X

CUVNT NAINTE
Manualul de Citologie i Embriologie animal este destinat, n
principal, studenilor n medicin veterinar i n biologie, dar este util
i altor specialiti care se ocup de creterea, reproducerea,
exploatarea i pstrarea biosecuritii animalelor domestice, precum
medici veterinari, ingineri zootehniti, biologi i biotehnologi.
Prelund datele de microscopie optic, microscopie electronic,
embriologie i mbinndu-le cu rezultatele tiinifice obinute n
activitatea, de peste treizeci de ani din domeniul morfologiei normale
(macro- i microscopice) a autorului, s-a elaborat o lucrare
structurat logic, ancorat n realitile biologiei, creterii, exploatrii
i medicinei animalelor domestice. Lucrarea prezint nivelul celular,
tisular, organic i sistemic de organizare a organismului animal,
mpreun cu noiunile de embriologie aferente.
Se urmrete, astfel, ca instruirea actualilor studeni s se
realizeze metodic, de la simplu la complex, nct nsuirea
cunotiinelor s se fac raional i gradual, rezultnd o baz solid
de cunotiine fundamentale, cu implicaii practice, care s permit
nelegerea, perfecionarea continu i mbuntirea eficacitii
activitilor viitorilor absolveni .
Adresndu-se, n primul rnd, studenilor din anii nceptori ,
lucrarea a fost conceput innd cont de programa programa analitic
a disciplinelor de Biologie celular, histologie i embriologie de la
Facultatea de medicin veterinar din Bucureti i a disciplinelor de
Oraganizare celular ( citologie animal), Histologie i embriologie
animal de la Facultatea de Agricultur din Bucureti, specializarea
Biologie.
Astfel, Biologia celular ( citologia sau organizarea celular)
studiaz organizarea, structura, ultrastructura i funcionarea
celulelor animale, permind cunoaterea substratului celular al
fenomenelor biologice, iar "Embriologia" se ocup cu studiul
dezvoltrii ontogenetice, din momentul producerii gameilor, al
apariiei zigotului i pn la formarea ntregului organism animal.
Formaiunile sunt prezentate att cu denumirea n limba romn, ct
i cu denumirea internaional n limba latin, fapt ce are menire de
facilita reinerea lor de ctre studenii strini.
Organismul animalelor domestice conine o serie de substane
anorganice (ap, elemente i sruri minerale, etc.) i organice
(proteine, glucide, lipide, enzime, acizi nucleici, etc.), care nu
X
formeaz soluii la ntmplare, ci sunt organizate cu mare
precizie, intracelular sau extracelular, sub forma unor structuri i
ultrastructuri, care ndeplinesc roluri bine definite. La rndul lor,
celulele sunt grupate, morfologic i funcional n esuturi sau organe,
rezultnd organismul, ca un tot unitar.
Celulele care intr n alctuirea unui organ realizeaz o
structur stabil, asemntoare la specii diferite, fenomen cunoscut
sub denumirea de homeostazie structural. Pentru realizarea unei
astfel de structur coopereaz un mare numr de celule de tipuri
diferite, care comunic ntre ele, i controleaz forma, mrimea,
poziia, orientarea n spaiu i activitatea n aa fel, nct fiecare
celul i structur, n ansamblul su, s funcioneze optim,
obinndu-se efecte maxime cu minimum de cheltuieli materiale i
energetice.
Funciile celulelor, esuturilor sau organelor pot fi explicate
numai dup cunoaterea n profunzime, pn la nivelul molecular, a
structurilor, care formeaz baza lor material. A nelege o structur,
un ansamblu de fapte observabile optic sau electronomicroscopic
nseamn s descoperi interrelaiile dintre elementele componente.
Domeniul tiinific prezentat n manual nregistreaz o
gigantic explozie informaional, nct a trebuit s selectez, din
multitudinea de date recente, numai pe acelea care prezint o
importan major pentru latura formativ, instructiv i tiinific a
pregtirii studenilor . Acest fapt limiteaz, de la nceput orice pretenii
asupra cartacterului exhaustiv al lucrrii i al indicaiilor bibliografice.
Pentru a facilita nsuirea materialului teoretic, autorul a
desenat o serie de scheme dup preparate histologice, iar alte
scheme au fost preluate, prelucrate i modificate din lucrri
consacrate.
Mulumesc tuturor celor care mi vor adresa sugestii i
idei ce vor duce la mbuntirea acestui material didactic, pe care l
doresc a fi ct mai util studenilor.

Autorul






X














1.1 Repere istorice n evoluia cunotiinelor despre
celule i esuturi
Descoperirea celulei a fost posibil dup inventarea
microscopului n anul 1590 de ctre doi frai olandezi HANS i
ZACHARIAS JENSSEN. n anul 1665, ROBERT HOOKE (1635-
1703), fizician englez a observat cu ajutorul microscopului, ntr-o
bucat subire de plut, o serie de caviti mici pe care le-a denumit
celule ( de la latinescul cella = cmru). Mai trziu (1674), A. van
LEEUWENHOEK (1632-1723) descoper mai multe tipuri de celule
libere (protiste, globulele roii) , iar HAM LUDWIG (1650-1723) a
descoperit spermatozoizii, n 1677. Tot n secolul al XVII-lea,
MARCELLO MALPIGHI (1628-1694) a descris pentru prima dat
capilarele sanguine n peritoneul de broasc i le-a denumit astfel
dup latinescul "capillus", care nseamn fir de pr. Totodat,
Malpighi a mai descoperit glomerulii renali, stratul intermediar al
epidermului, dar nu i-a dat sema c celula este unitatea de baz a
lumii vii. Olandezul REGNIER de GRAAF (1641-1693) a descoperit
foliculii ovarieni, n anul 1672.
La sfritul secolului al XVIII-lea, FRANCOIS MARIE XAVIER
BICHAT (1771-1802) a descris i a introdus noiunea de esut,
individualiznd 21 tipuri de esuturi i descriind n mod magistral
esutul osos, cartilaginos i muscular.Pentru descoperirile sale este
considerat printele histologiei.
Un moment crucial n dezvoltarea cunotiinelor despre celule l-
a avut cristalizarea teoriei celulare pe baza cercettilor i
generalizrilor efectuate de botanistul MATHIAS JACOB
X
SCHLEIDEN (1804-1880) i de zoologul THEODOR SCHWANN
(1810-1882). Ei au artat c celula nu este goal,ci conine un "utricul
azotat", cu caracter reticular, ce se formeaz din citoblastem.
Teoria celular, elaborat de ei, susinea c: 1- corpul tuturor
plantelor i animalelor este format din celule; 2- celulele au o via
proprie, caracteristic fiecrei celule; 3- viaa individual a celulelor
este influenat de viaa n ansamblu a organismului.
Mai trziu, RUDOLPH VIRCHOW (1821-1902) a completat i
mbuntit teoria celular, susinnd c: 1) "Omnis cellula e cellula" -
toate celulele provin din celule preexistente, negnd n acest fel
generaia spontan din citoblastem; 2) "Omnis vivum ex ovo" - tot ce
este viu provine din diviziunea i creterea unui ou fecundat, rezultat
din contopirea a dou celule diferite, ovulul i spermatozoidul; 3) n
afara celulelor nu exist via, iar organismul este o confederaie de
celule.
Microscopul optic modern a aprut n a doua jumtate a
secolului a XIX-lea ca urmare a contribuiei unor fizicieni, printre care
se disting doi germani, mecanicul KARL ZEISS (1816-1888) i
profesorul ERNEST ABBE (1840-1905).
Primul microscop electronic a fost pus la punct de germanii
G.A. KAUSCHE i H. RUSKA n 1939, cnd au reuit s observe i
s fotografieze un virus. n paralel cu perfecionarea microscopului
optic,s-au pus la punct tehnicile de colorare i impregnare cu
substane de contrast a componentelor celulare, n acest domeniu
remarcndu-se germanii G.H. HOFMANN, R. HEIDENHEIM,
C.WEIGERT, R. FEULGEN, A. PAPPEMHEIM, P.EHRLICH,
G.MANN, danezii M.G. GRAM, italianul C. GOLGI, spaniolul RAMON
Y.CAJAL, romnii V.BABE, G.LEVADITI, D.VOINOV i alii.
n secolul XX, histochimia i histoenzimologia modern au fost
fondate i ilustrate de personaliti ca: R. FEULGEN, J.VERNE,
J.BRACHET, G.GMRI, A. SELIGMAN, A.C.PEARSE i alii.
1.2. Contribuii romneti la studiul celulei i la
dezvoltarea histologiei
Constituirea unei discipline de histologie de sine stttoare n
nvmntul medical din Romnia s-a realizat n anul 1873, la Iai de
ctre profesorul LEON SCULLY (1853-1912) i n anul 1881 la
Bucureti de ctre profesorul Mihail PETRINI de GALATZ (1846-
1926), elev a lui LOUIS-ANTOINE RANVIER (1835-1922), prin
separarea histologiei de anatomie. nainte de aceste date, n 1839,
NICOLAE KRETZULESCU (1812-1900) i-a susinut teza de doctorat
X
privind structura microscopic a dinilor i cristalinului, iar din 1859
ADOLF LUDOVIC FIALLA (1831-1910) a predat un curs de
Anatomia microscopic i histologie, fiind primul profesor de
histologie la coala de medicin din Bucureti, ctitorit de CAROL
DAVILA (1828-1884).
La Facultatea de Medicin Veterinar din Bucureti, n anul
1883,histologia figura printre obiectele de studiu ale anului I, fiind
predat de profesorul Constantin Gavrilescu pn n anul 1899, iar
n continuare de profesorul Ion Athanasiu, n paralel fiziologia
animal. Din 1905 pn n 1923, cursul de histologie a fost predat de
profesorul Ion Drgoi, elev al lui Ion Athanasiu, mpreun cu care a
efectuat cercetri remarcabile privind histofiziologia esutului
muscular, descriind sarcolema i tubii " T ". ntre anii 1923-1941,
profesorul Drgoi a predat histologia la Facultatea de medicin
uman din Cluj. Dup 1923, la conducerea disciplinei, s-au succedat
profesorii: G. NIKITA (ntre anii 1923-1928), I.T.NICULESCU (ntre
1928-1932)- un strlucit elev al lui G. MARINESCU (fondatorul
neurohistologiei romneti), ILIE BDESCU (ntre 1932-1848), ILIE
DICULESCU (ntre 1946-1962), V.CIUREA(ntre anii 1948-1952) i
GH.BORDA ( ntre anii 1962 -1985).
Profesorul ILIE DICULESCU, absolvent al Facultii de
medicin veterinar, a condus din anul 1962 disciplina de Citologie i
histologie, de la Facultatea de medicin uman din Bucureti,
impunndu-se ca un creator al colii de histoenzimologie i citochimie
ultrastructural. Un merit deosebit n dezvoltarea biologiei celulare
revine savatului de origine romn, GEORGE EMIL PALADE (1912
prezent), laureat al premiului Nobel pentru medicin (n anul 1974),
considerat principalul cartograf al celulei.
n prezent, disciplinele de Biologie celular, histologie i
embriologie sunt predate la Facultile de medicin veterinar din
ar de: prof.dr. Corneliu Cotea la Iai, prof.dr. IClaudiu Lizovschi-
Cheleanu la Cluj-Napoca, prof.dr. Mariana incai la Timioara i
prof.dr. Nicolae Cornil la Bucureti, continundu-se i dezvoltndu-
se tradiiile valoroase ale ntemeietorilor i naintailor colii
romneti de morfologie microscopic.





X






1




1.3.Concepia actual despre citologie


Citologia este o ramur a tiinelor biologice, care studiaz
structurile funcionale i fenomenele biologice generale comune tuturor
celulelor, evideniind legile generale de desfurare a proceselor vitale la
nivelul celular i molecular de organizare. Manifestndu-se ca o tiin
integrativ, ea folosete noiuni de morfologie, biochimie molecular i
celular, fiziolgie celular i genetic molecular. Ultimul deceniu se
remarc prin intensificarea studierii nivelului molecular al proceselor
celulare. Celula este considerat ,astfel, un microcosmos, n care
structurile i funciile interacioneaz armonios, fiind determinate i
reglate genetic, nct s se realizeze o eficacitate maxim.
Dezvoltarea biologiei celulare i moleculare se datoreaz pe de o
parte perfecionrii tehnicilor de studiere a celulei, iar pe de alt parte
progreselor teoretice (conceptuale).


1.4.1.Tehnicile de studiere a celulei.


Sunt reprezentate de tehnici de microscopie (optic sau
electronic) i de tehnici de cercetare ( fizice, biochimice, debiologie
celular i molecular , etc).


1.4.1. Tehnicile de microscopie optic i electronic

Microscopia optic folosete fotonii pentru realizarea
imaginilor, asigurnd mriri de 1500-3000 de ori (n mod obinuit de
1400 ori), cu o putere de rezoluie de 0,2 micrometrii (m).(Fig.1.1)





2
Fig.1.1 Formarea imaginii n microscopul optic
1.Sursa de lumin; 2.Dispozitiv de uniformizare i dozare a
luminii;3.Condensor;4.Preparat;5.Lentil obictiv;6.Imagine format n
obiectiv;7.Lentil ocular;8.Imagine final.

Microscopia n contrast de faz, permite
examinarea celulelor vii. Utilizeaz: microscoape cu
interferen, pentru aprecierea cantitativ a masei unor
componente tisulare; - microscoape cu interferen
difereniat, pentru studierea suprafeei celulelor.

Microscopia de fluorescen evideniaz
moleculele cu fluorescen natural ( vitamina A,
catecolaminele) sau fluorescena indus. Se folosete n
imunohistochimie pentru detectarea reaciei antigen-
anticorp.

Microscopia cu ultraviolete folosete lumina
ultraviolet pentru detectarea unor amino acizi sau a
acizilor nucleici.

Microscopia cu lumin polarizat pentru studierea formaiunilor
cristaline.

Microscopul confocal
Permite obinerea de imagini tridimensionale ale structurilor din
preparatele histologice.
Principiul de funcionare este asemntor cu cel al microscopului de
fluorescen. Sursa de lumin este reprezentat de un laser a crei raz trece printr-
o diafragm cu deschidere punctiform, dup care este reflectat de o oglind mobil
spre lentila obiectiv. Preparatul este situat la nivelul distanei focale a obiectivului. In
urma aciunii razei laser asupra preparatului, acesta emite un fascicul de lumin
(eventual fluorescent) care este colectat de lentila obiectiv i dirijat spre diafragma
punctiform a detectorului , situat confocal ( n focarul lentilei obiectiv, opus
focarului n care este situat preparatul), rezultnd o imagine final, care este captat
de un detector (similar ocularului).
Razele luminoase emise de formaiuni situate n alte planuri nu vor fi captate
de detector, nct se obine o imagine foarte"curat", neestompat de imagini ale
obiectelor situate proximal sau distal fa de planul focal. Prin deplasarea n plan
vertical a focarului lentilei obiectiv, se pot obine imagini ale unor planuri succesive,
ca profunzime, realiznd "seciuni optice", fr a fi nevoie de o resecionare a
preparatului. Imaginile planurilor succesive sunt stocate n memoria unui computer,
care le "ansambleaz" obinnd o imagine tridimensional a preparatului examinat.


3
Microscopul confocal permite examinatorului s obin
"tomografia" unei structuri histologice, fiind folosit pentru studirea
citoscheletului, a dispunerii cromozomilor n nucleu,etc. Dac este dotat
cu lumin flurescent se pot obine imagini confocale
fluorescente. Microscopul electronic se bazeaz pe
utilizarea fluxurilor de electroni pentru realizarea
imaginilor, permind obinerea unor grosismente
teoretice mai puternice de 10.000 de ori dect n
microscopia optic. Se ajunge la o putere de rezoluie
egal cu 0,1 nanometri (nm).Exist dou tipuri principale
de microscoape electronice: - microscopul electronic de
transmisie i microscopul electronic de baleaj
(scanning).(Fig.1.2)

Fig.1.2 Formarea imaginii n microscopul electronic
1-Catod; 2-Anod; 3-Lentila (bobina)condensator;4-Preparatul; 5-
Lentila (bobina) obiectiv; 6-Imaginea primar; 7-Lentila (bobina) de proiecie; 8-
Imagine final.

Microscopul electronic de transmisie
(Transmission electron microscope - TEM) poate fi: -
convenional (CTEM), cnd diferena de potenial ajunge
pn la 100.000 voli; sau - de nalt voltaj (HVEM), cnd
diferena de potenial ajunga la 800.000 voli.
Componentele eseniale ale unui microscop
electronic de transmisie sunt:

Catodul sau sursa de electroni, reprezentat de un filament de
tungsten nclzit.

Anodul, care relizeaz diferena de potenial.

Un sistem de electromagnei, care acioneaz ca nite lentile
condensator, lentile-obiectiv i lentile de proiecie.

Un suport pentru preparat sau portobiect, reprezentat de o gril
metalic fin pe care se fixeaz seciunea de esut, inclus n mas
plastic.

Un ecran pe care se capteaz imaginea.

Un dispozitiv de fotografiere a imaginii.


4
Puterea de rezoluie este de 2 Angstromi(), n practic
ajungndu-se la 1,2 nanometri.

Fig.1.3 Formarea imaginii la microscopul de baleaj (scanning)
1-Catod; 2-Anod; 3-Lentil (bobin) condensator; 4-Bobin de scanare; 5-
Preparat; 5'-Detector de electroni; 6-Amplificator electronic; 7-Ecran de
proiecie;8-Imagine final.

Ca fixatori se folosesc glutaralaldehida, pentru
constiutieni proteici i tetraoxidul de osmiu pentru
lipide i fosfolipide.
Se realizeaz seciuni de ordinul nanometrilor cu
ajutorul unor ultramicrotoame, nzestrate cu cuite de
diamant.
Ultraseciunile sunt incluse n mase plastice i
ntise pe grile de cupru. Pentru realizarea contrastului
ntre diferite ultrastructuri se folosesc substane precum
citratul de plumb i acetatul de uranil.

La examinare se observ c structurile cu
densitate mare disperseaz (mprtie) electronii,
aprnd de culoare nchis, n timp ce structurile cu
densitate mic, care permit trecerea electronilor far a-
i devia apar clare.

n cazul microscoapelor electronice de nalt voltaj ( HVEM ),
diferena de potenial atinge un milion de voli. Electronii pot ptrunde
prin celule ntregi sau preparate de civa microni (cca. 2 microni). Se
obine o imagine detaliat a organizrii tridimensionale, permindu-se
vizualizarea texturii celulare interne i a unor detalii de structur, cum arfi
de exemplu elemntele citoscheletului.

Microscopul electronic de scanning (Scanning electron
microscope SEM ) se carcterizeaz prin faptul c electronii nu trec
prin preparatul studiat, ci mtur (terg) suprafaa acestuia, nct se va
obine o imagine tridimensional a accidentelor de suprafa. Puterea de
rezoluie este de cca. 100 Angstromi.
Cnd electronii folosii de TEM sau SEM bombardeaz preparatul se produc
radiaii X cu lungimi de und caracteristice elementelor lovite de electroni. Prin
analiza acestor raze X cu aparate adecvate se pot obine estimri calitative i
cantitative foarte exacte asupra elementelor cu numrul atomic mai mare de 12.






5

1.4.2.Tehnici fizice .biochimice,de biologie celular i
molecular
Tehnici fizice:
- Fracionarea celulei prin centrifugare difereniat permite
obinerea n stare pur a unor componente celulare, precum complexul
Golgi, aparatul mitotic, ribozomi, etc.
O contribuie deosebit la perfecionare acestei tehnici a adus-o G.Em.Palade
care a pus la punct centrifugarea n gel de sucroz.
- Criofracturarea permite despicarea membranelor celulare
ngheate, la nivelul planului median al bistratului lipidic.
- Autoradiografia localizeaz materialul radioactiv din esut.
- Historadiografia realizeaz o microradiografie cu raze X a unui
preparat histologic.
- Difracia razelor X, care a permis descifrarea structurii spaiale a
proteinelor i a acizilor nucleici.
- Difracia i dispersia de neutroni, prin care s-a descifrat
organizarea molecular a cromatinei.
- Rezonana magnetic nuclear de nalt rezoluie, ce se
utilizeaz pentru studierea interaciunilor moleculare n membranele
biologice.
- Rezonana magnetic n impulsuri, folosit la studiul
permeabilitii membranelor pentru ap i ioni.
- Rezonana electronic de spin, ce folosete ca markeri specifici
substane cu electroni impari care se ataeaz i evideniaz molecule
de ADN, de proteine,etc.
- Spectrofluorometria,ce permite studierea vscozitii
membranelor, difuziunea, rotaia proteinelor.

Tehnici biochimice
n biologia molecular se utilizeaz:
- Electroforeza n gel de poliacrilamid, pentru studiiul proteinelor
i acizilor nucleici.
- Marcrile bazate pe fotoafinitate a unor pri din moleculelele
integrate n structuri celulare.
- Reconstituiri de structuri i funcii celulare din componentele
purificate.
- Imunocitochimia evideniaz reaciile dintre antigen i anticorp.

Tehnici complexe de biologie celular i molecular
Sunt reprezentate de:
- Tehnica ADN-ului recombinat.


6
- Producerea de anticorpi monoclonali cu ajutorul hibridoamelor, ce
a permis descifrarea mecanismelor care regleaz exprimarea genei.
- Sinteza artificial a genelor.
- Manipulri de gene, etc.

1.5. Progrese conceptuale.
Progresele teoretice sau conceptuale au permis mbogirea,
dezvoltarea i aprofundarea cunotiinelor de biologie celular i
molecular. Sunt reprezentate de:
- Analiza i sinteza informaiilor obinute de morfologia
celular, biochimia i biofizica celular, fiziologia celular, genetica
molecular, imunologia celular i molecular, virusologie,etc. n acest
concept se manifest dou tendine opuse: una de acentuare a sintezei
i alta de extindere a sferei de sintez.
- Molecularizarea informaiilor , care const n descifrarea
structurilor i funciilor pn la nivel molecular. Acest fapt a dus la
schimbarea denumirii acestei ramuri a tiinelor biologice din "citologie
general" n "biologie celular" i apoi n "biologie celular i
molecular".
- Integrarea informaiilor obinute prin toate metodele i de la
toate nivelele ntr-un tot unitar, nct biologia celular i molecular
studiaz n mod complex i complet aspectele morfofuncionale ale
celululelor, observabile la microscopul optic, ultrastructurile relevate de
microscopul electronic, organizarea i fiziologia molecular, realiznd o
imagine exhaustiv a nivelului celular de organizare a materiei vii.




2. CELULA CA SISTEM BIOLOGIC

Prin sistem biologic se nelege un ansamblu de elemente
(componente) interconectate ntr-o formaiune complex, relativ stabil,
formaiune care se comport ca un ntreg, cu proprieti i funcii
distincte cantitativ i calitativ de proprietile elementelor componente.
Exist sisteme lipsite de via (abiotice), precum particulele
subatomice, atomii, moleculele i sisteme dotate cu via ( biotice )cum
ar fi celulele, esuturile, organele, organismul, populaia, biocenoza i
biosfera.
Celula (cellula) este primul sistem biologic care manifest cea mai
important caracteristic a materiei vii - capacitatea de auto
reproducere. Formele de "via molecular", identificate pn n prezent,
ca "prionii" (microorganisme patogene, formate din particule proteice,


7
far acizi nucleici) i virusurile (microorganisme ce conin acizi nucleici i
proteine) sunt capabile s se reproduc numai n interiorul celulei.
Celula, ca sistem, prezint urmtoarele caracteristici:
Este un sistem deschis, pentru c are n permanen schimburi
de energie i substan cu mediul extracelular.
Are un caracter istoric, aprnd la un anumit moment al
evuluiei materiei vii i putnd s dispar, atunci cnd materia vie i va
produce o alt form mai eficient de organizare dect celula.
Are caracter informaional, deoarece recepioneaz,
acumuleaz, prelucreaz i transmite informaii cu ajutorul codului
genetic.
Prezint trei categorii de programe, legate de capacitile sale
structurale i funcionale: a- programul " pentru sine", ce asigur
autoconservarea celulei ( de expl. n culturile de celule); b- programe ale
sistemelor componente, ca de exemplu programele organitelor sau ale
complexelor moleculare; i c- programe superioare care asigur
existena sistemelor superioare ( esut, organ, organism).
Echilibrul dinamic, ce se manifest printr-o "pendulare"
continu, fa de o stare morfofuncional optim, stabil.
Autoreglarea sau "feed back"-ul, prin care i controleaz
procesele interne, n funcie de relaiile cu mediul prin mecanisme de tip
cibernetic.
Heterogenitatea intern este nsuirea de a fi alctuit din
elemente componente mai mult sau mai puin diferite ( de expl.
mitocondrii, ribozomi, microfilamente, microtubului,etc.)
Integralitatea, prin care celula ca sistem, nu se reduce la suma
nsuirilor elementelor componente, ci prezint nsuiri noi (structurale i
funcionale) pe care nu le au aceste elemente considerate izolat.
Aceast nuire permite desfurarea funciilor biologice fundamentale:
metabolismul, reproducerea, adaptarea, meninerea strii de stabilitatea
difereniat,etc.
Pe baza acestor caracteristici, concepia actual despre celul o
definete ca fiind: unitatea elementar a lumii vii, produs al evoluiei,
cu structur complex, n relaie de autonomie i echilibru dinamic
cu mediul nconjurtor, avnd ca proprieti eseniale metabolismul,
autoreproducerea, creterea i dezvoltarea.

2.1. Arhetipurile celulare
Exist dou arhetipuri (arhetip = model primar, dup G.E.Palade)
celulare: procariotele (procariot =prenucleat, fr nucleu distinct) i
eucariotele (eukariot= cu nucleu distinct).

2.1.1. Procariotele


8
Sunt reprezentate, n principal, de bacterii i de algele albastre
verzi (denumite i cianobacterii).
Ele sunt mai mici (1-10 m) dect celulele eucariote i lipsite de
membrane intracelulare.
Organitele celulare sunt puine ( numai ribozomi) sau absente.
Nucleul nu apare distinct, genomul (totalitatea genelor) nefiind
separat de citoplasm.
Prezint un cromozom unic, dispus n citoplasm i reprezentat de
un AND circular neconjugat cu proteine. ARN-ul i proteinele sunt
sintetizate n acelai compartiment, n citoplasm.
Nu au aparat mitotic, deoarece se nmulesc prin sciziparitate.
i realizeaz locomoia prin flageli simpli.
Au metabolism aerob sau anaerob.
Sunt delimitate de o membran plasmatic, ce trimite prelungiri
endocelulare, denumite mezozomi, dublat la exterior de un perete
celular.
Nu prezint citoschelet, nu au cureni citoplasmatici, iar
endocitoza i exocitoza sunt absente.
De obicei sunt monocelulare.

2.1.2.Eucariotele
Sunt reprezentate de protiste, fungi, plante i animale.
Au dimesiuni mai mari (5-100 m) dect procariotele.
Prezint un sistem complicat de membrane intracelulare, care
delimiteaz unele componenete intracelulare (nucleul) i unele organite
(mitocondriile, reticulul endoplasmic,complexul Golgi,etc).
Au un nucleu distinct, n care este situat genomul, ce cuprinde mai
muli cromozomi. Molecula de AND este foarte lung i conjugat cu
proteine.
ARN-ul este sintetizat i procesat n nucleu, n timp ce proteinele
sunt sintetizate n citoplasm.
Au citoschelet compus din proteine filamentoase, cureni
citoplasmatici i desfoar procese de endocitoz i exocitoz.
Prezint aparat mitotic.Se divid prin mitoz i meioz.

2.2 Morfologia general a celulelor eucariote

Dimensiunile celulelor eucariote sunt extrem de variate. Ele se
exprim n urmtoarele uniti de msur: micrometrul, nanometrul i
angstromul.


9


Unitile de msur folosite n morfologia microscopic

Denumire Simbol Valoare
Micrometrul ( =
micronul )
m ( ) 1 m =0,001 mm = 10
6
m
Nanometrul nm 1 nm = 0,001 m = 10
-9
m
Angstrom A 1A=0.1nm=10
-4
um=10
-10
m

Limita practic de rezoluie a ochiului uman este de cca. 0,1 mm, a
microscopului optic de 0,2m, iar a celui electronic de 2 angstromi( ).

Pentru fiecare categorie de celule, dimensiunile sunt relativ
constante, indiferent de specie sau mrimea organului. Diferenele de
greutate a aceluiai organ la specii diferite sunt generate de numrul de
celule pe care l conin i nu de volumul celulelor.
De exemplu, nefrocitele i celulele musculare cardiace au dimensiuni
apropiate la hominide, ecvine i canide.

Limitele de rezoluie in morfologie

A. Cu ochiul
liber
0,1 milimetri (mm) Ovocitul de pasre
Ovocitul uman
Amoeba
B. Cu
microscopul
optic
0,2 micrometri sau
microni
( sau m)
Celule,
Hematii,
Neuroni
Nuclei
Mitocondrii
Bacterii, etc
C. cu
microscopul
electronic
2 Angstromi ()
sau
0,2 nanometri (nm)


Ribozomi,
Virusuri,
Organite celulaere
Macromolecule
molecule

* Prin rezoluie se nelege distana minim dintre dou puncte n care acestea pot fi percepute ca
imagini seperate



10


Fig.2.1.Diagrama unitilor de lungime

Dimensiunile medii ale diametrului celulelor se ncadreaz ntre 10-30 m, dar
n organismul animalelor exist i celule mai mici, precum: neuronii din stratul
molecular al scoarei cerebrale ( de cca.4-4 m), eritrocitele (5-7 m), precum i
celule ce ajung la dimesiuni foarte mari, un exemplu constituindu-l ovulul ce atinge un
diametru de 150-200 m la mamifere, 3,5 cm la psri i 10 cm la stru. Neuronii
motori din coarnele ventrale ale mduvei spinrii au un corp ce atinge un diametru de
200 m, iar dac se iau n considerare i prelungirile ajung la o lungime de 1-1,5 m
sau mai mult, n funcie de talia animalului. Fibra muscular striat are un diametru
de ordinul micronilor, dar lungimea este foarte variat, de la 1 la 12 cm.

Volumul celulelor variaz n limite foarte largi de la 200 la15000
micrometri cubi (m
3
), menndu-se constant pentru un anumit tip de
celul, independent de mrimea organului, aspect cunoscut sub
denumirea de "legea constanei volumului".
Vrsta i funcia determin variaii n mrimea celulelor. Se
observ o reducere a volumului celular n cursul embriogenezei timpurii,
n cursul mbtrnirii i o cretere volumetric n timpul dezvoltrii
postnatale. Se stabilete un raport nucleo/citoplasmatic optim, un raport
al suprafeei celulei fa de volum i un raport ntre metabolism i
volumul celulei.
Masa (greutatea) unei celule este de aproximativ 10
-12
g, iar cea a
unui ovocit uman de 10
-8
g.



11

Fig.2.2. Forma celulelor
1-Ovula; 2-Hematie de mamifer; 3-Eritrocit de pasre; 4-Neutrofil de mamifer; 5-
Spermatozoid; 6-Celule poliedrice;7-Celule pavimentoase; 8-Celule cubice; 9-Leiocit; 10-Neuron
piramidal; 11-Neuron piriform; 12-Celul mezenchimal; 13-Fibroblast;14-Melanocit,15-Adipocit alb;
16-Histiocit; 17-Celul prismatic cu platou striat; 18-Celul caliciform.

Forma celulelor, inial sferic se modific n cursul diferenierii i
maturrii celulelor. Forma celulelor este controlat att de factori externi
ca presiunea i vscozitatea mediului, ct i de factori interni ca
activitatea funcional, vrsta, vscozitatea citoplasmei, structura intern
i caracteristicile suprafeei.(Fig.2.2 )
Forma celulelor se adapteaz la funcie, respectndu-se o lege
general a biologiei, conform creia se obine maximum de randament
funcional cu minimum de cheltuieli materiale i energetice.Astfel,celulele
contractile sunt fuziforme sau cilindrice, iar celulele specializate n
conductibilitate prezint numeroase prelungiri.
Numrul celulelor este extrem de mare, ajungnd la ordinul de
milioane de miliarde (10
14
).
Celulele sanguine reprezint populaia cea mai numeroas, reprezentat de
mai multe zeci de miliarde. Numrul hepatocitelor i al neuronilor este de circa 100
de miliarde, iar cel al nevrogliilor este de aproximativ 10 ori mai mare dect numrul
neuronilor.
Durata vieii celulei sau ciclul celular reprezint intervalul de la
apariia unei celule pn i termin propria sa diviziune.
Variaz de la 10-20 minute pn la 10
9
minute. Celulele bacteriene triesc
cteva zeci de minute, celulele epiteliale 1-2 zile, hematiile 127 zile, iar unele celule
musculare i nervoase toat viaa individului.
La om, n fiecare secund au loc peste 4 milioane de diviziuni celulare, ntr-o
zi au loc cca. 350 bilioane diviziuni, iar ntr-un an 10
14
diviziuni, numr egal practic cu
numrul total al celulelor ce alctuiesc corpul omului adult.


12

2.3. Compartimentarea celulelor eucariote
Celula eucariot prezint trei componenete principale: membrana,
nucleul i citoplasma.(Fig.2.3)
Membrana poate fi situtat la periferie, realiznd pe de o parte
delimitarea celulei de mediul extracelular, sau poate fi dispus n
citoplasm, unde formeaz un sistem de membrane intracelulare cu o
suprafa deosebit de activ biologic, de 10-20 ori mai mare dect cea a
membranei periferice.




Fig.2.3. Schema unei celule eucariote
ideale
1-Membrana celular;2-Nucleul; 3-
Citoplasm; 4-Lizozom primar; 5-
Poliribozomi liberi; 6-Reticul endoplasmic
rugos; 7-Reticul endoplasmic neted; 8-
Complex Golgi;
9-Microfilamente; 10-Microtubuli; 11-
Centrioli; 12-Corpuscul bazal; 13-Microvili;
14-Cil; 15- Fagozom; 16-Peroxizom;
17-Caveol acoperit; 19-Nucleoli; 20-
eterocromatin; 21- Cistern
perinuclear; 22-Por nuclear; 23-
Mitocondrie; 24-Corp rezidual; 25-Granule
de secreie; 26-Pictur de lipide; 27-
Granule de glicogen; 28-Pseudopode.


Membranele intracelulare, endomembranele sau citomembranele
difer ntre ele prin structur, compoziie chimic i funcie.
Ele mpart celula n dou compartimente: compartimentul
matriceal sau plasmatic "P" i compartimentul intracisternal sau "E".
Exist i un compartiment secundar sau de tip "C", reprezentat de
matricea mitocondrial i a cloroplastelor.
Totodat endomembranele delimiteaz nucleul i unele organite
celulare (lizozomii, reticulul endoplasmic,complexul Golgi). Exist i
organite nedelimitate de membrane (ribozomii,centriolii, corpusculii
bazali, microfilamentele, filamentele intermediare i microtubulii).



13













13

3. Membranele celulare

Membranele celulare (membrana celullaris) sunt structuri moleculare
complexe care marcheaz limita celulei sau a unui teritoriu intracelular.
Exist trei categorii principale de membrane celulare:
1.Membrana plasmatic sau plasmalema, ce confer individualitate
celulei i particip la interaciunile dintre celule sau la cele cu mediul
extracelular.
2.Citomembranele sau endomembranele, reprezentate de
membrana nucleului, membranele reticulului endoplasmic, membranele
complexului Golgi, membranele mitocondriilor, lizozomilor i peroxizomilor.
3. Membranele speciale reprezentate de membranele tecilor de
mielin i de membranele discurilor din segmentul extern al celulelor
vizuale din retin.
3.1 Organizarea molecular a membranelor
n evoluia cunotiinelor despre organizarea molecular a
membranelor se disting mai multe modele: iniial, paucimolecular, unit,
mozaicul fluid i modelul actual.

Fig.3.1 Modelul paucimolecular.
1-Bistratul lipidic; 2-Stratul proteic extern; 3-Stratul proteic intern.

Modelul iniial (elaborat de OVERTON n 1895) a
sugerat prezena lipidelor n membranele
celulare, observnd c solvenii organici
difuzeaz mai rapid prin membrane dect n
ap. Lipidele din membrane sunt dispuse n
strat dublu ( n bistrat ), pentru c suprafaa
filmului lipidic din hematii este dubl fa de
suprafaa acestora. ( dup GRTER i GRENDEL 1925 )
Modelul paucimolecular a fost elaborat ( n 1930 de DANIELLI i
DAVSON ) , dup msurarea tensiunii superficiale a membranelor celulare,
cnd au gsit aproximativ o din/cm
2
, fa de 5 dine ct reieea din
calcule.
Asfel, ei au dedus c bistratul lipidic (stratul lipidic dublu) este tapetat
pe ambele fee de straturi de proteine, care reduc tensiunea superficial.
Totodat au demonstrat experimental acest fapt, adugnd proteine, ce
au produs reducerea tensiunii superficiale. Tot ei au elaborat modelul
paucimolecular (paucus = puin numeros), dup care membranele celulare



14
au un centru lipoid "lamina intermedia", ( format din fosfolipide, dispuse n strat
dublu, cu capetele polare orientate spre exterior ), tapetat cu proteine, care
formeaz o lamin extern i alta intern.(Fig.3.1)

Modelul "UNIT" a fost elaborat ( de ROBERTSON, ntre 1958-1960 ),
dup cercetri efectuate la microscopul electronic ( cu grosisment de 100.000),
efectuate pe membrana tecii de mielin. Dup acest model, membranele
celulare au o ultrastructur trilaminar, prezentnd dou benzi dense (de 2,5
nm), ce delimiteaz ntre ele o band clar ( de 3 nm), format dintr-un ax
lipidic hidrofob.

Acest model confirm modele anterioare i le dezvolt, adugnd
dou noi concepte: - universalitatea bistratului lipidic i - asimetria chimic,
dup care glucidele sunt ataate numai pe faa extern, lipsind pe faa
intern. Modelul este incomplet pentru c ignor dinamismul moleculelor
componente.(Fig.3.2).

Fig.3.2 Organizarea molecular a
membranei periferice

Modelul"mozaicului
fluid", (elaborat de SINGER i
NICOLSON n 1972 ) susine c
moleculele componente ( de
lipide i de protide) se mic
n mod ntmpltor n
bistratul lipidic.

Cercetrile ulterioare au
artat c micrile
moleculelor sunt controlate de citoschelet i sunt limitate la anumite poriuni
ale suprafeei membranei. Exist i zone ale feei externe a bistratului
lipidic neacoperite de proteine.


Modelul actual susine c: - bistratul lipidic este asimetric, fluid i
reprezint axul ntregului edificiu molecular al membranelor; - pe feele
hidrofile, proteinele sunt distribuite asimetric, n aranjamente caracteristice.





15


3.2. Ultrastructura membranei periferice

Membrana periferic are trei componente ultrastructurale:
plasmalema, glicolema,citoscheletul membranei.

Membrana periferic a celulei eucariote








Glicolema
Componenta
intern

20
nm
Puin
dens la
fluxul de
elecroni
Conine:
Galactoza
Galactozamina
Manoza,
Fucoza,
Glucoza
(50 nm) Componenta
extern
30
nm
Mai dens
la fluxul
de
electroni
Glucozamina,
Acidul sialic
Lamina
externa
2,5
nm
Band
dens la
fluxul de
elecroni
Conine:
Gruprile polare
hidrofile ale
fosfolipidelor
Proteine extriseci
Membrana
celular
periferic

Plasmalema
(7- 8 nm)
Lamina
intermedia
3 nm Band
clar la
fluxul de
electroni
Conine:
Fosfolipide 70%
Colesterol-25%
Glicolipide-5%
Lamina interna 2,5
nm
Band
dens la
fluxul de
electroni
Conine:
Gruprile polare
hidrofile ale
fosfolipidelor
Proteine
extrinseci
Citoscheletul
membranei

5-9
nm
Conine:
Actin
Anchirin
Spectrin
Proteina benzii 4-
1







16
3.2.1. Plasmalema

Plasmalema (plasmalemma) reprezint structura de baz a tuturor
membranelor celulare ( periferice sau endomembrane), fiind alctuit din
bistratul lipidic asociat cu proteine. Are o grosime de cca. 7,5 nm.
La un grosisment redus (de 10.000 ori ) apare ca o linie unic
elecronodens. La o mrire de 100.000 ori, dac planul seciunii a czut
perpendicular pe membran, plasmalema prezint un aspect caracteristic,
trilaminar, cu dou benzi dense (de 2,5 nm), separate de o band clar ( de 3
nm).
Endomembranele au ,n general, acelai aspect
electronomicroscopic, respectnd modelul unit. (Fig.3.3)
Banda luminoas, clar (lamina intermedia) corespunde radicalilor de acizi grai
hidrofobi din fosfolipidele bistratului, iar benzile dense (lamina externa et interna)
cuprind gruprile polare hidrofile ale fosfolipidelor i parial proteinele asociate
membranei.


Fig.3.3
Componentele
membranei celulare
periferice

I-Glicolema; II-
Plasmalema; III-
Citoscheletul membranei

Compoziia
chimic a
plasmalemei
cuprinde: lipide
complexe,
proteine i
glucide.


LIPIDELE sunt coninute n bistratul lipidic, fiind reprezentate de
fosfolipide (70%), colesterol (25%) i glicolipide (5%).







17


Fig.3.4. Tendina de organizare a moleculelor de fosfolipide
A-Monostrat; B,C- Micelii
1-Lauri de acizi grai; 2-Grup polar; 3-Ap; 4-Aer

Fosfolipidele i glicolipidele sunt molecule complexe cu caracter amfofil
(=amfipatice=bimodale), prezentnd un "cap" hidrofil (sau grupare polar) i o
"coad"hidrofob, ce cuprinde fragmente de acizi grai esterificai.Ele au tendina de a
se organiza n pelicule sau micelii , deoarece cozile trebuie s se dispun n afara
contactului cu apa.Meninerea moleculelor n pelicule sau micelii se realizeaz prin
legturi hidrofobe ce nu implic cheltuieli de energie.

n cazul fosfolipidelor i glicolipidelor din membran, forma cea mai
stabil a miceliilor este reprezentat de stratul lipidic dublu n care gruprile
polare sunt dispuse la exterior n contact cu apa, iar lanul de acizi grai se
afl la interior. Asfel, se formeaz un bistrat sau continuum lipidic.
Fosfolipidele din plasmalem sunt reprezentate de fosfogliceride (ca de exemplu:
fosfatidilcolin, fosfatidiletanolamina, fosfatidilserina, fosfatidilinozitolul) i de sfingolipide
( dintre care cea mai rspdit este sfingomielina. Molecula de fosfatidilcolin, denumit
i lecitin, are aspectul unui "cui", n care "capul" (alctuit din radicali de colin i fosfat)
este hidrofil, poart sarcini electrice i este numit grup polar. Radicalii de acizi grai
sunt hidrofobi i formeaz segmentul apolar al moleculei.

Glicolipidele pot fi simple ( de expl. cerebrozidele) sau complexe (de
expl.gangliozidele). Au asarcin electric negativ. Gangliozidele conin unul
sau mai multi radicali de acid sialic (numit i acid N-acetilneuraminic sau
NANA) care le confer sarcin electric negativ.
ncrctura electric negativ a suprafeelor celulare este conferit n mare parte
de gruprile polare ale fosfolipidelor, ale glicoproteinelor sulfatate i ndeosebi de
radicalii carboxilici ai acidului sialic.

Colesterolul se gsete n proporie mai mare n membranele la care
predomin funcia de barier, dar scade n membranele intracelulare.
Exist o asimetrie n dispunerea lipidelor n bistratul membranei eritrocitare.
Astfel,glicolipidele se gsesc numai n stratul extern, la nivelul cruia este abundent i
colesterolul. n stratul intern al bistratului lipidic sunt mai frecveni acizii grai nesaturai,
n timp ce n stratul extern se ntlnesc n proporie mai mare acizii grai saturai cu
lanuri lungi.


18
Lipidele sunt repartizate neuniform pe suprafaa membranei celulare,
putndu-se grupa n "petice" sau "calote", cu implicaii funcionale speciale,
ndeplinind rol de receptori.

Fluiditatea lipidelor. La temperatura corpului, toate lipidele din membran
se gsesc n stare fluid. Ele pot executa dou tipuri de micri: 1- micri
n interiorul unei molecule, precum micri ale atomilor de carbon n
lanurile de acizi grai i n gruparea polar; 2-micri ale ntregii molecule,
ce pot fi: - de translaie sau de difuziune lateral; - de rotaie n jurul axei
longitudinale a moleculei i c- micri de difuziune transversal (flip-
flop).(Fig.3.5)


Fig.3.5.Micrile lipidelor n bistrat
1-Gruparea hidrofil; 2-Gruparea hidrofob; 3-Difuziune lateral; 4-Rotaie; 5-Flip-flop;6-Flexie.

Moleculele de lipide se deplaseaz mai uor prin micri laterale n acelai strat
i trec foarte greudintr-un strat n altul.
Unele lipide (expl. cardiolipina) sunt capabile, n prezena ionilor de calciu, s se
detaeze din straturile lipidice i s se dispun n form hexagonal, n cilindri de lipide,
care delimiteaz canale, ce permit schimburi selective prin bistratul lipidic.
PROTEINELE plasmalemei formeaz dou straturi asimetrice, ce
tapeteaz bistratul lipidic sau pot traversa bistratul lipidic, unde execut
micri de translaie (difuziune lateral) i de rotaie. (Fig.3.6).
Prin electroforez n gel de poliacrilamid au fost identificate 15 proteine majore,
cu greuti moleculare ntre 15.000-250.000 daltoni. Trei din aceste proteine (spectrina,
glicoforina i proteina benzii 3) ocup mai mult de 60% din greutatea proteinelor
membranare.


19


Fig.3.6.Formarea porilor hidrofili

1-Lipide - grupri
hihrofobe; 2-Lipide - grupri
hidrofile; 3-Proteine;4-Por hidrofil.




S-au identificat dou grupuri de proteine ( prin metode de cogelare-
fracionare i fracionare - purificare ):
-a) proteine transmembranare (intriseci sau integrale), cuprinse n
bistratul lipidic ca nite cuburi de ghea, legate hidrofil i hidrofob de lipide.
Se extrag foarte greu i servesc ca dispozitive de recepie-transducie.
-b) proteine membranare periferice (sau extrinseci), situate de o
parte i de alta a bistratului lipidic, de care se ataeaz prin slabe legturi
hidrofile.(Fig.3.7)


Fig.3.7. Dispunerea proteinelor n plasmalem
1-Bistratul lipidic; 2- Proteine extrinseci externe;
3-Proteine extrinseci interne; 4-Proteine intriseci
transmembranare

Proteinele extrinseci sunt distribuite pe o fa sau alta a
bistratului lipidic i i se leag de capatele hidrofile ale lipidelor.


20
Sunt mai numeroase pe fa intern unde particip la realizarea citoscheletului
membranei celulare.
Proteinele de pe faa extern a bistratului lipidic sunt glicoproteine i
se prelungesc pe distane mai scurte sau mai lungi n glicolem, atand
pe lanul lor polipeptidic fragmente de oligozaharide.
Compoziia, ordinea moleculelor i dispunerea lanurilor de de oligozaharide fa
de proteinele transmembranare determin specificitatea funcional i identitatea
fiecrui tip de celule.

3.2.2. Glicolema sau glicocalixul
Glucidele plasmalemei sunt reprezentate de hexoze, hexozamine i
acid sialic. Fragmentele de acid sialic ocup ntotdeuna extremitile
periferice ale lanurilor de oligozaharide i confer sarcin electric
negativ suprafeei celulelor eucariote.(Fig.3.8)

Fig.3.8. Organizarea glicocalixului
A-Glicocalix;
B-Bistratul lipidic.

1-Rest glucidic;
2-Glicolipid;
3-Glicoprotein adsorbit;
4-Protein transmembranar

Lanurile de oligozaharide sunt
ancorate pe versantul extern al plasmalemei,
formnd un nveli al suprafeei celulare,
numit glicocalix (nveli dulce) sau glicolem.
Nu exist o delimitare net ntre glicocalix i
substana vie din spaiul extracelular,
cunoscut sub numele de matrice
extracelular.

Glicolema sau glicocalixul (glicocalyx) este o componenta extern,
de natur glicoproteic a membranei celulare periferice (cu grosimea medie de
50 nm) .
Glicocalixul prezint dou zone: - o zon intern, denumit i nveli
de suprafa, mai puin dens, (cu grosimea de 20 nm) i o zon extern mai
dens ( cu grosimea de 30 nm).
Grosimea glicocalixului apare variat. Este mult redus la celulele n
culturi; - subiat (pna la 20-30 nm), cnd ocup spaiul dintre celulele nvecinate; -
crescut (pn la 50 nm) la celulele libere sau pe polul apical al celulelor intestinale.
Din punct de vedere chimic, glicocalixul este alctuit dintr-o estur
delicat de de lanuri proteice, pe care sunt ancorate fragmente de glucide.


21
Dintre monozaharide, n glicoproteinele i glicolipidele de la nivelul membranelor i
din glicocalix, cele mai importante sunt: galactoza, galactozamina, manoza,fucoza,
glucoza, glucozamina i acidul sialic.
Raportul strns, de continuitate, dintre glicolem i plasmalem se datoreaz
glicolipidelor i glicoproteinelor componente, nveliul de suprafa devennd parte
integrant a membranei celulare.
Glicocalixul confer individualitate biochimic celulei, comportndu-se ca o "carte
de identitate a celulei", datorit numeroaselor variante moleculare pe care le realizeaz
cu ajutorul monozaharidelor componenete. Intre moleculele membranei, oligozaharidele
induc o variabilitate periferic pronunat, n contrast cu varibilitatea redus a lanului
polipeptidc. Astfel, trei aminoacizi diferii pot da natere la ase tripeptide, n timp ce trei
monozaharide pot genera 1056 trizaharide diferite.

Funciile glicocalixului sunt :
Particip, alturi de matricea extracelular, la realizarea adezivitii
intercelulare;
Asigur specificitatea i individualitatea biochimic tipului de
celule.Astfel grupele sanguine sunt determinate de gruprile glucidice
terminale aflate pe glicoproteinele i glicolipidele din membrana
eritrocitelor.
Conine gruprile glucidice ale proteinelor-receptori din membran,
dar i ale unor proteine implicate n fenomenele de transport.
Depoziteaz ionii de calciu (Ca
2+
)datorit sarcinilor elctrice negative
i intervine n controlul schimburilor ionice transmembranare.
Particip la transmiterea informaiei despre celul.
Astfel, unele celule din ficat i din splin recunosc cu ajutorul receptorilor de
membran glicoproteinele i glicolipidele de pe suprafaa eritrocitelor uzate, care au
pierdut acidul sialic i prezint descoperit galactoza, ce ocup penultimul loc din lan.
Galactoza este recunoscut de receptorii macrofagelor din ficat (celulele Kupffer), nct
hematiile uzate sau mbtrnite sunt imobilizate, fagocitate i lizate.

3.2.3. Citoscheletul
Citoscheletul (cytoscheleton) membranei celulare este o reea de
proteine extrinseci (cu grosimea de 5-9 nm), situate pe faa intern a
membranei periferice. Citosheletul este legat de plasmalem prin
intermediul captului intern al proteinelor transmembranare, iar spre
interiorul celulei se continu cu citoscheletul din matricea citoplasmatic.
La microscopul electronic, citoscheletul membranei apare ca o reea
de microfilamente proteice orientate neregulat, n nodurile reelei fiind
prezente proteine globulare. (Fig.3.9)
Datele referitoare la citoscheletul mebranei au fost obinute n urma cercetrilor
efectuate pe membranele globulelor roii, ulterior fiind considerate valabile i pentru
membranele altor tipuri de celule.


22
n membrana hematiilor, citoscheletul nglobeaz circa 60% din masa proteinelor
ntregii membrane. Principalele tipuri de proteine citoscheletale sunt:
spectrina,anchirina, actina,glicoforina i o protein care n cursul electroforezei n gel de
poliacrilamid migreaz n banda 4-1. Mai sunt prezente i alte proteine neidentificate,
ce au mase moleculare diferite. Prin extragerea spectrinei i actinei, citoscheletul
membranei se dezintegreaz, piezndu-i forma i structura.
Spectrina (sau tectina) este proteina care predomin n citoschelet.
Moleculele solitare de spectrin sunt foarte flexibile.
Apare sub forma a doi dimeri (unul de 240.000daltoni i altul de 220.000 daltoni).
Dimerii de spectrin au o form de bastona cu o lungime de 100 nm i o grosime de 5
nm. Ei se pot lega cap la cap formnd tetrameri, hexameri, octameri.



Fig.3.9.Schema citoscheletului
membranei
A-Complexul spectrin,
anchirin, protein integral;
B-Complexul spectrin,
actin,proteina benzii 4-1;
1-Protein transmembranar;
2-Anchirin; 3-Filamente scurte de
actin; 4-Proteina benzii 4-1; 5-
Spectrin.

.
Anchirina (nectina
sau sindeina) este un
polipeptid, cu form sferic
sau piramidal ce leag
spectrina la captul
citoplasmatic al proteinei benzii 4,1.
Are o greuate molecular de 200.000 daltoni,. Intr-o hematie de la om exist cca.
120.000 de molecule de anchirin, ntr-un neutrofil - 600.000, ntr-un trombocit - 3.000,
iar ntr-un fibroblast - 30.000.
Actina se gsete sub forma de mici fragmente de actin fibrilar, ce
conin 13 monomeri.
Lungimea fragmentelor de actin variaz n funcie de numrul moleculelor de
spectrin pe care le leag prin capetele lor, fapt ce poate explica plasticitatea
citoscheletului membranei, in vivo i aspectul lax al acestuia la microscopul electronic.
Proteina benzii 4-1 are aspect globular ( cu diametru de 6 nm) .
Laturile ochiurilor din reeaua citoscheletului membranar sunt alctuite din dimeri
de spectrin, iar nodurile reelei (complexele joncionale) sunt formate din dou tipuri de
complexe moleculare: - un complex ce conine spectrin, anchirin i o protein
transmembranar, ce realizeaz legtura cu membrana plasmatic; - i un alt complex
format din spectrin, actin, proteina benzii 4-1 i adducin, prezent n nodurile propiu


23
zise ale reelei. Proteinele citoscheletului membranei, mpreun cu lipidele i proteinele
de pe faa intern a plasmalemei prezint numeroi radicali hidrofili
electronegativi, nct ncrctura electric negativ este mai
puternic dect pe faa extern.

