect cea a genei corespunztoare.

Astfel, prin examinarea la microscopul electronic a hibrizilor moleculari ADN-ARNm

pentru ovalbumin s-au observat apte bucle monocatenare la nivelul catenei de ADN
(fig.).

In acest fel, genele eucariotelor au o structur discontinu sau n mozaic.

Descoperirea acestei structuri a genei de la eucariote a fost precedat de evidenierea

faptului c genele de la anumite virusuri animale conin secvene de nucleotide care
nu sunt exprimate n secvena de aminoacizi din proteinele codificate (Roberts, Sharp
i Berger, 1977).

54

Ulterior, acelai fenomen a fost evideniat i n cazul genelor eucariotelor.

Astfel, experimentele efectuate de Chambon n 1977 asupra genei ce codific

ovalbumina din albuul de ou de gin au evideniat c lungimea ARNm este mai
mic dect cea a genei corespunztoare.

Astfel, prin examinarea la microscopul electronic a hibrizilor moleculari ADN-ARNm

pentru ovalbumin s-au observat apte bucle monocatenare la nivelul catenei de ADN
(fig.).

Aspectul la microscopul electronic i

schematic al hibrizilor ADN-ARNm pentru

ovalbumin
Pe baza acestei descoperiri, Gilbert a propus n 1978 terminologia corespunztoare
pentru acest fenomen: secvenele de nucleotide (portiunile den gena) ce sunt transcrise n
ARNm se numesc exoni, iar cele necopiate, care sunt eliminate in cursul transcrierii, se
numesc introni.
In acest fel, se poate spune c gena ovalbuminei este alctuit din 7 introni i 8 exoni,
lungimea total a genei fiind de aproximativ 7700 pb, fa de 1872 nucleotide ct are ARNm
corespunztor.

55

Examinarea a numeroase gene mozaicate de la diferite tipuri de eucariote a permis

observaia c intronii conin, n general, un numr mai mare de nucleotide dect
exonii, iar numrul lor variaz n funcie de gen.

Identificarea numrului de exoni dintr-o gen eucariot necunoscut, fr a se recurge

la microscopia electronic, se realizeaz prin utilizarea tratamentului hibrizilor
moleculari ADN-ARN cu nucleaza S1 i apoi electroforeza produilor rezultai.

S-a constatat ca hibridizarea se realizeaza numai pe anumite portiuni, secventele de

nucleotide din AND care nu au corespondent in ARNm formeaza bucle monocatenare
(introni).

56

Determinarea numrului de exoni ai unei gene

FAMILII MULTIGENICE SI PSEUDOGENE

Aa cum s-a menionat anterior, la organismele haploide exist cte un singur

exemplar din fiecare gen n timp ce la eucariotele diploide genele se gsesc n
perechi.

57

Cu toate acestea, exist numeroase exemple cnd genele se afl ntr-un numr mai
mare de exemplare, fenomenul primind denumirea de amplificarea genic (copii
multiple ale unei gene).

Cele mai cunoscute situaii sunt cele ale genelor pentru histone care sunt grupate la
nivelul unor regiuni cromosomale distincte repetate de 100-1000 ori, precum i genele
pentru ARNr care prezint 450 copii la Xenopus laevis, peste 2000 exemplare la om,
200 exemplare n cromosomii de la gin i 32.000 copii la zambil (Hyacinthus
orientalis).

Un alt fenomen observat n cazul unor gene de la eucariote este cel al familiilor
multigenice, ceea ce nseamn gruparea genelor implicate n biosinteza catenelor
diferite ale aceleiai proteine sau a unor gene nrudite, avantajul fiind acela c, al un
moment dat se poate sintetiza o cantitate mai mare din anumite proteine, asigurnduse n acest fel o adaptare mai eficient la mediu (Raicu, 1997).

O alt categorie de gene identificate n genomul eucariot este reprezentat de

pseudogene.

Acestea sunt gene nefuncionale, silenioase care provin dintr-o gen ancestral
comun cu alte gene nrudite, cu funcii precise.

De exemplu, n familia genelor pentru hemoglobin de la om exist dou pseudogene notate

psi1 si psi 2 care sunt inrudite ca structura cu genele normale dar care prezinta aberatii
fiind astfel nefunctionale.
Rolul acestor gene este de a participa la realizarea arhitecturii normale a cromosomilor i de a
acumula mutaii, constituind o adevrat surs de variabilitate prin posibila dobndire a unor
funcii noi.
GENE SUPRAPUSE

La virusuri au fost descoperite gene suprapuse, ceea ce nseamn c o anumita

secventa de nucleotide poate fi citita in mod repetat realizandu-se astfe sinteza a 2
catene polipeptidice diferite (aceeai poriune din ADN poate fi folosit pentru a
specifica dou catene polipeptidice diferite).

Astfel, la bacteriofagul X174, la care s-a determinat ntreaga secven de 5.375 nucleotide a
ADN viral monocatenar, s-au identificat cel puin 10 gene care au fost notate de la A pn la
K

58

Genomului circular al fagului X174 cu evidenierea genelor suprapuse. Sgeile indic

sensul sintezei ARNm

Genele A si B determina sinteza a 2 proteine diferite si sunt suprapuse, la fel si genele

D si E.

Acelai fenomen a fost observat i n cazul virusului SV40, avantajele fenomenului

fiind economia de material genetic cu pstrarea cantitii sporite de informaie
genetic.

Principalul dezavantaj este acela c o mutaie care afecteaz o gen, afecteaz i gena
suprapus astfel c virusul poate s piard nsuiri importante.

59

Curs 8. SINTEZA REPLICATIV A ADN

Inc din 1950 se stabilise c, n celulele meristematice apicale ale tulpinii sau
rdcinii, n timpul interfazei se produce dublarea cantitii de ADN care apoi
revine la normal n urma diviziunii celulare. n 1957, Delbrck i Stent au denumit
semiconservativ mecanismul de replicare a ADN prezentat de Watson i Crick n
1953.
Prin acesta se avanseaz ideea c n procesul de replicare are loc despiralizarea
dublului helix, urmat de separarea progresiv a celor dou catene complementare
(dup modelul de deschidere a unui fermoar), iar ulterior are loc sinteza de noi
catene complementare.
n final se formeaz dou molecule identice de ADN bicatenar.

Acest proces se realizeaz prin intervenia unui complex enzimatic a crui

sintez depinde tot de informaia cuprins n structura ADN.

Replicarea acizilor nucleici st la baza reproducerii vieii; orice sistem biologic

realiznd sinteza de ADN ca o cerin esenial a reproducerii sale.

Sistemul prin care are loc dublarea cantitii de ADN se bazeaz pe

complementaritatea structural-funcional a celor dou catene ADN, fiecare
servind drept model sau matri pentru sinteza unei noi catene complementare
care se numete replic.

Termenul de replicare deriv din cuvntul englez to replicate, care nseamn a

copia.

Prin urmare, sinteza de noi molecule de ADN se realizeaz printr-un sistem de

copiere care este unic n lumea macromoleculelor, iar procesul a fost denumit
replicare fiind caracteristic numai acizilor nucleici.

Structura acizilor nucleici este foarte potrivit pentru realizarea replicrii lor:
astfel dintr-o molecul rezult dou molecule fiice, identice ntre ele i totodat,
identice cu molecula iniial.

Se asigur, pe de o parte, reproducerea fidel i continuitatea fenomenului

ereditar de-a lungul generaiilor, iar pe de alt parte, dublarea cantitii de
informaie genetic (respectiv multiplicarea sistemelor biologice).

Cantitatea dublat de material genetic este repartizat n mod echilibrat, prin

procesul diviziunii celulare, la cele dou celule fiice.

60

Cele dou catene complementare ale dublului helix sunt unite prin puni de
hidrogen (legturi slabe), pentru desfacerea crora nu este necesar un consum
mare de energie.

Prin desfacerea punilor de hidrogen, cele dou catene polinucleotidice se pot

separa (denaturare fiziologic), fr ca aceast separare s fie nsoit de
ruperea catenelor.

Procesul de replicare a ADN are loc in intervalul dintre 2 diviziuni celulare

succesive, numit interfaza.

Acest proces se desfasoara dupa modelul semiconservativ- fiecare dintre cele 2

molecule de ADN rezultate este constituita dintr-o catena nou sintetizata si una
veche care a servit ca model (matrita).

Replicarea presupune separarea si desfasurarea catenelor moleculei initiale, ceea

ce determina formarea unei structuri asemanatoare literei Y, numita furca de
replicare.

Procesul este initiat la nivelul unei secvante specifice, numita originea replicarii,
si ambele catene noi fiind sintetizate concomitent in ambele directii- proces
bidirectional.

61

Reprezentarea schematic a modelului semiconservativ de replicare a ADN

Sinteza ADN este realizat sub aciunea unor enzime de tip polimeraze, care folosesc
drept substrat cele patru tipuri de nucleozid-trifosfai (dGTP, dCTP,dATP si dTTP)
care se gsesc n mediul celular (la nivelul nucleoidului n cazul procariotelor sau n
nucleu la eucariote) i pe care i aliniaz secvenial pe matri, corespunztor
complementaritii bazelor azotate.

Se realizeaz apoi polimerizarea nucleotidelor libere prin formarea legturilor

fosfodiesterice dintre ele i constituirea unei noi catene complementare celei
vechi, deci replica matriei de care rmne legat prin puni de hidrogen.

Pe aceast cale se reface structura dublu catenar a moleculelor fiice de ADN,

cldite fundamental pe baza celor vechi, mperecherea specific pe baz de
complementaritate a bazelor azotate fiind singura restricie impus n timpul
replicrii.

62

Formarea perechilor specifice de baze azotate (A-T, T-A, C-G, G-C) determin
nalta precizie a procesului de replicare.

Rezult de aici c ntreaga informaie genetic este inclus n nsi secvena de

baze azotate din ADN.

Mecanismul replicrii semiconservative este un mecanism ideal care asigur

transmiterea informaiei genetice n mod fidel de la o molecul parental de ADN la
dou molecule fiice identice cu cele iniiale i ntre ele, care vor fi apoi repartizate n
cele dou celule prin mecanismul diviziunii celulare.

n acest fel se asigur continuitatea fenomenului ereditar pe orizontal (mitoza), de-a

lungul generaiilor celulare i pe vertical, n succesiunea generaiilor de organisme,
prin meioz.

Replicarea acizilor nucleici nu se face dect n celule, fie c acestea sunt procariote,
fie eucariote.

Chiar i n cazul virusurilor replicarea materialului lor genetic se desfoar ntr-un

sistem celular (celula infectat viral), deoarece virionul (particula viral matur) este
inert din punct de vedere metabolic.

Noile molecule de ADN nu pot fi create de novo, sinteza replicativ presupunnd

existena unei molecule preformate care particip direct la reacie.

Continuitatea este dat de faptul c n moleculele nou formate intr i cte o caten
din molecula iniial, care a funcionat ca matri, n aceasta constnd de altfel i
substratul replicrii semiconservative.

In vivo sinteza acizilor nucleici se desfoar n trei etape majore:

sinteza precursorilor nucleotidelor purinice i pirimidinice, adic a acidului inozinic i

a acidului uridilic;

sinteza nucleotidelor propriu-zise care intr direct n alctuirea macromoleculelor de

ADN (dATP, dGTP, dCTP, dTTP);

63

polimerizarea ordonat a nucleotidelor ntr-o secven complementar unei matrie,

dup modelul semiconservativ i sub aciunea unor enzime polimerazice celulare.

Caracterul semiconservativ al replicrii ADN la bacterii a fost demonstrat de Meselson

i Stahl (1958) cu ajutorul tehnicilor de separare a moleculelor de ADN n funcie de
densitatea lor prin centrifugare n gradient de clorur de cesiu.

Ei au cultivat bacteria E. coli, pentru mai multe generaii celulare, pe un mediu de

cultur n care sursa unic de azot, clorura de amoniu (NH4Cl), nu conine azotul
normal 14N ci izotopul greu al acestuia 15N.

In paralel, celulele bacteriene au fost cultivate i pe un mediu de cultur normal (ce

conine o surs de azot cu 14N)

Reprezentarea schematic a experimentului lui Meselson i Stahl

Ultracentrifugarea ADN izolat de la ambele tipuri de bacterii (cultivate pe acest mediu

cu 14N i pe mediu cu 15N) a evideniat prezena a dou tipuri de ADN care
sedimenteaz (formeaz benzi compacte) n tubul de centrifug la niveluri diferite sub
forma unor benzi: ADN cu 15N apare ca o band grea, spre baza tubului de
centrifug, iar ADN cu 14N apare ca o band uoar, dispus mai spre vrf.

64

Cultivnd bacteriile pe mediu cu 15NH4Cl, ADN bacterian izolat i purificat a

prezentat o sedimentare corespunztoare benzii de la baza tubului de centrifug.
Asemenea bacterii au fost apoi trecute pe mediu cu 14NH4Cl pentru a se desfura un
singur ciclu apoi dou, trei de diviziune celular, dup care s-a extras de fiecare dat
ADN i s-a ultracentrifugat n gradient de densitate de CsCl. S-a constatat c ADN al
bacteriilor care au desfurat un singur ciclu de diviziune prezint un model de
bandare intermediar ntre cele ce au crescut pe mediu cu izotopul greu i cele ce au
crescut pe mediu cu izotopul uor al azotului (fig.31).

De aici s-a tras concluzia c acest ADN este un hibrid, avnd catena matri grea, iar
replica conine izotopul uor. Aceasta a fost prima dovad experimental la nivel
molecular a modelului semiconservativ de replicare a ADN.

la procariote, cultivarea bacteriilor n prezena unor deoxiribonucleozide radioactive

(de exemplu, timidin tritiat), urmat de liza celular, de izolarea ADN i apoi de
autoradiografia preparatului obinut a permis evidenierea separrii catenelor
complementare i bifurcaiei de replicare de forma literei Y.

De asemenea, aceast metod a contribuit la stabilirea faptului c la procariote

cromosomul este circular i are un punct de origine a replicrii i un punct de
ncheiere a acesteia, replicarea realizndu-se bidirecional.

Mai mult, s-a putut observa c, n cursul replicrii cromosomul se prezint sub forma
literei greceti theta (), ceea ce reprezint de fapt un intermediar de replicare.

Aplicarea aceleiai metode de marcare pentru ADN de la eucariote a permis

evidenierea faptului c, dup o rund de replicare n prezena timidinei radioactive,
fiecare molecul de ADN rezultat este alctuit dintr-o caten polinucleotidic
radioactiv i o alta neradioactiv.

Dac celulele eucariote sunt lsate s realizeze nc o rund de replicare n absena

timidinei marcate, celulele rezultate vor conine dou tipuri de molecule de ADN:
unele molecule vor fi hibride (cu o caten radioactiv i cealalt neradioactiv), iar
alte molecule vor avea ambele catene neradioactive.

Toate aceste rezultate experimentale indic faptul c, att la procariote ct i la

eucariote, replicare a ADN cromosomal este de tip semiconservativ.

65

MECANISMUL MOLECULAR AL REPLICRII ADN

Experimentele realizate pn n prezent au evideniat faptul c, dei principial
replicarea se realizeaz la fel la procariote i eucariote, exist anumite diferene ce in de
complexitatea organizrii cromosomilor la eucariote, de compartimentarea celular i de
enzimele ce particip la proces.

Biochimia polimerizrii ADN

Materialul de construcie al ADN este reprezentat de deoxiribonucleozidmonofosfaii care, prin adugarea unei grupri pirofosfat, devin precursori activai =
deoxiribonucleozid-trifosfai.

Biosinteza ADN este realizat prin polimerizarea succesiv a celor patru

deoxiribonucleozid-5'-trifosfai.

Natura i succesiunea fiecrui monomer adugat sunt determinate de natura

nucleotidelor de pe catena matri cu care se va lega pe baz de complementaritate.

Adugarea fiecrei nucleotide este nsoit de eliberare de pirofosfat anorganic.

La procesul de replicare a ADN particip numeroase enzime care constituie un

adevrat "aparat de replicare" care a primit denumirea de replisom.

In sistemele procariote funcioneaz trei ADN polimeraze dependente de ADN

(ADN replicaze), potenial capabile s asigure sinteza moleculelor de ADN, precum i alte
enzime cum ar fi: primaza, ligaze, helicaze, topoizomeraze.
Enzimele implicate n realizarea procesului de replicare au fost cel mai bine studiate la E.coli
.

- ADN polimeraza I (Pol I sau Pol A), izolat de Kornberg, nu este direct
implicat n replicare; ea intervine doar n finalul procesului, n umplerea golurilor
rmase dup ndeprtarea primerului ARN (prin activitate exonucleazic att de tip
53ct i de tip 35) i n conversia reparatorie a ADN parial monocatenar n
ADN dublu catenar.

- ADN polimeraza II este tot o polimeraz dependent de ADN, avnd n

principal activitate exonucleazic 3'5'; ea nu este implicat, ca i pol A, direct n

66

replicare, fiind activ n cazul reparrii leziunilor produse de UV i pentru a umple

golurile dintre fragmentele de ADN sintetizate discontinuu.

- ADN polimeraza III (Pol C) este produsul genei dna E de la E.coli. Ea a fost
descris tot de Kornberg; este solubil, are o mas molecular de aproximativ 150.000
Da i este esenial pentru replicare.

In celulele bacteriene (la E.coli) exist aproximativ 20 asemenea molecule per celul, ele
determinnd o polimerizare "in vivo" de aproximativ 60.000-100.000 nucleotide pe minut. La
E.coli, Pol C are un rol primordial n replicare, dar numai n prezena unui primer ARN.
Enzima nu poate sintetiza ADN "de novo" dar are funcie exonucleazic de tip 3'5' care i
permite corectarea rapid a eventualelor greeli de incorporare (Russel, 2002).
Direcia de naintare (citire) a enzimei pe catena de ADN matri este 3'5' i
determin realizarea de legturi fosfodiesterice (n catena nou sintetizat) n sensul 5'
3'.

La eucariote aparatul enzimatic necesar replicrii ADN este i mai complex, existnd
ADN polimeraze nucleare, cloroplastice sau mitocondriale :

ADN-polimeraza se gsete numai n nucleu i este implicat n iniierea procesului

de sintez a ADN;

ADN-polimeraza , localizat att n nucleu ct i n citoplasm, la nivelul organitelor

celulare, are funcii reparatorii;

ADN-polimeraza este localizat n mitocondrii avnd rol n realizarea replicrii

ADN mitocondrial. De asemenea, aceast enzim are i activitate exonucleazic;

ADN-polimeraza este localizat n nucleu i este implicat n sinteza catenei n

avans la nivelul bifurcaiei de replicare. Enzima are i activitate exonucleazic de tip
3' 5', participnd astfel i la procesul reparator;

ADN-polimeraza localizat tot n nucleu are funcii multiple: realizeaz sinteza

catenei n ntrziere n cursul replicrii; are funcii reparatorii, de recombinare i poate
exercita activitate exonucleazic de tip 35. S-a dovedit c, la levuri, aceast
enzim este esenial pentru procesul de replicare.

ADN polimerazele nucleare sunt intens sintetizate naintea fazei S, scznd la sfritul
acesteia.

Ca i polimerazele bacteriene, cele de la eucariote necesit ARN primer pentru a

declana sinteza ADN, sensul polimerizrii fiind acelai, 53.
67

In realizarea procesului de replicare mai intervin i alte tipuri de enzime, cum ar fi:

enzimele de derulare (helicaze), care distorsioneaz moleculele de ADN la nivelul

bifurcaiei de replicare;

ARN-polimeraza de tip primaz care determin sinteza unei scurte secvene de ARN
numit ARN primer;

enzimele de relaxare care elimin zonele suprahelicale ce apar de-a lungul moleculei
de ADN;

topoizomerazele (I i II) care determin suprarsuciri sau relaxri ale moleculei de

ADN;

ADN ligazele care nchid breele din catenele de ADN asigurnd continuitatea acestor
molecule

RN-aza H i exonucleaze cu aciune de tip 53 care asigur eliminarea ARN

primer de la nivelul fragmentelor Okazaki.

ETAPELE REPLICRII ADN

Procesul de sinteza a ADN se mai numeste si replicare;

Are loc dupa modelul semiconservativ propus de Watson i Crick n 1953- in

macromolecula de ADN, alcatuita din 2 lanturi polinucleotidice complementare
(catene), are loc la un moment dat ruperea legaturilor de hidrogen dintre acestea, care
devin independente si servesc fiecare ca matrita pentru sinteza unui lant
polinucleotidic complementar;

Replicarea ADN se realizeaza cu ajutorul unui aparat enzimatic de replicare alcatuit

din peste 20 de enzime;

In general sinteza ADN dupa modelul semiconservativ se realizeaza astfel:

- intai are loc ruperea legaturilor de H2 dintre cele 2 lanturi polinucleotidice
- ruperea se continua de-a lungul macromoleculei asemanator cu desfacerea unui fermoar;
- In acelasi timp are loc o derulare a catenelor polinucleotidice, fiecare catena rotindu-se in
plan exterior in jurul radicalilor fosforici;
- In citoplasma se afla nucleotide diferite care au fost sintetizate in celula si care contin
cele 4 baze: adenina, guanina, citozina si timina;

68

- tinandu-se seama de corespondenta care trebuie sa existe intre bazele purinice si

pirimidinice, o nucleotida care contine adenina se va lega prin punti de H2 cu o nucleotida ce
contine timina, iar una care contine guanina se va lega cu una ce contine citozina;
In felul acesta are loc replicarea macromoleculelor de AND, fiecare molecula fiica fiind
formata dintr-o catena veche si una noua.

O importanta deosebita in procesul de replicare o are enzima ADN-polimeraza - I, II si III- la

bacterii si ADN polimeraza la eucariote.
La bacterii (E. coli) pentru replicarea ADN sunt necesare 2 ADN polimeraze:

ADN polimeraza I (Pol I) si ADN polimeraza III (Pol III).

Dintre cele 2, Pol III joaca un rol major in replicare, iar Pol I rol secundar.
In afara de abilitatea lor de a polimeriza nucleotidele, cele mai multe ADN polimeraze
poseda si o activitate nucleazica prin care taie legaturile fosfodiesterice dintre glucid- radical
fosfat ale lantului polinucleotidic.
Alte enzime au numai activitate nucleazica. Acestea sunt de 2 tipuri:
1. Exonucleaze care pot numai sa indeparteze o nucleotida de la un capat al lantului
polinucleotidic, si
2. Endonucleaze- care rup legaturile dintre lanturile polinucleotidice
Enzimele Pol I si Pol III de la E.coli au activitate exonucleazica la capatul 3, .
69

Etapele replicrii ADN

Studiul biochimic in vitro al replicrii ADN a permis stabilirea a trei etape succesive de
desfurare a acestui proces:

iniierea replicrii,

alungirea catenelor de ADN i

terminarea sintezei.

In 1963 Jacob, Brenner i Cuzin au enunat ideea funcionrii cromosomului bacterian ca

unitate de replicare pe care au denumit-o replicon.
Ulterior noiunea de replicon, prin care se nelege secvena de ADN la nivelul creia se
desfoar un proces individual de replicare (cu cele trei etape distincte), s-a extins asupra
tuturor elementelor genetice capabile de replicare autonom.
1. Iniierea procesului de replicare

Iniierea este un proces complex, multienzimatic, supus reglrii celulare i intim

cuplat cu creterea celulelor.

Ea are loc n situsuri specifice n replicon numite i regiuni de origine (secvena

ori) i const n recunoaterea acestora de ctre factorii de iniiere.

La bacterii, naintea nceperii replicrii propriu-zise a cromosomului are loc sinteza unui
situs de membran cu rol de receptor specific pentru un anumit segment cromosomal,
considerat n acelai timp punctul de iniiere a replicrii.
La nivelul acestui segment cromosomal acioneaz complexul de iniiere.
La procariote (bacterii) cromosomul prezint o singur regiune de origine a replicrii,
oriC, deci un singur replicon,

La eucariote, unde cromosomii sunt reprezentai de molecule lineare de ADN numrul

repliconilor este mult mai mare (n genomul uman exist aproximativ 20.000-100.000
regiuni ori).

Acest lucru explic, ntre altele, de ce exist diferene ntre momentul replicrii unor
anumite regiuni ale ADN (exist regiuni ale ADN ce se replic la nceputul fazei S a
ciclului celular i alte regiuni ale ADN la sfritul acesteia).

70

Cu ajutorul tehnicilor de clonare a fost stabilit structura i secvena nucleotidic a mai

multor regiuni ori de la virusuri, bacterii i ADN mitocondrial. Toate aceste regiuni au o serie
de caracteristici comune:

grad mare de repetitivitate al bazelor;

coninut bogat n AT, ceea ce presupune o separare mult mai uoar a celor dou
catene la nivelul acestei regiuni;

prezena unor secvene repetate invers care determin capacitatea de a forma

structuri secundare intracatenare de forma ac de pr sau form de trifoi, structuri
ce uureaz recunoaterea regiunilor respective de ctre enzimele i proteinele
specifice de iniiere.

Aa cum s-a precizat, replicarea ncepe la nivelul regiunii ori unde dublul helix de
ADN sufer un proces local de denaturare i despiralizare catalizat de enzima
helicaz care taie legaturile de hidrogen dintre cele 2 catene.

Procesul de despiralizare i de formare a unor suprarsuciri negative a ADN continu

i dincolo de regiunea ori, dup ce procesul de replicare a nceput, fenomenul
realizndu-se n ambele direcii (bidirecional).

Rezultatul procesului de despiralizare i denaturare localizat este formarea unei

regiuni de ADN monocatenar, n care cele dou catene vor servi drept matri pentru
replicare.

Separarea celor dou catene la nivelul originii replicrii determin formarea unei
bifurcaii de replicare (replication fork) sau punctul de cretere al ADN .

Furca de replicare este o structura asimetrica din cauza ca cele 2 catene au

sensuri diferite datorit polaritii diferite a celor dou catene.

Natura lor antiparalel face ca una din catene s aib o extremitate 3'OH, iar cealalt
una 5'P.
Bifurcaia de replicare corespunde regiunii cel mai recent replicate i marcheaz zona de
naintare a replicrii pe cromosom

71

a) Catena veche (matrita)

b) Catena leading
c) Catena lagging
d) Furca de replicare
e) Primer
f) Fragmente Okazaky
Pentru ca ADN polimeraza sa poata cataliza sinteza ADN este necesara prezenta:
- celor 4 tipuri de nucleotide
- O catena ADN preexistenta care sa poata fi copiata
- O secventa scurta de ADN numita ARN primer, cu un capat 3'OH liber.
Primer-ul este necesar deoarece nici o ADN polimeraza nu poate initia replicarea.
De asemenea, la nivelul bifurcaiei de replicare se gsesc i enzimele ce declaneaz
sinteza noilor catene de ADN:

ARN polimeraza (primaza) i ADN polimeraza III (n cazul E.coli).

ADN polimeraza poate cataliza sinteza diferitelor tipuri de ADN celular dar
trstura caracteristic a bifurcaiei de replicare, format la nivelul regiunii ori, nu
este ADN polimeraza ci un complex proteic macromolecular denumit primosom
ARN polimeraza (primaza) recunoate secvena ori i determin sinteza unei scurte
secvene

oligonucleotidice

ARN

(ARN

primer)

sensul

53.

Captul 3-OH al primerului este apoi recunoscut de ADN-polimeraz care adaug

deoxiribonucleotidele

corespunztoare

deoxiguanozina, timidina) n sensul 53.

72

(deoxiadenozina,

deoxicitidina,

3. Creterea (alungirea) moleculei de ADN

ADNpolimeraza nu poate copia, n mod continuu, dect una din catene, pe cea care are
orientarea 3'5', care a fost denumit catena n avans (leading chain), sinteza noii
catene facandu-se in directia 5'3' .
Replicarea celeilalte catene trebuie fcut n sens invers fa de direcia de naintare
a bifurcaiei de replicare.
De aceea, o alt molecul de ADN polimeraz trebuie s atepte ca bifurcaia de replicare
s fie suficient de lung nainte de a-i ncepe activitatea n sens opus (la nivelul unui nou
primer sintetizat tot de primaz).
Sinteza noii catene, complementar catenei matri i orientat n direcia 5'3' se
face deci discontinuu i n ntrziere fa de catena leading, motiv pentru care ea se
mai numete caten n ntrziere (lagging chain).
In 1968, Okazaki i colab. au demonstrat c sinteza catenei n ntrziere se realizeaz
discontinuu, sub forma unor fragmente nucleotidice intermediare scurte, care au fost
numite fragmente Okazaki

73

Pentru sinteza fiecrui fragment Okazaki este necesar sinteza unui scurt primer
ARN, dup care ADN-polimeraza adaug nucleotidele corespunztoare la
extremitatea 3 a primerului.

Dup sinteza fragmentului Okazaki, ARN-primer este ndeprtat prin excizie (prin
intervenia RN-azei H i unor exonucleaze), iar golul rmas este umplut de ADNpolimeraza I.

ADN-polimeraza I se leag la nivelul unui situs localizat la nivelul extremitii 3

a unui fragment Okazaki i adaug nucleotide n sensul 53, plombnd
catena dup ndeprtarea primerului. De asemenea, enzima este capabil s
recunoasc i s corecteze eventualele greeli de incorporare a nucleotidelor
(datorit activitii exonucleazice 35).

74

Imediat dup formare, cele dou catene de ADN interacioneaz cu proteine specifice,
numite proteine de legare la ADN monocatenar = SSB (single-strand DNA-binding
proteins) care stabilizeaz bifurcaia de replicare, obligatorie pentru realizarea biosintezei
ADN.
In absena proteinelor SSB, cele dou catene de ADN ar interaciona ntre ele prin formarea
de legturi de hidrogen ntre nucleotidele complementare intercatenare sau intracatenare.
De remarcat faptul c, despiralizarea ADN dintr-o regiune a macromoleculei circulare de
ADN este obligatoriu urmat de un proces de supraspiralizare ntr-o alt regiune a ADN.
75

Pentru ca procesul de replicare s se desfoare normal, suprarsucirile pozitive trebuie

eliminate, fenomenul fiind catalizat de giraze
O alt familie de enzime, topoizomerazele de tip I, relaxeaz constrngerile structurale
printr-un mecanism diferit. Ele sunt endonucleaze care fac incizii monocatenare n ADN
superhelical realiznd despiralizarea, pentru ca apoi, prin activitatea lor ligazic s refac
continuitatea ADN, dup ce condiia superhelical a disprut.

Dup utilizarea sa de ctre ADN-polimeraz, ARN primer este ndeprtat de o

nucleaz numit RNaz H care degradeaz n mod specific ARN din hibrizi ARN
ADN.

In final, breele rmase sunt plombate de o alt ADNpolimeraz care adaug

nucleotidele complementare, iar ADNligaza restabilete continuitatea normal a
moleculei.

In cazul eucariotelor, dei bifurcaia de replicare se formeaz ntr-un mod asemntor

bacteriilor, echipamentul enzimatic localizat la acest nivel i care formeaz replisomul
este mult mai complex

La procariote funcioneaz trei ADN polimeraze dependente de ADN (ADN replicaze),

potenial capabile s asigure sinteza moleculelor de ADN, precum i alte enzime cum ar fi:
primaza, ligaze, helicaze, topoizomeraze.

- ADN polimeraza I (Pol I sau Pol A) - ea intervine doar n finalul procesului, n

umplerea golurilor rmase dup ndeprtarea primerului ARN (prin activitate
exonucleazic att de tip 53ct i de tip 35)

- ADN polimeraza II umple golurile dintre fragmentele de ADN sintetizate

discontinuu.

76

- ADN polimeraza III (Pol C) este esenial pentru replicare dar numai n

prezena unui primer ARN. Are funcie exonucleazic de tip 3'5' care i permite
corectarea rapid a eventualelor greeli de incorporare.
Direcia de naintare (citire) a enzimei pe catena de ADN matri este 3'5'

i determin realizarea de legturi fosfodiesterice (n catena nou sintetizat) n sensul

5' 3'.
La eucariote aparatul enzimatic necesar replicrii ADN este i mai complex, existnd ADN
polimeraze nucleare, cloroplastice sau mitocondriale :

ADN-polimeraza se gsete numai n nucleu i este implicat n iniierea procesului

de sintez a ADN;

ADN-polimeraza , localizat att n nucleu ct i n citoplasm, la nivelul organitelor

celulare, are funcii reparatorii;

ADN-polimeraza este localizat n nucleu i este implicat n sinteza catenei n

avans la nivelul bifurcaiei de replicare. Enzima are i activitate exonucleazic de tip
3' 5', participnd astfel i la procesul reparator;

ADN-polimeraza localizat tot n nucleu are funcii multiple: realizeaz sinteza

catenei n ntrziere n cursul replicrii; are funcii reparatorii, de recombinare i poate
exercita activitate exonucleazic de tip 35.

Ca i polimerazele bacteriene, cele de la eucariote necesit ARN primer pentru a declana

sinteza ADN, sensul polimerizrii fiind acelai, 53.

In realizarea procesului de replicare mai intervin i alte tipuri de enzime, cum ar fi:

enzimele de derulare (helicaze), care distorsioneaz moleculele de ADN la nivelul

bifurcaiei de replicare;

ARN-polimeraza de tip primaz care determin sinteza unei scurte secvene de ARN
numit ARN primer;

enzimele de relaxare care elimin zonele suprahelicale ce apar de-a lungul moleculei
de ADN;

topoizomerazele (I i II) care determin suprarsuciri sau relaxri ale moleculei de

ADN;

ADN ligazele care nchid breele din catenele de ADN asigurnd continuitatea acestor
molecule

RN-aza H i exonucleaze cu aciune de tip 53 care asigur eliminarea ARN

primer de la nivelul fragmentelor Okazaki.
77

3. Terminarea procesului de replicare

Terminarea replicrii se realizeaz, de obicei, la nivelul unui punct fix n replicarea

bidirecional.

Procesul de ncheiere a replicrii este nsoit de mai multe evenimente:

eliminarea ARN primer sub aciunea RN-azei H sau a unor exonucleaze (de
exemplu, ADN-polimeraza I care are funcie exonucleazic 53 i 35);

umplerea breelor rmase prin eliminarea ARN primer sub aciunea unor ADNpolimeraze cu funcii reparatorii;

fragmentele Okazaki sunt sudate de ctre ligaz.

ADN ligaza catalizeaz formarea legturilor fosfodiesterice dintre extremitatea 3OH

a unui fragment Okazaki i cea 5 P a fragmentului urmtor, procesul realizndu-se cu
consum energetic.

La majoritatea procariotelor i eucariotelor, energia este furnizat de ATP.

Mecanismul reaciei de polimerizare presupune:

mai nti, acceptarea de ctre enzim (E) a unui grup AMP (rezultat prin hidroliza
ATP), cu eliberare de pirofosfat,

E + ATPE - AMP + Ppi

iar apoi transferarea AMP la captul 5 P al ADN.

E - AMP + P - 5 ADN E + AMP P - 5 ADN

In final, ADN-AMP interacioneaz cu extremitatea 3OH a ADN, elibernd AMP i

sigilnd astfel breele din catenele ADN.

ADN 3 - OH + AMP - P - 5 ADN ADN 3 - O - P - 5 ADN + AMP

78

In final, giraza i topoizomeraza refac structura suprahelical.

Schema replicarii

79

Curs 9. EXPRIMAREA INFORMAIEI GENETICE

ADN are dou funcii primare:
funcia autocatalitic, reprezentat de realizarea procesului de replicare,
functie ndeplinita prin natura structurii sale bicatenare,
funcia heterocatalitic ce const n procesul dirijrii de ctre ADN a
sintezei unor molecule specifice, n esen proteine.
Funcia heterocatalitic a ADN este ndeplinit prin intervenia unor intermediari ntre
ADN i proteinele sintetizate.
Procesul prin care informatia genetica continuta de ADN este convertita in proteine se
realizeaza in 2 etape:
Initial ADN este transcris la ARNm
ARNm este apoi tradus la proteine;

TRANSCRIEREA
Procesul de transcriere se refer la sinteza, catalizat de ARN polimeraz, a tuturor
tipurilor de ARN: ARNm, ARNr, ARNt etc, dintre care doar ARNm este tradus la proteine.
ARN polimeraza are capacitatea de a iniia sinteza de novo a unei catene ARN, fr a fi
necesar existena unui primer; ea alege catena din ADN purttoare de informaie, recunoate
nceputul i sfritul mesajului genetic i rspunde la aciunea unor factori de reglare pozitiv
sau negativ.
Dpdv chimic si enzimatic transcrierea este similara replicarii ADN.
Ambele procese implica sinteza unei noi catene polinucleotidice
complementare cu catena matrita de ADN, cu deosebirea ca in
cazul transcrierii noua catena este ARN.
Enzima care catalizeaza reactia de transcriere este ARN
polimeraza care nu are nevoie de primer ptr initierea reactiei
Se desfasoara cu o acuratete mai mica decat replicarea (rata de
eroare este de 1:10.000, fata de 1: 10.ooo.ooo cat este la replicare)
prin transcriere are loc copierea selectiva a anumitor parti ale
genomului realizandu-se copii ale regiunii respective( de la o
copie pana la cateva sute sau mii ) .
Transcrierea genetic reprezint procesul de sintez a diferitelor categorii de
ARN celular, prin care o catena de ADN este transcrisa intr-una de ARN
80

 Molecula de ARN rezultat n urma acestui proces este identic n ceea ce

privete secvena de nucleotide cu una dintre catenele ADN (cu excepia faptului
c timina este nlocuit de uracil), aceasta fiind numit caten sens sau codogen
i complementar cu cealalt care, de altfel, a servit ca matri pentru sintez
(aceasta fiind denumit catena nonsens=matri).

transcrierea genetic se realizeaz numai n celule, existnd diferene n ceea ce

privete locul transcrierii genetice la procariote i eucariote, impuse de specificul
organizrii celulare.
La procariote transcrierea se realizeaz pe matria ADN la nivelul nucleoidului,
dar molecula de ARN poate fi folosit de mainria de traducere a mesajului genetic
nainte ca sinteza lui s fie terminat.
La eucariote - transcrierea se desfoara n nucleu iar traducerea s se produc n
citoplasm, dup ce moleculele de ARN au suferit procesul de maturare i au trecut
prin porii membranei nucleare.
81

 In celule, indiferent c sunt procariote sau eucariote, exist mai multe tipuri de ARN
care sunt implicate n procesul de biosintez proteic.
Acizii ribonucleici sunt compui sintetizai prin polimerizarea a patru tipuri de
ribonucleotide (AMP, GMP, UMP i CMP), reacia fiind catalizat de transcriptaz
sau ARN-polimeraza dependent de ADN.
ARN polimeraza este un complex enzimatic si catalizeaza aceeasi reactie in
toate celulele de la atat la PK cat si la EK.
Toate ARN polimerazele au anumite functii comune.
La bacterii se afla o singura ARN polimeraza
La EK sunt 3 ARN polimeraze : I, II si III
Structura primar a ARN este reprezentat de ordinea ribonucleotidelor din
monocatena sa.
Alctuirea unei ribonucleotide:
Riboz
Baz azotat (A, U, G, C). In unele tipuri de ARN au fost evideniate baze
azotate speciale, cum ar fi:acid inozinic, derivai metilai ai unor purine sau
pirimidine (acid metilinozinic, acid metilguanilic); acid pseudouridilic; acid
dehidrouridilic; acid ribotimidilic.
Radical fosfat

Lungimea diferitelor tipuri de ARN variaz ntre 75 la 10.000 nucleotide. Cele mai
mici molecule de ARN sunt reprezentate de ARN de transfer (ARNt - 80 nucleotide).