Totodat, n citoscheletul membranei, se gsesc unele proteine cu
locusuri de legare a calciului, denumite calmoduline, ce joac un rol
important n reglarea proceselor intracelulare. Legturile dintre diferitele
tipuri de proteine din citoschelet sunt realizate prin procese de fosforilare,
n care intervine o protein reglatoare, gelsolina, dependent de calciu.
Citoscheletul confer membranei: -1) elasticitate, prin dispunerea n
reea a proteinelor; i -2) rezisten, prin complexele proteice de la nivelul
nodurilor.

3.3.Diferenieri de suprafaa ale membranei celulare periferice.
Sunt neregulariti ale citoplasmei periferice, cu caracter
tranzitoriu sau permanent, delimitate de membran.

Diferenieri ale membranei celulare periferice


Invaginri
Cripte
Canalicule
intracelulare



Diferenieri
tranzitorii



Expansiuni
sau
Pseudopode


Filiforme


Digitiforme
procese Procese lamelare Vluri
Membrane
ondulante

Diferenieri


Microviloziti Platou striat
Margine n perie
permanente Expansiuni Cili
Flageli

Diferenierile tranzitorii apar i dispar n raport cu anumite momente
funcionale ale celulei, avnd aspectul unor nvaginri (invaginatio



24

Fig.3.10. Difereneri ale membranei celulare
1-Capilar sanguin; 2-Neutrofile; 3-Pseudopod; 4-Nucleu de histiocit; 5-Vluri ondulante; 6-
Macrofag cu vluri; 7-Enterocit;8 -Microvili; 9-Glicocalix; 10-Lumenul nefronului; 11- Margine n
perie; 12-Celul prismatic ciliat; 13-Cili; 14-Axonema; 15_Corpuscul bazal; 16-Rdcina cilului; 17-
Seciune transversal prin tija cilului; 18-microtubuli centrali i periferici; 19-Stereocili pe celule
epiteliale din epididim; 20-Flagelul spermatozoidului

cellularis) ale plasmalemei (n endocitoz), sau al unor expansiuni
(processus celularis), cum ar fi pseudopodele sau vlurile ondulante, prin
care se realizeaz deplasarea celulelor.



25
Pseudopodele (processus amoeboideus) sunt expansiuni cu form
de conuri (processus filiformis) sau degete (processus digitiformis), cu
ajutorul crora leucocitele ader de suporturi, deplasndu-se n timpul
diapedezei. Ele conin organite celulare, precum mitocondrii, ribozomi,
lizozomi.

Vlurile i membranele ondulante (processus lamellosus) sunt
expansiuni lamelare, foarte mobile, ce se formeaz n mediul lichid. Nu
conin organite i nu ader la suporturi. Apar n urma unor modificri ale
tensiunii superficiale i se ntlnesc la histiocitele implicate n fagocitoz.


Expansiunile permanente sunt
reprezentate de microvili, cili i flagel.



Fig.3.11.Dispunerea microfilamentelor n
microvilul intestinal
1-Microvili;2-Microfilamente de actin; 3-
Microfilamente de miozin; 4-Zonula adherens.

Microvilii (microvillus, i ) sunt
expansiuni cilindrice, delimitate de
membrana polului apical (apex
cellularis).Ele intervin n procesele de
absorbie prin mrirea suprafeei de
contact a celulei cu substanele ce vor fi
absorbite i prin concentrarea unui numr
mare de receptori. Pot fi dispuse grupat sau solitar. Microvilii solitari sunt
inegali, cu forme i dimensiuni variabile, distanate unele de altele, formnd
marginea n perie ( de expl.la nefrocite, din tubii contori ai nefronului).

Platoul striat cuprinde numeroi microvili (300-3000/enterocit) uniformi
ca lungime (0,6-0,8m) i diametru (200 nm), mbracati n glicocalix.
Plasmalema microvililor conine ATP-az i un numr mare de transportori.
Citoplasma microvililor cuprinde n zona central microfilamente (10-40) de
actin, dispuse paralel cu axul lung al microvilului.(Fig.3.11)

Microfilamentele de actin se inser cu un capt pe plasmalema polului apical al
microvilului, iar la polul bazal al acestuia se termin ntr-o reea perpendicular de
filamente de actin i miozin, denumit buton terminal, ce are rolul de a menine
poziia microvilului. Mnunchiul de microfilamente din microvil este legat de plasmalem,


26
din loc n loc,printr-o protein, denumit fimbrin. Aceste legturi formeaz o scar, n
spiral, de-a lungul microvilului.

Fig.3.12.Cili- aspect, structur i ultrastructur
A-Epiteliu pseudostratificat prismatic cilat; B-Celule prismatice ciliate,polul
apical;C-Seciune transversal prin cil.

Cilii (cilium,a) pot fi mobili (sau vibratili) i rigizi (sau stereocili).
Cilii mobili (kinetocilii) sunt prezeni la polul apical al celulelor
epiteliale din mucoasa aparatului respirator sau a oviductului. Au o lungime
de 5-15 m, o grosime de 0,2 m. unt formai din trei poriuni: - tija sau
poriunea liber, -corpusculul bazal i rdcina.
Tija (pars extracellularis) conine o matrice electrono -dens, plasat
la periferie i un complex filamentos axial (sau axonema)(filamentum
axiale), format din 10 perechi de tubuli longitudinali: -o pereche central


27
(microtubulus centralis) i - nou perechi periferice (diplomicrotubulus
periphericus), dispuse n jurul perechii centrale.

Corpusculul bazal (corpusculum basale) are un aspect cilindric i
cuprinde n structura sa nou dublete sau triplete (triplomicrotubulus)
periferice de microtubuli, lipsndu-i perechea central. Coordoneaz
micarea cililor.(Fig.3.12)

Rdcina (radix basalis) cilului este format din dubletele sau
tripletele periferice ale corpusculului bazal care ajung n citoplasma polului
apical al celulei ciliate. Are rolul de a ancora cilul n citoplasm, prezint
proprieti contractile i particip la conducerea stimulilor recepionai de
poriunea liber.

Stereocilii sunt cili rigizi, n structura crora lipsete perechea de
microtubuli centrali, avnd numai cele nou dublete periferice. Se ntlnesc
pe polul apical al celulelor din epiteliul epididimului.

Flagelul (flagellum) are n axonem o pereche central i nou
perechi periferice de microtubuli. Este prezent n alctuirea
spermatozoidului.




28

(microtubulus centralis) i - nou perechi periferice (diplomicrotubulus
periphericus), dispuse n jurul perechii centrale.
Corpusculul bazal (corpusculum basale) are un aspect cilindric i
cuprinde n structura sa nou dublete sau triplete (triplomicrotubulus)
periferice de microtubuli, lipsndu-i perechea central. Coordoneaz
micarea cililor.(Fig.3.12)
Rdcina (radix basalis) cilului este format din dubletele sau
tripletele periferice ale corpusculului bazal care ajung n citoplasma polului
apical al celulei ciliate. Are rolul de a ancora cilul n citoplasm, prezint
proprieti contractile i particip la conducerea stimulilor recepionai de
poriunea liber.

Stereocilii sunt cili rigizi, n structura crora lipsete perechea de
microtubuli centrali, avnd numai cele nou dublete periferice. Se ntlnesc
pe polul apical al celulelor din epiteliul epididimului.

Flagelul (flagellum) are n axonem o pereche central i nou
perechi periferice de microtubuli. Este prezent n alctuirea
spermatozoidului.

3.4. Jonciunile celulare

Jonciunile celulare (junctio intercellulares) sunt structuri stabile prin
care plasmalemele celulelor interacioneaz specific.

Tipuri de jonciuni celulare

Spaii intercelulare
A. Jonciuni simple Jonciuni denticulate
Jonciuni digitiforme

Jonciuni de adezivitate
Desmozomi n pat
Desmozomi n band
Hemidesmozomi
B.Jonciuni
complexe
Jonciuni impermeabile Jonciuni focale
Jonciuni de
comunicare

C. Complexe
joncionale




29


Fig.3.13.Tipuri de jonciuni
celulare
A-Jonciuni impermeabile -
zonula occludens; B-Desmozomi n
band - zonula adherens; C-
Desmozomi n pat - macula
adherens; D-Jonciuni permeabile -
gap.
In raport cu structura
lor, se descriu jonciuni
simple, jonciuni complexe
i complexe joncionale
(jonctio intercellularis
complex). n cazul
jonciunilor simple (junctio
intercelluaris simplex),
ntre plasmaleme exist un spaiu (de cel puin 30 nm) prin care pot trece
toate tipurile de molecule existente n mediul intercelular. Dup aspectul lor,
jonciunile simple sunt de trei feluri : - spaii intercelulare, - jonciuni
intercelulare denticulate (junctio intercellularis denticulata), i - jonciuni
intercelulare digitiforme (junctio intercelluaris digitiformes).
n raport cu funciile lor , se disting trei categorii de jonciuni
complexe: -de adezivitate, - impermeabile i -de comunicare.(Fig.3.13)

3.4.1.Jonciunile de adezivitate sau dezmozomii.
Desmozomii (desmosoma) sunt jonciuni ce confer o mare rezisten
mecanic unor esuturi i organe, solicitate n acest sens . Se prezint sub
trei forme, toate ntlnite n esuturile epiteliale: 1-desmozomi n pat; 2-
desmozomi n band; 3-hemidesmozomi.
Desmozomii n pat (macula adherens) .Se mai numesc i
desmozomi n "spot", n "nit", sau macula adherens (macula = pat, n
limba latin). Sunt prezeni mai ales n esuturile epiteliale de acoperire. n
alctuirea lor intr urmtoarele componente: 1- plasmalemele adiacente,
dispuse paralel, la o distan de 25-30 nm; 2-un material proteic,
intercelular dens la fluxul de electroni, cu aspect filamentos, bisectat de o
densificare central,bogat n glucide i calciu; 3-densificri intracelulare, n
form de disc, ataate de plasmalele joncionate; 4-dispozitive de legtur
sau linkeri, reprezentai de microfilamente, ce se detaeaz din materialul
dens intercelular, strbat plasmalemele i apoi discurile intracelulare,
pentru a se ancora la microfilamentele citoscheletului;


30

5-elemente citoscheletale, respectiv microfilamente de actin sau filamente
intermediare de cheratin, care se numesc tonfilamente.(Fig.3.14)







Fig.3.14
Desmozom n
pat-schem
1 - Plasmalemele
adiacente;
2- Spaiu i
material
intercelular;
3-Discuri
intracelulare;
4-Linkeri;
5-Tonofilamente.








Desmozomii n band (zonula adherens) sau n panglic
(zonula=panglic, n latin) sunt prezeni la polul apical al celulelor
epiteliale i la nivelul segmentelor transversale ale discurilor intercalare
cardiace.
Prezint o structur asemntoare cu cea a desmozomilor n pat, cu
urmtoarele deosebiri: -spaiul intercelular, de 15-25 nm este mai srac n
material electronodens; -densificrile intracelulare, de pe faa intern a
plasmalemelor joncionate, nu au form de disc, ci de band sau panglic.
(Fig.3.15)
Hemidesmozomii (sau semidesmozomii) (hemidesmosoma)
reprezint o variant a desmozomilor n pat, prin care se leag celulele
epiteliale de membranele bazale. Prezint numai jumtate din structura
desmozomului n pat, n sensul c, pe frotul citoplasmatic al plasmalemei
exist un disc, care se leag de membrana bazal prin filamente.


31




Fig.3.15. Schema desmozomilor n band (zonula adherens)
A-Densificri intracelulare n band; b-Spaiul intracelular.

3.4.2.Jonciunile impermeabile

Sunt dispuse n panglic, fapt pentru care se mai numesc zonula
occludens ( sau jonciuni strnse).
Se caracterizeaz prin obliterarea spaiului intercelular, deoarece
membranele adiacente se apropie complet sau se sudeaz pentru a forma
structuri pentalaminate sau heptalaminate. La realizarea acestor jonciuni
particip proteine transmembranare, care se dispun n iruri gemene
pentru a construi dispozitive ce se conecteaz "n fermoar" pe feele
externe ale membranelor adiacente. Pe feele interne , proteinele
transmembranare sunt "ancorate" prin intermediul unor microfilamente la
citoscheletul matricei.


32



Fig.3.16.Schema jonciunilor impermeabile
A-,B-Plasmalemele adiacente; C-Proteine transmembranare;
D-Spaiu intercelular; E-Enterocit; F-Citoscheletul matricei.

Aceste jonciuni mpiedic scurgerea fluidelor printre celule, inclusiv a
micromoleculelor, care sunt obligate s treac prin celul. Sunt ntlnite la
poriunile apicale ale celulelor care delimiteaz lumenul intestinului. Astfel,
glucoza este pompat activ din lumenul intestinal n celul prin suprafaa
polului apical, dup care trece n snge prin difuziune facilitat mediat de
transportorii situai n zonele bazo-laterale ale plasmalemei, pe care o
polarizeaz funcional ntr-un domeniuapical i altul latero-bazal.Totodat,
jonciunile strnse mpiedic Retrodifuziunea glucozei din spaiul
intercelular n lumenul intestinului.(Fig.3.16).
Jonciunile strnse au aspecte diferite, n funcie de esutul epitelial
n care sunt prezente. Astfel, jonciunile strnse de la polul apical al
celulelor din tubul contort proximal al nefronului au o rezisten relativ
sczut, fiind formate numai din unul sau dou iruri de proteine
transmembranare. La nivelul celulelor epiteliale din mucoasa vezicii urinare,
jonciunile strnse conin ase sau mai multe iruri de proteine
transmembranare, nct se realizeaz o jonciune puternic, extrem de


33

greu de traversat. La nivelul barierei hematoencefalice, jonciunile strnse
existente ntre celulele endoteliale ale vaselor din encefal realizeaz o
protecie eficient pentru esutul nervos, permind ns trecerea glucozei
(principala surs de energie) din snge n creier i trecerea, n sens invers
a bioxidului de carbon, rezultat din respiraia celulelor nervoase.
Jonciunile celulare strnse se caracterizeaz prin: -flexibilitate i
siguran; - formarea unor bariere chimice i fizice intercelulare; - conferirea
unei polariti a celulelor angajate n jonciuni; -apariia de timpuriu, ntre
celulele embrionare, iniial sub form de macule, care se extind treptat,
lund form de zonule.

Jonciunile focale reprezint o variant a jonciunilor strnse, n
care membrana celulei se apropie de substratul de adezivitate pn la 10-
15 nm. Pe faa extracelular a membranei sunt prezente filamente
glicoproteice de fibronectin, iar pe faa intracelular se aglomereaz
fascicule de microfilamente de actin i vinculin, care se leag de
plasmalem prin intermediul unor densificri adiacente membranei. ntre
filamentele de fibronectin i microfilamentele de actin i vinculin se
realizeaz dispozitive transmembranare de legtur (de 8-20 nm),
denumite fibronexuri.

3.4.3.Jonciunile de comunicare
Permit trecerea unor molecule mici dintr-o celul n alta i sunt de de
dou tipuri: jonciunile permeabile i sinapsele.
Jonciunile permeabile, de tip gap, nexus sau macula comunicans
sunt realizate prin structuri proteice, denumite conexoni, ce strbat
plasmalema, proeminnd de o parte i de alta a bistraturilor lipidice ale
membranelor adiacente. Sunt rspndite n diferite tipuri de esuturi,
reprezentnd principala cale de comunicare intercelular. Permit schimburi
rapide de molecule, fcnd posibil o cooperare metabolic
eficient.Spaiul intercelular (spatium intercellulare) este foarte ngust (2-
4nm). n momentul realizrii jonciunii permeabile, conexonii din cele dou
plasmaleme se aeaz cap la cap, formnd canale directe de comunicare
ntre citoplasmele celor dou celule, fr deschideri n spaiul
intercelular.(fig.3.18).



34








Fig.3.17Schema
jonciunii permeabile
(gap)
1-Plasmalemele
adiacente;
2-Spaiu intercelular;
3-Conexoni;
4-Canale intercelulare.











Fig.3.18.Diagrama
schimburilor moleculare prin
jonciunile gap.

Un conexon are o form de
prism hexagonal cu
diametrul de 7-8 nm i este
alctuit din 6 subuniti
proteice (oligomeri).
Subunitile delimiteaz un
canal hidrofil cu diametrul
reglabil. Ionii de calciu intracelular (Ca
2+
) modific diametrul canalului,
controlnd astfel comunicarea intercelular.
Canalul hidrofil al jonciunii gap permite trecerea dintr-o celul n alta
a ionilor i a unor molecule cu greutate sub 1.000-1500 daltoni, precum:
glucide, aminoacizi, nucleotide, hormoni, vitamine,etc. Nu pot s treac
macromoleculele (proteine, acizi nucleici, etc.), dar sunt de 10.000 ori mai
permeabile pentru ionii metalici dect restul suprafeei membranei.


35

n culturile de celule, jonciunile de tip gap se organizeaz foarte
rapid, din proteinele existente n plasmalem, care se grupeaz n
conexoni. Ele permit schimbul unor molecule de mrimi medii, ca
nucleotizii.
Jonciunile gap sunt necesare mai ale n situaiile n care celulele
trebuie s acioneze simultan, n grup, cum este cazul celulelor
embrionare, pe cale de difereniere sau ntre celulele musculare (cardiace
i netede), nervoase i endocrine.

3.4.4.Complexele joncionale
Cuprind jonciuni strnse spre frontul luminal i desmozomi spre
frontul latero-bazal. Sunt ntlnite, mai ales, ntre celulele din epiteliile
intestinale i renale. n complexele joncionale sunt prezente toate tipurile
de legturi intercelulare necesare pentru ndeplinirea funciilor specifice
esuturilor respective.(fig.3.19)










Fig.3.19. Complexe joncionale
n epiteliul intestinului subire.
A-Micvrovili;B-Jonciuni
impermeabile; C-Desmozomi n
band; D-Desmozomi n pat;
E-Filamente din citoschelet;
F-Jonciuni permeabile;
G-Hemidesmozomi;
H-Mebrana bazal.






36



3.5. Receptorii din membrane

Receptorii din membrane sunt dispozitive moleculare proteice
intramembranare, cu ajutorul crora se intercepteaz semnalele, ce sosesc
pe cale nervoas sau umoral.


Receptorii din membrane



Denumire
Liganzi
= mesageri
extracelulari (de
ordinul I)
Receptori
pentru:


Mediatori chimici
locali
Mediatori chimici locali

Hormoni hidrofili
(insulina,glucagonul,etc)
Hormoni
Hormoni hidrofobi (Hormoni steroizi
sexuali)
A.
Receptori
pentru
substane
endogene


Neurotransmittori
Acetil colina
Adrenalina
Noradrenalina
Dopamina, serotonina
GABA= Acidul gama aminobutiric
Acidul aspartic

Subst. imunogene
Antigene endogene
Anticorpi
Componentele complementului
B.
Receptori
pentru
substane
exogene
Virusuri
Antigene non self
Toxine microbiene
Lectine, etc
Adenovirusuri
Mixovirusuri
Antigene nonslef
Toxine microbiene
Lectine,etc





37

Toate substanele care se leag de receptori i moduleaz (modific)
funcia celular se numesc liganzi. Liganzii sunt substane, produse de
celule specializate, care acioneaz n mod specific asupra unui grup de
celule "int", producnd-le modificri ale activitii . Ei sunt denumii i
mesageri extracelulari sau mesageri de ordinul I, cei mai cunoscui fiind
hormonii i neurotransmitorii.
Liganzii acioneaz n cantitate foarte mic (10
-8
M), iar receptorii i
leag cu o constant de afinitate mare (K=10
8
litri/mol).
Exist dou mari categorii de receptori n membrane: receptori
pentru substane endogene i receptori pentru substane exogene.

3.5.1. Receptorii pentru substane endogene
Se cunosc mai multe categorii de molecule semnal (de liganzi) de
natur endogen (produse de organism): 1-mediatori chimici locali; 2-
hormoni; 3-neurotransmitori; 4-substane imunogene.
Mediatorii chimici locali sunt secretai de unele tipuri de celule i
acioneaz numai asupra celulelor din imediata lor vecintate. Ei sunt rapid
captai i distrui.(Fig.3.20).
Hormonii sunt substane endogene produse de celulele glandelor
endocrine. Pe cale sanguin, ajung la celulele int din diferite organe,
acionnd la distane mari de locul de producere.
Neurotransmitorii sunt substane endogene produse de neuroni i
eliberate la nivelul sinapselor chimice. Ei acioneaz numai asupra
neuronilor agajai n sinaps.
Hormonii i neurotransmitorii sunt considerai mesageri de ordinul I.
Hormonii au o compoziie chimic variat, putnd fi substane steroide
(hormonii sexuali) sau polipeptide ( ca de expl. hormonii pancreatici i
tiroidieni). Hormonii steroizi ptrund n celul, traversnd bistratul lipidic, pe
cnd cei polipeptidici se cupleaz cu receptorii specifici din membran,
acionnd de la acest nivel.
Substanele imunogene sunt reprezentate de : -antigene endogene; -
anticorpi; - componentele complementului.
Receptorii pentru neurotransmitori sunt situai n membrana
postsinaptic a celulelor nervoase, n membrana celulelor musculare sau a
altor celule efectoare. Ei recepioneaz acetilcolina, noradrenalina,
dopamina, serotonina, adrenalina, histamina, acidul gama-aminobutiric,
acidul aspartic, encefalina,etc.




38



Fig.3.20. Molecule semnal endogene.

Receptorii pentru hormoni au
o localizare diferit n celul, n
funcie de tipul hormonului, hidrofil
sau hidrofob.
Hormonii hidrofili (insulina,
glucagonul, adrenalina, hormonii
hipofizari, parathormonul,etc.) se
ataeaz de receptorii din
membrana periferic, transmind
celulei informaia necesar pentru
a-i modula activitatea. Dintre
receptorii hidrofili, cei mai bine
studiai sunt receptorii pentru
insulin din membrana
hepatocitelor i adipocitelor.
Ei au o mas molecular de
300.000 daltoni, iar n membrana
unei celule exist circa 10.000
receptori pentru insulin.
Hormonii hidrofobi (steroizi i
tiroidieni) traverseaz membrana
celulei int i se leag de receptorii
membranelor intracelulare.
Receptorii pentru substanele imunogene sunt de trei feluri: 1-pentru
antigene endogene; 2- pentru anticorpi; 3- pentru complement.
Receptorii pentru antigene endogene sunt mai numeroi pe
membrana limfocitelor T, sunt codificai genetic i au capacitatea s
recunoasc structurile moleculare "self" (proprii organismului respectiv).Ei
pot fi prezeni i n membrana unor celule neimunogene (expl. n
membrana enterocitelor.)
Receptorii pentru anticorpi sunt receptori Fc, pentru fraciunea
cristalizabil a imunoglobulinei G. Ei sunt prezeni n membrana celulelor
din sistemul fagocitelor mononucleare. n membrana bazofilelor i
mastocitelor se gsesc receptori pentru imunoglobulina E.
Receptorii pentru complement leag cea de a treia component a
complementului de suprafaa celulei, fiind caracteristici celulelor din
sistemul fagocitelor mononucleare.


39



3.5.2.Receptorii pentru substane exogene
Sunt receptori pentru:
- virusuri, capabili s recunoasc adenovirusuri, mixovirusuri,etc.;
- antigene nonself (strine de organism); sunt prezeni pe suprafaa
limfocitelor B i au o structur molecular asemntoare
imunoglobulinelor.Aceti receptori determin transformarea blastic a
limfocitelor B, dup contactul cu antigenul.
- toxine microbiene. Sunt prezeni n membrana celulelor
imunocompetente.
- lectine. Lectinele sunt substane proteice sau glicoproteice, extrase
din esuturi vegetale sau animale, capabile s formeze puni ntre
glicoproteinele membranare.

3.5.3.Mecanismul de aciune al receptorilor.

Receptorii din membranele de suprafa sunt activai n majoritatea
cazurilor de molecule semnal (liganzi) hidrofile.
Moleculele semnal hidrofile nu pot strbate membrana celular dect
dup ce se leag de receptorii specifici. Sub influena diferiilor liganzi se
produc modificri metabolice n celulele int. Ataarea liganzilor de
receptori se realizeaz prin legturi hidrofobe i legturi de hidrogen ( ca de
exemplu legarea insulinei de receptori ). Legturile sunt labile i strict
dependente de concentraia liganzilor din mediul extracelular.
Efectele aciunii complexului ligand-receptor asupra celulelor constau
n: modificri structurale ale membranei celulare i modificri funcionale
ale membranelor.
Modificrile structurale ale membranei celulare se manifest prin
redistribuirea receptorilor, rspndii la ntmplare nainte de interaciunea
ligand receptor. Dup contactul ligand-receptor, receptorii se grupeaz la
suprafaa membranei n zone delimitate sau "plaje".(Fig.3.21)
Acest lucru se poate realiza datorit fluiditii bistratului lipidic, nct
mai multe molecule de ligand pot aciona asupra mai multor receptori
nvecinai. Astfel n limfocitele B, lectinele pot induce formarea unor
agregate receptor-ligand de dimensiuni mari, denumite cupole, unde se
declaneaz un proces de endocitoz.



40


Fig. 3.21. Redistribuirea receptorilor din membrana celular

Modificrile funcionale ale membranelor constau n:
1- Modificri de permeabilitate a membranei, caracteristice pentru
liganzi de tipul neurotransmitorilor. n acest sens, acetilcolina se leag de
receptorii din membranele postsinaptice ale fibrelor musculare,
determinnd creterea permeabilitii membranei pentru ionii din mediul
extracelular.
2- Inducerea de endocitoz, care se produce cnd ligandul este o
substan endogen, vehiculat pe cale umoral.
3- Ptrunderea din mediul extracelular a unor ioni cu funcie de
mesageri de ordinul II. Astfel, ionii de calciu ptrund n celul dup ce
neurotransmitorii se leag de receptorii din membranele post sinaptice
ale jonciunii neuromusculare.
4- Activarea unor enzime din membrana celular. Se produce cnd
liganzii sunt hormoni hidrofili. Asfel se activeaz adenilat ciclaza ce va
cataliza sinteza, pe faa intern a membranei, a adenozin 3' - 5'
monofosfatului ciclic (AMP-c) sau va determina fosforilarea proteinelor
celulare. Activarea adenilat ciclazei se realizeaz cu ajutorul unor proteine
reglatoare.(Fig.3.22)
Dup activarea adenilat ciclazei, n citosol crete cantitatea de AMP-c
(considerat mesager de ordinul II) , amplificndu-se semnalul hormonal.
Totodat se activeaz i o proteinkinaz care controleaz fosforilarea mai
multor molecule proteice, stimulnd procesele metabolice din celul.
Sinteza de AMP-c poate fi blocat de unele prostaglandine care acioneaz
prin inhibarea aciunii adenilat ciclazei.
n unele maladii este implicat, n mod direct disfuncia receptorilor
din membran. Astfel, n "miasthenia gravis" este inactivat receptorul
pentru acetilcolin de la nivelul plcii neuromusculare, iar n
hipercolesterolemia genetic sunt abseni sau nefuncionali receptorii
pentru colesterol.



41



Fig.3.22. Activarea unor enzime din membrana celular

Exist afeciuni ale receptorilor care constau n blocarea funciei
autoimune prin autoanticorpi antireceptori.
Asfel, autoanticorpii pentru receptorii de insulin pot aciona ca
insulinomimetici (activnd receptorii) sau ca blocani ai acestora (n
diabetul insulinorezistent). Autoanticorpii care stimuleaz receptorii
dopaminei pot constitui cauze ale scizofreniei, iar imunoautoanticorpii beta
adrenergici sunt implicai n afeciunile asmatice. n procesul de mbtrnire
i n unele boli neuropsihice (la om) s-a observat o modificare a densitii
receptorilor.

3.6.Schimburile prin membran

Prin membrana celular se efectueaz schimbul de substane, fie prin
traversarea diferitelor structuri ale acesteia, sau pe calea transportului n
mas, cu ajutorul veziculelor, furnizate de membrana celular.
Bistratul lipidic funcioneaz ca o barier de difuziune pentru ap i
alte molecule hidrofile, n timp ce moleculele liposolubile, oxigenul i
bioxidul de carbon l trec cu uurin.
3.6.1.Transportul transmembranar
Realizeaz schimburile de molecule mici i ioni (de unde i
denumirea de microtransport) ntre celul i mediul extracelular.
ndeplinete urmtoarele funcii:
Preia din mediul extracelular o serie de combustibili metabolici
necesari meninerii vieii celulei i activitilor ei metabolice;


42

Elimin n mediul extracelular compui fiziologici necesari
organismului (substane secretate), precum i substane toxice toxice ,
rezultate din activitatea celulei;
Regleaz volumul celulelor;
Asigur meninerea ph-ului intracelular i compoziia ionic la
valori ct mai favorabile desfurarii activitii metabolice celularte;
Produce diferene de concentraii (gradiente ionice), care permit
desfurarea unor activiti biologice complexe, cum snt excitabilitatea
nervului i a muchiului.





42

Preia din mediul extracelular o serie de combustibili metabolici
necesari meninerii vieii celulei i activitilor ei metabolice;
Elimin n mediul extracelular compui fiziologici necesari
organismului (substane secretate), precum i substane toxice toxice ,
rezultate din activitatea celulei;
Regleaz volumul celulelor;
Asigur meninerea ph-ului intracelular i compoziia ionic la
valori ct mai favorabile desfurarii activitii metabolice celularte;
Produce diferene de concentraii (gradiente ionice), care permit
desfurarea unor activiti biologice complexe, cum snt excitabilitatea
nervului i a muchiului.

Transportul prin membrane

Denumire Modaliti Mecanisme


A.Transport pasiv


Difuziune simpl

Pori
Canale moleculare
transmembranare

Difuziune facilitat Crui proteici moleculari
Transport prin pompe ionice Pompa de Na
+
- K
+
Pompa de Ca
2+
B. Transport
activ
Transport cuplat Pompare molecular
Translocare de grup

Endocitoza
Fagocitoza
Pinocitoza fr receptori
Pinocitoza mediat de receptori
C. Transportul n
mas
Exocitoza

Transcitoza
Transcitoza distributiv
Transcitoza conectiv


n funcie de mecanismele care intervin n micarea moleculelor prin
membrana celular se deosebesc dou forme de transport : a-transportul
activ i b- transportul pasiv. (Fig.3.23).
3.6.11.Transportul pasiv
Realizeaz trecerea moleculelor mici n sensul gradientului de
concentraie, iar a ionilor n sensul gradientului electrochimic. Se face fr
consum de energie, fiind independent de metabolismul celular.


43
Exist dou modaliti de realizare a transportului pasiv prin:
difuziune simpl i prin difuziune facilitat.
Transportul pasiv prin difuziune simpl. Se face lent, ntruct
restructurarea permanent a membranelor biologice este o dificultate
pentru difuziune.Este supus legilor difuziunii i osmozei, fiind dependent
numai de fore fizice.

















Fig.3.23. Transportul transmembranar.
1-Bistrat lipidic;2-Proteine transmembranare;
3-Molecule transportate;4-Difuziune simpl;5-Difuziune facilitat; 6-Transport activ;
7-Sensul gradientului electrochimic.

Moleculele mici liposolubile difuzeaz prin bistratul lipidic, iar cele
hidrosolubile trec prin orificii mici canale sau pori hidrofili situati n bistrat,
delimitai de proteine transmembranare. Canalele transmemebranare au un
diametru de 1 nm, fiind specializate i selective. Vasopresina stimuleaz
transportul prin canale i pori mrindu-le diametrul pn la 2-3 nm.
(Fig.3.24)

Fig.3.24. Transportul prin canale
i pori.
1-Por; 2-Bistrat lipidic; 3-Proteine
transmembranare; 4-Ion.
Transportul prin difuziune
faciliat. Este mult mai
rapid (de cca.100.000 ori)
dect cel prin difuziune simpl,
permind trecerea prin
membran a unor substane
greu solubile n lipide i cu o mas molecular relativ mare.



44

Se ntlnete frecvent la hepatocite,unde, n acest mod, se transport
glucoza,aminoacizi,etc.(Fig.3.25.)
Fig.3.25.Tranportori de tip
canal i cru.
1-Bistrat lipidic; 2-Canal; 3- Cru sau
tranportor mobil.
Se realizeaz cu
ajutorul unor molecule
proteice din compoziia
membranei cu rol de
crui.
Astfel, pe membrana
hepatocitului exist 800.000 de crui, iar fiecare cru transport 100
molecule de glucoz pe secund.
Transportul prin difuziune facilitat se efectueaz n sensul
gradientului de concentraie i duce la echilibrarea concentraiilor pe
ambele fee ale membranei, ns viteza de transport este direct
proporional cu concentraia lor. n raport cu numrul speciilor transportate
exist transport uniport, simport i antiport. (Fig.3.26.)


Fig.3.26. Tipuri de transport, n
funcie de sens i numrul speciilor
transportate
1-Bistrat lipidic; 2-Protein transportor; 3-
Molecule transportate; 4-Uniport: 5-
Sinport;6-Antiport.




3.6.1.2.Transportul activ
Se realizeaz mpotriva gradientelor de concentraie sau a
gradientelor electrochimice, producnd o cretere a concentraiei pe o fa
a membranei. Solicit cheltuial de energie, care este furnizat de
metabolismul celular, fiind metabolic dependent. Unele celule nalt
difereniate (fibre musculare, neuroni) i procur energia necesar
transportului pe cale aerob, prin producere de ATP. Hematiile i produc
moleculele de ATP necesare pentru transport prin glicoliz.
Exist mai multe tipuri de transport activ, n funcie de modul n care
este folosit energia:


45
1-Tranportul activ prin pompe ionice, n care proteinele ce efectuiaz
transportul folosesc direct energia din ATP, avnd proprieti ATP-azice (
de descompunere a ATP-ului).
2-Trasportul cuplat (sau cotransportul), n care se folosete energia
gradientelor ionice, substanele de transportat (glucide, aminoacizi) fiind
cuplate cu unii ioni (Na+).
3-Translocarea de grup, ntlnit la unele bacterii, care folosesc ca
surs de energie fosfoenolpiruvatul.
Transportul prin pompe ionice.
Pompele ionice sunt protein-enzime din compoziia plasmalemei care
transport ionii ntr-o direcie termodinamic nefavorabil, mpotriva
gradientului electrochimic sau de concentraie.
n organism se cunosc pompe transportoare pentru ioni sau
cationi,existnd pompe pentru un singur ion (Ca
2+
sau Mg
2+
) sau pentru doi
ioni (pompa de Na
+
i K
+
).
Pompa de Na
+
- K
+
este ce a mai bine cunoscut.(Fig.3.27)


Fig.3.27.
Organizarea
molecular a
pompei ionice de
Na
+
- K
+

1-Plasmalema;
,-Proteine
transmembranare







n condiii normale, ionul de potasiu (K
+
) se gsete ntr-o
concentraie mai mare (de cca. 15 ori)intracelular, n timp ce ionul de sodiu
(Na
+
) are o concentraie mai mare extracelular. Gradientele ionice
(diferenele de concentraii) sunt meninute printr-un sistem special de
transport, denumit pompa de Na
+
-K
+
.
Pompa de Na
+
-K
+
a fost studiat pe membranele hematiilor, unde s-a
constatat o deplasare concomitent a Na
+
extracelular (spre o concentraie
mai mare), iar a K
+
intracelular (tot spre o concentraie mai mare), contrar
gradientelor de concentraie. Energia necesar acestui transport se obine



46
prin hidroliza ATP-ului, care este realizat de ctre o enzim din
plasmalem, denumit Na
+
-K
+
-ATP-az, deoarece acioneaz numai n
prezena ionilor de Na
+
,K
+
i a unei concentraii favorabile de Mg
2+
.
Aceast enzim este o glicoprotein mare, un tetramer cu o greutate
molecular de 270.000 daltoni.


Fig.3.28.Transportul cuplat prin pompare molecular.


Pompa de Ca
2+
sau Ca
2+
-ATP-aza asigur transportul ionilor de Ca
2+

prin sistemul de membrane ale reticulului endoplasmic din fibrele
musculare.
Exist i pompe pentru anioni, precum pompa de clor (Cl
-
) din
celulele parietale ale glandelor gastrice sau pompa de iod (I
-
) din tiroid.
Transportul cuplat (sau mecanismul de pompare molecular)
utilizeaz, pentru transportul unor molecule (glucoz, aminoacizi), energia
care rezult din micarea Na
+
mpotiva gradientului de concentraie i al
gradientului electric. Aceast energie poate fi folosit pentru introducerea n
celul a unor substane nutritive. (Fig.3.28).
Glucoza este pompat din mediul extracelular n celule (enterocite
sau nefrocite) odat cu ionii de Na
+
cu ajutorul unei uniti proteice de
transport. Dup ptrunderea n celul, glucoza se decupleaz de ionii de
Na
+
, care sunt pompai n afara celulei printr-o Na
+
-K
+
-ATP-az.



47
3.6.2. Transportul n mas
Este procesul prin care celulele preiau din mediul extracelular
particule de natur diferit, prin formarea de vezicule pe seama membranei
celulare. n funcie de direcia n care se deplaseaz veziculele deosebim
trei tipuri de transport n mas: 1-exocitoza; 2-endocitoza; i 3-transcitoza.
3.6.2.1. Exocitoza
Exocitoza este procesul prin care celulele i descarc n mediul
extracelular produsele secretate sau alte materiale pemtru export.
Produsele pentru export se colecteaz n vezicule intracitoplasmatice
(vesicula cytoplasmatica, care se deplaseaz dinspre complexul Golgi spre
membrana celular, fie n mod spontan, fie dup stimularea celulei de ctre
unii factori secretagogi (hormoni, neurotransmitori, factori de eliberare).
Deschiderea veziculelor i eliminarea coninutului n spaiul extracelular se
datorete contraciei microfilamentelor, n prezena moleculelor de ATP , de
AMP-c ia ionilor de Ca
2+
.n celulele exocrine, exocitoza este limitat la
domeniul apical (luminal) al plasmalemei.

Fig.3.29.Transportul prin vezicule (n mas).
A-Endocitoza; B-Exocitoza; C-Transcitoza.
1-Plasmalema; 2-Fagozom; 3-Lizozom primar; 4-Lizozom secundar;5-Vezicule
de secreie; 6-Vezicule de transport.

Exocitoza este prezent i la nivelul sinapselor, unde veziculele ce
conin mediatori chimici (acetilcolin, noradrenalin) fuzioneaz cu
membrana presinaptic. Mediatorii sunt eliberai n spaiul sinaptic, dup
care se leag de receptorii specifici din membrana postsinaptic,
producnd depolarizarea ei i transmiterea influxului nervos.
3.6.2.2. Endocitoza


48
Endocitoza este procesul prin care celulele preiau din mediul
extracelular molecule mari ( cu greutate molecular mai mare de 10.000
daltoni), prin intermediul unor vezicule, care se formeaz din membrana
celular. n acest fel se poate realiza nutriia celulei, purificarea mediului
extracelular i unele procese de aprare imunitar.
Dup natura materialului endocitat i dup modaliatea de ingestie se
disting dou tipuri de endocitoz: 1-fagocitoza (de la grecescul phagein = a
mnca) sau endocitoza de molecule i particule solide,microorganisme
(bacteriene sau virale), macromolecule alterate, detritus celular, celule
ntregi, etc. nensoite de fluid; 2- pinocitoza ( de la grecescul pinein = a
bea) sau endocitoza de fluid, ce conine molecule sau particule.
3.6.2.2.1.Fagocitoza
n condiii normale i patologice, pot participa la fagocitoz un mare
numr de tipuri celulare, denumite generic fagocite. n funcie de mrimea
particulelor pe care sunt capabile s le nglobeze, se disting microfage,
care nglobeaz numai particule mici (exemplu neutrofilele) i macrofage,
care nglobeaz particule mari, existnd macrofage mobile ( monocitele
circulante) sau macrofage fixe (histiocitele din esutul conjunctiv, celulele
Kupffer din ficat, celulele capilarelor sinusoide din splin, unele celule din
mduva osoas hematogen, din limfonoduri, din pulmon,etc.).
Fagocitele prezint pe suprafaa membranei regiuni specializate
purttoare de receptori, cu ajutorul crora recunosc ceea ce este "self"
(macromoleculele proprii organismului) de ceea ce este ""non self", adic
macromoleculele strine de organism, denumite generic antigen. Dintre
macromoleculele self, receptorii pentru fagocitoz rercunosc ceea ce este
sntos de ceea ce este alterat ( self alterat: celule degenerate, celule
maligne, celule mbtrnite, resturi tisulare). n unele situaii patologice,
receptorii celulelor ce intervin n fagocitoz pierd capacitatea de a diferenia
self-ul de non-self , acionnd, asfel, mpotriva proteinelor din organismul
propriu i determinnd apariia reaciilor autoimune, care pot genera o serie
de entiti patologice.
Recunoaterea antigenilor n organism este nlesnit de prezena n
mediul extracelular a unor proteine, denumite opsonine. Opsoninele sunt
proteine extracelulare care mediaz i faciliteaz legtura ntre receptorii
membranei fagocitelor i antigenele ce vor fi fagocitate, formnd complexe
antigen-opsonine.
Se cunosc mai multe tipuri de receptori ai complexelor antigen-
opsonin, precum: - receptorii Fc, care leag de suprafaa membranei
antigenele opsonizate cu imunoglobuline G ( Ig G), dup ce au recunoscut
fraciunea cristalizabil (Fc) a imunoglobulinei G.; - receptorii C
3,
care


49
reconosc i fixeaz antigenii opsonizai cu cel de al treilea component al
complementului.
n membrana fagocitelor, n afar de receptoriii pentru complexe
opsonizate, s-au mai descris receptori nespecifici care recunosc i fixeaz
selful alterat, reprezentat de resturi celulare sau celule maligne.
Fagocitoza se desfoara n patru etape:chemotaxia,opsonizarea,
ingestia i digestia.
Chemotaxia este proprietatea unei celule mobile (n cazul de fa a
neutrofilelor) de a se deplasa prin esuturi ctre particule int, ca rspuns
la diveri stimulli dup ce inta a fost recunoscut. Semnalele chemotactice
sunt reprezentate de: substane bacteriene (proteine, lipide), proteine
serice, componente ale complementului (15 proteine serice, care amplific
rspusul imun), produse ale limfocitelor (limfokine), factori eliberai de
neutrofile.



Fig.3.30. Opsonizarea i fagocitarea.

Opsonizarea const n acoperirea bacteriilor sensibilizate de
anticorpi pentru a fi fagocitate. Principalele opsonine sunt anticorpii, n
special imunoglobuline (Ig
1
, Ig
3
) i componente ale complementului (C
3
,
C
5
). Fraciunea cristalizabil (Fc) a imunoglobulinei G este recunoscut de
receptorii Fc de pe suprafaa neutrofilelor. (Fig.3.30)


50
Ingestia microorganismelor are loc dup ce acestea au fost
opsonizate. Complexul antigen-opsonine este recunoscut de receptorii de
la suprafaa fagocitelor i legat de membrana celular, determinnd
activarea receptorilor. n urma activrii receptorilor, actina din citoscheletul
membranei,se contract, determinnd emiterea de pseudopode.
Pseudopodele nconjoar strns particula i n acest fel se realizeaz
interaciuni receptor- particul pe toat suprafaa ei. Mecanismul de fixare a
particulei de membrana psedupodelor este comparat cu nchiderea unui
fermoar. Extremitile pseudopodelor nconjoar particula i formeaz o
vezicul, denumit fagozom.(Fig.3.30.)
n citoplasm, fagozomul se unete cu un lizozom , formndu-se un
fagolizozom, n care hidrolazele acide vor aciona asupra particulei strine,
producnd digestia acesteia. n cazul neutrofilellor, contopirea granulelor
azurofile primare (a lizozomilor) cu fagozomul i eliberarea coninutului lor
n fagolizozom (sau vezicula digestiv) se manifest prin dispariia
granulelor din citoplasm,fenomen cunoscut ca degranularea neutrofilelor.




Fig.3.31.Mecanismele fagocitozei ;
A-Mecanisme moleculare; Realizarea fagozomilor.
1-ImunoglobulinaG; 2-Receptor inactiv; 3-Receptor activat; 4-Protein contractil din
citoschelet; 5-Pseudopode; 6-Fagozom.




51





Digestia intracelular a particulelor fagocitate are loc n lizozomi i se
produce prin: -sisteme dependente de oxigen, mediate de enzime
(mieloperoxidaz, superoxidismutaz); i - prin sisteme independente de
oxigen ,ce presupun aciunea lizozimului, a lactoferinei,etc..

3.6.2.2.2.Pinocitoza

Pinocitoza sau endocitoza particulelor n faz fluid reprezint
procesul de transport n mas a unei cantiti variabile de fluid tisular,
mpreun cu particulele pe care le conine, prin intermediul unor vezicule
(vezicula pinocitocica), denumite pinozomi.
Se ntlnete la toate tipurile de celule, aprnd ca o modaliatate
mportant prin care celulele capteaz din lichidul intercelular substanele
necesare metabolismului lor.
Se deosebesc dou forme de pinocitoz n funcie de mecanismele
care intervin n procesul de preluare a sustanelor: - pinocitoza far
receptori i - pinocitoza mediat de receptori.
Pinocitoza fr receptori este endocitoza cea mai frecvent ntlnit
la acele celule din organism, care folosesc pentru transport suprafee mari
nespecializate din membrana plasmatic.. Preluarea substanelor cu
ajutorul veziculelor se face fr o legare prealabil a lor de membrana
celular prin receptori.
Pinocitoza se desfoar n mai multe etape:
1-Contactul particulelor din fluidul tisular produce activarea unor
puncte de pe suprafaa celulei , denumite situsuri anionice. Acest proces
induce agregarea microfilamentelor din citoscheletul membranei,
producnd creterea flexibilitii membranei celulare.
2-Membrana celular se invagineaz formnd cripte sau canale
intracelulare (invaginatio cellularis), n care intr lichid extracelular,
mpreun cu particulele prezente n el.
3-Membranele din vecintatea extremitii profunde a canalului se
alipesc,fuzioneaz i apar pinozomii (vesicula pinocytotica), vezicule ce se
desprind de canal i sunt antrenate de curenii intracitoplasmatic.
4-Pinozomii fuzioneaz cu lizozomii, formnd pinolizozomii, n care
enzimele lizozomale produc digestia materialelor preluate din exteriorul
celulei.


52
n funcie de mrimea particulelor nglobate prin pinocitoz se
distinge o micropinocitoz i o-macropinocitoz.
Macropinocitoza este modalitatea de transport a unor particule mari
vizibile la microscopul optic. Poate fi studiat prin injectarea in vivo de
colorani vitali, care se fixeaz de proteinele serice. Complexele formate din
proteine serice i coloranii vitali coloidali sunt introduse n citoplasm
mpreun cu mici cantiti de lichid extracelular, fiind utilizate ca indicator
de recunoatere a celulelor care manifest proprietate de pinocitoz la
nivelul organelor i esuturilor.
Micropinocitoza reprezint modalitatea de transport a moleculelor
mici cu ajutorul veziculelor , vizibile numai la microscopul electronic.
Urmrindu-se soarta veziculelor pinocitate, s-a observat c acestea
pot: 1- rmne n citoplasm, unde fuzioneaz cu lizozomii, n care sunt
digerate, iar dup ce i-au descrcat coninutul, membranele lizozomale
sunt reintegrate n membrana celular; 2- traversa citoplasma fr a
fuziona cu lizozomii, descrcndu-i coninutul pe cealalt fa a
citoplasmei.
Pinocitoza mediat de receptori.
Se mai numete i pinocitoz absorbtiv, selectiv sau concentrativ.
Este modalitatea de preluare din mediul extracelular a unor materiale
diferite, prin folosirea unor zone specializate ale membranei celulare,
prevzute cu receptori.
Receptorii recunosc i leag de membran particule diferite. Fiind
mobili receptorii se grupeaz la nivelul unor zone specializate ale
membranei celulare, care se invagineaz formnd caveolele (vesicula
superficialis s. caveola) acoperite, deoarece sunt acoperite pe versantul
citoplasmatic de o reea de microfilamente, formate dintr-o protein,
denumit clatrin. Reeua de clatrin stabilizeaz poziia receptorilor i
menin caveolele n comunicare cu mediul extracelular.(Fig.3.32.)
Caveolele acoperite care fixeaz complexele particul-receptor (sau
ligand-receptor) sunt nglobate rapid mpreun cu o cantitate mic de fluid
extracelular sub form de vezicule care pot s-i pstreze mantaua de
clatrin pe faa lor extern (vezicule acoperite) sau microfilamentele de
clatrin se desprind la nivelul membranei, n acest caz aprnd vezicule
netede sau receptozomi.
Particulele nglobate prin pinocitoza mediat de receptori pot fi
degradate n lizozomi sau n unele cazuri, receptozomii traverseaz
citoplasma fr s interacioneze cu lizozomii, fiind eliminate pe cealalt
fa a celulelor.



53


























Fig.3.32. Pinocitoza mediat de receptori.
1-Plasmalema; 2-Receptori mobili;3-Ligand; 4-Complex ligand receptor;
5-Caveol acoperit cu clatrin; 6-receptozom ; 7-Nucleu; 8-Complex Golgi;
9-Lizozom.

Spre deosebire de pinocitoza fr receptori, n care concentraia
substanelor n veziculele endocitate este aceeai ca n lichidul
extracelular, n veziculele acoperite , ce apar n pinocitoza mediat de
receptori, concentraia substanlelor este mult mai mare dect n lichidul
extracelular, datorit capacitii receptorilor de a lega selectiv un numr
mare de particule.


Implicaii patologice. Pinocitoza mediat de receptori este o modalitate
folosit pentru preluarea din lichidul extracelular i din snge a
colesterolului, o lipoprotein cu densitate mic. n situaii normale, celulele
prevzute cu receptori pentru proteine cu densitate mic preiau colesterolul
din mediul extracelular. Lipsa acestor receptori, ntlnit n unele deficiene
genetice, face imposibil preluarea moleculelor de colesterol din snge,
determinnd o cretere a concentraiei acestuia (hipercolesterolemie) i
apariia de plci aterosclerotice n peretele vascular.



54



Fig.3.33. Schematizarea modalitilor de transport prin celula endotelial.
(dup SIMIONESCU-1981)

3.6.2.3.Transcitoza

Transcitoza sau citopemsis reprezint o form aparte a transportului
prin vezicule, prin care se realizeaz transportul macromoleculelor prin
celule endoteliului capilar. A fost studiat de Palade (1953), care a
observat, cu ajutorul microscopului electronic, vezicule ce traverseaz
celulele endoteliale, realiznd schimburi ntre plasm i lichidul
interstiial.(Fig.3.33)
Transportul veziculelor pinocitate se poate realiza prin dou
modaliti: 1-transcitoza distributiv, n care trecerea se face sub forma
unor iruri de vezicule intracitoplasmatice, ce se ntind de la faa luminal
la faa bazal, fr a ajunge n contact cu lizozomii; i 2-transcitoza
conectiv, n care transportul se face prin canale ce se formeaz fie prin
fiziunea veziculelor, fie prin invaginarea plasmalemelor.




55

4. NUCLEUL
Nucleul (lat. nucleus i gr. karion = smbure) (nucleus) este
o component esenial caracteristic celulelor eucariote.
ndeplinete ca funcii principale: -stocarea informaiei genetice n
ADN-ul nuclear , reglarea i controlul tuturor activitilor celulare. n
organismele animale, exist i celule anucleate (hematiile,
trombocitele), care sunt incapabile s sintetizeze proteine,
activitiile lor metabolice fiind foarte restrnse.

Componentele nucleului

Denumire Componente Formaiuni ultrastructurale
Membrana
nuclear
extern

A. Membrana
nuclear
( nveliul
nuclear)
Cisterna
perinuclear
Complexul por:
Anulus extern
Anulus intern
Granul central
8 granule proteice
periferice
8 conuri de proteine
fibrilare
Membrana
nuclear
intern


B. Nucleoplasma
Scheletul
nuclear
Matricea fibrilar (granule
i matrixin )
Lamina dens intern
Complexul lamina por
Componenta fibrilar a
nucleolului
Fraciune labil
Cromatina Eucromatina
Heterocromatina
C. Nucleolul Componenta
filamentar
Filamente de 5 nm
grosime/30-40 nm lungime
Componenta
granular
Precursori ribozomiali


Componenta
amorf


56
Cromozomial Cromatina perinucleolar
Cromatina intranucleolar

Nucleul a fost descoperit de FONTANA, n 1831, care a
observat o formaiune ovoid n celulele epidermice. Ulterior,
BROWN (1833) a fost primul care a enunat conceptul de celul
nucleat, ca unitate structural, care intr n alctuirea plantelor,
concept ce a fost extins i la alcturiea corpului animalelor.
n alctuirea nucleului intr: nucleolema sau membrana
nuclear, nucleoplasma (matricea sau sucul nuclear), nucleolii i
cromatina sau cromozomii.
Nucleul reprezint centrul de comand, control i de
coordonare a celulei eucariote, funcionnd ca un computer chimic
prevzut cu un program (ADN-ul) i o memorie (ARN-ul). n
calitate de centru informaional al celulei, nucleul coordoneaz
toate reaciile chimice legate de desfurarea proceselor vitale,
contrlnd att sinteza proteinelor enzime din celul, ct i sinteza
proteinelor de structur. (Fig.4.1.)



Fig.4.1. Rolul nucleului n circulaia informaiei genetice n celula eucariot.

Nucleul conine genomul (totalitatea genelor) celulei, format
dintr-un numr precis de gene. O gen este o secven de
nucleotide (500-1500), care determin o secven de aminoacizi,

57
mpreun cu elementele de control (un promotor, o secven lider
i un terminator. La animalele domestice, gena ocup un loc
specific n molecula de ADN care ntr n compoziia
cromozomului.
ntr-o celul uman, lungimea total a moleculelor de ADN
este de cca. 1,6 m coninnd un potenial informaional imens,
estimat la aproximativ 9 X 10
11
bii, ce corespunde informaiilor
cuprinse ntr-o bibliotec cu 180.000 volume (considerndu-se c
un cuvnt este evaluat n medie la 36 bii, iar n fiecare volum se
gsesc 150.000 cuvinte).
Totodat nucleul conine echipamentul enzimatic necesar
pentru: repararea genomului, replicarea sa, transcrierea mesajului
n ARN i prelucrarea ARN-ului ( n ARN mesager, ARN de
transfer i ARN ribozomal.