Unele tipuri de ARN prezint structur secundar (ARNr, ARNt)

Procesul de transcriere este catalizat de enzima ARN-polimeraza.

ARN-polimeraza :

recunoate cu mare exactitate secvene specifice de baze azotate de pe matria de

ADN,

realizeaza polimerizarea unor ribonucleozid-trifosfai (rNTP) liberi aliniai pe

matri pe baza complementaritii dintre bazele azotate: adeninei din matri i
corespunde uracilul n catena ARN, timinei i corespunde adenina iar guaninei i
va corespunde citozina (i invers),
specific e faptul c nucleotidele care intr n componena ARN conin n
structura lor riboza (sunt ribonucleotide).
82

 catalizeaz formarea de legturi fosfodiesterice ntre ribonucleotidele succesive.

Majoritatea procariotelor conin o singur ARN-polimeraz (cel mai bine fiind
studiat cea de la E.coli),
n timp ce n celulele eucariote au fost identificate trei tipuri de ARN-polimeraze,
cu localizare nuclear (fie n nucleoplasm fie la nivelul nucleolului),
specializate n sinteza unui anumit tip de ARN.
Transcrierea necesit
existena matriei ADN -la nivelul unor regiuni specifice, cele 2 catene ale ADN
se separ (denaturare fiziologic), iar una dintre ele (catena nonsens) servete ca
matri pentru sinteza ARN.
ARN-polimeraza are capacitatea de a iniia sinteza de novo a unei catene ARN
fr a fi necesar existena unui primer; ea citete catena de ADN pe care o
copiaz n sensul 35, iar sinteza ARN se realizeaz n sensul 53. Astfel,
rNTF sunt adugai pe rnd la nivelul gruprii 3OH a ribonucleotidei
anterioare, n urma reaciei de polimerizare fiind eliberate grupri pirofosfat.
Procesul de transcriere ncepe atunci cnd ARN-polimeraza se leag la nivelul unei
regiuni specifice, numit promotor, localizat la extremitatea 5' a secvenei genice ce
va fi transcris.
Procesul incepe la nivelul unui punct de start al transcrierii i se desfoar pn
cnd ARN-polimeraza ajunge la nivelul unei secvene de terminare (terminator
sequence).
Aceast aciune definete o unitate transcripional ce se ntinde de la promotor la
terminator i se refer de obicei la ARNm.
Produsul rezultat n urma transcrierii a primit denumirea de transcript primar
(sau produs primar de transcriere).

83

 La bacterii, ARNm copiaz mai multe gene alturate (ce formeaz un operon)
fiind policistronic, n timp ce la eucariote el copiaz o singur gen, fiind
monocistronic.
De regul acest produs primar este instabil, att la procariote ct i la eucariote,
el suferind unele prelucrri post-transcripionale.
In cazul procariotelor, produsul primar este fie degradat rapid, dup ce i-a
ndeplinit funcia (ARNm), fie este clivat pentru a forma produi funcionali
(ARNr sau ARNt).
La eucariote, produsul primar ce a copiat o gen discontinu este prelucrat prin
eliminarea secvenelor non-informaionale (intronii) sau prin adugarea unor
secvene specifice de nucleotide la extremitile moleculei.

84

TRANSCRIEREA LA PROCARIOTE
Cel mai studiat sistem bacterian de transcriere este cel de la E.coli i, cu toate c
exist particulariti n cazul anumitor bacterii, el a cptat un caracter de
aplicabilitate general n grupul bacteriilor.
In procesul de transcriere este implicat o unitate transcripional ce se ntinde
de la nivelul promotorului pn la secvena de terminare.

Etapele procesului de transcriere

3 etape:
-

Initierea transcrierii

Alungirea (elongarea) ARN

Terminarea transcrierii

Initierea transcrierii
Are loc la nivelul unei secvene specifice de ADN numit promotor care
interacioneaz cu enzima ARN-polimeraza.
Examinarea unui numr mare de secvene promotor de la mai multe gene de la
procariote a evideniat :
Secventa promotor cuprinde 2 secvente de la regiunea -10 la regiunea -35
Astfel, exist o secven TATAAT, denumit cutia Pribnow sau regiunea 10
(centrat pe nucleotida din poziia 10, raportat la punctul de start al
transcrierii), ea fiind conservat la toate secvenele promotor de la procariote.

85

O a doua secven, denumit regiunea 35, este comun procariotelor i este localizat
la aproximativ 35 pb n faa (n direcia de transcriere) situsului de start al transcrierii
(este centrat pe nucleotida din poziia 35).
Se consider c ambele regiuni, -10 (TATAAT) i 35 (TTGACA) reprezint secvene
consens, adic se regsesc la majoritatea promotorilor bacterieni.
Mai mult, se apreciaz c punctul de start al transcrierii este de obicei o purin,
localizat la mijlocul tripletei CAT.

Al doilea element esenial realizrii transcrierii este reprezentat de ARNpolimeraz.

Cea mai studiat enzim de acest tip este ARN-polimeraza de la E.coli.
La aceast bacterie s-a evideniat faptul c exist aproximativ 7.000 molecule de
enzim per celul, viteza de sintez fiind de 40 ribonucleotide/ secund la 37oC.
ARN-polimeraza dependent de ADN sau transcriptaza este de fapt un complex
enzimatic cu structur cuaternar. ARN-polimerazele, indiferent de origine, au
n general aceleai trei funcii eseniale:
aleg catena purttoare de informaie
recunosc nceputul i sfritul mesajului genetic
rspund la aciunea unor factori de reglare pozitiv sau negativ.
86

 In ceea ce privete structura chimic, ARN-polimeraza de la E.coli are o mas

molecular de 465 kDa i este alctuit din patru subuniti majore :
2 subuniti i cte o subunitate i (2 ) -miezul enzimatic sau
apoenzima
la care se mai adaug o subunitate (factorul ) (figura).

Holoenzima (enzima complet format din cele cinci subuniti: 2 ) poate fi

separat n dou componente:
miezul enzimatic sau apoenzima (2 ) i
factorul (polipeptidul ).
Pentru realizarea corect a transcrierii (mai ales a iniierii procesului) este
necesar asamblarea tuturor componentelor.
miezul enzimatic al ARN-polimerazei poate realiza sinteza de ARN dar nu poate
iniia n mod corect procesul de transcriere pentru care este obligatorie
asamblarea i a factorului .
87

 Deci factorul mediaza legarea enzimei la promotor

Dup iniierea transcrierii, dupa ce lungimea catenei de ARN a ajuns la 8-9
ribonucleotide, factorul se desprinde de holoenzim, apoenzima (2 )
continund singur sinteza ARN.
Iniial, ARN-polimeraza recunoate i se leag la nivelul regiunii 35,
considerat de unii autori ca fiind situsul R ("recognition"),
dup care contactul cu ADN se extinde i la regiunea 10 (situsul B, de legare
strns).
Initierea
Enzima ARN Pol se leaga la regiunea numita promotor de pe ADN. Complexul
promotor polimeraza este supus unor modificari structurale. Catena ADN din punctul
de start se desface producand o bucla de transcriere.Transcrierea are loc numai in
directia 5-3. Numai una dintre catenele AND are rol de matrita
Sunt implicate 3 etape:
Ezima ARNPol se leaga la promotor formand un complex inchis. Acest complex este
supus tranzitiei spre un complex deschis in care catena de AND este separata in peste 14
pb.
Starea relaxata a dublului helix initiaza transcrierea, sunt aduse primele 2 nucleotide
iar sistemul incepe polimerizarea.
Enzima incepe sa avanseze de-a lungul matritei, deschide dublul helix in fata situsului
de polimerizare, se incorporeaza rNTP complementare, reface dublul helix in spatele
situsului de polimerizare.
Iniierea transcrierii face s fie ataat la matri primul NTP care ofer gruparea 3'-OH
ce va fi pus n legtur de ctre ARN-polimeraza cu gruparea 5'- fosfat a nucleotidului
urmtor prin reacia ce poart numele de atac nucleofilic.
Subunitatea a enzimei catalizeaz formarea legturii fosfodiesterice i astfel ncepe
procesul de elongaie a monocatenei poliribonucleotidice, finalizat printr-o molecul de
ARN.

88

Alungirea ARN
Incepe Odata ce s-a sintetizat primul segment de ARN
Sinteza catenei ARN, adic transcrierea genetic se realizeaz n direcia 5'3',
aceasta fiind direcia de elongaie, matria de ADN fiind citit totdeauna n
direcia 3'5', astfel c matria i produsul de transcriere sunt antiparalele.
Spre deosebire de ADN-polimeraz care are numai specificitate de direcie,
ARN-polimeraza are i specificitate de secven recunoscnd promotorul genei
care trebuie s funcioneze la un moment dat.

Terminarea transcrierii
Incheierea procesului de transcriere se poate realiza la bacterii prin dou mecanisme:
unul care este determinat doar de secvena de ADN i
altul care necesit prezena unor proteine specifice (factorul rho).
In cazul anumitor procariote, la captul unor gene transcrise se afl secvene de
nucleotide ce corespund regiunii de terminare, care determin formarea la nivelul
ARNm corespunztor a unei structuri de tip trunchi i bucl (stem and loop).
In cazul celui ce-al doilea mecanism de terminare a transcrierii este implicat o protein
specific numit factorul rho.
Aceasta se ataeaz la ARN n curs de formare i se deplaseaz de-a lungul moleculei n
urma ARN-polimerazei.
Atunci cnd aceasta ajunge la nivelul regiunii de stopare a transcrierii, ARNpolimeraza i ncetinete foarte mult activitatea de polimerizare astfel c factorul rho
poate s interacioneze cu ARN-polimeraza.
89

Factorul rho are aciune helicazic specific asupra hibrizilor ADN-ARN formai n
cursul transcrierii, rezultatul final al activitii sale fiind detaarea ARN de matri i
ncheierea transcrierii .

TRANSCRIEREA LA EUCARIOTE
Din punct de vedere chimic, sinteza ARNm la eucariote este realizat n acelai mod ca
i la procariote:
cele patru categorii de ribonucleozid-trifosfai sunt asamblate de ctre ARNpolimeraz utilizndu-se o caten de ADN drept matri.
Cele mai importante diferene provin din structura diferit a genelor de la
eucariote, acestea avnd de regul o structur discontinu (sunt alctuite din
90

secvene

informaionale

numite

exoni

ce

alterneaz

cu

secvene

noninformaionale numite introni).

In esen, etapele procesului de transcriere sunt aceleai ca i la procariote:
iniiere, alungire i terminare, aspecte deosebite aprnd doar n procesul de
iniiere.

Iniierea transcrierii la eucariote

In celulele eucariote s-a demonstrat c exist trei tipuri de ARN-polimeraze care
realizeaz transcrierea difereniat a genelor:
ARN-polimeraza I transcrie genele pentru ARNr
ARN-polimeraza II determin sinteza ARNm
ARN-polimeraza III transcrie genele pentru ARNt i pentru alte
molecule de ARN de dimensiuni mici (ARNsn).
Nici una dintre cele trei categorii ARN-polimeraze de la eucariote nu recunosc
promotorul n mod direct ci prin intermediul unor factori de transcriere,
iniiindu-se astfel procesul de transcriere.
ARN Pol II formeaza un complex de pre-initiere care odata format, enzima incepe sa
adauge rNTP
Promotorul reprezint un alt element esenial procesului de iniiere a
transcrierii, el coninnd regiunile de recunoatere pentru ARN-polimeraz i
pentru factorii de transcriere.
Promotorii ce conin situsurile pentru factorii generali i pentru cei suplimnetari
din amonte vor fi transcrii n orice tip de celul, ei fiind responsabili de
exprimarea genelor cu funcionare constitutiv.
Secvenele de nucleotide ce alctuiesc promotorul (aproximativ 200 pb) sunt
definite operaional pe baza localizrii lor (n vecintatea punctului de start) i a
necesitilor pentru iniiere.
Analizele efectuate asupra unor promotori tipici au evideniat faptul c acetia
conin trei secvene specifice de nucleotide, centrate la nivelul nucleotidelor din

91

poziiile 30, -75 i 90, toate fiind necesare pentru iniierea optim a procesului
de transcriere
In afar de promotor, n iniierea procesului de transcriere mai sunt implicate i
alte secvene de ADN ce stimuleaz declanarea transcrierii dar acestea sunt
localizate la o distan considerabil n raport cu punctul de start (fie spre
captul 5 fie 3 al regiunii de ADN luat n discuie).
Aceste secvente au primit denumirea de elemente activatoare sau secvene de tip
enhancer

Alungirea catenei de ARN

Dup ce primele ribonucleotide au fost ataate la matria de ADN de ctre ARNpolimeraza corespunztoare, continuarea sintezei catenei de ARN se realizeaz
la fel ca i la bacterii: citirea mesajului genetic se face n sensul 35 iar sinteza
catenei de ARN se realizeaz n sensul 53.

Terminarea transcrierii la eucariote

Dac la procariote aspectele legate de ncheierea transcrierii sunt relativ clare, la
eucariote lucrurile nu stau la fel. Astfel, nu se cunoate cum are loc acest proces
n cazul genelor eucariote nefiind identificate semnalele de terminare a
transcrierii.
S-a constatat ca ARN-polimeraza II cnd ajunge n regiunea 3 a genei
transcrise, determin sinteza unei secvene AAUAAA (conform matriei de
ADN) dar, se pare c sinteza ARN continu i dup aceast secven.
In final, o enzim special taie produsul de transcriere la o scurt distan dup
secvena AAUAAA, dup care, o alt enzim independent de matri (poliA
polimeraza), adaug o serie de nucleotide cu adenin (aproximativ 200),
utiliznd ca surs de nucleotide ATP, formnd coada poliA (poliadenilat) la
nivelul creia se leag proteine specifice.
Deoarece

coada poli A lipsete n cazul ARNm pentru histone, nseamn c

aceasta nu este esenial pentru transcriere.

Se pare c aceast secven, adugat dup ce procesul de transcriere s-a
ncheiat, ar fi implicat n asigurarea stabilitii moleculei de ARN n celul .

92

Prelucrri postranscripionale:
-

adugarea cozii poliA;

adugarea secvenei cap;

modificarea chimic unor nucleotide;

eliminarea intronilor i asamblarea exonilor

Procesul de transcriere de la eucariote prezint unele particulariti: exist mai

multe tipuri de ARN-polimeraze ce asigur, n mod specifici, sinteza diverselor tipuri
de ARN celular (inclusiv din organitele celulare); ARN-polimerazele interacioneaz
cu promotorul doar dup ce intervin factori de transcriere; transcrierea anumitor
gene este stimulat de o serie de elemente activatoare; produsul primar de transcriere
este supus unor prelucrri transcripionale de tipul: adugrii de secvene
caracteristice la ambele extremiti ale moleculei, modificarea unor baze azotate,

ETAPELE TRANSCRIERII

93

CATEGORII DE ARN CELULAR

Att n celulele bacteriene ct i n cele eucariote exist mai multe categorii de ARN:
ARN mesager (ARNm);
ARN solubil sau de transfer (ARNt) i
ARN ribosomal (ARNr).
La acestea, n cazul eucariotelor, se mai adaug:
ARN nuclear heterogen,
ARN cromosomal i
ARNsn (small nuclear= nuclear mic).
Majoritatea moleculelor de ARN rezultate n urma transcrierii sunt supuse unor
modificri specifice n urma crora, moleculele respective devin biologic active. Formarea
moleculelor de ARN matur implic adiia, deleia sau modificarea unor nucleotide.
ARN mesager (ARNm)
ARNm este singurul tip de ARN celular tradus n structura proteinelor, el reprezentnd circa
5% din ARN total.
ARNm este n acelai timp singura categorie de ARN celular care prezint o structur
integral monocatenar, cel puin n momentul traducerii mesajului genetic la nivelul
ribosomilor.
Fiind purttoare de mesaj genetic, moleculele de ARNm au lungimi variabile
deoarece i mrimea genelor de la care preiau informaia sunt variate ca dimensiune.
De aceea, constanta de sedimentare a diferitelor molecule de ARNm variaz foarte
mult, de la 8S la 54S
La procariote
ARNm este utilizat direct in sinteza polipeptidelor
Moleculele de ARNm contin informatia pentru secventele de aminoacizi ale mai
multor catene polipeptidice diferite.
La procariote, ARNm este policistronic pentru c el copiaz informaia genetic
(genele) necesar sintezei mai multor catene polipeptidice implicate, de obicei, n aceeai cale
metabolic. Utilizarea ARNm policistronic la procariote reprezint o cale economic de a regla
sinteza unor proteine n mod coordonat, cu ajutorul unui singur semnal de reglare.
La eucariote de regul ARNm este monocistronic, el este sintetizat sub forma unui
precursor numit pre-ARNm sau ARN premesager care este supus prelucrrilor
posttranscripionale n urma crora se obine ARNm matur. Acesta trece n citoplasm unde
se asociaz cu ribosomii cu care formeaz polisomi sau poliribosomi. Lungimea ARN matur
94

nu corespunde secvenei genelor numai pre-ARNm este corespunztor cu aceasta, deoarece n

cadrul prelucrrilor posttranscripionale, anumite poriuni necodificatoare sunt eliminate
(introni) fiind pstrate numai regiunile informaionale (exoni) care vor fi traduse. Rezult c
ARNm matur este reasamblat prin unirea exonilor.
Durata de via a unei molecule de ARNm variaz n funcie de tipul ce celul n
care se gsete. Stabilitatea moleculelor de ARNm presupune rezistena acestora fa de
aciunea nucleazelor citoplasmatice. Degradarea ARNm se datoreaz fie aciunii unor
exonucleaze (care acioneaz asupra moleculelor ncepnd cu extremitatea 3) sau a unor
endonucleaze care recunosc i cliveaz anumite secvene specifice de ribonucleotide
localizate n interiorul moleculei de ARNm.
La procariote moleculele de ARNm sunt meninute funcionale doar 2-4 minute deoarece,
dup ce au fost utilizate pentru traducere, ele sunt degradate de ctre RN-aze. Se evit n acest fel
alterrile structurale i implicit ale mesajului coninut de ele, fenomenul fiind o consecin a
adaptrii rapide a metabolismului bacterian la condiiile de mediu. De asemenea, se permite
activarea i represia unui mare numr de gene ntr-un timp foarte scurt. Fenomenul de degradare
rapid a ARNm explic proporia foarte mic de ARNm din celule fa de alte categorii de ARN
(de exemplu, ARNr) dei numrul genelor transcrise la ARNm este aproximativ de 1000 de ori
mai mare dect al celor ribosomale.
La eucariote durata de via a unei celule este mai mare dect la procariote i deci
ARNm este mai stabil. Aceasta se datoreaz faptului c, la organismele pluricelulare celulele
se gsesc ntr-un mediu intern mult mai stabil n privina parametrilor si.
Din punct de vedere structural, ARNm prezint trei regiuni distincte:
secvena leader de la captul 5 al moleculei;
secvena codificatoare i
regiunea 3 terminal.
Regiunea leader este important pentru iniierea traducerii dar aceast secven nu este
tradus. Secvena codificatoare determin structura primar a unei catene polipeptidice,
constituind matria pentru sinteza unei catene polipeptidice, n timp ce regiunea terminal
conine nucleotide care nu vor fi traduse, rolul su fiind legat de asigurarea stabilitii
moleculei de ARNm.
La nivelul ARNm de la procariote exist o secven particular de baze numit situs
de legare la ribosom sau secven Shine-Dalgarno care prezint complementaritate cu o
secven de la captul 3 al ARNr 16S din subunitatea mic a ribosomilor.
95

De asemenea, la nivelul ARNm policistronic se gsesc, de obicei, secvene spaiatoare lungi de

10 pb, care delimiteaz secvenele codificatoare pentru fiecare polipeptid.
La procariote, cu excepia arhebacteriilor, ARNm matur corespunde ca lungime secvenei
genice pe care a transcris-o, fenomen denumit colinearitate.

Moleculele de ARNm sunt lineare, monocatenare, cu lungimi variate n funcie de

mrimea genei copiate. La procariote ARNm este policistronic, nefiind modificat
dup sintez, n timp ce la eucariote ARNm sufer o serie de prelucrri
posttranscripionale. Moleculele de ARNm matur conin att secvene ce vor fi
traduse ct i secvene netraduse, dar eseniale pentru procesul de traducere (situsul
ARN ribosomal (ARNr) reprezint aproximativ 80-85% din cantitatea total de ARN
celular, intrnd n structura ribosomilor.
Ribosomii sunt particule nucleoproteice citoplasmatice implicate n sinteza
proteinelor, respectiv n traducerea mesajului genetic dintr-o secven de ribonucleotide, din
ARNm, ntr-o secven de aminoacizi din catena polipeptidic. In cadrul acestui proces se
realizeaz al treilea transfer informaional la nivel molecular, de la ARNm la proteine.
Ribosomii conin 40-60% ARN, restul fiind reprezentat de proteine bazice
ribosomale. In ribosomii bacteriilor exist aproximativ 55 tipuri de proteine n timp ce
ribosomii de la eucariote conin 75-80 tipuri de proteine ribosomale.
Ribosomii procariotelor prezint o constant de sedimentare de 70S, ei fiind formai
din dou subuniti: subunitatea mic de 30S i subunitatea mare de 50S. La eucariote,
ribosomii au o constant de sedimentare de 80S, cu o subunitate mic de 40S i o subunitate
mare de 60S, n timp ce n organitele celulelor eucariote (mitocondrii i cloroplaste) exist
ribosomi de tip procariot.
In structura ribosomilor intr mai multe tipuri de ARNr.
Astfel, la procariote, n subunitatea ribosomal mic intr o molecul de ARNr de
tip 16S asociat cu 21 de tipuri de proteine ribosomale caracteristice subunitii mici, n timp
ce subunitatea mare conine o molecul de ARNr 23S i 34 tipuri diferite de proteine
ribosomale.

96

La eucariote subunitatea ribosomal mic conine o molecul de ARNr 18 S i 33

tipuri de proteine ribosomale, iar n subunitatea mare se gsesc trei tipuri de ARNr (28 S;
5,8 S i 5 S) 50 tipuri de proteine ribosomale.

Moleculele de ARNr au o conformaie complex, n care alterneaz regiuni monocatenare cu regiuni bicatenare (acolo unde se realizeaz mperecheri ntre baze azotate
complementare).
Toate moleculele de ARNr la eucariote sunt sintetizate pe matri ADN sub form
de molecule precursoare pre-ARNr care, dup transcriere, sunt supuse prelucrrilor posttranscripionale. Genele pentru diferitele tipuri de ARNr sunt grupate la nivelul unor regiuni
cromosomale cunoscute ca ADN ribosomal (ADNr), ele fiind prezente n mai multe copii
funcionale (sunt amplificate). De exemplu, la eucariote genele pentru sinteza ARNr sunt
localizate n regiunea organizatorului nucleolar (NOR) de la nivelul constriciilor secundare
97

ale unor cromosomi ai complementului cromosomal, denumii cromosomi organizatori

nucleolari. La majoritatea speciilor exist cte un cromosom organizator nucleolar/set haploid
de cromosomi dar exist i specii cu mai muli asemenea cromosomi: de exemplu, la om n
organizarea nucleolului sunt implicate cinci perechi de cromosomi.
Proteinele ribosomale sunt sintetizate n citoplasm i apoi transportate n nucleu,
unde sunt asamblate n subunitile ribosomale prin ataarea lor la precursorii ARNr. Dup
asamblare la nivelul nucleolului, subunitile ribosomale sunt transferate n citoplasm.
Procesul de transport bidirecional este extrem de complicat, n realizarea sa putnd fi
implicate proteine ribosomale suplimentare, coninute de ribosomii de la eucariote (spre
deosebire de cei de la procariote).
O celul de E. coli conine aproximativ 15.000 ribosomi, pe cnd n celulele eucariote
numrul de ribosomi este mult mai mare. n celule se remarc un ciclu ordonat al asamblrii
celor dou subuniti ale ribosomilor atunci cnd ARNm trebuie tradus, i de dezasamblare a
lor cnd nu se face traducere.

ARNr reprezint cel mai abundent tip de ARN celular, el fiind legat de formarea
ribosomilor. Exist mai multe tipuri de ARNr care intr n alctuirea celor dou
subuniti ribosomale alturi de proteinele ribosomale. Moleculele de ARNr sunt
monocatenare cu poriuni bicatenare datorit complementaritii unor secvene de
la nivelului aceleiai molecule. Genele ce codific moleculele de ARNr sunt eseniale
pentru supravieuirea celular; ele sunt grupate, amplificate i localizate n regiuni

ARN de transfer (ARNt) ARNt reprezint aproximativ 10-20% din totalul de ARN
celular i constituie un component celular stabil att la procariote ct i la eucariote.
Acest tip de ARN (numit iniial ARN solubil deoarece a fost identificat n fracia
solubil a lizatului celular) este o molecul specializat pentru acceptarea n
citoplasm a aminoacizilor i transferul lor la ribosomi, ndeplinind n felul acesta
rolul de molecul adaptoare ntre ARNm i catena polipeptidic n curs de sintez.
Se poate spune c ARNt mediaz cel de-al treilea tip de transfer informaional: de la
ARNm la proteine.
Din punct de vedere al compoziiei chimice, moleculele de ARNt conin, pe lng
bazele azotate obinuite (AUCG) i o serie de baze

neobinuite: acid inozinic,

derivai metilai ai unor purine sau pirimidine (acid metilinozinic, acid metilguanilic);
acid pseudouridilic; acid dehidrouridilic; acid ribotimidilic.
Moleculele de ARNt sunt de dimensiuni mici, fiind alctuite din 73-93 ribonucleotide.
98

 Plierea ARNt determin realizarea unor legturi de hidrogen intracatenare ntre

ribonucleotidele complementare, rezultnd molecule cu o structur secundar care are
forma unei frunze de trifoi, cu brae bicatenare i bucle monocatenare.

. Structura general a moleculelor de ARNt

Regiunile monocatenare din cadrul structurii secundare apar sub forma unor bucle,

prima dinspre captul 3 fiind bucla timinei (sau TGC) format din 7 baze (ntre
care i timina i pseudouridina).

Bucla cea mai important este bucla anticodonului i n sfrit bucla D (a

dihidrouracilului) format din 8 12 baze semi - mperecheate.

Captul 5 al ARNt se termin cu guanin, nucleotid ce este adugat

postranscripional.

De asemenea, la nivelul extremitii 3 a ARNt exist situsul aminoacil (de legare a

aminoacizilor specifici la nivelul gruprilor 2 OH sau 3 OH de la captul 3 al
ARNt). Situsul aminoacil are la toate tipurile de ARNt aceeai succesiune de
ribonucleotide: 3 ACC 5.

ARNt are rolul de a recunoate, lega i transporta aminoacizii citoplasmatici la

locul sintezei proteinelor (la nivel ribosomal). Moleculele de ARNt sunt
monocatenare dar, n urma unor plieri specifice prezint o form de frunz de
trifoi, n care regiunile dublu catenare alterneaz cu cele monocatenare (bucle).
Cele mai importante regiuni ale moleculei de ARNt sunt: bucla anticodonului i
it l i
il

99

Funcia buclei anticodonului

Anticodonul este tripleta de nucleotide din bucla central, care recunoate, pe
principiul complementaritii, un codon din ARNm (o secven de trei nucleotide care
specific plasarea n catena polipeptidic a unui anumit aminoacid).
Anticodonul se leag temporar de codon prin intermediul unor legturi de hidrogen.
Buclei variabile i se atribuie rolul de fixare a ARNt la ribosom, iar bucla D se pare c
este implicat n recunoaterea de ctre enzimele aminoacil ARNt ligaze a ARNt
corespunztor aminoacidului pe care aceste enzime l-au activat.
Teoretic, n natur ar trebui s existe 61 de tipuri de molecule de ARNt, corespunztor
codonilor din codul genetic.
Cu toate acestea, pn acum, au fost identificate doar aproximativ 40 tipuri de
molecule de ARNt.
De asemenea, s-a evideniat faptul c genele ce codific ARNt sunt, de obicei, grupate
pe cromosomi.
ARNt este sintetizat sub forma unei monocatene de preARNt, iar secvena sa
nucleotidic este cu 3040 ribonucleotide mai mare dect n ARNt matur.
n urma unor prelucrri post-transcripionale are loc excizia unor ribonucleotide i
modificarea chimic a altora (acidul inosinic, metilguanina, dimetilguanina, acidul
pseudouridilic, timina sub form de acid ribotimidilic).
De asemenea, dup transcriere, la captul 3 al ARNt este adugat secvena CCA la
nivelul creia se va ataa aminoacidul activat n vederea transferului su la ribosom.

100

ARN nuclear heterogen i ARN cromosomal sunt ntlnite numai n celulele

eucariotelor. Se consider c ARNnh sintetizat n afara nucleolului este supus unor
prelucrri posttranscripionale i va forma ARNm matur. ARN cromosomal este un tip de
ARN ce reprezint, cel puin parial, molecule precursoare pentru celelalte tipuri de ARN. Pe
de alt parte, se consider c ARNcr ar fi o categorie de ARN legat de reglarea funciilor
genice avnd rol de activator al genelor.
In plus, n nucleul i citoplasma celulelor eucariote au fost identificate molecule de
ARN de dimensiuni mici (n medie de 100-300 ribonucleotide), care au fost denumite, n
funcie de localizare, ARNsn (small nuclear) sau ARNsc (small cytoplasmic). In starea
lor natural, aceste molecule de ARN se gsesc la nivelul unor particule ribonucleoproteice.
Mai mult, a fost identificat nc un tip de ARN de dimensiuni mici, localizat la nivelul
nucleolului (notat ARNsno) implicat, se pare n prelucrarea precursorilor de ARNr.
In general, moleculele de ARNsn mpreun cu unele molecule proteice (aproximativ
40 tipuri de proteine) realizeaz procesul de prelucrare a moleculelor de ARNm precursor ce
presupune eliminarea intronilor i asamblarea exonilor (fenomenul de splicing). Au fost
101

identificate mai multe molecule de ARNsn implicate n prelucrrile postranscripionale ale

moleculelor de ARN, ele fiind notate: U1, U2, U5, U4/U6. Moleculele de ARN care i
controleaz propria prelucrare au fost denumite ribozime.
In afara tipurilor clasice de ARN, la eucariote au mai fost identificate i alte tipuri
de ARN cu funcii specifice: ARNnh, ARNcr, ARNsn, ARNsc, ribozime.

102

CURS 10. DECODIFICAREA MESAJULUI GENETIC

Codul genetic i structura proteinelor
Structura primar a proteinelor sau ordinea aezrii aminoacizilor n aceste
molecule, componente eseniale pentru toate organismele vii (procariote sau eucariote), este
legat de cea a acizilor nucleici. Informaia genetic se afl nscris n structura acizilor
nucleici (n gene) n mod codificat (codul genetic), corespunznd succesiunii specifice a celor
patru tipuri de baze azotate (ATCG pentru ADN sau AUCG pentru ARN). Astfel,
modificarea genelor prin mutaii (deleii, adiii, substituii) reprezint de fapt modificarea
secvenei de baze azotate i, n consecin, determin schimbri n succesiunea aminoacizilor
din proteine.
Proteinele sunt substane macromoleculare alctuite din una sau mai multe catene
polipeptidice, formate din aminoacizi legai ntre ei prin legturi peptidice.
In natur exist 20 aminoacizi care, n funcie de natura radicalului din structura lor
pot fi acizi, bazici, neutri i polari sau neutri i nepolari i care prezint cte o grupare NH 2 i
COOH libere. Din punct de vedere al organizrii structurale, proteinele pot manifesta diferite
tipuri de structuri, controlate genetic:

structur primar: corespunde succesiunii aminoacizilor din catena polipeptidic;

structura secundar: se refer la plierea specific a catenei polipeptidice formnduse regiuni cu structuri de tip -helix sau de tip -helix;

structura teriar se refer la conformaia tridimensional o unei singure catene

polipeptidice; aceast structur este de cele mai multe ori asociat cu proprietile
biologice ale proteinei;

structura cuaternar reprezint asocierea mai multor catene polipeptidice cu

formarea unor complexe multimerice. In anumite cazuri, catenele polipeptidice pot fi
asociate i cu grupri neproteice (prostetice), formnd macromolecule funcionale, aa
cum este exemplul hemoglobinei (format din patru catene polipeptidice, 2 i 2,
asociate cu o grupare hem, ceea ce confer macromoleculei capacitatea de a lega
oxigenul) (fig. 8.1-1).

103

Fig. 8.1-1. Tipurile conformaionale ale hemoglobinei

De remarcat faptul c aceste tipuri de structur a proteinelor nu sunt obligatorii, n
totalitate, tuturor proteinelor, astfel c multe catene polipeptidice manifest funcia specific
fr a se asocia cu alte catene polipeptidice (deci fr a prezenta structur cuaternar).
Proteinele sunt formate din una sau mai multe catene polipeptidice, alctuite prin
asamblarea, prin legturi peptidice, a aminoacizilor. Proteinele pot prezenta
structur primar, secundar teriar sau cuaternar.
Moleculele de ADN poart n structura lor un adevrat cod molecular a crui
semnificaie este determinat de succesiunea specific a celor patru baze azotate i a crui
complexitate este proporional cu mrimea genomului purttor de informaie.
CODUL GENETIC
Codul genetic reprezint ansamblul regulilor i principiilor dup care informaia
genetic codificat n ADN (sau ARN n cazul ribovirusurilor sau viroizilor) este copiat
pentru a putea fi transmis, de la locul su de origine (genomul organismului respectiv), la
dispozitivele care realizeaz sinteza proteinelor, precum i modul n care mesajul transcris
poate fi citit i tradus n secvene specifice de aminoacizi.
Informatia genetica este inregistrata si transmisa sub forma codificata.
Unitatile de codificare a informatiei genetice se numesc CODONI.
Un CODON este alcatuit dintr-o secventa de 3 nucleotide (tripleta) care specifica
sau codifica, respectiv determina pozitia unui aminoacid in catena polipeptidica.
Fiecare codon codifica un singur aminoacid.

104

Funcia codului genetic poate fi asemnat, n ultim instan, cu procesul de

transmitere a unei informaii codificate de la surs (structura biochimic a genomului), pe
anumite canale (ARNm), la locul de recepie (ribosomii), unde mesajul este decodificat
(tradus) i folosit, n cazul activitilor celulare, n procesul de biosintez a proteinelor. Ea
const n conservarea criptografic a informaiei i transmiterea ei de la surs la receptorul
reprezentat de structurile cu funcii efectoare care sunt ribosomii.
Dup descrierea structurii ADN de ctre Watson i Crick problema cea mai
important a fost cea a modalitii de asociere a celor 4 baze, pentru ca fiecare combinaie s
conin informaia corespunztoare legrii unuia din cei 20 de aminoacizi n constituia
proteinelor. Presupunnd c toate unitile fundamentale de codificare, denumite codoni, au
aceeai lungime, Gamow (1954) este cel care a emis ipoteza c cea mai scurt secven
nucleotidic necesar pentru a codifica un aminoacid este format din trei baze (cod triplet),
ceea ce permite formarea a 64 de combinaii. Dac un aminoacid ar corespunde unei singure
baze, nu ar fi posibil dect codificarea a 4 aminoacizi. Un cod dublet, n care un aminoacid
ar fi specificat de un codon alctuit din dou nucleotide nu ar putea codifica dect 42, adic
16 aminoacizi. Codul triplet permite formarea a 64 de cuvinte (43), reprezentnd forma
cea mai simpl care asigur codificarea celor 20 de aminoacizi naturali.
Nirenberg i colab (1966) au demonstrat c 61 din cele 64 de triplete de cod au rol n
specificarea celor 20 de aminoacizi naturali, ceilali trei fiind caracterizai ca nonsens,
deoarece nu au rol n codificarea unui aminoacid, ei marcnd sfritul mesajului genetic
(codoni Stop: UAA, UAG, UGA) (tabelul 8.1-1).
Codul triplet reprezenta forma cea mai simpl care asigur codificarea celor 20
de aminoacizi naturali.
Codul genetic este alcatuit din 64 de codoni, cifra reprezentand totalitatea
combinatiilor posibile ale celor 4 tipuri de nucleotide (ATCG) luate cate trei,
adica 43.
Potrivit relatiei 43 = 64 combinatii, care nu numai ca asigura codificarea celor 20
de aminoacizi, dar asigura si posibilitati suplimentare de codificare.
Deci :
Codonul este unitatea functionala a codului genetic.
Codul genetic reprezinta totalitatea celor 64 de codoni.

105

Codul genetic
Pentru 3 codoni din ARNm nu exista molecule de ARNt. Ei marcheaza sfarsitul mesajului
genetic si se numesc codoni STOP (UAA, UAG, UGA).
Pe baza a numeroase experiene s-a reuit s se determine caracteristicile de baz ale codului
genetic:
1. Codul genetic este nesuprapus, n sensul c un grup de trei nucleotide adiacente
alctuiesc un codon i determin legarea unui anumit aminoacid n lanul
polipeptidic; doi codoni adiaceni nu au nucleotide n comun. Examinarea a
numeroase proteine a demonstrat colinearitatea dintre informaia genetic i
structura polipeptidului. Nesuprapunerea codonilor determin trei posibiliti de
traducere a aceleiai secvene de nucleotide, n funcie de punctul de start, acestea
fiind denumite cadre de citire (reading frames).
De exemplu, pentru secvena A C G A C G A C G A C G A C G A C G exist trei cadre de
citire, deci trei mesaje genetice distincte:

ACG ACG ACG ACG ACG ACG

CGA CGA CGA CGA CGA CGA
GAC GAC GAC GAC GAC GAC

106

Orice modificare a secvenei de nucleotide prin adugarea sau eliminarea (deleia) unei
nucleotide determin modificarea cadrului de citire corect, ncepnd de la nivelul nucleotidei
modificate.
2. Codul genetic este "degenerat", aceast caracteristic decurgnd din faptul c mai
muli codoni diferii specific acelai aminoacid. Codonii care specific acelai aminoacid
sunt numii codoni sinonimi.
3. Flexibilitatea codului genetic se refer la codonii sinonimi la care primele dou
baze ale tripletei sunt constante, n timp ce a treia poate varia, deci aceast poziie este variabil sau oscilant. Crick a ajuns la concluzia c recunoaterea codon anticodon se face n
mod riguros specific n poziiile 1 i 2 i n mod variabil (flexibil) la nivelul celei de-a treia
nucleotide. De exemplu, dac anticodonul din ARNt este de tipul 3-CGG-5 el se
mperecheaz, n mod corect, cu codonul 5-GCC-3 din structura ARNm, dar i cu codonul
5-GCU-3 din ARNm. Deoarece, n exemplul de mai sus, codonul GCC i codonul GCU
codific pentru acelai aminoacid, alanina, fenomenul de flexibilitate nu este nsoit de
modificarea secvenei de aminoacizi din structura catenei polipeptidice corespunztoare.
Semnificaia acestui fenomen se refer la faptul c aceeai molecul de ARNt asigur
traducerea mai multor codoni ceea ce permite celulei s sintetizeze mai puine tipuri de
ARNt.
4. Codul genetic este fr virgule, ceea ce nsemn c nu exist nici un semn de
punctuaie ntre sfritul unui codon i nceputul celui urmtor. Decodificarea ARNm se face
apoi secvenial de la o triplet la alta pn se ntlnete unul dintre cei trei codoni stop: UAA,
UAG sau UGA.
5. Universalitatea codului genetic evideniaz faptul c aceleai uniti de codificare
(codonii) specific aceiai aminoacizi la toate organismele, indiferent de poziia lor taxonomic.
Universalitatea codului genetic sugereaz nu numai o origine comun a vieii pe Pmnt, dar
i imposibilitatea schimbrii lui (ipoteza accidentului ngheat) odat ce viaa a dobndit un
anumit grad de complexitate. Exist ns i unele abateri de la caracterul universal al codului
genetic: la fungi i mamifere, triptofanul este codificat n mitocondrii nu numai de tripleta
UGG ci i de UGA, care n mod normal este stop; n sinteza polipeptidelor, metionina este
codificat nu numai de codonul AUG (normal) ci i de codonii AUA i probabil AUU, care
semnific normal izoleucina; codonii AGA i AGG care n citoplasm codific arginina, n
ADNmt sunt codoni terminali. Variaiile codului genetic mitocondrial observate la diferite
microorganisme eucariote sugereaz c aceste modificri s-au stabilit n perioade de timp
107

diferite n cursul evoluiei, probabil dup divergena dintre plante, pe de o parte i animale i
fungi pe de alt parte.
Codul genetic este alctuit din 64 codoni (grup de trei nucleotide adiacente) dintre
care 61 sunt codificatori iar 3 sunt stop. Codul genetic prezint o serie de
particulariti cum ar fi: este universal, degenerat, fr virgule i nesuprapus.

Traducerea informaiei genetice i sinteza proteinelor

TRADUCEREA- este procesul prin care o proteina este sintetizata pe baza informatiei
continute de o molecula de ARNm.
Biosinteza propriu-zis a proteinelor este un proces complex n cursul cruia
informaia coninut n ADN, transferat n citoplasm prin intermediul ARNm este tradus,
la nivelul ribosomilor, ntr-o secven polipeptidic, prin asamblarea aminoacizilor ntr-o
ordine specific, prescris de informaia genetic. Acest proces implic activitatea mai
multor constitueni ai mainriei celulare de sintez a proteinelor i evolueaz n mai multe
etape. In cadrul biosintezei proteinelor particip att acizi nucleici, ct i proteine. Pentru
sinteza unei singure catene polipeptidice sunt mobilizate sute de alte proteine cu rol structural
i enzimatic.
Polimerizarea aminoacizilor i formarea catenelor polipeptidice se desfoar la
nivelul ribosomilor prin reacia de condensare dintre gruparea carboxil a unui aminoacid i
cea amino a altui aminoacid, cu eliberarea unei molecule de ap, proces catalizat de enzime
de tip peptid-polimeraze.
Fiecare caten polipeptidic este sintetizat pe baza informaiei genetice inclus n
gene diferite. Aa se explic de ce formularea iniial o gen o enzim, a fost nlocuit cu
expresia: o gen o caten polipeptidic, ce exprim mai bine realitatea la nivel molecular,
mai ales n cazul proteinelor complexe.
Dup realizarea polimerizrii aminoacizilor catena polipeptidic poate fi supus unor
procese post-translaionale prin care se formeaz structura secundar, teriar sau cuaternar,
ce i dau n final configuraia i funcionalitatea.
Procesul de traducere necesita urmatoarele componenete:
1. Un model (matrita) furnizor de informatie: ARNm
2. Un sistem de citire a informatiei: Ribozomii
108

3. Adaptori- molecule ce asigura corespondenta dintre aminoacizi si codonii din

ARNm: ARNt
In sinteza unei anumite polipeptide aminoacizii trebuie sa fie ordonati conform
secventei de nucleotide din molecula de ARNm.
Aceasta aranjare este realizata de moleculele de ARNt.
O molecula de ARNt citeste secventa de nucleotide continuta de ARNm.
Limbajul de citire de catre ARNt se numeste cod genetic- un set de relatii dintre
secventele a 3 nucleotide adiacente dintr-o molecula de ARNm si un anumit
aminoacid.
4. Un stoc celular de aminoacizi
5. Un furnizor de energie ATP,
6. Un set de enzime ce catalizeaza atasarea dintre un aminoacid si o molecula de
ARNt: Aminoacil ARNt sintetaze.
7. Molecule proteice ce intervin in diferite etape ale sintezei proteice:Factori de
initiere, alungire si eliberare a catenei polipeptidice.
La procariote toate aceste componente sunt prezente in toata celula iar la eucariote sunt
localizate in citoplasma.
Concret, expresia unei gene - adica sinteza proteinei sale corespunzatoare- este
un proces compus din doua etape majore:
I. informatia cuprinsa in ADN este transferata unei molecule de ARNm printr-un proces
numit transcriere;
In timpul transcrierii o catena de ADN serveste ca matrita pentru imperecherea
bazelor complementare, proces catalizat de enzima ARN polimeraza II.
Se formeaza initial o molecula de ARN-pre mesager care este apoi prelucrat la
ARNm matur (fig)
II. A 2-a etapa este traducerea informatiei la proteine. ARNm rezultat care este o
copie a unei molecule de ADN (catena matrita)-trebuie sa fie tradus intr-o molecula de
protein.

109

In timpul traducerii, ARNm este citit conform unui cod genetic in care un
grup de 3 nucleotide din ARNm formeaza un codon, fiecare codon specificand pentru
un tip particular de aminoacid.
Astfel, o secventa de ARNm este utilizata ca matrita pentru asamblarea
aminoacizilor intr-o catena polipeptidica (proteina).

In procesul de traducere:
1. ARNm este tradus de la capatul 5 a moleculei spre capatul 3
2. polipeptidele sunt sintetizate dinspre gruparea NH2 spre gruparea COOH, prin
adaugarea aminoacizilor, unul cate unul, la gruparea COOH.

110

ETAPELE PROCESULUI DE TRADUCERE

Ca orice reacie de polimerizare i n sinteza proteinelor au loc cele trei etape:
- iniiere,
- elongare
- terminare a catenei polipeptidice
Etapa de iniiere a sintezei proteinelor presupune activarea aminoacizilor
citoplasmatici prin interaciunea cu ATP, reacia fiind catalizat de aminoacil-sintetaza sau
aminoacil ARNt ligaz, specific fiecrui aminoacid.
Aminoacizii activai sunt apoi legai la molecule specifice de ARNt, care i
transport la locul sintezei proteinelor: aminoacidul activat se ataeaz la restul de A
(adenin) din gruparea CCA de la captul 3 OH al ARNt, ataare catalizat tot de aminoacilsintetaza (aminoacil ARNt ligaza):
aminoacil-ARNt-ligaza
aminoacid + ATP

aminoacil~AMP + PPi
E1

aminoacil~AMP + ARNt

aminoacil~ARNt 1 + AMP

Ultima faz a iniierii sintezei unei catene polipeptidice se desfoar la nivelul

ribosomului unde au loc o serie de interaciuni ntre componentele ribosomale, ARNm,
ARNt i diveri factori proteici celulari, astfel nct codonii din ARNm sunt recunoscui
de ctre anticodonul corespunztor din ARNt, pe principiul complementaritii.
Este esenial ca ribosomul s nceap corect procesul de traducere al ARNm de la
nivelul codonului start al secvenei codificatoare al acestuia (ARNm avnd la captul 5,
respectiv 3, regiuni terminale, necodificatoare, care nu vor fi traduse). Iniierea precis a
traducerii depinde de corecta recunoatere a cadrului de citire. Primul codon cu care se
ncepe procesul de traducere att la procariote ct i la eucariote este, de regul, AUG (mai
rar GUG sau UUG), ceea ce nseamn c exist anumite mecanisme specifice care determin
alegerea corect a codonului AUG start.
Codonul AUG codific metionina indiferent dac se gsete la nceputul secvenei
ce urmeaz a fi tradus fie n interiorul acesteia.
Pentru ca ribosomul s recunoasc codonul de iniiere este necesar un semnal
suplimentar de discriminare ntre AUG iniiator i AUG din interiorul mesajului
genetic.
111

La bacterii, acest semnal este reprezentat de situsul de legate la ribosomi,

complementar unei secvene de 37 ribonucleotide de la captul 3' al moleculei ARNr 16S
din subunitatea ribosomal mic (secvena ShineDalgarno).
In cazul eucariotelor, ARNm nu conine o asemenea secven, dovedindu-se c
ribosomii citoplasmatici nu se leag direct la situsul de iniiere al traducerii. In acest caz,
primul eveniment ce precede iniierea traducerii la eucariote este recunoaterea de ctre
subunitatea ribosomal mic (40S) a secvenei terminale 5, metilat de la nivelul ARNm,
dup care el migreaz spre situsul specific de legare la ribosomi. Intre cele dou regiuni ale
ARNm exist o secven de aproximativ 1000 nucleotide. Ulterior, subunitatea ribosomal
40S stabilizat la nivelul situsului de iniiere se asociaz cu subunitatea 60S, iar procesul de
sintez a proteinelor ncepe.
La procariote, iniierea sintezei catenei polipeptidice este asigurat de intervenia
unor factori proteici citoplasmatici de iniiere, desemnai IF1, IF2, IF3, formndu-se n
final complexul de iniiere 30S reprezentat de ARNm + subunitatea ribosomal mic + fMetARNt + factori de iniiere + GTP ARNm30S. La acest complex se ataeaz i subunitatea
ribosomal mare, de 50 S i se formeaz complexul de iniiere 70S, proces nsoit de hidroliza
GTP cu eliberarea GMP, a pirofosfatului i a factorilor de iniiere (fig. 8.2-1).

Fig.8.2-1. Iniierea procesului de traducere la procariote

Ribosomul astfel asamblat conine dou situsuri de legare a ARNt: situsul A
(acceptor)(este situsul pentru ARNt asociat cu aminoacidul specific) i situsul P
(peptidil)(este situsul la care se ataeaz ARNt iniiator - Met i -ARNtMet n cursul procesului
de iniiere sau ARNt asociat cu catena peptidic n curs de alungire).

112

Dac la procariote n procesul de iniiere este folosit un ARNtMet specific pentru

codonul de iniiere care leag formil metionina, la eucariote, n procesul de iniiere a
sintezei catenei polipeptidice, nu are loc formilarea metioninei, dar exist un ARNtMet
iniiator care difer de celelalte tipuri i care se leag direct la situsul P al ribosomului. De
asemenea, la procariote exist numai 3 factori de iniiere, n timp ce la eucariote exist 10
asemenea factori de iniiere.
Etapa de alungire presupune deplasarea ribosomilor pe ARNm, printr-o micare de
translaie, n aa fel nct la nivelul situsului A ajunge urmtorul codon la care se atea
ARNt cu aminoacidul pe care-l transport (fig. 8.2-2).
Intre gruparea COOH a aminoacidului iniiator (metionina) i NH 2 a aminoacidului
urmtor (corespunztor celui de-al doilea codon din ARNm) legat de ARNt i aflat n situsul
A are loc reacia de condensare i realizarea primei legturi peptidice.
In aceasta etapa 2 molecule de ARNt se asociaza cu ribozomul si respectiv cu ARNm
Primul ARNt poarta catena polipeptidica completa (peptidil -ARNt)si ocupa
locusul donor P iar cealalta locusul donor A aminoacil.
Odata formata prima legatura peptidica, ARNt initiator , ramas fara aminoacid,
paraseste situsul P.
Acesta, eliberat, va putea primi cel de-al 2-lea aminoacil-ARNt, care a trecut in
prealabil prin situsul A spre a realiza recunoasterea codon-anticodon.
Se formeaza astfel cea de-a 2-a punte peptidica iar translocarea succesiva din A
in P permite citirea codon dupa codon, de catre anticodonii complexelor
aminoacil-ARNt, a intregului mesaj continut de catre ARNm.
Translocarea succesiva din A in P cu formarea de fiecare data de legaturi
peptidice, asigura alungirea catenei.
Reacia respectiv este catalizat de enzima peptidil-polimeraza, care face parte din
proteinele ribosomale.
In procesul de elongare intervin i factorii de elongaie = proteine ribosomale care
se ataeaz n aceast faz la particula ribosomal (la subunitatea mare).
De remarcat c la procariote transcrierea mesajului genetic i traducerea sa pot avea
loc simultan deoarece nainte de terminarea sintezei ARNm, datorit absenei membranei
nucleare, captul su 5' se poate asocia cu ribosomii, n timp ce la eucariote cele dou procese
sunt separate n compartimente celulare diferite: transcrierea n nucleu, iar transducerea n
citoplasm.
113

Alungirea catenei polipeptidice

Terminarea sintezei proteice se produce atunci cnd situsul A ajunge la nivelul unui
codon stop (UAA, UAG, UGA) pentru care nu exist nici un aminoacilARNt. Codonii stop
sunt recunoscui de factori de eliberare sau de terminare: factorii TFR1, TFR2 i TFR3 la
bacterii i factorul RF la eucariote care asigur desfacerea grupului carboxil al aminoacidului
terminal de ARNt transportor, eliberarea de pe ribosom a catenei polipeptidice i a ARNt
precum i separarea ribosomilor n cele dou subuniti ale sale.

Figura. Terminarea sintezei proteice

Traducerea mesajului genetic este un proces complicat ce necesit prezena ARNm,
a ribosomilor, ARNt, aminoacizilor, a unor proteine ribosomale, a unor factori
proteici i a unei surse de energie. AUG (pentru metionin) este codonul iniiator
att la procariote ct i la eucariote. Alungirea catenei polipeptidice presupune
evenimente de translocare a situsurilor ribosomale A i P de-a lungul moleculei de
ARNm, i ataarea compexelor ARNt-aminoacil corespunztoare i asamblarea
succesiv a aminoacizilor prin formarea de legturi peptidice, proces catalizat de
peptid-polimeraza. Terminarea sintezei este rezultatul interaciunii dintre factorii de
eliberare i codonul stop de la nivelul ARNm.
114

La eucariote, procesul de traducere este separat de cel de transcriere, ele realiznduse n compartimente distincte. Etapele biosintezei sunt similare celor de la procariote,
existnd unele diferene n ceea ce privete complexitatea componentelor i
evenimentelor ce se desfoar la nivelul ribosomilor (liberi n citoplasm sau ataai
RE).
MODIFICRI POST-TRANSLAIONALE
S-a dovedit c majoritatea proteinelor, pentru a deveni funcionale, sunt supuse unor
modificri ce au loc dup ce procesul de sintez s-a ncheiat = modificri posttranslaionale, ele referindu-se la stabilirea conformaiei spaiale corecte (fenomenul de
mpachetare) i la modificrile ce presupun ndeprtarea sau adugarea anumitor grupri
chimice.
Impachetarea proteinelor constituie un proces esenial pentru ca anumite proteine s
dobndeasc proprietile funcionale specifice. Pentru o mpachetare corect sunt implicate
proteine care au primit denumirea de chaperone. Aceste proteine particip la mpachetarea
corect a proteinelor nou sintetizate, stabilizeaz proteinele denaturate i ndrum
proteinele mbtrnite spre lizozomi unde vor fi degradate. Chaperonele mai sunt implicate
n procesul de translocare a proteinelor prin membranele mitocondriale i n rearanjarea
subunitilor proteice n complexele macromoleculare.
Importana deosebit a corectitudinii procesului de mpachetare a proteinelor a fost
dovedit n urma descoperirii prionilor, ageni proteici infecioi responsabili de maladii
neurologice degenerative foarte grave, cum ar fi: boala Creutzfeld-Jacob i boala kuru la om
sau maladia vacii nebune de la bovine (encefalopatia spongiform bovin = ESB). Bolile
sunt asociate cu prezena n esutul afectat a unor proteine modificate, rezistente la aciunea
proteazelor, care au fost denumite prioni (PrP = proteinaceous infectious particle); aceste
proteine sunt derivate de la proteine normale, n urma unor modificri conformaionale
trecerea de la conformaia normal de tip -helix (normal) la cea de tip (anormal).
La eucariote s-a evideniat faptul c, odat sintetizate, proteinele sunt redistribuite la
nivelul celulelor n vederea ndeplinirii funciei pe care o au. Majoritatea proteinelor rmn la
nivelul citoplasmei n timp ce o parte traverseaz diverse membrane celulare trecnd fie n
interiorul unor organite celulare (aparat Golgi, mitocondrii, lizozomi, peroxizomi, nucleu etc)
fie sunt eliminate n spaiul extracelular. Studiile efectuate asupra unor tipuri de celule
eucariote au dovedit c proteinele care au alt destinaie dect citoplasma (proteinele
extracelulare i cele lizozomale), ajung dup sintez mai nti n interiorul reticulului
115

endoplasmic (RE), ele prezentnd la captul N-terminal o secven specific numit secven
semnal. Secvena semnal a proteinei n formare interacioneaz mai nti cu o molecul
semnal dup care, complexul rezultat se leag la nivelul unei proteine de la nivelul
membranei RE care asigur translocarea proteinei n lumenul RE, dup care secvena semnal
este ndeprtat. Proteinele sunt apoi sortate la nivelul aparatului Golgi, n funcie de
destinaia lor final.
O parte dintre proteinele ce ajung n lumenul RE sunt supuse unui proces de
glicozilare (N-glicozilare la nivelul gruprii NH 2 a asparaginei sau O-glicozilare la nivelul
gruprii OH a resturilor de serin sau treonin din protein), esenial activrii funcionale a
multor tipuri de proteine.
In cazul proteinelor citoplasmatice a cror destinaie sunt mitocondriile i
cloroplastele, sintetiza lor se realizeaz la nivelul ribosomilor liberi sub forma unor preproteine ce prezint la extremitatea NH 2 secvena semnal necesar translocrii prin
membrana organitelor.
Proteinele ce au drept destinaie nucleul sunt sintetizate n citoplasm dup care trec
n nucleu prin porii de la nivelul membranei nucleare.
La procariote, procesul de secreie a fost mai bine studiat dect n cazul eucariotelor,
fiind propus utilizarea a dou noiuni: aceea de export pentru transportul proteinelor din
citoplasm n spaiul periplasmic i termenul de secreie pentru transportul proteinelor din
citoplasm n mediul extern. In ambele situaii este implicat o secven semnal format din
15-30 aminoacizi hidrofobi care asigur traversarea membranei celulare, ea fiind eliminat pe
parcursul transportului.
Dup ndeplinirea rolului pe care l au, proteinele celulare sunt degradate, proces
selectiv ce are drept scop nlocuirea proteinelor vechi cu proteine noi (turnover proteic).
Degradarea proteinelor se datoreaz, n principal, aciunii proteazelor citoplasmatice sau a
celor lizozomale.
Pentru a deveni funcionale, numeroase proteine sufer o serie de prelucrri
posttranslaionale care se refer la: mpachetarea corect, formarea structurilor
moleculare adecvate (structura secundar, teriar sau cuaternar), translocarea
prin membrane, eliminarea unor aminoacizi (metionina iniial) sau a unor secvene
de aminoacizi (secvena semnal), adugarea unor grupri chimice (glicozilare,
metilare etc), iar atunci cnd nu mai sunt utile proteinele sunt degradate.

116

Schema procesului de traducere (sinteza proteinelor)

Informatia codificata in succesiunea lineara a nucleotidelor din ADN (gena) este tradusa intro succesiune lineara de aminoacizi dintr-o proteina.

117

Curs 11. MUTAIILE I MUTAGENEZA

Materialul genetic prezint, n mod normal, o structur de o mare stabilitate, care face s
fie protejat fa de apariia schimbrilor neprogramate, i care asigur transmiterea nealterat a
structurii cromosomilor de la celulele le mame la celulele fiice i de la o generaie la alta.
Pe de alt parte, ns, structura ADN, prin fenomenul de tautomerie, poate suferi
modificri n proprietile de mperechere a bazelor azotate i de aici n schimbarea de-a lungul
generaiilor a secvenei de nucleotide.
Modificrile aprute n structura i funcia materialului genetic, care se transmit de la
o generaie la alta i care nu sunt rezultatul segregrii genetice sau recombinrii genetice, se
numesc mutaii genetice , iar capacitatea materialului genetic de a suferi asemenea mutaii se
numete mutabilitate.
Procesul de aparie a mutaiilor sub aciunea unor factori mutageni (fizici, chimici sau
biologici) se numete mutagenez. Termenul de mutant se refer la un individ care rezult
dintr-un organism normal dar care fenotipic prezint anumite diferene, mai mult sau mai puin
evidente. Uneori aceste modificri pot fi reparate iar celulele respective redobndesc fenotipul
normal.
Pentru a clarifica termenii utilizai n experimentele de mutagenez, se poate
recurge la urmtorul exemplu: o cultur de Pseudomonas fluorescens are particularitatea c
pe mediu agarizat, formeaz colonii de culoare verde. Uneori, n mod spontan, printre
coloniile colorate apare i una fr culoare, care a rezultat prin multiplicarea unei celule
mutante.
Astfel, fenotipul mutant este lipsa culorii, iar fenotipul normal este culoarea verde a
coloniei. Bacteriile mutante prezint o mutaie la nivelul genei ce codific sinteza unei enzime
necesare pentru producerea pigmentului verde. Astfel, bacteriile mutante i cele normale (de tip
slbatic), conin gene alele (alela normal pentru culoarea verde i alela mutant).
n acest caz, mutaia produs la nivel genetic poate fi cunoscut datorit efectului
fenotipic pe care l-a determinat.
Exist cazuri n care nu toate modificrile de la nivelul genelor sunt urmate de
efecte fenotipice evidente; n acest caz se poate spune c genele sunt tcute sau silenioase
(silent genes).
118

Exist mai multe variante n ceea ce privete notaia genelor.

De exemplu,
notaia his se refer la o gen ce codific enzima necesar pentru sinteza aminoacidului
histidin. Uneori exist mai multe gene ce codific proteine cu funcii asemntoare: his
A i his B sunt gene ce codific polipeptide necesare pentru biosinteza histidinei. Notaia
his A se refer la mutaia care afecteaz gena respectiv i care nu mai permite sinteza
polipeptidului normal. Reciproc, notaia his A + desemneaz gena alel normal.
Uneori, pentru desemnarea genei mutante se folosesc cifre arabe care nsoesc denumirea
genei normale. Astfel, notaia his A4 se refer la gena his A cu mutaia numrul 4 (alela 4 a genei
respective).
Atunci cnd mutaia determin modificarea genei de tip slbatic i conduce la apariia
unei alele mutante, ea se numete mutaie nainte (forward mutation), iar mutaia de la tipul
mutant la tipul normal se numete mutaie napoi (back mutation).
Pentru desemnarea fenotipurilor normale sau mutante, notaiile sunt similare celor pentru
gene cu deosebirea c prima liter este o majuscul.
De exemplu,
notaia His

se refer la fenotipul unui organism incapabil s creasc pe un mediu

minimal lipsit de histidin; notaia Rfmr se refer la un organism rezistent la aciunea

rifampicinei,
n timp ce Lac- se refer la un organism incapabil de a metaboliza lactoza.

Clasificarea mutaiilor
Clasificarea mutaiilor ine cont de mai multe criterii: mrimea secvenei de ADN
afectate, efectul mutaiei, modul de producere etc.
Mutaiile pot aprea n mod spontan mutaii spontane sau naturale- cu o rat foarte
sczut, ele fiind cauzate de o serie de factori naturali, sau pot fi induse prin utilizarea unor
factori mutageni variai (fizici, chimici, biologici) mutaii induse sau artificiale.
Dup mrimea segmentului de ADN afectat, se deosebesc:
-

mutaiile genice care afecteaz structura i funcia genei; cnd este afectat doar o
pereche de nucleotide mutaia se numete mutaie punctiform.

119

Mutaiile

cromosomale-

determinnd

modificri

ale

structurii

numrului

cromosomilor la eucariote.
Dup tipul de celul n care se produce evenimentul mutaional:
- mutaii somatice cnd mutaia se desfoar n celulele somatice i mutaii gametice
cnd aceasta afecteaz gameii.
Mutaia somatic, aprut ntr-o celul a corpului ntr-un stadiu iniial al evoluiei
ontogenetice (la nceputul dezvoltrii embrionare), va face ca din acea celul, prin diviziune
mitotic, s rezulte o clon mutant care va genera o parte o corpului la nivelul creia se va
produce fenotipic mutaia: petale albe alturi de petale roii la diferite specii de plante, un ram de
mr ce produce fructe de alt culoare dect restul pomului sau la om, uvia alb de pr ntr-un
pr castaniu sau negru. Mutaia somatic la organismele cu reproducere sexuat nu se transmite
la descendeni. Ea se transmite la descenden numai n cazul organismelor ce se reproduc
vegetativ. Pe de alt parte, mutaia gametic se transmite n descenden la organismele cu
reproducere sexuat, putnd afecta n totalitate organe diferite sau ntregul organism.
Pentru analiza genetic sunt folosite dou tipuri de mutante:
-

mutantele auxotrofe organisme care nu se pot multiplica pe medii minimale n absena

unor factori de nutriie (prezint modificri la nivelul unor gene ce codific enzime
implicate n biosinteza unor aminoacizi, baze azotate etc.) sau care nu pot utiliza pentru
cretere anumite substane (genele afectate mpiedic desfurarea normal a unor ci
metabolice de degradare);

mutantele condiionat letale: organisme care prezint anumite modificri ce determin

moartea acestora n anumite condiii (restrictive sau nonpermisive) sau supravieuirea lor
n alte condiii (condiii permisive). De exemplu, la Bacillus stearothermophilus, o
mutant termosensibil sintetizeaz anumite proteine, inactive atunci cnd bacteria este
cultivat la 55o C (temperatur nonpermisiv), n timp ce, la temperatura de 47oC
(temperatur permisiv) proteinele sintetizate prezint funcii normale.

Deseori, mutaiile determin moartea celulelor afectate, fiind astfel letale, sau alteori, le
confer acestora anumite avantaje selective (de exemplu, rezisten la anumite antibiotice, la
aciunea unor virusuri etc.).

120

1. Mutaiile spontane sau naturale

Frecvena de apariie a mutaiilor spontane este, de regul, foarte mic ea depinznd de
condiiile de mediu i de genele afectate. De exemplu, la Drosophila melanogaster, frecvena
de apariie a mutaiilor la nivelul genelor plasate pe cromosomul X este de 0,1 %, n timp ce
n cazul genelor plasate pe cromosomii 2 i 3, frecvena mutaiilor spontane este 0,5 %. n
medie, rata mutaiilor per locus la o generaie este de ordinul 1/100,000, conform estimrilor
lui Muller.
Frecvena de apariie a mutaiilor se calculeaz diferit, n funcie de specie. Astfel, n
cazul mamiferelor, producerea unei mutaii dominante se poate realiza la nivelul unui singur
gamet dintre cei doi gamei participani la procesul de fecundaie. Dac aceast mutaie
dominant apare cu o frecven de 1/1000, nseamn c, de fapt, o mutaie se produce la 2000
de gamei. Pentru a afla frecvena mutaiilor pe gamet, frecvena mutaiilor la nivel individual
se nmulete cu .
Un exemplu n acest sens este cel al mutaiei ce determin la om , o tumor a retinei
(retinoblastomul). n 1951, analiza cazurilor aprute ntr-o populaie din SUA, a evideniat
apariia a 49 cazuri la 1.054.984 nateri. n acest caz, rata mutaiei per gamet este (49: 1.054.984)
x = 0,000023. corelarea acestor date cu altele obinute pentru diferite gene a condus la
concluzia c la om, rata mutaiilor per gen este de 4 la 100.000 de gamei.
2. Mutaii induse
Evidenierea faptului c unele organisme mutante pot prezenta anumite avantaje
(productivitate crescut, rezisten la anumii factori de stres etc.) i pot fi utilizate n practic, a
condus la examinarea posibilitii obinerii unor mutaii cu o frecven crescut, prin utilizarea
unor ageni mutageni variai (fizici, chimici, biologici).
Agenii mutageni fizici
O categorie important de ageni mutageni este reprezentat de radiaii. Acestea sunt, n
principal, de 2 tipuri: ionizante i neionizante.
Radiaiile ionizante pot fi clasificate, la rndul lor n:
-

radiaii electromagnetice (razele X Rntgen, raze gamma) i

radiaii corpusculare (raze beta, raze alfa, protonii, neutronii)

121

Dintre acestea, cele mai puternice sunt radiaiile electromagnetice care au o lungime de und
mic i o putere de penterare foarte mare, producnd fenomene de ionizare.
Efectele radiaiilor ionizante sunt dependente de doz, tipul radiaiei, tipul de organism
asupra cruia acioneaz, de viteza diviziunii celulare.
La nivelul macromoleculelor de ADN radiaiile ionizante determin ionizarea bazelor azotate
care nu se mai pot mperechea corect conducnd la apariia mutaiilor.
De asemenea, aceste radiaii pot determina, pe lng dezaminarea sau dehidroxilarea bazelor
azotate i oxidarea dezoxiribozei, consecina fiind ruperea catenelor de ADN, precum i blocarea
proceselor de replicare i transcriere.
La anumite doze de radiaii ionizante, se produc diferite tipuri de restructurri cromosomale:
rupturi cromosomale, inversii terminale sau paracentrice, translocaii, duplicaii.
n mod natural, pe Pmnt, exist un fond de radiaii compus din radiaia cosmic, radiaii
emise de elementele radioactive existente n scoara terestr sau a emisiuniloe provenite de la
diferii radioizotopi existeni n organismele vii. n ultimele decenii ns, nivelul radiaiei
naturale a crescut destul de mult ca o consecin a contaminrii radioactive a mediului, datorit
experienelor nucleare, accidentelor sau a eliberrii necontrolate de deeuri radioactive.
Consecina: creterea numrului de cazuri de cancer precum i de copii cu malformaii
congenitale severe.
Radiaiile neionizante cuprind radiaiile ultraviolete (UV). Aceste radiaii aparin spectrului
solar invizibil, avnd o lungime de und cuprins ntre 100 i 400 nm, dar efectul mutagen
maxim l au radiaiile UV cu lungimea de und de 258 nm, deoarece spectrul de absorbie a ADN
corespunde cu aceast lungime de und. Radiaiile UV nu au proprieti ionizante, dar n contact
cu materialul genetic, i transfer acestuia suficient energie care imprim nucleotidelor o stare
de excitare. Prin acest mecanism, radiaiile UV pot induce, la interacia cu moleculele de ADN,
tautomerizri i erori de mperechere. Cele mai sensibile nucleotide la aciunea radiaiilor UV
sunt cele ce conin baze pirimidinice (timina i citozina).
Efectul cel mai caracteristic al iradierii cu UV este formarea dimerilor pirimidinici, fapt
ce distorsioneaz forma moleculei de ADN perturbnd replicarea.

122

In urma acestor modificri efectul poate fi letal dac nu se desfoar procesul reparator.
Pentru a contracara efectele negative ale radiaiilor UV, organismele prezint mecanisme
reparatorii (fotoreactivarea, repararea prin excizie, repararea replicativ prin recombinare).
Doza de radiaii folosit i timpul de aciune variaz n funcie de specia testat, iar
simplitatea echipamentului necesar i efectele obinute in vitro, fac din iradierea cu UV
principala modalitate de inducere a mutaiilor la microorganisme.
Agenii mutageni chimici
Agenii mutageni chimici grupeaz o gam larg de substane chimice cum ar fi: analogii
bazelor azotate, agenii alkilani, substantele de intercalare, colorani, antibiotice, alcaloizi etc.
Efectele acestor substane asupra materialului genetic sunt i ele diverse.
Analogii bazelor azotate- sunt compui asemntori bazelor azotate normale, astfel c, n cursul
proceselor de replicare ei le pot nlocui producnd erori de mperechere i deci mutaii
punctiforme.
De exemplu, 5-bromouracilul (BU) este un analog al timinei care, n cursul procesului de
replicare poate s nlocuiasc timina n perechea AT (AT ABU), iar pe de alt parte poate s
se mperecheze n mod incorect cu guanina.
Efecte similare 5-bromouracilului pot prezenta i alte substane, fie analogi ai celorlalte
baze azotate, fie precursori ai ADN: 5-bromodeoxiuridina, 2-oxipurina, 2-aminopurina, cafeina
etc.
Agenii alkilani reprezint grupul de substane chimice cu efectele mutagene cele mai
puternice, asemntoare din acest punct de vedere cu radiaiile ionizante.

123

Din aceast categorie fac parte: iperita, etil metan sulfonatul (EMS), dimetil sulfatul
(DMS), nitrosoguanidina (NTG) etc.
Aceste substane determin introducerea n structura nucleotidelor a unor grupri alchil: la
nivelul atomului din poziia 7 din structura guanidinei (cel mai adesea), n poziia 3 a adeninei,
foarte rar n poziia 1 a adeninei.
De asemenea, prezena gruprii alkil la nivelul guanidinei, slbete legtura glucozidic i determin eliminarea guaninei (depurinare), cu formarea unor bree n structura
ADN. Consecina, n absena reparrii genetice, poate fi deleia sau ncorporarea la ntmplare a
unei alte nucleotide (tranziie sau transversie).
Urmarea procesului de alchilare a bazelor purinice este eroarea procesului de
mperechere a nucleotidelor (de exemplu, guanina alchilat se mperecheaz cu T n loc de C).
Bazele azotate pirimidinice sunt mai rezistente la aciunea agenilor alkilani, dei EMS
poate determina uneori alchilarea citozinei.
Alkilarea este nsoit de fenomene de denaturare a ADN sau de formarea unor legturi
ncruciate sau transversale ntre nucleotide, ceea ce mpiedic mperecherea normal.
Agenii alkilani NTG sau EMS prezint o eficien crescut n modificarea materialului
genetic, att al celulelor procariote ct i al celor eucariote.
Substanele de intercalare sunt substane care, n soluii apoase, se pot nsera n ADN ntre
bazele azotate adiacente proces denumit intercalare.
Din aceast categorie fac parte coloranii acridinici de tipul acriflavinei, acridin oranjului
sau proflavinei.
Intercalarea acridinelor n ADN determin alungiri ale perechilor de baze, modificarea
vitezei de sedimentare i a vscozitii sau chiar derulri locale ale moleculei de ADN. Atunci
cnd o asemenea molecul de ADN este supus fenomenului de replicare, poate avea loc
introducerea unor baze azotate suplimentare n structura ADN sau chiar deleia anumitor
nucleotide. Consecina, n ambele situaii, este modificarea cadrului de citire a mesajului genetic.
S a dovedit c prin utilizarea coloranilor acridinici se poate realiza eliminarea
preferenial a unor molecule de ADN din celulele purttoare. De exemplu utilizarea acridin
oranjului permite eliminarea plasmidelor din celulele bacteriene ce le conin, datorit

124

fenomenului de interferen cu procesul de replicare. Fenomenul a fost denumit vindecare

(curing), el fiind evideniat la numeroase bacterii Gram negative.
Ali ageni mutageni chimici. Procesul de mutagenez poate fi determinat i prin utilizarea altor
ageni mutageni chimici: acidul nitros, hidroxilamina, colorani, colchicina etc.
Acidul nitros determin dezaminarea oxidativ a citozinei i adeninei, iar prin
ndeprtarea unor grupri amino i nlocuirea lor cu grupri ceto rezult uracil, respectiv
hipoxantin. Ca urmare perechea GC este transformat n AT (datorita dezaminrii citozinei), iar
perechea AT este nlocuit cu perechea GC, datorit dezaminrii adeninei.
Hidroxilamina, este unul dintre cei mai specifici ageni mutageni ce determin mutaii
punctiforme. Ea este utilizat pentru mutageneza in vitro a moleculelor de ADN purificat sau
asupra virusurilor deoarece nu ptrunde n interiorul celulei. Acest mutagen reacioneaz specific
cu citozina pe care o hidroxileaz. Rezultatul: o mutaie de tip tranziie unidirecional
nlocuirea perechii GC cu AT.
O alt categorie de ageni mutageni, acioneaz asupra fusului celular a crui activitate
este inhibat. n aceast categorie intr colchicina, substana cel mai des utilizat pentru
inducerea de mutaii prin blocarea diviziunii celulare.
Colchicina poate inhiba formarea fibrelor fusului de diviziune sau poate bloca migrarea
cromosomilor ataai la fibrele fusului n cursul mitozei sau meiozei. Ca urmare, celulele nu se
mai divid dar numrul de cromosomi crete (se dubleaz), rezultnd astfel celule poliploide.
Ageni biologici cu efect mutagen
Din categoria agenilor biologici care determin modificri ale structurii i funciei
cromosomilor cei mai cunoscui sunt virusurile i micoplasmele.

BAZELE MOLECULARE ALE PRODUCERII MUTAIILOR

Modificrile spontane ale ADN ce determin apariia unei mutaii pot implica un numr
variat de perechi de nucleotide : de la o singur pereche (mutaii punctiforme) la sute de perechi
de nucleotide (mutaii genice sau cromosomale).
125

MUTATIILE PUNCTIFORME pot fi datorate: substituirii unei perechi de nucleotide

de ctre o alta (mutaii prin substituie), eliminrii (deleiei), inserrii unei noi perechi de
nucleotide (adiie), inversrii unei anumite secvene de nucleotide (inversii) sau duplicaiilor.
a) Mutaiile prin substituie pot fi clasificate la rndul lor, n funcie de nucleotida
nlocuit n:
-

mutaii de tip tranziie constau n nlocuirea unei purine cu o alt purin sau a unei
pirimidine cu o alt pirimidin (AT GC; TA CG; GC AT; CG TA)

mutaii de tip transversie constau n nlocuirea unei purine cu o pirimidin i

invers (AT TA; AT CG; GC CG; GC TA).