Fig.4.2. Forme de nuclei
1-Veziculos (n neuron); 2-Multilobat (neutrofil); 3,11-Bilobat (eozinofil,
pseudoeozinofil de pasre); 4-Aplatizat (adipocit); 5-Reniform (monocit); 6-Ovoidal
(eritrocit); 7-Discoidal (celula caliciform); 8-Alungit (leiocit); 9,10-Sferoidal sau ovoidal
(limfocit)

4.1. Caracterele morfologice ale nucleului



58
Rspndire. Majorittea celulelor organismului prezint
nucleu. Exist i excepii (hematiile,celulele cristaliniene,
trombocitele), care reprezint stadii finale, n evoluia unui tip
celular, cu existen limitat n timp, stadii specializate la funcii
pasive. Celulele fr nucleu nu pot crete i nu se mai divid.
Forma nucleilor este foarte variat,indicnd, de regul, pe
cea a celulei. Nucleul apare: - sferic-ovoidal (nucleus sphericus-
ovoideus), n celulele izodiametrice (sferice,cubice,poliedrice);-
alungit (bacilliformis,fusiformis), n celulele fusiforme (musculare)
sau columnare (prismatice); - turtit,aplatizat (planus) n celulele
pavimentoase (endoteliale),n adipocite, n celulele caliciforme;
lobat (segmentalis s. moniliformis)), n celulele care trebuie s se
modeleze rapid.(Fig.4.2.)
Forma nucleului este influenat de activitatea celulei.
Devine neregulat n celulele foarte active. n acest mod se
produce o cretere a suprafeei prin care se realizeaz schimburile
dintre nucleu i citoplasm. Totodat nucleul prezint o oarecare
plasticitate (deformabilitate) care i permite ca, n anumite condiii
spaiale intracelulare, s i modifice forma. Asfel, n monocite
nucleul apare reniform (nucleus reniformis), dei celula este
sferic, deformarea datorndu-se prezenei centriolului.

Fig.4.3. Poziia nucleului n diferite celule.
1-Central; 2-Periferic; 3-Mediobazal; 4,5-Bazal.

Poziia. n cele mai multe cazuri, nucleul ocup o poziie
central, strategic pentru rolul de coordonator al activitii
celulare. Totodat exist numeroase excepii, n care nucleul
ocup o poziie: excentric, n adipocite (celule care acumuleaz
grsimi n citoplasm); medio-bazal, n celulele secretoare din
pancreas sau parotid; bazal, n secretoare de mucus, n celulele
caliciforme. n general n celulele secretoare.(Fig.4.3.)
Numr. Ca regul general, o celul prezint un nucleu.
Excepiile sunt ns numeroase. Astfel, hepatocitele sunt
binucleate n proporie de 7-8%, osteoclastele au 30-40 nuclei, iar

59
fibra muscular striat (rabdocitul) prezint ntre 20-40 nuclei
pentru fiecare centimetru.
n condiii patologice, mai muli nuclei apar n:- celulele
gigante Langhans (prezente n tuberculoz, au cva zeci de
nuclei, dispui la periferia celulei, n coroan sau potcoav); -
celulele gigante de corp strin, care apar n cazul ptrunderii n
organism a unor particule strine, nedigerabile de ctre celule; -
celulele tumorale.
Multinuclearitatea se produce n dou moduri: 1- prin
multiplicare nuclear repetat (cariokinez), fr diviziunea
citoplasmei (citodierez),rezultnd un plasmodiu; 2-prin fuzionarea
mai multor celule mononucleate, rezultnd un sinciiu (cum este
cazul osteoclastelor, rabdocitelor,celulelor Langhans,etc.)


Fig.4.4. Variaia dimensiunilor nucleului n funcie de gradul de poliploidie

Dimensiunile nucleului. Variaz n limite mai strnse (ntre 5-
15) dect dimensiunile celulelor, diversitatea dimensiunilor
celulelor din organismul animal realizndu-se pe baza variaiei de
volum a citoplasmelor.
Msurarea dimensiunilor nucleului se numete cariometrie
i reprezint un domeniu de mare interes pentru biologia i
patologia celular. Nucleii prezint variaii dimensionale funcionale
i patologice.
Variaiile funcionale ale dimensiunilor nucleului sunt n
legtur cu: Vrsta, nucleul fiind mai mare n celula tnr,
dect n celula mbtrnit, n cazul aceluiai tip celular;
Bioritmul, existnd diferene de volum de pn la 20%,
ntre zi i noapte, la hepatocite,neuroni, nefrocite,etc.;
Gradul de poliploidie (numrul de seturi cromozomale
prezente n nucleu). Cu ct gradul de poliploidie este mai mare cu
att nucleul este mai mare. Astfel, nucleii megacariocitelor sunt
mult mai voluminoi dect cei a hepatocitelor. Din acest punct de
vedere n hepatocite se pot ntlni : 1 - nuclei mici (cu diametru de
10 m), diploizi (2n), ntlnii la cca.80% din hepatocite; 2 - nuclei

60
medii (cu diametru de 15 m); - tetraploizi (4 n), ntlnii la 16% din
hepatocite i uneori octaploizi. S-a constatat c suprafaa nuclear
crete proporional cu gradul de poliploidie, fapt ce explic
nmugurirea nucleilor poliploizi.
n patologie, variaii ale dimensiunilor nucleului se ntlnesc
n toxicoze, n boala de iradiere i n cancer. n celulele neoplazice,
nucleii apar de talie mare, cu morfologie extrem de variat n
acelai cmp microscopic, putnd prezenta uneori aspect
monstruos.+
ntre volumul nucleului i volumul citoplasmei se stabilete
un raport nucleo-citoplasmatic (N/C), a crei valoare variaz n
limite foarte largi (1/3 - 1/20), de obicei situndu-se ntre 1/7 - 1/10.
Atunci cnd volumul citoplasmei crete mai mult dect
volumul nucleului, raportul N/C va fi refcut fie prin diviziune
celular, fie printr-o cretere a volumului nuclear. n cazul n care
volumul nu poate fi refcut, funcionarea normal a celulei este
perturbat. n condiii patologice, raportul N/C poate fi complet
modificat, ajungndu-se la inversarea raportului, n celulele
tumorale.
Vscozitatea nucleoplasmei este mai mic dect a
citoplasmei, excepie fcnd ovocitul. Greutatea specific a
nucleului este influenat de coninutul n ap i de starea
fiziologic a celulei, descrescnd n urmtoarea ordine: nucleol,
cromatin, nucleoplasm.
Ph-ul nuclear este uor alcalin (7,4-7,5). Totodat, n nucleu
se realizeaz diferene de potenial ntre membrana nuclear (cu
sarcini electrice negative) i nucleoli sau cromozomi, ce au sarcini
electrice pozitive.
Componentele nucleului sunt: membrana nuclear,
nucleoplasma,cromatina i nucleolul.
4.2. Membrana nuclear
Membrana nuclear (nucleolema sau carioteca)
(nucleolemma s. karyoteca) este o structur lipoproteic, cu o
grosime de civa zeci de nanometri, caracteristic eucariotelor
care mparte celula n dou compartimente: - nucleul ce conine
genomul, structurile implicate n transcripie i n prelucrarea
produsului transcriptic; - citoplasma ce cuprinde organitele
celulare. n celulele vii, apare ca o pelicul fin, cu indice de
refracie i densitate mai mare dect restul nucleului. n celulele
fixate, se coloreaz bazofil, iar vizibilitatea cromatic se datorete
condensrii i coagulrii unor componente ale carioplasmei care
se depoziteaz pe faa intern a membranei.

61
La microscopul electronic, nucleolema apare format din
dou foie (una intern i alta extern), fiecare trilaminat,
lipoproteic, groase de 60-100 , separate printr-un spaiu
perinuclear sau cisterna perinuclear, de 150 300 , plin cu o
substan amorf.

Fig.4.5.Membrana (MN) nuclear - reprezentare tridimesional
1-MN i relaiile sale cu reticulul endoplasmic (RE); 2-MN, la microscopul electronic,
cu grosisment redus; 3-Trilaminaritatea celor dou MN; 4-Organizarea molecular a MN;
5-Ultrastructura MN .
a-Nucleul; b-Membrana nuclear; c-Citoplasma; d-Por; e-Reticul endoplasmic; f-ribozomi.

Membrana nuclear extern (membrana nuclearis externa)
prezint o fa citoplasmatic, ornat cu ribozomi, are un contur
mai flexibil i zone active de formare a veziculelor.
Membrana nuclear intern (mebrana nuclearis interna) este
lipsit de ribozomi i ader fie la nucleoplasm, care poate
diferenia o lamin dens, fie la cromatin.
Cisterna perinuclear (cisterna nucleolemmae) apare ca un
spaiu tridimensional, aflat n continuitate cu spaiul reticulului

62
endoplasmatic. n acest spaiu s-au pus n eviden proteine,
enzime.Ca
2+
.(Fig.4.5)
Nucleolema sau nveliul nuclear este ntrerupt (fenestrat)
de orificii circulare, denumite pori circulari, la nivelul crora cele
dou membrane se afl n raporturi de continuitate. Numrul de
pori de pe o unitate de suprafa este legat de intensitatea
schimburilor nucleo-citoplasmatice. Asfel, la celulele n cretere
pot exista 10 pori/m
2
. Se ntlnesc variaii n numrul, frecvena i
distribuia porilor de la un tip de nucleu la altul. Porii sunt n fapt
"porile" folosite de macromolecule i de ansamblurile
macromoleculare (proteine, ARN m, subuniti ribozomale,etc.)
pentru a intra sau iei din nucleu. (Fig.4.6)


Fig.4.6. Structura porului nuclear.

Porul (porus nuclearis) mpreun cu structurile adiacente
formeaz complexul porului.
Complexul por (complexus pori) cuprinde: a - dou inele sau
anuli , asezate pe ambele fee ale porului (nuclear i
citoplasmatic), fiecare inel (anulus pori) fiind compus din granule
proteice sferoide cu diametrul de 10-25 nm, care sunt dispuse n
form de octagon; b - opt conuri, orientate dinspre peretele porului
ctre lumenul su, considerate a fi agregate de fibrile; c - o
particul central, n form de granul sau bastona, inconstant
prezent; d - pachete de filamente nucleoplasmatice de 4-8 nm,
care se inser cu oextremitate de inelul intern, iar cu cealalt
extremitate se prinde pe formaiuni intra nucleare (eventual pe
nucleol).
Dup unii autori, diferitele structuri care apar n centrul
porului (diafragma porului, granula central, filamentele) par a fi

63
mai curnd materiale surprinse n timpul trecerii prin por dect
structuri pemanente.

Fig.4.7.Schema complexului por.
1-MN extern; 2-MN-intern;3-Spaiu cisternal; 4-Filament intern; 5-Formaiune conic; 6-
Granul-anulus extern; 7-Granul-anulus intern; 8-Granul central.

Funciile membranei nucleare sunt: 1 - delimiteaz
coninutul nucleului de cel al citoplasmei;2 - regleaz schimburile
dintre nucleu i citoplasm; 3 - formeaz membranele reticulului
endoplasmic, reprezentnd rezerva de citomembrane n celule
care se divid rapid; 4 - menine i stabilizeaz cromatina, care se
ataeaz de faa sa intern; 5 - rol mecanic n susinerea
organitelor, acestea fiind legate de faa sa extern prin fibrile de 18
nm.(Fig.4.8.)

Fig.4.8. Diagrama cilor de translocare a matrialului din nucleu (A) n citoplasm (B).
1-Transport prin microvezicule; 2-Transport transmembranar3-Transport combinat;

64
4-Translocare prin pori; 5-Extruzare prin delimitarea unor saci din nveliul nuclear.



4.3.Nucleoplasma
Nucleoplasma, matricea nuclear sau sucul nuclear
(nucleoplasma) reprezint acea parte a nucleului, aparent lipsit
de structuri (la microscopul optic i la cel electronic,de grosisment
redus). La nivelul molecular apare structurat, nct denumirea de
suc nuclear apare impropie, fiind mai adecvat denumirea de
matrice nuclear. Nucleoplasma se prezint ca un mediu de
natur proteic care n care "plutesc" nucleolii i cromatina. Are rol
esenial n organizarea nucleului, determinndu-i forma, n sinteza
de ADN i ARN, n medierea semnalelor hormonale (ale
steroizilor).Conine diverse enzime, ce intervin n glicoliza
anaerob i n realizarea unor legturi macroergice.
Matricea nuclear cuprinde dou componente: matricea
nuclear propiu-zis i fraciunea labil a matricei.
Matricea nuclear propiu-zis sau scheletul nuclear
reprezint echivalentul citoscheletului la nivel nuclear,fiind format
dintr-o reea de proteine stabile cu greutatea molecular mare.Se
poate izola dup extragerea cromatinei i nucleolului. Este
format din trei componente: matricea fibrilar, componentele
fibrilare (nemembranoase) ale nveliului nuclear i componenta
fibrilar a nucleolului.
Matricea fibrilar apare ca o reea de fibrile intranucleare,
ntins n toat masa nucleului. Este format din granule sau
particule matriceale, electronodense, cu diametru de 15-20 nm i
din fibrile matriceale (sau matrixin), cu diametru de 5 nm,dispuse
n pachete. Matricea fibrilar conine proteine (20% din totalul
proteinelor nucleare), ADN (1,2%), ARN (0,5%) i fosfolipide, n
cantitate redus. Lipsesc proteinenele histonice, n timp ce
proteinele nonhistonice ocup 18,2%, predominnd cele acide.
Componentele fibrilare (nemembranoase) ale nveliului
nuclear sunt o form specializat a citoscheletului nuclear,fiind
reprezentate de lamina dens intern (sau lamina fibrosa) i de
complexul por.
Lamina dens intern este situat pe faa nuclear a
membranei interne a nveliului nuclear. Are aspectul unei reele
de fibrile legate pe de o parte la reeaua matricei nucleare i pe de
alt parte la componentele fibrilare ale complexului por.
Complexul por este format din structuri inelare (matricea anular
sau anulii), din granule centrale i din filamente radiare.

65
Lamina dens intern mpreun cu complexul por formeaz
o component a scheletului nuclear, denumit complex lamina-por.
Acest complex conine 2-3% din totalul proteinelor din nucleu (95%
din ele fiind nehistonice, predominent acide). Pe faa intern a
complexului lamina-por a fost identificat o nucleozid trifosfataz,
implicat n transportul ARN ctre citoplasm.
Componenta fibrilar nucleolar (matricea nucleolilor) este
reprezentat de o reea de filamente ce ocup aria ce corespunde
prii fibroase i prii granuloase din nucleol.Este format din
polipeptide asemntoare celor din scheletul nuclear i are rol de
suport pentru depozitarea granulelor ribozomale.
Funciile matricei nucleare sunt: 1- menine forma nucleului
i stabilitatea acestuia n interfaz; 2-asigur flexibilitatea
nucleului, fapt ce permite realizarea unor modificri structurale
legate de organizarea cromatinei, replicarea ADN, transcripia i
transportul intranuclear de ARN; 3- contractilitatea, independent
de ATP, dar influenat de ionii bivaleni (Ca
2+
,Mg
2+
) ce permite
realizarea unor variaii ale volumlui nuclear; 4- suport pentru
depozitarea granulelor ribozomale.

4.4. Cromatina

Cromatina nu este o substan chimic, ci o noiune
biologic, fiind reprezentat de materialul intranuclear care se
evideniaz cu colorani bazici. Este forma de existen a
cromozomilor n interfaz , n celula aflat ntre dou diviziuni.
Cromatina i cromozomii sunt dou forme de organizare ale unuia
i aceluiai material genetic (ADN-ul).
Compoziia chimic a cromatinei cuprinde ADN, proteine
histonice, mici cantiti de ARN i proteine nehistonice.
Cantitatea de ADN din nucleu este constant pentru o
anumit specie i reprezint genomul speciei respective. Este dat
de numrul i dimensiunile moleculelor de AND.
Histonele sunt proteine bazice, prezente numai n genomul
eucariotelor. n funcie de coninutul n arginin i lizin exist cinci
tipuri de histone, denumite H
1
, H
2A
, H
2B
, H
3
, H
4
. La rndul su
fiecare tip prezint mai multe subtipuri.
Histonele prezint mai multe particulariti: 1- au mas
molecular mic; 2- sunt puternic bazice, datorit coninutului mare
(10-20%) de aminoacizi bazici (lizine i arginine); 3- sunt
purttoare de sarcini electrice pozitive, care le permit s se lege de

66
sarcinile negative ale gruprilor fosfat din ADN; 4-sunt proteine cu
evoluie filogenetic molecular definitiv.
Histonele ndeplinesc un rol major n mpachetarea ADN-
ului n nucleu, n realizarea organizrii supramoleculare a ADN-ului
sub form de nucleozomi. n cursul ciclului celular, histonele sufer
o serie de modificri chimice ( acetilri,fosforilri, metilri).
n spermatozoid, histonele sunt nlocuite de protamine.
Protaminele au o greutate molecular foarte mic (4200 daltoni), o
lungime medie de numai 33 aminoacizi i sunt foarte bazice,
coninnd mult arginin. nlocuirea histonelor are loc n timpul
trecerii de la spermatid la spermatozoid, permind realizarea
unui nalt grad de condensare i compactare a cromatinei, pentru
mpachetarea ADN-ului ntr-un volum foarte mic, cum este cel al
capului spermatozoidului.

Fig.4.9. Aspecte ale cromatinei nucleare
I. La microscopul optic: 1-Cruste; 2-Granule; 3-Nevuri; 4-Nucleu hipercromatic;
5-Nucleu hipocromatic.
II. La microscopul electronic: 1- Cromatin periferic; 2-Cromatin insular; 3-
Cromatina asociat nucleolui; 4-Nucleol; 5-Membran nuclear; 6-Spaiu
perinuclear; 7-Pori.

Aspectele histologice ale cromatinei. Datorit coninutului
bogat n ADN,complexat cu histone, cromatina se coloreaz ntens
cu colorani bazici (hematoxilin,albastru de tripan), putnd

67
prezenta aspecte variate: granule, grmezi neregulate, reele de
filamente, corpusculi cromocentrici (sau cariozomi). Aspectul
morfologic al cromatinei este asemntor n nucleii aparinnd
aceluiai tip celular, dar variaz n funcie de tipul celular i de
stadiul funcional,fiind un criteriu important pentru identificarea
celulelor la microscopul optic.

4.4.1. Eucromatina

Eucromatina (euchromatinum) reprezint cromatina
funcional, activ, purttoare de gene structurale, pe care se face
transcripia mesajului genetic. Poate fi de dou feluri: 1-
eucromatin activ, pecare transcripia se efectueaz continuu,
asigurndu-se defurarea normal a vieii celulei; 2-
eucromatin permisiv , potenial activ, devenindactiv n
momentul n care acioneaz semnale specific modulatoare (de
exemplu: hormonii).
Reglarea conformaiei genetice se realizeaz pe
eucromatin, prin intervenia unor ageni biochimici, n principal
proteine nehistonice, ce pot aciona ca represori sau derepresori,
modulnd transcriptibilitatea materialului genetic activ i nu
structura acestuia.
Raportul dintre eucromatin i heterocromatin se exprim
funcional prin raportul dintre transcriptibil i netranscriptibil,
permind, n fapt, realizarea relaiei dintre genotip i fenotip.
Astfel, prin genotip se nelege totalitatea materialului genetic
cuprins n cromatina interfazic, deci eucromatina mpreun cu
heterocromatina. Fenotipul reprezint expresia unei pri din
genotip, care a fost transcris din eucromatin n interfaz,
totalitatea trsturilor (nsuirilor morfologice,fiziologice,etc.)
exprimate din noianul de informaii nscrise n genotip.

4.4.2. Heterocromatina

Heterocromatina (heterochromatinum) este cromatina
condensat, netranscriptibil, inactiv metabolic.Exist dou tipuri
de heterocromatin: constitutiv i facultativ.
Heterocromatina constitutiv este genetic inactiv, lipsit de
gene structurale. Pe ea nu se face transcripie niciodat, rmnd
ntotdeuna condensat n interfaz. Conine ADN repetitiv sau
satelit, un ADN n care anumite secvene nucleotidice sunt
repetate de un numr foarte mare de ori. La mamifere, ADN-ul

68
repetitiv reprezint 15% din cantitatea total de ADN. Exist dou
tipuri de ADN repetitiv:1- ADN nalt repetitiv (10%), n care
secvenele se repet de sute de mii de ori; 2-ADN mediu repetitiv
(5 %), n care secvenele se repet de 100 ori, de 1000 ori sau de
zeci de mii de ori.
Pe cromozomii omologi (care formeaz o pereche),
heterocromatina constitutiv se localizeaz identic, de regul, n
imediata vecintate a centromerului, putnd fi detectat prin
tehnica de bandare a cromozomilor.
Rolul heterocromatinei constitutive este incomplet elucidat,
atribuindu-se o semnificaie de "protecie" sau de "suport",
sugerndu-se ipoteza c ea determin specificitatea centromeric,
respectiv poziia centromerului n cromozomi.
Heterocromatina facultativ este o cromatin condensat,
care conine gene structurale represate (inactive) pe care nu se
face transcripia. Pe aceste gene, transcripia s-a efectuat sau nu
ntr-o perioad anterioar, sau se va putea efectua, dac se
transform n eucromatin, sub influena unui agent derepresor.
Astfel, transformarea unei pri din heterocromatina autozomal n
eucromatin determin sinteza de imunoglobuline i transformarea
limfoblastic a limfocitelor.
n funcie de cromozomi n care se gsete,
heterocromatina poate fi: 1-autozomal (autosoma), prezent n
perechile de cromozomi autozomi, sub forma poriunilor
condensate, heterocromatice, ce conin lanuri de gene, inactive
transcripional; 2-gonozomal (gonosoma), prezent numai n
cromozomii ce determin sexul , reprezentat de cromatina X, la
femel i de corpusculul Y, la mascul.

Fig.4.10. Aspectele cromatinei X
1-Satelit nucleolar; 2-Drumstick; 3-Corpuscul cromocentric

Cromatina X sau corpusculul Barr a fost descris de
M.L.BARR i de E.G.BERTRAM n 1949, n neuronii din nucleul
nervului hipoglos la pisic. Este folosit ca marker genetic pentru

69
recunoaterea sexului genetic. In mod normal este prezent numai
n nucleii celulelor somatice ale femelelor sub forma unui
corpuscul cromatidian, denumit corpuscul Barr. Acesta reprezint
condensarea interfazic a unuia din cei doi gonozomi X. Prin
condensare, eucromatina se transform n heterocromatin
facultativ inactiv. n situaia n care ambii gonozomi X ar fi activi
(transcripionabili), n celulele femelei ar trebui s existe o cantitate
dubl de enzime, controlate de genele situate pe cromozomul X.
Cromatina X este prezent i detectabil la toate femelele
mamiferelor, cu excepia femelei de opussum (mamifer marsupial),
unde este prezent la ambele sexe. Lipsete la toi masculii
normali.
Corpusculul Barr are un diametru de cca. 1m i poate
prezenta forme diferite: plan-convex, convex-concav, biconvex,
triunghiular. Poziia sa variaz dup tipul celular, aprnd situtat
adiacent membranei nucleare interne ( n celulele epidermale i
ale epiteliului mucoasei bucale) sau ataat nucleolului (n unii
neuroni). n neutrofilele femelelor este prezent o formaiune
echivalent corpusculului Barr, denumit, dup aspectul su "b
de tob" (drumstick), format dintr-un cap cu diametrul de 1,5m,
ataat printr-un filament cromatic extrem de subire la unul din lobii
nucleului. Frecvena drumstick-ului est de 7/500 neutrofile, sau
chiar mai mult.
Cromatina Y sau corpusculul F se poate observa n nucleii
celulelor provenite de la masculii normali, examinate n lumin
ultraviolet, dup colorare cu fluorocrom. Are aspectul unui
corpuscul intens fluorescent. A fost descpoperit de PEARSON, n
1970 i reprezint expresia citologic a cromozomului Y. La
indivizii ce prezint doi cromozomi Y se observ doi corpusculi F.
n acest mod se pot diagnostica unele anomalii cromozomiale
(trisomia XXY) la masculi, care predispun la un comportament dur,
nrit.

4.4.3. Cromozomii
Cromozomii (Chromosoma) sunt structuri celulare cu numr,
forme i mrimi caracteristice pentru fiecare specie. Ei devin vizibili
la microscopul optic n celulele care se pregtesc pentru diviziune
sub forma unor filamente lungi, cu mare afinitate pentru colorani
bazici, de unde i trag denumirea, croma nsemnnd n limba
greac culoare, iar soma - corp. (Fig.4.11.)
n funcie de posibilitile de a fi observai la microscopul
optic, cromozomii pot fi clasificai n : - cromozomi interfazici,

70
necondensai i neobservabili la microscop; -cromozomi mitotici,
uor observabili la microscop, mai ales n cursul metafazei i de
aceea denumii cromozomi metafazici. Structura cromozomilor
metafazici cuprinde: cromatidele, centromerul, kinetocorii,
constriciile secundare i sateliii.
Cromatidele (chromatidea) sunt cele dou jumti
longitudinale, genetic identice ce formeaz fiecare cromozom
metafazic. Fiecare cromatid corespunde unei molecule de ADN.

Fig.4.11. Cromozomi interfazici i cromozomi mitotici

Extremitile terminale ale cromatidelor se numesc telomere
(telomerus) i sunt absolut necesare pentru structura i
funcionarea normal a cromozomilor, deoarece previn fuziunea i
menin o anumit ordine a cromozomilor interfazici n interiorul
nucleului prin ataarea lor la membrana nuclear intern.
Centromerul (centromerus ) sau constricia primar este regiunea
cea mai ngust din lungimea cromozomului, unde cele dou
cromatide se unesc. Centromerul este slab colorat sau acromatic,
avnd un coninut sczut de ADN. n vecintatea centromerului se
gsete heterocromatina constitutiv. Cei mai muli cromozomi
sunt monocentrici ( cromosoma monocentricum), prezentnd un
singur centromer. n cazul unor anomalii cromozomiale apar
cromozomi dicentrici ( cromosoma dicentricum) sau policentrici
(cromosoma polycentricum).
Kinetocorii (kinetocorus, i) sunt n numr de doi pentru
un cromozom i reprezint locul prin care fiecare cromatid se

71
ataeaz de microtubulii fusului de diviziune. La microscopul
electronic un kinetocor are forma unui oval cu dimensiunile de 5/25
nm. (fig.4.12.)

Fig.4.12.Ultrastructura cromozomului
1-Centromer; 2-Cromatide; 3-Cromoneme; 4-Cromomere.

Constriciile secundare sunt zone ale cromozomilor ce nu
rein colorantul bazic. Servesc drept criteriu morfologic de
indiviudalizare a cromozomilor. n comparaie cu constriciile
primare, la nivelul costriciilor secundare nuse produc deviaii
angulare ale segmentelor pe care le unesc. Unele din zonele de
constricie secundar sunt legate de formarea nucleolilor i se
numesc zone nucleolare sau organizatori nucleolari. iar
cromozomii care particip la formarea nucleolilor sunt denumii
cromozomi nucleolari (chromosoma nucleolare).
Satelitul (satelles chromosomalis) este un corpuscul sferic,
cu diametrul egal cu al cromozomului sau mai mic, ataat de
restul cromozomului printr-un filament (filum satellitis) subire de
cromatin de lungime variabil. Cromozomii ce prezint satelit se
numesc SAT-cromozomi (chromosoma satellitiferum).
n funcie de poziia centromerului, cromozomii se clasific
n: 1-telocentrici (chromosoma telocentricum), la care centromerul
este situat la o extremitate a cromozomului,lipsindu-i braele
scurte; 2-acrocentrici (chromosoma acrocentricum), cu brae
scurte abia vizibile, centromerul fiind situat n apropierea

72
extremitii cromozomului;3-submetacentrici (chromosoma
submetacentricum), la care centromerul este situat n apropierea
mijlocului lungimii cromozomului, prezentnd un bra scurt i un
bra lung; 4- metacentrici (chromosoma metacentricum), cu braele
aproximativ egale, centromerul fiind situat la mijlocul lungimii
cromozomului.

Fig.4.13. Schema unui cromozom.Tipuri de cromozomi.
1-Centromer: 2-Constricie secundar; 3-Satelit;
a-Cromozom telocentric; b-Cromozom acrocentric;
c-Cromozom submetacentric;d-Cromozom metacentric.

Dimensiunile cromozomilor sunt cuprinse ntre 1,5-10 m,
lungime i 0,2-2 m diametru, putndu-se ntlni cromozomi
gigani i cromozomi pitici.
Numrul cromozomilor apare constant pentru aceiai specie,
existnd: 60 cromozomi la bovine, 54 la ovine, 38 la suine, 64 la
cabaline, 63 la catr, 38 la felide, 78 la canide i 46 la primate.
Celulele sexuale sau gameii sunt haploide (haplos= simplu),
coninnd un singur set de cromozomi, notat cu "n",fa de celulele
somatice care sunt diploide (diplos=dublu) i conin dou seturi
(2n) de cromozomi (un set matern i altul patern). Fiecare
cromozom dintr-un set are n setul opus un cromozom
complementar, identic structurat morfologic i genetic, alctuind o
pereche de cromozomi omologi. Asfel, taurinele prezint 58
cromozomi autozomi (29 perechi) i 2 cromozomi de sex (
heterocromozomi sau gonozomi). Taurinele femele au n celulele
somatice doi cromozomi X, ,iar formula cromozomial este 60,XX.
Masculii taurinelor au formula cromozomial 60,XY i prezint n
celulele somatice un cromozom X i altul Y. n formula
cromozomial, prima cifr indic numrul total de cromozomi,
dup virgul fiind indicai cromozomii de sex (gonozomii). La
taurine, fiecare din cele 29 perechi de cromozomi autosomi este
format din 2 cromozomi omologi, cu aceiai morfologie i

73
dispunere a genelor. Heterocromozomii ( gonozomii) nu sunt
omologi. La taur, diferena de form ntre cromozomul X i cel Y
este evident, cromozomul Y fiind un cromozom submetacentric
mic. La vaci, cei doi cromozomi X submetacentrici nu sunt
omologi, deoarece numai unul este activ genetic, iar cellalt este
inactiv, rmne condensat n interfaz i formeaz cromatina
sexual (corpusculul Barr). Diferenierea celor doi cromozomi X n
unul activ i altul inert genetic se face ntr-un stadiu precoce al
dezvoltrii embrionare.
Compoziia chimic a cromozomilor include ADN, proteine
(histonice i nonhistonice) i o cantitate redus de ARN.
Histonele sunt proteine cu greutate molecular redus
(10.000- 20.000 dal), cu coninut mare (10-20%) de aminoacizi
bazici (lizin i arginin), purttori de sarcini electrice pozitive, ce
le permite s se lege de sarcinile negative ale gruprilor fosfat din
ADN. La eucariote exist cinci clase de histone, ce difer dup
coninutul lor n lizin i arginin: H
1
, H
2A
, H
2B
, H
3
i H
4.
. n timp ce
histonele H
2A
, H
2B
, H
3
i H
4
sunt cele mai constante din punct de
vedere al secvenei aminoacizilor la diverse specii, histonele H
1

prezint o variabilitate a secvenelor.
Proteinele nonhistonice sunt de foarte multe tipuri, de la
proteine ce intr n structura cromozomilor sau care se leag de
ADN, intervenind n exprimarea genelor i pn la proteine enzime
ce intervin n sinteza de ADN i ARN sau n scindarea lor.
Proteinele ce intervin n reglarea exprimrii genelor sunt
rare, aprnd ntr-un exemplar la 3000 de nucleozomi. Exist, ns
i proteine nehistonice mult mai abundente, precum grupul de
proteine cu mobilitate mare (HMG-higt mobility group), care fiind
mici i cu multe sarcini electrice migreaz rapid n cursul
electroforezei. Din acest grup, proteinele HMG
14
i HMG
17
se
gsesc n toate celulele de la mamifere, legndu-se de
nucleozomii asociai cu genele active.
ARN-ul se gsete n cantitate redus n cromozomi, fiind
reprezentat de ARN-ul nascent, care se formeaz pe matria de
ADN n procesul de transcriere.

4.4.3.1. Cariotipul

Cariotipul este reprezentat de totalitatea caracterelor
morfologice (numr, mrime, form, poziia centromerului,
constriciile ) ale cromozomilordintr-o celul diploid. Grafic poate fi
prezentat printr-o "hart" numit cario- sau idiogram, n care

74
perechile de cromozomi omologi sunt aezai n ordinea
descrescnd a lungimii. Cromozomii sexuali sunt cromozomi X
submetacentrici i cromozomul Y, submetacentric mic.
Cariotipul unei specii se obine prin fotografierea
cromozomilor metafazici, obinui din metafazele limfocitelor din
culturi, stimulate s se divid cu fitohemaglutinine i blocate n
metafaz prin adaus de colchicin, un alcaloid ce mpiedic
asamblarea fusului de diviziune. Din fotografiile obinute se
decupeaz cromozomii i se aranjeaz n cariotip, putndu-se
identifica grupele de cromozomi, fra a se putea preciza cu
certitudine perechea.
Identificarea fiecrei perechi se face prin folosirea tehnicilor
de bandare, tehnici care permit punerea n eviden a unor benzi
transversale de-a lungul cromozomilor, benzi care sunt
caracteristice pentru fiecare cromozom.
Se folosesc dou categorii de tehnici de bandare: 1- tehnici
cu fluorescen prin care se obin benzile "Q" ( de la quinacrin)
fluorescente; 2 -tehnici bazate pe tratarea cromozomilor cu diferii
ageni fizici i chimici, urmate de coloraia Giemsa prin care se
evideniaz trei feluri de benzi : benzile G (Giemsa), care apar
intens colorate i corespund benzilor fluorescente Q; -benzile R
(reverse band), cu o dispunere invers benzilor G, nct benzile R
intens colorate, corespund benzilor G palide;- benzile C, apar
numai n regiunea centromerului sau n apropiere ei i corespund
localizrii heterocromatinei constitutive.
Determinarea cariotipului are o mare importan n practica
medical, pentru: a-diagnosticul unor boli congenitale, precum
trisomia perechiii 21, care produce boala Down (idioia
mongoloid); b- sfatul genetic i dirijarea mperecherilor la
animale; c-aprecierea statusului genetic la populaiile cu mare risc
genetic; d-diagnosticul diferenial al unor anomalii sexuale, cu
determinare genetic, precum sindromul Turner (XO, n loc de
XX), ce produce sterilitate, ovare vestigiale i sindromul Kleinfelter
(XXX, n loc de XY), ce se manifest prin testicule atrofiate,
sterilitate, ginecomastie; e-diagnosticul unor boli ale sngelui,
precum leucemia mieloid, unde apare un cromozom marker
anormal (cromozomul Ph-Philadelphia); f - pentru diagnosticul de
paternitate, prin msurarea lungimii cromozomului Y, care trebuie
s fie aceiai la ft ca i la presupusul tat; g- pentru diagnosticul
diferenial ntre unele tumori benigne i alte maligne, ce modific
cariotipul. De asemenea stabilirea locusului pe care l ocup ogen

75
ntr-un cromozom permite realizarea hrilor cromozomiale, un
domeniu de cercetare de mare actualitate.
4.4.3.2. Organizarea molecular i supramolecular a
cromozomilor la eucariote.
La microcopul electronic, cromozomii metafazici apar ca
nite gheme de cromatin, nfurate foarte neregulat. Fiecare
cromatid conine o singur molecul de ADN ce se organizeaz
sub forma unei fibre de cromatin, cu grosimea de 10 nm, foarte
sinuoas, mpachetat compact, prezentnd zone de eucromatin
i heterocromatin. mpachetarea ADN-ului i a histonelor n
cromozom este absolut necesar pentru ca o molecul de AND co
greutate molecular de 610
10
daltoni i o lungime de 3 cm s
ncap ntr-un cromozom lung de 5 m ( 0,0005 cm).
mpachetarea se facecu ajutoul nucleozomilor, care sunt uniti
fundamentale repetitive de organizare a complexului AND -histone,
deci a cromatinei. (Fig.4.14).


Fig.4.14.Modaliti de plicaturare a fibrei de cromatin n cromozom
1-Plicaturare transversal; 2-Plicaturare longiutdinal;
3-Plicaturare combinat; 4-Structur cuaternar.

4.4.3.3. Nucleozomii
Conceptul de nucleozom a fost elaborat de KRNBERG, n
anii 1975-1977. Un nucleozom este un octamer histonic de forma
unui cilindru scurt , cu un diametru de 11 nm i o nlime de 5,5
nm, pe care duplexul de AND l nconjoar de dou ori.(Fig.4.15.)



76

Fig.4.15.Alctuirea nucleozomului Fig.4.16.Poziia histonei H
1

Octamerul histonic este format din opt molecule de histone,
cte dou molecule de H
2A
, H
2B
, H
3
i H
4
. Tetramerul de histone -
(H
3
)2 i (H
4
)2 - bogate n arginin formeaz miezul
nucleozomului i determin nfurarea duplexului de ADN. Cei doi
dimeri de histone bogate n lizin, - (H
2A
)2 i (H
2B
)2 - sunt
ataai miezului nucleozomului. Nucleozomul nu conine proteine
nonhistonice.
Histona H
1
nu intr n structura nucleozomului, fiind siutat
lateral de acesta, n contact cu intrarea sau ieirea ADN-ului din
nucleozom. Histona H
1
se leag de ADN-ul linker prin fore ionice,
prezentnd o poriune C (carboxil) terminal, legat direct de ADN
i o poriune N (amino-), ce nu se ataeaz de ADN, dar ofer
locusuri de legare pentru proteinele nehistonice HMG
1
i HMG
2
.
Histona H
1
este implicat n spiralizarea Fibrei de
cromatin.(Fig.4.16).
Molecula de ADN este continu de-a lungul cromozomului,
prezetnd poriuni nfurate pe nucleozomi i poriuni ce fac
legtura dintre doi nucleozomi succesivi, denumite ADN-linker sau
internucleozomic. De ADN-ul linker se leag o molecul de histon
H
1
, amplasat ntre doi nucleozomi. Se realizeaz, asfel, o
niruire a nucleozomilor unul dup altul, ca mrgele pe a,
formndu-se filamentul subire de cromatin, cu diametrul de 11
nm, care se poate observa la microscopul electronic, numai dac
cromatina este "ntins" n mod artificial. n celula vie, fibra de
cromatin are un diametru de 30 nm, rsucit ntr-o structur
helicoidal (un solenoid sau o bobin) cu pasul elicei de 11 nm. La
fiecare tur de spir se inser ase nucleozomi. Rata de
mperechere a ADN-ului pe nucleozom este de circa 10/1.
aproximativ 60 nm de ADN fiind nfurai pe un cilindru

77
nucleozomic nalt de 5,5 nm. Apoi, dispunerea nucleozomilor sub
form de bobin (solenoid) cu diametru de 30 nm permite
realizarea unui raport de mpachetare de cca. 50/1. Eucromatina
corespunde filamentului de cromatin de 10 nm, iar
heterocromatina corespunde solenoidului (bobinei) de 30
nm.(Fig.4.17)






Fig.4.17.Formarea filamentului subire de cromatin
A-Histona H
1
; B-Nucleozom; C-Filamentul de cromatin;
1-Poriunea globular a histonei.
mpachetarea duplexului de ADN pe nucleozom i a
nucleozomilor n fibra de cromatin de 30 nm ar permite ca ntr-un
cromozom ipotetic de 1 mm lungime, s ncap un ADN lung de 3
cm. La rndul ei, fibra de cromatin de 30 nm se pliaz formnd
bucle de mrimi variabile, ce permite s se reduc lungimea
"firului" de ADN de la 1 mm la 100 m.
Pentru a "ncape" n cei 5 m lungime ai unui cromozom
metafazic sunt necesare nc dou ordine de condensare a
cromatinei, care se realizeaz probabil prin mpachetarea
elicoidal a buclelor de cromatin, nct aglomerarea lor n
anumite zone determin apariia benzilor vizibile n cromozomul
metafazic. Se pare c superspiralizarea solenoidului se realizeaz
cu ajutorul unor proteine nehistonice. Astfel, fosforilarea proteinelor
nehistonice ar declana superspiralizarea solenoidului, n
momentul trecerii de la G
2
la mitoz, iar defosforilarea lor ar
induce despiralizarea, n momentul trecerii de la mitoz la G
1
.
Alturi de histone, n procesele de mpachetare a nucleozomilor n
fibra de cromatin, ntervine ionul de Mg
2+
.(Fig.4.18.)

78






























Fig.4.18.Structura fibrei de cromatin de 30 nm (A) i nucleozomului (B).
1- Miezul histonic; 2- ADN linker.

In timpul diviziunii celulare, condensa-rea cromatinei
corespunde mpachet-rii compacte n spaiu a fibrei de cromatin
de 30 nm, odat cu realizarea structurii cromozomului metafazic.
(Fig.4.19.)
S-a calculat c, ADN-ul nfurat pe un nucleozom este prea
scurt pentru a corespunde unei gene structurale, nct nu exist o
concordan ntre o gen, ca unitate de informaie genetic i un
nucleozom, ca unitate de mpachetare a ADN-ului.
Gena este format din aproximativ 1000 perechi de
nucleotide (perechi de baze), n timp ce ADN-ul nfurat pe un
nucleozom are 200 perechi de baze. Unele gene de la eucariote
apar discontinui, prezentnd secvenele din ADN care codific
aminoacizi (exoni), separate ntre ele prin secvene de ADN care
nu codific aminoacizi (introni).(fig. 4.19)




79

Fig.4.19.Eucromatina i heterocromatina Fig.4.20.Etapele realizrii structurilor
cromozomilor eucariotici
1-ADN linker A-Duplex de ADN;
1+2Eucromatin; B-Filament de cromatin;
3-Solenoid de 30 nm - heterocromatin C-Fibra de cromatin;
D-Bucle de cromatin;
E-Band condensat;
F-Cromozom n metafaz.

Exist mai multe ipoteze asupra mecanismului prin care
genele structurale din ADN-ul nfurat pe nucleozom sunt
activate pentru transcripie. Cea mai larg acceptat ipotez (emis
n 1982) susine c activarea genelor se face ca urmare a
interveniei proteinelor nehistonice HMG
14
i HMG
17
, care fie c
nlocuiesc proteinele HMG
1
i HMG
2
de pe locurile lor de legare pe
histona H
1
,fie c nlocuiesc nsi histona H
1
de pe ADN-ul linker
internucleozomic.(Fig.4.20.)
In acest fel, regiunile din filamentul nucleozomic n care
intervin proteinele HMG
14
i HMG
17
i vor modifica conformaia
biochimic, devenind regiuni active transcripional.

4.5. Nucleolul

Nucleolul (nucleolus) este o component intranuclear, cu
aspect corpuscular (corpusculum nucleare), prezent n interfaz,
a crei funcie principal const n biogeneza ribozomilor (cu
excepia ribozomilor mitocondriali. Ocup o poziie cheie n

80
circuitul intracelular al informaiei, fiind sediul unui considerabil
trafic de molecule. n el se desfoar principalele procese care
au loc n nucleu (replicare, transcripie, transport), jucnd rolul unui
intermediar ntre cromozomi i citoplasm. Este prezent (vizibil sau
nu ) n toate celulele eucariote. Nu exist nucleu fr nucleol, iar
celulele care i perd nucleolii nu mai sunt viabile.
n timpul diviziunii celulare se dezintegreaz i reapare dup
terminarea acesteia. n structurarea nucleolului, un rol deosebit
revineorganizatorilor nucleolari, prezeni n unii cromozomi,
adiacent constriciei secundare.
Dei a fost observat nc din 1836 de ctre VALENTIN, ca o
granul dens n interiorul nucleului, rolul su a fost dezlegat mult
mai trziu, abia n 1960, precizndu-se rolul esenial pe care l are
n biogeneza ribozomilor.
Examinat la microscopul prezint un aspect omogen,
puternic bazofil, bine delimitat. Prin impregnri argentice, au fost
evideniate dou componente n structura nucleolului: 1-
nucleolonema (nucleolonema), o formaiune filamentoas,
rsucit ca un ghem; i 2- o component astructurat sau amorf
(pars amorpha). Nu este delimitat de o membran.
n celulele vii, examinate n contrast de faz, nucleolul apare
ca un corpuscul puternic refringent, datorit coninutului redus de
ap, heterogen i cu contur neregulat.
Numrul nucleolilor. n nucleii celulelor somatice exist, n
mod obinuit doi nucleoli, cte unul pentru ,fiecare set
cromozomial. Numrul nucleolilor crete n raport direct cu gradul
de poliploidie. Astfel, n hepatocite exist 2 nucleoli, n celulele
diploide, 4 n cele tetraploide i 8 n cele octaploide.
Dimesiunile nucleolilor sunt ntre 1-2 m, ocupnd circa
30% din volumul nucleului. Ele variaz n funcie de implicarea
celulelor n sinteza de proteine. Celulele care sintetizeaz cantiti
mari de proteine (neuronii, celulele embrionare, limfocitele
stimulate antigenic) au nevoie de muli ribozomi,ceea ce face ca
nucleolii s aib dimensiuni mari. n celule n care sinteza de
proteine este redus (n spermatozoizi), nucleolii au dimensiuni
mai mici. Nucleolul apare hipertrofiat n anabolism, n perioada de
difereniere embrionar i se reduce n catabolism i n inaniie.
Raportul nucleolo / nuclear. Numrul i volumul nucleolilor
depind de starea funcional a celulei. Cu ct celula este mai
activ n sinteza proteinelor, cu att raportul nucleolo/nuclear este
mai mare. Acest raport este folosit drept criteriu pentru aprecierea
vrstei celulelor. Astfel celula tnr prezint un nucleu mare

81
eucromatic, cu un nucleol mare, cu o citoplasm redus i
bazofil, iar o celul adult prezint un nucleu mai mic, hipercrom,
cu nucleoli mici i o citoplasm abundent.



Fig.4.21. Forma i poziia
nucleolului
A-Forma: 1-Sferoidal-ovoidal; 2-
Discoidal; 3-Triunghiular; 4-
Neregulat.
B-Poziia: 1-Alipit membranei
nucleolare; 2-Central; 3-Excentric.


Forma nucleolilor. Nucleolii prezint, de cele mai multe ori, o
form sferic-ovoidal, care pe msura mbtrnirii celulei devine
neregulat.
Densitatea nucleolilor este mare (1,35), nucleolul fiind cea
mai dens structur din celul, datorit concentraiei ridicate n
substan uscat i a cantitii foarte mici de ap.
Dispunerea nucleolilor n nucleu este n majoritatea cazurilor
central sau paracentral, putnd varia n raport cu mometul
funcional. S-au observat i descris micri ale nucleolului n
interiorul nucleului i stabilirea unor contacte cu nveliul nuclear,
localizare eficient pentru descrcarea de material biologic n
citoplasm.

4.5.1. Ultrastructura nucleolului
Ultrastructura nucleolului evideniaz patru componente n
alctuirea nucleolului: componenta filamentar (pars filamentosa),
componenta granular (pars granulosa), componenta
cromozomial (pars cromosoma) i componenta astructurat (pars
amorpha).
Componenta filamentar cuprinde filamente de 5nm grosime
i 30-40nm lungime, dispuse n pachete ntretiate, formnd o
reea. Conine ADN-ul pe care se sintetizeaz ARN-ul ribozomal i
produsul primar al acestei sinteze (ARN de 45 S). (Fig.4.22.)
Componenta granular este domi-nant, fiindalctuit din
granule cu diametru de 15-20 nm, asemntoare, dar nu identice
cu ribozomii citoplasma-tici. Aceste granule reprezint precursorii
ribozomilor.
Componenta cromozomial, dispus la periferia nucleolului
(cromatina perinucleolar) sau avansnd spre interiorul nucleolului




82
sub form de benzi (cromatin intranucleolar) este alctuit din
filamente de 10 nm.







Fig.4.22.Ultrastructura
nucleolului.
1-Componenta filamentar;
2-Componenta granular;
3-Componenta cromozomial;
4-Componenta astructurat.










Componenta astructurat apare omogen i cu densitate
medie la fluxul de electroni. Umple spaiul dintre granule i fibre,
fiind considerat, de unii autori, cariolimf, iar de ali autori un gen
de matrice pentru celelalte componente nucleolare.
Cele patru componente nucleolare se pot distinge n acelai
nucleol numai n cazuri rare. Raporturile cantitative i topografice
dintre ele variaz n funcie de tipul celulei i de momentul
funcional al acesteia. Asfel, n hepatocitul uman, componentei
filamentoase i revine 15 %, celei granulare 70%, iar componentei
cromozomiale 5% din volumul nucleolului. n celulele active,
componenetele nucleolare pot segrega, dnd natere unui
corpuscul nucleolar (corpusculum nucleare).
Nucleolul nu conine membrane i nu este delimitat de
membrane.Componenta filamentoas i ce granular se pot
asocia formnd benzi ce apar, la microscopul optic, ca
nucleolem. iar poriunea periferic a componentei cromozomiale
corespunde cromatinei asociate nucleolului.
n funcie de criteriile ultrastructurale, exist mai multe tipuri
de nucleoli: nucleoli reticulari, cei mai comuni, cu cele patru
componente distincte; nucleoli compaci, n care nu se disting
componentele, ntlnii la cteva tipuri celulare, ca de exemplu la


83
limfocite; nucleoli inelari, n care copmponenetele filamentoas i
granular formeaz un inel periferic, care nconjoar o lacun
central.
Compoziia chimic a nucleolului variaz n funcie de tipul
celular i de momentul funcional, principalele componente chimice
fiind: ADN-ul (3 %), ARN-ul (7%) i proteinele (90% din greutatea
uscat). La aceasta se mai adaug cantiti mici foarte mici de
lipide i minerale (magneziu, calciu, zinc, cobalt, etc.).
ADN-ul din nucleol este reprezentat de organizatorii
nucleolari ce ptrund ca nite bucle de ADN n nucleol.
ARN-ul din nucleol este n principal ARN ribozomal aflat n
diverse faza de maturare. Se presupune c nucleolul este o staie
intermediar obligatorie n tranzitul spre citoplasm al ARN-ului
mesager i al celui de transfer.n nucleol exist diferite tipuri de
ARN, ce difer dup coeficentul lor de sedimentare (exprimat n
uniti Svedberg), precum ARN 45 S, ARN 41 S, ARN 20 S, ARN
28 S, ARN 32 S. Aceste tipuri corespund diferitelor etape de
maturare a ARN-lui.
Proteinele nucleolare provin din citoplasm i sunt
repezentate n cea mai mare parte de enzime implicate n sinteza
i maturarea ARN r (ribozomal), precum ARN-polimeraza-ADN
dependent (sau ARN-polimeraza I), convertaza, metilaza,etc.
Bazofilia nucleolului reprezint principala sa caracteristic,
vizibil la microscopul optic i se datorete coninutului relativ mare
de ARN i AND.

4.5.2.Biogeneza nucleolilor
Nucleolul este vizibil numai n interfaz,disprnd n profaz
i reaprnd n interfaz. Un rol esenial n biogeneza nucleolului
i revine organizatorului nucleolar,care este o zon cromozomial
distinct, slab colarabil (heteropicnoz negativ), situat n
vecintatea constriciei secundare, avnd un grad mai redus de
nfurare a fibrei de cromatin. Numrul cromozomilor care
prezint organizatori nucleolari este limitat i variabil n funcie de
specie. La hominide exist cinci perechi de cromozomi autuzomi,
purttori de organizatori nucleolari (perechile 13, 14, 15,21 i 22 ).
(Fig.4.23.)
La microscopul optic, organizatorii nucleolari corespund
cromatinei asociat nucleolului, ce poate fi evideniat prin reacia
Feulgen, aprnd colorat rou-violaceu. La microscopul
electronic, organizatorii nucleolari corespund componentei

84
cromozomiale, iar funcional cu ADN r (genele care codific ARN r)
ce cuprinde cistronii responsabili de transcripia ARN r.







Fig.4.23. Organizatorii nucleolari.
1-nveliul nuclear; 2-Nucleol; 3-
Cromozomi cu oranizatori nucleolari;
4-Bucle de cromatin cu gene
pentru ARN r.




Ipotezele clasice privind biogeneza nucleolului susin: a-
continuitatea sau persistena nucleolului n cursul diviziunii celulare
sub form de granule sau filamente fine (denumite corpusculi
nucleolari), ataate de cromozomi, mpreun cu care se
repartizeaz n celulele fiice, dup care sunt asamblai de
organizatorii nucleolari; b-formarea de novo, deoarece materialul
nucleolar se dezintegreaz complet n cursul mitozei, fr a fi
incorporat n noii nucleoli.
Concepia actual a realizat un compromis raional din punct
de vedere molecular, ntre ipotezele clasice (a continuitii i a
formrii de novo), n sensul c componeneta cromozomal
respect continuitatea, iar celelalte componente (filamentoas,
granular i amorf) sunt neoformate rapid n faza G
1
a ciclului
celular, cnd cistronii sunt reactivai pentru transcripie.

4.5.3. Funciile nucleolului
Nucleolul ndeplinete funcii legate de: - sinteza ARN r i
biogeneza ribozomilor; -reglarea sintezei de ARN r; - transferul
ARNm i ARNs n citoplasm; pregtirea mitozei.
n sinteza de ARNr, ADN-ul nucleolar joac rolul de matri,
reprezentnd organizatorul nucleolar. ADN nucleolar conine
cistroni, denumii ADNr, responsabili pentru transcripia ARNr,
separai ntre ei prin segmente de spaiere i terminare, formate
din ADN care nu codific. ADNr este transcris prin intervenia
ARN-polimerazei I, rezultnd un ARN de 45 S care reprezint
precursorul ARN-ribozomal. n nucleolii hepatocitelor se


85
sintetizeaz 1000 de molecule de ARN-45S pe minut. O parte din
molecula de ARN de 45 S este ndeprtat de o endonucleaz i
apare un ARN de 41 S, care prin intervenia unei convertaze este
scindat n ARN de 20 S i ARN de 32 S. (Fig.4.24.)

Fig.4.24.Rolul nucleolului n sinteza de ARNr i n biogeneza ribozomilor

ARN-ul de 20 S sufer intervenia unei metilaze, care
ndeprteaz un fragment molecular, transformndu-se n forma
matur de 18 S. ARN-ul de 18 S prsete nucleolul i se combin
cu proteine venite din citoplasm, dup care este trecut n
citoplasm prin porii membranei nucleare sub form de particule
ribonucleoproteice, care reprezint subunitatea ribozomal mic
de 40 S, ce apare n citoplasm la 30 minute de la nceperea
sintezei.

86
ARN-ul de 32 S este i el metilat i se transform n forma
matur de ARN de 28 S, dup ce a pierdut un fragment din
molecul. ARN-ul de 28 S mpreun cu ARN-ul de 5 S ( de origine
nuclear, dar extranucleolar) i cu proteine formeaz o particul
ribonucleoproteic, care reprezint subunitatea ribozomal mare
(de 60 S). Subunitatea ribozomal mare trece prin porii nveliului
nuclear, aprnd n citoplasm la o or de la debutul sintezei. Cele
dou subuniti ribozomale se ataeaz de ARNm, n momentul
nceperii sintezei de proteine, formnd ribozomii. Fibrilele din
componenta filamentoas sunt filamente de ARN de 45 S, iar
granulele din componenta granular sunt subuniti ribozomale
mari.