Schimbarea sucesiunii normale a nucleotidelor, conduce la greeli de mperechere n

cursul proceselor de replicare, recombinare sau reparare.
Deseori, greelile de mperechere pot avea loc datorit faptului c bazele azotate se pot
gsi ntr-o form tautomer, diferit de cea normal (ceto enol sau amino imino).
Cercetrile efectuate asupra greelilor ce apar n cursul replicrii, au evideniat faptul c
acestea nu se produc la ntmplare.
La nivelul moleculelor de ADN exist anumite zone predispuse la mutaii cu o frecven
crescut. Aceste zone au primit denumirea de puncte fierbini (hot spots).
Consecina modificrilor ce apar n succesiunea normal a nucleotidelor din structura
ADN, poate fi modificarea cadrului de citire al mesajului genetic i ca urmare, a fenotipului
determinat de acesta. Alteori, datorit caracterului degenerat al codului genetic, mutaia va
rmne fr consecine fenotipice.
De exemplu:
-

substituirea unei nucleotide conduce la nlocuirea unui aminoacid cu un altul, n

structura proteinei (ca n cazul hemoglobinei), reprezint o mutaie cu sens greit
(missense mutation) ;

cnd substituirea unei nucleotide din gen nu determin modificri n succesiunea

aminoacizilor din structura proteinei (datorit degenerrii codului genetic), mutaia se
consider a fi cu acelai sens (same sense mutation) sau mutaie tcut (silent
mutation) ;

126

cnd consecina mutaiei este terminarea anormal a sintezei proteinei, mutaia este
denumit mutaie nonsens (determin apariia unui codon stop ntr-o poziie diferit
dect cea normal).

In unele situaii dei mutaia determin anumite modificri n succesiunea aminoacizilor

din catena polipeptidic, funcia proteinei nu este modificat. In acest caz se spune c mutaia
este neutr (neutral mutation).
b) Mutaiile prin deleie presupun eliminarea uneia sau mai multor nucleotide din
molecula de ADN. S-a dovedit c la bacterii, prin deleie pot fi eliminate chiar i gene ntregi. Cu
toate acestea pentru ca bacteriile mutante s supravieuiasc este necesar ca gena eliminat s nu
fie esenial supravieuirii.
Mutaiile prin deleie ocup, ca frecven, un loc important ntre mutaiile spontane.
Astfel, la E. coli, ele reprezint aproximativ 5% din totalul mutaiilor spontane.
Consecinele mutaiilor prin deleie sunt:

Inactivarea complet a produsului codificat de o gen- prin eliminarea unei pri

din aceasta sau a genei n ntregime;

Detrmin uneori fuziunea unei gene cu o alta, astfel c amndou ajung s fie
controlate simultan;

Determin modificarea cadrului de citire a mesajului genetic (mutaii de tip

frameshift), iar modificrile fenotipice sunt evidente ; ele nu permit apariia de
mutaii de reversie cu excepia cazurilor n care are loc inserarea corect a
secvenei lips.

c) Mutaiile prin inversie sunt determinate de situaia n care anumite secvene de

ADN
nu sunt eliminate ci sunt integrate n ADN-ul de origine, n orientare invers dect cea norml.
Inversiile pot fi determinate de aceleai cauze ca i deleiile, cu deosebirea c, n cazul
inversiilor recombinarea genetic se realizeaz la nivelul unor secvene repetate inversat,
localizate pe aceeai molecul de ADN. In cazul mutaiilor prin inversie pot apare, relativ uor,
revertani, fenomen datorat de obicei tot recombinrii genetice. Cu toate acestea, reversia
complet i exact este un fenomen destul de rar, deoarece recombinarea genetic ar trebui s se
realizeze exact ntre aceleai secvene care au fost afectate.

127

d) Mutaiile prin adiie sau inserie sunt cauzate de inserarea unei nucleotide sau a
unei
secvene de nucleotide la nivelul unei regiuni a ADN. De cele mai multe ori , asemenea mutaii
se datoreaz integrrii elementelor genetice transpozabile: transpozonilor (Tn- secvente de
ADN ce pot migra in diferite pozitii in cadrul genomului ) sau sau secvenelor de inserie
(IS-fragmente mici de ADN -1-2 gene).
Integrarea unei anumite secvene de nucleotide ntr-o gen, determin de obicei
inactivarea acesteia, prin modificarea cadrului de citire. Mutaiile de acest tip produse de Tn sau
de IS, pot suferi reversii la tipul normal, deoarece eliminarea secvenelor integrate se elimin n
mod corect.
Insertiile si deletiile unei sau a doua (sau mai multe) perechi de nucleotide, pot avea
consecinte devastatoare asupra unei gene datorita translatiei acesteia in cadrul
fragmentului de citire.
e) Mutaiile prin duplicaie reprezint o categorie de mutaii datorate copierii unei
anumite secvene de ADN i integrarea sa n continuarea celei iniiale (n tandem).

De cele mai multe ori regiunile duplicate sunt alctuite din copii multiple ale aceleiai
secvene, avnd astfel lungimi foarte mari. Cea mai important proprietate a mutaiilor prin
duplicaie este instabilitatea lor, ele putnd reveni cu uurin la tipul normal. Se pare c
mutaiile prin duplicaie au avut un rol important n evoluia materialului genetic.
128

De obicei o gen nu se poate modifica fr ca funcia sa originar s se schimbe, iar dac

funcia respectiv este una esenial, organismul respectiv nu poate supravieui.
Totui, atunci cnd au loc duplicaii, rezult dou copii ale aceleiai gene, dintre care una
poate suferi la rndul ei, mutaii putnd dobndi funcii noi.
Acest mecanism permite vieuitoarelor de a deveni din ce n ce mai complexe, prin
mrirea numrului de gene i a cantitii de informaie genetic.
MUTATIILE CROMOSOMALE
In condiii naturale sau sub aciunea unor ageni mutageni, cromosomii pot suferi
modificri structurale (restructurri cromosomale) sau numerice (poliploidii, aneuploidii).

Modificrile structurale se pot datora deleiilor, duplicaiilor sau translocaiilor

unor segmente cromosomale.
a) Deleiile cromosomale (lipsa unui segment din cromosom) pot fi:
-

terminale produse la extremitile cromosomilor ca urmare a unei singure

fragmentri;

sau intercalare produse la nivelul cromatidelor dup o dubl fragmentare a

cromosomilor.

Atunci cnd deleiile cromosomale sunt extinse i se produc la nivelul cromosomilor din
gamei, consecina este formarea de gamei incapabili de fecundare n cazul plantelor, sau n
cazul animalelor, zigoii rezultai sunt neviabili.
129

Dac ele sunt localizate n regiuni cromosomale neeseniale, ele pot fi transmise
descendenilor.
In anumite situaii, deleiile sunt asociate cu un anumit fenotip: de exemplu, fenotipul
aripilor crestate de la Drosophila melanogaster, este rezultatul unei deleii la nivelul unui singur
cromosom, organismul respectiv fiind deci heterozigot, iar la om, deleiile de la nivelul diferiilor
cromosomi produc sindroame precum : Cri-du- chat, Wolf- Hirschhorn, retinoblastom etc.
In cazul organismelor cu deleii heterozigote, pe cromosomul normal apare o bucl
numit bucl de deleie, corespunztoare segmentului lips de pe cromosomul pereche.
b) Duplicaiile cromosomale constau n existena unui anumit segment n tandem
(segmente succesive).

Segmentele duplicate se pot gsi pe acelai cromosom sau pe cromosomi diferii, iar n
funcie de dimensiuni i de localizare, pot fi sau nu letale.
Deleiile pot determina apariia unor fenotipuri specifice: de exemplu, la Drosophila
melanogaster, fenotipul ochi barai, este consecina unei duplicaii.
In funcie de numrul de duplicaii, fenotipul variaz de la un aspect de bar mai groas
(fenotipul Bar) cnd exist o singur duplicaie, pn la un aspect de bar foarte subire
(fenotipul ultra-Bar), cnd exist dou duplicaii ale aceluiai segment cromosomal.

130

Se pare c acest tip de mutaii, n procesul evolutiv, au determinat o variabilitate crescut

la nivelul familiilor de gene.
c) Inversiile cromosomale implic segmente cromosomale ce conin mai multe gene
a
cror ordine se modific n urma acestui fenomen.
In funcie de localizare, inversiile pot fi:
paracentrice (de o parte i de alta a centromerului) i
pericentrice localizate la nivelul unuia dintre braele cromosomale.

131

In cazul n care inversiile sunt reduse ca lungime, n absena omologiei, regiunile

respective nu se imperecheaz cu segmentele opuse corespunztoare.
Segmentele inversate de dimensiuni mai mari formeaz bucle de inversie la nivelul crora
se poate produce crossing- over. De obicei, acest proces de crossing-over determin formarea
unor cromosomi cu duplicaii i respectiv al unora cu deleii, dar n cazul anumitor inversii se pot
firma perechi de cromosomi diacentrici (cu doi centromeri) sau acrocentrici (fr centromer).
d) Translocaiile implic de obicei, un schimb de fragmente cromatidice ntre
cromosomii neomologi (translocaii nereciproce i reciproce) sau schimbarea poziiei unui
segment cromosomal la nivelul aceluiai cromosom.

Mutaiile produse prin translocaii pot avea efecte fenotipice grave n cazul unor anumite
organisme. De exemplu, la om, n cazul pacienilor cu leucemie mielogen cronic, a fost
evideniat un cromosom numit cromosom Philadelphia, rezultat n urma unei translocaii
reciproce ce presupune transferul unei pri a braului lug al cromosomului 22 la cromosomul 9
i reciproc.

132

Modificarea numrului normal de cromosomi

Modificrile numrului normal de cromosomi presupun:
fie mrirea setului complet de cromosomi fenomen numit poliploidie,
fie sunt afectate doar anumite perechi de cromosomi (multiplicri sau scderi ale
numrului de cromosomi) fenomen numit aneuploidie.
Numrul de cromosomi existeni ntr-un set de cromosomi se numete monoploid si este
notat cu x.
Organismele diploide conin dou seturi complete de cromosomi, notaia fiind 2x.
In cazul celulelor haploide ale organismelor diploide, care conin doar un set de
cromosomi, numrul haploid (n) este egal cu numrul monoploid (x), n timp ce n celulele
somatice numrul diploid de cromosomi (2n) este egal cu 2x.
POLIPLOIDIA
Unele organisme conin n celulele somatice mai mult dect dou seturi de cromosomi,
ele fiind denumite poliploide.
De exemplu, celulele care conin trei seturi de cromosomi se numesc triploide, cele care
onin patru seturi se numesc tetraploide etc.

133

Fenomenul poliploidiei este larg rspndit n lumea plantelor (mai ales la angiosperme),
el putnd fi indus i n laborator, prin utilizarea colchicinei.
De obicei organismele poliploide manifest fenomenul de gigantism, care poate avea o
serie de aplicaii practice.
Organismele poliploide pot fi de 2 feluri :
-

autopoliploide (conin seturi multiple de cromosomi derivate de la aceeai specie)

i alopoliploizi (conin seturi de cromosomi derivate de la specii diferite).

Autopoliploidia
Poate aprea spontan, sub influena ocurilor de temperatur sau poate fi indus chimic.
In funcie de mecanismul de producere, autoploizii pot fi :
-

mitotici: la celulele aflate n diviziune mitotic nu se mai formeaz fusul de

diviziune iar cromosomii separai n cromatide nu mai migreaz spre cei doi
poli, astfel c nucleul care se formeaz va ngloba un numr dublu de
cromosomi monocromatidici;

meiotici: se formeaz prin nesepararea cromosomilor n cursul anafazei I a

meiozei, rezultnd astfel gamei diploizi.

Multe dintre speciile de legume , fructe i plante de interes horticol sunt autopoliploide
(de obicei tetraploide).
Alopoliploidia (sau amfiploidia)- rezult n urma ncrucirilor dintre speciile nrudite
urmate de dublarea ulterioar a numrului de cromosomi.
Alopoliploizii pot fi :
-

amfiploizi genomiali- sunt rezultatul hibridrilor ntre specii complet

diferite ; n prima generaie rezult un hibrid steril dar prin dublarea numrului
de cromosomi se obine un amfiploid fertilcare poate fi considerat o specie
nou ;

amfiploizi segmentali sunt rezultatul hibridrii ntre specii cu genomuri

parial sau total omoloage, urmat de dublarea numrului de cromosomi.

Cel mai cunoscut exemplu de alopoliploid natural este cel al grului cultivat (Triticum
aestivum) care s-a dovedit a fi un alohexaploid (2n=6x=42). Alte specii cu origine amfiploid :
Prunus domestica este un aloploid ntre P. spinosa (4n=32) i P. cerasifera (2n = 16), Nicotiana

134

tabacum s-a format din N. sylvestris (2n =24) i N. tomentosiformis (2n = 24), Brassica napus a
rezultat din B. oleracea (2n = 18) i B. campestris (2n = 20).

ANEUPLOIDIA
O categorie special de variaii ale numrului normal de cromosomi este reprezentat de
aneuploidie.
Cauza apariiei acestui fenomen este non-disjuncia (nesepararea) perechilor de
cromosomi n cursul procesului de meioz.
In funcie de variaiile numrului de cromosomi din perechi, aneuploidiile pot fi :
-

nulisomii (2n - 2): se pierd ambii cromosomi dintr-o pereche ;

monosomii (2n - 1): se pierde un cromosom dintr-o pereche ;

trisomii (2n+ 1): se adaug un cromosom omolog la o pereche ;

tetrasomii (2n+ 2): se adaug doi cromosomi omologi la o pereche.

135

Fenomenul este de destul de des ntlnit n natur, el fiind deseori letal la animale i
puternic mutagen la plante. La om au fost descrise numeroase cazuri de aneuploidii ce afecteaz
att cromosomii somatici ct i pe cei ai sexului i care determin apariia unor sindroame grave.

136

Reparaia genetic
Repararea ADN poate fi definit n sens general ca un ansamblu de rspunsuri celulare
asociate cu refacerea instruciunilor genetice asigurate de secvene normale de ADN.
La nivel molecular, mijloacele de aprare sunt de natur ereditar i sunt cunoscute ca
procese de corectare a erorilor de copiere ce se pot produce n cadrul replicrii ADN, fie ca
procese reparatorii ale leziunilor induse n structura ADN.
Totalitatea mecanismelor de reparare a leziunilor induse n structura ADN prin aciunea
agenilor mutageni se numete proces reparator.
In funcie de tipul de mutaii, de modul de apariie i de mecanismul implicat n
corectare, procesul reparator se poate realiza prin mai multe ci, grupate n urmtoarele
mecanisme :
-

repararea direct a ADN prin intervenia unor enzime de tipul ADN

polimerazelor, alkiltransferazelor sau prin fotoreactivare ;

excizia reparatorie eliminarea nucleotidelor modificate (dimerizate) de un

complex enzimatic i sinteza unui nou fragment la restul catenei de ADN prin
intervenia enzimei ADN polimeraza I ;

repararea post-replicativ recombinatorie (post-replicativ- se desfoar

dup ce bifurcaia de replicare a depit zona modificat, reparare prin
recombinare- deoarece necesit funciile celulare de recombinare)

sistemul SOS -

activarea anumitor gene ce codific produii necesari

procesului reparator, ca urmare a modificrilor la nivelul ADN.

137

Curs 12. REGLAREA ACTIVITII GENICE

Necesitatea reglajului activitii genelor, att n celula procariot ct i n cea
eucariot , este determinat de faptul c la un moment dat funcioneaz numai o mic
parte din totalitatea genelor.
Astfel, n celula bacterian se aproximeaz c, n condiii determinate de mediu, nu se
sintetizeaz dect cca 1 % din totalitatea proteinelor structurale i enzimelor pentru care
exist informaie genetic n genom. Ca urmare, cantitatea de proteine i n special de enzime
sintetizate n celule nu este constant n timp, ci se afl sub controlul unui mecanism de
reglare genetic. n cazul eucariotelor superioare, numai cca 7 10 % din secvenele de ADN
din genom sunt transcrise n ARN.
Mecanismele de reglare reprezint deci un sistem de coordonare prin care se face
selecia adecvat, n raport cu mediul, a informaiei genetice care urmeaz a fi
exprimat fenotipic.
Mesajul selectat reprezint doar o parte

din totalul informaiei pstrat i

transmis ereditar de genom, ceea ce nseamn c exist molecule semnal care

controleaz rata de transcriere a unor molecule specifice de ARNm (control
transcripional).
Dup selecia genelor, urmeaz transcrierea informaiei genetice purtat de
acestea, n vederea sintezelor proteice dup un program codificat de gene, apoi realizarea
echilibrat cantitativ a acestor sinteze i desfurarea reaciilor ce implic activitatea
catalitic a proteinelor sintetizate (control translaional).
Reglarea activitii genelor, intrarea lor n funciune dup un program riguros
controlat este evident att la procariote ct i la eucariote.
La eucariote, dezvoltarea i diferenierea celular este legat de transcrierea selectiv
a informaiei genetice de la nivel celular. La aceste organisme apar diferenieri celulare
specifice ce nu pot fi explicate dect admind faptul c unele gene funcioneaz permanent,
n timp ce altele funcioneaz difereniat, n anumite momente specifice ale ontogenezei.
n sinteza proteinelor exist, n general, dou tipuri de control:
-

Controlul adaptativ este dependent de condiiile de mediu care determin activarea

unei anumite pri din mesajul genetic (nefolosit pn n acel moment), fcnd s fie
sintetizate enzimele necesare celulei n acel moment i s fie blocat sinteza
enzimelor ce nu sunt necesare n momentul respectiv;

138

Controlul programat este indirect influenat de mediu, conducnd la funcionarea

constant a genelor i la sinteza de proteine n cantitate aproape constant n tot
timpul vieii organismului respectiv.

REGLAREA EXPRIMRII GENELOR LA PROCARIOTE

Mecanismele de reglare a activitii genelor au fost cel mai bine studiate la bacterii.
Teoria reglrii genetice la procariote a fost elaborat de geneticienii francezi F.
Jacob i J. Monod, n 1961.
Ei au demonstrat experimental i teoretic c sinteza proteinelor i respectiv a
enzimelor celulare, nu este constant n timp ci variaz n funcie de necesitile
celulei.
n funcie de mecanismele moleculare i de efectele acestora, procesele de reglare a
activitii genice pot fi grupate n dou mari categorii: reglare pozitiv i reglare
negativ.
Reglarea pozitiv - reglarea genetic se realizeaz prin activarea unor gene n
prezena unei molecule efector care poate fi o protein, o molecul activator de mici
dimensiuni sau un complex molecular. Acest sistem , n anumite situaii, necesit
prezena AMPc i a proteinei CRP (proteina de legare, receptor, a AMPc), care iniiaz
transcrierea genetic.
n sistemul de reglare negativ n celul este prezent un inhibitor care mpiedic
transcrierea. Acest inhibitor (represor) interacioneaz cu o anumit regiune plasat n
faa genelor reglate. Pentru iniierea transcrierii este necesar prezena unui antagonist al
inhibitorului, numit inductor.

Reglarea operonului lactozei la Escherichia coli (operonul lac)

Cercetrile privind reglarea genetic la procariote, au dus la concluzia c genele
care acioneaz asupra unei ci metabolice nu au o activitate independent ci fac
parte din uniti mai mari denumite operoni ce funcioneaz coordonat.

139

Un operon este o unitate funcional alctuit dintr-o secven de nucleotide ce

include:
un promotor,
un operator i
una sau mai multe gene structurale care sunt transcrise ntr-un ARNm
policistronic (o molecul de ARNm codific pentru mai mult dect o protein).
Promotorul este o secven de ADN, reprezint situsul de recunoatere a
enzimei ARN polimeraza care are rol n procesul de iniiere a transcrierii.
n sinteza ARN, promotorul indic care gene ar trebui utilizate pentru sinteza
ARNm, i prin alungire (elongare), controleaz ce proteine vor fi sintetizate.
Operatorul este un segment de ADN, care regleaz activitatea genelor
structurale din cadrul operonului, prin interaciunea cu un represor sau un inductor
specific.
Primul operon, descris de ctre F. Jacob, D. Perrin, C. Sanchez and J. Monod n
1960, a fost operonul lac (operonul lactozei) de la Escherichia coli.
La E. Coli se consider a fi cca 200 de operoni, dintre care numai activitatea unora
este mai bine cunoscut.
Astfel, la E. Coli, posibilitatea utilizrii lactozei din mediu i a metabolizrii ei,
se realizeaz cu ajutorul a 3 enzime:
- galactozid permeaza (localizat n membrana celulei bacteriene asigur
permeabilizarea acesteia, facilitnd trecerea lactozei n celula bacterian) si
- galactozidaza (localizat n citoplasma bacterian, cliveaz lactoza la glucoz i
galactoz fig. 1).
n cadrul metabolismului celular mai intervine tiogalactozid transacetilaza (care n
mod normal, are rol de acetilare a lactozei i a altor galactozide cu ajutorul acetilCoA).

140

Fig. 1. Lactoza si produsii de clivare

Sinteza acestor 3 enzime este determinat de 3 gene structurale:
lac Z codific - galactozidaza ,
lac Y codific - galactozid permeaza i
lac A- codific tiogalactozid transacetilaza.
n absena lactozei din mediu, genele structurale care determin sinteza celor 3
enzime sunt inactive.
Dac ns se adaug lactoz n mediu, cele 3 gene sunt rapid activate i ncepe
sinteza celor 3 enzime.
Activitatea celor 3 gene structurale este controlat de o gen reglatoare lac I, care
acioneaz asupra lor prin intermediul unui represor.
n absena lactozei, gena reglatoare sintetizeaz o protein represoare care se
cupleaz cu un segment de ADN denumit operator dispus naintea celor 3 gene structurale,
blocnd astfel activitatea genelor respective.

Operonul lac (fig. 2) este alctuit din cele 3 gene structurale (lac Z, lac Y, lac A)
i o serie de elemente reglatoare reprezentate de:

Represor o protein codificat de gena lac I gena reglatoare, situat de

regul separat de operonul a crei activitate o regleaz; are 2 situsuri de
recunoatere: unul pentru lactoz i compuii si i altul pentru operonul
lactozei.

Promotorul (p) reprezentat de o secven de nucleotide care are rol de loc

de recunoatere pentru enzima ARN polimeraza, determinnd astfel iniierea
transcrierii;
141

Operatorul (o) o secven de nucleotide care servete ca un situs de

recunoatere i de legare pentru represorul specific operonului.

Fig. 2. Operonul lac

Prin transcrierea operonului lac se formeaz o molecul de ARNm ce copiaz
informaia de pe catena sens.
Acest ARNm policistronic conine mai multe semnale start pentru iniierea
traducerii.
Transcrierea genetic a operonului lac este controlat att pozitiv ct i negativ.

Inducia, represia i retroinhibiia enzimatic

Cercetrile privind sinteza celular a enzimelor au dus la descoperirea fenomenelor de
inducie i represie enzimatic, fenomene opuse ca aciune (antagoniste) i care controleaz
cantitatea de substane sintetizate.

Inducia enzimatic este declanat de prezena n mediu a substanei ce

trebuie metabolizat (Ex. lactoza) denumit n acest caz inductor.
n mod obinuit, operonul lac este nefuncional. El este indus s funcioneze de
ndat ce bacteria este pus pe un mediu cu lactoz.
Represorul se combin cu inductorul (substana ce trebuie metabolizat), devine
inactiv i pierde afinitatea pentru regiunea Operatorului. Starea deblocat a
operatorului permite accesul ARN polimerazei la genele structurale care ncep s fie
transcrise sintetizndu-se astfel enzimele corespunztoare (enzime catabolice- ce
catalizeaz metabolizarea sau degradarea- substratului nutritiv) (Fig. 3 si 3a).

142

Fig. 3. Inductia enzimatica

a) Sistem inductibil
Reglarea operonului lactozei la Escherichia coli- sistem inductibil

143

Represia enzimatic este declanat de absena substratului din mediu (

intervine n momentul n care concentraia substratului din mediu scade).
Represorul trece din stare inactiv n starea activ, se cupleaz cu regiunea
operatorului blocnd-o, inhibnd astfel activitatea genelor structurale care asigur
sinteza enzimelor corespunztoare.
n mod normal, represorul este inactiv i genele care asigur sinteza enzimelor
implicate n sinteza unor metabolii eseniali funcioneaz.
Atunci cnd ns concentraia unui metabolit esenial depete necesitile celulei,
metabolitul (substana sintetizat) formeaz cu represorul un complex activ numit
corepresor, care blocheaz operatorul i genele corespunztoare (Fig. 3b si 4).

b) Sistem represibil

144

Fig. 4. Reglarea operonului lactozei la Escherichia coli- sistem represibil

De exemplu, la Salmonella typhimurium, genele din operonul his care specific
enzimele ce intervin n sinteza histidinei, sunt funcionale atunci cnd n celul se afl o
concentraie mic de histidin.
Cnd n celul s-a acumulat o cantitate mare de histidin, expresia acestor gene este
represat i sinteza histidinei nceteaz.
Corepresorul (histidina n cazul operonului his) se cupleaz cu represorul (o
protein reglatoare) inactiv, care devine activ, blocnd transcrierea operonului his.

Retroinhibiia enzimatic denumit i inhibiia prin feedback sau efectul

Novick- Szilard, este un alt sistem de control al sintezei proteice prin cantitatea de
produs final.
Astfel, n cazul unui anumit lan metabolic n care intervin mai multe enzime,
produsul final n cantitate mare inhib moleculele existente ale enzimei care controleaz
prima etap a lanului metabolic. (spre deosebire de represia enzimatic care blocheaz
sinteza tuturor enzimelor care intervin n lanul metabolic respectiv, in acest caz este
blocata prima enzima din lantul metabolic, inhibandu-se astfel activitatea celorlate
enzime).
De exemplu, n calea metabolic a histidinei, prima enzim este pirofosforilaza.
Cnd concentraia histidinei n celul devine prea mare, molecula de histidin se
leag la o regiune specific acestei enzime, schimbndu-i conformaia sa tridimensional,
astfel c enzima devine nefuncional.
Cnd concentraia de histidin scade, aceasta prsete enzima, care refcndu-i
conformaia spaial original, redevine activ.

Controlul pozitiv al funcionrii operonului lac-Represia prin catabolit

La E coli s-a observat c prin cultivarea pe un mediu ce conine att glucoz ct i
lactoz, bacteriile utilizeaz preferenial

mai

nti glucoza,

lactoza

rmne

nemetabolizat pn cnd n mediu nu mai exist glucoza, fenomen numit diauxie.

Aceasta nseamn c atta timp ct exist glucoz n mediu, genele lac sunt inactivate.
Acest mecanism reglator a fost denumit represie prin catabolit.
Prin urmare, pentru iniierea transcrierii ARNm policistronic, pe lng prezena
inductorului mai este necesar nc un element.
145

Activitatea acestui element este legat de concentraia glucozei, efectul inhibitor al

glucozei asupra exprimrii genelor lac fiind indirect. Natura elementului suplimentar
necesar iniierii transcrierii operonului lac, a fost stabilit recent, acesta fiind reprezentat de
proteine implicate n reglarea pozitiv a genelor.
Astfel, tulpinile de E.coli (i multe alte specii de bacterii) sunt capabile s sintetizeze
o protein specific ce are rolul de receptor pentru AMPc (proteina CRP) codificat de
gena crp.
Proteina CRP, mpreun cu AMPc, formeaz un complex AMPc-CRP care se leag
la promotorul operonului lac, la nivelul unui situs specific i activeaz transcrierea.
Sinteza ARNm are loc doar n absena represorului i n prezena complexului
AMPc-CRP legat la o secven din regiunea promotor.
In celulele ce conin mutaii n genele crp sau cya nu se poate iniia sinteza ARNm
chiar dac respectivele celule conin i mutaii lac I- (deci nu se sintetizeaz represor)
sau

mutaii la nivelul regiunii operator care determin sinteza constitutiv a -

galactozidazei.
Cu toate acestea, s-a dovedit c transcrierea genelor operonului lac se realizeaz i
n condiii bazale, cu o rat foarte sczut dar activitatea maxim a acestuia necesit
ndeplinirea condiiilor menionate anterior
In cazul operonului lac, cnd glucoza este absent, n celul exist o cantitate mare
din molecula de reglare AMPc (adenozin-monofosfat ciclic). Acest element exist i n
cazul celulelor eucariote, mai ales la animale, unde regleaz aciunea mai multor hormoni.
Cnd glucoza este prezent n mediu, nivelul AMPc este sczut. Deasemenea, dac n
mediu se afl glicerol sau un alt compus care nu poate intra n calea metabolic a
glucozei, nivelul AMPc este ridicat.

Controlul procesului de traducere al mesajului genetic

Cercetrile efectuate asupra operonului lac au evideniat faptul c exist unele

diferene n ceea ce privete traducerea informaiei purtate de ARNm
policistronic, ceea ce sugereaz existena i la procariote a unei reglri la nivelul
procesului de tranducere.

146

Astfel, s-a remarcat faptul c biosinteza celor trei enzime (-galactozidaz,

permeaz i acetilaz) se face n raport molar de 1:1/2:1/5, diferenele
datorndu-se reglrii la nivelul traducerii.

Fenomenul se poate realiza pe dou ci:

1. gena lac Z este tradus prima.
Se pare c, n cazul moleculelor de ARNm policistronic, imediat dup sinteza
polipeptidului codificat de prima gen are loc separarea de ribosomi, urmnd s se
formeze un nou complex de iniiere la nivelul codonului AUG al celei de-a doua
gene.
Frecvena cu care se realizeaz acest proces este corelat cu probabilitatea reiniierii
la fiecare codon AUG urmtor.
Astfel, se formeaz un gradient n cantitatea de polipeptide sintetizate de la captul
5 spre cel 3 al ARNm.
Aceste efect, numit polaritate, se realizeaz n cazul majoritii moleculelor de
ARNm policistronic.
2. toate moleculele de ARNm sunt degradate la nucleotide dup cteva runde de
traducere.

Degradarea este nceat dar uneori ncepe imediat dup primul eveniment de
traducere.

Degradarea ARNm policistronic ncepe, cel mai frecvent, la nivelul genei lac A,
apoi continu cu gena lac Y i, abia la sfrit, cu gena lac Z.

Consecina acestui fenomen este c, la un moment dat, sunt mai multe copii ale
genei lac Z dect lac Y i, evident, cu mult mai multe dect lac A.

REGLAREA EXPRIMRII GENELOR LA EUCARIOTE

La eucariote reglarea genetic are un caracter mult mai complex deoarece:
-

materialul genetic este complexat cu histone, pentru a forma fibra de cromatin;

reglajul genetic la eucariote este mai complex din cauza existenei genelor n
mozaic, astfel c sinteza ARN se realizeaz n mai multe etape prin care se elimin
intronii;

reglajul genetic la eucariote este afectat de faptul c sinteza proteic se realizeaz

n citoplasm, iar ARNm trebuie s migreze din nucleu n citoplasm, la locul
sintezei proteice;
147

reglajul genetic la eucariote are un caracter mai complex din cauza unei cantiti
foarte mari de ADN n nucleu, din care ns numai o parte este informaional.

La eucariote, genele nu sunt organizate n operoni, motiv pentru care reglajul genetic
se realizeaz la nivelul genelor individuale. Ca urmare, fiecare molecul de ARNm
poart mesajul genetic pentru o singur caten polipeptidic el fiind monocistronic.
ADN de la eucariote este permanent complexat de histone care, pe lng rolul lor
structural de a asigura stabilitatea fibrei de cromatin, joac i rol de represori nespecifici
generalizai, astfel c genele se afl ntr-o permanent stare represat.
Pentru a funciona, genele trebuie s fie induse s funcioneze, atunci cnd necesitile
celulei o cer. Activarea genelor se realizeaz cu ajutorul proteinelor nonhistonice.
Deoarece la eucariote majoritatea genelor sunt inactivate n orice moment, reglajul genetic se
realizeaz nu prin blocarea activitii lor (represie) ci prin activarea unor anumite gene
(inducie), activarea i inactivarea avnd un caracter reversibil.
La eucariote se poate spune c exist dou tipuri de reglare a activitii genelor:
reglare pe termen scurt- se bazeaz pe mecanime moleculare reversibile,
reprezentate de modificri n activitatea unor gene, i
reglare pe termen lung- care este de regul ireversibil i implic fenomene
legate de diferenierea celular ce au loc n cursul dezvoltrii ontogenetice.
REGLAJ PE TERMEN SCURT
Reglarea activitii genelor se poate realiza la mai multe nivele, evidente n cursul
citodiferenierii:
-

la nivel transcripional

la nivelul maturrii ARNm

la nivelul transportului ARNm n citoplasm

la nivelul translaiei mesajului genetic.

la nivelul degradrii ARNm

Reglaj prin intermediul hormonilor

Reglarea activitii genelor se poate realiza la mai multe nivele, evidente n cursul

citodiferenierii:
1. Reglaj genetic la nivel transcripional. La eucariote ca i la procariote, acesta este
nivelul cel mai important la care se realizeaz controlul activitii genelor. Controlul
transcripional determin care dintre gene este transcris la un moment dat i rata cu
148

care se realizeaz procesul de transcriere. Genele de la eucariote conin secvena

promotor i , de cele mai multe ori o secven activatoare (enhancer), ele
reprezentnd elemente reglatoare majore.
Majoritatea genelor de la eucariote sunt inactive (tcute) pn n momentul n care
sunt activate n mod specific. O prim condiie pentru ca procesul de transcriere s
poat fi iniiat este ca nucleosomii s poat fi ndeprtai de la nivelul regiunii de
interes.
Histonele, la rndul lor, pot s influeneze proprietile de transcriere ale ADN prin
modificri chimice (fosforilare, acetilare, metilare) afectnd astfel interaciunea ADNhistone. Proteinele nonhistonice ndeplinesc rolul unor activatori specifici ai genelor
asigurnd transcrierea difereniat a genelor , ele interacionnd cu histonele pe care le
ndeprteaz de la nivelul genelor ce rmeaz a fi transcrise.
Reglarea transcrierii genelor la eucariote se mai poate realiza i prin procesul
de metilare al ADN. Astfel, imediat dup replicare, o parte din bazele azotate (n
special citozina) sufer un proces de metilare (prin intervenia unei metil transferaze).
Gradul de metilare al citozinei variaz n funcie de specie. Astfel, la mamifere de
exemplu, 70 % din ADN este metilat.. S- a constatat c ADN-ul genelor inactivate
este mai puternic metilat dect cel al genelor active. Metilarea citozinei poate marca
macromolecula de ADN n mod stabil, el fiind transmis celulelor fiice la fiecare
diviziune i poate ndeplini funcii multiple, incluznd meninerea structurii
cromosomului, controlul transcripiei, transformarea oncogenic etc. Metilarea unor
anumite secvene de ADN este asociat cu inhibiia transcripiei, genele respective
fiind ns inactivate n mod reversibil.
2. Reglajul genetic la nivelul maturrii ARNm. Acest tip de reglare funcioneaz n
procesul de maturare al ARNm. Dou evenimente reglatoare exemplific acest nivel
de reglare: alegerea situsului de poliadenilare (adugarea cozii poliA) i a celui de
eliminare a intronilor i asamblare a exonilor.
Datorit structurii discontinue a genelor (exoni + introni), se sintetizeaz ARNm
precursor (premesager) ce conine att secvene informaionale ct i secvene noninformaionale. Prelucrarea acestei molecule (splicing) pentru a obine ARNm matur,
funcional presupune parcurgerea mai multor etape n care sunt implicate molecule de
ARNsn precum i anumii factori proteici.

149

S-a evideniat faptul c n anumite situaii prelucrarea ARNm se poate realiza ntr-o
asemenea manier nct permite o asortare variat a ezonilor din aceeai gen, proces
denumit prelucrare alternativ (alternative splicing).
3. Reglajul genetic la nivelul transportului ARNm n citoplasm. Odat prelucrat, ARNm
migreaz din nucleu n citoplasm, la nivelul porilor din membrana nuclear. Cercetrile au
artat c numai o mic parte din ARNm sintetizat n nucleu, migreaz n citoplasm, cea mai
mare parte din ARNm fiind degradat n nucleu cu ajutorul unor enzime. Reglajul genetic este
acela care decide ce secvene de ARNm vor fi degradate n nucleu i care vor fi exportate n
citoplasm, acolo unde se realizeaz sinteza proteic. Este vorba de enzime diferite ce
opereaz n tipuri variate de celule, fapt ce determin ce sinteze proteice caracteristice vor
realiza celulele respective.
4. Reglajul genetic la nivelul translaiei mesajului genetic. Const n faptul c nu toate
moleculele de ARNm matur migrate n citoplasm vor fi utilizate n procesul sintezei
proteice.
5. Rglajul genetic la nivelul degradrii ARNm are rolul de a selecta moleculele de ARNm
matur migrate n citoplasm care vor fi degradate. n cazul genelor hemogobinei, de exemplu,
ARNm are o mare stabilitate n timp, astfel c el servete repetat pentru sinteza proteic.
La eucariotele superioare, reglarea pe termen scurt (la nivelul transcrierii
genetice), este n mare parte mediat de hormoni.
Un anumit hormon poate avea drept int una sau mai multe tipuri de celule, fiecare
tip rspunznd diferit la acelai hormon. Unii hormoni regleaz activitatea genelor
influennd transcrierea, traducerea sau funcionarea unor enzime cum este adenilat ciclaza.
De exemplu, cei mai muli hormoni polipeptidici i exercit efectele lor iniiale la
nivelul membranei celulelor int, stimulnd activitatea adenilat- ciclazei. Aceasta
convertete ATP la AMPc capabil s stimuleze sinteza genelor, ca i n cazul procariotelor.
Hormonii steroizi acioneaz direct la nivelul transcrierii genetice, fr intervenia AMPc, n
timp ce ali hormoni pot afecta histonele stimulnd astfel procesul de transcriere.
In cazul plantelor au fost identificate numeroase substane care au diferite roluri n
controlul creterii i dezvoltrii, ele fiind denumite hormoni vegetali.
Hormonii vegetali sunt de cinci tipuri:
-etilena,
-acid abscizic,
-auxine,
- citokinine i
150

-gibereline.
Ei sunt responsabili de realizarea unor activiti variate: de exemplu,

etilena induce coacerea fructelor, maturarea florilor i senescena plantelor, pe lng

alte activiti.

Giberelinele- la fel ca i hormonii steroizi animali, stimuleaz transcrierea i, n

acest fel, determin creterea cantitativ a anumitor proteine specifice implicate n
anumite procese majore de formare i difereniere celular.
Atunci cnd sunt aplicate plantelor giberelinele produc o serie de efecte, aa cum sunt

cele observate n cazul plantelor pitice(dwarf) la care determin creterea n nlime.