Biogeneza ribozomilor
Etape Intervin: Rezultat
Copierea cistronilor
ADNr
ARN-
polimeraza I
Sinteza de ARN 45 S
Prelucrarea ARN 45
S
Endonucleaza ARN 41 S
Prelucrarea ARN
41S
Convertaze ARN 20 S
ARN 32 S
Prelucrare ARN 20 S Metilaze ARN 18 S
Prelucrare ARN 32 S Metilaze ARN 28 S
Prelucrare ARN 18 S Proteine
ribozomale
Subunitatea ribozomala
mica 40 S
Prelucrare ARN 28 S Proteine
ribozomale
Subunitatea ribozomala
mare 60 S

Reglarea sintezei de ARNr n nucleol se realizeaz printr-un
mecanism de feed-back. Existea unui exces de ribozomii
acioneaz ca inhibitor al genelor ADN r, care determin sinteza de
ARNr. Invers, distrugerea ribozomilor va declana ncetarea
inhibiiei i creterea sintezei de ARNr, cu formarea de noi
ribozomi.
Transferul de ARN mesager (ARN m), deci a mesajului
genetic i de ARN de transport (ARN t) din nucleu n citoplasm
nu poate avea loc dect n prezena unui nucleol funcional, fapt
demonstrat experimental rpin distrugerea selectiv anucleolului cu
un fascicul laser. Se crede c nucleolul joac rolul de staie
intermediar n tranzitul ARN m-ului i ARN t-ului spre citoplasm.

87
Pregtirea i desfurarea mitozei nu pote avea loc fr
prezena nucleolului n interfaz. Distrugerea acestuia produce
blocarea celulei n faza G
2
, care precede mitoza.

4.5.4. Implicarea nucleolului n citopatologie.
Aspectul nucleolului poate fi folosit pentru recunoaterea
celulelor canceroase. n celulele canceroase, nucleolul prezint
modificri de volum,numr i form, care sunt o consecin a
malignizrii i nu cauza acesteia.
Hipertrofia nucleolar apare ca o caracteristic aproape
constant n celulele neoplazice (canceroase),iar creterea
numrului de nucleoli i neregularitile de form sunt relativ
frcvente. Hipertrofia nucleolar nu este acompaniat i de o
hipertrofie proporional a nucleului nct valoarea raportului
nucleolo-nuclear este mai ridicat n celulele neoplazice fa de cele
normale (depind valoarea de 1/3). Gradul de hipertrofie a
nucleolului reflect capacitatea proliferativ a celulei fiind
proporional cu gradul de malignitate a tumorii.
Numrul nucleolilor este mai mare n celulele maligne dect
n celulele normale, fiind uneori proporional cu gradul de
malignitate a tumorii. Asfel, n unele adenocarcinoame din ovar, au
putut fi observati 24 nucleoli ntr-o celul.
Forma nucleolilor este neregulat n celulele maligne, ea
putnd varia de la o celul la alta n cadrul aceleiai tumori.






88
5.CITOPLASMA
Citoplasma (cytoplasma) reprezint acea component a
celulei situat ntre plasmalem i nucleolem. Cuprinde n
volumul su : - o matrice citoplamatic ( hialoplasm sau
citoplasma fundamental) ce corespunde prii din citoplasm,
care nu este cuprins n compartimentele delimitate de
membranele intracelulare; - organite celulare sau
intracitoplasmatice (organellae cytoplasmaticae); i - incluziuni
(inclusiones cytoplasmaticae) celulare.
5.1. Matricea citoplasmatic
Matricea citoplasmatic (matrix cytoplasmae) se prezint ca un
mediu intern al celulei n care sunt "gzduite" organitele celulare.
O lung perioad de timp s-a considerat c matricea
citoplasmatic este omogen, nestructurat (amorf), fapt pentru
care a fost denumit hialoplasm.

Fig.5.1. Ultrastructura citoplasmei
1-Membrana celular; 2-Citoscheletul membranei; 3- Microtubuli; 4-Microtrabecule;
5-Mitocondrie; 6-Reticul endoplasmic rugos; 7-Polizomi; 8-Fibre de stress;
9-Ribozomi.


89

Ultrastructura citoplasmei

Denumire Componente Ultrastructuri Observatii



A.Matricea
citoplasmatica
I.Citoscheletul
matriceal

a.Microfilamentele
b.Microfilamentele intermediare
c.Microtrabecule
d.Microtubuli


Faza solid
II. Citosolul Citoplama astructurata Faza fluid







1.Microfilamentele de actina Contin:actina, tropomiozina,
troponinele (T,C,I)
I. Organitele
miscarii celulare
2.Microfilamentele de miozina Contin:molecule de miozina
3.Microtubulii Contin: si tubuline,
dinein
II. Organitele
energetice
Mitocondriile Au : membrana externa,
membrana interna
cu criste, compartiment
extern,
matrice mitocondrial
a.Ribozomi Au: subunitate mica de 40S,
subunitate mare de 60s
B.Organite
citoplasmatice
III. Organitele
de sinteza
b.Reticulul endoplasmatic Reticul endoplasmatic rugos
Reticul endoplsamatic neted
c.Complexul Golgi Compus din: microvezicule,
cisterne golgiene si
macrovezicule
IV. Organitele
de digestie
1.Lizozomi Contin: hidrolaze acide
2.Peroxizomi (glioxizomi) Contin: uratoxidaza si
catalaza


I.Incluziuni
cu substante
de rezerva
Vezicule delimitate
de endomembrane
Conin : proteine,
lipide, glucide,vitamine,
minerale
C.Incluziuni
citoplasmatice
II.Incluziuni
cu produsi
de elaborare
Conin : granule de zimogen,
granule de mucigen,
hormoni,etc.
III. Incluziuni
cu produsi
de dezasimilatie

Pigmenti cromolipoizi


lipofuscina, hemofuscina
IV. Incluziuni cu
pigmenti
1.Pigmenti endogeni

2.Pigmenti exogeni
-carotenoizi, melanici,
cu nucleu tetrazolic
-praf, pulberi,caroten


La microscopul optic apare astructurat, cu grade diferite de
acidofilie sau bazofilie. n celula vie prezint vscoelasticitate,
aprnd mai frecvent cu aspect de gel dect de sol, n funcie de
echilibrul dinamic dintre procesele de polimerizare i

90
depolimerizare, echilibru determinat de momentul funcional al
celulei, de condiiile mediului intracelular si extracelular.
Cu ajutorul microscopiei electronice (de transmisie i de nalt
voltaj) s-a observat, n hialoplasm, citoscheletul matriceal, format
din microfilamente i microtubuli, precum i dintr-o reea de
microtrabecule.n acest fel matricea citoplasmatic, prezint dou
faze sau componente: -o component (faz) fluid,denumit
citosol, ce conine ap, aminoacizi,enzime,electrolii, ioni i gaze; -
o component (faz) solid, polimerizat, sub forma unei reele
bogat n proteine structurale i n enzime.(Fig.5.1.)
Matricea citoplasmatic ndeplinete mai multe roluri: -
menine forma celulei i o adapteaz la necesitile funcionale ale
celulei prin componentele citoscheletului; - este sediul de
desfurare a unor procese metabolice, precum glicoliza,
gluconeogeneza, glicogenoliza, glicogenogeneza, biosinteza
acizilor grai, a nucleotidelor, etc.; - conine sau depoziteaz
glicogen (n ficat i muchi), lipide (n corticosuprarenal), ioni,
pigmeni, ribozomi liberi, 15% din ARN-ul celular (sub form de
ARN mesager i ARN de transport); adpostete organitele
celulare i incluziunile citoplasmatice.
Organitele citoplasmatice au diferite mrimi, unele de ordinul
micrometrilor, fiind observabile la microscopul optic (complexul
Golgi, mitocondriile, centrul celular,ergastoplasma) iar altele sunt
mai mici, de ordinul nanometrilor, putnd fii observate numai la
microscopul electronic (ribozomii, lizozomii, peroxizomii, reticulul
endoplasmic neted i rugos, microtubulii i microfilamentele).
Unele organite sunt delimitate de membrane (complexul Golgi,
mitocondriile, peroxozomii, lizozomii, reticulul endoplasmic), n
timp ce altele sunt lipsite de membrane (ribozomii, centriolii,
microtubulii i microfilamentele).
Organitele delimitate conin n structura membranelor unele
enzime caracteristice, denumite enzime marker, ce pot fi
evideniate prin metode histochimice. De exemplu, mitocondria se
caracterizeaz prin prezena monoaminoxidazei, citocromoxidazei
i a enzimelor ciclului Krebs.Lizozomii au ca enzime marker
fosfataza acid i aril sulfataza, peroxizomii au catalaza i urat
oxidaza, iar reticulul endoplasmic glucozo-6-fosfataza.
Membranele ce aparin reticulului endoplasmic, complexului
Golgi i nveliului nuclear se afl n continuitate structural i
funcional, formnd un sistem al endomembranelor. Acest sistem
poate stabili conexiuni temporare cu unele organite ca
mitocondriile, peroxizomii, unele vacuole i cu membrana
periferic.

91
Organitele celulare ndeplinesc diferite funcii: 1- micarea
intracelular (microfilamentele, microtubulii, centriolii); 2-
deplasarea celulei n mediu extracelular (cilii i flagelul); 3-
producerea de energie (mitocondriile); 4-digestia intracelulular
(lizozomii, peroxizomii); 5-dezintoxicare (reticulul endoplasmic
neted, peroxizomii); 6- sinteza de molecule necesare celulei sau
destinate exportului (ribozomii, reticulul endoplasmic rugos i
neted, compexul Golgi); 7- unele funcii speciale n celulele
musculare (miofilamentele), n celulele epiteliale (tonofilamentele),
n celulele nervoase (neurofilamentele) i nevroglice
(gliofilamentele).

5.2.Citoscheletul

Citoscleletul (cytoskeleton) este o reea n spaiu
(tridimensional) de filamente proteice i microtubuli care strbat
ntreaga matrice citoplasmatic, ntretindu-se n toate direciile.
Citoscheletul ndeplinete funcii variate: - menine forma
celulei i o adapteaz la necesitile funcionale; - particip la
realizarea micrilor celulei; - ia parte la formarea citoscheletului
membranei;- interacioneaz cu nucleul i cu organitele celulare
(mitocondriile,veziculele sinaptice), participnd la meninerea lor n
poziie i la deplasarea lor n celul (mitocondriile i lizozomii
efectund o micare saltatorie); - interacioneaz cu
macromoleculele din citosol, evideniindu-se enzime glicolitice
legate de filamentele de actin; - particip la transportul proteinelor
n lungul axonului.
Citoscheletul se modific n celulele maligne. Astfel,
fibroblastele transformate malign i pierd fibrele de stress din
citoschelet i devin sferice.
n compunerea citoscheletului intr microfilamentele,
microtubulii, microfilamentele intermediare i microtrabeculele.

5.2.1. Microfilamentele i microtubulii

Microfilamentele (microfilamentum, a) sunt componente ale
citoscheletului, prezente n citoplasma tuturor celulelor, aprnd
mai abundente n celulele care prezint micri de deplasare n
esuturi sau micri active intracitoplasmatice. Au lungimi variate i
un diametru de 5-7 nm, putnd apare izolate sau grupate. Sunt
orientate pe direcii diferite i formate din molecule proteice, n
special din actin i miozin, asemntoare celor din celulele
musculare.

92
Microtubulii (microtubulus,i) sunt componente ale
citoscheletului cu aspect cilindric, cu diametrul cuprins ntre 20-30
nm, formai prin polimerizarea unor molecule proteice, denumite
tubuline. Pot apare grupai sau izolai.
Microfilamentele i microtubulii sunt ultrastructuri cu caracter
dinamic, deoarece procesele de polimerizare i depolimerizare se
desfoar concomitent i continuu. Ele se asambleaz i
dezasambleaz rapid n celul, n citoplasm existnd un depozit
permanent de monomeri de actin i de dimeri de tubulin.
Microtubulii i microfilamentele prezint polaritate, nct
polimerizarea i depolimerizarea se desfoar cu viteze diferite
la cele dou extremiti. La extremitatea pozitiv (notat cu +),
viteza polimerizrii este mult mai mare dect cea a depolimerizrii,
nct microfilamentul sau microtubulul se alungete. La
extremitatea negativ (notat cu -), viteza de depolimerizare este
mai mare, determinnd scurtarea. Pentru o anumit concentraie
de monomeri liberi n citosol, microfilamentul sau microtubulul se
afl ntr-o stare de echilibru, n care la extremitatea negativ se
pierd molecule, iar la extremitatea pozitiv se ataeaz molecule.
n acest fel, un grup de molecule ataate la captul pozitiv (+), se
deplaseaz de-a lungul filamentului sau microtubulului, de la
extremitatea pozitiv spre extremitatea negativ. (Fig.5.2.)
n cazul cnd se protejeaz captul negativ (-) i se
mpiedic depolimerizarea, se produce creterea n lungime. Din
acest motiv, microtubulii liberi au captul negativ inserat n centrul
celular sau n corpusculii bazali.


Fig.5.2. Polilerizarea i depolimerizarea microtubulului.

Dinamismul citosheletului este influenat foarte mult de cationii
bivaleni. Astfel, modificarea concentraiei ionilor de calciu ( Ca
2+
)
induce polimerizarea sau depolimerizarea microtubulilor i
regleaz interaciunile dintre actin i miozin. Ionul de calciu i

93
exercit efectele sale prin intermediul unor proteine ce leag
calciul, ca de exemplul calmodulina, o protein format din 148
aminoacizi, cu secvene de aminoacizi asemntoare cu troponina
C. Calmodulina a fost detectat n toate celulele animale i
vegetale, nct este considerat a fi un receptor intracelular
pentru calciu.
De asemenea unele proteine ca profilina,vilina, gelsolina,
filamina, alfa-actinina, fibrina, miozina influeneaz polimerizarea i
depolimerizarea microfilamentelor de actin. n polimerizarea i
depolimerizarea microtubulilor intervin proteinele tau () i
proteinele asociate microtubulilor.
Un alt factor care moduleaz dinamismul citoscheletului l
reprezint nucleotidele. Astfel, adenozin monofosfatul ciclic
(AMPc) favorizeaz polimerizarea citoscheletului i determin
aglomerarea microfilamentelor i a microtubulilor, modificnd
forma i mobilitatea celulelor.

5.2.2.Microfilementele intermediare
Microfilamentele intermediare au fost descrise i investigate
intens dup anul 1978. Sunt denumite astfel, deoarece au
diametrul de 10 nm, cuprins ntre cel al microfilamentelor de actin
(6 nm) i cel al microtubulilor (25 nm).
La microscopul electronic apar sub forma unor filamente
rectilinii sau uor curbate, prezente n endoplasm, la periferia
celulei (n desmozomi sau n prelungiri). Sunt structuri mult mai
stabile dect filamentele de actin i dect microtubulii, nct odat
asamblate nu se mai depoliomerizeaz.
Sunt formate din molecule filiforme de proteine.
Polimerizarea lor se face prin alturarea i mpletirea monomerilor,
ca ntr-o frghie i nu prin niruirea monomerilor. Rezult astfel,
structuri rezistente, ce pot fi ntrite la nevoie i prin legturi
covalente ntre subuniti. Proteinele ce alctuiesc filamentele
intermediare variaz dup tipul de celul n care apar i dup
specie. n compoziia unui filament intermediar pot intra mai multe
polipeptide diferite, cu greuti moleculare ce variaz n limite largi.
n funcie de proteinele componenete, exist urmtoarele
tipuri de filamente intermediare: - filamentele de cheratin sau
tonofilamentele, caracteristice pentru celula epitelial, formate din
proteine (citokeratine) asemntoare keratinei din pr i ongloane;
-neurofilamentele, caracteristice neuronului, prin asociere cu
microtubulii strucutreaz neurofibrilele ce au un diametru de 1-2
m; - filamentele de vimentin, caracteristice celulelor de origine

94
mezodermic (fibroblaste, condroblaste, macrofage, celule
endoteliale, leiocite, astrocite, celulele Sertoli).(Fig.5.3.)

Fig.5.3. Tonofilamentele
A-Aspect la microscopul optic; B-Aspect la electronomicroscop:
1-Material fibrilar; 2-Material granular.

Aplicaii medicale. Identificarea tipului de filament intermediar
cu ajutorul anticorpilor monoclonali, marcai prin fluorescen sau
cuplai cu o enzim capabil s coloreze, permite diagnosticarea
tumorilor maligne, deoarece: carcinoamele au filamente de
cheratin, sarcoamele de vimentin, iar rabdomiosarcoamele de
desmin. Glioamele au filamente gliale, iar neuroblastoamele au
neurofilamente.

5.2.3.Microtrabeculele.

Microtrabeculele au fost descrise n celule examinate prin
microscopie electronic de voltaj supranalt, la mriri de 300.000
ori. Sunt structuri fibrilare mai subiri de 4-6 nm, dect
microfilamentele.
Microtrabeculele formeaz o reea ce strbate ntreaga
citoplasm, nterconectnd microfilamentele,microtubulii, practic
toate componentele subcelulare prezente n celula animal. Pot fi
considerate ca fiind expresia fenomenului de gelificare, dei uneori
se contest realitatea lor biologic, fiind considerate un artefact.
Microtrabeculele menin poziia n spaiul intracelular a
citoscheletului i organitelor,fiind considerate suportul matricii
biostructurate. De reeaua microtrabecular se leag enzimele din
citosol, asigurndu-se trecerea substratului de la o enzim la alta
n mod coordonat. n ochiurile reelei se gsete ap i ioni , nct
microtrabeculele protejeaz celula n cazul fluctuailor coninutului
n ap. Atunci cnd apa ptrunde n celul, spaiile se dilat, n
timp ce n cazul deshidratrii celulei, spaiile se contract. Un alt
rol al reelei de microtrabecule constp n micarea intracelular a
granulelor de pigment.



95


5.3.Organitele micrii celulare

Organitele micrii celulare sunt: -microfilamentele de actin,
microfilamentele de miozin i microtubulii.

5.3.1.Microfilamentele de actin

Microfilamentele de actin sunt formate din molecule de
actin i au diametrul de 6 nm. La eucariote, actina ocup 10% din
totalul proteinelor din celulele nemusculare.
n citoplasm, moleculele de actin se pot gsi fie sub form
monomeric ( actin globular sau actin G), fie sub form
polimerizat, filamentoas ( actin filamentoas sau actin F).
Microfilamentele de actin (denumite, pe scurt , filamente) se
formeaz prin polimerizarea actinei globulare. Un filament
cuprinde dou lanuri de actin nfurate unul n jurul celuilalt,
formnd dublu helix rsucit spre dreapta avnd pasul spiralei de
70-80 nm.Fiecare molecul de actin din microfilament este
capabil s lege cte un cap al moleculei de miozin.
n celulele eucariote, cu excepia celulelor musculare,
microfilementele se pot gsi izolate sau grupate n mnunchuri,
dispuse la periferia citoplasmei, imediat sub plasmalem, formnd
fibrele de stress n cazul celulelor n culturi sau intnd n structura
inelelor contractile. Inelul contractil poate fi: - tranzitoriu, cnd
apare n telofaza diviziunii celulare indirecte, producnd
strangularea citoplasmei i separarea celulelor fiice; - permanent,
ca de exemplu n zona apical a celulelor epiteliale, unde
formeaz dezmozomul n band. Mnunchiuri de filamente de
actin exist i n microvili, n stereocili, n prelungirile filiforme
temporare ale celulelor din culturi.
n alte tipuri de celule dect cele musculare, microfilamentele
de actin ndeplinesc att un rol structural sau de susinere,
formnd suportul prelungirilor (al microvililor, ct i un rol dinamic
n realizarea micrilor bazate pe mecanismul actin-miozin.
Exist un echilibru dinamic ntre filamentele de actin i
monomerii de actin din citoplasm, ntre polimerizare i
depolimerizarea actinei, echilibru ce joac un rol esenial n
micrile celulare. Polimerizarea actinei este nsoit de o cretere
a vscozitii citoplasmei, iar depolimerizarea se asociaz cu
scderea vscozitii.Ambele procese joac un rol principal n
trecerea de la starea de gel la cea de sol a citoplasmei.

96
Polimerizarea actinei este inhibat de unele substane
(citocalazine) secretate de mucegaiuri, producndu-se oprirea
micrii de locomoie ameboidal.
n celulele musculare, moleculele de actin mpreun cu
proteinele reglatoare formeaz miofilamentele subiri
(miofilamentum tenue) din sarcomere. Astfel, pe toat lungimea
miofilamentului de actin se gsete o protein tropomiozina, pe
care se nir 7 monomeri de actin. Tropomiozina are att un rol
structural, ntrind flilamentul subire, ct i un rol funcional n
realizarea contraciei. Din loc n loc, de-a lungul filamentului de
actin se gsete o alt protein, troponina, care este un complex
de trei polipetide - troponinele T,I i C.Troponina T este strns
ataat de tropomiozin, troponina C leag ionii de calciu, iar
troponina I inhib interaciunea actin-miozin. Tropomiozina are
att un rol structural, participnd la structurarea filamentului
subire, ct i un rol funcional mediind reglarea contraciei.
(Fig.5.4).
Filamentele subiri se gsesc numai n miofibrilele din
muchii scheletici i muchiul cardiac unde sunt dispuse ordonat,
paralel cu filamentele groase de miozin.
i n alte tipuri de celule dect cele musculare au fost
evideniate proteine reglatoare ale interaciunii actin-
miozin,asemntoare tropomiozinei, dar acestea sunt mai scurte,
permind ataarea a numai 6 monomeri de actin, n loc de 7
cum apare n celulele musculare. n celulele nemusculare, nu a
fost bine precizat existena troponinelor T i I, dar au fost
identificate proteine reglatoare, asemnotare troponinei C, carer
leag ionii de calciu i au fost denumite proteine modulatorii sau
calmoduline.
n afara proteinelor reglatoare amintite
(tropomiozina,troponinele i calmodulina), n celule se mai pot
gsi i alte proteine reglatoare ce se leag de actin, ca: -filamina,
prezent mai abundent n leiocite; -spectrina, ce se gsete n
citoscheletul membranei celulare.






97





Fig.5.4. Organizarea molecular a filamentului subire de actin


5.3.2.Microfilamentele de miozin

Formate prin polimerizarea proteinelor denumite miozine,
miofilamentele de miozin au un diametru de 10 nm. Miozinele se
gsesc n cantitate mai mic dect actinele n toate celulele
eucariote, cu excepia celulelor musculare.


98

Fig.5.5. Moleculele de
miozin i formarea
filamentului gros.
1-Coad; 2-Cap; 3-Punte
transversal.

Molecula de
miozin are
aspectul unui
bastona lung
(160 nm/2nm) i
subire
(coada),prevzut
la una din
extremiti cu o
regiune globular
(capul). Capul
moleculei de
miozin(4-5
nm/15-20 nm)
este bipartit (iar
molecula este
bicefal), fiind
alctuit din dou
subuniti sau lobi.
Polimerizarea se produce prin agregarea cozilor moleculelor de
miozin, n timp ce capetele rmn la exterior. n acest fel, mio-
filamentul de miozin prezint o zon "nud" (neted) la mijloc,
unde se gsesc cozile i dou zone mai groase la extremiti n
care proemin de jur mprejurul filamentului capetele globulare ale
miozinelor.(fig.5.5.)
n alte celule dect cele musculare, filamentele de miozin
sunt agregate mici, labile greu observabile, formate prin
polimerizarea a 10-20 molecule.
n celulele musculare, polimerizeaz cteva sute de
molecule de miozin (200-500), formnd miofilamente groase
(myofilamentum crassum) cu diametrul de 10-20 nm, ce se dispun
paralel cu filamentele subiri de actin.Miofilamentele sunt dispuse
ntr-o reea hexagonal, la un miofilament gros revenind 6
miofilamente subiri.



99
Fig.5.6. Reprezentarea schematic a moleculei de miozin
LMM - L meromiozin; HMM - H meromiozin; S
1
- Subfragmentul 1;
S
2
- Subfragmentul 2.

Alctuirea moleculei de miozin cuprinde dou lanuri
polipeptidice grele, fiecare cu greutate de cca. 200 kilodaltoni i
patru lanuri uoare cu greuti de 15-20 kilodaltoni. Lanurile grele
se ntind pe toat lungimea moleculei, n timp ce lanurile uoare
sunt localizate la capul moleculei de miozin, cte dou pentru
fiecare lob. Fiecare lan greu are dou poriuni: - o poriune
alungit alfa - helicoidal (coada) i un cap globular. Poriunile
alungite ale lanurilor grele sunt rsucite n spiral, pe
cndcapetele globulare rmn separate. De fiecare cap sau lob se
leag cte o pereche de lanuri uoare.
Pentru studierea alctuirii moleculei de miozin s-a efectuat
proteoliza moleculei cu ajutorul tripsinei. Din molecula de miozin
se formeaz dou fragmente, denumite meromiozine: - o
meromiozin uoar, L meromiozina (de la light = uor n englez)
i o meromiozin grea, H - meromiozina (de la heavy = greu).
L meromiozina (LMM) are aspectul unui bastona cu
lungimea de 80 nm i grosimea de 2 nm, este lipsit de activitate
ATP-azic i nu interacioneaz cu actina.
H meromiozina (HMM) are o poriune linear de 60 nm, care
se termin cu o poriune globular de 20/5 nm. Sub aciunea

100
papainei, HMM poate fi scindat n dou subuniti, subfragmentul
1 i subfragmentul 2.
Subfragmentul 1(S -1) are o greutate de 120 KD i
corespunde poriunii globulare a H meromiozinei, prezint
activitate ATP-azic i poate interaciona cu actina.
Subfragmentul 2 (S - 2) are o greutate milecular de 60 KD,
i lipsete activitatea ATP-azic i capacitaea de a interaciona cu
actina.
n ntregul ei, poriunea liniar a moleculei de miozin este
format din L meromiozin i subfragmentul 2 al H meromiozinei,
iar capul moleculei de miozin este reprezentat de subfragmentul
1 al H meromiozinei.

5.3.2.1.Funciile microfilamentelor de actin i miozin.

Microfilamentele de actin i miozin sunt implicate att n
micrile celulare de locomoie (deplasarea fibroblastelor n culturi,
micarea ameboidal prin emiterea de pseudopode, micrile
morfogenetice din embrion), ct i n micrile intracitoplasmatice
(migrarea granulelor de secreie, a granulelor pigmentare,
deplasarea organitelor celulare, mobilitatea microvililor).
Participarea microfilamentelor n aceste fenomene celulare este
influenat de concentraia n citosol a ionilor de calciu, a
moleculeor de ATP i de AMP-ciclic, de ph, etc.
n celulele musculare, actina i miozina intr n alctuirea
unor ultrastructuri stabile, denumite microfilamente sau
miofilamente (myofilamentum) de actin i de miozin.
Miofilamentele se dispun ordonat, n sensul lungimii, paralele ntre
ele i formeaz miofibrilele, cu un diametru de 1-2 m. Un
miofilament de actin este alctuit din 600 molecule de actin, n
timp ce un miofilament de miozin conine numai 200 molecule de
miozin.
Cea mai precis organizare i dispunerea a moleculeor de
actin i miozin se ntlnete n miofilamentele i miofibrilele
muchiului striat (scheletic i cardiac), care sunt orientate paralel
cu axul mare al fibrei musculare. (Fig.5.7.) n rabdocit (fibra
muscular scheletic) exist cca. 1000 miofibrile ,dispuse n
pachete longitudinale (colonete Leydig), ce apar pe seciune
transversal sub forma unor grupri de 30-50 miofibrile ( cmpurile
Cohnheim).
La microscopul optic, miofibrilele apar striate,prezentnd o
succesiune alternant de benzi sau discuri. O band A (stria A),
denumit i disc ntunecat, de 1,5 nm, anizotrop (discus

101
anizotropicus) n lumin polarizat, ntunecat n contrast de faz,
mai intens colorabil, alterneaz cu o band clar (stria I) de 0.8
nm, izotrop (discus isotropicus) n lumin polarizat, clar n
contrast de faz, mai slab colorabil.




Fig.5.7.Organizarea dispozitivului contractil n fibra muscular striat

Discul ntunecat (banda A) este transversat prin mijlocul lui
de zon clar (zona lucida s. stria H) care este strbtut de o linie
ntunecat, numit linia M (linea M) sau mesofragm
(mesophragma).
Discul clar (banda I) este i el traversat de o linie
intunecat, denumit linia Z (linea Z), telofragm (telophragma)
sau stria AMICI, ce se prelungete transversal, de o parte i de
alta, n toate miofibrilele dintr-un rabdocit. n unele fibre musculare
mai intens solicitate, discurile clare (I) pot fi traversate, n plus, i
de o fina linie accesorie, linia N.

102
ntre dou telofragme (strii Amici sau linii Z) sucesive se
delimiteaz un sarcomer sau un miomer (myomerrum), care
reprezint unitatea fundamental de structur i funcie a
miofibrilei. Un sarcomer are o lungime de 2,5 m i cuprinde un
disc ntunecat ( o band A) i cele dou jumti de benzi clare (I)
adiacente. ntr-o mifobril se gsesc cteva zeci de mii de
sarcomere aezate cap la cap. De exemplu, ntr-un rabdocit cu
lungimea de 5 cm sunt 20.000 de sarcomere, nct 20.000 x 2,5
m = 50.000 = 5 cm.




Fig.5.8. Organizarea ultrastructurilor din banda M
a.Seciune transversal
b. Reprezentare tridimensionala, FG-filament gros de miozin;FM-filamente M
ale citoscheletului endosarcometric enodsarcomeric; PM-puni M

Ultrastructura sarcomerului a fost investigat prin studii de
microscopie electronic nc din anul 1953, reprezentnd primele
aplicaii ale electronomicroscopiei n biologie. S-a constatat c
filamentele groase, de miozin (cu diametrul de 15 nm i lungimea
de 1,6 nm) sunt dispuse n mijlocul sarcomerului n zona ocupat
de discul ntunecat ( banda A) n timp ce la nivelul discului clar
(banda I) se gsesc numai filamente subiri, de actin (cu
diametrul de 6 nm i lungimea de 1nm), care pornesc de o parte i
de alta a benzii Z i ptrund n discul ntunecat (A) pn n
apropierea zonei H, n care se gsesc numai filamente groase. n
restul discului ntunecat (A) se produce o interdigitare a
filamentelor groase i subiri, nct pe o seciune transversal la
acest nivel, ficare filament gros are n jurul su 6 filamente subiri,
realizndu-se un model hexagonal. (Fig.5.8.)


103
Pe suprafaa filamentelor groase proemin capetele
moleculelor de miozin sub forma unor puni transversale. Pe
imaginile electronomicroscopice, punile transversale apar ca
proeminene laterale, perpendiculare pe
axa filamentelor groase, extinse spre
filamentele subiri pe care tind s le
ating. S-au numrat 200-220 puni
transversale pentru un filament gros,
dispuse regulat urmnd un traiect
spiralat de-a lungul filamentului. Punile
transversale conin HMM (H
meromiozin) ce are activitate ATP-
azic i interacioneaz cu
actina.(Fig.5.9)


Fig.5.9. Dispunerea punilor transversale la
nivelul filamentului

5.3.2.2. Micri celulare bazate pe sistemul actin-miozin

Pe baza sistemului molecular actin-miozin se realizaez
mai multe categorii de micri celulare: -micrile din timpul
contraciei musculare; -micarea de locomoie ameboidal; -
micrile din microvili; i curenii citoplasmatici.
Interaciunile actin-miozin se desfoar dup acelai
mecanism molecular att n celulele musculare, ct i n cele
nemusculare: Ele se stabilesc ntre filamentele subiri de actin i
capete globulare ale moleculelor de miozin din punile
tranversale. Micarea se produce prin alunecarea filamentelor de
actin i miozin, unul peste altul. Pentru aceasta se desface
puntea dintre miozin i actin i se restabilete puntea cu
monomerul urmtor din filamentul de actin, antrennd deplasarea
filamentului. Energia necesar este furnizat de hidroliza ATP-ului,
iar deplasarea se face dup mecaniosmul "roii cu clichei" de
la ceasornicele mecanice.Relaxarea se produce prin desfacerea
simultan a tuturor punilor dintre filamentele de actin i miozin,
ceea ce permite glisarea filamentelor.(fig.5.10).







104





































Fig.5.10. Schema
modului de aciune a punilor transversale.
a-n relaxare; b-La nceputul contraciei; c-detaarea de filamentul de actin;
d-Reataarea pe monomerul urmtor de actin;
1,2,3,4,5,6,7-Monomeri de actin.


5.3.2.2.1. Contracia fibrelor musculare striate

Contracia muscular reprezint forma cea mai perfecionat de
micare bazat pe sistemul actin-miozin. Se produce prin
alunecarea (glisarea) filamentelor de actin printre cele de
miozin, fr a se modifica lungimile lor. Mecanismul glisrii a fost
propus de HUXLEY n 1954 i apoi demonstrat experimental. Ca
rezultat al glisrii se scurteaz lungimea sarcomerului, iar prin
nsumarea scurtrii tuturor sarcomerelor se ajunge la scurtarea

105
fibrei musculare n ntregul ei. De exemplu, o scurtare a
sarcomerului de la 2,5 la 2 m (deci cu 20%), nsumat pentru
20.000de sarcomere produce o scurtare de la 5 cm la 4 cm. n
timpul contraciei, discul ntunecat (banda A) nu se modific,
scurtndu-se doar discul clar (banda I) (fig.5.11.)




Fig.5.11. Aspectul sarcomerului
a-n muchiul contractat; b- n muchiul relaxat; c-n muchiul ntins.

Glisarea se datoreaz faptului c fiecare cap al moleculelor
de miozin "pete" n lungul filamentului de actin, de pe un
monomer pe urmtorul "trgnd" filamentul de actin pas cu pas.
Contracia muchiului scheletic se declaneaz n momentul
n care excitarea nervului motor al muchiului determin apariia
unui potenial de aciune n sarcolem ( plasmalema fibrei
musculare striate), la nivelul jonciunii neuromusculare. Semnalul
electric se transmite rapid n jurul fiecrei miofibrile prin tubii
transveri (T) ce se ntind de la sarcolem la miofibril. n acest fel,
semnalul electric ajunge la reticulul sarcoplamic ( o form
specific a reticulului endoplasmic n fibra muscular), producnd
eliberarea din cisternele reticulului n citosol, a unei cantiti mari
de ioni de calciu ( Ca
2+
), ce se afl stocai n lumenul cisternelor.
Creterea brusc a concentraiei de ioni de calciu declaneaz
contracia miofibrilei, datorit efectului pe care Ca
2+
l produc
asupra troponinei i tropomiozinei, proteine asociate cu actina n
filamentul subire. n repaus, tropomiozina se interpune ntre
actin i capul miozinei, blocnd interaciunea dintre ele.

106
Troponina C leag ionul de calciu i prin aceasta modific poziia
tropomiozinei, fcnd posibil interaciunea actinei cu miozina.
(Fig.5.12).



Fig.5.12. Relaiile actin- miozin- tropomiozin
a - n repaus; b- n activitate;
1- miozina; 2- actina; 3 tropomiozina

n momentul n care capul miozinei atinge actina este
eliberat ADP i gruparea fostfat, ceia ce determin o flexare a
capului miozinei care trage de filamentul de actin, rezultnd
glisarea filamentului i contracia muscular. Dup acest moment,
de capul miozinei se leag o molecul de ATP, producndu-se
desprinderea miozinei de actin.Miozina hidrolizeaz ATP-ul n
ADP i gruparea fosfat, iar capul miozinei i recapt conformaia
iniial, dup capul se repet.
Micrile de "pire" a capetelor de miozin (din filamentele
groase) n lungul filamentelor subiri (de actin) sunt efectuate de
ctre fiecare molecul i de ctre fiecare lob al capului. n acest
fel, ntr-un muchi n contracie, la un moment dat exist capete
ale moleculelor de miozin care sunt ataate de actin, iar altele
sunt detaate. ntr-o contracie rapid, fiecare din cele 500 capete
de miozin ale unui filament gros parcurge ciclul de 5 ori ntr-o
secund.
Dup terminarea contraciei, ionii de calciu sunt recaptai
n cisternele reticulului sarcoplasmic printr-o enzim (Ca
2+
- ATP -
az), ceea ce produce relaxarea muchiului.
Pe lng actin i miozin, n miofibrile se mai gsesc
proteine accesorii cu rolstructural. Astfel, n stria Z, se gsesc
proteine (-actina i desmina) ce ancoreaz filamentele de actin
i aliniaz miofibrilele adiacente, asigurnd contracia sincronizat

107
a miofibrilelor. Alte proteine accesorii ndeplinesc un rol funcional
mediind efectul pe care Ca
2+
l are n contracia muscular.
n muchiul cardiac, filamentele de actin i miozin prezint
o dispunere asemntoare cu din muchiul scheletic, fiind
evidente striaiile.
Muchiul neted este lipsit de striaii, iar filamentele de
miozin i de actin nu formeaz miofibrile, nefiind dispuse strict
ordonat ca n muchii striai, dei, n general, sunt orintate paralel
cu axul lung al celulei. Miozina din celulele musculare netede
(leiocite) se deosebete de cea din fibrele musculare striate
(rabdocite) prin dou caractere:
1-activitatea ATP-azic este de zece ori mai mic, fiind mult mai
direct legat de ionii de calciu; 2- n leiocite, miozina poate
interaciona cu actina numai dac lanuriile uoare sunt fosforilate.



Fig.5.14. Diagrama activrii kinazei
1-Calmodulina; 2-Ioni de calciu; 3-Complexul Ca
2+
- calmodulin; 4- Kinaz inactiv;
5-Kinaz activat.

Fosforilarea i defosforilarea lanurilor uoare ale miozinei
din leiocit sunt efectuate de enzime specifice. Astfel. enzima de
fosforilare se numete kinaza lanurilor uoare i este activat de
complexul Ca
2+
- calmodulin. Kinaza activat fosforileaz lanurile
uoare din molecula de miozin, permind interaciunea cu actina.
(Fig.5.14.)
Kinaza miozinei poate fi activat de influxul de Ca
2+
,
rezultat n urma excitrii sistemului neurovegetativ, dar i prin
AMP-ul cicclic al crui nivel n celul este legat de hormoni. n
acest fel contracia muchiului neted poate fi produs prin aciune
nervoas sau hormonal. Contracia muchiului neted este mai
lent deoarece i activarea miozinei prin sistemul calmodulinei
este lent. n muchiul striat, unde se realizeaz o contracie

108
rapid este prezent o form specializat a calmodulinei,
troponina C.
n toate celulele nemusculare, miozina se aseamn cu cea
din muchiul neted prin faptul c activarea ei (dobndirea
capacitii de a se lega de actin) depinde de fosforilarea
lanurilor uoare. care la rndul ei este stimulat de complexul
Ca
2+
-calmodulin.Fosforilarea induce asamblarea miozinei n
agregate mici bipolare, formate din 10-20 molecule de miozin,
legate prin cozile lor. Aceste agregate pot produce deplasarea
filamentelor de actin prin mecanismul interaciunii actin-miozin.
Contracia complexului acto-miozinic produce trecerea citoplasmei
n starea de gel, iar relaxarea determin trecerea n stare fluid,
cum se ntmpl n micarea ameboidal i n motilitatea
microvililor. (Fig.5.15.)




Fig.5.15. Agregarea miozinei n celulele nemusculare.
1-Molecule de miozin;
2-Agregate moleculare.

Alte micri bazate pe sistemul actin-miozin sunt micarea
ameboidal, micrile din microvili i curenii citoplasmatici.

5.3.2.2.2. Micarea de locomoie ameboidal

Micarea de locomoie ameboidal prezint o importan
deosebit pentru organisme, deoarece prin acest mecanism
leucocitele ies din vasele sanguine i se deplaseaz la locul
infeciilor, iar fibroblastele se deplaseaz pe suprafaa rnilor
depunnd colagen, cu rol n formarea cicatricei.

109




Fig.5.16.Micarea ameboidal a fibroblastelor.
1-Nucleu; 2-Coad; 3-Ondulaii de suprafa; 4-Microvrfuri; 5-Lamelipode;
6-Plci de adeziune; 7,8-Extensie; 9-Adeziune; 10-Contracie.

n cazul animalelor domestice, emiterea de pseudopode
mici se ntlnete la deplasarea leucocitelor, care se face lent.
Fibroblastul emite pe direcia micrii prelungiri lite, lamelipode,
care formeaz o muchie de naintare. Procesul de emitere a
acestor prelungiri este continuu, unele prelungiri adernd la
substrat prin una din feele lor cu plci de adeziune, n timp ce alte
prelungiri, desprinse de pe faa opus, se rentorc spre corpul
celulei, formnd ondulaii de suprafa. Pe msur ce are loc
naintarea celulei, rmne o coad n interiorul creia se gsesc
fibre de retracie, iar din aceast coad se desprind fragmente pe
care celula le las n urm. La micarea fibroblastelor se produc
treceri succesive i reversibile ale citoplasmei din starea de gel n
cea de sol, ajungndu-se la o vitez de 40 nm/or.
Micarea ameboidal nu se face la ntmplare, fibroblastele
manifestnd o preferin pentru suprafeele pe care pot adera.
Este posibil ca prelungirile subiri, epii observai pe lamelipode s
acioneze ca nite antene de exploatare a suprafeei. Forma
suprafeei influeneaz micarea ameboidal, fibroblastele

110
migrnd pe direcia curburii minime ( n sensul lungimii cilindrului
de sticl). (Fig.5.16)
Emiterea pseudopodelor i deplasarea celulei se face spre
un stimul chimic, fenomen cunoscut sub denumirea de
chemotactism.S-a dovedit c leucocitele sunt atrase de molecule
"atractante" eliberate n focarul inflamator. Aceste molecule produc
metilarea unor grupri carboxil din proteinele din membran. Dac
metilarea este blocat, chemotactismul este inhibat.

5.3.2.2.3. Micrile din microvili

n alctuirea unui microvil (microvillus) exist filamente de
actin (cca.40), dispuse longitudinal i paralele ntre ele, avnd
toate aceeai polaritate. O extremitate a filamentelor ajunge al
vrful microvilului, ntr-o regiune amorf, cu o compoziie chimic
insuficient precizat, ce ancoreaz filamentele de membran.
Extremitatea opus ajunge la polul bazal al microvilului,
terminndu-se ntr-o reea perpendicular de filamente de actin,
denumit buton terminal, ce conine i miozin, avnd rolul de a
menine n poziie microvilul. Mnunchiul de filamente din microvil
este legat, din loc n loc, ntre ele i cu plasmalema prin fimbrin,
ce realizeaz o "scar " n spiral n lungul microvilului. (Fig.5.16.)

















Fig.5.16.Diagrama ultrastructurii microvililor



111
Polaritatea filamentelor de actin din microvil este similar cu
a filamentelor subiri din sarcomer, producnd scurtarea ritmic a
microvililor i mpingerea substanelor absorbite spre interiorul
celulei. (Fig.5.18.)





Fig.5.19.Polaritatea filamentelor de actin
A - n microvil
B n sarcomer






5.3.2.2.4. Curenii citoplasmatici

Curenii citoplasmatici sunt micri ce realizeaz o deplasare
a organitelor i componenetelor n interiorul celulei. Se manifest
sub form de: 1 - scurgere a citoplasmei fluidifiate n prelungirile
celulere n timpul micrii ameboidale; 2 - micare saltatorie a
organitelor, n care pe filamentele de actin situate la
periferia celulei se deplaseaz filamente de miozin pe care sunt
ancorate organite celulare; 3 -cicloza, o micare n jurul nucleului,
vizibil n celule vegetale sau n algele verzi unicelulare.
Curenii citoplasmatici sunt caracteristici celulelor eucariote
vii, disprnd odat cu moartea acestora. Transportul
axoplasmatic din neuroni reprezint o form specializat de cureni
citoplasmatici n care intervin microtubulii.

5.3.3. Microtubulii i micrile bazate pe sistemul
microtubul - dinein

5.3.3.1. Microtubulii

Microtubulii (microtubulus, i) sunt formaiuni rectiliniii cu
lungimi variabile (pn la civa micrometri) i cu un diametru
mediu de 25 nm. Pot apare grupai sau singulari n citoplasm.
Peretele microtubulului este format din 13 iruri lineare, drepte sau
spiralate, formate din molecule proteice globulare, cu diametru de
5nm, cu o greutate molecular de 50-60 Kdal., denumite tubuline.

112
Tubulinele polimerizeaz rezultnd dimeri de tubulin,
alctuii dintr-o alfa-tubulin i o beta-tubulin, legate prin
interaciuni necovalente i dispuse alternant n peretele
microtubulului.
n peretele microtubulilor, dimerii de tubuline formeaz
protofilamente sau protofibrile (protofibrila) cu diametrul de 5 nm.
n protofibrile, dimerii formeaz se dispun n aa fel, nct alfa-
tubulina de la un dimer de leag de beta-tubulina de la de la
dimerul din rndul vecin. Protofibrilele, n numr de 13 se dispun
sub forma unui cilindru, structurnd un microtubul cu diametrul de
25 nm constant n toate cazurile.Energia necesar asamblrii
microtubulilor este furnizat de moleculele de guanizin-trifosfat
(G.T.P.) i nu de cele de A.T.P.
Microtubulii prezint polaritate, adaugarea de dimeri, avnd
lo intensitate mai mare la captul pozitiv, producndu-se
creterea, n n timp ce la captul opus (negativ) predomin
pierdera de dimeri, avnd loc scurtarea. Exist un echilibru
dinamic ntre microtubuli i dimerii de tubulin din citosol.
Polimerizarea se petrece spontan la temperatura de 37
0
C, n timp
ce depolimerizarea are loc la 0
0
. Cationii bivaleni de calciu i
magneziu n concentraie mic (micromolar) sunt necesari pentru
polimerizare, care este mult accelerat n prezena proteinelor
asociate microtubulilor (MPAs), care pot fi: - proteine cu greutate
molecular mare (HMW = Hight Molecular Weight ) i proteine tau
(). De asemenea, calmodulina controleaz procesul de asamblare
- dezasamblare, iar colchicina, un alcaloid blocheaz
polimerizarea tubulinelor, prin legarea unei molecule de colchicin
de un dimer de tubulin. Pe aceast proprietate se bazeaz
folosirea colchicinei la blocarea metafazelor n culturile de celule,
pentru studierea cromozomilor. Unele medicamente,folosite ca
citostatice (vinblastina, vincristina) distrug fusul de diviziune i
oar celulelele maligne, care se divid intens.
















113

















Fig.5.20.Formarea protofibrilelor din dimeri de tubulin i asamblarea unui
microtubul
A.Seciune transversal prin microtubul
1-Alfa-tubulin; 2-Beta-tubulin; 3-Dimer; 4-Asamblare;
5- Blocarea asamblrii prin colchicin; 6-Protofibril; 7-Dezasamblare.
n celul, microtubulii ndeplinesc att un rol structural, ct i
un rol dinamic.
Rolul strucutural const n: 1- meninerea formei celulelor i
a prelungirilor sale (axon,dentrite, cili, flageli); 2-determinarea i
pstrarea dispunerii spaiale a organitelor; 3- organizarea
citosheletului, determinnd distribuia filamentelor intermediare n
celul; 4- dispunerea filamentelor de actin, ce structureaz inelul
contractil, ntre cei doi poli ai celulei; 5- formarea unor "schele
temporare" pe care celula s-i dispun unele componente, ca de

114
exemplu n cursul spermatogenezei, cnd microtubulii formeaz o
"schel" n spiral pe care se sprijin mitocondriile.
Rolul dinamic const n: 1- particip la realizarea micrilor
celulare ce au la baz mecanismul microtubul-dinein, precum
micarea cililor i flagelilor; 2- asigur o serie de micri
intracitoplasmatice, precum micarea granulelor de melanin n
melanocite; 4- asigur transportul unor molecule i substane; 5-
realizeaz transportul axonal rapid (200 nm/ 24 ore) i lent (24 nm/
24ore); 5- particip la eliberarea proteinelor i lipoproteinelor
sintetizate n hepatocite.
n citoplasm, microtubulii sunt prezeni n alctuirea unor structuri
stabile, cum sunt centriolii, fusul de diviziune, cilii i flagelii.
5.3.3.2. Centriolii
Centriolul (centriolum) este o structur microtubular stabil
ce intr n componena centrului celular ( cytocentrum).
n majoritatea celulelor, centrul celular este situat juxta
nuclear, n apropierea complexullui Golgi i conine unul sau doi
centrioli, ce sunt nconjurai de o zon citoplamatic clar,
denumit material pericentriolar.
Centrul celular lipsete n celulele nalt specializate (eritrocit,
rabdocit, neuron), iar cnd este prezent coordoneaz mobilitatea
celular n timpul diviziunii. (Fig.5.20.)













Fig.5.21.Aspectul centrului celular la microscopul optic

115
A- n intercinez; B- n timpul diviziunii.

La microscopul electronic, fiecare centriol apare ca o
structur cilindric (n lungimre de 0,5 m i cu diametrul de 0,11
m), dispus perpendicular pe congenerul su. Fiecare centriol
este format din 9 triplete (triplomicrotubulus) de microtubuli, notai
de la interior spre exterior cu A,B,C i mbrcai ntr-o mas de
substan dens. Centrul cilindrului este lipsit de microtubuli,
realizndu-se o structur de tipul "9+0", diferit de structura
axonemei cililor i flagelului, care este de tipul "9+2".(Fig.5.22)





Fig.5.22.Ultrastructura centriolilor
1-Triplet de microtubuli
Centrul celular (sau centrozomul ) joac rolul de organizator al
microtubulilor, datorit faptului c materialul pericentriolar format
din proteine i ARN, determin polimerizarea tubulinelor i
asamblarea microtubulilor, care au captul negativ ( - ) n
materialul pericentriolar din centrazom, n timp ce captul pozitiv
( + ) dispus distal prezint o cretere intens.
Datorit funciei sale de organizator temporar, spaial i
vectorial al microtubulilor, centrul celular este implicat n toate
procesele n care acetia apar ca organizatori ai citoscheletului.
Centrul celular intervine i n direcionarea micrilor de
locomoie ameboidal ( a fibroblastelor i leucocitelor), situndu-se
naintea nucleului pe direcia micarii celulelor.Tot odat, centrul
celular particip i definirea polaritii celulei, dispunndu-se ca i
complexul Golgi, apical fa de nucleu n celulele epiteliale.

5.3.3.3. Fusul de diviziune

116
Fusul de diviziune (fusus mitoticus) este o structur intra
celular, format din microtubuli (microtubuli fusalis) ce realizeaz
o legtur ntre centriolii care se despart i migraz la cei doi poli
ai celulei, n timpul diviziunii celulare.
n interfaz, centrozomul este situat n vecintatea nucleului
i din el pleac microtubuli n toat citoplasma. n timpul fazei "S" a
ciclului celular ncepe dublarea centrului celular prin separarea
centriolilor, n vecintatea fiecruia din centriolii vechi producndu-
se asamblarea unui centriol, nou perpendicular pe cel vechi.
Concomitent cu deplasarea spre polii celulei a centrilor celulari,
microtubulii formeaz filamente ce se dispun sub forma unui fus de
diviziune.Fiecare filament este alctuit din circa 100 microtubuli i
proteinele asociate lor.ntre microtubuli din fus i moleculele de
tubulin din citosol se stabilete un echilibru dinamic.(Fig.5.22)















Fig.5.22.Participarea microtubulilor la formarea fusului de diviziune
3-Centrioli; 2-Microtubuli;3-Fibrele fusului de diviziune; 4-Cromozomi.

5.3.3.4. Cilii i flagelul

117
Cilii (cilium,a) i flagelul (flagellum) sunt expansiuni celulare
permanente, formate din citoplasm i membran celular,
dispuse la polul apical al celulei.
n structura lor, microtubulii sunt prezeni, n axul
citoplasmatic ciliar, denumit axonem (axonema), fiind dispui
ordonat, paraleli ntre ei i cu axul longiutudinal al formaiunii. La
baza fiecrei axoneme se afl cte un corpuscul bazal
(corpusculum basale), ce are organizarea unui centriol.
Cilii pot fi vibratili ( sau kinetocili) i nevibratili (sau stereocili).
La cilii vibratili (din mucoasa traheal, nasal), axonema este
format din doi microtubuli axiali, nconjurai, la periferie de nou
dublete de microtubuli. Fiecare dublet cuprinde un microtubul
complet sau subfibra A, format din 13 protofilamente i un
microtubul incomplet sau subfibra B, format din 10 sau
11protofilamente. Tubulinele alfa () i beta () ce formeaz
subfibra A sunt diferite de tubulinele omoloage din subfibra B.











Fig.5.24. Ultrastructura cililor
De la fiecare subfibr A pornesc nspre subfibra B din
dubletul vecin dou brae simetrice n form de clete formate din
molecule de dinein, care este o protein-enzim bogat n ATP-

118
az. Braele de dinein sunt dispuse n lungul microtubulului la
intervale regulate de 24 nm. La intervale mai mari de 24 nm exist,
din loc n loc, la o distan de 86,5 nm legturi elastice, formate
dintr-o alt protein, denumit nexin.
De la subfibra A pleac spre centrul axonemei cte un bra
de legtur (sau spi), ce se termin printr-o poriune globular, n
vecintatea tecii interne ce nconjoar cei doi microtubuli
centrali.(Fig.5.25).
Flagelul (flagellum), de obicei, unul singur pentru fiecare
celul (expl. la spermatozoid) prezint o structur asemntoare
cu a cilului, dar mai complex. Axonema sa este structurat dup
tipul "9+2", prezentnd n jurul su o coroan de mitocondrii ce a
asigur ATP-ul necesar micrii.
Cilii nevibratili sau stereocilii ( de exempl. cei din epididim i
din urechea intern) au aceiai structur ca i cilii mobili, cu
deosebirea c lipsesc cei doi microtubuli centrali din axonem.
Micrile celulare ce au la baz sistemul microtubul-dinein
sunt pe deoparte micrile caracteristice cililor i flagelilor, iar pe
de alt parte sunt micrile cromozomilor din cursul diviziunii
celulare.






119






Fig.5.25.Seciune transversal prin axonema unui cil
A - Subfibra A.; B - Subfibra B.
a-Brae de dinein; b-Legturi de nexin; c-Spi; d-Teaca intern; e-Microtubuli
centrali; f-Tija cilului; g-Rdcina cilului.

Micarea cililor i flagelilor se realizeaz prin alunecarea
unui dublet periferic n raport cu dubletul vecin lui.Alunecarea
depinde de legarea ciclic a dineinei subfibrei A dintr-un dublet de
subfibra B a dubletului vecin, nct braele de dinein "pesc "
de-a lungul dubletelor, producnd energia necesar btilor cilului
sau a flagelului.Se realizeaz astfel glisarea dubletelor unul peste
altuli ncovierea cilului i flagelului.
Dineina prezint o funcie similar cu a miozinei, prezentnd
activitate ATP-azic, nct prin scindarea ATP-ului furnizeaz
energia necesar micrii. ATP-ul provine din glicoliz i difuzeaz
prin citoplasm n axonema cililor, pe cnd, n flageli, ATP-ul este
generat de mitocondriile ce nconjoar axonema.

120
Legturile radiare (spiele) dintre teaca intern i dubletele
periferice, precum i teaca intern au rolul de a controla activitatea
braelor de dinein, nct s se produc o und coerent de
micri de la baz spre vrf. Astfel cilii au micri ciclice n doi
timpi (btaie - revenire), ce dureaz 0,1-0,2 secunde, n timp ce
flagelul are o micare ondulatorie sinusoidal sau
elicoidal.(Fig.5.26).





Fig.5.26. Schema micrii flagelului (A) i a cililor.
a-Btaie; b-Revenire


n condiii patologice, pot aprea tulburri funcionale ale
cililor datorit unor anomalii localizate fie la nivelul corpuisculului
bazal (centriol incomplet), fie la nivelul axonemei (complexe
tubulare supranumerare, sau cu aranjament dezorganizat) ,fie n
pri componente ale cilului.
De asemenea, absena dineinei produce sindromul cililor
imobili (o boal genetic), care se caracterizeaz prin infecii
respiratorii cronice (datorit incapacitii cililor de a curii cile
respiratorii sau prin sterilitate (spermatozoizii fiind imobili).

5.4.Mitocondriile - organite generatoare de
energie

Mitocondriile (mitochondrion gr.= filament,granul) sunt
organite specializate n producerea de energie necesar activitii
celulelor eucariote, comportndu-se ca nite centrale energetice,
in care energia este eliberat prin oxidarea unor substrate i
transformat n energie chimic (ATP) prin procesul de fosforilare
oxidativ. Sunt fabricile de energie ale celulei.

121
Mitocondriile sunt prezente n toate tipurile de celule cu
excepia eritrocitului adult, n care lipsesc. Au fost observate la
microscopul optic n a II-a jumtate a secolului XIX de ctre
ALTMAN-1890, prin coloraie cu verde Janus i de BENDA-1897,
care afolosit coloraia cu hematoxilin feric Regaud.
Enzimele marker pentru mitocondrii sunt: monoaminoxidaza,
citrocromoxidaza i enzimele ciclului Krebs.
Numrul mitocondriilor difer de la o celul la alta n funcie
de intensitatea activitii acestora, fiind mai mare n celulele mai
active. Astfel, n hepatocite exist 1000-3000 de mitocondrii n
citosol, n nefrocite-300, n spematozoizi 20-24, n timp ce n
eritrocite lipsesc.Numrul mitocondriilor este mai redus n celulele
cu activitate metabolic redus.
Poziia mitocondriilor n celul este diferit.Ele pot fi
rspdite, reletiv uniform, n ntreaga citoplasm ( de expl. n
hepatocit) sau localizate n celul, n locurile unde ATP-ul este
necesar n cantitate mai mare. Astfel: - n muchiul scheletic,
mitocondriile sunt dispuse ntre miofibrile; -n spermatozoid, sunt
aranjate helicoidal n jurul axonemei flagelului; - n neuroni, n
regiunea sinaptic; - n panceasul endocrin, mitocondriile sunt
alturate reticulului endoplasmic rugos, genernd ATP-ul necesar
biosintezei proteinelor. Mitocondriile se concentreaz la polii activi
ai celulelor polarizate funcional: - la polul bazal, n nefrocite; - la
polul apical, n enterocite;- perinuclear, n momentele de intens
activitate de sintez, dup care se rspdesc n citoplasm.
Mitocondriile i schimb mereu poziia, putndu-se altura
temporar unor organite aflate n intens activitate, n special
reticulului endoplasmic.
5.4.1.Morfologie,structur i ultrastructur
Dimensiunile mitocondriilor sunt variabile de la o celul la
alta, ajungnd pn la 7 m lungime i 0,5 m grosime. n general,
cu ct o celul este mai activ, cu att mitocondriile sunt mai mari.
n celule aflate n repaus, dimesiunile sunt mai mici.
La microscopul optic, mitocondria se poate prezenta sub trei
aspecte:-granule ( granulum mitochondriale),mitocondrii
individualizate , diseminate n citoplasm; -granule nirate ca nite
mrgele pe a (condriomite)i filamente (filamentum
mitochondriale) sau virgule (condrioconi ) (Fig.5.27).


122



Fig.5.27. Mitocondriile
A. Aspecte la microscopul optic: 1-Condrioconte; 2-Bastonae Heidenhein;
3-Mitocondrii; 4-Condriomite; 5-Condrioconi, localizai bipolar.
B.Aspecte la microscopul electronic: 6-Organizarea spaial a mitocondriei;
7-Ultrastructura membranelor; 8-Aspecte ale cristelor; 9-Ultrastructura cristelor;
10-Seciune transversal printr-o crist.

Ultrastructura mitocondriilor a fost elucidat de PALADE i
SJSTRAND-1952, pe seciuni de ficat examinate
electronomicroscopic. n ultrastructura mitocondriei intr dou
membrane (membrana mitochondrialis), cu grosimea de 6 nm
fiecare, ce delimiteaz dou compartimente.Membrana extern
(membrana mitochondrialis externa) este neted, n timp ce
membrana intern (membrana mitocondrialis interna) dei
urmrete conturul celei externe prezint din loc n loc pliuri sau
invaginri denumite criste (latinescul crista= creast) mitocondriale
cu grosimea de 25 nm, de forme variate. Numrul, dispoziia i
dimensiunea cristelor variaz n raport cu tipul activitii metabolice
i necesitile energetice ale celulei. Numrul cristelor este mai
mare atunci cnd activitatea celulelor este mai intens. Cristele
mitocondriale au forme variate, putnd aprea lamelate sau
septate (sub form de foie sau septe) i tubulare ( tubulus),sub

123
form de cilindri sau veziculare (vesicula). Cristele pot fi orientate
perpendicular sau paralel cu axul longitudinal al mitocondriei. Ele
pot fi rectilinii,ramificate sau ncruciate n reea, compartimentnd
matricea mitocondriei. (Fig.5.28).


Fig.5.28.Ultrastructura
mitocondriei
1-Crist; 2-ADN-mitocondrial;3-F
1
-ATP-az; 4-
Membrana extern; 5-Membrana intern;6-Spaiul
intermembranar; 7-Ribozomi; 8-Incluziuni; 9-
Matrice; 10-Particul elementar(F
1
): a-piesa
bazal,b-piesa intermediar,c-piesa superioar.

ntre cele dou membrane
(extern i intern) se delimiteaz
un compartiment extern (spatium
intermembranosum) de 7-8nm.
Membrana intern delimiteaz un
compartiment intern sau matricea
mitocondrial (matrix
mitochondrialis). La nivelul
membranei interne, prin tehnici
adecvate (coloraie negativ cu acid fosfotungtic, pentru a obine
un contrast mai mare la microscopul electronic) s-au evideniat
subuniti de membran sau particule elementare (particule F
1
)
(particula elementaria s. spherula s.sphaerula membrane).
O particul elementar apare ca o proeminen de 10 nm,
format din trei piese: bazal, intermediar i superioar.
Particulele elementare conin o enzim, F
1
- ATP-az, ce face
parte din complexul enzimatic ce particip la sinteza ATP-
ului.(Fig.5.29)
Membrana mitocondrial intern este mai puin permeabil
dect membrana mitocondrial extern, comportndu-se ca unfel
de barier ntre matricea mitocondrial i restul mitocondriei. Prin
ea trec spre spaiul intern: -ioni de calciu (Ca 2
+
) i magneziu
(Mg
2+
), necesari activitii enzimelor cuprinse n matricea
mitocondrial; - molecule de ADP i ATP, necesare desfurrii
procesului de fosforilare activ; -acizi grai i unii aminoacizi
(glutamatul i apartatul). Transportul prin membran a acestor
produi se realizeaz cu ajutorul unor proteine din membran,care
servesc ca transportori sau crui (translocazele i permeazele).

124




Fig.5.29. Organizarea particulelor
elementare
1-Factorul de cuplare; 2-Citocromi;
3-Succinat dehidrogenaza.



5.4.2. Matricea mitocondrial.

Matricea mitocondrial conine enzime, vitamine (B,A,C),
acizi nucleici (ADN i ARN), ioni ( K
+
, Na
+
, Ca
2+
, Mg
2+
) i granule
de glicogen, lipide, riboproteine (ribozomi).
Enzimele matricei aparin la urmtoarele sisteme: -sistemul
enzimatic al ciclului acidului citric (Krebs); - sistemul enzimatic al
beta oxidrii acizilor grai; -sistemul enzimatic de fosforilare
oxidativ; enzime care intervin n sinteze specifice; -enzime
proteolitice.
Acizii nucleici mitocondriali sunt reprezentai de ARN
ribozomal, ARN mesager, ARN de transfer i ADN. Molecula de
ADN mitocondrial (cu lungimea de 20m) este circular,
asemntoare cu cea a procariotelor. Replicarea ADN-ului
mitocondrial nu se produce sincron cu replicarea ADN-ului nuclear
i nici n mod continuu. Sinteza ADN-ului mitocondrial se produce
mai lent dect n cazul ADN-ului nuclear i independent de acesta.
ADN-ul mitocondrial este sintetizat independent n matricea
mitocondrial,fapt demonstrat prin evidenierea n matrice a
enzimei care catalizeaz biosinteza ADN-ului, enzim denumit
ADN-polimeraza.
Ribozomii mitocondriali au diametrul de 15 nm i sunt
asemntori celor de la procariote, de tip 70 S, cu cele dou
subuniti: mare, de 50S i mic, de 30S.
Mitocondria are autonomie genetic parial, ntruct
posed un cromosom (cromosoma mitochondrialis) ce conine
programul genetic (ADN-ul mitocondrial), i este capabil s-i
sintetizeze singur, fr ajutorul nucleului unele protein-enzime
(datorit nzestrrii cu ribozomi proprii, ce biosintetizeaz
proteine).Codul genetic folosit de mitocondrie difer parial de
codul genetic nuclear.

5.4.3.Procesele metabolice mitocondriale

125

Aparin pe de o parte metabolismului energetic, iar pe de alt
parte metabolismului sintetetic.
Mitocondria este sediul metabolismului celular aerob,
dependent de oxigen, care include: 1- ciclul acidului citric
(KREBS); 2- oxidarea acizilor grai i 3-fosforilarea oxidativ. Prin
aceste procese, n mitocondrii se produce ntreaga cantitate de
energie (sub form de ATP) necesar creterii,funcionrii i vieii
celulei, nct mitocondriile se comport ca nite centrale
energetice celulare.
ntr-un caz ipotetic, n care celulele animale ar fi lipsite de
mitocondrii, producerea de energie ar depinde de glicoliza
anaerob, n care fiecare molecul de glucoz genereaz dou
molecule de ATP. n realitate, n mitocondrii, metabolismul
glucozei este complet, oxidarea mergnd pn la CO
2
i H
2
O,
nct fiecare molecul de glucoz produce 36 molecule de
ATP.Prin hidroliza ATP-ului se elibereaz o cantitate important de
energie (8.000-10.000 Kcal/mol) necesar proceselor metabolice.
n cazul acizilor grai, acetia trec din citosol n matricea
mitocondrial, unde intr n ciclul beta-oxidrii,pierznd n mod
repetat cte doi atomi de carbon de la captul carboxil i rezultnd
o molecul de acetil-coenzim A. Totodat, n urma glicolizei ce
are loc n citosol,rezult dou molecule de piruvat, care n
matricea mitocondrial este convertit de ctre complexul piruvat
dehidrogenaz n acetil coenzima A.
Acetil coenzima A, rezultat din acizii grai sau din glucoz
intr n ciclul acidului citric (ciclul KREBS), ce are loc n matricea
mitocondrial.La acest nivel cu ajutorul oxigenului molecular,
produs de respiraia celular, au loc oxidri n urma crora rezult
energie ce este folosit pentru sinteza de ATP, de ctre complexul
ATP- sintetazei, prezent n membrana mitocondrial intern.
Celulele dispun de depozite de lipide (trigliceride) n esutul
adipos i de glucide (glicogen), n ficat i muchi, prin care se
asigur o surs continu de piruvat.
Participarea mitocondriilor la efectuarea unor procese
metabolice este posibil datorit existenei unui mozaic complex
de enzime,localizate n diferite structuri mitocondriale, precum
membrana extern, membrana intern cu criste i particule
elementare, compartimentul extern (sau spaiul intermembranar) i
compartimentul intern (sau matricea mitocondrial).Astfel,
enzimele care intervin n ciclul acidului citric i n beta -oxidarea
acizilor grai sunt localizate n membrana extern i n matricea
mitocondriilor.Enzimele i ali factori care particip la procesul de

126
fosforilare oxidativ (generatoare de ATP) sunt localizate n
membrana intern,respectiv n criste.n particulele elementare ale
membranei interne se afl localizat enzima denumit factorul de
cuplare F
1
, care posed activitate ATP-azic i catalizeaz ultima
etap a formrii ATP-ului.
Procesele metabolice biosintetice pot avea loc, datorit
faptului c mitocondriile conin ADN, ARN, ribozomi i toate
enzimele necesare exprimrii genelor mitocondriale.n mitocondrii
se desfoar unele etape din sinteza hemului i a hormonilor
steroizi, ca de exemplu n celulele interstiiale din ovar i testicul,
n corticosuprarenal.
Structura chimic a mitocondriilor cuprinde 65-70% proteine
(din care 30% structurale i 70% enzime), 25-28% lipide
(fosfolipide, lecitine, trigliceride, cardiolipin), 0,5% ARN, AND (n
cantitate mic),glucide,ioni,ap i uneori vitaminac. ntr-o
mitocondrie, toate proteinele, ca i toate lipidele sunt n locuite la
aproximativ 20 de zile, nct mitocondria se renoiete continuu, iar
cnd iese din funcie, este ndeprtat prin autofagie cu ajutorul
lizozomilor.

5.4.4. Originea mitocondriilor

n celul, noile mitocondrii apar prin condrodierez
(clivaj,despicare), nct dintr-o mitocondrie funcional rezult
dou organite asemntoare. Se menioneaz i posibilitatea de
formare a mitocondriilor din molecule proteice i lipidice sintetizate
n celul sau din alte citomembrane, n special din cele ale
reticulului endoplasmic.
n filogenez, primele mitocondrii au aprut n celulele
animale prin transformarea unor bacterii care, odat ptrunse n
celul animal i-au pierdut virulena, i-au structurat o a doua
membran (membrana mitocondrial extern), i-au adoptata
metabolismul la celula gazd, devenind un organit endo-simbiont.
Mitocondria,ca i bacteriile prezint o molecul de AND circular,
iar unele enzime sunt prezente att n bacterii, ct i n mitocondrii.

5.4.5. Funciile mitocondriilor

Mitocondriile ndeplinesc un rol esenial n metabolismul
energetic al celulelor vii, producnd energia necesar desfurrii
oricrei activiti celulare (diviziune,difereniere,secreie, contracie
muscular, transmitere nervoas).Energia este generat prin
aciunea enzimelor oxido-reductorii mitocondriale i prin procesul

127
fosforilrii active sub forma molecelor macroergice de ATP.Enzima
denumit ATP-az, scindeaz molecule de ATP i elibereaz
energia pe care acestea o conin.
n cursul desfurrii reaciilor enzimatice oxidative i ale
cuplrii oxidrii cu fosforilarea, mitocondria sufer o serie de
modificri de form i strucutur, ce formeaz un ciclu fiziologic de
umflare contracie. n acest ciclu, membrana extern rmne
nemodificat, n timp ce membrana intern permite micri ale
apei i ionilor cu ajutorul translocatorilor
specifici.(Fig.5.30)

Fig.5.30. Ciclu fiziologic de balonare-
contracie al mitocondriei.
1-Mitocondrie nemodificat; 2-Mitocondrie
condensat; 3-Mitocondrie balonat.

n stare de contracie,datorit
proteinelor contractile pe care le conine,
mitocondria i micoreaz mult volumul,
spaiul intermembranar se reduce, iar cristele mitocondriale se
taseaz, organitul, n totalitatea sa, aprnd electronodens.
n starea de balonare, mitocondria acumuleaz o cantitate
mrit de ap, i mrete volumul, se sterg cresteler
mitocondriale, iar cele dou membrane ajung n contact una cu
cealalt. Aceste modificri pot fi fiziologice i reversibile.
Balonarea se datorete pe de o parte modificrii raportului
ATP/ADP de la suprafaa extern a mitocondriei, ct i datorit
acumulrii peste normal a unor ioni.

126

5.5.Organitele de sintez i secreie ale celulei

Sunt reprezentate de ribozomi,reticulul endoplasmic i
complexul Golgi.

5.5.1. Ribozomii

Ribozomii (ribosoma) sau granulele Palade sunt organite
celulare intracitoplasmatice prezente n toate celulele cu excepia
eritrocitelor . (Fig.5.31).


Fig.5.31. Ribozomii - aspect, ultrastructur i biogenez:
1-Ribozomi liberi;2-Ribozomi ataai la RE;3-Poliribozomi;4-Subunitate mic;
5-Subunitate mare;6-Ribozom funcional;7-Dimer;8-Protein ribozomal structural;
9-ARN ribozomal dublu elicoidal;10-ARN ribozomal monocatenar;11-Nucleu;
12-Nucleol;13-Ribozom;14-citoplasm,15-membran celular.

Ribozomii pot fi liberi n citoplasm , solitari sau grupai sub
form de poliribozomi (polyribosoma). De asemenea,se pot ataa
de membranele reticulului endoplasmatic (structurnd reticulul
endoplasmic granular) sau de faa extern a membranei nucleare.
Numrul ribozomilor variaz n funcie de tipul celulei i de
momentele funcionale ale acesteia , fiind foarte mare i ataai
reticulului endoplasmic n celulele care sintetizeaz proteine de
export (celulele acinoase, limfocit i plasmocit). n celulele care
127
secret hormoni steroizi (din glandele suprarenale , din gonade )
numrul este foarte mic, ribozomii aprnd liberi, n citoplasm
(Fig.5.32).
Diametrul ribozomilor este de 15-30nm, avnd aspectul unor
granule sferice, cu constana de sedimentare de 80S la eucariote i
de 70S (uniti Svedberg) la procariote.



Fig.5.32.Aspecte ale ribozomilor examinai cu microscopul optic
1-Ergastoplasm; 2-Corpusculi Nissl; 3-Grupri bazofile n celulele secretorii din
glanda mamar; 4-Corpi Berg n hepatocit.
Organizarea ultrastructural. La eucariote, un ribozom este
format din dou subuniti inegale, ca dimensiuni asimetrice: a) o
subunitate mare (cu diametrul de aproximativ 30nm), de form
sferoidal, cu constan de sedimentare de 60S. ; b) o subunitate
mic, alungit, cu o constant de sedimentare de 40S.(Fig.5.33).

Fig.5.33.Schema ribozomilor i a formelor lor de organizare
1-Subunitatea mic; 2-Subunitatea mare; 3-Ribozomi; 4-Dimer; 5-Poliribozomi.

Ribozomul de la procariote este asemntor cu ribozomul
mitocondrial de la eucariote, avnd o constant de sedimentare de
70S, cu o subunitate mic, de 30S i o subunitate mare, de 50S.
Cele dou subuniti ribozomale sunt separate atunci cnd nu
particip la sinteza de proteine sau cnd, n citoplasm,
concentraia ionilor de magneziu (Mg
2+
) scade sub 10
-3
sau n
128
prezena unor inhibitori ai sintezei de proteine ca puromicina sau
etionina. Atunci, cnd concentraia ionilor de magneziu crete peste
10
-3
se produce agregarea ribozomilor n grupuri denumite polimeri
(di, tri, tetra) care nu au o funcie special n celul. Odat cu
revenirea la normal a concentraiei ionilor de magneziu n
citoplasm se produce desfacerea polimerilor i individualizarea
ribozomilor.
n cursul proceselor de biosintez a proteinelor mai muli
ribozomi se dispun de-a lungul unei molecule de ARN mesager
(ARNm), formnd cu un poliribozom (polirybozoma), sau un
polizom. ARNm se amplaseaz n spaiul dintre cele dou subuniti
ale ribozomului i introduce mesajul genetic n secvena de
aminoacizi a proteinelor ce se sintetizeaz. Numrul de ribozomi ce
se grupeaz variaz n funcie de mrimea moleculei proteice ce
urmeaz a fi sintetizat, fiind necesari 100 ribozomi pentru o
molecul de colagen i de 5 ribozomi pentru o molecul de globin
din hemoglobin. Molecula de ARN mesager are forma unui
filament sinuos, gros de 2nm, ce nir ribozomii, precum mrgelele
pe a, trecnd prin fiecare ribozom, printre subunitatea mic i cea
mare. Dup ce proteina a fost sintetizat, lanul poliribozomal se
rupe, iar ribozomii se disperseaz n citoplasm.
Compoziia chimic a ribozomilor cuprinde ARN ribozomal
(ARNr) i proteine n pri aproximativ egale, cantiti mici de ap i
diferii ioni metalici (de magneziu i calciu).




Fig.5.34. Proteine de structur
(1) i ARN ribozomal (2)

Molecula de
ARN ribozomal
prezint segmente
bicatenare elicoidale,
dispuse la suprafaa
subunitilor
ribozomale, ce alterneaz cu segmente monocatenare nespiralate,
dispuse n interiorul subunitilor, unde sunt situate i proteinele
ribozomale. Prin coninutul lor n ARNr, ribozomi confer bazofilia
celulelor. (Fig.5.34).
n subunitatea mare de 60S sunt prezente 3 specii de ARNr
(de 5,8S, de 28S i de 5S), n timp ce, subunitatea mic conine
numai o singur specie de ARNr (de 18S). n moleculele de ARNr,
129
bazele apar asimetrice, fiind reprezentate de baze purinice (guanin
i adenin) mai abundente i de baze pirimidinice (uracil i citozin).
Proteinele ribozomale sunt legate mai strns sau mai lax de
ARNr i ndeplinesc un rol structural, unele intervenind n
asamblarea unitilor ribozomale, iar altele sunt implicate n
realizarea funciilor specifice ribozomilor. Proteinele ribozomale sunt
bogate n radicali specifici de tipul argininei i lizinei n subunitatea
mare existnd 45 proteine i n subunitatea mic 33 proteine
(Fig.5.35).


Fig.5.35. Diagrama componentelor ribozomului la eucariote.
1-Ribozom; 2-Subunitate ribozomal mic; 3-Subunitate ribozomal mare.
Biogeneza ribozomilor ncepe n nucleol, la nivelul
moleculelor de AND nucleolar din componenta cromozomal, unde
pe o poriune a cromozomului denumit organizator nuclear se
gsesc genele pentru producerea ARNr. Iniial se produce un
precursor al ARNr cu constant de 45S ce se localizeaz n
componenta fibrilar a nucleolului. O parte din ARNr 45S d natere
la ARNr 28S i ARNr 18S, care trece n componenta granular a
nucleolului, iar cealalt parte de ARN 41S se transform sub
aciunea exonucleazelor n ARNr 28S i ARNr 20S (din care rezult
rapid un ARNr 18S). ARNr 28S i ARNr 18S, mpreun cu o parte
din proteinele ribozomale venite n nucleu din citoplasm, migreaz
separat n citoplasm prin porii membranei nucleare. ARNr 58S se
sintetizeaz n afara nucleolului n nucleoplasm dup tiparul ADN-
ului, iar ARNr 5S i ARNr 5,8S migreaz n citoplasm ataai de
molecula de ARNr 28S. Odat trecute n citoplasm, cele dou
subuniti, nc imature se matureaz foarte repede, se asambleaz
130
i se asociaz cu proteine citoplasmatice specifice ribozomului,
structurnd n final ribozomii.
Funcia ribozomilor const n sinteza proteinelor. Ribozomii
ataai membranelor reticulului endoplasmic sintetizeaz proteinele
de export (enzime, hormoni, anticorpi, tropocolageni- ca n cazul
celulelor seroase din pancreas, limfocitelor, plasmocitelor i
fibroblastelor), n timp ce poliribozomii liberi neataai sintetizeaz
proteine de structur (ce se consum n diviziune i cretere, n
nlocuirea organitelor uzate), precum i unele proteine speciale
(proteine contractile, proteinele din mioglobin i hemoglobin).

5.5.2.RETICULUL ENDOPLASMIC

Reticulul endoplasmic (reticulum endoplasmaticum
s.cytoplasmaticum) este un organit intracelular implicat n activitile
de sintez i secreie celular, format dintr-un complex de
membrane intracelulare ce delimiteaz un sistem de canalicule
(tuburi, cisterne) care strbat ntreaga citoploasm a celulei
eucariote. Este prezent n toate tipurile de celule, cu excepia
eritrocitului adult. (Fig.5.36).



Fig.5.36. Reticulul endoplasmatic - aspect i organizare tridimensional.
1-Reticul endoplasmic rugos; 2-Reticul endoplasmic neted; 3-Organizare
tridimensional a REN; 4-Ergastoplasm n celula seroas din pancreas; 5-
Corpusculii Nissl n neuron.


131



A fost observat n secolul trecut la microscopul optic sub forma
unor granulaii bazofile n neuron (unde formeaz substana tigroid
sau corpusculii Nissl), n hepatocit (sub forma unor zone sferice,
corpii Berg) i n pancreas (unde formeaz o zon bazofil cu striaii
longitudinale numit ergastoplasm).
Reticulul endoplasmic este mai bine reprezentat n celulele
active n sinteze (de proteine, de glucide, de lipide) i foarte
dezvoltat n celulele secretorii exo- i endocrine. n interiorul celulei
este situat cu precdere n zona intern i mijlocie a citoplasmei, ce
formeaz endoplasma (endoplasma) i mai puin n zona extern.
Este separat de plasmalem printr-un strat subire de ectoplasm,
ce conine infrastructurile fibrilare ale citoscheletului. Contactul cu
plasmalema sau continuitatea membranei reticulului cu plasmalema
este extrem de rar i poate fi considerat accidental (sau artefacte
datorit preparrii).
Ultrastructura reticulului endoplasmic cuprinde saci
(sacculus), cisterne (cisterna) , tubi (tubulus) i vezicule
anastomozate ntre ele i delimitate de o endomembran groas de
6 nm, cu organizare molecular , comun tuturor membranelor
interne. Lumenul formaiunilor reticulului endoplasmic variaz ntre
25-500 nm, n raport de momentul funcional al celulei, iar coninutul
lor poate apare la M.E. clar sau ntunecat, mai des omogen i amorf
dect heterogen.
Unele poriuni ale reticulului endoplasmic prezint ribozomi
ataai de endomembrane i poart numele de reticul endoplasmic
rugos (RER) sau granulos (reticulum endoplasmaticum
granulosum), n timp ce alte poriuni sunt lipsite de ribozomi i
formeaz reticulul endoplasmic neted (REN) (reticulum
endoplasmaticum nongranulosum).
Membrana REN se continu cu membrana RER, dar n RER
predomin cisternele, pe cnd n REN sunt mai frecvente tuburile i
canalele interconectate n reea. Membrana RER se continu cu
foia extern a nveliului nuclear, iar lumenul RER comunic cu
spaiul perinuclear. REN se ntinde spre periferia celulei fr a
atinge plasmalema. Cele dou poriuni ale reticulului endoplasmic,
rugos i neted, prezint interconexiuni morfologice i funcionale.
Reticulul endoplasmic rugos prezint pe faa extern a
endomembranei sale ribozomi individualizai sau grupai n
poliribozomi. Ribozomii se leag de membranele reticulului prin
subunitatea mare, care este strbtut de un canal ce se deschide
132
n lumenul reticulului i prin care trec lanurile polipeptidice, ce se
formeaz n ribozomi. Legarea ribozomilor se face cu ajutorul unor
glicoproteine transmembranare denumite riboforine (I i II).
Ribozomii ataai confer o puternic bazofilie celulei respective.
R.E.R. prezint o mare plasticitate i o mare putere de
adoptare n raport cu vrsta sau starea funcional a celulei. n
situaii patologice ale celulei se observ mari variaii morfologice ale
organitului, precum: fragmentri, dilatri, acumulri de materiale n
cisterne i vezicule, proliferri ale formaiunilor reticulului.
R.E.R. este specializat n sinteza proteinelor.
Reticulul endoplasmic neted (R.E.N.) nu prezint ribozomi
pe membrana sa limitant. Este alctuit mai mult din formaiuni
tubulare cu diametrul de 30nm, ce comunic prin canale de legtur
cu R.E.R. Este prezent n citoplasma tuturor celulelor, dar mai puin
reprezentat cantitativ dect cel rugos.
REN apare mai dezvoltat n celulele care: - sintetizeaza
hormoni steroizi (glandele suprarenale, celulele interstitiale din ovar
si testicul); - produc glucide n cantitate mare (hepatocite, celule
musculare); - formeaza pigment (melanoblaste) si - elaboreaz acid
clorhidric (parietale din glandele fundice).
n celula musculara, REN se numeste reticul sarcoplasmic
prezentnd un aspect morfologic si functional particular si
ndeplinind un rol esential n cuplarea excitatiei cu contractia. n
celulele pigmentare ale retinei, REN apare si sub forma unor corpi
nucleoizi, biconvexi, PAS pozitivi cu rol n procesele de
fotoreceptie.
Compoziia chimica a reticulului endoplasmic a fost studiat
dupa centrifugarea diferentiata a omogenatului celular, cnd s-au
obtinut microzomii.
Microzomii nu sunt organite celulare, ci fractiuni subcelulare,
ce cuprind portiuni de reticul endoplasmic,membrane golgiene i
fragmente de membrane celulare. Se pot obtine i separa
microzomii rugosi si netezi, atunci cnd se desprind ribozomii de
RER. n microzomi se pastreaza orientarea membranei reticulului
endoplasmic din celula, prezentnd o fata externa, ce corespunde
fetei citoplasmatice a reticulului endoplasmic, iar continutul lor este
identic cu cel din lumenul reticulului endoplasmic.
In compozitia chimica a reticulului endoplasmic intra proteine
(60%) si lipide (40%). O parte din proteine sunt incluse n structurile
organitului (proteine structurale), iar alta parte sunt proteine de
export (hormoni, enzime). Dintre lipide, predomina fosfolipidele,
lecitinele si cefalinele, iar colesterolul este n cantitate mica (mai
133
ales n RER). Acizii grasi din fosfolipide sunt foarte nesaturati, ceea
ce confera o mare fluiditate membranei reticulului endoplasmic.
Enzima marker pentru reticulul endoplasmic este
glucozo-6-fosfataza, dar n membranele reticulului endoplasmic se
mai gasesc si alte enzime legate de transferul de electroni, precum
si enzime hidrolitice sau de dezaminare.
Originea reticulului endoplasmic este nca discutabila, el
parnd sa se formeze fie din membranele nucleare, fie de novo
prin sinteza macromoleculelor caracteristice n membrane si
asamblarea lor. Membranele reticulului endoplasmic se rennoiesc
cu viteze diferite de la un segment la altul (unele dupa 40-60 de ore,
iar altele dupa 16 zile).
Functiile comune ale reticulului endoplasmic sunt:
1) RE realizeaza un vast sistem microcirculator
intracitoplasmatic, prin care sunt vehiculate n permanent
substante n toata citoplasma sau n alte structuri cu care RE
comunica (precum complexul golgian sau spatiul perinuclear).
2) RE formeaza un suport intracitoplasmatic att pentru
celelalte organite, ct si pentru mentinerea formei celulei.
3) RE participa prin citomembranele sale, dotate cu
permeabilitate selectiva, la realizarea unor schimburi active ntre
continutul formatiunilor componente si citosol.



Fig.5.37 - Participarea RER la sinteza proteinelor


Functiile specifice difera la RER la REN.
Reticulul endoplasmic rugos (RER) are ca functie de baza
sinteza proteinelor de export, dar si sinteza proteinelor de

134
membrana destinate diferitelor membrane ale organitelor si
plasmalemei.
Astfel, RER apare foarte bine dezvoltat n: a) celulele seroase
ale pancreasului exocrin ce secreta enzime digestive; b) n
plasmocitele ce sintetizeaza imunoglobuline; c) n hepatocite care
produc albumine si alte proteine serice; d) n neuroni, unde
ndeplineste rolul unei fabrici de membrane, care produce si
ntretine o suprafata mare de membrane, datorita prelungirilor. n
general, RER este fabrica de membrane a celulei eucariote.
(Fig.5.37)

Reticulul endoplasmic neted ndeplineste mai multe functii
specifice n celule:
1) participa la sinteza hormonilor steroizi (n celulele
corticosuprarenalei, precum si n celulele glandei interstitiale din
ovar si testicul;
2) participa la metabolismul glucidelor, intervin att n
glicogeneza (n hepatocite), ct si n glicogenolliza (prin glucozo-6-
fosfataza pe care o contine);
3) intervine n metabolismul lipidelor, participnd la sinteza
unor lipoproteine (trigliceride sau complexe lipoproteice). Astfel, n
celulele intestinale, REN este foarte dezvoltat i sintetizeaza
trigliceride (din substante absorbite), ce pot fi evidentiate n REN
sub forma de chilimicroni (picaturi de grasime);
4) intervine n procesele de detoxifiere, prin metabolizarea
unor substante toxice endo- si extracelulare, datorita enzimelor
localizate n citomembranele sale (de exemplu, metabolizeaza
sarurile biliare, hormonii steroizi, colesterolul, hemoglobina, precum
si unele medicamente);
5) participa la realizarea contractiei musculare, conducnd,
prin sistemul tubilor transversi, excitatia de la suprafata plasmalemei
la miofilamentele contractile;
6) intervine n biosinteza acidului clorhidric n celulele parietale
ale glandelor fundice;
7) participa la fotoreceptie, n celulele pigmentare din retina.

5.5.3.COMPLEXUL GOLGI

Complexul Golgi (complexus golgiensis s. apparatus
reticulatus internus) este un organit celular comun, prezent n toate
tipurile de celule, cu exceptia hematiei adulte. A fost descoperit n
1898 de catre Camillo Golgi, n neuronii piriformi din cerebel. La
135
microscopul optic, n celula proaspata poate fi evidentiat prin
colorare cu rosu neutru, iar n celula fixata prin impregnare cu saruri
de metale grele (osmiu, argint etc.), aparnd sub forma unei retele,
formata din canalicule anastomozate, vacuole de diverse marimi
sau bastonase (dictiozomi). (Fig.5.38)



Fig.5.38 - Aparatul Golgi - aspecte la microscopul optic
1 - Retea perinucleara; 2 - Vezicule; 3 - Ramificat printre granule de secretie (a); 4 - Retea
terminata n crlig n celulele foliculului tiroidian; 5 - Coarda rasucita; 6 - Imagine Golgi
negativa.

Pozitia complexului Golgi n celula variaza dupa tipul si
activitatea celulei. Astfel, n neuroni este dispus perinuclear, pe
cnd n celulele secretorii exocrine (de exemplu n celulele acinilor
serosi din pancreas) ocupa o pozitie supranucleara, fiind situat ntre
nucleu si polul apical al celulei. n celulele cu dubla polaritate
functionala (exemplu celula tiroidiana si adamantoblastul),
complexul Golgi se deplaseaza frecvent ntre cei doi poli, n functie
de activitatea metabolica predominanta a unuia sau altuia.
n celule, complexul Golgi se poate gasi n mai multe
exemplare distincte.
Organizarea ultrastructurala a complexului Golgi cuprinde trei
elemente componente: a) pachete de saci turtiti sau cisterne
asezate n stiva; b) microvezicule si c) macrovezicule. Aceste
elemente componente sunt delimitate de endomembrane
(citomembrane), groase de 6-8 nm, netede, fara ribozomi atasati de
suprafetele lor.
136
Sacii sau cisternele golgiene sunt polarizate morfologic si
functional, prezentnd:
a) o fata cis sau proximala sau convexa sau imatura,
formatoare, n strnsa relatie cu RER. (Fig.5.39)



Fig.5.39 - Complexul Golgi - ultrastructura si relatii cu alte componente celulare

b) o fata trans sau distala, concava sau matura, ndreptata
catre membrana celulara, unde se formeaza veziculele de secretie.
Membrana sacilor si veziculelor este mai subtire (6 nm, ca la RE) pe
fata CIS si mai groasa (10 nm, ca la plasmalema), pe fata
TRANS, tranzitia de la un tip de membrana la altul fac^andu-se la
nivelul cisternelor.
Structurile complexului Golgi se gsesc n micare continu,
n sensul migrarii lor de la fata imatura spre fata de maturare a
organitului, nct microveziculele vor forma sacii Golgieni, iar din
acestia vor lua nastere macroveziculele si apoi veziculele secretorii.
Microveziculele (sau veziculele de transfer) (vesicula) sunt
cavitati sferoidale (de 20-80 nm), delimitate de o membrana de 6
nm, sunt dispuse de obicei pe fata imatura CIS sau se gsesc
ntre RER si sacii Golgieni. Se formeaza prin gtuirea capetelor
dilatate ale RER, de care se desprind pierzndu-si ribozomii de pe
fata externa. Unele dintre microvezicule prezinta o membrana mai
groasa dect a primilor saci golgieni si sunt pozitive la reactia pentru
137
fosfataza acida, nct sunt interpretate a fi lizozomi primari formati n
complexul GERL (Golgi - endoplasmic reticulum - lysosome). Restul
microveziculelor fuzioneaza, formnd astfel noi saci golgieni.
(Fig.5.40)
Cisternele (sacii) golgieni (sacculus lamelliformis) formeaza
componenta major a complexului Golgi, avnd un aspect de saci
turtii, usor curbati si dispusi paralel unii fata de altii si separati ntre
ei prin spatii regulate de 20-30 nm. Fiecare sac (cisterna) se
aseamana cu o farfurie, avnd regiunea centrala mai subtire (1-7
nm) si periferia mai groasa. Numarul sacilor este variat (ntre 3-12)
putnd sa ajunga n unele celule secretorii pna la 20. Extremitatile
laterale ale sacilor pot prezenta pori sau prelungiri care sa
anastomozeze sacii ntre ei sau sa-i lege de RE.


Fig.5.40. Formarea veziculelor de transfer

Macroveziculele sunt cavitati sferoidale sau ovoidale, cu
diametrul ntre 200-600 nm, delimitate de o citomembrana groasa
(8 nm), cu un continut amorf sau granular-heterogen, cu material
mai condensat si inegal la fluxul de electroni. Ele sunt situate de
obicei pe fata de maturare - TRANS - a complexului Golgi si sunt
interpretate ca fiind vacuole de secretie sau corpi de condensare a
produsului secretat de celula.
Macroveziculele se formeaza din dilatatiile laterale ale sacilor
golgieni, de care se desprind si se individualizeaza.
Numarul veziculelor de secretie difera de la un tip de celula la
altul, fiind mai numeroase n faza de maxima activitate a celulelor
secretorii exocrine si endocrine.
Compozitia chimica a complexului Golgi contine 60% proteine
de structura si protein-enzime si 40% fosfolipide si colesterol.
138
Enzimele marker pentru complexul Golgi sunt: a)
tiaminpirofosfataza (TPP), localizata mai ales n interiorul sacilor
golgieni de pe fata trans; b) nucleoziddifosfataza (NDP) prezenta n
interiorul sacilor golgieni intermediari si c) unele glicoziltransferaze.
Totodata complexul Golgi este bogat n sulfatotransferaza, care
intervine activ n sulfatarea polizaharidelor. De asemenea mai
contine: citocrom-reductaza (ca si RE) 5-nucleotidaza (ca si
membrana plasmatica), adenilat ciclaza, fosfataza acida (n
veziculele sistemului GERL), ubiquinona, vitamina A si vitamina K.
Originea complexului Golgi. Structurile complexului Golgi se
formeaza din membranele preexistente ale sacilor golgieni. Nucleul
controleaza sinteza proteinelor specifice din endomembrane si deci
indirect influenteaza formarea complexului Golgi.
Functiile complexului Golgi sunt multiple, fiind reprezentate de:
1) Functii legate de procesul de secreie intracelular, aparatul
Golgi fiind implicat n: a) concentrarea produsilor sintetizati n RE; b)
prelucrarea produsilor sintetizati n RE prin procese biochimice; c)
sinteza de noi componente; d) stocarea si segregarea produsilor de
secretie; e) ambalarea produsilor sub forma de vezicule; f) livrarea
produsilor spre plasmalema. Produsul de secretie elaborat n RE
ajunge la formatiunile golgiene prin microvezicule ce se detaseaza
din capetele reticulului endoplasmic rugos, functionnd ca o naveta
(suveica) cu frecvente deplasari dus-ntors ntre RE si sacii golgieni.
(Fig.5.41).


Fig.5.41 - Functiile complexului Golgi
139




2) Fabricarea de endomembrane pentru veziculele secretorii si
din acestea mai departe pentru plasmalema. n acest mod,
membrana veziculelor de secretie se ncorporeaza n plasmalema,
compensnd astfel pierderile de plasmalema prin endocitoza.
Complexul Golgi participa la reciclarea (reutilizarea) membranelor
veziculelor secretoare, ale veziculelor sinaptice si ale veziculelor de
endocitoza. Prin acest proces, unele componente ale plasmalemei
ca receptori, enzime sau unele molecule informationale din mediul
extracelular (hormoni peptidici, cotecolamine) sunt introduse n
celula pe calea complexului Golgi, unde sunt modificate (glicozilate,
sulfatate, fosforilate) sau reparate. n acest mod, complexul Golgi
ndeplineste rolul de a fi principala statie de rennoire a
endomembranelor si a plasmalemei.
Actiunea unor virusuri sau transformarea maligna a celulelor
poate altera fluxul membranelor, att n ceea ce priveste conexiunile
dintre formatiunile delimitate de endomembrane, ct si n ceea ce
priveste manifestarile functionale ale acestora.
3) Sinteza complexelor hidratilor de carbon. Complexul Golgi
participa la sinteza glicoproteinelor prin faptul ca n structurile
golgiene componenta primita de la RER se uneste cu moleculele de
hidrati de carbon, cu ajutorul unor enzime aflate n organit
(transferaze, glucozaminidaze). n complexul Golgi se desavrseste
procesul de glicozilare a glicoproteinelor. Glicoproteinele sintetizate
pot ramne intracelular ca enzime lizozomale sau pot forma
continutul veziculelor secretorii, care prin exocitoza ajung
extracelular.
4) Formarea proteoglicanilor sulfatati (condroitin sulfatatilor) si
a glicoproteinelor sulfatate (mucina) se realizeaza prin procesul
enzimatic de sulfatare a glicoproteinelor cu ajutorul sulfotransferazei
golgiene.
5) Maturarea lipoproteinelor si a albuminelor. Lipidele
sintetizate la nivelul reticulului endoplasmic neted sunt transportate
la complexul Golgian, unde are loc procesul de maturare si
complexare cu proteinele.
6) Formarea lizozomilor primari are loc pe fata cis - imatura -
sub forma unor microvezicule pozitive pentru fosfataza acida.
Enzimele lizozomale sintetizate n RER sunt transportate si
mpachetate fie n sistemul GERL, fie n vezicule de condensare.
140
7) Formarea acrozomului. n spermiogeneza, complexul Golgi
ocupa o pozitie supranucleara, si modifica forma si realizeaza
acrozomul, care elibereaza enzime litice la contactul cu ovulul.

5.5.4.Ciclul secretor

Ciclul secretor sau procesul secretor reprezinta o succesiune
de etape pe care le parcurg proteinele de export din momentul
sintezei si pna la eliberarea lor n mediul extracelular. Se descriu
cinci etape obligatorii:


Fig.5.42. Desfasurarea ciclului secretor

1. Sinteza si segregarea proteinelor de export la nivelul RER.
Initial proteinele sunt sintetizate pe polizomii neatasati membranelor
RE, formati din ribozomi dispusi de-a lungul unei molecule de
ARNm la distante de 100 nucleotide. ntr-un polizom, fiecare
ribozom sintetizeaza independent cte un lant polipeptidic, care este
adapostit n tunelul subunitatii ribozomale mari. Atunci cnd lantul
polipeptidic a atind un anumit stadiu de formare, ribozomii se
ataseaza de membrana reticulului endoplasmic ntr-o anumita
pozitie care recunoaste o secventa specifica fiecarei proteine,
denumita secventa semnal, situata pe capatul terminal amino al
peptidei care ia nastere. Acest semnal este interceptat de proteine
specifice din membrana reticulului (denumite riboforine). n
momentul atasarii polizomilor se formeaza un orificiu n membranele
RER, n continuarea celui din subunitatea ribozomala mare. Prin
141
acest tunel trec n spatiul endoplasmic lanturile polipeptidice nou-
formate. (Fig.5.42)

2. Transportul intracelular al proteinelor prin formatiunile
reticulului endoplasmic rugos la complexul Golgi se realizeaza cu
ajutorul microveziculelor, care sunt ncarcate cu proteine sintetizate
de polizomi si se ndreapta spre sacii golgieni.

3. Condensarea si maturarea proteinelor n structurile
golgiene. Procesul de maturare sau condensare (cu durata de circa
1 ora) desavrseste conformatia cuaternara a proteinelor,
realizndu-se prin interactiunea proteinelor cu un peptidoglican
sulfatat sintetizat n complexul Golgi. Din aceasta interactiune se
formeaza agregate osmotic inactive nsotite de eliberarea unor
molecule de apa din proteinele nou formate (deci de o concentrare a
lor).

4. Depozitarea intracelulara se face sub forma veziculelor
secretorii, care ramn un timp n citoplasma, dupa care sunt trecute
n ectoplasma si mai departe n mediul extracelular, sub actiunea
unor hormoni sau neurotransmitatori.

5. Exocitoza este procesul prin care veziculele secretorii sunt
trecute n mediul extracelular. Este influentat de concentratia
intracelulara a ionilor de calciu, de prezenta moleculelor de ATP si
AMP-ciclic care provoaca contractia microfilamentelor care
determina deschiderea veziculelor si eliminarea continutului n
spatiul extracelular.

Prin exocitoza sunt eliberati din celula: hormonii, enzime,
imunoglobuline, lipoproteine, neurotransmitatori, constituenti ai
serului si laptelui, componente ale membranei celulare, glicocalixului
sau alti produsi sintetizati n reticulul endoplasmic si condensati n
complexul Golgi. Prin acelasi mecanism al exocitozei sunt eliminati
si unii produsi terminali, metabolic inerti, nefolositori sau daunatori
pentru celula.
142
5.6. Organitele digestiei intracelulare
Digestia intracelular cuprinde totalitatea fenomenelor care produc
degradarea biochimic a moleculelor ptrunse n citoplasm prin
endocitoz, a unor organite uzate, a unor fragmente de celul sau
structuri celulare.
La procesul de digestie intracelular particip dou tipuri de
organite: lizozomii i peroxizomii.

5.61. Lizozomii

Lizozomii (lysosoma) sunt organite celulare de form sferic sau
ovoidal (de 0,2 - 1 nm diametru), prezeni n citoplasma tuturor celulelor
animale, cu excepia hematiilor adulte.
Lizozomii au fost descoperii n 1950, de ctre DE DUVE prin
tehnici de fracionare celular, ca particule ce sedimenteaz ntre
mitocondrii i microzomi i conin enzime hidrolitice cu pH optim de
aciune acid. Organizarea lor ultrastructural a fost descris de ctre
NOVIKOFF n 1956. Au mai fost denumii corpi litici, saci de sinucidere
sau stomacul celulei.
Organizarea ultrastructural a lizozomilor cuprinde o membran
lizozomal i matricea lizozomal (Fig 5.43).


Fig. 5.43. Schema imaginii electronooptice a
lizozomilor
1- Membran lizozomal;
2- Matrice lizozomal.

Membrana lizozomal delimiteaz
lizozomii, prezentnd o structur comun
endomembranelor, lipoproteic,
mozaicat, cu o grosime medie de 6-8
nm. Membrana lizozomal poate fi dubl
sau unic, prevzut la exterior cu mici prelungiri numite spiculi. Ea
acioneaz ca o barier ntre enzimele digestive i citosol, mpiedicnd
ptrunderea acestor hidrolaze n matricea citoplasmatic. Hormonii
glucocorticoizi (cortizon, cortizol) i colchicina activeaz ca stabilizatori ai
membranei lizozomale, n timp ce vitaminele A, E, radiaiile X i
ultraviolete, endotoxinele, hormonii steroizi sexuali (testosteron,
progesteron), dezoxicorticosteronul, ocul osmotic, hipoxia, anoxia etc.
acioneaz ca destabilizatori ai membranei.
Matricea lizozomal prezint aspecte diferite la microscopul
electronic, putnd aprea omogen, fin granular sau heterogen nct se
recunosc dou tipuri majore de lizozomi: primari i secundari.
143
Lizozomii primari sunt de talie mic i au matricea omogen sau fin
granular fiind dotat cu un set incomplet de hidrolaze acide. Sunt
lizozomi tineri, cu o via scurt (de 24-48 ore), neangajai nc n
activitile de digestie intracelular. Coninutul enzimatic variaz n raport
cu specia, starea funcional i tipul celulei. Astfel, lizozomii primari ai
polimorfonuclearelor neutrofile (microfage mobile) conin o mare
cantitate de neuroaminidaz, care distruge membrana bacteriilor; -
lizozomii macrofagelor conin multe fosfataze acide.
Lizozomii secundari sunt heterogeni, coninnd n matrice structuri
granulare i membranoase i desfurnd activiti enzimatice digestive.
Au o via mai lung (de la cteva zile la cteva sptmni), talia mai
mare i un set enzimatic complet. Se formeaz din fuziunea lizozomilor
primari, cu veziculele de endocitoz ce conin substane fagocitate,
endocitate sau degradate din celule. n funcie de modul n care s-au
format, exist mai multe tipuri de fagozomi secundari: heterofagolizozomi
(heterophagosoma s. phagolysosoma), autofagolizozomi
(autophagosoma), crinofagolizozomi, corpusculi reziduali (corpusculum
residuale) i corpi multiveziculari (corpus multivesiculare).
Organizarea chimic a lizozomilor cuprinde un numr mare de
hidrolaze acide (peste 50 enzime), care pot degrada orice component a
celulei: acizi nucleici (prin ribonucleaz acid), proteinele (prin
colagenaz, catepsin), glicogenul (prin alfa-glicozidaz),
mucopolizaharidele (prin alfa-monozidaz).
Enzimele lizozomale sunt active numai la pH acid (4-6).

Fig. 5.44. Coninutul enzimatic lizozomal i aciunile sale

Enzimele marker pentru identificarea lizozomilor pe seciuni de
esuturi sunt fosfataza acid i arilsulfataza, iar n timpul fracionrii
celulare: fosfataza acid, catepsina C, N-acetil-beta-glucozaminidaza.
Niciodat un lizozom nu conine ntreg setul de enzime hidrolitice, nct
heterogenitatea lizozomilor este dat att de numrul, ct i de
concentraia unor enzime din matrice i membrana lizozomal. Cea mai
mare parte a enzimelor e localizat n matricea lizozomal, existnd ns
enzime localizate numai pe membrana lizozomal, ct i enzime cu dubl
localizare n matrice i n membran. (Fig. 5.44)
144

n afar de hidrolaze acide, lizozomii mai conin conponente de
origine extra sau intracelular, supuse digestiei i aflate n diferite stadii
de degradare. Datorit acestui aspect pentru identificarea lizozomilor
trebuie avute n vedere enzimele marker, att la examinarea la
microscopul electronic, ct i la examinarea prin fracionare celular.
Lizozomii pot fi comparai cu nite saci de sinucidere ce conin
enzime (hidrolaze acide) care sunt eliberate n mediul intracelular, fie
prin modificarea membranei lizozomale de ctre diferii ageni toxici,
chimici sau fizici (ca de exemplu: temperaturi foarte joase, raze
ultraviolete, vitamina K), fie de ctre detergeni care rup membrana.
Odat eliberate n citoplasm enzimele produc liza celulei. Eliberarea
poate avea loc i n mod normal n timpul unor fenomene de involuie
fiziologic (ca n evoluia uterin post partum, n glanda mamar n
perioada de post-lactaie).







Fig.5.43. Lizozomi primari i formarea lizozomilor secundari
1- Lzozom primar: a-membran, b- halou, c-matrice; 2- Corp multivezicular;
3- Fagozom; 4- Heterolizozom (heterofagolizozom); 5- Hetero lizozom cu material
digerat; 6- Corp rezidual; 7- Mitocondrie; 8- Autofagozom; 9- Membrana nuclear.

Ph-ul optim (acid) pentru activitatea enzimelor lizozomale este
asigurat de membrana lizozomilor care conine o protein ce grupeaz
ionii de hidrogen n lumenul lizozomilor folosind energia rezultat din
hidroliza ATP. Alturi de enzimele hidrolitice acide, n lizozomi se mai
145
gsesc n cantiti reduse lipide i proteine de structur, iar n proporii
foarte reduse glicolipide, flavine, acid hialuronic.
n funcie de natura (substratul) materialului asupra cruia
acioneaz lizozomii exist trei tipuri de digestie lizozomal: a)
heterofagia, cnd lizozomii acioneaz asupra materialelor exogene
nglobate prin endocitoz; b) autofagia, cnd lizozomii acioneaz asupra
propriilor constitueni citoplasmatici (exemplu: organite degenerate),
segregai n focare de citoliz; c) crinofagia, cnd lizozomii diger unele
materiale de secreie celular. (Fig. 5.45).
n heterofagie se diger intracelular, cu ajutorul lizozomilor
substanele nutritive, bacteriile, virusurile introduse prin endocitoz
(fagocitoz, pinocitoz). n urma proceselor de endocitoz se formeaz:
fagozomi (phagosoma) (sau heterofagozomi), n cazul fagocitozei,
pinozomi n procesul de pinocitoz fr receptori i receptozomi n
pinocitoza mediat de receptori. (Fig.5.46)



Fig. 5.46. Schem privind participarea lizozomilor la procesul de digestie intracelular

146
Fagozomii, pinozomii i receptozomii sunt antrenai prin micrile
din citoplasm, ctre interiorul celulei. Spre ei se ndreapt chimiotactil
lizozomii primari i prin fuzionare, rezult o singur vacuol, denumit
lizozom-secundar sau heterolizozom sau heterolizom.
n interiorul lizozomilor secundari, enzimele hidrolitice lizozomale
produc digestia n funcie de complexitatea materialului endocitat. Ca
urmare a aciunii enzimelor lizozomale se obin produi de digestie
micromoleculari (aminoacizi, nucleotide, hidrai de carbon, lipide) ce vor
traversa membrana lizozomal, ajungnd n citoplasm, unde sunt
folosite ca materie prim pentru procesele biosintetice sau ca surs de
energie. Pe msur ce produii de digestie prsesc lizozomul
secundar, acesta i micoreaz volumul, producndu-se simultan o
invaginare a membranei lizozomale cu formarea unor vezicule (ca la
pinocitoz), care vor fi i ele digerate. Prezena acestor vezicule mici n
interiorul unui lizozom secundari d aspectul de corp multivezicular
(corpus multiveziculare), observabill electro-microscopic.