De asemenea, aceti hormoni stimuleaz procesul de germinare al anumitor tipuri
de semine.

Dei aciunea giberelinelor a fost intens studiat, pn n prezent nu s-au evideniat

receptori pentru aceti hormoni iar mecanismul molecular nu este pe deplin clarificat

Reglarea pe termen lung (Reglajul genetic la nivelul cromatinei)

Se realizeaz prin heterocromatinizarea sau condensarea mai pronunat a
cromatinei ceea ce conduce la o reducere sau chiar o blocare a funcionrii ADN ca
matri pentru sinteza ARN. Heterocromatina, puternic condensat, este prezent mai ales
n celulele nalt difereniate care sintetizeaz foarte puine proteine comparativ cu celulele
nedifereniate.
La nivelul cromosomilor eucariotelor exist dou tipuri de heterocromatin,
constitutiv i facultativ, care sunt implicate n activitatea genelor.
Astfel heterocromatina constitutiv se gsete la nivelul regiunilor care nu sunt
niciodat exprimate (transcrise); acestea includ sateliii i au un rol structural pentru
cromosom. Deseori, secvenele condensate sunt concentrate la nivelul unor regiuni specifice,
de obicei n jurul centromerului, ele pstrnd aceeai configuraie n toate celulele
organismului respectiv.
Heterocromatina facultativ reprezint cromatina condensat doar n anumite
celule, n timp ce n alte tipuri de celule regiunile corespunztoare sunt decondensate.
S-a dovedit faptul c, n celulele embrionare cantitatea de heterocromatin facultativ
este mic n timp ce n celulele specializate proporia sa crete foarte mult.
Aceasta nseamn c n cursul procesului de dezvoltare individual (ontogenetic) are loc
inactivarea prin heterocromatinizare a unui numr mare de gene.

151

Cel mai cunoscut exemplu de reglare prin heterocromatinizare de tip facultativ este
cromatina sexual ce reprezint unul dintre cromosomii X de la femelele de mamifere
care se inactiveaz la ntmplare (fie cel de origine matern, fie cel de origine patern), n
mod definitiv.
Astfel, organismul femel poate fi considerat ca fiind un mozaic de clone celulare, fenomenul
fiind evident n cazul unor gene mutante localizate pe cromosomul X:
n cazul unor celule gena mutant se manifest fenotipic, n timp ce n altele nu (cele ce
conin cromosomul X heterocromatinizat).
Un exemplu este cel al pisicilor calico la care femelele au blana cu pete galbene i
negre, fiind heterozigote (Cy/CB), genele pentru culoarea blnii fiind localizate pe
cromosomii X.
In cursul dezvoltrii ontogenetice n unele celule este inactivat cromosomul X pe care
se gsete gena Cy n timp ce n alte celule se inactiveaz cromosomul X ce conine gena CB.
Rezultatul este apariia unor pisici cu blana cu pete galbene i negre.
La masculi, din cauz c exist un singur cromosom X, fenomenul nu se realizeaz, ei
fiind fie complet negri fie galbeni
Ex de mai sus este un tip de Reglare pe termen lung care se realizeaz prin
heterocromatinizarea sau condensarea mai pronunat a cromatinei ceea ce conduce la
o reducere sau chiar o blocare a funcionrii ADN ca matri pentru sinteza ARN.
Heterocromatina, puternic condensat, este prezent mai ales n celulele nalt difereniate
care sintetizeaz foarte puine proteine comparativ cu celulele nedifereniate.

De exemplu, n leucocitele normale apar mase mari de heterocromatin sub forma

unor blocuri puternic condensate la periferia nucleului, n timp ce n cazul leucemiilor
aceste aspecte sunt absente, celulele trecnd n starea nedifereniat cu sinteze
proteice intense i capabile de diviziuni celulare rapide.

Heterocromatinizarea poate avea loc:

-

la nivelul unor segmente cromosomale,

a unor cromosomi ntregi (X de la femelele de mamifere) i

chiar a ntregului genom (ex. La Planococcus citri), cnd cromosomii de origine

patern sunt inactivi, formarea spermatozoizilor realizndu-se n urma diviziunii
mitotice, ei fiind de 2 tipuri: unii funcionali i alii nefuncionali (conin cromosomii
paterni inactivi).

152

CITODIFERENIEREA
Procesul de difereniere celular sau citodiferenierea este specific organismelor
eucariote pluricelulare, el referindu-se la modificrile structurale i funcionale pe care le
sufer celulele ce rezult (n urma unor diviziuni mitotice repetate) din celula-ou sau zigot.
La organismele eucariote, coninutul n ADN este acelai, indiferent de tipul celular, ceea ce
nseamn c diferenierea celular i dezvoltarea organismului reprezint rezultatul unor
evenimente programate genetic ce determin activarea sau represia genelor.
Studiile efectuate asupra dezvoltrii ontogenetice la Drosophila melanogaster i la
nematodul Caenorhabditis elegans au permis elucidarea unor aspecte legate de genetica
dezvoltrii.
Fenomenul diferenierii celulare se realizeaz ntr-o ordine cronologic strict, dup un
program extrem de riguros a crui nerespectare conduce la modificri anormale ale
organismului.
De exemplu, la om unde exist aproximativ 1013 celule, n cursul dezvoltrii ontogenetice
are loc diferenierea a peste 150 tipuri diferite de celule, deosebite ca form, mrime,
structur sau funcie. Studiul diferenierii celulare la mamifere este dificil, motiv pentru
care cercettorii au ales un sistem model la care dezvoltarea embrionar s poat fi
urmrit cu uurin, este reprezentat de cel de la Drosophila melanogaster,
Avantajele alegerii datorndu-se urmtoarelor caracteristici:

genom de dimensiuni mici

numr mic de cromosomi (patru perechi) i existena cromosomilor politeni

prezint mai multe stadii larvare, dezvoltarea fiind prin metamorfoz (oularv-pup-adult), ntregul proces de metamorfoz (dezvoltarea de la ou la
adult- vezi figura) dureaz aproximativ nou zile.

153

Procesul de metamorfoz (ou-larv-pup-adult) la Drosophila

Reglarea procesului de citodifereniere, se realizeaz la niveluri diferite:

la nivelul cantitii de ADN i a replicrii materialului genetic,

al transcrierii i traducerii la nivel cromosomal sau al ntregului genom.

Astfel, dei se consider c toate celulele unui organism conin aceeai cantitate de ADN, s-a
dovedit c exist unele variaii ce se datoreaz unor procese de replicare difereniat:

suprareplicare a anumitor regiuni cromosomale i

subreplicarea altora (mai ales a regiunilor heterocromatice).

In aceea ce privete genele implicate n controlul dezvoltrii la D.melanogaster, acestea

au fost identificate i studiate pe baza mutaiilor produse la nivelul lor, care au condus fie
la apariia unor structuri anormale fie la moartea organismului.
Aceste gene pot fi incluse n cel puin trei grupuri
- gene de origine matern: se exprim n cursul ovogenezei i sunt responsabile de
gradientul de proteine ce apare la nivelul oului i care sunt implicate organizarea
spaial a embrionului timpuriu

gene de segmentare: sunt exprimate dup fecundare la nivelul zigotului i

determin numrul i organizarea segmentelor corpului.

genele homeotice: se exprim dup genele segmentare i determin

identitatea fiecrui segment individual.

La plante -exist diferene ntre cantitatea de ADN din meristeme i cea din diferite
organe:
154

Astfel, la nivelul celulelor meristematice cantitatea de ADN este mai mic n timp ce n
alte organe, cum sunt cotiledoanele care sunt alctuite din celule nalt difereniate,
cantitatea de ADN este mai mare.
Diferenierea celular ce apare n cazul organismelor multicelulare se datoreaz nu numai
interveniei genelor menionate ci i unor mecanisme specifice de comunicare i semnalizare
ce se realizeaz ntre celule.
In aceste mecanisme sunt implicate o serie de proteine ce interacioneaz cu receptori
caracteristici aflai la suprafaa celulelor int.
In urma interaciunii dintre semnalul molecular i receptorul su specific sunt generate
alte semnale intracelulare care informeaz nucleul asupra necesitii stimulrii
proliferrii celulare, fenomen numit proces de transducie a semnalelor.
In realizarea acestui proces particip o serie de factori cu funcii distincte:
factori de cretere celular (de exemplu, factorul de cretere epidermic),
receptori membranari proteici,
transmitori citoplasmatici fosforilani,
factori nucleari de transcriere.
O mare parte a acestor factori este determinat de o categorie aparte de gene denumite protooncogene.

155

Curs 13. DIVIZIUNEA CELULARA

MITOZA SI MEIOZA
PROCARIOTE I EUCARIOTE
Marea diversitate a lumii vii a fost observat nc din cele mai vechi timpuri, iar
clasificarea organismelor a devenit o necesitate. Sistemele de clasificare elaborate pn n
prezent sunt extrem de variate i nu exist o unanimitate de opinii.
Cu toate acestea, n prezent unul dintre cele mai acceptate sisteme de clasificare a
organismelor consider c acestea pot fi mprite n trei mari grupe: eubacteria, archaea i
eucariote.
Cele mai cunoscute bacterii cum ar fi Escherichia coli, Streptococcus pneumoniae
sau Staphylococcus aureus aparin grupului de eubacterii. Organismele aparinnd
eubacteriilor prezint o serie de diferene n ceea ce privete morfologia (sunt sferice sau sub
form de bacili, au un ciclu de dezvoltare complicat etc) i chiar unele proprieti (unele sunt
capabile de fotosintez, altele produc antibiotice sau fixeaz azotul atmosferic etc) dar,
caracterele generale sunt comune tuturor, iar clasificarea n cadrul grupului este posibil mai
ales pe baza unor criterii biochimice sau genetice.
In grupul eubacteriilor sunt cuprinse, ntre altele, cianobacteriile (sau algele
albastre-verzi cum au fost denumite iniial), bacterii cu un aspect filamentos, ce conin
clorofil i care sunt capabile de a realiza fotosintez. Alturi de acestea, ntre eubacterii
mai sunt grupate i actinomicetele, care includ bacteriile din genul Streptomyces
cunoscute ca producnd o gam larg de antibiotice i care prezint o serie de
caracteristici particulare (creterea micelial) ce le apropie de fungi.
Eubacteriile pot fi mprite n dou subgrupe majore: bacterii Gram pozitive i
bacterii Gram negative, separarea bazndu-se pe rspunsul fa de un test de colorare numit
coloraia Gram. Diferenele de colorare reflect de fapt anumite particulariti structurale:
prezena membranei externe la bacteriile Gram negative. Cu toate acestea, existena unor
abateri de la tipurile clasice de colorare precum i alte particulariti au condus la elaborarea
unor criterii de clasificare moderne bazate de anumite nsuiri biochimice (de exemplu,
compoziia peretelui celular) i genetice (de exemplu, examinarea tipurilor de ARNr).
Grupul archaea (denumit i arhebacterii) cuprinde organisme unicelulare
asemntoare eubacteriilor dar cu proprieti biochimice diferite. Cea mai mare parte a
bacteriilor din acest grup triesc n condiii extreme de mediu (temperaturi foarte nalte,
156

presiune ridicat, concentraii mari de sruri etc), ele fiind cunoscute i ca extremofile. Unele
dintre speciile din acest grup realizeaz o serie de ci biochimice neobinuite, cum ar fi
producerea de metan (bacterii metanogene). Separarea taxonomic a grupului archaea de
grupul eubacteriilor a devenit posibil relativ recent i se bazeaz n special pe tipurile de de
ARNr i pe structura ARN polimerazelor i a lipidelor. Datele recente obinute prin
compararea secvenelor factorilor de traducere i a ATP-azelor membranare sugereaz c
grupul archaea este mai apropiat de eucariote dect de eubacterii. Cu toate progresele fcute,
cunotinele legate de particularitile arhebacteriilor sunt cu mult mai puine comparativ cu
cele referitoare la eubacterii.
Eucariotele sunt membri celui de-al treilea regn i cuprind organisme foarte variate
cum ar fi fungii, plantele i animalele. Organismele de tip eucariot sunt unicelulare
(protozoare sau unele tipuri de alge) sau pluricelulare (plante superioare sau animale), numele
lor derivnd de la existena membranei nucleare (au nucleu adevrat). In ciuda marii
diversiti a eucariotelor, a complexitii lor i a modurilor de via diferite, eucariotele
evideniaz o remarcabil similaritate la nivel biochimic, n special a cilor de sintez a
macromoleculelor.
Deseori, pentru simplificare, organismele sunt mprite n procariote i
eucariote, clasificarea bazndu-se pe prezena sau absena membranei nucleare, deci a
unui nucleu adevrat.
Numele de procariot se refer la absena membranei nucleare (nainte nucleu), fapt
ce influeneaz mecanismele ce asigur biosinteza proteinelor. Astfel, la procariote,

absena membranei nucleare, procesul de sintez al ARNm (transcrierea) i cel de sintez al

proteinelor (traducerea) au loc aproape simultan, n timp ce la eucariote exist un anumit
decalaj de timp ntre aceste procese. In acest caz, ARNm este sintetizat n nucleu, dup care
este transportat n citoplasm unde, la nivelul ribozomilor are loc sinteza proteinelor.
In afar de absena nucleului, la procariote lipsesc o serie de ali constitueni celulari,
cum ar fi organitele celulare de tipul mitocondriilor, cloroplastelor, reticulului endoplasmic,
aparatului Golgi etc, care exist n mod normal n celulele eucariote. S-a dovedit c toate
celulele eucariote conin mitocondrii, n timp ce cloroplastele exist doar n celulele vegetale.
Cercetrile efectuate asupra acestor organite au artat c ele sunt foarte nrudite cu
eubacteriile (conin ADN propriu ce codific pentru sinteza ARNr, ARNt, factori de

157

traducere i ali compui ce particip la procesele de transcriere i traducere), ceea ce a

condus la ipoteza originii simbiotice a acestor organite.

DIVIZIUNEA CELULAR
Toate celulele provin de la celule pre-existente, noile celule sunt produse pentru
cresterea sau inlocuirea celulelor distruse sau batrane.
Diviziunea celulara difera la procariote (bacterii) fata de eucariote (protiste, fungi, plante si
animale).
La bacterii exista un cromosom circular inclavat (atasat) in membrana celulara nucleotid.
Celula procariota, precum cea bacteriana, se divide in 2 celule identice printr-un proces de
FISIUNE BINARA prin care cromosomul bacterian se replica producand o copie identica cu
el insusi (figura).

Dupa replicare, intre cei 2 cromosomi se formeaza peretele celular, care va divide
celula initiala.
In cazul organismelor eucariote materialul genetic este repartizat pe mai muli
cromosomi lineari, localizai la nivelul nucleului. Numeroase eucariote conin n nucleu
cte dou copii ale fiecrui cromosom (perechi de cromosomi), ele fiind diploide, n timp
ce altele au cte un singur exemplar din fiecare cromosom, fiind haploide.
Reproducerea eucariotelor poate fi asexuat (asigurata de mitoza) sau sexuat
(asigurata de meioza), caz n care intervin celule specifice, numite gamei, haploide,
produse ntr-o anumit faz a ciclului de dezvoltare i prin a cror fuziune (fecundare) se
formeaz zigotul diploid.
Complementul cromosomal dintr-un nucleu haploid constituie genomul
organismului respectiv. La organismele diploide, cromosomii dintr-o pereche se numesc
158

omologi, ei coninnd aceleai gene, iar cei care conin gene diferite se numesc
neomologi.
La numeroase specii de animale i la unele specii de plante exist cromosomi
distinci la nivelul crora sunt grupate genele particularitilor celor dou sexe; ei se
numesc cromosomii sexului sau heterozomi n timp ce restul cromosomilor din genom
sunt autosomi.
Reproducerea celular la organismele eucariote este un proces ciclic de cretere,
de diviziune nuclear mitotic (cariochinez) i de diviziune celular (citochinez), ele
alctuind aa numitul ciclu celular. Pe parcursul ciclului celular cromosomii prezint
variaii n privina numrului de cromatide din care sunt alctuii i a gradului de condensare.
STRUCTURA CROMOSOMILOR
Cromosomii (gr. chroma = culoare, soma = corp) reprezint entiti genetice ale
genomului eucariot, fiind purttori ai informaiei genetice (genelor). Cromosomii sunt
corpusculi colorai cu structur i numr caracteristice fiecrei specii constituind un
criteriu de identificare al speciei.
Cromosomii metafazici sunt alctuii din urmtoarele componente: cromatide,
centromer, kinetocor, brae, telomere.
Cromatidele sunt subuniti structurale longitudinale unite ntr-un singur punct numit
centromer, cu ajutorul cruia se prinde de fibrele fusului de diviziune, n metafaz.
Braele cromosomului sunt poriunile libere ale cromatidelor, de o parte i de alta a
centromerului. Funcie de poziia centromerului, cromosomii pot avea braele egale
(metacentrici) sau inegale (submetacentrici, acrocentrici).
Constricia primar apare la cromosomii metafazici n regiunea centromerului,
zon unde cromatidele sunt mult ngustate. La acest nivel se afl kinetocorul - o structur
trilamelar, tristratificat dispus pe partea extern a centromerului, cte una la
fiecare centromer al celor dou cromatide. Rolul kinetocorului este de-a ataa
cromosomii la fibrele fusului de diviziune.
Unii cromosomi prezint i o a doua constricie - secundar. Cromosomii care au
constricii secundare sunt implicai n organizarea nucleolilor i se numesc organizatori
nucleolari. La nivelul constriciei secundare sunt grupate genele pentru ARNr (28 S, 18 S, 5.8
S i 5 S). Constriciile secundare pot fi foarte accentuate, realizndu-se desprirea
aproape complet a unui segment din cromatidele cromozomului. Aceste poriuni se
numesc satelii.
159

Extremitile cromozomilor se numesc telomere i se presupune c au rol n

stabilitatea cromozomilor (previne asocierea la capete a diferiilor cromozomi. n zona
telomerelor se pot ntlni secvene de ADN nalt repetate.
Un rol important n formarea i reglarea aparatului mitotic, care este responsabil
de repartiia egal a cromosomilor n cele dou celule fiice, l au centriolii. Centriolul este
un organit celular de forma unui cilindru gol cu pereii formai din 9 grupe de cte 3
microtubuli, numite triplete. Microtubulii sunt cilindri goi, constituii din protofilamente
formate din dimere de i tubulin.

Fig.1. Elementele structurale ale

unui cromosom metafazic

CICLUL CELULAR LA EUCARIOTE

Ciclul celular reprezint perioada dintre dou diviziuni mitotice succesive. Este
divizat n dou etape: interfaza (I) i diviziunea celular - mitoza (M).
Interfaza este perioada cea mai activ din punct de vedere metabolic - are loc sinteza
ADN, a proteinelor histonice. Interfaza este subdivizat n trei faze (fig.1.) :
a) faza presintetic G 1 - (G = gol sintetic)
-

nu se sintetizeaz ADN, dar are loc acumularea compuilor necesari replicrii

cromosomilor monocromatidici, dublrii centriolilor i formrii aparatului mitotic. Au
loc sinteze de ARN, proteine enzimatice i neenzimatice.

exist celule care nu se divid continuu, nefiind implicate permanent n cicluri

proliferative repetate, dei ele rmn viabile i active metabolic ndeplinind funcii
specifice tisulare pentru perioade lungi de timp. Ele pot reveni la ciclul celular
proliferativ, sub aciunea unor factori extracelulari, aa cum se ntmpl n cazul
vindecrii unei leziuni - procesul cicatrizrii. Acest tip de celule se spune c se afl n

160

faza G 0 . Decizia unei celule G 0 de a reintra n ciclul celular sau a celulelor ciclice dea iei din circuit se produce n ultima parte a fazei G 1 .
b) faza S - (S = sintez)
-

se dubleaz cantitatea de ADN, cromosomii devenind bicromatidici. La sfritul

mitozei i n G 1 cromosomii sunt monocromatidici.

c) faza postsintetic G 2
-

nu se sintetizeaz ADN, dar se asigur condiiile pentru formarea aparatului de

diviziune a celulei i se acumuleaz substane cu rol energetic necesare pentru
realizarea mitozei.
Durata ciclului celular variaz la diferite tipuri de celule eucariote. Astfel

drojdiile se pot divide la aproximativ 120 min. Cele mai multe celule vegetale i animale se
divid la 10-12 ore. La mamifere, dac se atribuie 24 ore unui ciclu celular, atunci mitoza
dureaz 1 or, faza G 1 circa 10 ore, faza S pn la 9 ore, iar faza G 2 aproximativ 4 ore.

Fig.2. Reprezentarea schematic a

ciclului celular (dup Watson i col.,
2004)

Diviziunea celular - Mitoza

Mitoza reprezint procesul de diviziune a nucleului celulelor somatice, care
asigur ca cele dou celule fiice s primeasc fiecare cte un complement cromozomal
identic cu cel al celulei mam.
Mitoza este alctuit din patru etape: profaza, metafaza, anafaza i telofaza (fig.
3.).

161

Fig.3. Aspect microscopic al fazelor diviziunii mitotice la Allium cepa (foto stnga) i la
Bellevalia romana (foto dreapta)
Parcurgerea acestor etape permite celulei iniiale s se divid n dou celule fiice, care
au fiecare acelai numr de cromosomi monocromatidici, egal cu numrul de cromosomi
bicromatidici ai celulei mam.
n esen, acest proces este la fel la toate organismele eucariote. Fiecare cromosom,
care la nceputul diviziunii nucleului are dou cromatide, se divide n dou jumti
identice, care se separ una de alta i sunt distribuite n nucleele celor dou celule fiice.

162

nainte de-a intra n faza distributiva a ciclului celular (mitoza) cromosomii sunt despiralizai,
decondensai i nu pot fi observai la microscopul optic.
Diviziunea celular de la majoritatea animalelor i la unele plante (alge, ciuperci,
briofite, pteridofite i gimnosperme inferioare) se desfoar datorit fusului mitotic, a
crui origine este n principal centriolar.
Mitoza (kariokineza) cuprinde urmtoarele faze: profaza, metafaza, anafaza i
telofaza (fig. 3.).
1. PROFAZA. n timpul acestei faze, cu excepia unuia sau mai multor nucleoli,
nucleul prezint un aspect difuz, granulat. La nceputul profazei cromozomii ncep s se
condenseze, avnd forma unor filamente subiri, vizibile n nucleu. n timp ce profaza
avanseaz, cromozomii devin mai scuri i mai groi ca urmare a spiralizrii lor. n profaza
trzie, au loc urmtoarele trei fenomene:
dispar nucleolii;
membrana nuclear de dezintegreaz;
apare fusul de diviziune, n urma migrrii spre poli a centriolilor i formrii fibrelor.
2. METAFAZA. Dup ce cromozomii bicromatidici se ataeaz la fibrele fusului de
diviziune cu ajutorul kinetocorului, ei migreaz spre centrul celulei, distribuindu-se n planul
ecuatorial al fusului mitotic, formnd astfel placa metafazic. n metafaz, cromozomii
prezint un maxim de condensare.
3. ANAFAZA. ncepe separarea cromatidelor surori prin clivarea longitudinal a
centromerilor i deplasarea lor spre polii opui ai fusului de diviziune. Cromozomii devin
astfel monocromatidici.
4. TELOFAZA. Cromozomii monocromatidici ajung la polii opui ai fusului de
diviziune. Membrana nuclear se reface n jurul fiecrui grup de cromozomi. Fusul de
diviziune dispare, nucleolii se reorganizeaz i cromozomii se despiralizeaz. Treptat, cele
dou nuclee rezultate capt aspectul caracteristic din interfaz i celula se divide
(citokineza).
CITOKINEZA. n zona ecuatorial a celulei, n locul fostei plci metafazice, apare
un perete despritor numit fragmoplast, de natur proteic, astfel citoplasma i organitele
celulare se repartizeaz n mod egal n cele dou celule fiice.
Citokineza marcheaz nceputul interfazei unui nou ciclu celular.

163

Fig. 4.Reprezentarea schematic a diviziunii mitotice

Rolul mitozei: asigura cresterea si dezvoltarea organismului, asigura regenerarea

celulelor, a tesuturilor si organelor; inlocuirea tesuturilor distruse sau
imbatranite.
Rezulta 2 celule noi identice cu celula parentala-asigura un nr. constant de
cromozomi, deci este responsabila de constanta materialului ereditar de la celula
mama la celulele fiice. Celulele rezultate sunt diploide (2n)

MEIOZA
Meioza (gr. meion = a njumti), numit i diviziune reducional, reprezint
diviziunea celulelor germinale sau sexuale (diploide, 2n) n urma creia se formeaz
gameii (haploizi, n) (fig.1).

Fig.1. Meioza la antere de Allium ursinum ( 2n = 14), aspect microscopic

Metafaza II (foto stnga) i Anafaza II (foto dreapta)
164

Meioza const din dou diviziuni nucleare succesive:

-

una reducional (meioza I sau primar) i una ecuaional (meioza II sau

secundar).

n meioza I (heterotipic) dintr-o celul diploid, care are dou garnituri de

cromozomi, una de origine matern, cealalt de origine patern, se formeaz dou celule cu
nuclei haploizi.
Meioza II (homotipic) este asemntoare cu mitoza obinuit, dintr-o celul
haploid rezult dou celule haploide. n concluzie, de la o celul diploid se obin patru
celule hapoide, gameii.
Meioza I (reducional) cuprinde urmtoarele faze:
1. PROFAZA I este o faz care dureaz mai multe zile n majoritatea organismelor
superioare i se mparte n urmtoarele subfaze:
1.1 Leptonem (gr. leptos = subire). Nucleul celulei are un numr dublu de
cromozomi (2n). Cromozomii apar sub form de filamente subiri, fiecare fiind format din
dou cromatide, deci sunt bicromatidici. De-a lungul filamentelor pot fi observate
cromomerele.
1.2 Zigonem (gr. zygon = jug). Cromozomii omologi, unul matern i altul patern,
ncep s se uneasc din loc n loc de-a lungul cromatidelor nesurori, formndu-se perechi de
omologi numii bivaleni. Fiecare bivalent conine patru cromatide. Bivalenii sunt ataai de
membrana nuclear prin intermediul telomerelor cromozomilor omologi.
1.3 Pachinem (gr. pachyns = gros). Procesul de mperechere a cromozomilor omologi
se realizeaz cu ajutorul complexului sinaptinemal (gr. synapto = unire). Legtura dintre
cromozomii bivaleni devine tot mai strns, cromatidele nesurori se unesc cromomer la
cromomer, sinapsa fiind complet. Datorit sinapsei numrul de cromozomi este egal cu
numrul haploid. Cromozomii unii n perechi se scurteaz i se ngroa. Nucleolii sunt
vizibili. n acest stadiu se realizeaz procesul de recombinare genetic intracromozomal crossing over.
1.4 Diplonem (gr. diplos = dublu). Bivalenii unii prin sinaps ncep s se despart
rmnnd unii doar la nivelul unor puncte de contact numite chiasme. Acestea reprezint
baza citologic a fenomenului de schimb reciproc de segmente cromatidice - crossing over.
1.5 Diachinez (gr. dia = divergent). Cromozomii se condenseaz i se scurteaz
puternic. Cromozomii bivaleni rmn unii printr-una sau dou chiasme pn n anafaza I la
nivelul cromatidelor nesurori i prin centromer la nivelul cromatidelor surori. Cromozomii
165

bivaleni mici pot lua o form sferic, iar cei mari n funcie de numrul chiasmelor, a poziiei
acestora i a centromerului pot avea forme de cruce sau baghet. Nucleolii se dezorganizeaz
i se iniiaz formarea fusului de diviziune. Membrana nuclear se dezorganizeaz,
cromozomii desprinzndu-se de ea.
2. METAFAZA I. Cromozomii bivaleni prezint un maxim de condensare i
scurtare. Acetia se ataeaz de fibrele fusului de diviziune cu ajutorul kinetocorilor i se
plaseaz n zona ecuatorial a celulei, formnd placa metafazic. Fiecare bivalent are doi
centromeri funcionali nedivizai orientai spre polii opui ai celulei. Orientarea lor nu ine
cont de originea lor matern sau patern.
3. ANAFAZA I. Cromozomii omologi ncep s se ndeprteze unul de altul,
cromatidele nesurori se rup la nivelul chiasmelor, realizndu-se schimbul de segmente
cromatidice.
Cromozomii omologi separai, formai din cte dou cromatide, alunec pe fibrele
fusului de diviziune spre cei doi poli opui ai celulei. Cromatidele surori sunt unite prin
centromer, care nu s-a divizat. Fiecare nucleu n anafaza I este format dintr-un numr haploid
de cromozomi.
4. TELOFAZA I. n jurul celor dou grupuri de cromozomi (n) ajuni la capetele
fusului de diviziune se formeaz membrana nuclear, cele dou celulele fiice formnd o
diad.
La unele specii cromozomii trec direct de la telofaza I la profaza II fr s se
decondenseze. La alte specii ntre cele dou diviziuni meiotice exist o faz scurt numit
interkinez, n care ns nu are loc replicarea cromozomilor.
Meioza II (ecuaional) cuprinde urmtoarele faze:
1. PROFAZA II. Este scurt i greu de observat la microscop.
2. METAFAZA II. Membrana nuclear se dezorganizeaz. Se formeaz fusul de
diviziune. Cromozomii bicromatidici se ataeaz la fibrele fusului de diviziune i se dispun n
planul ecuatorial al celulei.
3. ANAFAZA II. Centromerii fiecrui cromozom se cliveaz longitudinal, astfel
cromatidele surori se separ i cromozomii unicromatidici migreaz spre polii opui ai
celulei.
4. TELOFAZA II. n jurul fiecrui set de cromozomi cu numr haploid se formeaz
membrana nuclear. Se formeaz 4 celule - tetrada - cu set haploid de cromozomi
unicromatidici.
166

n cadrul primei diviziuni meiotice se desfoar cele mai importante evenimente

din punct de vedere genetic: 1.sinapsa cromosomal, 2.recombinarea genetic
intracromosomal (crossing over), 3.disjuncia independent a perechilor de cromosomi
(recombinarea genetic intercromosomal) i 4.reducerea la jumtate a numrului de
cromosomi. Primele dou au loc n profaza I, al treilea are loc la trecerea din metafaza I
n anafaza I, iar ultimul dup prima diviziune meiotic.

Meioza produce celule fiice cu 1/2 din numarul de cromozomi al parintilor. (de la 2n
la 1n).

Celulele fiice rezultate in urma meiozei nu sunt identice dpdv genetic

In meioza, diviziunea celulara are loc de 2x iar replicarea materialului genetic doar

odata.

ASEMANARI SI DIFERENTE INTRE MITOZA SI MEIOZA

Ambele reprezinta procesul de diviziune nucleara

Ambele implica sinteza materialului genetic

Atat in mitoza cat si in meioza, in faza initiala, nucleul, nucleolii si membrana

nucleara se dezintegreaza si apare fusul de diviziune.

167

. Comparaie ntre diviziunea mitotic i cea meiotic

168

Curs 14. EREDITATEA MENDELIAN

LEGILE SEGREGRII
Ereditatea mendelian (genetica mendelian sau Mendelism) reprezint un set de
principii sau legi legate de transmiterea ereditar a caracterelor de la parinti la descendeni.
Dei hibridarea a fost practicata din cele mai vechi timpuri (odat cu introducerea n
cultur a plantelor i cu practica de cretere a animalelor) primul om de tiin care a
intreprins un studiu sistematic asupra comportrii caracterelor ereditare la genitori i la
generaiile obinute prin ncruciare a fost Gregor Johann Mendel (1822-1884), considerat
fondatorul geneticii ca tiin.

Gregor Johann Mendel (1822-1884)

Gregor Mendel a studiat tiinele naturii la Viena, fiind apoi profesor de tiine ale
naturii i matematic la liceul din Brno (Cehia). Totodat el a fost clugr augustin la
mnstirea din Brno, n grdina creia, ntre anii 1856-1865, el a realizat celebrele sale
experiene de hibridare.
n cercetrile sale, G. Mendel a folosit mai mult mazrea (Pisum sativum), plant
autogam care prezint caractere distincte de la o varietate la alta.
Caracterele luate n studiu au fost urmtoarele (fig. 1):
talia plantelor (nalt sau pitic),
culoarea pstilor nemature (galben sau verde),
culoarea cotiledoanelor (verde sau galben),
suprafaa boabelor (neted sau zbrcit),
culoarea boabelor (galben sau verde),
poziia florilor (axial sau terminal) .a.m.d.

169

Figura 1. Caracterele studiate de Mendel la mazare

Aceste perechi de caractere, au fost numite mai trziu alelomorfe (1902 de W.
Bateson i E.R. Saunders). Determinanii ereditari au fost denumii de Mendel factori
ereditari (indicai ulterior prin noiunea de gen).
Iniial, G. Mendel a nceput s lucreze cu un numr de 34 de soiuri de mazre pe care
le-a cultivat timp de 2 ani pentru a verifica dac nsuirile lor se menin neschimbate. Dintre
acestea, el a ales 22 de soiuri ce s-au dovedit a avea caractere distincte i constante.
n 1865 prezint rezultatele experienelor sale i concluziile la care a ajuns, la 2
conferine ale Societii de Istorie Natural din Brno, iar n 1866 aceste comunicri au fost
publicate ntr-o lucrare numit Versuche uber Pflanzenhybriden (Cercetri privind
hibridarea plantelor). Rezultatele cercetrilor lui G. Mendel nu au produs senzaie n lumea
tiinific de atunci, neputndu-se sesiza importana descoperirilor sale. Astfel , concluziile lui
Mendel au rmas necunoscute pn n 1900, cnd au fost redescoperite de ctre Hugo de
Vries, Carl Correns i Erich von Tschermak i ridicate la rangul de legi ale ereditii.

170

LEGILE MENDELIENE ALE EREDITII

Pe baza utilizrii metodei hibridologice la mazre, G. Mendel a formulat, n anul
1865, trei principii eseniale considerate ca fiind legi ale ereditii.
Cele 3 legi descoperite de Mendel sunt:
1. LEGEA UNIFORMITII HIBRIZILOR DIN PRIMA GENERAIE (F1);
Aceat lege a fost enunat astfel: atunci cnd se ncrucieaz genitori homozigoi
ce difer prin caractere perechi contrastante, de exemplu AA x aa sau AABB x aabb
etc., n prima generaie hibrid (F1) rezult indivizi uniformi din punct de vedere
fenotipic. n F1, hibrizii Aa sau AaBb manifest numai caracterul controlat de
factorul ereditar dominant (A i respectiv A i B), n timp ce caracterul recesiv (a,
respectiv a i b) nu se manifest.
2. LEGEA

SEGREGRII

SAU

DISJUNCIEI

FACTORILOR

EREDITARI

(GENELOR) N GENERAIA A DOUA HIBRID (F2) conform creia caracterele

recesive, care sunt mascate la hibrizii din F1, reapar n F2 ntr-o proporie de
dominant la recesiv.
3. LEGEA COMBINRII LIBERE A PERECHILOR DE FACTORI EREDITARI
SAU A SEGREGRII INDEPENDENTE A PERECHILOR DE CARACTERE: se
refer la apariia n urma ncrucirii di- i polihibride, a unor combinaii noi de
factori ereditari la descendeni.

MONOHIBRIDAREA I FENOMENUL SEGREGRII

Monohibridarea reprezint ncruciarea dintre organisme care se deosebesc printr-o
singur pereche de caractere.
ntr-o prim serie de experiene, Mendel a urmrit modul de transmitere la
descendeni a perechii de caractere port nalt port pitic, iar ulterior a examinat
comportarea perechii de caractere bob neted- bob zbrcit. n acest din urm caz s-a

171

dovedit c aspectul de bob neted se datoreaz unui coninut bogat n amidon, n timp ce
caracterul bob zbrcit este asociat cu un coninut bogat n dextrin.
Pentru ncruciare, ntr-o prim variant, polenul colectat de la o plant cu bobul
neted a fost folosit pentru polenizarea unei plante cu bobul zbrcit, iar ntr-o alt variant
cele dou tipuri paternale au fost inversate (figura).

Polenizare artificiala
n ambele variante, descendenii obinui n prima generaie hibrid F1 au manifestat
doar caracterul bob neted. Mendel a numit acest caracter dominant, iar caracterul bob
zbrcit, care nu a aprut n F1, a fost denumit caracter recesiv. Faptul c ambele variante
experimentale au fost identice, a dovedit c nsuirile urmrite nu sunt dependente de
sexul organismului (Fig. 1).
Parinti

AA x

Gameti

Generatia F1

aa

Aa

Aa

n urma acestui experiment (repetat i pentru alte tipuri de caractere) a fost emis
prima lege: principiul uniformitii hibrizilor din F1.
Pentru a obine cea de-a 2-a generaie, Mendel a cultivat boabele plantelor din prima
generaie (F1) i a lsat plantele hibride s se autopolenizeze (mazrea este o plant
autogam). A obinut astfel generaia a 2-a (F2) n care plantele au prezentat (n aceeai
pstaie) att boabe netede ct i boabe zbrcite.
172

Numrnd boabele plantelor din F2, Mendel a constatat c 5474 dintre acestea erau
netede i 1850 erau zbrcite, raportul dintre ele fiind 2,96/1 (neted/zbrcit), prin rotunjire
3 dominant / 1 recesiv.
Apariia n F2 a ambelor caractere, bob neted i bob zbrcit, a primit denumirea de
segregare sau disjuncie factorilor ereditari n a 2-a generaie hibrid F2 (figura)

Rezultatele experimentelor de monohibridare

G. Mendel explic astfel segregarea perechilor de caractere:
- Prinii P sunt homozigoi, fiecare pentru caracteristica studiat (neted respectiv
zbrcit);
- n F1 se formeaz un hibrid care are o structur heterozoigot. Toi indivizii sunt
la fel, deoarece caracteristica dominant acoper n manifestare pe cea recesiv.
- Hibridul va produce 2 feluri de gamei, corespunztori celor 2 caracteristici.
Aceti gamei sunt puri, deoarece caracteristicile dictate de ei se desfac, se izoleaz iar
prin combinarea lor produc n F2 trei genotipuri.
Premizele de la care a pornit Mendel n explicarea rezultatelor experienelor de
monohibridare au fost urmtoarele:
-

factorii ereditari se afl n nucleul celulelor: n celulele somatice ei se afl sub

form de pereche, iar n gamei, sub form simpl. Aceast idee i-a fost sugerat
173

de faptul c orice organism cu reproducere sexuat provine din doi prini ce

contribuie n mod egal la obinerea descendentului;
-

n cursul formrii gameilor prin diviziune meiotic, factorii ereditari din

pereche se separ (segreg), astfel c fiecare gamet motenete doar unul
dintre cei doi factori ereditari ai perechii respective (A sau a). Aceast ipotez
s-a dovedit adevrat cnd mai trziu, s-a studiat comportamentul cromozomilor
n meioz;

n procesul de fecundare are loc unirea pe baz de probabilitate a gameilor de

sex opus, ceea ce nseamn c un gamet de un anumit sex are anse egale de a
se uni cu oricare gamet de sex opus.

Comparnd comportamentul cromosomilor n meioz i comportamentul factorilor

ereditari mendelieni, se constat existena unei asemnri clare:
-

cromosomii exist sub form de perechi, exact ca i factorii ereditari;

cromosomii din perechi sunt cromosomi omologi ce provin unul de la mam

cellalt de la tat, la fel ca i factorii ereditari;

factorii ereditari se afl sub form de pereche: cnd n pereche exist

acelai tip de factor ereditar, fie dominant fie recesiv, organismul este
homozigot, iar cnd n pereche exist ambele tipuri de factori ereditari,
organismul este heterozigot.

Segregarea n F2, n raport de A la a este deci consecina segregrii factorilor

ereditari n cursul formrii gameilor prin meioz, iar pe de alt parte a unirii gameilor de
sex opus pe baz de probabilitate.
Genitorul matern de tip Aa din F1 produce , n proporie egal, dou tipuri de
gamei: 50 % conin factorul ereditar dominant A i 50 % l conin pe cel recesiv a.
n mod similar genitorul patern din F1, de tip Aa , produce aceleai categorii de
gamei cu aceleai categorii de factori ereditari. Gameii rezultai de la genitorii din F1 se
unesc pe baz de probabilitate n procesul de fecundaie rezultnd plantele generaiei F2.
Aranjamentul gameilor de sexe diferite i combinaiile posibile ale acestora n F2, pot
fi reprezentate sub forma unei table de ah alctuita de R.C. Punnett:

174

Gamei

50 % A

50 % a

50 % A

25 % AA

25 % Aa

50 % a

25 % Aa

25 % aa

Aa cum se poate remarca din figura si tabelul de mai sus, raportul de segregare n
F2 n funcie de genotip este de 25 % A: 50 % Aa : 25 % aa (1:2:1), iar din punct de
vedere fenotipic raportul de segregare n F2 este de 75 % caracter dominant : 25 %
caracter recesiv (3:1).
Astfel, dup mai bine de 2 milenii timp n care a persistat teoria motenirii directe a
caracterelor, Mendel impune ideea transmiterii indirecte a caracterelor prin
intermediul unor factori ereditari de natur corpuscular.
Mai trziu, s-au fcut monohibridri similare i la animale: psri, oareci etc.
rezultnd n F1 indivizi uniformi iar n F2 o segregare fenotipic n raport de 3:1.
Tipul de ereditate descris de ctre Mendel n cazul experimentelor efectuate pe
mazre i care respect principiile enunate mai sus a primit denumirea de ereditate
de tip Pisum, fiind caracteristic tuturor categoriilor de dominan complet n care
un caracter se manifest ca total dominant iar cellalt din pereche ca total recesiv.

DIHIBRIDAREA SI SEGREGAREA INDEPENDENTA A

PERECHILOR DE CARACTERE
Pe lng experimentele n care a urmrit modul de transmitere a unei singure perechi
de caractere, Mendel a efectuat i o serie de alte teste n care a examinat modul de
transmitere simultan a 2 perechi de caractere contrastante: perechea de caractere
care se refer la forma bobului (neted-zbrcit) i la culoarea sa (galben - verde). Astfel,
Mendel a folosit pentru ncruciare plante homozigote dintre care unele manifestau
ambele caractere dominante, bob neted i galben (homozigote dominante AABB), iar
celelalte ambele caractere recesive, bob zbrcit i verde (homozigot recesive aabb),
plantele respective fiind pure din punct de vedere genetic.
Ca urmare a ncrucirii organismelor de tipul menionat (dihibridare), n F1 a
rezultat o populaie de plante hibride, 100% heterozigote pentru ambele tipuri de factori
ereditari (AaBb), care manifestau fenotipic doar caracterele dominante: boabe netede
i galbene. Legea uniformitii hibrizilor din F1 este astfel valabil i n cazul
dihibridrii.
Prin autopolenizarea plantelor dublu- heterozigote din F1 (AaBb), se obine
generaia F2 la care se manifest fenomenul de segregare.

175

Prin comparaie cu monohibridarea, n cazul dihibridrii n F2, situaia este mai

complex: pe lng plante cu caractere asemntoare genitorilor primei generaii F1
(galben-neted i verde-zbrcit), apar 2 categorii de plante care prezint noi combinaii
de caractere: bob neted i verde i respectiv bob zbrcit i galben n proporiile
urmtoare:

9/16 boabe netede i galbene

3/16 boabe netede i verzi

3/16 boabe zbrcite i galbene

1/16 boabe zbrcite i verzi

Acest raport de segregare de 9:3:3:1 se explic prin faptul c hibrizii din prima
generaie F1, dublu heterozigoi (AaBb) produc 4 categorii de gamei femeli i 4 categorii
de gamei masculi. Din unirea probabilistic a gameilor respectivi rezult n F2, 16
combinaii diferite de factori ereditari:
Gamei /

AB

Ab

aB

ab

AB

AABB

AABb

AaBB

AaBb

neted-galben

neted-galben

neted-galben

neted-galben

AABb

Aabb

AaBb

Aabb

neted-galben

neted-verde

neted-galben

neted-verde

AaBB

AaBb

aaBB

aaBb

neted-galben

neted-galben

zbrcit-galben

zbrcit-galben

AaBb

Aabb

aaBb

aabb

neted-galben

neted-verde

zbrcit-galben

zbrcit-verde

Ab

Ab

ab

Aceste noi combinaii se produc prin faptul c la formarea gameilor, n cazul

organismelor dublu heterozigote din F1, pe lng formele nerecombinate AB i ab, apar i
gamei recombinai de tipul Ab i aB, ceea ce nseamn c perechea de factori ereditari ce
determin forma bobului Aa, segreg independent de perechea de factori ce determin
culoarea bobului Bb.
In cazul experimentelor de monohibridare, probabilitatea exprimrii n fenotip a
factorului ereditar dominant A este de , iar a celui recesiv a este de .

176

In mod similar, n cazul dihibridrii, se ntlnesc aceleai probabiliti i n cazul

perechii de factori ereditari Bb: pentru caracterul dominant B probabilitatea este de , iar a
celui recesiv b este de .
Astfel raportul de segregare de 9/3/3/1 aprut n F2 poate fi dedus aplicnd regula
probabilitii care spune c probabilitatea apariiei concomitente a 2 evenimente
independente este egal cu produsul probabilitii apariiei lor separate. Aplicnd aceast
regul n cazul experimentelor de dihibridare se obin urmtoarele rezultate:

Probabilitatea apariiei simultane n fenotip a factorilor dominani A i B

este x = 9/16

Probabilitatea apariiei simultane n fenotip a factorului dominant A i a

celui recesiv b este
x = 3/16

Probabilitatea apariiei simultane n fenotip a factorului dominant B i a

celui recesiv a este
x = 3/16

Probabilitatea apariiei simultane n fenotip a factorilor recesivi a i b este

x = 1/16.

Pe baza rezultatelor obinute n cazul dihibridrii i a abordrii statistice, Mendel a

enunat cea de-a 3 a lege a ereditii: legea segregrii independente a perechilor de
factori ereditari, respectiv a perechilor de caractere.
La nivel celular, comportamentul ereditar mendelian are la baz intervenia n
segregare a fusului de diviziune celular, acesta fiind suportul material, fizic al fenomenului
de segregare care face posibil separarea cromosomilor din perechile meiotice de cromosomi
ntre cei 2 gamei ce se formeaz.

Aplicaii practice ale monohibridrii i dihibridrii

Din experienele de monohibridare s-a constatat c n F1 toate organismele
obinute n urma ncrucirii sunt heterozigote.
Acest fapt determin la unele plante de cultur (porumb, floarea soarelui)
manifestarea fenomenului de heterozis, adic o vigoare sporit a organismelor heterozigote
prin care i depesc genitorii n productivitate i rezisten la diferii factori de mediu.
Dar prin autopolenizare are loc segregarea prin care se reduce cu 50 % procentul
de organisme heterozigote pentru fiecare generaie. Astfel, dup 7-8 generaii de
177

autopolenizare o populaie hibrid revine la liniile homozigote din care a provenit prin
ncruciare.
Reducerea heterozigoiei este nsoit i de reducerea heterozisului. De aceea n
procesul de ameliorare, amelioratorul trebuie s cunoasc determinismul genetic al
caracterelor, constituia genetic a liniilor i soiurilor cu care lucreaz precum i legile
ereditii.
Dihibridarea prezint i ea aspecte interesante legate de ameliorare deoarece se
poate realiza mbinarea ntr-un singur soi sau linie a factorilor ereditari ce determin
caractere utile provenite de la mai multe linii homozigote.
Aceasta este recombinarea genetic realizat prin hibridare n urma segregrii
independente a perechilor de factori ereditari plasai pe perechi diferite de cromosomi.

178

Curs 15. INTERACIUNI GENICE

Experienele realizate de cercetatori, asupra unor organisme variate, pentru elucidarea
determinismului genetic al diferitelor caractere ereditare, au evideniat o abatere
semnificativ de la rapoartele de segregare obinute la mazare. Cauza principal a
acestor variaii este aceea c respectivele caractere nu sunt trsturi simple, de tip mendelian,
ci mult mai complexe determinate uneori de interaciunea mai multor gene.

Interaciunile alelice
Analizele genetice efectuate la diferite specii de eucariote, au evideniat faptul c o
serie de insuiri fenotipice sunt determinate de interaciunea dintre dou sau mai multe gene
alele.
Genele alele sunt genele care ocup acelai locus pe cromosomii omologi, afecteaz
acelasi caracter i determin apariia de nsuiri contrastante (figura 1).

Fig. 1. Gene alele

De exemplu, genele ce determin caracterul bob neted respectiv bob zbrcit de la
mazare (sau celelalte insuiri examinate de Mendel) sunt gene alele, ntre care interaciunea
este de tip dominan complet iar raportul de segregare fenotipic n F2 este de 3/1.

179

In cazul altor gene alele, interaciunea este de un alt tip, astfel c i raportul de
segregare fenotipic difer de cel mendelian.
1. Dominana

incomplet sau semidominana- este fenomenul de

interaciune ntre gene alele care determin formele heterozigote s prezinte un

fenotip intermediar ntre formele homozigote parentale.

Ex. 1. In anul 1912, Correns a realizat o serie de ncruciri la planta Mirabilis

jalapa. El a observat c prin ncruciarea unor plante homozigote cu flori roii cu plante
homozigote cu flori albe, n F1 se obin plante hibride cu flori roz.
Prin ncruciarea plantelor cu flori roz, se obine generaia F2, n care s-a observat o
segregare fenotipic n raport de: 1:2:1
25 % plante cu flori roii, 50 % cu flori roz si 25 % cu flori albe.
Acest fenomen a primit denumirea de semidominan sau dominan incomplet.
Dac se noteaz cu Sr alela care determin culoarea roie i cu Sa alela care determin
culoarea alb, experiena lui Correns poate fi redat astfel:

Parinii

180

Sr Sr x Sa Sa

SrSa

F1- plante cu flori roz

F2

S rS r
flori roii
25 %
1

SrSa
flori roz
50 %
:

SaSa
flori albe
25 %
:

In acest caz se constat c raportul de segregare fenotipic este de 1/2/1 , i corespunde

cu cel genotipic.
Ex. 2. Un alt caz de semidominan a fost descris la rasa de gini de Andaluzia, al
cror penaj este de culoare gri-albstrui.
Prin ncruciarea ntre indivizi cu penaj de culoare neagr, homozigoi (CBCB), cu
indivizi homozigoi cu penaj alb (CWCW), n generaia F1 heterozigot, toate psrile au
prezentat penaj de culoare gri-albstrui (CBCW) (gini de Andaluzia)-

Din ncruciarea acestora, n F2 reapar fenotipurile parentale n proporii egale de

cte 25 % precum i fenotipul intermediar n proporie de 50 %, raportul fenotipic de
segregare fiind de 1/2/1.
Ex. 3. La porumb, s-a observat c n determinismul genetic al culorii boabelor sunt
implicate gene alele semidominante. Din ncruciarea unei varieti de porumb cu boabe
galbene cu o varietate cu boabe de culoare albastr, n F1 rezult hibrizi de culoare
violet, iar n F2 reapar fenotipurile parentale, raportul de segregare fiind de 1/2/1.
181

Acest tip de ereditate ntlnit la porumb a fost denumit ereditate de tip Zea, i este
specific pentru fenomenul de dominan incomplet, deosebindu-se de ereditatea de tip
Pisum ce corespunde fenomenului de dominan complet.
Interaciunea alelic de tip dominan incomplet a fost evideniat i la om n cazul
determinismului genetic al formei prului sau a vocii.

Explicaia molecular a fenomenului de dominant incomplet este

urmatoarea:
n cazul organismelor homozigote ce conin alelele care codific culoarea
nchis, se exprim ambele gene astfel c rezult o cantitate dubl de produs
codificat, iar fenotipul este cel aparent dominant (culoarea roie a florilor de
Mirabilis sau penajul negru de la gini).
In cazul homozigoilor de culoare alb, se consider c genele mutante alele nu
se exprim, astfel c nu se sintetizeaz pigment sau produsul codificat de
acestea.
In cazul heterozigoilor n care exist cte un exemplar din fiecare gen alel,
se exprim doar alela normal fapt ce determin sinteza unei cantiti reduse
de pigment, ceea ce asigur apariia unui fenotip intermediar.

2.Codominana
Reprezint un alt fenomen de interaciune ntre genele alele, care determin apariia
la indivizii heterozigoi a unui fenotip nou, comparativ cu cel al genitorilor homozigoi.
Exemplul clasic de ereditate de tip codominan este oferit de grupele sanguine la om.
Astfel, n determinarea celor 4 grupe sanguine la om (sistemul ABO, descris n anul 1900
de Landsteiner) intervin 3 gene alele notate LA, LB i l :

Grupa sanguin A este determinat de genotipurile LALA i LAl;

Grupa sanguin B este determinat de genotipurile LBLB i LBl;

Grupa sanguin AB este determinat exclusiv de genotipul LALB;

Grupa sanguin O este determinat de genotipul ll.

Dup cum se poate remarca, genele alele LA i LB sunt dominante fa de gena l, iar
mpreun, n genotipurile de tip LALB, ele sunt codominante una fa de alta, din
interaciunea lor rezultnd un fenotip nou- grupa sanguin AB.

182

Grupa de sange (Fenotipul)

Genotipul

LALA sau LAl

LBLB sau LBl

AB

LALB

ll

In 1927, a fost descris sistemul MN de grupe sanguine la om, n care se manifest

acelai fenomen de codominan cu deosebirea c, fa de sistemul ABO, nu exist nici o
alel recesiv. Astfel, genotipurile vor fi MM, MN, NN, iar grupele de sange vor fi M, N i
MN.
Ca i n cazul sistemului ABO, alelele M i N determin producerea de antigene
specifice localizate la suprafaa hematiilor.
Cunoaterea grupelor sanguine la om are o importan deosebit legat de
transfuziile de snge. Uneori nu este suficient s se cunoasc doar grupa sanguin fiind
necesare informaii suplimentare despre particularitile hematiilor, aa cum este cazul
factorului Rh.
De asemenea, analiza modului de transmitere a tipului de grup sanguin reprezint o
modalitate eficient de stabilire a paternitii.

3. Supradominana
Prin studierea comportamentului hibrizilor din F1, rezultai prin diferite ncruciri
ntre organisme homozigote, a evidentiat faptul ca deseori, insusirile heterozigotilor
depasesc atat insusirile genitorilor dominanti cat si insusirile celor recesivi.
In acest caz este vorba despre supradominanta, care sta la baza fenomenului de
heterozis- in care hibrizii sunt mai vigurosi, mai productivi sau mai rezistenti la factorii de
stres (factori de mediu, daunatori etc)

183

Fenomenul are o semnificatie practica deosebita atunci cand se manifesta la specii

de cultura importante din punct de vedere economic.
Fenomenul de supradominanta a fost observat si la Drosophila melanogaster, in
cazul interactiunii a 2 gene alele ce determina culoarea ochilor:
gena ce determina culoarea rosie caramizie a ochilor este dominanta, iar cea ce
determina culoarea alba este recesiva.
La heterozigoti (w+w -) se constata o crestere semnificativa a cantitatii de pigment
fata de homozigotii dominanti.
Fenomenul de supradominanta este greu de studiat deoarece in aparitia sa sunt
implicate mai multe gene dificil de identificat.

4. Genele letale sunt acele gene care determin moartea individului nainte de
maturitate, n perioada prenatal sau postnatal.
O alel letal dominant poate determina moartea individului cnd se gsete in
stare homozigot (LL) i, uneori chiar n stare heterozigot (Ll); ea se elimin din
populaie n momentul n care apare n constituia unui individ.
O alel letal recesiv determin moartea individului numai n stare homozigot
(ll).
Indivizii heterozigoi sunt n aparen normali sau pot manifesta unele
deficiene care ns nu le afecteaz viabilitatea.

184

Exemplu: studiul unor oareci galbeni a artat c acetia sunt heterozigoi

deoarece la ncruciarea lor rezult o descenden neuniform alctuit din oareci galbeni
i oareci de alt culoare, n proporie de 2 oareci galbeni : 1 oarece de alt culoare .
Culoarea blnii la oareci
Deoarece segreg, oarecii galbeni homozigoi lipsesc pentru c
ei mor nc din stadiul embrionar.

5. Polialelia (alelia multipla)

Existenta genelor sub forma de pereche, adica de alele, este caracteristica
organismelor diploide cu reproducere sexuata, la care una dintre alele provine de la
mama iar cealalta de la tata. Efectul alelelor este contrastant, ele determinand
fenotipuri diferite sau caractere biochimice distincte. Asemenea alele ce determina
aparitia unor diferente foarte mici in expresia fenotipica a caracterelor au primit denumirea
de isoalele.
Modificarea genei de tip salbatic (normale) ce determina aparitia alelei se poate
produce succesiv in diferite zone ale genei astfel ca, in urma evenimentelor mutationale
apar mai multe gene alele ce pot fi notate . a 1 , a 2, a 3 , ..................., a n
Deoarece in cazul organismelor diploide pot exista simultan doar doua alele, cate
una pentru fiecare dintre cromosomii omologi din pereche, unii dintre indivizi vor avea
pe un cromosom gena normala A, iar pe celalalt cromosom alela a 1 ; alti indivizi vor
avea constitutia genetica de tip Aa 2 , altii a 1 a 2 sau a 2 a 2 etc. La nivel populational alelele
A, a 1 , a 2, a 3 , ..................., a n , formeaza o serie polialela care determina o serie alelomorfa
de fenotipuri, in care fenotipul salbatic este dominant fata de fenotipurile mutante,
conditionate de alele recesive ale seriei polialele.

Exemple de polialelie
Un exemplu clasic de polialelie este intalnit la Drosophila melanogaster in ceea ce
priveste culoarea ochilor. Alela normala, de tip salbatic simbolizata cu w+, determina in
stare homozigota sau heterozigota culoarea rosie-caramizie a ochilor. Alela recesiva,
185

simbolizata prin w, determina in stare homozigota, ochi de culoare alba. Prin mutatii
succesive ale genei de tip salbatic, aparute in etape diferite si cu efecte variate, au aparut
alte alele, recesive fata de alela normala, dar dominante fata de cea pentru culoarea alba,
ele determinand aparitia unor nuante diferite ale ochilor.
Si la om exista o serie polialela implicata in culoarea ochilor, in care Eb este alela
dominanta:
Eb (ochi negri)

Egr (caprui verzi)

Ebl (ochi albastri)

Un alt exemplu de serie polialela este legat de culoarea blanii la mamiferele

rozatoare. Astfel, la iepuri genele alele sunt C, cch, ch si ca. Tipul salbatic, numit si
agouti, este determinat de alela dominanta C.
In cazul altor culori ale blanii intervin alte combinatii de gene alele:

Tipul chinchila (blana de culoare gri) este determinat de genotipurile cch cch,
cch ch si cch ca;

Tipul himalaian (cu blana alba dar cu botul, urechile, coada si labele colorate)
este determinat de genotipurile ch ch sau ch ca;

Tipul albinos (blana alba) este determinat exclusiv de genotipul ca ca.

In acest caz ordinea dominantei in seria polialela este:

C

186

cch

ch

ca

Curs 16. INTERACIUNI NON-ALELICE

Modificarea raportului mendelian de segregare poate fi datorat nu numai
interaciunilor dintre genele alele ci i interaciunii dintre genele nealele. Acestea sunt
gene plasate fie n loci diferii, pe acelai cromosom, fie pe cromosomi diferii, neomologi,
ele afectnd acelai caracter.
Uneori, n urma interaciunii dintre genele nealele, se modific felurile fenotipurilor
nu ns i numarul acestora, astfel c, aparent, raportul de segregare nu se modific.

1. Pstrarea raportului de segregare i apariia unui fenotip nou

Unul dintre primele exemple prin care s-a constatat c dou perechi de gene nealele
interacioneaz pentru a determina un singur caracter, a fost adus de Bateson i Punnett,
care au studiat determinismul formei crestei la gini n care intervin perechile de gene
Rr i Pp :

Rasa Leghorn, prezint creasta simpl, caracter recesiv cu genotipul rrpp;

Rasa Brahmas, prezint creasta de tip mazare, caracter dominant asupra tipului
simplu, indivizii avnd genotipul rrPP;

Rasa Wyandotte, prezint creasta de tip trandafir, caracter deasemenea

dominant asupra tipului simplu, determinat de genotipul RRpp (Fig. 1, Tabelul
1).

Trandafir

Mazre

Simpl

Nuc
187

Figura 1. Rase de gaini

Tabelul 1
Rase de gini

Fenotip

Genotip

Wyandotte

Creast tip trandafir (caracter dominant fa de creasta simpl)

RRpp

Brahmas

Creast tip mazre (caracter dominant fa de creasta simpl)

rrPP

Leghorn

Creast simpl (caracter recesiv)

rrpp

Din ncrucirile ntre gini din rasele Brahmas x Leghorn, respectiv Wyandotte x
Leghorn rezult:
a) Brahmas

(mazre) (rrPP)

(simpl) (rrpp)

F1

F2

Leghorns

b) Wyandotte
trandafir (RRpp)

mazre (rrPp)

3 mazre (rrPp) : 1 simpl (rrpp)

3:1

Brahmas

mazre (rrPP)

Wyandotte
trandafir (RRpp)

nuc (RrPp)
9/16 nuc (RRPP)
3/16 mazre (rrPP)
3/16 trandafir (RRpp)
1/16 simpl (rrpp)

9:3:3:1

188

simpl (rrpp)

3 trandafir (Rrpp):1 simpl (rrpp)

Din ncrucirile ntre gini din rasele Brahmas i Wyandotte rezult:

F2

Leghorns

trandafir (Rrpp)

3:1

F1

Acest raport de segregare (9: 3: 3: 1) este tipic pentru o dihibridare, ns n acest caz
cele dou perechi de gene nu determin perechi diferite de gene ci un acelai caracterforma crestei.
In urma interaciunii dintre cele 2 gene nealele rezult un fenotip nou, iar din
interaciunea dintre o gen dominant i una recesiv apar alte 2 fenotipuri.
In acest caz, interaciunea dintre cele dou gene nealele nu modific raportul de
segregare ci determin apariia unui fenotip nou, diferit de cel al genitorilor.

2. Modificarea raportului de segregare

In determinismul culorii blnii la rozatoare intervine un numr mare de gene care
codific sinteza pigmenilor melaninici, puritatea culorilor, intensitatea acestora,
distibuia zonal a pigmentului n blana animalelor etc.
In acest caz este vorba despre un singur caracter care este determinat de interaciunea
mai multor gene nealele. Studiile efectuate asupra determinismului genetic al acestui
caracter (culoarea blnii la rozatoare), au permis identificarea mai multor perechi de gene
notate cu diferite simboluri:

Perechea de gene alele C, c determin prezena sau absena pigmentului n

blan. Constituia genetic CC sau Cc condiioneaz sinteza pigmentului : fie
melanina ce determin culoarea neagr sau brun-inchis a blnii, fie feomelanina,
pigmentul ce determin culoarea galben. Constituia genetic homozigot cc
condiioneaz absena total a pigmentului, n acest caz animalele fiind
albinotice ;

Perechea de gene A, a- determin combinaia de pigmeni n blana

roztoarelor : gena A asigur culoarea agouti de tip salbatic (culoare ce
rezulta din combinarea a 2 culori negru si galben sau negru si brun) care
permite camuflarea animalelor n condiii normale de mediu. Constituia
genetic de tip aa caracterizeaz animalele cu blana de o singur culoare (nonagouti) ;

perechea de gene B, b determin apariia culorii negre (constituia genetic

BB sau Bb) sau a celei brune (genotipul bb) ;

perechea de gene D,d este implicat n intensitatea culorii blnii : gena D

asigur o intensitate mai mare a culorii (n ambele combinaii DD sau Dd) n
189

timp ce gena d (exclusiv n stare homozigot , dd) determin diluarea culorii

generale ;

perechea de gene S, s condiioneaz distribuia regional a pigmentului n

blana animalului. Gena S determin o distribuie uniform, iar alela sa n
stare homozigot (ss) asigur apariia petelor de culoare.

Diversitatea culorii blnii la animalele rozatoare, dar i la alte tipuri de organisme, se

bazeaz pe realizarea unor combinaii diverse ale acestor gene sau chiar a altor gene ce pot
interveni n determinarea pigmentaiei. Incruciarea ntre animale cu fenotipuri diferite poate
duce la apariia unor descendeni cu aspect diferit datorit realizarii de combinaii variate
ntre genele nealele implicate n determinismul genetic al culorii blnii.
Uneori asemenea combinaii conduc la apariia, dup mai multe generaii, a unui
fenotip prezent la strmoi. Acest fenomen a fost denumit reversie sau atavism.

3. Complementaritatea genic
Este fenomenul prin care din interaciunea a 2 sau mai multe gene nealele rezult o
expresie fenotipic diferit de cea determinat de fiecare gen n parte.
In funcie de genele complementare (dominante sau recesive), complementaritatea
poate fi dominant sau recesiv.
Complementaritatea dominant
In acest caz exprimarea unui anumit caracter necesit prezena concomitent a 2 sau
mai multe gene dominante.
Ex. Bateson i Punnett au realizat o serie de experimente cu 2 varieti de Lathyrus
odoratus (sngele voinicului), ambele cu flori albe. Prin ncruciarea acestora, n F1 au fost
obinute doar plante cu flori roii. Prin autopolenizarea acestora, n F2 s-a obinut un
raport de segregare de 9/16 plante cu flori roii i 7/16 plante cu flori albe.
plante cu flori albe (AAbb) x plante cu flori albe (aaBB)

F1
F2

plante cu flori roii (AaBb) x

plante cu flori roii (AaBb)

9/16 plante cu flori roii (A-B-)

3/16 plante cu flori albe (A-bb)
3/16 plante cu flori albe (aaB-)
1/16 plante cu flori albe (aabb)

190

9/16 plante cu flori roii i

7/16 plante cu flori albe.
Pentru apariia culorii roii a petalelor este necesar prezena simultan a 2 gene
nealele n stare dominanta (AABB, AaBb, AABb sau AaBB).
Se constata c n acest caz abaterea de la raportul mendelian de segregare fenotipic, este
cauzata de interaciunea complementar ntre genele dominante A i B.
In F2 se constat c raportul de segregare genotipic este n conformitate cu legea
disjunciei independente a perechilor de caractere.
Complementaritatea recesiv
Presupune manifestarea unui anumit caracter doar n prezena concomitent a 2
sau mai multor gene nealele recesive.
Acest tip de complementaritate a fost descoperit n cazul formei capsulei (triunghiular
sau ovoid) la planta traista ciobanului (Capsella bursa -pastoris). Astfel, prin ncruciarea
unei varieti cu capsula triunghiular (genotip A 1 A 1 A 2 A 2 ) cu o varietate cu capsula
ovoid (a 1 a 1 a 2 a 2 ), s-au obinut n F1 plante hibride cu capsula triunghiular
(A 1 a 1 A 2 a 2 ) . n urma autopolenizarii plantelor din F1, n generaia F2 s-a evideniat un
raport de segregare de 15/16 plante cu capsula triunghiular la 1/16 plante capsula
ovoid (a 1 a 1 a 2 a 2 ).

4. Epistazia
Genele care inhib aciunea altor gene (gene nealele) se numesc epistatice iar genele
inhibate se numesc hipostatice.
Epistazia reprezint o form de interaciune ntre genele nealele n care o gen
mascheaz sau inhib exprimarea fenotipic a altei gene.
Epistazia nu trebuie confundat cu raportul de dominan-recesivitate n care, de
asemenea, exprimarea unei gene este inhibat de prezena altei gene, dar genele implicate
sunt alele, una fiind dominant iar cealalta recesiv.
Genele epistatice pot fi, la rndul lor, dominante sau recesive.
Epistazia de dominan
Prin eistazia de dominan att gena epistatic ct i cea hipostatic sunt reprezentate
de gene nealele dominante. Raportul de segregare n acest caz este de 12:3:1.

191

Fenomenul epistaziei dominante a fost remarcat la o ncruciare ntre ovzul

slbatic (Avena fatua) cu boabe negre (AABB) i ovzul cultivat (Avena sativa) cu boabe
galbene (aabb).
In urma unei astfel de ncruciri, n F1 s-a obinut o generaie 100 % hibrid
(heterozigot) plantele producnd boabe negre. In generaia urmtoare (F2) s-au obinut
plante cu trei fenotipuri distincte: 12/ 16 cu boabe negre, 3/ 16 cu boabe cenuii i 1/ 16
cu boabe galbene.
Cele 12 combinaii ce manifest caracterul bob negru conin gena alel A n stare
homozigot sau heterozigot iar gena b n stare homozigot (AAbb sau Aabb).
In cazul celor trei combinaii ce manifest caracterul bob cenuiu, gena B exist n
stare homozigot sau heterozigot iar gena a n stare exclusiv homozigot (aaBB sau
aaBb).
Organismele ce prezint caracterul bob galben, sunt homozigote pentru ambele tipuri
de gene recesive (aabb). Analiza genotipurilor posibile i a fenotipurilor aparente, relev
faptul c gena dominant A mpiedic expresia genei dominante B ce determin culoarea
cenuie a boabelor.
In acest caz, gena A este epistatic iar gena B hipostatic.
Epistazia de recesivitate
Are loc cnd o gen recesiv homozigot (aa) inhib exprimarea aciunea genelor
dominante sau recesive. Raportul de segregare n acest caz este de 9:4:3.
In cazul epistaziei recesive, un exemplu cunoscut este cel legat de culoarea blnii la
unele rase de cini (de exemplu, rasa Labrador Retriever).
Astfel, cnd se ncrucieaz dou tipuri de cini, unul homozigot cu blana alb cu
altul homozigot cu blana de culoare maro, n F1 rezult descendeni de culoare neagr.
In F2, prin ncruciarea indivizilor din F1 apar descendeni n raportul de segregare
fenotipic de 9 negri: 3 maro: 4 albi.
Constituia genetic a celor 3 categorii de indivizi este: B_C_ pentru culoarea neagr,
bbC_ pentru culoarea maro i B_cc sau bbcc pentru culoarea alb. In acest caz , alelele B i b
determin culoarea neagr i respectiv maro dar numai n prezena genei dominante situat la
un alt locus. Dac organismele conin perechea cc atunci fenotipul este culoarea alb (absena
pigmentului), perechea respectiv fiind epistatic fa de genele B sau b.

192

5. Pleiotropia
Capacitatea unei singure perechi de gene alele de a afecta mai multe caractere
diferite poart denumirea de pleiotropie.
De exemplu, alelele locusului T de la oarece afecteaz un numr mare de funcii:
formarea cozii, rata de mutaie, sterilitatea i procesele dezvoltrii.
La Drosophila melanogaster, alela mutant vestigial vg , care reduce mrimea
aripilor, determin, n acelai timp, modificarea periorilor de pe partea dorsal a corpului,
reducerea fertilitii, a numrului de ou etc.
n mod similar, gena ca, care n stare homozigot determin tipul albinos, are effect
pleiotropic determinnd i o vitalitate mai redus, din care cauz indivizii albinoi sunt mai
rar n natur.
Fenomenul de pleiotropie exist i la om. De exemplu, n cazul bolii de anemie
falciform (boal genetic n care hematiile i-au pierdut forma caracteristic de disc
dobndind o form de secer) gena mutant are ca efect primar sinteza unei hemoglobine
anormale (HbS).
Aceast hemoglobin se deosebete de cea normal prin aceea c n catena ,
aminoacidul acid glutamic este nlocuit cu valin datorit unei mutaii punctiforme ce
afecteaz gena care codific sinteza catenei respective. Astfel, HbS va conine catenele
normale dar catenele modificate.
Gena mutant este letal n stare homozigot, dar codominant la heterozigoi,
prezena sa afectnd i alte caractere : forma eritrocitelor, anemie, alterri ale funciilor
mduvei osoase i ale funciilor mentale etc.

6. Genele eseniale i alelele letale

Noiunea de gene letale a fost introdus n 1911 de L.Cuenot pentru a denumi alelele
unor gene eseniale care determin moartea organismului.
Dac mutaia care afecteaz genele eseniale este dominant, atunci att
homozigoii ct i heterozigoii pentru alelele mutante vor prezenta un fenotip letal.
Dac mutaia determin apariia unei alele recesive, atunci doar homozigoii
pentru respectiva gen vor manifesta fenotipul letal.
Cuenot a observat c prin ncruciarea unor oareci de culoare galben cu oareci de
alt culoare, descendenii obinui prezentau un raport de segregare de aproximativ 1 oareci

193

galbeni : 1 oareci de alt culoare, ceea ce corespunde situaiei n care oarecii galbeni sunt
heterozigoi.
Prin ncruciarea oarecilor de culoare galben ntre ei s-a obinut un raport de
segregare de 2 oareci galbeni la 1 oarece de alt culoare.
Explicaia acestui raport de segregare este aceea c dintre oareci mor nainte de
natere.
Notnd cu Ay gena mutant letal i cu A gena normal, rezult c oarecii galbeni
sunt exclusiv heterozigoi (AyA), deoarece oarecii cu genotip homozigot (AyAy) mor nainte
de natere. In acest caz, genotipul prinilor i ale combinaiilor descendente este :
P
F1

AyA

AyAy 2/4 AyA

AyA
AA

Genele letale au fost evideniate i la om. De exemplu, boala genetic denumit

hemofilie este datorat unei mutaii recesive localizate pe cromozomul X.
n stare homozigot gena codificatoare, determin moartea organismului purttor n
cursul dezvoltrii embrionare iar n stare heterozigot ea determin boala respectiv.
Si la plante se cunosc mutaii letale recesive care n stare homozigot mpiedic
formarea clorofilei. Astfel la Anthirrhinum majus var. aurea (gura leului) exist plante cu
frunze verde pal care nu pot exista dect n stare heterozigot.
In afar de genele letale recesive, au mai fost identificate i gene letale dominante
care i exercit efectul i la heterozigoi, determinnd moartea acestora n perioada prenatal
sau postnatal. Acesta este cazul bolii genetice umane, numit boala Huntigton, provocat
de o gen autosomal dominant. Boala este caracterizat prin degenerarea progresiva a
sistemului nervos central.
Genele letale pot fi localizate pe autosomi sau pe heterosomi, putnd face ca fie
gameii s fie neviabili, fie ca zigotul s degenereze.
Dup gradul de letalitate (penetran) al indivizilor, genele letale pot fi:
-

letale propriu- zise- cnd se producea moartea tuturor indivizilor purttori ai

genei mutante ;

194

semiletale cnd circa 50 % dintre indivizi mor;

subvitale- cnd mortalitatea afecteaz 30 % dintre indivizi.

Exprimarea genelor i mediul

Manifestarea aciunii genelor poate fi influenat i de condiiile de mediu, care
modific proporiile fenotipice fa de cele teoretice. Influenele pot produce modificri
variate, att din punct de vedere cantitativ ct i calitativ.
De exemplu, larvele de Drosophila cu aripi vestigiale, crescute la temperaturi
ridicate, produc aripi aproape normale. Temperatura ridicat, nu influeneaz genele
respective dect la o anumit vrst a larvelor, care coincide cu perioada de dezvoltare a
aripilor.
La iepurele de Himalaia, culoarea neagr a extremitilor este determinat de alela
h

c . acest tip de iepure, crescut la temperaturi de peste 30oC este complet alb ; crescut la
temperaturi de aproximativ 25oC capt culoarea neagr a extremitilor (botului, urechilor,
labelor i cozii). Dac se smulge o poriune din blana alb i iepurele este supus la temeraturi
sub 25 oC pe acel loc va crete blan neagr.
Culoarea blnii n cazul acestor experiene, depinde de anumite reacii biochimice care duc la
elaborarea pigmentului. In acest caz, temperatura interfer cu aciunea genei, care la rndul ei
dirijeaz elaborarea acestor pigmeni.
La plante exist, de asemenea, gene a cror aciune asupra culorii florilor, poate fi
modificat n funcie de temperatur i umiditate. Astfel, Primula crescut n condiii de
temperatur ridicat, de 30 -35 oC i umiditate crescut, produce flori de culoare alb, iar la
temperaturi mai sczute, produce flori roii.
In condiii diferite de mediu, doi indivizi cu alele identice pentru acelai locus, pot
prezenta fenotipuri diferite. Capacitatea unei gene sau a unui grup de gene de a se exprima
fenotipic n anumite condiii determinate de mediu se numete penetran, iar gradul de
exprimare al fenotipului se numete expresivitate.
Penetrana poate fi complet, cnd n anumite condiii de mediu, gena prezent la
toi indivizii de o anumit categorie genotipic se exprim la toi indivizii purttori, sau
incomplet, cnd n alte condiii de mediu aceeai gen se manifest fenotipic doar la o parte
dintre indivizii purttori.
De exemplu, genele analizate de Mendel au o penetran complet. In cazul, genelor
implicate n rezistena sau sensibilitatea la boli se manifest o penetran redus, incomplet,
deoarece ele nu se exprim la toi indivizii populaiei ci doar la cei care au fost supui unei
infecii specifice.

195

O serie de gene, sub aciunea unor factori de mediu manifest manifest fenotipuri
similare altor gene, denumite fenocopii.