AUTOFAGIA este procesul de digestie intracelular, cu ajutorul
enzimelor lizozomale, a organitelor celulare epuizate sau uzate. n acest
mod, mitocondriile uzate, peroxizomii, poriuni uzate de reticul
endoplasmic sunt iniial nconjurate cu o membran, denumit nveli de
izolare provenit din reticulul endoplasmic sau din aparatul Golgi. Se
formeaz astfel vezicule (autofagozomi) sau vacuole autofagice, ce
conin materialul intracelular ce trebuie ndeprtat. Autofagozomii
fuzioneaz cu lizozomii primari, rezultnd lizozomi secundari n care se
produce digestia materialelor incluse. O parte din produsele rezultate din
digestie sunt eliberate n citoplasm pentru a fi reutilizate, iar ceea ce
rmne formeaz corpii reziduali. Prin autofagie, lizozomii asigur
rennoirea (turn-over-ul) componentelor citoplasmei, deoarece
mitocondriile au o via de circa 12 zile, peroxizomii de 2-3 zile, iar
ribozomii de 10 zile. n ficat se distrug mai mult de un miliard de
mitocondrii pe un gram de esut ntr-o or.
Procesele de autofagie sunt accelerate: a) n inaniie cnd se
remarc o cretere a numrului de vacuole autofagice (de exemplu n
ficat) sau b) n inactivitate ( n muchi). De asemenea, se intensific
funcia de autofagie n timpul morfogenezei ori de cte ori are loc
involuia unor esuturi.
n unele situaii, enzimele lizozomale sunt deversate n afara
celulei, producnd efecte litice, prin acest mecanism osteoclastele
digernd esutul osos.

CRINOFAGIA reprezint un aspect particular de autofagie
observat n celulele secretorii exocrine i endocrine, prin care lizozomii
147
intervin n reglarea cantitii de produi de secreie ai celulei. n cazul n
care n celul se acumuleaz un surplus de vezicule secretorii, care nu

ajung s fie exocitate, acest surplus va fi digerat cu ajutorul lizozomilor
primari care vor fuziona cu veziculele secretorii, formnd
crinofagolizozomii. Moleculele mici rezultate n urma digestiei sunt
trecute n citosol unde sunt reutilizate (Fig. 5.47).



Fig.5.47. Participarea lizozomilor la
crinofagie
1-Hormon sintetizat pe ribozom; 2-
Segregare i transport prin R.E.; 3-Vezicule Golgi
cu hormon; 5- Vezicule de secreie; 6- Fuzionarea
veziculei cu lizozomul.


Digestia n heterolizozomi i n
autolizozomi este incomplet, unele
materiale nefiind digerabile.
Lizozomii care, dei i-au terminat
funcia digestiv, conin nc resturi
nedigerabile se numesc lizozomi
teriari, telolizomi sau corpi reziduali
i vor fi eliminai n cea mai mare
parte prin procesul de exocitoz. n
cazul celulelor care nu se divid (neuronii, celulele musculare) corpii
reziduali se pot ntlni n celulele n vrst, formnd granule de
lipofuscin. n corpii reziduali se mai pot ntlni: figuri mielinice, ce
reprezint produi de degradare a fosfolipidelor, pigmeni hemoglobinici
sub forma granulelor de hemosiderin, substane injectate.
Biogeneza lizozomilor ncepe n reticulul endoplasmic rugos, unde
sunt sintetizate proteinele componente (structurale i enzimatice) ale
lizozomilor. Microveziculele formate n RER i care transport hidrolazele
acide pot fi mpachetate n sistemul GERL (scurtcircuitnd structurile
golgiene) sau n veziculele de condensare. (Fig. 5.48)

Fig.5.48. Formarea lizozomilor
1- Complexul Golgi; 2-Reticul endoplasmic
neted; 3-Reticul endoplasmic granular; 4- Vezicul
autofagic; 6- Vezicul de fagocitoz; 7- Corp dens; 8- Corp
multivezicular; 9- Endocitoz; 10-Exocitoz

Implicarea lizozomilor n patologie
Lizozomii pot fi implicai ntr-o serie de
procese patologice determinate de diverse
substane (medicamente, toxine
148
microbiene), introduse n celul prin endocitoz, sau de unele boli
congenitale. Sunt descrise n aceste condiii modificri ale structurii i
funciei lizozomilor precum: a) alterri morfologice i funcionale (creteri
n volum, intensificarea sau reducerea funciei datorit acumulrii n
exces a substanelor toxice endocitate); b) alterri ale activitii, prin
activarea sau inhibarea mai multor hidrolaze acide; c) alterri ale
stabilitii membranei, cu eliberarea enzimelor lizozomale n citoplasm
sau extracelular, provocnd distrugerea matricei esuturilor.
Astfel, vitamina K i expunerea prelungit la soare produc ruperea
membranelor lizozomale cu distrugerea celulelor epidermice. Unele
bacterii vii (bacilul turbeculozei, al leprei) sau toxoplasma (un protozoor
parazit) inhib fuziunea lizozomilor primari cu veziculele de endocitoz,
permind acestor microorganisme s distrug celulele care le-au
fagocitat. Uneori fuziunea lizozomilor primari cu veziculele endocitate are
loc prematur, nainte ca membrana plasmatic s fi nchis complet
vezicula, nct coninutul enzimatic lizozomal este eliminat n spaiul
extracelular, producnd inflamaii (exemplu: n reumatism, n artrita
gutoas), afeciuni n care se folosete colchicina, care inhib fuziunea
lizozomilor cu veziculele de endocitoz, mpiedicnd trecerea enzimelor
lizozomale n mediul extracelular. n mucolipidoza II (sau boala cu
celule I), enzimele lizozomale sunt lipsite de semnalul de recunoatere
(manoz-6-P) i din acest motiv sunt eliminate i nu mai pot fi recaptate,
nefiind recunoscute.
Lipsa unei enzime din setul de hidrolaze acide se datoreaz unui
defect genetic i determin apariia bolilor de depozit, denumite i
tezaurimoze lizozomice, care se manifest prin acumularea, n lizozomii
deficieni, a substanelor ce nu pot fi digerate din lipsa unei enzimei sau
mai multor enzime. Astfel se acumuleaz lipide sau poliozide nedigerate,
care, n final, ocup celula i compromit funcia ei, afectnd organe
precum creierul, ficatul, splina.
n ultimii ani se folosete terapia lizozomotropic, care const n
administrarea unor medicamente legate de un vehicul transportor.
Lizozomii desfac legtura dintre medicament i vehiculul transportor,
medicamentul trecnd n citoplasma celulei bolnave, n timp ce
transportorul este digerat.
n orice necroz celular se distrug i lizozomii nct trec n snge
unele enzime, care permit precizarea diagnosticului (exemplu n necroz
hepatic sau miocardic).
5.6.2. Peroxizomii
Peroxizomii (peroxysoma) sunt organite celulare comune i
permanente, care se caracterizeaz printr-un bogat coninut n
peroxidaze, enzime care catalizeaz reacia de formare (oxidaza) i de
149
descompunere (catalaza) a peroxidului de hidrogen (sau a apei
oxigenate H
2
O
2
).
Au fost observai la microscopul electronic n 1954, n rinichi de
ctre RHODIN i denumii microbodies. Mai trziu, DE DUVE i
colaboratorii, n urma unor cercetri de fracionare a hepatocitului, le-au
considerat ca organite distincte, ce au ca enzime marker: uratoxidaza,
catalaza i D-aminoacidoxidaza. n celulele din cotiledoanele plantelor
au fost descrii sub denumirea de glioxizomi, deoarece conin glioxilat i
particip la transformarea lipidelor n carbohidrai. Denumirea de
glioxizomi este acceptat i n cazul celulelor animale, pentru acei
peroxizomi care, pe lng alte enzime peroxizomale, mai conin cel
puin dou enzime ale ciclului glioxilat (malat-sintetaza sau izocitrat-
liaza).
Forma, dimensiuni i numr. Peroxizomii au o form sferic sau
oval, uneori neregulat cu prelungiri. Au dimensiuni de 0,5 - 1 nm,
variabile de la o celul la alta. n funcie de talia lor se deosebesc dou
categorii de peroxizomi: macroperoxizomi, cu diametrul de o,5 - 1,5 nm
i microperoxizomi, cu diametrul de 0,1 - 0,4 nm.
Numrul peroxizomilor apare diferit de la un tip de celul la altul,
iar n aceeai celul, n funcie de momentul ei de activitate. n unele
celule (exemplu celula hepatic), numrul peroxizomilor depete cu
mult pe cel al lizozomilor.

Fig.5. 49. Organizarea ultrastructural a
peroxizomului
1- Reticul endoplasmatic rugos;
2- Reticul endoplasmatic neted;
2- Mitocondrie;
4- Peroxizom: a- membran, b-
matrice, c- cristaloid
Organizarea ultrastructural a
peroxizomilor cuprinde: o
endomembran, de 6,5 - 8 nm
grosime i o matrice fin granular,
mai dens la fluxul de electroni
dect matricea lizozomal. La unii
peroxizomi, n matrice se observ o
zon central dens, numit miez
sau cristaloid, care la un grosisment puternic apare format dintr-un
mnunchi de tubuli paraleli i deni la fluxul de electroni, care pe
seciune transversal dau imaginea unui fagure de miere. La unii
peroxizomi se mai observ n matrice prezena unei plci marginale, cu
aspect de regiune dens, ngroat la periferie, cu funcie nc
neelucidat. Cristaloidul nu apare dect la unele specii i conine
uratoxidaza. (Fig. 5. 49)
.
150

Endomembrana peroxizomal, dei prezint o compoziie
asemntoare cu a membranei reticulului endoplasmic, difer de
aceasta prin unele polipeptide i enzime din structura sa. S-a putut
observa, n unele cazuri att o continuitate ntre membrana
microperoxizomilor i a reticulului endoplasmic neted, dar i o
continuitate a membranei de la un peroxizom la altul, formnd un reticul
peroxizomal, diferit de reticulul endoplasmic.
Biogeneza peroxizomilor se poate realiza direct din reticulul
endoplasmic prin dilatarea i desprinderea unor pri terminale ale
cisternelor, care sunt pozitive pentru catalaz. Mai frecvent, peroxizomii
se formeaz prin reticulul endoplasmic - complexul Golgi, unele enzime
peroxizomale sintetizndu-se n reticulul endoplasmic rugos, iar altele
(catalaza, uricaza) n ribozomii liberi, dup care sunt dirijate spre
peroxizomi direct prin citosol.
n compoziia chimic a peroxizomilor sunt prezente proteine,
lipide i enzime speciale, precum: catalaza (33% din proteinele
peroxizomale, enzim marker), uratoxidaza (uricaza), enzimele ciclului
glioxilat, D-aminoacidoxidaza. Aceste enzime difer ca numr i
specificitate de la un peroxizom la altul. Astfel, peroxizomii renali nu
conin sistemul enzimatic al beta-oxidrii.
Funciile peroxizomilor sunt :
1. Intervin n metabolismul peroxidului de hidrogen, ntr-o prim
etap n producerea acestuia, cu ajutorul oxidazelor, care folosesc
oxigenul molecular pentru oxidarea unor substraturi variate, producnd
peroxidul de hidrogen ( H
2
O
2
), un produs toxic pentru celule. n etapa
urmtoare, peroxidul de hidrogen este descompus, cu ajutorul catalazei,
n oxigen i ap.
2. Intervin n metabolismul acizilor nucleici deoarece prin
uratoxidaz, particip la degradarea purinelor (adenina i guanina).
3. Particip la reglarea metabolismului glucozei, prin enzima
denumit alfa-hidroxiacidoxidaza, care catalizeaz oxidarea lactatului la
piruvat. Prin alfa-hidroxiacid-oxidaza i D-amino-acidoxidaza (sau
aminotransferaza), peroxizomii particip i la procesul de
gluconeogenez (prin care se sintetizeaz glucoz pe seama unor
precursori neglucidici). Cu ajutorul acestor enzime se realizeaz
transferul ireversibil al gruprilor amino de la unii aminoacizi (leucina,
fenilalanina) formndu-se n acest fel alfa-cetoacizii care reprezint
substratul pentru gluconeogenez.
4. Particip la beta-oxidarea acizilor grai, mprind aceast
funcie cu mitocondria, fiind ns mai puin activi, nct numai 1/4 - 1/5
din totalul oxidrii acizilor grai are loc n peroxizomi. Caracteristic apare
faptul c peroxizomii oxideaz acizii grai, cu lan lung de atomi de
151
carbon pn cnd lanul s-a scurtat la 6 atomi de carbon, dup care
oxidarea este realizat de mitocondrii.
5. Produc acetil coenzima A i reduc NAD
+
la NADH, ambele
substane fiind utilizate de mitocondrie pentru producerea de ATP.
6. Particip la detoxificarea unor molecule deoarece membrana
peroxizomilor este foarte permeabil pentru ioni i moleculele cu
greutate molecular mic. Astfel, jumtate din etanolul consumat este
oxidat n acetaldehid.
7. Sintetizeaz plasmalogenii (substane asemntoare cu
fosfolipidele), care intr n proporie de 10% n componena unor
membrane.
8. Produc cldur, intervenind n termogenez. Astfel numrul lor e
crescut n esutul adipos brun.
Implicaii medicale. Peroxizomii sunt afectai n unele boli
congenitale, fie prin absena catalazei ( acatalasemie), fie prin reducere
numeric i alterarea coninutului enzimatic, n sindromul cerebro-
hepato-renal (Zellwegar). Este descris o reducere a funciei de oxidare
a acizilor grai cu lan lung de atomi de carbon n adreno-leuco-distrofii,
boli genetice letale caracterizate prin distrugerea progresiv a substanei
albe din creier i a corticosuprarenalei.
S-a observat o relaie ntre peroxizomi i cancer, peroxizomii
lipsind total n tumorile cu proliferare rapid.
Peroxizomii cresc numeric i n dimensiuni n unele infecii virale
(exemplu, n hepatit) sau dup administrarea de medicamente ce scad
lipemia. Hipertiroidia determin o proliferare hepatic a peroxizomilor i
n consecin o cretere remarcabil a activitii catalazei i a beta-
oxidrii acizilor grai cu lan lung de atomi de carbon.

5.7.Incluziunile celulare

Incluziunile (sau pseudoincluziile) celulare, sau citoplasmice
(inclusiones cytoplasmicae) sunt formaiuni prezente n matricea
citoplasmatic n care pot fi depozitai temporar sau definitiv diferii
produi ai metabolismului. Aceste depuneri, denumite incluziuni pot
conine: a) substane de rezerv (proteine, glucide, lipide, vitamine,
minerale, cristale i cristaloizi); b) produi de elaborare (granule de
zimogen, granule de mucus, de pigment, hormoni); c) produi de
dezasimilaie (pigmentul lipofuscinic).
Proteinele se depoziteaz ca substane de rezerv n fibrele
musculare, hepatocite i n vitelusul oului, putndu-se prezenta ca
granule fine sau mase omogene. Se pot evidenia prin reacia MILLON
(cnd apar roii), prin reacia xantoproteic ( cnd apar galbene) i prin
impregnri argentice (cnd apar brune). (Fig.5.50)

152
Lipidele se prezint sub forma unor picturi sferice de diferite
mrimi. Ele se evideniaz n seciuni, obinute la criostat, unde se pot
colora n galben (cu Sudan III), n rou (cu SARLACH), n negru (cu
Sudan negru). Lipidele sunt frecvente n: hepatocite (n cantiti diferite
n funcie de diverse stri fiziologice i patologice); - n celulele
productoare de hormoni steroizi din corticosuprarenal, ovar, corp
galben, testicul, unde formeaz substratul n steroidogenez. n lipocitele
din esutul adipos alb, lipidele formeaz o bul mare, ce ocup aproape
n ntregime celula, pe cnd, n esutul adipos brun apar forme de
picturi mici, dispersate n citoplasm.



Fig.5.50. Incluziuni celulare
1- Granule; 2-Bocuri; 3- Depozite perinucleare; 4Granule de cherato-hialin i eleidin (n
celulele epiteliale); 5- Mucopoliozide neutre (n glandele uterine); 6- Mucopoliozide acide n celulele
cervixului); 7- Adipocit alb; 8-9 Vezicule cu lipide (n celula luteinic); 10-Cristale Reinke ( n celula
Leydig, din testicul); 11- Granule de zimogen (n celulele seroase); 12-Hemoglobin (n hematie);13-
Melanin (n melanocite); 14- Vitamina C; 15- Cristale de colesterol


Glucidele se depoziteaz sub form de glicogen, n special n
hepatocite i n fibrele musculare. Histochimic se evideniaz prin
metoda PAS (periodic acid SCHIFF) sau prin colorare cu carmin BEST,
153
cnd apar sub form de rou violaceu, grupate n grmezi sau plaje. La
electronomicroscop, glicogenul poate apare: a) sub form de particule
mari, neregulate sau n form de rozet cu diametrul de 150 nm
(particule alfa); b) cu aspect de particule mici, cu form de bastonae
lungi de 20 - 30 nm (particule beta). n unele boli de depozit sau n
diabet, glucidele pot apare i n nucleu.

Incluziuni citoplasmatice

Denumire Conin :
Incluziuni cu substante
de rezerv
proteine,lipide, glucide,vitamine, minerale
Incluziuni cu produsi de
elaborare
hormoni,granule de zimogen, granule de
mucigen, vezicule de secreie, etc.




Incluziuni cu pigmenti
endogeni

a.Carotenoizi : lipocromi, luiteina, caroten
protidele (iodopsina, rodopsina, caroten-
albumina) ;

b.Cromolipozi (de dezasimilaie):
lipofuscina, hemofuscina ;

c.melanici : melanina

d. cu nucleu tetrazolic : hemoglobina,
mioglobina, hemosiderina ;

Pigmenti exogeni
Particule de crbune (n antracoz) ;
Particule de fier (n sideroz) ;
Particule de siliciu (n sideroz)

Vitaminele se pot evidenia n epitelii prin fluorescen natural
(vitamina A), sau prin impregnaie argentic (metoda Cater) n
corticosuprarenal, gonade, hepatocite i fibre musculare.
Incluziile minerale de fier, cupru, potasiu, calciu se prezint cu
aspect de granule, ce pot fi evideniate prin metode citochimice
specifice.
Incluziile cristaloide sunt prezente n citoplasma celulelor
interstiiale din testicul sub forma cristalelor REINKE, fine, polimorfe.
Produii de elaborare apar sub forma unor incluzii diferite precum:
granulele de zimogen (la polul apical al celulelor seroase din pancreas);
granulele de mucigen (la polul apical al celulelor mucoase i n celulele
caliciforme); hormonii (n celulele glandelor endocrine); pigmeni
(melanina n melanocite). Aceste incluzii se evideniaz prin diferite
metode histochimice: cu rou Magenta (zimogenul), cu mucicarmin
(mucusul) sau prin colorare natural proprie n cazul pigmenilor.
154
Pigmenii pot fi de origine endogen sau exogen.
Pigmenii endogeni sunt reprezentai de: carotenoizi, cromolipoizi,
pigmeni melanici i pigmeni cu nucleu tetrazolic.
Carotenoizii sunt de obicei asociai cu lipidele i sunt reprezentai
de: lipocrom (pigmentul esutului adipos, la cabaline), luteina (n celulele
corpului galben din ovarul mamiferelor), carotenproteidele
(carotenalbumine, iodopsina i rodopsina din celulele cu conuri i
bastona din retin).
Cromolipoizii sunt: pigmeni de culoare brun sau neagr
(lipofuscina), rezultai n urma dezasimilaiei n neuroni, hepatocite, zona
reticular a corticosuprarenalei, miocard, celulele interstiiale Leydig, sau
hemofuscina ntlnit n focare hemoragice.
Pigmenii melanici sunt de culori diferite: neagr, brun sau
galben. Cel mai cunoscut este melanina, prezent n melanocitele pielii,
coroidei, proceselor ciliare, irisului i stratului pigmentar din retin.
Pigmenii cu nucleu tetrazolic sunt reprezentai de: hemoglobin
(n eritrocite), mioglobina (n muchi), hemosiderina (n celulele
sistemului macrofagic monocitar din mduva hematogen, ficat,
pulmoni).
Pigmenii de origine exogen provin din mediul extern i sunt
ncorporai prin aer sau prin furaje, producnd impregnarea esuturilor
crora le imprim devieri de la coloraia natural specific. Astfel,
impregnarea cu particule de praf (crbune) produce antracoza, cu
localizri mai frecvente n pulmoni la carnasiere, n limfocentrul bronic,
la rumegtoare i n mucoasa duodenal la psri; - impregnarea cu
pulberi de fier produce sideroza cu localizare predominant pulmonar;
impregnarea cu pulberi de siliciu (nisip) produce silicoza, frecvent la
ovinele ce pasc pe terenuri cu nisipuri foarte fine; furajele bogate n
caroten (exemplu morcovul) imprim o coloraie glbuie esuturilor la
suine i la psri datorit carotenilor din vitelus.

6. REPRODUCEREA CELULAR

Reproducerea celular este fenomenul prin care se asigur
continuitatea n timp a celulelor i const n esen n faptul c dintr-o
celul se obin dou celule. Acest proces are loc n cursul diviziunii
celulare, care devine posibil numai dup ce a avut loc o reproducere
biochimic sau molecular, care necesit att materiale nutritive i
energie, ct i informaie genetic.
Reproducerea biochimic se produce n cel puin 4 faze: 1)
acumularea de substane anorganice; 2) sinteza enzimatic a unor
substane organice simple (aminoacizi, monozaharide etc.); 3) sinteza
155
proteinelor i 4) sinteza (sau replicarea) ADN-ului, care este esenial
pentru declanarea diviziunii.
n cursul reproducerii biochimice are loc dublarea masei celulare,
duplicarea componentelor i se produce un complex de evenimente ce
se succed ciclic, realizndu-se un ciclu celular.

6.1. Ciclul celular

Ciclul celular(cyclus cellularis) sau ciclul de via al unei celule este
perioada de timp cuprins ntre momentul apariiei unei celule i
momentul terminrii propriei diviziuni. Ciclul vieii celulare cuprinde dou
mari perioade sau faze: a) diviziunea celular (notat cu M de la mitoz)
(periodus mitoticus) i b) interfaza sau intercineza (periodus
intermitoticus), perioada dintre dou diviziuni succesive sau perioada ce
precede diviziunea. Mult timp s-a considerat n mod greit c n interfaz
(n perioada situat n afara diviziunii) celula se odihnete. Prin
folosirea metodelor biologiei celulare, s-a observat c interfaza este
perioada din viaa celulei cu maxim activitate metabolic, deoarece n
cursul ei se produce sinteza ADN-ului, ARN-ului i a proteinelor din
celul.

Etapele ciclului celular

Faze Perioade Puncte de restricie
Perioada presintetic
(G1)

Interfaza Punct de restricie (R 1)
Perioada sintetic (S)
Perioda Postsintetica
(G2)

Punct de restricie (R2)
Profaza
Prometafaza
Mitoza Metafaza
Anafaza
Telofaza

n timp ce sinteza ARN i a proteinelor are loc n toat interfaza,
sinteza ADN are loc numai ntr-o anumit perioad, numit perioada
sintetic (i notat cu S) care este precedat de o perioad presintetic
(notat cu G
1
) i succedat de o perioad postsintetic (notat cu G
2
).
Un ciclu celular complet (cu durata de circa 16 ore) cuprinde patru
perioade: 1) G
1
(intervallum ambiguum s.postmitoticum))- intervalul de
156
timp de 5 ore de la sfritul mitozei pn la nceputul sintezei de ADN; 2)
S - perioada sintezei de AND( synthesis genomica) de circa 7 ore; 3) G
2

(intervallum premitoticum) - intervalul de timp de la sfritul sintezei de
ADN i nceputul diviziunii de circa 3 ore i 4) M - diviziunea celular de
circa 1 or.
La celulele eucariote ciclul celular dureaz 10-25 ore. Durata lui
variaz n funcie de specie, tip celular i chiar de la o celul la alta n
cadrul aceluiai esut. Dintre perioadele ciclului, perioada G
1
are durata
cea mai variabil, putnd s difere, la unele celule, n timp ce perioada S
sau G
2
este cea mai constant pentru un anumit tip celular. Astfel exist
celule care se divid foarte rapid, parcurgnd ciclul n 8 ore, n timp ce
altele se divid mai rar, avnd ciclul de 100 zile sau mai mult. (Fig.6.1)







Fig.6.1. Diagrama ciclului
celular

G
0_
- Perioada de repaus
G
1
Peroada presintetic
S perioada sintetic
G
2
Perioada postsintetic






Exist dou momente denumite puncte
de restricie a cror depire permite parcurgerea etapelor urmtoare.
Primul i cel mai important punct de restricie este ntre perioadele G
1
i
S
1
, iar cel de-al doilea este ntre perioadele G
2
i M. ntr-o populaie de
celule, momentul depirii punctului de restricie (punctul R) difer de la
o celul la alta, nct nu toate celulele parcurg n acelai timp etapele
ciclului celular, gsindu-se n diferite etape. Datorit acestui aspect
populaiile celulare sunt asincrome.
Nu se cunoate precis care este factorul care determin trecerea
unei celule de mamifer dincolo de punctul R. Practic se consider c
depirea punctului de restricie G
1
/S depinde de realizarea unei
concentraii prag a unei proteine instabile, denumit proteina U de la
unstable. ntr-o celul, proteina U poate trece pragul concentraiei
numai cnd este sintetizat rapid. n momentul realizrii pragului de
concentraie, proteina U determin nceperea replicrii ADN i n
consecin trecerea celulei din faza G
1
n S. Inhibarea sintezei
157
proteinelor i n mod implicit a sintezei proteinei U poate explica
prelungirea fazei G
1
.
Existena punctului de restricie G
1
/S constituie o rezerv de
supravieuire a celulei, care n condiii vitrege, sintetizeaz n primul rnd
proteine de ntreinere, iar sinteza proteinei U va fi redus, nct dei
celula nu se divide, ea rmne vie pentru perioade lungi de timp, chiar i
n condiii de inaniie sever. n condiii n care celula este lipsit de
aport nutritiv n alte perioade ale ciclului celular, ea nu va supravieui. n
acest mod, punctul de restricie G
1
/S apare ca un punct de odihn sigur
pentru celulele care din cauza condiiilor de cretere sau interaciunilor
cu alte celule trebuie s-i opreasc diviziunile. Celulele care se afl
oprite n aceast stare stabil se afl n faza G
0
a ciclului celular.
Un alt punct de restricie se afl la sfritul perioadei G
2
. Inhibarea
sintezei proteinelor n aceast faz mpiedic intrarea celulei n
diviziune. Se consider c la sfritul perioadei G
2
este activat o
proteinkinaz solubil, care catalizeaz fosforilarea proteinelor din
membrana nuclear i a histonelor H
1
. Fosforilarea proteinelor din
membrana nuclear induce dezasamblarea nveliului nuclear, iar
fosforilarea histonelor H
1
produce condensarea cromozomilor, fenomen
caracteristic diviziunii.
n raport cu modul n care parcurg ciclul celular, se disting trei
categorii de celule:
I - Celulele care i-au pierdut capacitatea de a se divide, dup
parturiie, fiind oprite n faza G
1
, ca de exemplu: neuronii, celulele
musculare.
II - Celulele care au o capacitate sczut de a se divide
(hepatocitele, unele celule endocrine), dar care n condiii speciale se pot
divide rapid. Astfel, hepatocitele se divid rapid dup hepatectomie,
refcnd celulele pierdute.
III - Celulele care se divid rapid, ca de exemplu celulele mduvei
osoase hematogene, din epiderm, din epiteliul mucoasei intestinale,
celulele liniei germinative spermatogene. Aceste celule se pot gsi n
esuturi n dou compartimente (grupe) celulare: a) un compartiment
proliferativ, ce cuprinde celulele care se divid rapid i b) un compartiment
neproliferativ, ce cuprind celule care nu se divid dect n anumite
condiii. Astfel, se petrec fenomenele n esuturile n care o parte din
celulele materne se pierd n mod fiziologic, ca de exemplu celulele din
epiteliul mucoasei intestinale, care se descuameaz dup 3-5 zile;
hematiile care se distrug dup 120 zile de via. Pierderile de celule
mature sunt compensate prin trecerea constant a unor celule de
rezerv, numite i celule surs, sau celule stem, aflate n faza G
0
, din
compartimentul neproliferator n compartimentul proliferator. Trecerea
din faza G
0
se face sub aciunea unor stimuli specifici, reprezentai de
substanele mitogene, adic de cele ce induc mitoza, precum:
158
eritropoietina, factorii de cretere ai unor celule (ai nervilor, ai
fibroblastelor), poliamina (exemplu putrescina), hormoni (estrogeni). Pot
aciona ns i factori tisulari, cum sunt chalonele (peptide sau
glicoproteine), care inhib diviziunile celulare.

Tip Modalitati Faze Etape Stadii
Inmugurire
Diviziunea Clivaj
direct
(amitoza)
Sciziparitate
Profaza
Mitoza Prometafaza
(Diviziunea Metafaza
nereducional) Anafaza
Telofaza

Meioza I
(reductional)
Profaza I Leptonema
Zigonema
Pachinema
Diplonema
Diachineza
Prometafaza I
Diviziunea Meioza Metafaza I
indirect (Diviziunea Anafaza I
reducional) Telofaza I
Interfaza

Meioza II
(nereducional)
Profaza II
Prometafaza
II
Metafaza II
Anafaza II
Telofaza II

6.2. DIVIZIUNEA CELULAR

Diviziunea celular (divisio cellularis) este acea perioad a ciclului
celular n care se realizeaz distribuirea materialului genetic la cele dou
celule fiice. Exist dou modaliti de realizare a diviziunii celulare: a)
diviziunea direct (sau amitoza) i b) diviziunea indirect, care poate fi
de dou feluri: mitoz sau meioz.

6.2.1.Diviziunea direct

Diviziunea direct sau amitoza (amitosis) reprezint forma
inferioar de reproducere celular, caracteristic organismelor
159
unicelulare. La metazoare apare fie n procesele de regenerare, fie n
condiii patologice n unele procese tumorale. Se caracterizeaz prin
lipsa aparatului mitotic, iar materialul genetic este inegal distribuit,
putndu-se produce erori n distribuie. Cele mai frecvente modaliti de
diviziune direct sunt: nmugurirea, sciziparitatea, clivajul.(Fig.6.2.)



























Fig.6.2. Diviziunea direct - amitoza

6.2.2.Diviziunea indirect
Se caracterizeaz prin procese mai complexe, ce constau n
modificri sincrone n citoplasm (cytokinesis) i nucleu (nucleokinesis),
ce realizeaz o distribuire egal a materialului genetic la celulele fiice.
Exist dou tipuri de diviziune indirect: a) mitoza sau diviziunea
ecuaional, ntlnit la celulele somatice i produce celule diploide; b)
meioza sau diviziunea reducional, ntlnit numai la celulele
gametogene i produc celule haploide.

160

Fig. 6.3. Mitoza
1- Centrul celular; 2- Spirem; 3- fusul de diviziune;4- Cromozom; 5-Plac
metafazic;
6- Inel contractil

6.2.2.1.Mitoza

Mitosa (mitosis) are o durat total de circa 60 minute la om i se
desfoar n patru faze: a) profaza (prophasis), mpreun cu o faz
intermediar - prometafaza (30 minute sau 50% din durata total); b)
metafaza (metaphsis) (8 minute sau 13,4%); c) anafaza (anaphasis) (4
minute sau 6,6%); d) telofaza (telophasis)(18 minute sau 30%).
161


Profaza
Se remarc printr-o serie de fenomene caracteristice, ce se
desfoar att n citoplasm, ct i n nucleu. (Fig.6.3.)
n citoplasm:
1) Devine vizibil cel de-al II-lea centru celular (centrozom),
dublarea centriolilor realizndu-se prin asamblarea unui centriol nou
(centriolum filiale), din depozitul de tubuline al citoplasmei. Polimerizarea
tubulinelor are loc ncepnd din faza S.
2) Separarea i ndeprtarea centriolilor centrosomului spre polul
celulei, ntre ei realizndu-se un fus de diviziune (fusus mitoticus),
format din filamente structurate pe seama microtubulilor.
n nucleu: 1) dispare nucleolul; 2) se condenseaz cromatina
nuclear sub forma unui spirem (sau ghem) (glomus), iniial compact
(glomus compactum) i apoi lax (glomus dispersum) din care se
desprind cromozomii sub form de bastonae.
n nucleol - componenta amorf se desprinde i se amestec cu
sucul nuclear, iar restul structurii se ataeaz pe fragmentele
cromozomilor SAT.
n prometafaz: 1) dispare nucleolema (membrana nuclear) prin
aciunea proteinkinazei solubile (coninute n lizozomi) care produce
fosforilarea proteinelor din membran; 2) cromozomii ncep s
interacioneze cu fibrele fusului de diviziune. Ei execut micri
oscilatorii agitate, iar datorit contraciei tubulinei, cromozomii se
deplaseaz spre mijlocul fusului de diviziune. Viteza lor de deplasare
variaz de la un cromozom la altul, ultimul ajungnd cromozomul X.
n metafaz:
1) Cromozomii sunt dispui la nivelul ecuatorului fusului(equator
fusi) de diviziune, cu axul lor lung perpendicular pe axul fusului,
realiznd o plac metafazic (lamina equatorialis).
2) n placa metafazic, cromozomii se despic (cliveaz)
longitudinal, nct cele dou cromatide surori se despart. n urma acestei
clivri longitudinale se dubleaz numrul de cromozomi (exemplu la
taurine, din 60 rezult 120 cromozomi monocromatidici), iar materialul
genetic se distribuie n mod egal la celulele fiice.
Fiecare din fibrele fusului de diviziune este alctuit dintr-un
mnunchi de circa 100 microtubuli i proteinele asociate lor. n structura
fusului de diviziune (fusus mirtoticus) se disting dou categorii de fibre,
n funcie de modul lor de ancorare la capete: a) fibre polare (centrozom-
centrozom) (microtubulus continuus), cele mai numeroase, dispuse de la
un pol la altul; b) fibre cinetocorice (centrozom-kenetocor) sau fibre de
jumtate de fus (microtubulus chromosomaticus), ancorate cu un capt
pe centrozom i cu cellalt pe cinetocorii cromatidelor (cte doi pentru
162
fiecare centromer al unui cromozom). Fibrele cinetocorice sunt alctuite
din mnunchiuri de microtubuli ce radiaz n direcie opus de pe cea
cinetocori ai fiecrui cromozom. Ele servesc la aezarea cromozomilor
n placa metafazic, avnd capetele pozitive (+) blocate n cinetocori, iar
capetele negative (-) libere. (Fig.6.4.)




Fig.6.4. Schema fusului de diviziune
A-nceputul metafazei; B Sfritul metafazei
1- Centrozom; 2- Cromozom; 3- Fibr polar;
4- Fibr cinetocoric



Dac fusul este distrus nu se mai
produce diviziunea celular, pe acest
fapt bazndu-se utilizarea unor
medicamente citostatice (ca vinblastina sau vincristina).
Anafaza
Se caracterizeaz prin deplasarea cromatidelor devenite
cromozomii fii spre cei doi poli ai celulei. Deplasarea spre polii celulei
este rezultatul a dou evenimente independente: a) micarea spre poli a
fibrelor cinetocorice prin depolimerizarea capetelor libere (negative) ale
microtubulilor i antrenarea cu ele a cromatidelor ataate; b) alungirea
prin polimerizare la captul pozitiv (+) a fibrelor polare, producndu-se
distanarea celor doi poli. Alunecarea fibrelor polare are la baz sistemul
motil microtubul-dinein.
Telofaza
ncepe n momentul n care cele dou grupe cromozomiale au
ajuns la cei doi poli celulari i fuzioneaz aparent formnd cte un
spirem. n jurul spiremului se reface nveliul nuclear prin defosforilarea
proteinelor laminare. Totodat se refac nucleolii, datorit aciunii
cromozomilor SAT, iar nucleul i recapt structura din interfaz,
cromatina lundu-i aspectul de reea i granule.
Clivarea citoplasmei la nivelul plcii ecuatoriale, n cursul
fenomenului denumit citodierez sau citokinez (cytokinesis), ncepe
prin apariia unui an pe suprafaa celulei (constrictio cytoplasmatica),
datorit activitii unui inel contractil, prezent sub plasmalem.
Inelul contractil (anulus equatorialis) este format dintr-un mnunchi
de filamente de actin, ce ncepe s fie asamblat nc de la nceputul
anafazei. Inelul i micoreaz diametrul prin depolimerizarea
filamentelor sale, necesitnd prezena ionilor de calciu.
Suprafaa total a celor dou celule fiice este mai mare dect a
celulei mam, fapt ce necesit o biogenez de plasmalem. Se constat
163
c biogeneza plasmalemei ncepe naintea diviziunii, observndu-se prin
microscopia de baleaj c pe msur ce celula trece din faza G
1
n faza S
i apoi n faza G
2
, suprafaa ei devine din ce n ce mai proas
prezentnd microviloziti care reprezint rezerva de membran
necesar pentru nvelirea celulelor fiice, ce au foarte puini microvili.
n urma mitozei, dintr-o celul mam rezult dou celule fiice
avnd aceeai cantitate de ADN i acelai numr de cromozomi ca i
celula mam. Gradul de asemnare al celulelor fiice cu celula mam
permite s se disting patru forme de mitoz: homotipic, heterotipic,
asimetric i de ntinerire.
n mitoza homotipic ( sau homoplastic ) celulele fiice sunt
asemntoare ntre ele i cu celula mam. Este ntlnit la celulele
nedifereniate (foarte tinere).
n mitoza heterotipic ( sau heteroplastic ), celulele fiice sunt
asemntoare ntre ele, dar sunt mai mature, mai difereniate dect
celula mam, fapt pentru care se mai numete i mitoz de difereniere.
n mitoza asimetric ( homo-heteroplastic ), una din celulele fiice
seamn cu celula mam, iar cealalt este diferit.
n mitoza de ntinerire (sau de dedifereniere), celula mam d
natere la celule mai tinere (active), cu potenialiti biologice
caracteristice formelor tinere (active) ale celulei mam. Se ntlnete la
limfocit, care prin diviziune d natere la dou limfoblaste.
Factorii care determin mitozele sunt nc insuficient precizai.
Mitoza apare ca o faz obligatorie a ciclului celular ( n situaia n care s-
au depit punctele de restricie) i ca o consecin a dublrii masei i
componentelor celulei, fiind declanai de o serie de factori ce pot fi
ncadrai n trei grupe: a) factori generali, ca: temperatura, lumina,
hormonii (tiroidieni, hipofizari), vitamine; b) factori intracelulari, ca:
modificarea raportului nucleo-citoplasmatic i nucleolo-nuclear (ca i
cum volumul crescut al citoplasmei nu ar mai putea fi controlat de
nucleu, fcnd necesar diviziunea celulei); c) factori intercelulari,
precum raportul care trebuie s existe, n fiecare esut, ntre celulele
uzate i cele care se divid. Sunt cei mai importani n cazul n care un
grup de celule moare, se declaneaz diviziunea unui alt grup de celule
printr-un mecanism de retro-aciune (feed-back), nct raportul ntre
cele trei categorii de celule s rmn aproximativ acelai.

6.2.2.2. Meioza

Meioza (meyosis s. cyclus meioticus) se caracterizeaz prin faptul
c reduce la jumtate numrul de cromozomi ( deci materialul genetic),
nct plecndu-se de la celule diploide, se ajunge la celule haploide,
care conin numai cte un cromozom din fiecare pereche de omologi i

164
Fig.6.5. Comparaie ntre mitoz i meioz


numai un cromozom de sex. Este prezent n procesul de maturare al
gameilor. Permite ca, prin procesul fecundrii, din dou celule haploide
s rezulte o celul diploid, din care se poate dezvolta n mod normal
ntregul organism (Fig.6.5).
165
Meioza este alctuit din dou diviziuni indirecte care se succed
fr ca ntre ele s se mai produc sinteza de ADN. Prima diviziune se
numete meioza I i este reducional, n timp ce a doua diviziune se
numete meioza II i este nereducional, aprnd ca o mitoz
homoplastic.
Meioza I apare mai complicat, cu o profaz specific n care se
petrec fenomene caracteristice. Poate dura zile, luni i ani de zile (n
funcie de specie), iar profaza este foarte lung, ocupnd 90% din
aceast durat. Astfel, ovocitele primare rmn n profaza I pn la
pubertate, iar spermatogoniile intr n meioz numai la pubertate.
Profaza I (prophasis I) cuprinde 5 faze (etape, stadii) succesive:
leptonema, zigonema, pachinema, diplonema i diachinezis.
1) n leptonem (leptonema), se produce condensarea
cromatinei, nct cromozomii devin vizibili cu aspect de filamente lungi,
cu diametrul neuniform. Ei se ataeaz cu ambele capete de nveliul
nuclear la nivelul unor structuri denumite plci de ataare . Fiecare
cromozom deci este duplicat i format din 2 cromatide surori, intim
ataate una de alta nct n lungul cromozomului se formeaz o lam
proteic, denumit ax. (Fig.6.6).


Fig. 6.6. Modificarea cromozomilor n profaza I a meiozei - schem
A- Interfaz; B-Leptoten; C-zigoten; D-Pahiten; E- Diploten i daicinezis
A, b, c, d - cromatide

2) n zigonem (zygonema), caracteristic este fenomenul de
sinaps sau conjugarea (conjugatio) cromozomilor, care const n faptul
c, cromozomii omologi (chromosoma homologum)( din aceeai
pereche), unul din setul matern i altul din setul patern se apropie i se
alipesc, dar nu funzioneaz. Cromozomii omologi sunt legai unul de
altul printr-o reea proteic, denumit complex sinaptolemal (complexus
synaptonematicus), ce se ntinde pe ntreaga lungime a cromozomilor,
ancorndu-se la cele dou capete de nveliul nuclear. Complexul
sinaptolemal realizeaz alinierea perfect a celor doi cromozomi, nct
genele alele s fie situate fa n fa. (Fig.6.7.)
166



Fig.6.7. Structura complexului sinaptolemal din cromozomul bivalent
1- Modul de recombinare; 2- Element central; 3-Elemente laterale;
a-b i c-d cromatide surori.

3) n pachinem (pachynema), cromozomii sunt mai condensai.
Pachinema ncepe n momentul n care sinapsa (synapsis) este
complet i are drept caracteristic fenomenul de crossing-over
(decussatio), ce const n ruperea unei cromatide materne i a unei
cromatide paterne n acelai punct din lungimea cromozomului i
sudarea ncruciat a fragmentelor, nct un fragment situat iniial pe un
cromozom patern ajunge pe cromozomul matern i invers.
Fiecare pereche de cromozomi
omologi este denumit cromozom
bivalent (chromosoma bivalens) sau
tetrad (chromosoma tetravalens),
deoarece fiecare cromozom omolog
este clivat n dou cromatide surori,
nct ntr-o pereche exist patru
cromatide. (Fig.6.8)

Fig.6.8. Schema tetradei i a fenomenului
de crossing-over
1- Centromere; 2- Chiasma;
a-b i c-d cromatide surori



Prin schimbul de fragmente
ntre cromozomi omologi se realizeaz un schimb de gene, cu un rol
extrem de important n ereditate, nct gametul unui individ va avea n
final gene ce provin de la cromozomul patern, ct i gene ce provin de la
cromozomul matern. n acest fel, un cromozom bivalent, va cuprinde tot
patru cromatide, din care una este patern pur, alta matern pur, iar

167
cele dou cromatide ntre care s-a efectuat schimbul de material genetic
sunt mixte.
Acest schimb de gene ntre
cromozomii omologi (chromosoma
homologicum), denumit i recombinare
genetic sau fenomen de crossing-
over este universal i are importan
foarte mare n transmiterea caracterelor
ereditare.

Fig.-6.9. Comparaie ntre mecanismele alinierii i
separarii cromozomilor n meioza I i meioza II

4) n diplonem (diplonema),
cromozomii rezultai dup crossing over
(cromosoma meioticum) ncep s se
despart (s realizeze desinapsa ). Ei
rmn, ns, legai n punctele numite
chiasme, n care s-a produs crossing-
overul.
La ovocite, diplonema poate dura
luni sau ani de zile, deoarece
cromozomii se decondenseaz i
ncepe sinteza de ARN.
5) n diachinesis (diakinesis),
nceteaz sinteza ARN-ului, cromozomii
se condenseaz, se ngroa i se
detaeaz de nveliul nuclear. Fiecare
cromozom bivalent conine patru
cromatide, din care cromatidele surori
sunt unite la nivelul centromerilor, iar
cele nesurori, mixte, ntre care s-a
produs crossing-overul sunt unite la
nivelul chiasmelor.
n concluzie, n profaza I au loc
trei importante fenomene caracteristice:
1) condensarea cromozomilor; 2)
conjugarea sau sinapsa ( n zigonem )
i 3) schimbul de gene ntre cromatidele nesurori (sau crossing-overul ).
n prometafaza I ( prometaphasis I ) se produce dispariia
nveliului nuclear i formarea fusului de diviziune.
n metafaza I ( metaphasis I ) cromozomii se ataeaz de fibrele
fusului de diviziune i formeaz placa metafazic .
168
n anafaza I ( anaphasis I ) se produce deplasarea cte unui
cromozom ntreg (bicromatidic,cu dou cromatide) din fiecare cromozom
bivalent ctre un pol al celulei, pe cnd cellalt cromozom, tot
bicromatidic, se deplaseaz spre polul opus. Diferena esenial fa de
anafaza din mitoz const n faptul c nu se despart i nu migreaz
separat cromatidele fiecrui cromozom, ele rmnnd legate la nivelul
centromerului. (Fig.6.9)

Fig.6.10. Diagrama meiozei

169

Meioza II se realizeaz ca o mitoz obinuit, avnd cele patru
faze: profaza II cu prometafaza II (prometaphasis II), metafaza II
(metaphasis II), anafaza II (anaphasis), telofaza II (telophasis) . n
metafaza II se despart cromatidele fiecrui cromozom, dup care are loc
deplasarea lor spre polii celulei, n timpul anafazei II. (Fig.6.10)
n concluzie, n cursul diviziunii reducionale (a meiozei), celula se
divide de 2 ori, n timp ce cromozomii se divid (desprindu-i
cromatidele) numai o singur dat, n timpul metafazei II.

6.3.Bazele moleculare ale reproducerii celulare


Bazele moleculare ale reproducerii celulare se refer la trei
fenomene eseniale: 1) replicarea ADN; 2) transcrierea mesajului
genetic i 3) traducerea mesajului genetic n biosinteza proteinelor.

6.3.1. Structura i replicarea ADN

Acidul deoxiribonucleic (ADN) constituie materialul genetic al
tuturor vieuitoarelor, care au n compoziia lor acest acid nucleic.
Replicarea (sau duplicarea sau autoreplicarea) ADN-ului
cromozomial i distribuirea lui n mod egal n celulele fiice formeaz baza
mecanismelor moleculare de transmitere a informaiei genetice.
Replicarea ADN este procesul molecular prin care se realizeaz o
copiere fidel a moleculelor de ADN (a secvenelor de nucleotide) n
timpul duplicrii cromozomilor. Dublarea cantitii de ADN are loc n
cursul biosintezei de ADN n faza S a ciclului celular, biosintez care se
numete replicare.

Structura ADN-ului

ADN-ul este o macromolecul, compus din dou lanuri de
nucleotide foarte lungi, rsucite unul n jurul celuilalt ntr-o structur
dublu-elicoidal (numit dublu-helix sau duplex de ADN).
Fiecare lan are: a) o parte constant (ce poate fi asemnat cu
coloana vertebral) format din dezoxiriboze, situate pe latura extern i
legate prin puni diesterice i b) o parte variabil, reprezentat de
secvena bazelor. Bazele sunt situate pe latura intern (ntre lanuri) i
sunt reprezentate de dou baze purinice (adenina A i guanina G)
i dou baze pirimidinice (timina T i citozina C) (fig.6.11).


170
Fiecare lan este polarizat,
deoarece la un capt prezint hidroxilul
5 liber, iar la captul opus hidroxilul 3
liber. n mod convenional se consider
c secvena n lan este scris de la
5 spre 3, aa cum n proteine
secvena este scris n direcia
amino-carboxil. Cele dou lanuri sunt
antiparalele, avnd direcia legturilor
fosfo-diesterice opus, pe unul este de
la 5 la 3, iar pe lanul pereche de la 3
la 5.
Cele dou lanuri polinucleotidice sunt
meninute mpreun prin legturi de
hidrogen ntre baze, existnd dou
legturi ntre adenin i timin i trei
ntre guanin i citozin.

Fig.6.11. Structura ADN-ului

Aranjarea bazelor n perechi este
specific, nct adenina este legat, n
pereche, ntotdeauna cu timina, iar
guanina cu citozina. Aceast
specificitate este determinat de factori
spaiali (sterici) i de legturile de
hidrogen. Astfel, diametrul constant al duplexului de ADN (de 2 nm) face
ca spaiul dintre cele dou lanuri s fie de 1,1 nm, att ct ocup o baz
pirimidinic aranjat n pereche cu o baz purinic. Dou baze purinice
ar ocupa prea mult spaiu, iar dou baze pirimidinice prea puin.
Pasul helixului este de 3,4 nm i reprezint intervalul la care se
repet structura helicoidal. Pe aceast distan se afl zece nucleotide,
deci 10 perechi de baze. Numrul de perechi de baze dintr-o molecul
de ADN variaz de la cteva mii pn la cteva milioane ( de exemplu,
la E. colli molecula de ADN cuprinde 3,4 milioane perechi de baze).
Pe un lan polinucleotidic, considerat izolat, secvena bazelor nu
este expus nici unei restricii; dar pe lanul pereche secvena va fi strict
determinat de specificitatea aranjrii bazelor n perechi, nct lanurile
sunt complementare. Astfel, un lan este complementul celuilalt, la
secvena GCTAG corespunznd pe lanul opus secvena CGATC.
Complementaritatea lanurilor polinucleotidice a permis lui
WATSON i CRICK (1953), descoperitorii structurilor n dublu helix a
ADN-ului, s sugereze mecanismul replicrii i al transmiterii informaiei
genetice. Astfel fiecare lan acioneaz ca o matri pentru formarea unui
171
lan nou complementar cu el nsui. n acest fel se poate replica ADN-ul
(dubla cantitate de ADN), iar pentru c molecula de ADN funcioneaz ca
matri pentru propria sa formare, procesul a fost denumit autoreplicare.
(fig. 6.12).


Fig.6.12. Autoreplicarea AND-ului

n biologia molecular prin
matri se nelege o macromolecul
ce prezint o suprafa de legare cu o
anumit configuraie spaial. Pe
fiecare loc de matri se poate lega n
mod specific un singur fel de
monomer, cel care are o configuraie
complementar cu a matriei (fig.
124).

Replicarea ADN-ului

Replicarea ADN-ului prezint
urmtoarele caracteristici: 1) este
semiconservativ, nct n fiecare
molecul de ADN nou format, unul
din lanuri provine din molecula mam
(iniial); 2) ncepe ntotdeauna n
acelai punct numit origine, din care
pleac pe fiecare lan cte o furculi
de replicare, ce reprezint locul n
care se produce simultan
dezrsucirea ADN-ului parental i n care din dou lanuri se formeaz
patru lanuri polinucleotidice.
Replicarea ADN-ului ncepe odat cu dezrsucirea celor dou
lanuri polinucleotidice din dublul helix al ADN parental. Dezrsucirea
este favorizat de ruperea unuia din cele dou lanuri la nivelul coloanei
vertebrale de riboz-fosfat, la distan de circa 30 de furculia de
replicare, cu ajutorul unei enzime. n continuare dezrsucirea este
uurat de unele proteine specifice de dezrsucire, care se leag una
dup alta de ADN monocatenar, mpiedicnd rsucirea lui. Concomitent
cu dezrsucirea, pe fiecare din cele dou lanuri polinucleotidice se
sintetizeaz un lan nou (o replic) cu secven complementar de
nucleotide. Astfel pe fiecare din lanurile parentale este sintetizat un ADN
nou sub form de fragmente mici (fragmente OKAZAKI) de circa 1000
nucleotide. n procesul sintezei ADN-ului intervin urmtoarele enzime:
172
1. ARN-polimeraza, ce sintetizeaz cte
un fragment scurt de ARN (de circa 100
nucleotide) pe fiecare din lanurile de ADN
parental ce servete ca matri. Rezult astfel un
primer de ARN, necesar pentru nceperea
sintezei propriu-zise de ADN cu ajutorul
polimerazelor.(Fig. 6.13)

Fig.6.13. Reprezentarea schematic a biosintezei de ADN

2. ADN-polimerazele denumite ADN-polimeraza I, II i III n ordinea
descoperirii lor la E coli, catalizeaz polimerizarea deoxiribonucleotidelor.
3. ADN-ligaza, ce leag cte dou capete ale unor fragmente de
ADN ce fac parte dintr-un duplex, prin formarea unor legturi fosfo-
diesterice ntre cele dou capete (unul cu OH n 3, iar cellalt cu un
fosfat la 5). Se nchid astfel discontinuitile (sprturile) din ADN.
Reacia este endergonic, energia fiind donat de ctre ATP.
4. ADN-topoizomerazele ( I i II ) scindeaz reversibil dublexul de
ADN, permind astfel rotaia i ndeprtarea tensiunii acumulate n
timpul dezrsucirii lanurilor polinucleotidice.
Mecanismul molecular al biosintezei (replicrii) de ADN cuprinde
urmtoarele etape: 1) desprinderea (desperecherea) lanurilor de ADN
din molecula parental; 2) sintetizarea, pe fiecare lan, prin aciunea
ARN-polimerazei, a cte unui primer de ARN; 3) sintetizarea, n
continuarea primerului, a lanurilor de ADN complementare matriei, cu
ajutorul ADN-polimerazei; 4) fragmentele OKAZAKI - se formeaz n
direcia 5 - 3 pe ambele lanuri; 5) excizia fragmentului de ARN sub
aciunea ARN-polimerazei I nct pe msur ce se ndeprteaz cte un
ribonucleotid, se adaug imediat dezoxiribonucleotidul corespunztor; 6)
legarea fragmentelor de ADN nou formate prin aciunea ADN-ligazei.