Anumii factori de mediu, care acioneaz n

perioade critice ale dezvoltrii indivizilor pot conduce la unele anomalii specifice. Un
exemplu cunoscut de fenocopie este cel al malformaiilor aprute la copiii ai cror mame au
folosit medicamentul talidomida n timpul sarcinii. Copiii nscui prezentau malformaii
grave asemntoare celor ce apar n cazul unei maladii ereditare numit focomelie (mini cu
aspect de palete de foc) determinat de o gen recesiv rar.

196

Curs 17. MECANISMELE EREDITII LA NIVEL CELULAR

n anul 1902, citologul german T. Boveri, descoper la ariciul de mare Paracentratus
lividus (2n=36) c dimensiunile i caracreristicile cromosomilor se pstreaz constant de-a
lungul generaiilor. Studiind ovule fecundate cu 2 spermatozoizi diferii, el constat c zigoii
triploizi rezultai, cu 54 cromosomi, prezint mitoze anormale, cu distribuia neregulat a
cromosomilor n celulele fiice, rezultnd organisme cu numeroase anomalii. Numai indivizii
care au 36 de cromosomi (numrul caracteristic speciei) sunt normali.
Concluzia: pentru dezvoltarea normal a organismului este necesar prezena
unei garnituri complete, normale de cromosomi.
De aici, el a emis ipoteza c pe cromosomi se afl factorii ereditari descrii de
Mendel, ei fiind cei care condiioneaz o dezvoltare normal a organismului.
ntre 1902- 1904, Sutton i Boveri emit independent, ipoteza localizrii factorilor
ereditari mendelieni pe cromosomi, formulnd astfel teoria cromosomal a ereditii.
n 1903, Sutton a evideniat faptul c numrul de caractere distincte ale unui
organism, depete cu mult numrul de cromosomi, astfel c, n acelai cromosom
trebuie s existe mai muli factori mendelieni (gene).
Din momentul n care s-a stabilit c rolul cromosomilor de a fi depozitari i vehicule
pentru gene, cu ajutorul crra genele sunt transmise de la prini la descendeni, atenia
geneticienilor s-a concentrate lor, ncercndu-se s se rspund la probleme precum: modul
de organizare a cromosomilor, compoziia chimic a acestora, localizarea genelor.

Morfologia i numrul cromosomilor

La nivelul nucleului celulelor eucariote, cromosomii se individualizeaz ca structuri
sub form de baghet sau de corp sferic, formate dintr-un complex macromolecular nucleohistonic.
Dimensiunea cromosomilor variaz n funcie de specie, ntre 0,2 0,5 m n
diametru i 0,2 30 m n lungime, astfel : cromosomii umani au dimensiunile cuprinse
ntre 4- 6 m, la porumb 8- 10 m, la ceap 10- 20 m etc.
La nceputul diviziunii, fiecare cromosom are o structur dedublat, alctuit din dou
subuniti structurale longitudinale numite CROMATIDE, libere pe toat lungimea lor cu
excepia unui punct sau regiuni n care sunt unite i care se numete CENTROMER, cu
197

ajutorul cruia cromosomul se ataeaz de fibrele fusului nuclear de diviziune n timpul

metafazei (fig. 1).
Poriunile libere ale celor dou cromatide, situate de o parte i de cealalt a
centromerului, reprezint BRAELE CROMOSOMULUI.
In funcie de poziia centromerului apar diferite tipuri morfologice de cromosomi :
-

metacentrici cu centromerul plasat central n mijlocul cromosomului,

rezultnd dou brae egale ;

submetacentrici cnd centromerul este n regiunea central deplasat spre

unul dintre capetele cromosomului rezultnd un bra lung (q) i un bra scurt
(p) ;

subtelocentrici cu centromerul plasat sub captul cromosomului, rezultnd

un bra mai lung i un bra mai scurt ;

telocentric cnd centromerul este localizat strict pe captul cromosomului

- cromosomul respectiv avnd un singur bra, sau acrocentric - cnd
centromerul este localizat n regiunea terminal, rezultnd un bra foarte lung
i unul foarte scurt.

Morfologia exact a cromosomilor, poate fi analiznd raportul R dintre braele

cromosomilor R = q / p sau stabilind indexul centromeric, care reprezint
raportul dintre braul scurt i lungimea total a cromosomului x cu 100.
Regiunea n care se afl centromerul apare la nivelul cromosomului metafazic, ca o
constricie numit CONSTRICIE PRIMAR.
La nivelul constriciei primare se afl KINETOCHORUL o structur trilamelar,
tristratificat, dispus pe partea extern a centromerului, cte una pentru fiecare centromer al
celor 2 cromatide (la cromosomul metafazic, centromerul are o structur dedublat, fiecare
cromatid avnd centromerul su asociat cu centromerul cromatidei surori).
Kinetochorul este structura care ataeaz cromosomul la fibrele fusului de diviziune.
La unele specii, prezint pe lng constricia primar, i o a 2-a constricie
CONSTRICIE SECUNDAR pe braul lung sau scurt al cromosomului.
Cnd constricia secundar este localizat n apropierea captului cromosomului,
rezult o poriune ce pare a fi separat de restul cromosomului, dar legat de acesta printr-un
dublu filament subire. Aceast regiune se numete SATELIT- fiecare cromatid avnd
satelitul su.
Capetele cromosomului se numesc TELOMERE, ele prezentnd o structur care
confer cromosomului stabilitate, prevenind asocierea cu ali cromosomi, astfel c fiecare
198

cromosom reprezint o entitate distinct, rolul su fiind acela de a transporta n celulele fiice
acelai set de gene, aceeai informaie ereditar pe care a avut-o celula mam.
Substana cromatic a cromosomilor ca i a nucleului , are 2 stri distincte
interconvertibile, numite :
-

eucromatin- este decondensat n interfaz i condensat n timpul

diviziunii, la nivelul cromosomilor, cnd se coloreaz intens ;

heterocromatin este condensat att n timpul diviziunii ct i n

interfaz, colorndu-se n mod egal de-a lungul ciclului celular (interfaz +
mitoz).

Numrul de cromosomi este o caracteristic a fiecrei specii.

Fig. 1.Particularitile morfologice i genetice ale cromosomului metafazic (dup L.

Gavril, 1986)
199

CR- Cromatide surori ; C- centromer ; CP- constricie primar ; K kinetochor

F- fibre de diviziune ; CS- constricie secundar ; T- telomere ; mS
macrosatelit
S microsatelit ; D dublu helix ADN ; p bra scurt ; q bra lung

Fundamentarea citogeneticii
n 1906, geneticianul american W.E. Castle, unul dintre autorii conceptului privind
constana genelor i genotipurilor n populaii i fondatorul geneticii populaiilor, mpreun
cu studentul su Woodworth, au descoprit c musculia de oet (Drosophila melanogaster)
este uor de cultivat n laborator. Ei se ocupau cu problema consangvinizrii i a seleciei la
obolani aa c nefiind interesai n studiul acestei insecte, au fcut cadou colecia lor de
Drosophila zoologului american T.H. Morgan.
Dndu-i seama de avantajele pe care le are musculia n urmrirea caracterelor
ereditare de-a lungul generaiilor, Morgan a fcut din ea un obiect ideal de studiu n genetic.
Pe baza rezultatelor experimentale efectuate asupra acestei specii i a datelor cercetrilor care
au implicat cromosomii n transmiterea caracterelor ereditare, Morgan a elaborat, ntre 19111919, tezele teoriei cromosomale a ereditii, fundamentnd citogenetica.
Avantajele oferite de Drosophila melanogaster (fig. 2) pentru cercetarea transmiterii
caracterelor ereditare sunt:
se cultiv n laborator pe medii simple, uor de pregtit, n condiii de cretere
controlabile;
este prolific (o pereche d natere la cteva zeci sau sute de descendeni), numrul
mare de descendeni permind interpretarea statistic a rezultatelor;
timp scurt de generaie (aprox. 12 zile), la temperatura camerei, permind urmrirea
caracterelor ereditare de-a lungul unui numr mare de generaii, ntr-un timp redus;
prezint peste 500 de mutante diferite, aprute spontan sau induse, ntre care se pot
realiza diferite experiene de ncruciare;
are un numr mic de cromosomi somatici (2n=8), care pot fi uor identificai datorit
particularitilor morfologice;
n nucleii interfazici ai glandelor salivare ale larvelor de stadiul III s-au identificat
cromosomii politeni, care sunt de peste 150 de ori mai mari dect cei 8 cromosomi obinuii.
Studiul acestora s-a dovedit de o deosebit importan n cristalizarea teoriei cromosomale a
ereditii.
200

Fig. 2. Drosophila melanogaster : a. aspectul adulilor; b. larvele celor 2 sexe;

c. reprezentarea schematic a cromosomilor
Dup cum mazre prin autogamie i prin prezena caracterelor alelomorfe distincte i
constante s.a dovedit un obiect de studiu foarte bun pentru genetica factorial sau formal, la
fel i Drosophila melanogaster s-a dovedit un obiect de studiu foarte bun pentru descifrarea
mecanismelor ereditii la nivel celular cromosomal.
Dovezi ale implicrii cromosomilor n ereditate la Drosophila melanogaster
Primele dovezi ale implicrii cromosomilor n ereditate, la Drosophila
melanogaster au fost de ordin citologic.
Studiul complementului cromosomal de la aceast specie (2n=8), a artat c cei 8
cromosomi ai si sunt omologi, 2 cte 2, formnd 4 perechi:
3 perechi de autosomi (II, III, IV) identici la femel i la mascul i perechea I,
cromosomii sexului, care la femel este notat cu XX iar la mascul cu XY.
Perechile II i III de autosomi sunt cei mai mari, iar perechea IV sunt cei mai
mici, aproape punctiformi (fig. 2).
201

Cromosomii sexului formeaz o pereche la femel (XX), considerat a fi perechea I,

pe cnd la mascul exist doar un singur cromosom X, asemntor celui de la femel, asociat
cu un alt cromosom, neomolog, ce apare ca un bastona frnt i care a primit notaia Y. Deci,
n determinarea sexelor la Drosophila melanogaster, exist urmtoarele formule
heterosomale:

femela este sexul homogametic XX, dnd ovule de un singur tip (cu 3 autosomi+X),

masculul este heterogametic XY, dnd spermatozoizi de 2 tipuri n proporii egale:

unii cu 3 autosomi + X, alii cu 3 autosomi + Y.

Prin fecundarea unui ovul 3A+X de ctre un spermatozoid 3A+X, rezult o femel
(6A+XX), iar prin fecundarea unui ovul 3A+X de ctre un spermatozoid 3A+Y, rezult un
mascul (6A+XY). Determinarea sexelor la Drosophila melanogaster , caracter ereditar
deosebit de important pentru specie, s-a dovedit a fi de natur cromosomal.
Implicarea n ereditate a cromosomilor la Drosophila melanogaster s-a fcut i pe
criterii genetice.
Astfel, analiza cromosomilor la unii indivizi la care s-a constatat absena ochilor, a
condus la constatarea absenei unuia dintre cromosomii perechii IV.
Musculiele respective, sunt prin urmare aneuploide, lipsindu-le un cromosom (2n-1) i
avnd numai 7 cromosomi. Prin ncruciarea acestor mutante cu musculie normale s-au
obinut mai muli descendeni dintre care 50 % reprezentau musculie normale i 50 %
musculie fr ochi.
Aceasta a fost prima dovad a implicrii, pe baza unor argumente genetice, a
cromosomilor n ereditate, fcndu-se o corelaie direct ntre unui anumit cromosom i
absena unui caracter specific.
Ulterior, Bridges a constatat c exist i mutante ce au un cromosom suplimentar (2n+1),
deci cu 9 cromosomi, organismele respective manifestnd modificri fenotipice evidente.
Mutantele cu 7 i respectiv 9 cromosomi apar ca urmare a nondisjunciei cromosomilor n
meioz: dac din bivalentul respectiv cromosomii nu se separ, rezult 50% gamei
aneuploizi, fr cromosomul din perechea IV i 50% cu ambii cromosomi ai perechii
respective. Dac aceti gamei vor fi fecundai de gamei de sex opus normali, vor rezulta
musculie cu 2n-1= 7 cromosomi i 2n+1=9 cromosomi.
n concluzie, dezvoltarea normal a organismului presupune o garnitur normal,
diploid de cromosomi, abaterile numerice de la aceasta ducnd la apariia unor anomalii.
Acesta este un argument sigur n implicarea cromosomilor n ereditate.
202

Ca i la mazre i n cazul musculiei de oet s-a demonstrat existena perechilor de factori

ereditari (adic a genelor sub form de perechi) localizate pe cromosomi omologi ce au
proveniene diferite.
Simbolizarea genelor se realizeaz de obicei folosind prima liter (sau dou litere) de la
cuvntul englez ce desemneaz fenotipul mutant determinat de gena respectiv: w= white
= alb, vg=vestigial=rudimentar.
Gena dominant de tip slbatic (normal) se desemneaz prin adugarea semnului +
la litera mic, sau se folosesc majuscule.

203

Curs 18. TEZELE TEORIEI CROMOSOMALE A EREDITII

Analiza genetic realizat n cadrul a numeroase experiene de ncruciare la D.
melanogaster, ntre tipul normal i diverse mutante precum i ntre diferite mutante, care au
implicat indivizi ce se deosebeau prin una sau mai multe perechi de caractere, au artat c n
anumite situaii exist mai multe alele pentru acelai caracter, plasate pe aceli locus pe
cromosomii omologi, constituind serii polialele. De asemenea s-a constatat c unele caractere
normale ale tipului slbatic de drosofil se comport ca recesive n timp ce unele mutante se
comport ca dominante.
Pe baza acestor analize, T.H.Morgan i colaboratorii si, C.B.Bridges,
A.H.Sturtevant i H.J.Mller, au elaborat tezele teoriei cromosomale a ereditii, ele
avnd un caracter general valabil:

Aezarea liniar a genelor pe cromosomi;

Transmiterea nlnuit a genelor plasate pe acelai cromosom - linkage;

Schimbul reciproc de segmente cromosomale (gene) ntre cromosomii omologicrossing-over.

Aezarea liniar a genelor pe cromosomi

S-a constatat c exist un numr mai mare de caractere ereditare, respectiv de gene,
exprimate n fenotip, fa de numrul de cromosomi din complementul cromosomal al
unei specii.
Concluzia: pe acelai cromozom sunt localizate mai multe gene, plasate ntr-o
succesiune liniar.
ncepnd cu anul 1968, ca urmare a numeroselor experimente, au fost separate gene
individuale i s-a reuit stabilirea exact a genelor n succesiunea lor natural n
macromolecula ADN din structura cromosomului. Dar la nceputul secolului cnd se
fundamenta teoria cromosomal a ereditii, dovedirea localizrii liniare a mai multor gene pe
un cromosom s-a realizat pe baz de dovezi indirecte i de logic. Dovezile indirecte ale
plasrii liniare a genelor pe cromosom deriv din descoperirea fenomenului de nlnuire a
genelor i de schimb reciproc de material genetic.

204

Transmiterea nlnuit a genelor localizate pe acelai cromosom linkage

Ipoteza Sutton Boveri (1902- 1904) a admis c genele sunt localizate pe acelai
cromosom.
n timpul diviziunii, cromosomii i pstreaz integritatea lor morfologic
transmindu-se ca uniti de la celula mam la celulele fiice, astfel c genele pe care le
conine fiecare cromosom se transmit mpreun, n bloc.
Acest fenomen, de transmitere nlnuit a genelor plasate pe acelai cromosom, s-a
numit linkage.
Spre deosebire de fenomenul de transmitere independent a perechilor de gene- care se
refer la perechi de gene plasate pe cromosomi diferii, neomologi, fenomenul de
transmitere nlnuit a genelor (linkage) se refer la perechi de gene localizate pe acelai
cromosom.
Exemple:
Primul caz de transmitere nlnuit a genelor a fost descris de

W.Bateson i

R.Punnett n 1906, la Lathyrus odoratus (sngele voinicului). ncrucind o varietate cu

flori purpurii (AA) i polen alungit (BB) cu o varietate cu flori roii (aa) i polen rotund
(bb) ei au obinut n F1 plante dublu heterozigote (AaBb) cu flori purpurii i polen
alungit. Prin autopolenizarea acestora ar fi trebuit s se obin, n F2, un raport de
segregare caracteristic dihibridrii de 9: 3: 3: 1.
n realitate s-au obinut :
296 plante cu flori purpurii i polen alungit,
27 plante cu flori roii i polen alungit,
25 plante cu flori purpurii i polen rotund i
85 plante cu flori roii i polen rotund,
n raport de 9: 1: 1: 3.

205

Bateson i Punnett nu au putut explica acest fenomen , dar au descris sub termenul de
cuplaj, aceast tendin a caracterului de floare purpurie de a se transmite mpreun cu
cel de polen alungit, respectiv a caracterului de floare roie de a se transmite mpreun
cu cel de polen rotund.
Genele care determin caracterele floare purpurie- polen alungit se afl pe acelai
cromosom i se transmit mpreun la descendeni, n timp ce cele pentru caracterele
floare roie- polen rotund se afl pe cromosomul omolog n loci corespondeni.

206

Ca urmare, simbolurile pentru pentru organismele dublu homozigote dominante vor

fi AB/AB, pentru cele dublu homozigote recesive vor fi ab/ab, iar pentru dublu
heterozigoi AB/ab.
Exist dou posibiliti ca genele linkate ale unui dublu heterozigot (dihibrid) s se
afle plasate pe o pereche de cromosomi omologi, astfel:

Cele dou gene dominante A i B s fie plasate pe acelai cromosom, aceasta

fiind faza de cuplaj sau poziia cis, caz n care alelele recesive se afl pe cellalt
omolog, n loci corespondeni;

Cele dou alele dominante se afl una pe un cromosom iar cealalt pe

cromosomul omolog, n loci corespondeni, aceasta fiind poziia trans sau faza
de repulsie.

n cadrul experimentelor la Lathyrus odoratus plantele cu caractere recombinate

obinute, NU apar ca urmare a disjunciei independente a perechilor de cromosomi
(respectiv factori ereditari) ci n urma recombinrii genetice intracromosomale (schimbul
reciproc de segmente cromosomale sau crossing-over), fapt stabilit ulterior de Morgan i
echipa sa.
n cazul

D. melanogaster (care are 4 perechi de cromosomi), clasic a rmas

experiena efectuat de Morgan i colaboratorii si.

Astfel, ei au ncruciat musculie femele normale (cu aripi normale i ochi roii
crmizii) cu masculi dublu mutani (cu aripi vestigiale i ochi purpurii).
n prima generaie F1 au rezultat musculie normale, pentru ambele caractere,
dublu heterozigote.
ncrucind masculi dublu heterozigoi din F1 cu musculie femele dublu
mutante, s-a obinut generaia F2 n care, conform cu legea mendelian a segregrii
independente a perechilor de factori ereditari, ar fi trebuit s se obin:
9/16 musculie cu aripi normale i ochi normali,
3/16 musculie cu aripi normale i ochi purpurii;
3/16 musculie cu aripi vestigiale i ochi normali;
1/16 musculie cu aripi vestigiale i ochi purpurii.
n realitate, Morgan a obinut 519 musculie cu aripi normale i ochi normali i
552 musculie cu aripi vestigiale i ochi purpurii.

207

Interpretnd rezultatele, Morgan a ajuns la concluzia c genele pentru aripi normale

i ochi normali se afl plasate pe un cromosom, iar genele pentru aripi vestigiale i ochi
purpurii se afl pe cromosomul omolog, transmindu-se nlnuit la descendeni, fr a
avea loc segregarea independent a acestor perechi de gene.
Spre deosebire de fenomenul de transmitere independent a perechilor de genecare se refer la perechi de gene plasate pe cromosomi diferii, neomologi, fenomenul de
transmitere nlnuit a genelor (linkage) se refer la perechi de gene localizate pe acelai
cromosom.
Un rezultat identic s-a obinut i n cazul ncrucirii ntre un mascul cu corp
normal (b+b+) i aripi normale (vg+vg+) cu o femel cu corp negru (bb) i aripi vestigiale
(vg vg). n F1 s-au obinut indivizi dublu heterozigoi dar normali fenotipic (b+ vg+/ b vg).
Prin ncruciarea unui mascul dublu heterozigot cu o femel dublu mutant, n F2 s-au
obinut 50 % indivizi cu corp normal i aripi normale i 50 % indivizi cu corp negru i
aripi vestigiale.
Acest raport de segregare poate fi explicat prin faptul c la nivelul indivizilor
masculi dublu heterozigoi din F1, n timpul meiozei (la formarea spermatozoizilor), gena
pentru corp negru se transmite nlnuit cu gena pentru aripi vestigiale deoarece se gsesc
plasate pe acelai cromosom, care se transmite intact (i pstreaz integritatea structural)
208

n gamei. n mod similar, genele normale (de tip slbatic) sunt plasate alturat pe
cromosomul omolog i se transmit mpreun.
n urma a numeroase experimente realizate la D. melanogaster, au fost ncadrate toate
cele peste 500 de gene ce determin mutaii, n 4 grupe de linkage corespunztoare celor
4 perechi de cromosomi:

Grupa I- cuprinde 141 mutante

Grupa II- cuprinde 228 mutante

Grupa III- cuprinde 156 mutante

Grupa IV- cuprinde 12 mutante

La speciile diploide, numrul grupelor de nlnuire corespunde numrului de

perechi de cromosomi. Egalitatea dintre numrul perechilor de cromosomi si numrul
grupelor de nlnuire, a mai fost denumit de Morgan cea de-a 6 lege a ereditii.
La speciile haploide, fiecare cromosom poart un set diferit de gene, neputnd fi
cromosomi omologi, astfel ca numrul grupelor de nlnuire coincide cu numrul de
cromosomi.
De exemplu, virusurile au un singur grup de linkage deoarece ADN viral este unic; la
fel i la bacterii. Alga verde flagelat Chlamydomonas reinhardii este haploid, are 16
cromosomi i 16 grupe de linkage, iar la Saccharomyces sp., n stare haploid, are 17
cromosomi i 17 grupe de linkage.

Crossing-over sau schimbul reciproc de segmente cromosomale

(gene) ntre cromosomi omologi
n experiena de ncruciare dintre musculie cu corp normal (b+b+) i aripi
normale (vg+vg+) cu musculie dublu mutante, cu corp negru (bb) i aripi vestigiale (vg
vg) (genele care determin aceste caractere sunt plasate n perechea a II-a de cromosomi, deci
n grupa a II-a de linkage), Morgan i colaboratorii au obinut n F1 musculie dublu
heterozigote (b vg/ b+ vg+) cu corp normal i aripi normale.
Prin retroncruciarea (back-cross) unei musculie femele din F1, normal
fenotipic dar dublu heterozigot, cu un mascul dublu mutant cu corp negru i aripi
vestigiale (b vg/b vg), n F2, pe lng tipurile parentale, se obin urmtoarele categorii
de indivizi:

Cu corp normal i aripi normale (b vg/ b+ vg+ )- 41,5 %;

Cu corp negru i aripi vestigiale (b vg/ b vg ) 41,5 %;

209

Cu corp negru i aripi normale (b vg+/ b vg ) 8,5 %;

Cu corp normal i aripi vestigiale (b+vg/ b vg ) 8,5 %.

Ultimele dou categorii de musculie reprezint organisme recombinate.

Apariia acestora nu se poate explica prin realizarea recombinrii n urma
disjunciei (segregrii) independente a perechilor de caractere, deoarece acest tip de
segregare este caracteristic perechilor de gene localizate pe perechi diferite de cromosomi
(cromosomi neomologi).
Ori prin experiena anterioar de ncruciare ntre aceleai dou mutante s-a dovedit
clar linkage-ul genei b+ cu gena vg+, localizate pe un cromosom i respectiv, al genelor b
i vg localizate pe cromosomul omolog.
n cazul experienei prin care femelele dublu heterozigote din F1 au fost
ncruciate cu masculi mutani, n F2 s-a manifestat fenomenul de linkage dar numai n
proporie de 83 %, restul de 17 % din descenden reprezint organisme recombinate.
Pentru explicarea apariiei organismelor cu caractere recombinate determinate
de gene linkate, Morgan a propus un mecanism de crossing-over sau de schimb reciproc
de segmente ntre cromosomii omologi, care are loc n timpul formrii gameilor (n
meioz cnd cromosomii omologi se asociaz pentru a forma bivaleni).

210

Experimentele de ncruciare realizate ntre diferite categorii de D. melanogaster,

au relevat o serie de constatri interesante.
Astfel, dac pentru ncruciare se utilizeaz masculi dublu heterozigoi din F1 i
femele dublu mutante, a fost evideniat n acest caz un linkage total, iar schimbul de
gene (crossing-over) nu se realizeaz. Acest fapt a fost evideniat i n cadrul altor
experimente.
Concluzia a fost aceea c la masculii de Drosophila nu se manifest fenomenul de
crossing-over.
n schimb, dac pentru ncruciare se folosesc femele dublu heterozigote din F1
cu masculi dublu mutani, a aprut un linkage parial nsoit de crossing-over.
Aceste rezultate se explic prin faptul c la femelele dublu heterozigote din F1,
de tipul vg b/ vg+ b+, n ovogenez, produc att ovule normale, nerecombinate ct i
ovule recombinate ce conin cromosomi recombinai (b vg+ i b+ vg), aprui n urma
crossing-over-ului.
Prin unirea aleatorie, n procesul de fecundaie, a ovulelor normale i
recombinate, cu spermatozoizi dublu mutani vor rezulta cele patru categorii de
organisme, dintre care 2 de tip parental (cele mai numeroase) i 2 de tip recombinat.
Pentru a avea confirmarea rezultatelor obinute, Morgan a realizat apoi o serie de
experimente de ncruciare ntre musculiele care prezentau caractere alelomorfe
determinate de gene plasate pe cromosomul X (gene X- linkate).
El a ncruciat femele homozigote pentru caracterul recesiv heterosomal ochi albi i
aripi normale, cu masculi cu ochi normali i aripi miniaturale(vestigiale), caracter
determinat de asemenea de o gena recesiv heterosomal.
In F1 au fost obinute femele normale pentru ambele caractere, dar dublu
heterozigote, i masculi cu ochi albi i aripi normale (caracterele organismului matern au
trecut la fii, o caracteristic pentru caracterele determinate de genele X-linkate).
Incrucind apoi o femel din F2 dublu heterozigot, cu un mascul de tip iniial (backcross = retroncruciare) cu ochi normali i aripi miniaturale, a obinut n F2: femele cu
ochi normali i aripi miniaturale, femele cu ochi normali i aripi normale i patru categorii
de masculi:
- cu ochi albi i aripi miniaturale
-

cu ochi normali i aripi normale

cu ochi albi i aripi normale

cu ochi normali i aripi miniaturale

211

Apariia acestor categorii de masculi nu poate fi explicat dect admind realizarea

unui schimb reiproc de gene ntre cromosomii X omologi ai femelelor dublu heterozigote.
In urma acestor experimente, s-a constatat ca fenomenul de crossing- over are loc ntre
orice tip de cromosomi omologi, fie autozomi fie heterozomi.
Procentul de apariie a fenomenului de crossing-over, denumit i frecvena de
crossing-over, se poate determina prin raportul ntre numarul de indivizi recombinai i
numarul total de descendeni, nmulit cu 100.
Unitatea de msur relativ a distanei ntre gene, este reprezentat de procentul de
crossing-over.
Prin realizarea unor tipuri variate de ncruciri, se poate stabili nu numai distaa
dintre dou gene ci chiar i poziia unei gene fa de altele din acelai grup de linkage, deci
plasarea lor ntr-un anume loc pe cromosomul respectiv.
Astfel, s-au putut realiza hrile genetice sau hri cromosomale, n care distana
dintre gene este o distan relativ exprimat n uniti de recombinare sau procente de
crossing-over. Unitatea de recombinare a fost denumit centimorgan sau morganid (1
morganid se echivaleaz cu 1% de crossing-over).
Cartarea genelor scoate n eviden faptul c ele sunt plasate liniar pe cromosom, dar
distribuia lor nu este uniform, astfel c lungimea total a cromosomului nu poate servi
ca un indicator al activitii genetice a acestuia.

212

Curs 19. DETERMINISMUL GENETIC AL SEXELOR

Fenomenul de sexualitate presupune mperecherea organismelor de sex opus
spre a realiza unirea gameilor n cadrul procesului de fecundaie n urma cruia
rezult zigotul, punctul de plecare n ontogeneza unui nou organism.
Momentul cheie n procesul de sexualitate este meioza. n meioz se stabilete
destinul viitorului organism cnd are loc asortarea independent a perechilor de factori
ereditari cu toat gama de evenimente ce au loc dup acest fenomen: separarea i
njumtirea cromosomilor, reunirea i refacerea, n urma fecundaiei, a garniturii diploide
de cromosomi.
Ca urmare a cercetrilor efectuate asupra a numeroase organisme, s-a ajuns la
concluzia c pe cromosomii sexului se gsesc plasate i alte gene, toate constituind un
grup de linkage, fenomen denumit X-linkage.
Genele plasate pe autosomi se numesc gene autosomale, iar genele plasate pe
cromosomul de sex X se numesc X-linkate sau heterosomale.
La Drosophila melanogaster, ca i la alte organisme cu determinism genetic
asemntor, la organismul mascul (XY) genele care se afl plasate pe cromosomul X se
manifest nestingherit indiferent dac sunt dominante sau recesive.
Acest fapt este posibil deoarece cromosomul X de la mascul nu are omolog, astfel
c pentru genele X-linkate se manifest fenomenul de hemizigoie (masculii sunt hemizigoi
pentru caracterele X-linkate).
La femele (XX), genele plasate pe cromosomul X se manifest numai n stare
homozigot.
n afara genelor localizate pe cromosomul X, au fost depistate i gene localizate pe
un alt heterosom, i anume cromosomul Y, ele fiind Y- linkate, manifestndu-se exclusiv la
organismele ce conin cromosomul Y.
Genele plasate pe cromosomul Y se transmit n mod normal de la tat la fii la
acele organisme la care exist un determinism cromosomal asementor celui de la
Drosophila. Ereditatea transmis prin intermediul cromosomului Y a fost denumit
holandric, nsemnnd o transmitere n ntregime pe linie patern a unor caractere.

213

Tipuri de determinism genetic al sexelor

Cercetrile efectuate asupra a numeroase organisme, au permis identificarea a 2
categorii de determinism genetic al sexelor: determinism cromosomal i determinism
genic.
n cazul determinismului cromosomal al sexelor, au fost descrise 2 tipuri
distincte:

Cu femele homogametice (organisme ce produc ovule de un singur tip) i masculi

heterogametici (ce produc spermatozoizi de 2 tipuri);

Cu femele heterogametice (care produc ovule de 2 tipuri) i masculi

homogametici (ce produc spermatozoizi de un singur tip).

Din prima categorie fac parte organisme la care n determinarea sexului femel
intervin doi heterosomi omologi notai XX, iar la mascul intervin doi heterosomi
neomologi XY.
Din aceast categorie face parte tipul Drosophila, care se ntlnete att la diptere (la
care a fost identificat) ct i la alte organisme cum sunt mamiferele (inclusiv omul) i unele
plante (spanacul, hameiul, cnepa).
Tipul Drosophila este cel mai rspndit n natur. Combinarea probabilistic a gameilor
femeli ce conin numrul corespunztor de autosomi i un cromosom X cu gamei masculi, ce
pot fi de 2 tipuri: unul conine cromosomul X cellalt cromosomul Y, se obin organisme
femele i mascule n proporie egal (50 % XX i 50 % XY). Conform acestui mod de
transmitere raportul de segregare dintre cele dou sexe este de 1 : 1.
n cazul mamiferelor, prezena celor 2 heterosomi X la organismul femel i doar a unui
cromosom X la sexul mascul ar conduce la diferene mult prea mari ntre cele dou sexe,
dac ar funciona ambii cromosomi X la femele. Murray Barr i Edward Bertram, au realizat
o serie de observaii asupra cromosomilor de la pisicile femele i au constatat c unul dintre
cromosomii X este inactivat prin heterocromatinizare, el aprnd sub forma unui corpuscul
nuclear intens colorat care a primit denumirea de corpuscul Barr sau cromatin sexual.
O variant a tipului Drosophila este subtipul Protenor, la care femela prezint
perechea XX iar masculul XO, ceea ce nseamn c sexul mascul este condiionat de
absena unuia dintre cromosomii X. Astfel, femela are un numr par de cromosomi, iar
masculul are un numr impar. Acest subtip este mult mai rar n natur, el fiind ntlnit la
unele nevertebrate.

214

Din a doua categorie face parte tipul Abraxas sau pasre, n care femelele
heterogametice conin heterosomi neomologi XY sau ZW, iar masculii homogametici au
heterosomi omologi XX sau ZZ. Acest mecanism a fost identificat iniial la fluturele
Abraxas grossulariata, iar ulterior la unele nevertebrate, amfibieni, reptile i la toate speciile
de psri.
nrudit cu acest mecanism este subtipul fluture , la care organismele femele prezint un
singur cromosom X (XO), iar masculii conin perechea XX. Si acest tip de determinism
genetic al sexelor este mai rar ntlnit n natur.
Exist, ns, i alte tipuri de determinism al sexelor. De exemplu la albine, matca i
albinele lucrtoare sunt diploide pe cnd masculii sunt haploizi, derivnd partenogenetic, din
ovule nefecundate. La rndul lor, formarea spermatozoizilor are loc prin mitoz.
n cazul plantelor i animalelor hermafrodite, acelai organism, produce att gamei
masculi ct i femeli ceea ce nseamn c informaia genetic necesar pentru ambele sexe, se
gsete n acelai organism. Prin urmare, acelai genotip codific ambele sexe, iar la
animalele hermafrodite mediul determin care dintre cele dou fenotipuri sexuale vor fi
exprimate.
La melc (Helix pomatia) exist o gonad care, pornind de la celule situate apropiat
unele fa de celelalte, produce att ovule ct i spermatozoizi.
La rm, ovulele i spermatozoizii sunt produse n gonade separate localizate n
segmente diferite ale corpului.
La viermele marin Bonellia, sexele sunt separate, iar indivizii sunt fenotipic foarte
diferii ntre ei: femelele sunt de dimensiuni foarte mari, au un corp globular de 5 cm, cu o
tromp absorbant de cca 10 cm, n timp ce masculii sunt microscopici (1-2 mm) i triesc ca
parazii ai femelei. Ovulele fecundate, se dezvolt ca femele n absena femelelor adulte; n
prezena acestora sau a unui extract din trompa femelei, ovulele fecundate se dezvolt ca
masculi.
La mamifere, dei formula heterosomal este asemntoare celei de tip drosofila,
exist i unele diferene. Astfel, prezena cromosomului Y determin masculinizarea iar
absena lui determin feminizarea. Hormonii influeneaz dezvoltarea sexului. Pe lng gene
care condiioneaz formarea sexului, cromosomii de sex conin i gene care nu au nicio
legtur cu diferenierea acestuia, dar care determin nsuiri sex- linkate. La psri (cu
femele heterogametice i masculi homogametici) culoarea penajului este un caracter sex
linkat, care este folosit i n practic, permind sortarea puilor dup sex, imediat dup
ecloziune. De exemplu, gena pentru culoarea penajului este sex-linkat, iar n stare
215

hemizigot, determin la rasa Plymouth porumbac, alternana de dungi albe i negre (1:1),
iar n dublu exemplar, masculi cu dou dungi albe la una neagr.
Exist i gene cu localizare autosomal, care sunt influenate diferit de sex (se
manifest diferit de la un sex la altul).
n acest caz, este vorba de sex influenare fenomenul prin care unele caractere
apar la ambele sexe, dar au o expresie mai pronunat la unul dintre sexe.
De exemplu, calviia este determinat de o gen cromosomal ce se manifest ca
dominant la brbai i ca recesiv la femei. n acest caz se consider c exprimarea genelor
respective este influenat i de anumii hormoni.
Dimorfismul sexual, se caracterizeaz prin trsturi specifice pentru un sex, anumite
caractere manifestndu-se doar la un anumit sex. Acest fenomen se numete sex-limitare.
De exemplu, producia de lapte la taurine i de ou la gini. Dei se manifest doar
la un sex, caracterele de sex-limitare sunt transmise prin ambele sexe. De exemplu, calitatea
de a fi bune productoare de lapte, se transmite la fiice nu numai prin femele ct i prin
masculi (tauri).

Curs 20. EREDITATEA EXTRANUCLEAR

n marea lor majoritate, caracterele ereditare sunt determinate de gene
localizate n nucleu. Comportamentul acestor gene se supune legilor formulate de
Mendel i Morgan.
n unele cazuri ns, s-a constatat c unele caractere ereditare se transmit
preferenial pe linia unui genitor, de regul a genitorului matern, indiferent de structura
genetic nuclear a acestuia sau a genitorului patern (homozigot dominant - AA,
heterozigot Aa sau homozigot recesiv - aa), ceea ce nseamn c aceste caractere nu
se supun legilor mendeliene ale ereditii.
Asemenea caractere, nu sunt determinate de gene localizate n nucleu ci de gene
extranucleare localizate, n principal, n organitele citoplasmei celulei eucariote
(mitocondrii i cloroplaste).
Transmiterea pe linia genitorului matern efect descris uneori ca ereditate de
tip matern- are la baz specificul gameilor: dac din punct de vedere cantitativ
organizarea nuclear a gametului mascul este identic cu cea a gametului femel, ntre
gameii de sex opus apar diferene cantitative n ceea ce privete citoplasma.
216

Astfel, gametul femel (ovul la animale, oosfer la plante), conine o cantitate

incomparabil mai mare de citoplasm fa de gametul mascul (spermatozoizi la animale,
nucleu spermatic la plante), al crui nucleu este nconjurat doar de un strat pelicular de
citoplasm.
n consecin, n citoplasma gametului femel se vor gsi mai multe gene
extranucleare, asigurnd transmiterea preferenial a caracterelor determinate de
acestea, pe linia genitorului matern.
Principalele gene extranucleare sunt localizate n mitocondrii i cloroplaste,
organite caracteristice celulelor eucariote.
n celula eucariot interacioneaz sisteme genetice multiple:
cel puin dou la animale (nucleu i mitocondrii) i
trei la plante (nucleu, mitocondrii i cloroplaste).
Genomurile organitelor celulare caracterizate pn n prezent sunt reprezentate de
cte o molecul circular de ADN, care a primit notaia de ADNmt pentru mitocondrii sau
de ADNcp pentru cloroplaste.
n cazul unor eucariote inferioare, ADNmt este reprezentat dintr-o molecul
liniar.
De obicei, n fiecare organit celular exist cteva copii de molecule de ADN, iar
prin faptul c celulele conin un numr mare de organite, se poate spune c exist mai multe
genomuri extranucleare per celul.
Dimensiunile acestor genomuri (mitocondrial si cloroplastic) variaz foarte mult
ntre diferitele specii de eucariote.
n cazul mitocondriilor, fiecare celul vegetal sau animal conine cca. 100
organite, al cror ADNmt reprezint nu mai mult de 1 % din genomul nuclear. n unele cazuri
ns, cu este cel al ovulelor fecundate de broasc, numrul mitocondriilor poate ajunge la 1
milion astfel c el reprezint 99 % din ADN ul celular. Numrul de molecule de ADN per
organit este de regul cuprins ntre 5 i 20.
n celula eucariot de la plantele superioare, se gsesc cteva zeci de cloroplaste, n
care se afl de obicei 20-40 molecule de ADNcp circular care reprezintpn la 15 % din
totalul ADN circular.
n ceea ce privete masa molecular a ADN n mitocondriile din celulele vegetale, se
gsete o cantitate mult mai mare dect cea din celulele animale. Mrimea genomului
cloroplastelor este mult mai uniform, comparativ cu cel al mitocondriilor.
217

Fa de genele extranucleare localizate n organite celulare, la unele specii de

eucariote au mai fost evideniate i alte tipuri de gene cu localizare citoplasmatic. Este
cazul fenomenului killer de la protozoarul Paramecium aurelia. Tulpinile killer Paramecium
elibereaz n mediu o substan toxic numita paramecin, care este letal pentru alte tulpini
de protozoare. Fenotipul killer este dat de prezena unor particule citoplasmatice, numite
particule kappa, a cror meninere este dependent de existena unei gene dominante cu
localizare nuclear (gena K).
La parameci, a fost evideniat un tip special de conjugare asociat cu fenomenul
de autogamie care asigur transferul ntre celule a particulelor kappa.
Dac celulele acceptoare sunt KK sau Kk, particulele kappa sunt multiplicate i
determin sinteza de paramecin.
Dac paramecii acceptori sunt kk multiplicarea particulelor kappa i producerea
de paramecin nu sunt posibile, iar celulele respective rmn sensibile la toxina produs
de ali parameci.
Cercetrile efectuate n ultimii ani asupra particulelor kappa, au evideniat faptul c
acestea sunt de fapt bacterii simbionte din specia Coedobacter taeniospiralis. Aceast
bacterie conine informaia genetic necesar sintezei paramecinei, substan pe care astfel o
i produce.