6.3.1.1. Particularitile replicrii la eucariote

Diferenele care exist ntre replicarea de la procariote i cea de la
eucariote se datoresc complexitii organizrii cromatinei la eucariote,
unde ADN-ul este complexat cu histone n nucleozomi, care se succed
la intervale de circa 200 perechi baze n lungul ADN, nct fragmentele
de ADN nou formate (OKAZAKI) sunt mai mici ca la procariote avnd
100-200 nucleotide, iar primerul de ARN numai 10-20 nucleotide.
Viteza replicrii la eucariote este de 10 ori mai mic dect la
procariote (de exemplu se replic 50 nucleotide pe secund fa de 500
la procariote). Astfel pentru ntreaga replicare a unui cromozom uman, o
singur furculi de replicare ar avea nevoie de 800 de ore, depind de
circa 10 ori perioada S a ciclului celular.
173


Fig.6.14. Replicarea ADN-ului la
eucariote
1- Puncte de origine; 2- Furculie de
replicare; 3- Bule de replicare

Pentru a se putea ncadra n faza
S, replicarea ncepe pe fiecare
cromozom n mai multe puncte de
origine (circa 100 pentru fiecare
cromozom uman). Pentru fiecare punct de origine apar dou furculie de
replicare, ce se deplaseaz pe direcii opuse n lungul cromozomului
genernd nite structuri denumite bule de replicare (fig. 6.14).
Originile furculielor de replicare apar n grupe (de 20-80) situate
toate ntr-o anumit zon. Fiecare grup se numete unitate de replicare
(sau replicon). Repliconii se activeaz treptat n faza S a ciclului, zonele
de heterocromatin fiind ultimele activate. Furculiele de replicare se
deplaseaz cu aceeai vitez n tot cursul fazei S. Cnd ajung s se
ntlneasc pe tot cromozomul, replicarea se termin, iar cei doi
cromozomi se despart.
Replicarea ADN-ului se produce paralel cu sinteza de histone, care
are loc numai n faza S a ciclului celular. Odat sintetizate i asamblate
n nucleozomi, histonele nu mai prsesc ADN-ul de care s-au legat nct
miezurile nucleozomilor vechi trec numai pe unul din duplexuri, n timp
ce pe cellalt duplex de ADN se leag numai de miezurile nucleozomilor
noi sintetizai.
Implicaiile i aplicaiile medicale ale replicrii ADN-ului constau n:
a) apariia mutaiilor; b) sinteza reparatoare a ADN-lui i c) inhibarea
sintezei de ADN.
Apariia mutaiilor este rezultatul unor greeli care apar n procesul
de replicare a ADN-ului. Un anumit nivel de apariie a mutaiilor (de
obicei sczut) a fost necesar i util n evoluia speciilor, dar atunci cnd
depesc acest nivel fac imposibil supravieuirea celulei, majoritatea
mutaiilor fiind duntoare. Din aceast cauz celulele au numeroase
sisteme enzimatice de reparare a erorilor care pot apare n ADN spontan
sau induse de ageni mutageni (fizici sau chimici). Mecanismele
reparatorii sunt eficace, nct o mutaie spontan apare la un milion de
replicri ale genelor.
Pot s apar mutaii punctiforme (prin nlocuirea unui singur
nucleotid) sau mutaii mari complexe, ca: deleii (lipsa unor secvene din
ADN), inserii (secvene n plus de nucleotide). Frecvena mutaiilor
poate crete foarte mult n urma aciunii unor substane, denumite
mutagene, precum: a) unele substane chimice (ce modific direct bazele
din ADN), agenii alchilani (care fixeaz radicalii metil, etil etc.)
174
actiflavinele, cofeina; b) radiaiile ultraviolete; c) radiaiile ionizante (ce
produc ruperea unuia sau a ambelor lanuri de ADN, pierderi de baze,
modificri ale bazelor).
Unii din aceti ageni pot fi folosii n terapia cancerului, ntruct
celulele maligne sunt mai sensibile la aciunea lor (ca de exemplu, unii
ageni alchilani, radiaiile ionizante).
Sinteza reparatorie a ADN-lui se produce ntr-o anumit perioad
de timp, nct exist posibilitatea (n cazul celulelor care prolifereaz
foarte rapid) ca s nceap un nou ciclu de replicare nainte ca reparaia
s fie complet. n acest fel, celulele care prolifereaz foarte rapid sunt
foarte sensibile la radiaii, fapt ce permite folosirea radiaiilor ionizante n
tratamentul cancerelor.
Inhibarea sintezei de ADN este produs de o serie de substane
chimice, care pot fi folosite n practica medical curent - ca substane
antimicrobiene, antivirale i antitumorale (citostatice). Astfel: acidul
molidixic, un antibiotic, inhib biosinteza ADN-ului; acidul fosfonoacetic,
un agent antiviral, inhib selectiv ADN-polimerazele virale i din celula
gazd. Unele substane antitumorale (arabinozilcitozina,
arabinoziladenina) inhib sinteza de ADN, iar altele (neocarcinostatina -
o protein format din 109 aminoacizi) produc rupturi n molecula de
ADN.

6.3.2.Transcrierea mesajului genetic

n exprimarea informaiei genetice (a mesajului genetic) exist dou
etape: 1) transcrierea (copierea) informaiei din ADN n ARN i 2)
traducerea informaiei coninut n ARN n sinteza de proteine. Sub
form prescurtat transmiterea informaiei genetice este cuprins n
dogma central a biologiei moleculare care se exprim n formula:
autoreplicare ADN
transcriere
ARN
traducere
proteine
Astfel, genele din ADN determin sinteza de proteine de ctre
celul, dar nu ADN-ul este matricea pe care se sintetizeaz proteinele, ci
moleculele de ARN (Fig. 6.15).
Moleculele de ARN care poart informaia genetic necesar pentru
biosinteza proteinelor se numesc ARN mesager (ARN-m).





ARN-ul mesager

175
Conceptul de ARN mesager (ARN-m) a fost introdus n biologia
molecular n 1961 de ctre JACOB i MONOD care au presupus
existena unui ARN care este sintetizat i degradat foarte rapid, ce
servete ca mesager al genei (aflat n nucleu), transfernd informaia de
la nucleu la sediul sintezei proteinelor (ribozomi) - aflai n citoplasm.
ARN mesager este o molecul sintetizat pe matria de ADN,
avnd o secven a bazelor complementar ADN-matri. Pentru fiecare
gen se sintetizeaz cte o molecul de ARN-m, care va servi la rndul
ei ca matri pentru sinteza proteinei codificat de gena respectiv.



Fig. 6.15. Reprezentarea schematic a transmiterii informaiei genetice

n celul, pe lng ARN-ul mesager, mai exist nc dou categorii
de ARN, implicate direct n biosinteza proteinelor: ARN-l de transfer i
ARN-ul ribozomal.
ARN-ul de transfer (ARNt) transport aminoacizii activai la
ribozomi, unde se realizeaz formarea legturilor polipeptidice n
secvena dictat de matria de ARNm.
ARN-ul ribozomal (ARNr) intr n componena ribozomilor, fr a i
se cunoate precis rolul lui n biosinteza proteinelor.

6.3.3.1. Mecanismul molecular al biosintezei de ARN
176

ARN-ul este o macromolecul lung format din ribonucleotide
legate prin legturi 3-5 fosfodiesterice. Numrul de nucleotide variaz
ntre 75 (n ARNt) i cteva mii (n ARNm).
Toate tipurile de ARN sunt biosintetizate printr-un mecanism
molecular asemntor, sinteza de ARN pe matri de ADN fiind catalizat
de enzima denumit ARN-polimeraz-ADN-dependent (transcriptaz).
Pentru realizarea sintezei de ARN sunt necesare urmtoarele
elemente: 1) matria de ADN dublu helicoidal; 2) precursori activai, ca
ribonucleozid-trifosfai (ATP, GTP, UTP, CTP); 3) ioni de magneziu sau
alte metale bivalente. Sinteza de ARN se aseamn cu sinteza de ADN
prin: a) direcia de sintez (de la 5 la 3, care este antiparalel lanului de
ADN); b) mecanismul de alungire, care produce eliberarea de acid
pirofosforic (din ribonucleozid-trifosfat), ce este hidrolizat, eliberndu-se
energie.
Diferenele ntre biosinteza de ARN i biosinteza de ADN constau
n: 1) conservarea integral a matriei de ADN n procesul de sintez de
ARN (n timp ce n sinteza de ADN matria este semiconservat);
2) ARN-polimeraza nu necesit un primer; 3) ARN-polimeraza nu
desfoar activitate nucleazic.
La eucariote, exist mai multe ARN-polimeraze, nct cele din
clasa A produc ARNr, cele din clasa B produc ARNm, iar cele din clasa
C produc ARNt.
n timpul procesului de transcriere se parcurg mai multe etape
dup cum urmeaz:
1) Legarea ARN-polimerazei de matria de ADN n regiunile
promotoare care sunt recunoscute n mod specific, producndu-se
dezrsuciri locale ale helixului.
2) Iniierea formrii lanului de ARN prin formarea primei legturi
diesterice la nivelul regiunii dezrsucite.
3) Alungirea lanului de ARN se face n direcia de la 3 la 5 a
matriei de ADN, n timp ce lanul de ARN crete n direcia 5 la 3.
Matria de ADN transcris i reia conformaia dublu helicoidal, n timp
ce poriunea urmtoare se dezrsucete.
4) terminarea lanului de ARN are loc n momentul n care pe
matria de ADN se recunosc unele puncte de terminare, cu ajutorul unei
proteine specifice.
5) maturarea sau prelucrarea are loc numai dup desprinderea de
pe matri de ADN i este suferit numai de unele molecule de ARN.
Maturarea const n: a) clivarea (ruperea) lanului de ARN (de 45 S) n
lanuri mai mici (de 28 S i 18 S); b) metilarea unor grupri OH din riboz
sau din bazele purinice i pirimidinice.
177
La eucariote, trecerea ARNm din nucleu n citoplasm se face prin
porii nucleeari sub forma unor precursori ribozomali.
S-a demonstrat c, pentru fiecare gen (care are dou lanuri ADN),
numai unul din cele dou lanuri de ADN este copiat, nct o gen
codific o singur protein.
Aplicaiile medicale legate de transcrierea mesajului genetic
constau n folosirea unor inhibitori i a transcrierii n combaterea unor
infecii microbiene sau virale. Astfel, rifamicina (extras din
Streptomyces) i rifampicina (un derivat semisintetic) inhib n mod
specific iniierea sintezei de ARNm. Actinomicina D inhib n mod
specific transcrierea fr a inhiba replicarea ADN sau biosinteza
proteinelor.

6.3.3.Traducerea mesajului genetic n biosinteza proteinelor

n conformitate cu dogma central a biologiei moleculare,
informaia genetic stocat sub forma secvenei de baze n ADN este
transcris (copiat) n secvena de baze din ARNm i apoi este tradus
(concretizat) n secvena ( dispunerea ) aminoacizilor din proteine.
ntruct n acizii nucleici exist numai patru baze azotate diferite,
iar n proteine exist 20 aminoacizi diferii, apare necesitatea existenei
unui cod genetic (o form cifrat) care s permit legarea n proteine a
acestor aminoacizi.
Codul genetic reprezint, astfel, relaia care exist ntre secvena
bazelor n ADN (sau n ARNm) i secvena aminoacizilor n proteine. El
cuprinde 64 secvene (grupuri) de cte 3 nucleotide denumite codoni,
care determin legarea unui aminoacid ntr-o protein, jucnd rolul unor
cuvinte n traducerea informaiei genetice n sinteza proteinelor. Astfel,
codonul U-U-U determin legarea fenilalaninei ntr-o protein.
Codul genetic prezint urmtoarele caracteristici:
a) este degenerat, deoarece legarea unui aminoacid (specificarea
lui) ntr-o protein este determinat de mai muli codoni;
b) prezint 3 codoni nonsens, care nu specific (leag) nici un acid,
ci determin terminarea lanului polipeptidic;
c) este universal, fiind acelai n toate celulele de la bacterii pn la
om.
Sinteza unei molecule de protein, prin asamblarea aminoacizilor,
se face la nivelul ribozomilor, unde se citete informaia genetic de pe
ARNm, participnd i o serie de proteine solubile, precum i aminoacizi
activai legai de ARNt ce prezint: 1) un loc de punct de legare a
aminoacidului i 2) un loc de recunoatere a matriei de ARNm,
reprezentat de o secven de 3 baze, denumit anticodon.
178
Anticodonul de pe ARNt recunoate secvena complementar de 3
baze din codonul de pe ARNm permind legarea specific a
aminoacidului de matri. Pentru un aminoacid (din cei 20 existeni n
proteine) pot exista mai multe molecule diferite de ARNt, legat de faptul
c mai muli codoni pot specifica (lega) mai muli aminoacizi. (Fig. 6.16)


Fig.6.16. Schema moleculei de ARN t

Moleculele de ARNt prezint: a) patru regiuni cu baze
complementare dispuse n dublu helix, denumite tulpini (tulpina acceptor,
tulpina D, tulpina T i tulpina anticodon) i b) 4 regiuni fr baze
complementare denumite bucle (o bucl anticodon, o bucl D, o bucl T
i o bucl variabil).(Fig. 6.16)
Datorit apariiei structurii de dublu helix la nivelul tulpinilor,
molecula de ARNt are o dispunere spaial n forma literei L, cu dou
brae: a) un bra lung ce cuprinde tulpinile T i acceptor. Regiunile dublu
helicoidale sunt perpendiculare una pe alta i conin fiecare cte 10
perechi de baze, ce corespund la o tur de dublu helix. Formarea
regiunilor de dublu helix asigur moleculei o mare stabilitate, iar buclele
ce proemin pot interaciona specific cu alte grupri de atomi. Astfel,
anticodonul este situat la captul braului lung din L, iar aminoacidul
este legat la captul braului scurt din L.



179
Rolul ARNt este de a lega specific aminoacizii liberi din citoplasm
i de a-i transporta n ribozomi, permind legarea lor n lanul
polipeptidic n secvena dictat de ARNm. (Fig.6.17)


Fig.6. 17. Aspectul tridimensional al moleculei de ARN-t

Legarea aminoacidului de ARNt este catalizat de o enzim,
denumit aminoacil-ARN-sintetaz existnd cte o enzim specific
pentru fiecare din cei 20 aminoacizi, care poate lega aminoacidul de
ARNt diferii.
Aminoacidul ARNt-sintetaza catalizeaz dou reacii succesive:
1) activeaz aminoacidul legndu-l de AMP, formnd un compus
intermediar, denumit aminoaciladenilat (aminoacil~AMP), care rmne
legat de enzim pn ntlnete o molecul de ARNt specific pentru
aminoacidul respectiv;

AA + ATP = AA ~ AMP + ADP

2) transfer aminoacidul pe ARNt formnd complexul ARNt
ncrcat ( aminoacil-ARNt ). Energia legturii macroergice din complexul
aminoacil-ARNt poate fi utilizat ulterior n ribozomi pentru formarea
legturii macroergice;

AA~AMP + ARN t = AA~ ARN t + AMP
180

Molecula de ARNt prezint la toate vieuitoarele o structur
asemntoare, perfect adaptat funciei sale, fiind o molecul universal
ca i codul genetic.
Acidul ribonucleic ribozomal (ARNr) este reprezentat de mai multe
specii cu constante de sedimentare diferite. ARNr este sintetizat n
nucleu i intr n constituia celor dou subuniti ribozomale: a)
subunitatea mic (40 S) i b) subunitatea mare (60 S), care se
angreneaz, n citoplasm, cu subunitatea mic, realiznd ribozomul.

6.3.3.1.Mecanismul molecular al biosintezei proteinelor

Formarea legturilor peptidice ntre aminoacizii care compun
proteina are loc n ribozom, sinteza lanului polipeptidic avnd loc n
direcia aminocarboxil. Ribozomul devine funcional numai atunci cnd
are loc asocierea celor dou subuniti. (Fig. 6.18)

Fig.6.18. Schema sintezei proteinelor n celula eucariot
Mecanismul sintezei de proteine, mai bine studiat la E.coli, este
acelai n toate celulele i cuprinde trei faze: 1) faza de iniiere, 2) faza
de elongare i 3) faza de terminare (la fel ca i la sinteza de ADN i de
ARN).
Faza de iniiere ncepe odat cu formarea compusului
formil-metionil-ARNt prin legarea metioninei de un ARNt specific i prin
blocarea gruprii amino prin formilare. n continuare se formeaz
Complexul de iniiere 30 S la care particip formil-metionil-ARNt,
181
subunitatea mic 30 S, ARNm i unele proteine solubile din citosol,
denumite factori de iniiere (IF
1
, IF
2
, IF
3
), precum i GTP. Subunitatea
mic (30 S) se leag de ARNm pe un loc specific situat la circa 10
nucleotide de la captul 5 al ARNm (factorul IF
3
intervenind n aceast
legare).

Biosinteza proteinelor la procariote


Faze Timpi Fenomene
A.Iniiere Formarea compusului
formil metionil - ARNt
- se leag metionina de ARNt
-se blochez gruparea amino prin formilare
-se formeaz complexul de iniiere
1.Inseria unui AA-ARNt
-pe locul A se inser un AA ~ ARNt
B.
Elongare

2.Formarea legturii
peptidice
-se transfer formil metionina de pe locul P
pe gruparea aminoacil ~ ARNt de pe locul A
-pe locul P rmne un ARNt descrcat
-pe locul A se gsete un dipeptidil ~ ARNt


-ARNt desccat prse locul P
3.Translocarea
-dipeptidil ~ ARNt se mut de pe locu lA pe
locul P

-ARNm se deplaseaz spre captul 3
!
C.
Terminar
e
Terminarea sintezei
lanului polipeptidic
-n dreptul locusului A, pe ARNm apare
un codon nonsens

De complexul 30 S se leag apoi subunitatea mare (50 S) a
ribozomului, folosind pentru legare energia rezultat din hidroliza
GTP-ului. S-a format astfel, complexul de iniiere (70 S), n care pe
ribozom exist dou locuri de legare: a) un loc P (de la peptidil) care este
ocupat de formil-metionil-ARNt i b) un loc A (de la aminoacid) neocupat
n complexul de iniiere.
Faza de elongare se realizeaz n trei timpi (subfaze): a) inseria
unui aminoacid; b) formarea legturii peptidice i c) translocarea.
Inseria const n legarea pe locul A din ribozom a unui aminoacid-
ARNt, ce corespunde codonului din ARNm, aflat n dreptul locului A.
Codonul din ARNm este recunoscut de anticodonul ce transport
aminoacidul cerut (specificat) de cele trei nucleotide ale codonului (din
ARNm). Pentru inserie sunt necesare: o molecul de GTP i o protein
din citosol numit primul factor al elongrii. n urma inseriei a rezultat un
complex n care pe locul P se afl formilmetionil-ARNt-ul, iar pe locul A
se afl un aminoacil-ARNt.
Formarea legturii peptidice se produce cu ajutorul unei enzime
denumit peptidil transferaz, existent n subunitatea 50 S a
ribozomului, prin transferul formilmetioninei (de pe locul P) pe gruparea
182
amino din animoacil-ARNt (aflat pe locul A). n urma formrii legturii
peptidice pe locul P rmne un ARNt descrcat, n timp ce pe locul A se
gsete un dipeptidil-ARNt.
Translocarea cuprinde trei fenomene: a) ARNt descrcat prsete
locul P; b) dipeptidil-ARNt se mut (transloc) de pe locul A pe locul P i
c) ARNm se deplaseaz cu trei nucleotide spre captul 3. Datorit
acestui fapt, codonul urmtor de pe ARNm este pregtit pentru a fi citit
de ctre anticodonul unui nou aminoacid-ARNt corespunztor.
Translocarea necesit hidroliza celei de-a treia molecule de GTP i
intervenia celui de al treilea factor al elongrii, denumit translocaz.
Odat ncheiat translocarea, ciclul elongrii se poate repeta,
fiindc locul A a devenit vacant, iar n dreptul su se afl un alt codon,
care poate fi recunoscut de aminoacidul ce prezint anticodonul
complementar. n acest fel un alt aminoacid este legat n locul
polipeptidic (P), iar mesajul genetic nscris n ARNm este citit de ctre
anticodonii de pe ARNt i tradus n formarea unei legturi peptidice
ntre aminoacizi n conformitate cu secvena dictat (specificat) de
codoni.
Faza de terminare a sintezei lanului polipeptidic se declaneaz n
momentul cnd la sfritul fazei de elongare, n dreptul locului A din
ribozom ajunge unul dintre cei trei codoni nonsens (UAA, UGA i UAG);
n citoplasma celulelor normale nu se gsesc molecule de ARN cu
anticodoni camplementari acestor codoni. Dar aceti codoni nonsens
sunt recunoscui de o protein, denumit factor de eliberare (existnd doi
factori de eliberare RF
1
i RF
2
). Factorii de eliberare se leag de locul A i
determin hidroliza legturii dintre polipeptid i ARNt de pe locul P,
elibernd lanul polipeptidic terminat care prsete ribozomul. n
continuare, ribozomul se disociaz n cele dou subuniti, care se
desprind de ARNm, iar ARNt-ul este pus n libertate.
Compoziia lanului polipeptidic sintetizat de un ribozom este
determinat n mod exclusiv de ARNm i nu de felul ribozomului. n acest
mod, aceiai ribozomi pot sintetiza lanuri polipeptidice diferite n funcie
de matria de ARNm pe care sunt legai.

6.3.3.2.Particulariti ale biosintezei proteinelor la eucariote

La eucariote, sinteza proteinelor are loc n ribozomii 80 S din
citosol, iar iniierea sintezei lanului polipeptidic se face prin metionil-
ARNt care nu este formilat ca la bacterii. Factorii de iniiere sunt mai
numeroi i mai compleci la eucariote, ei controlnd viteza sintezei
proteinelor.
Viteza cu care se sintetizeaz proteinele este foarte mare, att datorit
elongrii foarte rapide, ct i datorit faptului c o molecul~a de ARNm
183
este tradus simultan de mai muli ribozomi. Grupul de ribozomi legat de
o molecul de ARNm se numete poliribozom sau polizom. ntr-un
polizom ribozomii sunt dispui la distane de circa 100 nucleotide unul de
altul i fiecare ribozom sintetizeaz cte un lan polipeptidic. (Fig. 6.19)


Fig.6. 19. Schema poliribozomului la eucariote
1- Subunitate mic; 2- Subunitate mare; 3- ARN m; 5-nceperea sintezei;
6- Terminarea sintezei lanului polipeptidic.

n lanul polipeptidic, aminoacizii sunt legai n mod strict n ordinea
(secvena) codificat de gen, nct codul genetic (limbajul bazelor
nucleotidice din ADN i ARNm) este tradus n ordonarea (aezarea)
aminoacizilor din molecula de protein.
Numrul de lanuri polipeptidice care pot fi sintetizate pe o
molecul de ARNm este diferit la procariote, de eucariote. Astfel, la
eucariote pe fiecare molecul de ARNm se sintetizeaz un singur lan
polipeptidic, n timp ce la procariote o molecul de ARNm sintetizeaz
mai multe lanuri polipeptidice. Poriunea din ARNm care codific un lan
polipeptidic se numete cistron i ncepe cu un codon de iniiere (unde
se leag ribozomii) i se termin cu un codon nonsens.
La eucariote ARNm este ntotdeauna monocistronic, pe cnd la
bacterii este de obicei policistronic.
Prin adugarea sau prin delecia (nlturarea) unei baze din ARNm
apar mutaii, deoarece din acel punct de vedere citirea codonilor este
greit, defazat fa de mesajul original, rezultnd alte cuvinte.
La eucariote unele gene apar discontinui. Pn n prezent gena
este definit ca o regiune a cromozomului (ca un fragment de ADN) care
este copiat (transcris) ntr-o molecul de ARNm, iar aceasta este
tradus ntr-un lan polipeptidic. La eucariote secvenele de ADN
(denumite exoni) care codific aminoacizii sunt separate prin segmente
de ADN (denumite introni) care nu codific. Din moleculele de ARNm
precursor (ce apare prin transcrierea genei) sunt ndeprtate poriunile
184
ce corespund intronilor, fragmentele rmase fiind legate cap la cap
printr-un proces de ndire (splicing) ce se pot produce n nucleu n
cursul maturrii ARNm. (Fig.6.20)



Fig. 6.20. Schema procesului de splicing a ARN-ului mesager

i la eucariote exist posibilitatea ca unele secvene de ADN s
produc cel puin dou molecule diferite de ARNm, datorit unor variaii
n fenomenul de ndire. De asemenea, nu toate genele codific
proteine.
Influenarea biosintezei proteinelor cu ajutorul unor antibiotice sau
prin aciunea unor toxine st la baza unor aplicaii sau implicaii
medicale.
Aplicaii medicale
n practica medical sunt folosite antibiotice care inhib biosinteza
proteinelor, acionnd pe subunitatea mic sau mare i pe ribozomi de
tipuri diferite (70 S sau 80 S). Streptomicina i tetraciclinele acioneaz
pe subunitatea 30 S, producnd citirea greit a ARNm (streptomicina)
sau blocnd legarea aminoacil-ARNt pe locul A din ribozomi
(tetraciclinele).
Cloramfenicolul i ciclohexinida acioneaz pe subunitatea mare,
blocnd activitatea peptidil transferazei. Eritromicina acioneaz pe
subunitatea mare (50 S) a ribozomului procariotic, mpiedicnd
translocarea.
Puromicina acioneaz pe ambele tipuri de ribozomi producnd
terminarea prematur a sintezei lanului polipeptidic.
Unele toxine microbiene inhib biosinteza proteinelor la eucariote.
Astfel, toxina difteric produs de Corynebacterium dyphteriae,
blocheaz faza de elongare la eucariote, inactivnd translocaza.
7.DIFERENIEREA I EVOLUIA CELULELOR

185
Diferenierea celular este procesul biologic, n care, pornindu-se
de la o singur celul, se constituie tipuri celulare stabile, deosebite
morfofuncional ntre ele.
n biologie, diferenierea este un proces esenial, de el depinznd
nsi apariia i existena organismelor individuale. Prin difereniere se
realizeaz: 1) reproducerea, n urma creia se formeaz noi indivizi
ntr-o specie; 2) creterea i dezvoltarea organismelor; 3) regenerarea
celulelor sau a esuturilor lezate sau uzate; 4) evoluia speciilor i
adaptarea organismelor la mediu.
Diferenierea celular are caracter universal n lumea vie, fiind
prezent la toate speciile de plante sau animale. Nefiind limitat n timp,
diferenierea celular se desfoar pe tot parcursul vieii individului, din
momentul concepiei i pn n momentul morii organismului.
Intensitatea i amploarea diferenierii sunt variabile n timpul diverselor
perioade ale vieii organismului, nregistrnd o intensitate maxim n
embriogenez. La mamifere, diferenierea celular are un caracter
ireversibil, nct nici o celul difereniat nu-i mai poate redobndi
caracterele embrionare.

7.1.Mecanismele diferenierii celulare

La mamifere, diferenierea celular debuteaz n momentul
fecundrii, cnd se formeaz zigotul. Att zigotul, ct i celulele rezultate
din primele diviziuni se pot diferenia n oricare din tipurile celulare
funcionale ale adultului. Aceste celule care au potenial maxim de
difereniere sunt denumite celule totipotente sau pluripotente i se
caracterizeaz din punct de vedere genetic c au toate genele active
(derepresate) nct accept orice mesaj genetic, putnd urma orice
traseu evolutiv. Ele se pot integra n oricare din regiunile unui embrion
avansat, la care soarta celulelor este definitiv, genernd structuri
specializate n funcie de indicaia primit de la regiunea suport.





Etapele diferenierii celulelor

Etap Denumirea
celulei
Exemple Caracteristici Asupra lor
acionez:
Iniial Celula
totipotent
(pluripotent)
Zigotul i
primele 8-16
blastomere
Toate genele
sunt active
(derepresate)
Factori
determinani
Determinrii Celule Celule Au gene Factori inductori
186
determinate
(direcionate)
foielor
embrionare

active i gene
inactive
(represate)
Apariia
celulelor
permisive
Celule stem
multipoten -
iale
Celule
mezenchi -
male
Hemohistio -
blast
Hemocitoblast
Sunt
permisive
Crete
numrul
genelor
represate
Factori inductori
Apariia
celulelor
progeni-
toare
Celule
stem
direcionate
(formatoare
de colonii)
Celule
multipoten -
iale limfoide
Celule
multipoten -
iale mieloide
Crete
numrul
genelor
represate
Factori inductori
Apariia
celuleor
precursoare
Celule
tinere
(blati)
Proeritro-
blast
Mieloblast
Monoblast
Limfoblast
Crete
numrul
genelor
represate
Factori inductori
Apariia
celulelor
specializate
Celulele
mature
Neuroni,
celule
musculare,
eritrocite,
leucocite
Numrul de
gene active
este
caracteristic
fiecrui tip
celular



O serie de factori extracelulari denumii factori determinani, oblig
fiecare celul pluripotent s aleag un anumit traseu evolutiv,
transformndu-se n celule determinate ( direcionate ).
Determinarea reduce progresiv numrul de tipuri celulare
specializate care pot lua natere din celule embrionare. Astfel, celulele
pluripotente pot genera prin difereniere toate tipurile de celule adulte,
dar mai trziu, odat cu apari,tia celor trei foie embrionare, din fiecare
foi rezult un numr limitat de celule, ca de exemplu: celule nervoase
din ectoderm; celule conjunctive, musculare din mezoderm etc.
Dei cantitativ i calitativ genotipul celulelor pluripotente i
determinate este identic, determinarea i diferenierea celular
represeaz (inactiveaz) un numr variabil de gene, mereu altele n
funcie de tipul de celule specializate. Cu ct vrsta embrionului este mai
avansat, numrul genelor represate este mai mare, iar starea de celul
determinat este ireversibil la mamifere.
187
Factorii care impun alegerea unui anumit parcurs i deci
diferenierea spre un anumit tip de celul specializat se numesc
inductori. Inductorii acioneaz asupra unor celule int, iar aciunea lor
este posibil numai dac celulele int devin permisive, n urma primirii
unor mesaje sau influene directoare.
Permisivitatea apare ca urmare a unor modificri genetice i
structurale ce au loc la nivelul membranei celulare, modificri
determinate de aciunea unui alt inductor anterior. Se remarc faptul c
permisivitatea pentru un anumit inductor este limitat n timp.
Diferenierea celular se realizeaz prin intervenia unui grup
heterogen de factori inductori, care iniial acioneaz asupra unei
populaii de celule pluripotente, iar mai apoi, asupra unor celule
determinate (direcionate). Astfel, n ontogenez numrul determinrilor
succesive coincide cu numrul inductorilor.
n urma aciunii inductorilor i determinrii rezult celulele STEM,
celule de origine, din care vor lua natere anumite tipuri de celule
specializate. Astfel, celulele stem din mduva osoas hematogen sunt
capt de serie pentru hematii, leucocite i trombocite, iar celulele
nedifereniarte din epiteliu sunt capt de serie pentru diverse tipuri de
epitelii.
n organismul adult nu mai exist celule pluripotente, dar fiecare
esut i fiecare organ mai are nc rezerve de celule stem incomplet
difereniate (excepie fcnd esutul nervos i muscular cardiac). Aceste
celule stem i pot continua programul de difereniere, putnd reface
celulele specializate adulte, lezate sau uzate.
La mamifere, celula difereniat i pstreaz aceeai cantitate de
ADN ca i celula pluripotent, iar caracterele generale ale celulelor
difereniate sunt expresia fnotipic a numrului de gene nerepresate din
genotip.
Diferenierea celular se realizeaz n dou etape: a) o etap a
diferenierii intracelular i b) o etap a diferenierii intercelular.
n etapa diferenierii intracelulare, n interiorul celulei se produc
modificri structurale succesive care determin apariia formei i
structurilor specifice celulei difereniate, ca de exemplu modificarea
formei spermatogoniei i apariia flagelului.
n etapa diferenierii intercelulare, modificrile structurale suferite
de un grup restrns de celule dintr-o populaie mai mare determin
apariia unor diferene ntre caracterele celulelor iniiale i caracterele
celulelor provenite din celulele iniiale.
Sub raport biochimic, diferenierea s-a realizat n momentul n care
n celul s-a acumulat o substan specific, de regul o protein cu
funcie enzimatic, ca de exemplu hemoglobina n hematii, actina i
miozina n celulele musculare.
188
Ca rezultat al diferenierii celulare apar funcii specifice fiecrui tip
celular constituit, precum contractilitatea celulelor musculare, mobilitatea
spermatozoidului, transportul de oxigen i bioxid de carbon.

7.2. Caracteristicile celulelor difereniate

Caracterele celulelor difereniate sunt reprezentate de:
1) Specializarea funcional, care reprezint principalul obiectiv al
diferenierii celulare, fr a se contrapune cooperrii cu alte tipuri
celulare.
2) Morfologia (forma i structura) celulelor difereniate este
specific n sensul dezvoltrii mai accentuate a organitelor celulare
necesare ndeplinirii funciilor specifice. Astfel, reticulul endoplasmic
rugos i complexul Golgi sunt foarte dezvoltate n celulele implicate n
sinteza de proteine, iar aparatul de contracie, respectiv filamentele de
actin i miozin, apare foarte dezvoltat n celulele musculare.
3) Compoziia chimic apare specific, datorit acumulrii unor
proteine specifice sau datorit desfurrii unor activiti enzimatice
specifice.
4) Adezivitatea pe substrat, care permite formarea esuturilor i
organelor.
5) Interrelaia cu alte celule sau jonciunea, prin care se realizeaz
solidarizarea ntre ele n cadrul unui esut. Prin jonciunile permeabile, de
tip gap pot trece anumite molecule cu rol n reglarea funcional,
permind funcionarea sincron a celulelor din esuturi.
6) Inhibiia capacitii de diviziune. Celulele difereniate sunt greu
divizibile sau indivizibile (ca neuronul, hematia, celula muscular
cardiac etc). Celulele difereniate divizibile i pot regla ritmul de
diviziune n funcie de necesiti (ca n cazul hepatocitelor). Capacitatea
de diviziune este mai ntrziat sau inhibat n cazul celulelor cu grad de
specializare avansat. De asemenea, n cazul unor esuturi n care
celulele specializate au o durat de via foarte scurt, ca urmare a
solicitrilor func,tionale intense (exemplu n epiteliu interstiial) se
ntlnesc celule tinere, incomplet difereniate, capabile s se divid
pentru refacerea populaiei de celule adulte specializate, epuizate.


189
7) Inhibiia de contact, care apare atunci cnd densitatea celulelor
atinge un anumit grad ntr-un esut (ca, de exemplu n regenerarea
epiteliilor dup lezionare) sau n culturile de celule. Prin aceast
proprietate celulele sunt oprite din migrare i proliferare.

Celule specializate



7.3. Caracteristicele celulelor nedifereniate

Celulele nedifereniate prezint urmtoarele caracteristici.
1) Nu au funcii specifice, celulele nedifereniate pot ndeplini un
singur rol, acela de a genera diverse tipuri de celule specializate n urma
determinrilor succesive.
2) Nu au structuri specifice, toate celulele nedifereniate sau parial
difereniate sunt asemntoare prezentnd: nucleul mare, eucromatic,
citoplasma redus cantitativ, slab bazofil datorit numrului sczut de
ribozomi.
3) Nu au compoziii chimice specifice.
4) Prezint adezivitate pe substrat, nct atunci cnd vin n contact
se recunosc, ader i formeaz esuturi sau organe.
5) Joncionarea cu alte celule se poate realiza prin jonciuni de tip
gap, cu un diametrul mai mic dect n cazul celulelor difereniate. Aceste
jonciuni prezint un mare dinamism desfcndu-se i refcndu-se cu
rapiditate.
6) Prezint o mare capacitate de diviziune, ceea ce permite unui
numr redus de molecule inductoare care acioneaz iniial asupra unui
numr foarte mic de celule s genereze un numr mare de celule.
Denumirea celulelor Specializarea funcional
Eritrocite Transport de oxigen i dioxid de
carbon
Miocite Contracie
Enterocite Absorbie i metabolism
Celule caliciforme Sintez de substane mucoase
Exocrinocitele pancreatice Sintez i secreie de enzime
Endocrinocitele pancreatice Sintez de hormoni pancreatici
Endocrinocitele din gonade Sintez de hormoni steroizi
Nefrocitele Transport de ioni
Neuroni Generare i conducere de
impulsuri nervoase
Macrofage Digestie intracelular
190
7) Prezint inhibiie de contact, ca i n cazul celulelor difereniate.
n momentul n care iau contact cu alte tipuri de celule, celulele
nedifereniate se opresc din migrare, putnd s realizeze esuturi i
organe.
Celulele mature pot suferi fenomenul de modulaie i de
metaplazie.
Modulaia este fenomenul prin care n celulele mature, n anumite
condiii fiziologice sau patologice, pot s apar modificri structurale i
funcionale, minore i pasagere, reversibile, care le fac s semene cu
celula tnr din care au provenit. Astfel, fibrocitele se pot transforma n
fibroblaste n culturile de celule, datorit condiiilor de mediu.
Metaplazia este fenomenul de transformare a unei celule
difereniat ntr-o celul difereniat de alt tip. Metaplazia apare exclusiv
la esutul epitelial i conjunctiv.
7.4.MBTRNIREA I MOARTEA CELULELOR

n viaa sa, celula parcurge urmtoarele stadii (sau faze): 1) un
stadiu de funcionare normal; 2) mbtrnirea (sau senescena); 3)
agonia; 4) moartea celular.
Celule mbtrnite sufer o serie de modificri morfologice precum:
a) scderea volumului celular; b) scderea ritmului mitotic i creterea
procentului de celule moarte, ntr-o populaie de celule; c) modificri ale
nuceului i d) modificri ale citoplasmei.


Fig.7.1. Modificri ale nucleului n timpul nbtrnirii i morii celulelor
1-Picnoza; 2- Cariorexis; 3- Carioliz

Modificrile nucleului sunt reprezentate de: a) picnoza nuclear, care
const n retractarea i condensarea nucleilor, colorare intens
(hipercromie) i dispariia detaliilor de structur; b) cariorexis sau
fragmentarea nucleului; c) carioliza sau dispariia (dizolvarea) nucleului.
Modificrile citoplasmei constau n: scderea bazofiliei,
vacuolizarea citoplasmei, acumularea de pigmeni de uzur i lipide ca
urmare a scindrii moleculelor lipoproteice. (Fig.7.1)
191

n celulele n agonie se observ: a) modificri nucleare
asemntoare celor ntlnite n celulele mbtrnite; b) modificri ale
organitelor citoplasmatice, cu eliberare de fosfolipide i formarea de
figuri mielinice; c) modificarea strii coloidale a citoplasmei (fluidificare
sau gelificare) i modificri ale curenilor citoplasmatici.
Ipotezele i teoriile privind mbtrnirea i moartea celulelor se pot
grupa n dou categorii: a) o teorie a erorilor i b) o teorie a morii
programate a celulelor.
Teoria erorilor consider c senescena celular (mbtrnirea)
este o consecin a acumulrii defectelor genetice n urma aciunii
radiaiilor, agenilor mutageni sau radicallor liberi din mediu asupra ADN-
ului sau asupra diferitelor etape din transcrierea i traducerea informaiei
genetice. Rezultatul acestei aciuni este producerea unor erori n
sinteza unor proteine i n funcionalitatea lor. O variant a teoriei erorilor
o reprezint teoria invaziei virale care consider senescena celular ca
fiiind o consecin a ncorporrii ADN-ului viral n genomul celulei. Prin
teoria erorilor nu se poate explica ns variabilitatea duratei de via a
diferitelor tipuri de celule.
Teoria morii programate, recent elaborat, susine c fiecare tip
de celul are nscris n programul genetic o anumit durat de via,
dup care celula moare. Aceast teorie este sprijinit de rezultatele
experimentale obinute de HAYFLICK (1986), care, n culturi de celule, a
observat c fibroblastele provenite din esutul embrionar se divid de 50
de ori, n timp ce la fibroblastele provenite de la persoane de diferite
vrste, numrul diviziunilor scade treptat cu vrsta. Dac culturile de
celule sunt ngheate mai muli ani, la dezgheare, culturile se divid exact
de attea ori, ca i celulele de aceeai generaie nengheate.
Descifrarea mecanismului programrii morii n celulele normale poate
oferi cheia vindecrii cancerului i prelungirea vieii.
mbtrnirea celular apare ca un proces cu semnificaii structurale
i funcionale variate pentru diferitele tipuri de celule existente n
organism. Astfel, celulele cu ritm rapid de diviziune au un proces de
mbtrnire cu un mecanism de producere diferit fa de unele celule
nedivizibile. Orice tip celular difereniat divizibil parcurge n cursul viaii
organismului un numr precis de diviziuni programate genetic, nct
mbtrnirea poate s se traduc prin scderea ritmului sau chiar
oprirea complet a procesului de diviziune. n cazul celulelor nedivizibile
n cursul vieii organismului (neuronul, celulele musculare) mbtrnirea
se traduce prin acumularea de macromolecule cu proprieti diferite de
cele iniiale sau prin acumularea de substane nedegradabile (ca
lipofuscin etc.).
ntre senescena celular i mbtrnirea organismului ntreg este
o mare diferen, organismul animal fiind format din mai multe sisteme.
192
Astfel mbtrnirea organismului este rezultatul mbtrnirii fiecrui
sistem n parte i mai ales rezultatul mbtrnirii moleculelor, celulelor,
esuturilor i organelor, fiecare dintre acestea mbtrnind ntr-un mod
specific, diferit.

Moartea celulei
Studierea mecanismelor i a cauzelor care produc moartea celulei
constiuie obiectul de studiu al tanatologiei celulare.
Moartea celulei se produce instantaneu, nct post mortem se
poate observa: a) retractarea pseudopodelor i adoptarea unei forme
sferice; b) o colorare difuz a nucleului i citoplasmei cu colorani vitali;
c) balonarea i dispariia mitocondrilor; d) picnoz, cariorexis i carioliz
nuclear. Aceste modificri sunt rezultatul eliberrii enzimelor din
lizozomii alterai, ca urmare a ncetrii circulaiei sanguine i constituie
un semn cert al morii organismului animal.
Sunt descrise trei tipuri de moarte a celulelor: moartea celular
programat, apoptoza i necroza.
Moartea celular programat sau oncoza const n
autodistrugerea celului prin activarea unui program genetic propriu i
specific. Se ntlnete n cursul dezvoltrii ontogenetice embrio-foetale,
pe parcursul dezvoltrii sau funcionrii unor organe (de exemplu: in-
voluia glandei mamare, la ncheierea unui ciclu de lactaie sau involuia
uerului la ncetarea strii de gestaie.
Apoptoza este o moarte celular lent, care intervine dup
primirea unor semnale intrinseci i se realizeaz prin mecanisme proprii.
Prin acest tip de moarte celular, organismul se elibereaz de anumite
celule care nu-i mai sunt utile (celule lezate, celule n exces, celule cu
ADN-ul modificat i nereparat, etc)
n producerea apoptozei se pot distinge patru stadii evulutive : un
stadiu molecular, un stadiu de contractare, un stadiu de clivaj i un
stadiu de fagocitoz.
n stadiul molecular sau de preangajare apar modificri ale
membranei i citoplasmei care i permit celulei s recepioneze semnale
(de obicei chimice: AMP-c, inozitol trifosfatul, ioni de calciu, etc), ce
produc modificarea permeabilitii membranelor celulare, dispariia
microvililor , dispariia jonciunilor i pierderea contactului cu celulele
adiacente. Ca o consecin a acestor fenomene se produce activarea
unor gene de liz sau gene letale (protooncogene c-fos, c-myc,
antioncogena P 53). Aceste gene induc sinteza de macromolecule
efectoare sau activatoare ale apoptozei (proteina de stress hsp 70,
catepsina D etc.) Celulele prsesc angrenajul tisular, citosolul se
condenseaz, plasmalema prezint invaginaii adnci, iar n nucleu
apare o hipercromatoz marginal, datorit dispunerii periferice a
193
eucromatinei nucleare. n acest stadiu ribozomii i mitocondriile nu sunt
modificate,iar celula este nc capabil s elimine colranii vitali
n stadiul urmtor, de clivaj n corpi apoptotici, cisternele reticulului
endoplasmic i unii saci golgieni se vacuolizeaz, iar fibra de cromatin
este fragmentat, sub aciunea unor endonucleaze, dependente de
calciu i sensibile la zinc. Apar corpii apototici cu aspectul fragmente
celulare delimitate de plamalem i coninnd citosol, organite i
oligonucleozomi.
Stadiul de fagocitoz i de eliminare a corpilor apoptotici este de
scurt durat, deoarece corpii apoptotici sunt recunoscui imediat de
lectine i receptorii macrofagelor i eliminai prin fagocitoz.
Citonecroza sau necroza sau necrobioza este o moarte celular
violent. Se produce sub o aciune patogen intens ce depsete
posibitile de adaptare ale celulei i cuprinde un numr mai mare de
celule. ntr-o prim faz celula se tumefiaz, apoi lizozomii elibereaz
hidrolazele acide, nct celulele se lizeaz n totalitate,genernd o
reacie inflamatorie n teritorillie nvecinate. Nucleul trece prin modificri
profunde (picnoz, carirexis i carioliz).Celulele necrozate i mresc
volumul, contrar fa de ceea ce se ntmpl n apoptoz.



7.5. Recunoaterea celular

Celula posed capacitatea de a se recunoate unele pe altele n
mod specific. Astfel, dac un embrion de gin este disociat n celule
independente, prin tratament cu tripsin, dup cteva ore celulele aflate
n suspensie se agreg (se grupeaz) din nou. Dac se amestec celule
ectodermice i mezodermice, iniial se formeaz un conglomerat sferic,
dar dup 1-2 zile, celulele se separ dup tip, cele mezodermice
dispunndu-se la interior, iar cele ectodermice la exterior. Fenomenul se
datoreaz glicoproteinelor prezente n membrana citoplasmatic, care
formeaz molecule specifice, capabile s transmit informaia genetic.
n cultur fenomenul recunoaterii celulare se manifest n cazul
celulelor normale prin inhibiia de contact nct contactul cu peretele
lateral al vasului i cu celulele vecine ofer celulei informaia necesar
pentru oprirea diviziunii.
Inhibiia de contact este absent n cazul celulelor maligne i a
unor celule transformate, care apar spontan n culturile de celule
normale.
Pierderea inhibiiei de contact nu este ns un criteriu suficient
pentru a defini o celul malign sau o celul transformat. Astfel n 1960,
AUB a descoperit c celulele maligne i transformate au un plus nc o
proprietate care le deosebete de celulele normale, ele fiind aglutinate
194
de lectine (sau fit - hemaglutinine) care sunt proteine vegetale ce se
leag de glicolipidele i glicoproteinele din membranele celulelor
transformate i tumorale.

7.6.ONCOGENELE

Oncogenele sunt o categorie de gene, care pot s determine
transformarea unei celule normale ntr-o celul canceroas. Sunt
considerate o form mutant a unei gene normale (proto-oncogen)
implicat n creterea i diviziunea celulelor.
Modificrile de membran ale celulelor maligne se datoresc
modificrilor intervenite n exprimarea unor gene, care determin
compoziia i proprietile membranei celulare periferice, ceeace face ca
celulele maligne s aib o capacitate de cretere autonom, ele
reproducndu-se i prolifernd independent de mecanismele normale
de reglare.
Un model al genezei cancerelor (cancerogenezei) propus de
HUEBNER i TODARO (1969) susine c n toate celulele normale
exist un virus integrat n cromozomi (un provirus). La un moment dat se
produce activarea uneia din genele virale (denumit oncogen) care
codific proteine ce pot s transforme o celul normal ntr-o celul
malign.
S-a constatat c, n cromozomii umani, exist gene care au
secvene foarte asemntoare cu oncogenele virusurilor cu ARN
(denumite v-oncogene). Astzi se tie c nu oncogenele celulare provin
din cele virale (deci nu sunt virusuri integrate), ci dimpotriv virusurile au
preluat din celulele normale aceste gene.
Oncogenele celulare au fost denumite i proto-oncogene i se pare
c s-au conservat, n evoluie, un timp foarte ndelungat, ndeplinind
funcii foarte importante. Pn n prezent nu se cunoate ce rol au n
celula normal i nici ce este modificat, atunci cnd se produce cancerul,
determinnd perturbri n exprimarea oncogenelor. n cancer s-au
descris modificri ale cromozomilor ca ruperi de cromozomi i transferuri
ale fragmentelor pe ali cromozomi, oncogenele fiind localizate tocmai n
locul n care se rup cromozomii sau n fragmentele translocate.
Sunt cunoscute 18 proto-oncogene, care se pot clasifica n dou
clase: a) myc i b) ras.
Oncogenele myc intervin n codificarea proteinelor nucleare,
regleaz transcrierea i induc transcrierea unor gene eseniale, critice
pentru proliferarea celular.
Oncogenele ras codific o serie de proteine ce se localizeaz n
citoplasm i determin modificri de form, de adezivitate i de
recepionare a unor semnale de cretere. Se pare c o celul devine
transformat malign ntruct secret n exces un factor stimulator al
195
creterii celulare, care printr-un mecanism autocin suprastimuleaz
nsi creterea celulei care l-a produs.
Date recente par a indica c o singur oncogen nu poate produce
cancer, fiind necesar colaborarea mai multor oncogene care intr n
activitate n fiecare din etapele carcicogenezei. Cunoscndu-se
mecanismele moleculare ale malignizrii se pot identifica punctele unde
aceasta va putea fi ntrerupt nct se sper c biologia molecular va
contribui la adoptarea unei adevrate terapii a cancerelor.

195
transformat malign, ntruct secret n exces un factor stimulator al
creterii celulare, care printr-un mecanism autocrin suprastimuleaz
nsi creterea celulei care l-a produs.
Se consider c o singur oncogen nu poate produce cancer,
fiind necesar conlucrarea mai multor oncogene care intr n activitate n
fiecare din etapele carcicogenezei. Cunoscndu-se mecanismele
moleculare ale malignizrii se pot identifica punctele unde aceasta va
putea fi ntrerupt nct se sper c biologia molecular va contribui la
adoptarea unei adevrate terapii a cancerelor.

8.MATRICEA EXTRACELULAR

Matricea extracelular sau intercelular este mediul n care
triesc i i desfoar activitatea diferitele tipuri de celule ale
organismelor pluricelulare. n acest mod, celulele se afl n contact cu o
reea de macromolecule, denumit matricea extracelular, care ocup
spaiul intercelular continundu-se cu glicocalixul.

Matricea extracelular


Componente Ultrastructuri Compoziie molecular

Membrana
bazal
A.Lamina bazal
(lamina lucida +
lamina reticularis)
B. Lamina
reticular


colagen IV
proteoglicani (perlecan)
fibronectin
laminin
Fibre de colagen colagen fibrilar (I, II, III )
colageni asociai fibrilelor ( IX, XII)
Fibre
intercelulare
Fibre elastice
(oxitalanice, de
elaunin)
elastina
fibrilina
elaunina
Fibre de reticulin colagen III



Substan
fundamental



astructurat
- Glicozaminaglicani: acidul
hialuronic,condroitin sulfaii, keratan
sulfaii,heparina
- Proteoglicanii : agrecan,sindecan,
betaglican)
- Glicoproteinele structurale :
fibronectina,laminina,condronectina,
uvomorulina, glicoproteina 115
Lichid tisular astrucuturat ap, ioni, micromolecule de proteine

196

Matricea extracelular este compus dintr-o mare diversitate de
molecule de proteine i de poliglucide,care sunt asamblate ntr-o reea,
ce menine strnse raporturi cu suprafaa celulelor, care le
sintetizeaz.Este bogat n polimeri fibrilari, n special de colagen, care
rezist mai mult dect celulele la diferite solicitri mecanice.
Exist mari diferene n cantitatea, tipul de molecule i modul de
organizare a matricei extracelulare, fiecare form de organizare fiind
adaptat la solicitrile funcionale ale esutului.Astfel,matricea
extracelular se calcific n esutul osos i n dini, este transparent n
cornee.n esutul conjunctiv, matricea este mai abundent dect n alte
tipuri de esuturi, nct celulele apar relativ mai rare.
Matricea extracelular particip la realizarea unor structuri
specializate precum: membranele bazale, cartilagiile i tendoanele. iar
mpreun cu depunerea cristalelor de fosfat de calciu particip la
formarea oaselor i dinilor.
Funciile matricei extracelulare sunt multiple: a) stabilizeaz
structura fizic a esuturilor; b) lubrefiaz, amortizeaz ocurile mecanice
i asigur elasticitatea esuturilor i organelor; c) asigur i controleaz
adezivitatea celular, acionnd ca un clei intercelular universal; d)
influeneaz i controleaz creterea, diferenierea, proliferarea i
migrarea celulelor; e) ndeplinete un rol metabolic activ.
n alctuirea matricei extracelulare intr trei componente: a)
membrana bazal; b) fibrele intercelulare (colagene, elastice i
reticulare) i c) substana fundamental a matricei.