Genomul mitocondrial
Mitocondriile sunt organite celulare care au rolul de a stoca energia sub form
chimic sintetiznd molecule de adenozin trifosfat (ATP) care particip la majoritatea
proceselor metabolice. n cadrul acestor reacii, ATP este degradat elibernd astfel energia
stocat.
Mitocondriile au o form sferic sau elipsoidal, cu un diametru de 0,3- 0,7 i o
lungime de 1-7 .
Genomurile mitocondriale variaz n ceea ce privete mrimea:
La animalele superioare genomul mitocondrial este mai mic, fapt ce a permis
secvenierea complet (la om, oarece sau bovine). Dimensiunea genomului mitocondrial la
asemenea organisme este n medie de aproximativ 16,5 kb. Cantitatea de ADNmt per celul
este de 1 % fa de ADN nuclear, deoarece fiecare mitocondrie conine mai multe copii
ADN, iar numrul de mitocondrii per celul este mare.
218

Plantele prezint o variaie foarte mare n ceea ce privete mrimea ADNmt, cea
minim fiind de aproximativ 100 kb.
Numrul de gene mitocondriale variaz foarte mult ntre speciile examinate: de la 5
gene la Plasmodium falciparum (parazitul malariei), la 37 gene la om, 58 gene la Arabidopsis
thaliana, 35 gene la Saccharomyces cerevisiae sau chiar 94 de gene la Reclinomonas
americana. n general, genele mitocondriale codific pentru dou tipuri de ARNr, pentru
toate tipurile de ARNt necesare pentru buna desfurare a biosintezei proteice i pentru un
numr variat de proteine mitocondriale. Genele mitocondriale de la mamifere conin introni.
Genele mitocondriale se transmit ereditar de la o generaie la alta nonmendelian.
La animalele superioare, din cauz c ovulele conin mai mult citoplasm dect
spermatozoizii, iar n unele cazuri spermatozoizii sunt complet lipsii de citoplasm,
transmiterea ereditar a mitocondriilor este uniparental matern.
La obolanii de laborator, unele linii conin ADNmt care difer, ntr-o mic msur,
prin secvena nucleotidelor. Dac se ncrucieaz dou linii diferite n ceea ce privete
ADNmt, descendenii motenesc tipul de ADNmt matern. Deci este vorba de ereditate nonmendelian. i la plantele superioare mitocondriile se transmit pe linie matern.
La drojdii (Saccharomyces cerevisiae, S. carlsbergensis) transmiterea ereditar a
mitocondriilor este biparental, celulele haploide care fuzioneaz sexuat pentru a forma
zigotul sunt egale ca mrime i conin cantiti egale de ADNmt. Este vorba deci de o
transmitere biparental.
n cazul ncrucirii unei linii de drojdii mutante la nivelul ADNmt, de pild pentru
gena ce determin rezistena la cloramfenicol, cu tipul normal (slbatic) sensibil la
cloramfenicol, zigotul diploid conine un amestec de mitocondrii normale i mutante. Prin
mitoze repetate, zigotul d natere la celule diploide prin nmugurire. n aceti muguri
ptrund numai un numr redus de mitocondrii, astfel c prin replicare mitotic repetat, o
celul poate primi ocazional numai mitocondrii normale, iar alta numai mitocondrii mutante.
Prin acest proces probabilistic, de segregare mitotic, apar celule diploide de drojdii cu un
singur tip de mitocondrii.
Datorit transmiterii biparentale a mitocondriilor, la drojdii s-a evideniat fenomenul
recombinrii genetice ntre ADNmt de origini diferite.
n genomul mitocondrial de la drojdii exist un numr similar de gene, dei el
are dimensiuni mai mari ca cel de la mamifere.
219

n genomul mitocondrial de la drojdii, au fost indentificate diverse tipuri de

restructurri, mai ales deleii, prin care apar tulpinile petite. Toate mutantele de acest
tip, se caracterizeaz prin pierderea funciilor mitocondriilor, astfel c tulpinile de acest tip
supravieuiesc numai datorit capacitii alternative a drojdiilor de a tri n mediu aerob
sau anaerob.
Genomul mitocondrial uman este reprezentat de o macromolecul de ADN alctuit
din 16569 perechi de nucleotide n care se gsete un numr de 37 gene.
Prin mutaii ale acestor gene apar maladiile genetice mitocondriale umane. Un
exemplu n acest sens este neuropatia optic Leber caracterizat prin pierderea acut sau
subacut a vederii i care se transmite ereditar pe linie matern.
Aparatul de sintez proteic a organitelor celulare are i el o origine mixt: cel mai
multe dintre proteinele organitelor sunt preluate de citoplasm fiind codificate de ADN
nuclear i doar o mic parte a proteinelor sunt codificate de gene specifice localizate n
genomul organitelor.
Genele mitocondriale sunt transcrise de o ARN polimeraz care, probabil, este codificat
de gene nucleare. La nivelul mitocondriilor sunt sintetizate doar moleculele de ARNm ce au
transcris genele mitocondriale, precum i catenele polipeptidice codificate de acestea,
mitocondriile reprezentnd singurul sediu unde acest mesaj genetic se poate exprima.
Dintre caracterele plantelor codificate de gene mitocondriale, se poate meniona
sterilitatea masculin citoplasmatic, trstur cu specificaii practice deosebite.
Plantele respective nu produc polen activ, n schimb componentele sistemului reproductor
femel este normal, plantele fiind astfel fertile, dar la nivelul lor nu se poate realiza
autofecundarea (autopolenizarea). Acest tip de sterilitate este utilizat n producerea de
semine de porumb hibrid. S-a dovedit c fenomenul nu este controlat de gene nucleare ci se
datoreaz unor rearanjamente masive de ARNmt.

Genomul cloroplastic
Una dintre primele observaii referitoare la ereditatea extranuclear la plante, a
fost cea a variegrii frunzelor (fenotipul albomaculatus) la numeroase specii de plante.
n 1909, Carl Correns a realizat experimente referitoare la modul de transmitere a
caracterelor la planta Mirabilis jalapa constatnd c anumite caractere nu se supun
legilor mendeliene ale ereditii.
S-a evideniat faptul c unele plante pot avea trei tipuri de lstari:
220

 unii care prezint toate frunzele verzi,

unii care prezint toate frunzele albe i
alii care au frunze variegate (frunze verzi cu pete albe de dimensiuni diferite
figura).

Deoarece pe toate tipurile de lstari se pot forma flori, s-au putut realiza ncruciri
controlate pentru a clarifica modul de transmitere a fenotipului modificat.
n acest mod s-a evideniat faptul c motenirea culorii frunzelor se face exclusiv pe
linie matern.
Explicaia fenomenului este urmtoarea:
-

culoarea verde depinde de prezena pigmenilor clorofilieni care se gsesc n

cloroplaste, iar grunciorii de polen nu conin cloroplaste;

segregarea cloroplastelor n celulele fiice nu este determinat de nici o

trstur a aparatului mitotic ci de diviziunea citoplasmei;

celulele din esuturile vegetale de culoare alb-glbuie conin cloroplaste lipsite

de clorofil.

Cloroplastele au un genom similar celui mitocondrial alctuit din mai multe copii
de ADNcp, cu o lungime ce variaz ntre 120 i 200 kb.
ADNcp conine aproximativ 140 de gene ce codific toate tipurile de ADNr, ADNt
precum i pentru un numr relativ mare de proteine specifice (50) (inclusiv ADN polimeraza
i unele proteine ribozomale). Ribozomii cloroplastici conin, pe lng ARNr 16S i 23S, nc
dou tipuri de ARNr de dimensiuni mai mici (ARNr 5S i ARNr 4,5S). n ce privete ARNt,
la nivelul ADNcp codificate 30 tipuri de molecule.

221

Ca i n cazul mitocondriilor, genele cloroplastice sunt transcrise i apoi traduse de

aparatul propriu al organitelor respective.
Replicarea ADNcp este tot de tip semiconservativ, se realizeaz de-a lungul ntregului
ciclu celular, prin utilizarea enzimelor specifice din cloroplaste.
Experimentele din ultimii ani au permis determinarea secvenei complete a nucleotidelor
din ADNcp de la unele specii vegetale observndu-se c, dei lungimea moleculelor de
ADNcp variaz foarte mult, organizarea genelor precum i numrul lor este asemntor.
Genele cloroplastice identificate au evideniat mai multe tipuri de funcii: 45 de gene
codific diferite tipuri de ARN, 27 codific proteine implicate n exprimarea genelor, 18
codific proteine ale membranei tilacoidale, iar alte 10 reprezint funcii legate de transferul
de electroni.

Originea genomului mitocondrial i cloroplastic

Studiul aprofundat al celulei eucariote a demonstrat c pe lng aparatul genetic
nuclear, care are o pondere deosebit n structura i metabolismul celualar, exist aparate
genetice extranucleare n organite, cu o relativ independen de cel nuclear i care mresc
posibilitile de variabilitate genotipic a organismelor i capacitatea lor de adaptare la
mediu.
Cercetri privind originea i evoluia ADN extracelular au dus la ipoteza c
organitele celulare au aprut datorit unor evenimente de endosimbioz, n care o
celul primitiv a capturat bacterii care realizau funcii speciale i care au evoluat spre
organite sau cloroplaste.
Cele mai importante argumente n sprijunul acestei ipoteze sunt urmtoarele:
-

structura i funciile unor organite prezint similitudine cu celulele procariote

(bacterii i alge albastre- verzi);

ADN din organite se prezint sub forma unui nucleotid similar cu cel bacterian;

Cantitatea de ADN per organit este similar cu cea dintr-o celul bacterian;

Replicaia genomului organitelor se realizeaz similar cu cea a bacteriilor, fiind

de tip procariot; ea este independent de replicaia materialului genetic nuclear;

222

Genele extranucleare din organite sunt capabile de mutaii i recombinare

genetic, independent de materialul genetic al nucleului;

n organite se sintetizeaz diferite tipuri de ARNr i ARNt, avnd loc o sintez

proteic proprie, pe baza unor ribozomi particulari independeni de cei din
citosol;

Genele extranucleare din organite se caracterizeaz printr-o transmitere

ereditar non-mendelian, nemanifestnd linkage cu nici unul din cromosomii din
nucleu;

Organitele celulare (mitocondrii, cloroplaste) nu pot aprea de novo n celul ci

numai prin diviziunea celor pre-existente.

Evident ca independena acestor organite este numai relativ, deoarece ele au realizat n
timp un grad nalt de integrare cu celula gazd i ca urmare funciile lor sunt parial
dependente de aparatul genetic nuclear i de importul de proteine, enzime etc. din citosol.

223

Curs 21. RECOMBINAREA GENETIC LA EUCARIOTE

Recombinarea genetic este procesul prin care are loc transferul intra- sau
intermolecular a unor secvene de ADN, avnd ca rezultat modificri n nlnuirea
genelor sau a unor pri din gene. Se poate produce astfel, reasortarea unor nucleotide la
nivelul aceleiai molecule de ADN sau ntre molecule separate, rezultnd, n final, una sau
dou molecule recombinate.
La eucariote procesul de recombinare genetic este legat de fenomenul
sexualitii i se realizeaz n special n cursul meiozei, fiind condiionat de realizarea
contactelor ntre cromosomi urmat de disjuncia independent a perechilor de
cromosomi (bivaleni).
n cazul organismelor eucariote au fost descrise 3 tipuri de recombinare genetic:
-

recombinarea intra-cromosomal prin crossing-over (schimbul reciproc de

segmente cromosomale);

recombinarea inter-cromosomal prin disjuncia independent a cromosomilor

omologi;

recombinarea genetic nereciproc prin conversie genetic.

Recombinarea intra-cromosomal (crossing-over)

Se realizeaz att n meioz ct i n mitoz.Ea poate avea loc intergenic, ct i
intragenic.
Recombinarea intragenic este un fenomen rar. Acest fenomen manifest interferen
negativ care determin creterea probabilitii ca un al 2-lea crossing-over s aib loc n
apropierea primului.
n meioz, formarea bivalenilor presupune participarea a 2 cromosomi de origine
diferit (matern i patern), ntre care se stabilesc contacte intercromatidice (sinapse) ce
conduce la formarea unei structuri specializate numit complex sinaptinemal.
Complexul sinaptinemal este o structura tripartita ce consta din 2 regiuni
paralele si un element central (figura). Este de natura proteica care se formeaza
in cursul meiozei intre 2 cromosomi omologi si care se pare ca mediaza formarea
de bivalenti, a sinapselor si recombinarea (crossing-over).

224

Importana

complexului

sinaptinemal

desfurarea

recombinrii

genetice

intracromosomale este dovedit de faptul c la organismele la care nu se produce acest

complex, nu are loc procesul de crossing-over.
Formarea chiasmelor este dependent de sinteze proteice ce au loc la sfritul zigotenului.
Procesul de recombinare genetic implic ruperea i reunirea cromatidelor
participante, fapt ce conduce la un schimb reciproc de segmente de ADN de dimensiuni
egale i la apariia de cromosomi (iar apoi de gamei) recombinai (Figura).

Fenomenul de crossing-over se realizeaz mai mult sau mai puin randomic, de-a
lungul perechilor de cromosomi omologi. Astfel, probabilitatea realizrii recombinrii
ntre 2 loci crete odat cu distana dintre acetia pe cromosomi.

225

Deoarece procesul de crossing-over afecteaz numai 2 dintre cromatidele bivalenilor,

doar 50 % dintre produii meiozei sunt de tip recombinat, restul de 50 % sunt de tip
parental.
S-a constatat c ntre genele plasate pe cromosomii omologi, n afar de crossing-over
simplu, pot aprea i crossing-overe multiple (Figura). Dac procesul de recombinare are
loc la nivelul unor gene heterozigotze, indiferent de numrul de crossing-overe ce se
realizeaz, procentul de recombinare nu depete 50 %.

In Mitoza
Procesul recombinrii genetice poate avea loc i n celulele somatice. Schimburile
intercromatidice (sister chromatid exchange) au fost evideniate mai ales n celulele
mamaliene aflate n cultur in vitro, ele nefiind urmate, de obicei, de modificri fenotipice
deoarece cromatidele implicate sunt identice.

226

Schimburile intercromatidice (sister chromatid exchange)

Fenomenul recombinrii mitotice a fost studiat n special n cazul fungilor
(Aspergillus nidulans, S. cerevisiae) la care n ciclul de via predomin haplofaza.
Recombinarea mitotic poate avea loc n cursul metafazei i presupune asocierea
cromosomilor omologi i realizarea schimbului genetic nainte de diviziunea
centromerului.
Procesul de crossing-over se poate produce i la nivelul aceleiai gene (crossing-over
intragenic).
n mecanismul molecular al recombinrii genetice de tip crossing-over, sunt implicate
proteine specifice, procesul recombinrii fiind asociat cu cel de reparare genetic.

Recombinarea inter-cromosomal
Are loc prin disjuncia independent a perechilor de cromosomi care reprezint
suportul material pentru disjuncia perechilor de factori ereditari.
Segregarea independent are loc la trecerea celulelor sexuale de la metafaza I la
anafaza I, cnd are loc aezarea ntmpltoare a cromosomilor de origine matern sau
patern deasupra sau dedesubtul planului ecuatorial al plcii metafazice.
Acest comportament al cromosomilor de origine maten, care se mperecheaz cu cei
de origine patern i apoi separarea perechilor respective, a fost comparat de ctre Muller
227

cu formarea perechilor de dansatori n timpul dansului i separarea lor la sfritul

acestuia. Din aceast cauz, Muller a denumit acest comportament dansul cromosomilor .
Cu ct numrul cromosomilor i a genelor coninute este mai mare cu att numrul de
combinaii posibile de gamei i de organisme este mai mare. Posibilitatea ca un organism
s fie asemntor cu altul este de (1/2)2n, n care n =numr de perechi de cromosomi, iar
2n reprezint numrul total de cromosomi din complementul speciei respective.

Conversia genic
Este o recombinare nereciproc. In cadrul conversiei genice, un segment din
molecula de ADN a unei cromatide se desprinde i se ataeaza de alta cromatida.

Deosebirea dintre Conversia genica si crossing over

Este posibil, in acest mod, ca un cromozom sa conina o gena in doua exemplare
(daca transferul s-a realizat intre cromozomi omologi), iar altul o gena in minus.
Are loc cu o frecventa mai mare in cursul diviziunii meiotice dar poate avea loc
si in celulele somatice.
Ea a fost evideniat prin analiza tetradelor la ciupercile din genurile Saccharomyces,
Aspergillus, Neurospora unde apar abateri de la raportul normal de segregare alelic, ca i
cum se produce o transformare a alelei A n a (Figura).
228

Frecvena recombinrii genetice nereciproce poate crete de la un capt la altul al unui

locus genic, fenomen numit polarizarea conversiei. Astfel , la fungi, n locul raportului
de segregare normal de
4 : 4, se ntlnesv valori diferite ale acestui raport: 6 : 2, 5 : 3, 7: 1 sau chiar 8 :0.
fenomenul conversiei genice a fost evideniat i la plante, n cazul unor gene ce intervin n
determinismul pigmentaiei, precum i la virusuri (n special bacteriofagi).
Unii autori consider c, de fapt, conversia genic este consecina unui proces de
recombinare, n urma cruia apar nepotriviri ale unor baze azotate situate pe
cromatide omoloage. Aceste zone de nepotrivire sunt reparate prin excizie i prin
adugarea nucleotidei corespunztoare. Prin reparaie poate reaprea astfel, tipul
normal (figura).

229

Curs 22. RECOMBINAREA GENETIC LA PROCARIOTE

La procariote au fost descrise mai multe ci de transfer de material genetic:
transformare genetic, conjugare, sexducie i transducie, asociate cu mecanisme ce
asigur integrarea noii informaii genetice n genomul gazdei. Indiferent de natura sa,
transferul de gene reprezint un fenomen n care moeculele informaionale i schimb gazda,
avnd de traversat dou bariere celulare: una la ieire din celula donatoare i alta la intrarea n
celula receptoare.

1. Transformarea genetic
Fenomenul transformrii genetice a fost descoperit n 1928 de ctre Griffith, n urma
experimentelor realizate cu pneumococi asupra oarecilor. Ulterior , Avery, Mac Leod i
McCarthy, au descoperit, n 1944, c agentul transformant este reprezentat de ADN izolat din
celulele bacteriene.
Transformarea genetic la bacterii presupune transferul unui fragment de ADN
(cromosomal sau plasmidial) de la o bacterie donatoare i ncorporarea acestuia n
genomul unei bacterii receptoare.
Asemenea fragmente de ADN sunt, n general, de dimensiuni mari (n medie de 20.000
perechi de nucleotide), putnd conine gene utile care, ptrunse n bacteria receptoare, pot
nlocui printr-un proces de recombinare o secven de nucleotide omoloag din genomul
acesteia. Informaia genetic nou integrat n cromosomul bacteriei receptoare este transmis
stabil de-a lungul generaiilor.
Fenomenul de transformare genetic a fost evideniat prima dat la pneumococul
Diploccocus pneumoniae i ulterior la Bacillus subtilis, Escherichia coli, Haemophilus
influenzae, Staphylococcus sp., etc.
Pentru a putea prelua ADN exogen din mediul extracelular, celulele receptoare trebuie
s manifeste o anumit stare specific numit stare de competen.
Aceasta presupune:
ca peretele celular i membrana celular ale celulei bacteriene receptoare s fie
permeabile pentru ADN exogen,
iar celula s se afle ntr-o anumit faz a ciclului de via care s permit
acceptarea acestuia.
n cursul realizrii competenei are loc activarea unor receptori specifici
localizai la nivelul peretelui celular cu rol de legare a ADN exoged la suprafaa
230

celular. Numrul receptorilor activi, variaz de la o specie bacterian la alta, de exemplu: la

Streptococcus au fost identificai 80 de receptori, la Bacillus subtilis 50, iar la Haemophilus
doar 4 receptori.
La unele specii bacteriene, starea de competen este o stare natural, fiziologic,
aprnd ntr-o anumit etap a ciclului de via i dureaz un anumit interval de timp. De
exemplu, la Azotobacter, Staphylococcus, Pneumococcus competena este maxim pe
parcursul fazei logaritmice, n timp ce la alte specii Bacillus, Pseudomonas,
Methylobacterium- competena este maxim la trecerea de la faza logaritmic la cea
staionar.
n cazul altor specii, starea de competen poate fi indus prin tratamente specifice
(oc de temperatur, adugarea unor ioni etc.).
ntr-o populaie bacterian, proporia celulelor capabile de a prelua ADN exogen
poate fi estimat pe baza frecvenei de transformare, urmrind un anumit marker genetic.
Pentru a se obine o frecven ridicat de integrare/ transformare, este necesar ca ADN
transformant s provin de la o tulpin bacterian nrudit (ADN omolog). n cazul utilizrii
unor organisme nenrudite (ADN heterolog), eficiena procesului de transformare este foarte
sczut.
Multe bacterii se pot liza n mod natural, mai ales n timpul etapelor finale ale
ciclului celular. n aceste condiii, ADN este eliberat n mediu extracelular de unde
poate fi preluat de alte bacterii aflate n aceeai populaie (figura).

231

Transformarea. A) preluarea ADN eliberat de celulele bacteriene moarte; formarea unui

complex de legare ADN la suprafata peretelui celular ; degradarea enzimatica a uneia dintre
catenele ADN dublu catenar in nucleotidele componente; B) integrarea in cromozomul
bacterian a catenei ramase.
La bacterii, procesul natural de transformare genetic (cu fragmente de ADN
cromosomal eliberat prin metoda lizei celulelor bacteriene) se realizeaz n mai multe
etape:
1. legarea reversibil (adsorbia) a moleculelor de ADN dublu catenar, la nivelul
situsurilor receptoare aflate pe suprafaa celular;
2. preluarea ADN exogen de ctre celulele competente;
3. convertirea ADN dublu catenar la forma monocatenar, prin degradarea uneia
dintre catenele moleculei iniiale;
4. integrarea segmentului de ADN monocatenar n cromosomul celulei receptoare;
5. segregarea i exprimarea fenotipic a noii informaii genetice integrate n genomul
celulei gazd.
Procesul de transformare este destul de rspndit n natur, mai ales n cazul tulpinilor
bacteriene nrudite, el jucnd un rol important n evoluia bacteriilor. Aceast concluzie este
ntrit i de observaia c transferul de gene prin transformare genetic are loc nu
numai pe orizontal (ntre bacterii nrudite) ci i ntre grupe de organisme nenrudite
(fenomen ce explic, de exemplu, rspndirea rezistenei la antibiotice).

2. Conjugarea bacterian
Conjugarea bacterian reprezint un mod de transfer unidirecional de
ADN de la o celul donatoare la o celul receptoare prin intermediul unei legturi
intercelulare directe (pil de sex) i condionat de prezena n bacteria donatoare a
unui element genetic specializat numit conjugon.

232

Formarea pilului de sex

Fenomenul conjugrii a fost descoperit n 1946 (de ctre Lederberg i Tatum) n urma
experimentelor cu tulpini de Escherichia coli ce conineau sau nu o plasmid specific
notat F. Din acest punct de vedere, celulele bacteriene care conin plasmida F (
factorul F) sunt notate F+, iar cele care nu conin aceast plasmid sunt notate F-.
n cazul bacteriilor Gram negative, n afar de plasmida F, funciile necesare
procesului de conjugare se gsesc la nivelul mai multor plasmide. De exemplu, n
cazul plasmidelor de rezisten la antibiotice (plasmida RP4) i plasmidele Col ce conin
determinani genetici pentru sinteza colicinelor.
Factorul F este alctuit din ADN dublu catenar circular cu o lungime de 94,5 kb
i n numr de 1-2 copii/celul. Transferul prin conjugare al acestor plasmide se
datoreaz prezenei unei regiuni specifice, regiunea tra, ce reprezint cca 30 % din
lungimea plasmidei F.

La nivelul factorului F sau se gasesc (figura):

- originea replicarii (oriV) si

- Originea procesului de transfer (oriT)

In absenta procesului de transfer din zona oriV, replicarea plasmidei F se face

bidirectional

Zona oriT este bogata in A-T si reprezinta zona de recunoastere pentru o enzima
(tip endonucleaza), care cresteaza una dintre catenele ADN.

233

Plasmida F
Cu excepia fectorului F, celelalte plasmide conjugative pot include i alte tipuri de
gene: pentru rezistena la antibiotice, toleran la metale grele, virulen patogenitate etc.
Studiile asupra procesului de conjugare efectuate la E. coli , au permis stabilirea
etapelor acestuia:

Formarea i stabilirea agregatelor de conjugare;

Pregtirea ADN pentru transfer

Transferul ADN conjugativ

Refacerea structurii circulare i dublu catenare a ADN transferat.

n prima etap are loc sinteza de ctre celula donatoare a pililor de sex structuri
specializate, tubulare, localizate la suprafaa celular, alctuite din molecule de pilin
(protein a crei sintez este codificat de gene plasmidiale).
A 2-a etap a conjugrii presupune intervenia unei proteine (enzima), codificat de
genele plasmidiale, care are rolul de a realiza o cresttur monocatenar la nivelul genei oriT
(originea transferului). La nivelul captului 5 al catenei de ADN crestat, se leag o
protein specific, codificat tot de gene plasmidiale de la nivelul regiunii tra. Are loc apoi,
transferul catenei crestate, ncepnd cu captul 5 , transferul fiind cuplat cu procesul de
234

replicare al plasmidei, conform modelului cercului rotativ. In acest fel, pe msur ce

procesul de replicare avanseaz, una dintre catenele vechi (cea crestat) se deplaseaz prin
pilul de sex n celula receptoare (Figura).
Crestarea ADN
plasmidial in celula
donatoare

Canal de
conjugare

a. Odata contactul stabilit, unul dintre

pilii celulei F+ se modifica devenind tub
sau canal de conjugare

c. In celula receptoare monocatena

este copiata in directia 5 3;
incepe refacerea structurii
circulare bicatenare.

b. Incepe replicarea ADNului

plasmidial. Capatul 5 al monocatenei de
ADN patrunde in celula receptoare dupa
modelul cercului rotativ

d. Celulele se separa, cu structurile

circulare bicatenare refacute.

Reprezentarea schematic a procesului de conjugare F+- F-.

235

In acelai timp, n celula donatoare are loc restabilirea structurii factorului F. la nivel
populaiei de bacterii, consecina transferului factorului F este masculinizarea acesteia, adic
se produce generalizarea caracterului F +al celulelor bacteriene.
Un tip special de conjugare este cel realizat ntre celulele bacteriene care conin
factorul F integrat n cromosom (celule de tip Hfr) i celulele de tip F (Figura).
Integrarea factorului F n cromosomul bacterian nu se realizeaz la ntmplare , ci la nivelul
unor situsuri ce prezint omologie ntre cele dou tipuri de molecule. Celulele rezultate n
urma unui asemenea proces de integrare , au primit denumirea de celule de tip Hfr (High
frequency of recombination).

Modalitatea specific de integrare a plasmidei F n cromosomul bacterian, face ca

secvena oriT s fie localizat aproape de una dintre marginile plasmidei linearizate i
integrate la captul acesteia, consecina fiind transferul specific al ADN monocatenar n
celula receptoare.
In a 3-a etap, n cazul transferului dintre bacteriile F+ i

F-, dup crestarea

monocatenar la nivelul secvenei OriT, ncepe transferul AND monocatenar reprezentat de o

scurt secven din plasmida F i apoi de o copie a AND cromosomal al gazdei. Cea mai
mare parte a plasmidei F rmne la nivelul celuilalt capt al cromosomului, i doar foarte rar
este transferat n celula acceptoare.
236

Cantitatea de informaie genetic transferat, proprie celulei donatoare, este direct

proporional cu timpul n care cele dou celule au stat n contact (cu ct contactul este
mai lung, cu att segmentul de ADN transferat va fi mai mare).
Astfel, pentru transferul complet al ADN cromosomal la E. coli sunt necesare
aproximativ 90-120 minute de contact ntre celule, n timp ce transferul plasmidei F din
bacteria F+ ntr-o bacterie F dureaz 2-3 min.
Procesul de transfer de segmente cromosomale din bacteria donor Hfr n cea
acceptoare F este urmat de cele mai multe ori de transformare genetic (fenomen
controlat de o serie de enzime sintetizate de gazd) ceea ce nseamn c poriuni din
respectivul segment se integreaz n genomul noii gazde fiind meninut i transmis
constant n generaiile urmtoare.
Procesul de conjugare dintre celulele Hfr i celulele de tip F servete la realizarea
hrilor cromosomale la bacterii , distana dintre gene (dispuse n ordine pe segmentul
transferat) exprimndu-se n uniti de timp (minute).

3. Sexducia
In cazul bacteriilor Hfr, plasmidele F rmn n mod normal integrate, astfel nct
diviziunile celulare succesive produc clone Hfr.
In anumite situaii, tulpinile Hfr au tendina de a redeveni F+, prin reversia
plasmidei F de la starea integrat la starea autonom n citoplasm.
Excizia plasmidei F poate fi corect sau eronat, n ultimul caz avnd loc un schimb
de material genetic ntre plasmida F i cromosomul gazdei, prin care plasmida
incorporeaz una sau mai multe gene cromosomale.
Ca urmare se formeaz o plasmid F modificat, denumit F care este capabil de
a transmite genele cromosomale integrate unei alte bacterii acceptoare, n cursul
procesului de conjugare.
Transferul de gene cromosomale bacteriene mediat de plasmidele de sex este numit
sexducie.
In urma conjugrii Fx F- se obin doar celule de tip F care sunt parial diploide
(merodiploid), coninnd alturi de genele proprii i gene similare provenite de la
bacteria donoare

237

4. Transducia fagic
Transducia fagic este procesul prin care un fragment din cromosomul
bacterian este transferat de la o bacterie la alta prin intermediul capsidei (nveliului
proteic) anumitor bacteriofagi temperai.
Fenomenul a fost descris iniial la bacteriofagi specifici unor tulpini de Salmonella
typhimurium, iar ulterior el a fost mai bine studiat n cazul fagului specific tulpinilor de E.
Coli .
In funcie de structura genetic a fagilor transductori i de mecanismul de
formare a materialului genetic al particulri fagice, au fost descrise dou tipuri de
transducie fagic:
transducie specializat i
transducie generalizat.
Bacteiofagii ce realizeaz transducia generalizat produc particule ce conin, n cea
mai mare parte, ADN provenit din bacteria gazd (din orice parte a cromosomului) i doar o
foarte mic parte genom fagic.
n cazul fagilor ce determin transducia specializat, ei produc particule ce conin
att gene fagice (majoritare) ct i gene cromosomale bacteriene provenite dintr-o anumit
regiune a cromosomului bacterian.

238

Mecanismul transductiei specializate

1) Infectia fagica
2) Hidroliza ADN
3) Impachetarea ADN in capsida fagica
4) Transductia fagului intr-o noua celula bacteriana
5) Recombinarea dintre cromozomul bacterian si ADN transdus de catre fag.
Cel mai cunoscut bacteriofag ce realizeaz transducie specializat este fagul .
n forma lui natural, fagul poate prelua, ca fag transductor, doar scurte secvene de ADN
din genomul gazdei n care s-a multiplicat (dup ce a parcurs ciclul lizogen), dimensiunea
acestora fiind limitat de capsida fagic. Secvenele pe care le poate prelua fagul sunt foarte
precise.
Tranducia generalizat este mediat de fagi viruleni precum i de anumii fagi
temperai ai cror genom nu se integreaz la nivelul unor situsuri specifice din cromosomul
gazdei (de exemplu fagul P1).

239

Transductia generalizata

Figura. Infectia bacteriei cu bacteriofagi (atasare la peretele celular baclerian si

injectarea ADN propriu in celula bacteriana)

Mecanismele moleculare ale recombinrii genetice

Pot fi:
1.Modelul "rupere-reunire
2.Modelul copierii alternative
3.Modelul "rupere i copiere
4.Recombinarea genetic general
5.Recombinarea la situs specific
240

6. Recombinarea "nelegitim"
1.Modelul "rupere-reunire", derivat din studiile genetice efectuate pe
bacteriofagi, presupune ca prim eveniment al recombinrii, ruperea celor dou
genomuri parentale la nivele similare pe ambele molecule de ADN.
Fragmentele rezultate se reunesc apoi ncruciat, prin crossing-over, formnd
genomuri recombinate.
Recombinarea nu depinde de molecule de ADN nou sintetizate ci determin
formarea de molecule ce provin, integral, din moleculele de ADN parentale.
n acest fel informaia genetic este transferat ntre cele dou genomuri
parentale.
2.Modelul copierii alternative consider c:

nu ar exista un schimb de ADN ntre genomul donatorului i cel al receptorului iar

sinteza moleculei de ADN recombinat are loc n cursul replicrii prin folosirea
alternativ, ca matri, a unei catene de ADN de la donator i a alteia de la
receptor.

Ca urmare, n una dintre catenele de ADN nou sintetizat o secven de nucleotide a

avut ca model nu segmentul corespunztor din ADN propriu ci secvena omolog
din ADN exogen.

n conformitate cu aceast ipotez, cromosomii recombinai sunt integral

sintetizai "de novo" i nu rezultai prin reunirea ncruciat a unor fragmente din
cromosomii parentali preexisteni.
3.Modelul "rupere i copiere"

preconizeaz formarea cromosomilor recombinai prin secionarea fizic a unui

genom parental i copierea celuilalt.
Prin acest mecanism, n cazul existenei a doi cromosomi parentali, se poate

forma un cromosom recombinat prin legarea unor fragmente vechi cu fragmente nou
sintetizate ce au fost copiate dup cellalt cromosom parental.
Dup Kornberg, motivul biochimic de baz rmne ruperea i reunirea, att la
procariote ct i la eucariote, dar realizarea lui se face prin mai multe ci i mecanisme
biochimice

241

4.Recombinarea genetic general

se poate realiza n diferite variante i cu denumiri diferite (recombinare

generalizat, normal, legitim, rec-dependent, nespecific etc.) i reprezint
schimbul unor fragmente de ADN cu un grad nalt de omologie.

La eucariote, acest tip de recombinare are loc n cursul meiozei, implicnd

participarea a doi cromosomi omologi, iar la procariote (la E.coli, de exemplu)
fenomenul depinde de factori celulari specifici (proteinele RecA, RecBC,
proteine de legare a ADN monocatenar, topoizomeraze, etc).

Acest tip de recombinare se manifest atunci cnd gradul de omologie genetic

ntre moleculele parentale ce interacioneaz este mare, prin omologie
nelegndu-se (dup Brooks-Low i Porter) identitate de secvene nucleotidice.

5.Recombinarea la situs specific (numit i specific sau special, localizat,

integrativ, rec-independent, aditiv etc)

Se poate produce ntre molecule de ADN cu un grad mic sau chiar absent de
omologie.

Acest tip de recombinare se realizeaz la nivelul unor situsuri particulare,

localizate pe una sau pe amndou dintre catenele parentale.
In derularea procesului respectiv sunt implicate enzime care recunosc n mod

specific aceste secvene. Au fost descrise dou variante ale recombinrii la situs specific:

la situs specific dublu i

la situs specific unic.

6.Recombinarea "nelegitim" (numit i aberant, neomolog, neobinuit,

Are n prezent cadrul conceptual cel mai confuz.

Ea a fost descris iniial pentru a caracteriza interaciunea dintre genofori n care

nu este implicat nici un fel de omologie, cum ar fi, de exemplu, formarea fagului
transductor specializat prin excizie eronat.

Cercetri mai recente au artat ns c multe din sistemele declarate iniial ca

nelegitime s-au dovedit ulterior a fi situs specifice, datorate unor secvene de
inserie.

242

CUPRINS

Curs 1. Genetic general..1

Curs 2. Structura acizilor nucleici12
Curs 3. Proprieti ADN21
Curs 4. Organizarea materialului genetic31
Curs 5. Organizarea celular35
Curs 6. Genomul eucariot..39
Curs 7. Genele si structura lor molecular..52
Curs 8. Sinteza replicativ a ADN60
Curs 9. Exprimarea informaiei genetice.80
Curs 10. Decodificarea mesajului genetic..103
Curs 11. Mutaiile i mutageneza118
Curs 12. Reglarea activitii genice138
Curs 13. Diviziunea celular156
Curs 14. Ereditatea mendeliana..169
Curs 15. Interaciuni genice179
Curs 16. Interaciuni non-alelice.187
Curs 17. Mecanismele ereditii la nivel celular197
Curs 18. Tezele teoriei cromozomale a ereditii..204
Curs 19. Determinismul genetic al sexelor 213
Curs 20. Ereditatea extranuclear..216
Curs 21. Recombinarea genetic la eucariote224
Curs 22. Recombinarea genetic la procariote..230

243