8.1.Membrana bazal

Membrana bazal (membrana basalis) sau lamina bazal este o
structur special situat sub celulele epiteliale (pe care le separ de
esutul conjunctiv subiacent) sau n jurul unor celule individuale
(musculare, adipoase, celula Schwann).
n histologia clasic, termenul de membran bazal a fost atribuit
structurilor alctuite dintr-o lam fin polizaharidic, ce ndeplinea rolul
de a cimenta baza epiteliilor i care se asociaz cu o tram reticular
fin, n contact cu esutul conjunctiv.
Lama poliglucidic a fost evideniat selectiv prin impregnri cu
sruri de argint sau prin reacia PAS cnd se coloreaz n rou purpuriu.
Epiteliile n marea lor majoritate, prezint membrane bazale de
form lamelar, cu o grosime de ordinul zecilor de nanometri (40-120, n
epiderm, epiteliul cilor respiratorii, glandele exocrine). Membrane
bazale mai groase (de civa micrometri) sunt prezente la nivelul
epiteliilor corneei (anterior i posterior), cristalinului. n alte cazuri, ca n
epiteliul vezicii urinare, existena membranei bazale a fost pus la

197
ndoial n histologia clasic, grosimea ei fiind sub puterea de rezoluie a
microscopului optic. n glomerulul renal (n foia visceral a capsulei
Browmann) sau n epiteliul alveolar, membrana bazal este singura care
se interpune ntre epiteliul respectiv i endoteliul capilarelor sanguine,
acionnd ca un filtru foarte selectiv. (Fig.8.1)


Fig.8.1.Ultrastructura membranei bazale
1- Nucleu; 2- Citoplasm; 3-Plasmalem; 4- Membrana bazal; 5- Fibre conjunctive;
6.Lamina lucida; 7- Lamina densa; 8- Lamina reticularis; 9- Colagen

La microscopul electronic, membrana bazal se prezint ca o
structur matriceal fin care se interpune ntre esuturile epiteliale i
esutul conjunctiv subiacent. Membrana bazal prezint n alctuirea sa
trei structuri lamelare suprapuse: 1) lamina lucid (lamina lucida), cu
grosime de 10 nm, adiacent plasmalemei bazale a celulelor epiteliale,
omogen i traversat de rare filamente fine; 2) o lamin dens (lamina
densa s.basalis), cu grosime de 20-30 nm format din filamente fine,
abundente, cuprinse ntr-o matrice amorf, dens i 3) o lamin
reticulat (lamina fibroreticularis), care face trecerea la matricea esutului
consjunctiv.
Membrana bazal este produs, prin secreie, de ctre celulele ce
se sprijin pe ea i se leag prin dispozitive joncionale speciale de
adezivitate, denumite hemidesmozomi. n epiteliul stratificat pavimentos
cornificat al epidermului, lamina basalis este ancorat de esutul
conjunctiv subiacent prin fibrile de ancorare (anchoring fibrils), formate
colagen VII.
Compoziia chimic a membranelor bazale variaz de la un esut la
altul, de la o regiune la alta a aceleiai lamine i cuprinde: colagen (de
tipul IV ), proteoglicani (precum un mare heparan sulfat, denumit
perlecan), fibronectin, entactina i laminina.
Laminina este una din primele proteine ale matricei extracelulare,
sintetizat de celulele embrionare. n stadiile timpuriii ale structurrii,

198
lamina bazal este format dintr-o reea de laminin, colagenul IV lipsind
sau fiind redus cantitativ.



Fig.8.2. Componentele membranei bazale

Laminina este o macromolecul (850.000 daltoni), complex
flexibil, format din trei lanuri polipeptidice foarte lungi, legate ntre ele
prin legturi disulfidice i dispuse n fom de cruce asimetric. Are mai
multe domenii funcionale care leag colagenul IV, heparan sulfatul,
entactina, iar unul sau mai multe domenii se leag de unele de pe
suprafaa celulei proteine receptori. Asemntor colagenului IV,
moleculele de laminin pot forma, in vitro, o reea prin stabilirea de
interaciuni ntre capetele braelor moleculei de laminin.
Entactina, o molecul proteic cu aspect de halter, se leag
strns de braul scurt al fiecrei molecul de laminin. totodat entactina
se mai leag de colagenul IV, jucnd rolul unei punii de legtur ntre
colagenul IV i reeua de laminin din membrana bazal.
Funciile membranei bazale sunt multiple i complexe:
1) Acioneaz ca un filtru semipermeabil selectiv, reglnd trecerea
macromoleculelor (exemplu, din snge n urin, la nivelul glomerulilor
renali). Heparan sulfatul joac un rol mportant n realizarea acestei
funcii, nct atunci cnd lanurile de glicozaminoglicani sunt distruse
enzimatic, funcia de filtru selectiv este distrus. (Fig. 8.2)
2) Acioneaz ca o barier celular n epitelii, oprind trecerea
fibroblastelor,nct acestea nu ajung n contact direct cu celulele
epiteliale, dar permite trecerea macrofagelor, limfocitelor i a
prelungirilor nervoase.

199
3) Particip la regenerarea esuturilor lezionate (epitelii, muchi,
nervi), funcionnd ca un suport pentru deplasarea celulelor n cursul
regenerrii esuturilor epiteliale, a jonciunilor neuromusculare.
n cazul jonciunii neuromusculare, membrana bazal care
nconjoar celula muscular prezint o poriune joncional care se
interpune ntre terminaiile neuronului motor i plasmalema celulei
musculare. Aceast poriune joncional joac un rol central n refacerea
sinapsei dup lezarea nervului sau a muchiului.Astfel, membrana
bazal joncional ghideaz terminaiile nervoase motorii i controleaz
localizarea receptorilor pentru acetilcolin n plasmalem celulei
musculare.
n extractele obinute din membrana bazal joncional s-a
identificat o nou protein matriceal, denumit agrin, care adaugat la
culturile de celule musculare, iniaz apariia de structuri sinaptice n
plasmalem. Agrina este produs nu numai de neuronii motori i pare a
avea rolul n configurarea ansamblului de receptori i de alte
macromolecule postsinaptice.
4) Particip la recunoaterea intercelular i la ghidarea celulelor,
n timpul dezvoltarii embrionului. Astfel, s-a observat c mutaia unei
gene care codific o protein asemntoare lamininei perturb cile pe
care unele celule mezodermice i axoni nervoi se deplaseaz pe
memebrana bazal ce susine epidermul.
5) Membranele bazale sunt capabile s: induc diferenierea
celular, s determine polaritatea celular, s influeneze metabolismul
celular, s organizeze proteinele din membrana plasmatic adiacent i
s constituie o cale specific pentru migrarea celulelor.

8.2. Fibrele intercelulare

Fibrele intercelulare sunt reprezentate de: a) fibrele de colagen;
b) fibrele elastice cu varianta lor fibrele oxitalanice i c) fibrele de
reticulin.

8.2.1. Fibrele de colagen

Fibrele de colagen (Fibrae collagenosae) sunt alctuite din
proteine fibroase (sau scleroproteine), constituite din molecule de
colagen, care reprezint aproximativ 25-30% din totalul proteinelor din
organism.
Molecula de colagen are o lungime de 300 nm i un diametru de
1,5 nm, fiind format din trei lanuri polipeptidice numite lanuri alfa,
rsucite n triplu helix. Configuraia de triplu helix a moleculei de
colagen este stabilizat prin puni de hidrogen i legturi bisulfidice,
realizate ntre cele trei lanuri, din care dou lanuri alfa 1 (
1
) sunt

200
asemntoare ntre ele prin frecvena aminoacizilor, dar difer de cel de
al treilea lan, denumit lan alfa 2 (
2
).
Lanurile alfa pot fi de 25 tipuri diferite, fiecare fiind codificat de
cte o gen proprie. Un lan conine 1000 radicali de aminoacizi, este
rsucit n helix spre dreapta, pe fiecare tur existnd o triplet de
aminoaci ( glicin -prolin -hidroxiprolin). Prolina are o form sferic,
stabilizeaz conformaia helicoidal n fiecare lan .Glicina, cel mai mic
aminoacid din lan (avnd numai un atom de hidrogen n lan) permite
mpacetarea strns a celor trei lanuri pentru a forma n final triplu
helixul de colagen. Genele care codific lanurile sunt foarte mari,
ajungnd la o lungime de 44 Kilobaze i conin n jur de 50 exoni. Multi
exoni au o lungime de 54 (sau un multiplu de 54) de nucleotide, ceea ce
sugereaz c colagenii iau natere prin multiple duplicaii ale unei gene
primordiale ce conine 54 nucleotide i codific tripleta Gly-X-Y (glicin-
prolin-hidroxiprolin).


Fig.8.3. Schema moleculei de colagen IV
A-Domeniu necolagenic 1 (globulus); B- Domeniu necolagenic 2; C- Fragment 7 S;
D-Segment major; E- Zona mobil a moleculei.

Exist 25 lanuri care pot fi asamblate n mai mult de 10.000
tipuri de molecule de colagen, dintre care numai 15 sunt mai bine
cunoscute. Principalele tipuri de colagen din esutul conjuctiv sunt
colagenul de tip I, II, III,IV, V i XI (Fig.8.3).
Colagenul de tip I, fibrilar, este cel mai comun,fiind principalul
colagen din piele, tendoane, oase i capsule. Prezint o structur
molecular tipic, n triplu helix (Fig.8.4).
Colagenii de tip IV i VII formeaz reele (network-forming
collagens).Moleculele de colagen IV formeaz o estur care ocup o
parte important din membrana bazal. Moleculele de colgen de tip VII
formeaz dimeri, care ntr n structura fibrilelor de ancorare (anchoring
fibrils), mai abundente n piele i care ajut la ancorarea membranei
bazale a epidermului la esutul conjunctiv subiacent. Colagenii de tip IX
i XII, denumii colageni asociai fibrilelor (fibril-associated collagens)

201
acoper suprafaa acestora i particip la legarea fibrilelor att ntre ele,
ct i de ali componeni ai matricei extracelulare.

Fig.8.4. Lanurile polipeptidice ale moleculei de colagen

Colagenul de tip I, II i III polimerizeaz sub form de fibrile de
colagen i organizeaz colagenul fibrilar care intr n alctuirea fibrelor
de colagen i reticulin.
Colagenul de tip IV i V nu formeaz fibrile, fiind colagen afibrilar i
intrnd n structura membranelor bazale i nvelitorilor fetale.
n mediul extracelular, moleculele de colagen polimerizeaz,
formnd microfibrile de colagen (microfibrilla colagenoidea), cu
diametrul de 10-300 nm, lungi de mai multe sute de microni, observabile
n electronomicrografii. Fiecare microfibril de colagen prezint o
alternan regulat de benzi clare i ntunecate, ce se succed cu o
periodicitate de 67 nm, datorit dispunerii ordonate a moleculelor. n
microfibrile, moleculele de colagen (sau tropocolagen) sunt dispuse
paralel ntre ele i n scar, aprnd astfel, de-a lungul microfibrilei,
zone lacunare (gap) de 35 nm ce alterneaz regulat cu zone de
suprapunere. Zonele sau benzile lacunare apar negre la microscopul
electronic, deoarece au mai muli radicali liberi care fixeaz mai uor
colorantul negativ. Mrimea gap-ului este astfel aranjat, nct se repet
dup 5 molecule de colagen. (Fig.8.5)



Fig.8.5. Dispunerea microfibrilelor n fibra de colagen

Microfibrilele de colagen se leag ntre ele, prin interaciuni
covalente transversale, ce se stabilesc ntre radicalii de lizin din

202
moleculele constituiente, formnd fibrilele de colagen (fibrilla
colagenosa), groase de 0,2 - 0,5 m. Dac legturile transversale sunt
inhibate, rezistena la ntindere este foarte redus, iar formaiunile
colagenoase din piele,tendoane i vase devin fragile, rupndu-se. n
unele structuri (tendonul Ahile), legturile transversale sunt foarte dese,
asigurnd o foarte mare rezisten la intindere.
Fibrilele au diametre variate i se organizeaz diferit. n pielea
mamiferelor se dispun n reele pentru a rezista la traciuni pe mai multe
direcii.n tendoane, se dispun n benzi parale, orientate n axul major al
tensiunii. n osul matur i n cornee, se dispun n lamele,iar fibrlele dintr-o
lamel sunt paralele ntre ele, dar perpendiculare pe cele din lamela
nvecinat.
Celulele conjunctive regla mrimea i dispunerea fibrilelor de
colagen, prin ghidarea dispunerii moleculelor de colagen dup secreie
n strns asociere cu plasmalemma. n plus, organizarea spaial a
fibrilelor de colagen este influenat i de interaciunile cu alte molecule
din matricea extracelular. Astfel, molecule de colagen de tip IX i XII
sunt produse de nsui celule conjunctive locale i devin colageni
asociai fibrilelor.
Colagenii asociai fibrilelor difer de colagenii fibrilari prin mai multe
particulariti: - au structura triplu helicoidal ntrerupt de unul sau dou
domenii nonhelicoidale, ceea ce le confer mai mult flexibilitate; - rein
propeptidele dup secreie; - nu se grupeaz pentru a forma fibrile;- se
leag periodic de suprafaa fibrilelor din colagenii fibrilar. Astfel,
colagenul de tip IX se leag de colagenul II, coninut n cartilagii, cornee
i corpul vitros.Clagenul de tip XII se leag de colagenul I din tendoane
i din alte esuturi. Colagenii asociai fibrilelor au rolul s medieze att
interaciunile fibrelor ntre ele, ct i cu alte molecule din matrice, jucnd
un rol deosebit n dispunere fibrilelor.
Un numr variabil de fibrile de colagen se asociaz i formeaz
fibre de colagen(fibra collagenosa), cu grosimi ntre 1 i 20 m. La
rndul lor, fibrele sunt unite ntre ele prin ca hexoze, care confer o
reacie PAS-pozitiv fibrelor de colagen.
Fibrele de colagen sunt cilindrice lungi i sinuoase cu capete care
se pierd n matricea extracelular. Sunt denumite i fibre albe i nu se
anastomozeaz ntre ele, dar se pot grupa n benzi, n unele esuturi
conjunctive. Sunt foarte rezistente i apar birefringente la microscopul de
polarizare. Fiind acidofile se coloreaz n roz cu eozina, n albastru prin
coloraia tricromic Mallory i n verde cu coloraia tricromic Masson.
Pot fi degradate sub aciunea colagenazei, care elibereaz molecula de
tropocolagen la un anumit nivel i mparte triplul helix n dou fragmente
inegale, unul reprezentnd 75% din molecul, iar cellalt 25%. Numai n
cazuri rare se reueste s separe unul de altul cele trei lanuri ale
moleculei de colagen.

203
Formarea (geneza) fibrelor de colagen
Colagenul este produs (sintetizat i secretat) de ctre fibroblaste
(n esuturile conjunctive), condroblaste (n cartilaj), osteoblaste (n
esuturile osos). Producerea colagenului are loc n dou etape: o etap
intracelular i alta extracelular.(Fig.8.6)



Fig.8.6. Etapele producerii fibrei de colagen




204
n etapa intracelular are loc:- copierea genelor (transcripia) care
codific sinteza moleculelor de colagen; - traducerea mesajului genetic
n sinteza lanurilor pro ; - hidroxilarea radicalilor de prolin i lizin,
precum i glicozilarea radicalilor de hidroxilizin; - elaborarea lanurilor
polipeptidice, formarea legturilor bisulfidice i asamblarea lanurilor
polipeptidice cu formarea de triplu helix; - mpachetarea procolagenului
n complexul Golgi i eliberarea acestuia n mediul extracelular.
Lanturile polipeptidice de colagen sintetizate de ribozomii ataati
membranele reticulului endoplasmic sunt injectate n lumenul acestuia ca
precursori, denumii lanuri pro-. Aceti precursori prezint la ambele
capete ( amino- i carboxil-) aminoacizi adiionali, denumii propeptide.
Propeptidele ghideaz formarea intracelular a moleculeor de
procolagen triplu rsucite, prevenind, totodat, apariia intracelular a
unor fibrile mari,care ar putea fi nocive pentru celule. n lumenul RE,
radicalii de prolin i lizin sunt hidroxilai, formnd hidroxiproline i
hidroxilizine, iar unele hidroxilizine sunt glicozilate. Fiecare lan pro- se
leag de alte dou lanuri prin puni de hidrogen, rezultnd o molecul
triplu rsucit helicoidal, denumit procolagen.
n etapa extracelular, procolagenul este transformat n molecule
de colagen ( tropocolagen ) prin nlturarea enzimatic a propeptidelor
(numai n cazul formelor de colagen fibrilar), dup care are loc
polimerizarea moleculelor i formarea fibrilelor de colagen.
n moleculele de colagen, gupurile hidroxil din hidroxiprolin i
hidroxilizin au rolul s formeze legturi de hidrogen ntre lanuri, care
stabilizeaz conformaia spaial de triplu helix i previn hidroxilarea
prolinei, cum se ntmpl n deficiena de acid ascorbic (scorbut).
nlocuirea (turnoverul) moleculelor de colagen are loc dup o perioad
destul de lung, ce ajunge n os pn la 10 ani.
Fibrilele de colagen se depun pe suprafaa celulei care le-a produs,
ocupnd cu predilecie nfundrile plasmalemei, formate prin fuziunea
veziculelor secretorii cu suprafaa celulei. Citoscheletul din citoplasma
periferic influenteaz poziia, numrul i orientarea ansamblului de
fibrile.

8.2.2.Fibrele elastice

Fibrele elastice (fibrae elasticae) sau fibrele galbene sunt mai
subiri dect cele de colagen avnd diametrul de numai 1 nm. Ele sunt
monofibrilare, se ramific i se anastomozeaz formnd reele
neregulate. Sunt de cel puin cinci ori mai extensibile dect o fibr de
cauciuc de aceeai seciune transversal. Se pot colora electiv cu
orcein ( n rou brun ntunecat ), cu rezorcin fuxin WEIGERT (n rou
aprins), cu aldehidfuxin GMRI (n negru) i cu hematoxilin-eozin
(cnd se coloreaz slab i inconstant). Sunt rezistente i extensibile (cu

205
100-200%), revenind la lungimea iniial, dup ce traciunea asupra lor a
ncetat. Se gsesc n pereii vaselor sanguine, n pulmon, n piele i n
esutul conjunctiv lax. Odat cu naintarea n vrst se rresc provocnd
disfuncia organelor respective. Au o compoziie n amino-acizi
asemntoare cu a fibrelor de colagen. Fibrele elastice sunt de trei feluri:
oxitalanice, de elaunin i elastice
propiu-zise.(Fig.8.7)

Fig.8.7. Contracia i relaxarea
moleculelor de elastin

Componentul principal al fibelor
elastice este elastina, o protein
foarte hidrofil cu o lungime de circa
750 resturi (radicali) de amino acizi.
Asemntor colagenului este bogat
n prolin i glicin, dar spre
deosebire de acesta nu este
glicozilat i conine puin
hidroxiprolin i hidroxilizin.
La microscopul electronic, fibrele elastice prezint n centru o mas
amorf, astructurat, ce conine elastina, nconjurat de o teac de
microtubuli, orientat n axul longitudinal al fibrei i dispui n benzi.
Microtubulii sunt formai din glicoproteine, apar primii n cursul elaborrii
fibrei de ctre fibroblast i au rolul de a orienta depunerea elastinei n
regiunea amorf central.
Formarea (geneza) fibrelor elastice.
Elastina este sintetizat ca precursor (proelastina) de ctre
fibroblastele din piele i tendoane sau de ctre celulele musculare
netede din pereii vaselor mari. Proelastina, o molecul globular cu
masa de 70 kDa este eliminat n matricea extracelular, unde pe
suprafaa membranei plasmatice (n nfundturile acesteia) are loc
polimerizarea n fibre elastice. Sub form nefibrilar, elastina este
prezent n lamele elastice din pereii unor vase sanguine.
Elastina conine doi amino acizi, desmosina i isodesmozina, fiind
compus din dou tipuri de segmente scurte, care alterneaz dealungul
lanurilor polipeptidice:- segmente hidrofobe, care i confer proprieti
elasticitate i semente -helicoidale,bogate n alanin i lizin, care
formeaz legturi transversale ntre moleculele adiacente. Fiecare
segment este codificat de un exon separat.
Elastina este rezistent la fierbere, la extracia cu acizi i baze
diluate i la aciunea tripsinei. n schimb, este hidrolizat de o enzim,
elastaza, secretat de pancreas.
Moleculele de elastin, sinuoase i polimorfe, sunt legate ntre ele
prin puni necovalente slabe, ca i prin puni covalente distanate, care

206
permit reelei s fie elastic. n organism, elastina poate servi ca matrice
pentru calcifiere, explicndu-se astfel formarea plcilor ateromatoase i
calcifierea unor esuturi.
Miezul de elastin este acoperit de o teac de microfibrile, care au
un diametru de 10 nm. Microfibrilele sunt compuse dintr-un numr de
glicoproteine, dintre care fibrilina pare a fi esenial pentru integritatea
lor. Microfibrilele joac un rol important n asmblarea fibrelo elastice. Ele
apar naintea elastinei n timpul dezvoltrii fibrelor elastice i formeaz o
schel pe care se depun moleculele de elastin.
Fibrele oxitalanice sunt o varietate de fibre elastice, foarte
rezistente la acizi. Sunt mai groase i mai rigide dect fibrele elastice.
Ele se pot colora cu coloranii fibrelor elastice (orceina, fucsina) numai
dup o prealabil tratare cu acid peracetic, acid permanganic sau acid
performic. Rezist la digestia cu elastaz, dar sunt degradate imediat
prin tratare cu acid peracetic. Se gsesc n numr mare n ligamentele
alveolo-dentare, dispersate printre fibrele de colagen i reticulin.
Numrul lor crete n bolile paradoniului sau n chisturile radiculare
dentare.
O form aparte de fibre elasice sunt fibrele de elaunin, care se
gsesc n jurul glandelor sudoripare i n derm.

8.2.3.Fibrele de reticulin

Fibrele de reticulin se caracterizeaz printr-un diametru mai redus
(ntre 0,5 i 2 m), aprnd foarte subiri. Nu sunt grupate n fascicule,
dar sunt ramificate i formeaz reele, n mod frecvent. Pot fi observate
n contrast de faz i n microscopul de polarizaie, dup colorare cu
rou Sirius. Pe preparatele fixate, se coloreaz ca i cele de colagen (cu
albastru de anilin). Fiind fibre argirofile, se pot evidenia n condiii bune
cu sruri de argint. Datorit coninutului mai mare n glicoproteine, fibrele
de reticulin sunt PAS-pozitive. Astfel, hexozele sunt n procent de 6-
12% n fibrele de reticulin, fa de 1% n fibrele de colagen.
Fibrele de reticulin conin, n principal, molecule de colagen de tip
III, asociat cu glicoproteine, proteoglicani i alte tipuri de colagen. La
microscopul electronic apar formate din fibrile groase de 35 nm, strns
mpachetate i legate ntre ele prin puni de proteoglicani i glicoproteine.
Fibrele de reticulin iau natere, ca i celelalte dou tipuri de fibre
conjunctive, n fibroblaste, unde are loc sinteza de molecule de colagen
tip III, ce vor fi exocitate i polimerizate extracelular.
Sunt rspndite n: muchii netezei, n esuturile hematopoetice i
limfopoetice (mduva osoas, splin i organele limfoide), n jurul
capilarelor, n membranele bazale, n glandele endocrine, n ficat, n
rinichi, iar,n condiii patologice, apar n esuturi dup lezionri.Diametru
redus i dispunerea n reea lax i flexibil a fibrelor reticulare permite

207
modificri de form i volum a unor organe,precum splina, ficatul,
arteerele, musculatura uterin i intestinal. n cursul embriogenezei, n
procesele inflamatorii i de cicatrizare, firbrele de reticulin pot fi
nlocuite de fibre de colagen.

8.3Substana fundamental a matricei extracelulare.

Substana fundamental (substantia fundamentalis), interfibrilar
sau intercelular, apare amorf, incolor, transparent, omogen i
vscoas. Din punct de vedere chimic, conine diferite molecule de
glicozaminoglicani, de obicei legai covalent de o protein, formnd
proteoglicani i proteine fibroase, care sunt de dou feluri: structurale
(colagen, elastin) i glicoproteine structurale adezive (fibronectina i
laminina).

8.3.1.Glicozaminoglicanii

Denumii, n trecut, mucopoliglucide sau mucopolizaharide,
glicozaminoglicanii (GAG) sunt complexe poliglucidice neramificate,
compuse din uniti repetitive de diglucide, n care unul din cele dou
resturi de glucid care se repet este un aminoglucid ( N-acetil
glucozamina sau N-acetil-galactozamina ).Cel de al doilea glucid este,
de obicei un acid uronic (glucoronic sau iduronic).


Fig.8.8. Proteoglicani n monomer i n agregat
1-Miez proteic; 2-Heparan sulfat; Condroitin sulfat; 4Keratan sulfat;5-Proteine de legtur

Glicozaminoglicanii sunt intens ncrcai negativ, din cauza
gruprilor (terminaiilor) sulfat sau carboxil existente pe resturile de

208
glucide. Dup radicalii de glucide, tipul de legturi ntre acestea,
numrul i dispunerea gruprilor sulfat se disting mai multe tipuri
principale de glicozaminoglicani:-acidul hialuronic sau hialuranul;-
condroitin sulfatul i dermatan sulfatul;- heparan sulfatul i heparina; -
keratan sulfatul (Fig. 8.8).
Lanurile de poliglucide sunt intens hidrofile i inflexibile, nct nu
se pot plia n structuri globulare. De aceia, glicozaminoglicanii au o
conformaie foarte extins, ocupnd un volum imens fa de masa lor,
formnd geluri i la concentraii foarte mici.
Sarcinile negative, foarte numeroase, atrag o mulime de cationi
(Na
+
), sunt osmotic active i rein o mare cantitate de ap n matricea
extracelular, fcnd-o turgescent, capabil s reziste la compresiuni,
n contradicie cu fibrele de colagen care rezist la traciuni. Prin acest
mecanism, matricea cartilajului articular poate rezista la presiuni de sute
de atmosfere.
n esutul conjunctiv, glicozaminoglicanii ocup mai puin de 10%
din cantitatea de proteine fibroase. Dar, pentru c ei formeaz geluri
hidratate "poroase", glicozaminoglicanii ocup mult din spaiul
extracelular, oferind suport mecanic pentru esuturi i permind o rapid
difuziune a moleculelor solubile n ap (nutrieni, metabolii, hormoni) sau
deplasarea celulelor.
n fibrele de colagen i elastice i sunt reprezentati de: acidul
hialuronic (singurul nesulfatat), condroitin-sulfaii, heparan-sulfaii,
keratan-sulfaii i heparina. Excepie fcnd acidul hialuronic, toi ceilali
glicozaminoglicani se leag covalent de o protein formnd molecule de
proteoglicani (PG), n care glicozaminoglicanii ocup 95%, iar proteinele
5%. n esutul conjunctiv, glicozaminoglicanii i proteoglicanii formeaz
un gel foarte hidratat, rezistent la compresiuni, n care sunt cuprinse
proteinele fibroase. (Fig.8.9)
Acidul hialuronic ( sau hialuronanul sau hialuronatul ) este format
dintr-o repetare secvenial a peste 25.000 de uniti diglucidice
nesulfatate. Se gsete n cantiti variabile n toate esuturile, fiind mai
abundent la embrionii timpurii. Este cea mai simpl form de
glicozaminoglicani.
Producerea acidului hialuronic se realizeaz direct pe suprafaa
celulei, cu ajutorul unui complex de enzime, cuprinse n membrana
plasmatic, nefiind nevoie de exocitoz.
Fa de ceilali glicozaminoglicani, acidul hialuronic nu conine
dizaharide sulfatate, secvenele sunt mai simple,iar lanurile mai scurte
(mai puin de 300 resturi glucidice).
Acidul hialuronic ndeplinete multiple roluri: - asigur rezistena
mecanic n esuturi i articulaii; - ocup spaiile libere n timpul
dezvoltrii embrionare, permind modificarea formelor i structurilor ;

209
- fiind produs de zona bazal a epiteliilor, sevete la crearea unui spaiu
liber, n care celulele vor migra , ca n cazul formrii cordului, corneei etc.
Cnd migrarea celulelor s-a ncheiat, excesul de hialuronan este
degradat de hialuronidaz. Hialuronanul este produs n cantiti mari n
timpul cicatrizrii leziunilor i constituie un lubrefiant al lichidului
articular.ndeplinirea acestor roluri este condiionat de legarea
hialuronanului de proteinele sau proteoglicanii din matricea extracelular
sau de pe suprafaa celulelor. Unele din aceste molecule, denumite
hialaderine prezint domenii omoloage pentru legare de acidul
hialuronic, coninnd grupe de radicali aminoacizi, ncrcate pozitiv.


Fig.8.9.Relaiile proteoglicanilor cu acidul hialuronic.

8.3.2.Proteoglicanii

Proteoglicanii (PG) sunt compui din lanuri de glicozaminoglicani
legate covalent de un miez proteic. Ca i n cazul altor glicoproteine,
lanul de polipeptide sau miezul proteic este sintetizat n reticulul
endoplasmic rugos, iar lanurile de polizaharide sunt asamblate pe
acesta n complexul Golgi.

210
Proteoglicanii se deosebesc de celelalte glicoproteine prin felul,
cantitatea i aranjamentul lanurilor de glucide. Apar foarte heterogeni,
n ceea ce privete coninutul proteic, mrimea moleculei i numr, dar
prezint o repetare a diglucidelor similare.
Miezul proteic al unui proteoglican este de obicei o glicoprotein. n
el, carbohidraii pot ocupa mai mult de 95% din greutatea sa, cel mai
adesea avnd forma de lanuri lungi neramificate, cu 80 radicali de
glucide.
De obicei, proteoglicanii sunt mult mai mari dect glicoproteinele.
Astfel, agrecanul care este o component major a cartilajului are o
mas de 3 x 10
6
daltoni, peste 100 lanuri de GAG, cte unul la fiecare
20 resturi de aminoacizi. Exist, ns i proteoglicani mici, cu 1-10
lanuri de GAG, ca de exemplu decorinul, care este secretat de
fiboblaste i are numai un lan de GAG.
n principiu, proteoglicanii au o heterogenitate fr limit. Greutatea
molecular a miezului proteic variaz de la 10.000 la 600.000 daltoni, de
el putndu-se ataa un mare numr i tipuri diferite de GAG. n plus,
modelul de repetare a diglucidelor n fiecare GAG poate varia n funcie
de gruprile SH, nct se obine o heterogenitate enorm, ce face
dificil identificarea i clasificarea proteoglicanilor n funcie de glucidele
lor. Secvena proteinelor din miezul proteic, determinat prin tehnici de
ADN recombinat apare, de asemenea extrem de divers. Dei au fost
identificate cteva familii mici, nu exist un aspect structural comun care
s disting clar proteinele din miezul proteic de alte proteine, iar muli PG
au unul sau mai multe domenii care sunt omoloage cu domeniile
existente n alte proteine din matricea extracelular i din membran. Se
consider (Hardungham, Fosang 1992) c proteoglicanii sunt un grup
aparte de glicoproteine glicosilate, a cror funcii sunt mediate att de
miezul proteic, ct i de lanurile de GAG.
Funciile proteoglicanilor.
Rolul PG nu poate fi limitat la meninerea hidratrii spaiului
intercelular.
Lanurile de GAG formeaz geluri cu pori de mrimi variate,nct
servesc ca site selective ce regleaz traficul de molecule n funcie de
mrime i ncrctura electric. Astfel, perlecanul, un PG heparan sulfat,
joac acest rol n membrana bazal a glomerulului renal.
PG intervin n comunicarea chimic dintre celule. Ei leag diferite
molecule semnal produse de celule, ca de exemplu unii factori de
cretere, modificndu-le activitatea. Astfel, factorul de cretere a
fibroblastelor (FGF) se leag de lanurile de heparan sulfat ale PG, att
n esuturi, ct i in vitro. Pentru unele celule aceast legare reprezint
un pas necesar pentru activarea receptorilor de suprafa.
n majoritatea cazurilor, moleculele semnal se leag de lanurile de
GAG ale PG, existnd diferene ntre molecule: - factorul de

211
transformare a creterii ( transforming growth factor =TGF- ) se leag
de miezul proteic al mai multor PG din matrice ( de decorin) ncetndu-i
activitatea. PG se leag i regleaz activitatea proteazelor i a
inhibitorilor de protease.
Legarea de un PG controlez activitatea unei proteine prin
urmtoarele mecanisme:- i limiteaz sfera de aciune, imobiliznd
proteina la locul de producere; - i blocheaz activitatea; - creaz un
rezervor de proteine, n vederea unei eliberri ulterioare; - protezeaz o
protein fa de o degradare proteolitic;- modific sau concentrez
proteina pentru o mai eficient prezentare la receptorii de suprafa.
Glicozaminoglicanii i proteoglicanii se asociaz pentru a forma
complexe polimerice imense n matricea extracelular, Astfel, molecula
de aggrecan ( un PG important din esutul cartilaginos) formeaz
mpreun cu acidul hialuronic un complex mai mare dect o bacterie.
Totodat GAG i PG se asociaz cu proteinele fibroase din matrice
(cu colagenul),rezultnd structuri extrem de complexe. Dispunerea
spaial a moleculelor de PG este intens determinat n esuturile vii.
Exit i PG intracelulari. Astfel, serglycina este un constituient al
veziculelor secretorii intracelulare, unde ajut la mpachetarea i
stocarea moleculelor secretate.
Ali PG sunt componenete integrate n membranele plasmatice,
avnd miezul proteic inserat transversal n bistratul lipidic sau ataat la
bistrat prin glicosil-fosfatidil-inozitol (GPI). Asfel, syndecanii au un miez
proteic ce traverseaz membrana. De domeniul lor extracelular se leag
un numr variabil de lanuri GAG (condroitin sulfat i heparan sulfat), n
timp ce domeniul lor intracelular interacioneaz cu actina citoscheletului
din cortexul celular.
Sindecanii se gsesc pe suprafaa mai multor tipuri de celule
(fibroblaste, celule epiteliale), unde ndeplinesc, alturi de integrine, rolul
de receptori pentru colagen, fibronectin i alte proteine matriceale , de
care ei se leag.Sindecanii se mai leag factorul de cretere a
fibroblastelor (FGF), fiind prezeni n receptorii pentru FGF. Betaglicanul
se leag de TGF- (factorul de transformare a creterii), fiind prezent n
receptorii pentru TGF-. n acest mod, proteoglicanii din membranele
plasmatice acioneaz ca i coreceptori care colaboreaz cu receptorii
convenionali ai suprafeei celulare, att n legarea celulelor de matricea
extracelular, ct i n iniierea rspunsului celular la factorii de cretere.
Sindecanii sunt organizai n gel hidratat, nct lanul de GAG
difuzeaz repede ntre celule, facilitnd migrarea celulelor i formarea
prelungirilor celulare.
Proteoglicanii se leag covalent de o parte i de alta a unui ax
polipeptidic, denumit miez proteic, nct formeaz subuniti i
complexe moleculare mari.

212
Mai multe subuniti se leag necovalent pe un lung filament de
acid hialuronic (AH) prin intermediul unor mici linkeri proteici, ajungnd
la o mas de 10
5
Kdal i o lungime de ordinul micrometrilor. n
majoritatea proteoglicanilor, miezul proteic este asociat cu dermatan-
sulfatul, condritin-sulfatul sau heparan-sulfatul. n unele cazuri
proteoglicanii se pot lega unii de alii sau de alte macromolecule locale
cum ar fi colagenul, elastina i fibronectina.
La microscopul electronic, proteoglicanii pot fi evideniai cu
ajutorul roului de ruteniu, care se leag selectiv la polimerii acizi i
devin electronodeni dup combinarea lor cu oxidul de osmiu (OsO
4
).
Astfel proteoglicanii au fost identificai n glicocalix (sub form de
filamente subiri de 3-5 nm), n matricea extracelular (sub form de
granule mari de 20-50 nm) i n membranele bazale (sub form de
granule mici de 10-20 nm).
n concluzie, proteoglicanii ndeplinesc multiple roluri, dintre care
subliniem : 1) particip la realizarea adezivitii celulare fa de matrice;
2) confer vsco-elasticitate i rezisten la presiune populaiilor
celulare; 3) regleaz deplasarea moleculelor (mari i mici) prin spaiul
interstiial; 4) modeleaz homeostazia tisular; 5) interacioneaz cu
lipoproteinele sanguine.
Sinteza glicozaminoglicanilor i proteoglicanilor se realizeaz n
fibroblaste printr-un mecanism de sintez comun glicoproteinelor. Astfel
componenta proteic se sintetizeaz la nivelul ribozomilor reticulului
endoplasmic rugos (RER), unde ncepe i glicolizarea, care va fi
completat n structurile golgiene, unde se desfoar i sulfatarea,
dup care sunt eliminai n matricea extracelular. Dup o funcionare de
2-4 zile (pentru proteoglicani) ei sunt degradai de macrofage prin
sistemul lor de hidrolaze acide lizozomale.

8.3.3.Glicoproteinele structurale

Sunt formate dintr-un miez proteic la care se ataeaz glucide cu
structur ramificat. n contrast cu PG, n glicoproteinele structurale (GS)
predomin miezul proteic, iar glicoproteinele structurale nu conin
poliglucide lineare formate din diglucide repetitive ce au glucozamine.
Ele joac un rol important n funcionalitatea matricei extracelulare, cum
ar fi relaiile intercelulare, adezivitatea celulelor.
Sunt reprezentate de fibronectine (prezente n matricea tuturor
tipurilor de esuturi conjunctive) i n cele mai multe membrane bazale,
condronectine (prezente n matricea cartilaginoas) i laminine (prezente
n membranele bazale).

213
Fibronectina este o glicoprotein, cu o greutate medie de 222-240
kDa, compus din dou subuniti legate prin puni bisulfidice, n
apropierea terminaiei carboxil. Fiecare subunitate prezint o serie de
domenii funcionale distincte, desprite prin domenii polipetidice
flexibile. (Fig.8.10)



Fig.8.10. Adezivitatea celulelor la colagenul intercelular cu ajutorul fibronectinei
i proteoglicanilor

Domeniile sunt constituite din mici module repetabile, codificate de
codoni separai deoarece gena fibronectinei prezint multiple duplicaii
ale exonilor, asemnndu-se cu genele colagenului. Un domeniu leag
colagenul, altul heparina, iar altul se leag de diveri receptori specifici
de pe suprafaa unor variate tipuri de celule.ndat ce un domeniu cu
activitate de legare a fost identificat de receptori, secvena sa de
aminoacizi determin sinteza unor peptide care i corespund. Aceste
peptide sunt folosite pentru gsirea regiunii principale pentru legarea
celulei, fiind identificat o secve specific de tripeptide (Arg-Gly-Asp
sau RDG). Fiecare peptid foarte scurt conine secvena RDG i
concur cu fibronectina pe situsul de legare al celulei, putnd s inhibe
ataarea celulelor la fibronectin. Dac aceste peptide sunt prezente pe
o suprafa solid, ele determin aderena celulelor la aceasta.
Tipul principal de modul, numit repetiia fibronectinei de tip III (type
III fibronectin repeat) are o lungime de circa 90 radicali de aminoacizi i
se gsete de cel puin 15 ori n fiecare subunitate. Acest modul mai

214
este ntlnit i n alte proteine matriceale, n unele proteine ale
membranei plasmatice i citoplasmei.
Exist mai multe forme ( izoforme ) de fibronectin:- fibronectina
plasmatic, solubil,prezent n snge i alte lichide din corp, intervine n
coagularea sngelui , n vindecarea rnilor i n fagocitoz; - fibronectina
filamentoas, asamblat pe suprafaa celulelor i depozitat n matrice.
Toate formele de fibronectin sunt codificate de o singur gen
mare, lung de 50 kilobase i format din circa 50 exoni cu mrimi
similare. Transcrierea AND-ului produce o singur molecul mare
deARN, care pote fi sudat alternativ n trei regiuni n funcie de tipul de
celul i de stadiu de dezvoltare. La om se produc 20 tipuri de ARN
mesageri, fiecare fiind capabil s codifice cel puin o subunitate diferit
de fibronectin. Sudarea alternativ permite celulei s produc tipul de
fibronectin cel mai potrivit cu necesitile esutului.
Astfel, formele de fibronectin produse n timpul dezvoltrii
embrionare difer de cele ntlnite n fazele trzii. Dar dac cutisul adult
este lezat se revine la fibrovectina embrionar. n vindecarea rnilor,
fibronectina permite migrarea celulelor i proliferrile cerute de
dezvoltare sau repararea esuturilor. Prin experiene de inginerie
genetic,efectuate pe oareci, s-au inactivat genele fibronectinei, fapt ce
a generat o serie de defecte morfologice ce au produs anomalii n
dezvoltarea notocordului, somitelor, cordului, vaselor sanguine, tubului
neural i anexelor extraembrionare.
Fibronectina este produs de fibroblaste, de celulele endoteliale i
n cantitate mai mic i de unele celule epiteliale i mediaz aderarea
celulelor la colagen sau la alte componente ale matricei extracelulare,
aciune la care pot contribui i alte molecule locale ca laminina,
condronectina etc.
Alte roluri ale fibronectinelor constau n: a) organizarea spaial a
citoscheletului; b) intervenia lor n migrarea celulelor n cursul
diferenierii embrionare, n fagocitoz, n hemostaz i n malignizarea
celulelor (cnd lipsa lor favorizeaz malignizarea); c) pot nlocui unii
factori de competen (ca de exemplu: factorul de cretere al
fibroblastelor i al plachetelor sanguine, factorul de cretere epidermic).
n timpul dezvoltrii embrionare, fibronectina ghideaz deplasarea
celulelor, ajutnd celulele s se ataeze de matrice, fr s fie
imobilizate n ea.
Mai exist i alte tipuri de molecule adezive din matrice, care joac
un rol n ghidarea celulelor n cursul deplasrilor morfogenetice.
Astfel,este tenascina un complex glicoproteic cu ase lanuri
polipeptidice, care se desprind dintr-un centru.
Fiecare din lanuri este pliat i compus din diferite secvene scurte
de aminoacizi, care se repet de mai multe ori. Pe fiecare lan se gsesc
un numr de domenii funcionale distincte, din care unul se leag de

215
suprafaa celulei prin syndecan ( un proteoglican transmemebranar), iar
altul de fibronectin. Tenascina este mai abundent n matricea a
esuturilor embrionare. Ea poate s favorizeze, sau s inhibe adeziunea
celular, n funcie de tipul de celul i de medierea unor domenii
proteice, jucnd un rol n ghidarea deplasrilor celulare.
Laminina este o glicoprotein a membranelor bazale, fiind
localizat n lamina rara, n imediata apropiere a celulelor epiteliale cu
membrana bazal, mediind ataarea acestora de colagenul de tip IV al
membranelor bazale. Nu prezint o specificitate absolut nct poate
facilita i ataarea fibroblastelor la un substrat de sticl. Este compus
din trei lanuri alfa (sau A) i un lan beta (sau B) ce formeaz o molecul
foarte mare cu o greutate de 1 milion daltoni, ce posed locuri specifice
de legare. (Fig.8.11)


Fig. 8.11. Laminina domenii structurale i funcionale
A i B lanuri alfa i beta; Regiunile haurate sunt rezistente la proteaze.

Condronectina este o glicoprotein seric ce mediaz specific
ataarea condrocitelor de colagenul de tip II din cartilaj. Este sintetizat
de condrocite.
n matricea extracelular din aproape toate esuturile conjunctive s-
a identificat glicoproteina 115 (necolagen), cu o greutate molecular
de aproape 115.000, care este prezent n cantitate mai mare n vasele
sanguine, n fibrele musculare netede, i n unele membrane bazale,
avnd o funcie asemntoare fibronectinei i lamininei.
La embrion, n faza de morul, se ntlnete o glicoprotein
denumit uvomorulina implicat n adezivitatea celulelor embrionare.
Ea a putut fi identificat i la adult n spaiul intercelular al epiteliului
intestinal, n jurul domeniului laterobazal al celulelor. Uvomorulina este
distribuit uniform la suprafaa celulelor maligne n carcinomul

216
nedifereniat. Tot n matricea extracelular a unui tip de carcinom a fost
izolat epinectina, o protein cu greutatea molecular de 70.000 daltoni.
n serul sanguin, n afar de condronectin i fibronectin se mai
ntlnesc i alte glicoproteine cu importan major n adezivitatea
celulelor de colagen i n etalarea celulelor n vitro, ca de exemplu:
factorul de etalare a fibroblatilor i a celulelor epiteliale, epibolina (ce
favorizeaz etalarea celulelor epiteliale).
Tot n matricea extracelular a esuturilor conjunctive este prezent
i lichidul tisular care are o compoziie asemntoare plasmei sanguine,
coninnd ap, molecule mici (inclusiv proteine) i diferii ioni (n special
de sodiu i clor i mai puin magneziu, calciu i potasiu).
Unele moleculele din matricea extracelular pot s regleze
cantitatea altor molecule extracelulare. Astfel, fibronectina stimuleaz
sinteza colagenului de ctre hepatocite n urma efectelor pe care
fibronectina le are asupra fosforilrii proteinelor. La fel factorul de
cretere epidermic, AMP-ul ciclic, vitamina A stimuleaz acumularea
fibronectinei n diferite linii celulare.
Refacerea (turnoverul) moleculelor matricei extracelulare este
continu i prezint o mare importa pentru multe procese biologice. Se
realizeaz un echilibru ntre degradare i resintez.
Astfel, o degradare rapid se produce n timpul involuiei uterine
post partum. Degradri localizate sunt necesare atunci cnd unele
celule ( leucocitele) trec prin memebrana bazal n esuturi, iar celulele
canceroase migreaz la distan, dnd metastaze. Componentele
matricei sunt degradate prin enzime proteolitice care sunt produse i
eliberate local de celule, precum:- unele metaloproteaze, ce depind de
ionii de Ca
2+
i de Zn
2+
, iar altele sunt proteaze serice. Ele coopereaz
pentru a degrada proteinele matriceale (colagenul, laminina,
fibronectina). Colagenaza (o proteaz seric) ore o specificitate
restrns, modificnd integritatea matricei pe zone limitate i facilitnd
migrarea celulelor. O important proteaz seric este un activator de tip
plasminogen al urokinazei (urokinase-type plasminogen activator) (U-
PA). Ea transform plasminogenul ntr-o proteaz activ plasmina, care
degradeaz fibrina, fibronjectina i laminina.
Degradarea componentelor matriceale este controlat strns prin
mai multe mecanisme ca: - secreia unor proteaze ca precursori inactivi;-
activitatea proteazelor este limitat la anumite arii de inhibitori specifici;
-inhibitorii sunt produi de celulele de la marginea ariilor cu degradri
active, avnd scopul de a conserva matricea neimplicat. Ei protejeaz
de asemenea i proteinele de pe suprafaa celulelor, care sunt necesare
pentru adeziune i migrare. Multe celulele au receptori de memebran
care leag U-PA, limitnd aciunea acesteia la zonele unde este
necesar. Astfel, un receptor pentru U-PA a fost detectat pe conul de

217
cretere al neuronului, la marginea de naintare a leucocitelor i la unele
tipuri de celule canceroase, care metastazeaz.

8.4. Integrinele sau receptorii celulari pentru
matricea extracelular

Integrinele sunt o familie de proteine transmembranare care leag
colagenul, fibronectina i laminina.
Spre deosebire de ali receptori de membran, integrinele prezint
o constant de afinitate relativ joas (K
a =
10
6
10
9
litri/ mol), permind
celulelor s exploreze ambiana fr s se ataeze de matrice.
Interginele sunt heterodimeri, compusi din dou subuniti ( i )
necovalente asociate cu glicoproteine transmembranare.
Integrinele ndeplinesc un rol crucial pentru adeziunea i
cooperarea celulelor cu matricea extracelular. n timp ce unele
integrine leag numai o macromolecul din matrice (fibronectina sau
laminina), altele pot lega mai multe. Astfel, o integrin prezent pe
suprafaa fibroblastelor leag colagenul, fibronectina i laminina. Mai
mult aceiai molecul de integrin, n diferite tipuri de celule, poate lega
diferite molecule. O subfamilie de integrine recunoate i leag secvena
de aminoacizi arginin-glicin-aspartat, care este prezent n
fibronectin i n alte proteine matriceale.Se pare c unii factori celulari
specifici interacioneaz cu integrinele i le moduleaz activitatea.
Datorit prezenei a 3 sau 4 domenii de legare existente pe partea
extracelular a catenei , legarea integrinelor depinde de unii cationi
extracelulari bivaleni(Ca
2+
, Mg
2+
).
La vertebrate, unele proteine matriceale pot fi recunoscute i
ataate de mai multe integrine. Astfel, fibronectina este legat de 8
integrine, iar laminina de 5 fibronectine.Integrinele sunt foarte diverse,
deoarece cei 20 heterodimeri pot forma 9 tipuri de subuniti i 14 tipuri
de subuniti . Catenele
1
care formeaz dimeri cu cel puin 9 catene
exist la aproape toate celuele de la vertebrate. Astfel,
5

1
este
receptor pentru fibronectin
,
iar
6

1
leag laminina. Lanurile
2
care
formeaz dimeri cu 3 tipuri de lanuri se gsesec pe suprafaa
leucocitelor i joac un rol esenial n activarea lor. Astfel, integrina
1

2
este un factor asociat limfocitelor (LAF-1), iar integrina
M

2
este
asociat macrofagelor (Mac-1). Integrinele
2
mediaz n principal
interaciunile dintre celule i mai puin pe cele dintre celul i matrice. Ele
premit leucocitelor s se ataeze de endoteliul vascular i s-l
traverseze.
Integrinele funcioneaz ca linkeri transmembranari (sau
integratori) care mediaz interaciunea dintre citoschelet i matricea
extracelular. Cele mai multe intergine se leag de filamentele de actin,

218
excepie fcnd integrina
6

4,
existent n hemidesmozomi, care se
leag de filamentele intermediare. n timpul atarii integrinei de un
ligand extracelular, captul intracelular al catenei se leag la
filamentele de actin din citoschelet. Ataarea transmembranar la
citoschelet este o cerin important att pentru adeziunea celelelor la
matrice, ct i pentru adeziunile intercelulare, deoarece n lipsa unei
ancorri interne adeziunile sunt slabe, nerezistente, aa cum s-a
observat n cazul unei integrine mutante far domeniu intracelular,
obinut prin tehnici de AND recombinat.
Integrinele mediaz, interaciuni transmembranare, ntre
citoschelet i matricea extracelular jucnd un rol important n orientarea
celulelor i matricei n esuturi.
La rndul su, matricea extracelular poate influena organizarea
citoscheletului, determinnd n fibroblastele transformate (cancer like)
din culturi apariia intracelular a fibrelor de stres, prin organizarea
filamentelor de actin i producerea unei cantiti mai reduse de
fibronectin. Citoscheletul exercit fore care orienteaz moleculele
matricei pe care celulele o produc, iar acestea influeneaz organizarea
citoscheletului.
Celulele reglez activitatea integrinelor pe care le produc. Astfel,
integrinele celulelor sanguine trebuie s fie activate pentru a media
adeziunea celular. Acest fapt permite celulelor sanguine s circule
nestnjenite pn cnd sunt activate rapid de un stimul specific,
deoarece integrinele lor nu trebuie sintetizate, ele existnd deja sub
form inactiv.
Trombocitele sunt activate de contactul cu peretele lezat al vasului
sanguin sau de unele molecule semnal solubile. Acestea determin
activarea integrinei
3
din membrana trombocitelor, nct aceasta
recepioneaz i leag proteinele coagulrii, determinnd agregarea
trombocitelor i formarea coagulilor.
n mod asemntor, legarea de limfocitul T a unui antigen de
suprafa specific blochez calea de semnalizare intracelular, ceea ce
duce la o activare rapid, dar trectoare a integrinei (LFA -1). Integrina
activat permite limfocitului T s adere puternic i pentru un timp
suficient de lung la celula int, pn de vine stimulat. Dup aceia
integrina revine la starea sa inactiv, permind limfocitului T s se
desprind.
i alte evenimente intracelulare pot determina activarea
integrinelor. Astfel, fosforilarea serinei de pe captul citoplasmatic a
integrinei
1
, n timpul mitozei celulelor din culturi diminueaz
capacitatea integrinei de a lega fibronectina, nct celulele i modific
forma i se detaeaz de substrat.
Moleculele matricei extracelulare influeneaz puternic comportaea
celulelor n culturi, modificndu-le forma, micarea, metabolisnmul,

219
dezvoltarea i diferite funcii. Integrinele mediaz multe din aceste
evenimente. Asfel , integrinele de locul de contact cu matricea sau cu
alt celul pot activa mai multe ci de semnalizare intracelular. ( pe cea
a fosfolipid inozitolului, a tirozin kinazei,etc). Se produce,astfel un
semnal complex pe faa intern a membranei, care determin intrarea in
activitate a unor receptori intracelulari . n urma acestor evenimente,
numai celulele ataate prin integrine la moleculele matricei extracelulare
reacioneaz, decland o cascad de semnale care se traduc prin
mnodificri n comportamentul celulelor i prin proliferri celulare.




220
9.EMBRIOLOGIA GENERAL

Embriologia este disciplina biologic care se ocup cu studiul
dezvoltrii ontogenetice a organismelor, din momentul producerii
gameilori si pn n momentul parturitiei sau ecloziunii.
Ontogeneza (ontogenesis) parcurge mai multe etape sau
faze: 1) gametogeneza; 2) fecundaia; 3) segmentarea; 4)
gastrularea; 5) histogeneza; 6) organogeneza si 7) creterea i
dezvoltarea postnatal sau post eclozional.

Etapele ontogenezei

PERIOADE
Etape Faze
Gametogeneza multiplicare
cretere
maturare
Fecundaia apropiere
penetrare
amfimixie
Dezvoltarea
intramaternal
(preeclozionala)

Embriogeneza
(segmentaia)
morul
blastul
gastrul

Histogeneza
(formarea esuturilor)
Neurul

Organogeneza


Dezvoltarea fetal
(preeclozional)

Dezvoltarea
postpartum
(posteclozional)
Perinatal (perieclozional)
Tineree
Maturitate
Imbtrnire



n cazul mamiferelor, unele din aceste faze sunt parcurse n
organismul matern, alctuind dezvoltarea intrauterin, ce cuprinde:
fecundaia, segmentarea, gastrularea, histogeneza i
organogeneza.
221
Dezvoltarea intrauterin (genesis praenatalis) se continu
dupa actul parturiiei (parturitio), n afara organismului matern cu o
perioada denumita extrauterin sau postnatal.
n cazul psrilor, perioada dezvoltrii n organismul matern
este nlocuit, aproape n totalitatea sa (exceptnd fecundatia) de
perioada dezvoltrii n ou, iar dup ecloziune se continua cu o
perioada posteclozionala.



Fig.9.1. Formarea i evoluia gameilor n
cursul unei generaii
1- Ovul; 2-Spermatozoid; 3-Zigot; 4 Celule
somatice; 5- Celul sexual primordial; 6-
Gonocite; 7- Ovogonii; 8- Ovocit I, 9- Ovocit II;
10- Globuli polari; 11- Ovocit matur; 12-
Spermatogonii; 13- Spermatocit I, 14-
Spermatocit II; 15- Spermatid.


Dezvoltarea intrauterin
sau preeclozional se
desfasoar n trei etape:
1) o perioada embrionar
sau embriogeneza
(embryogenesis), care ine pn
la apariia celor trei foie
embrionare i a anexelor
embrionare;
2) o perioada de
histogenez (histogenesis) i
organogenez (organogenesis);
3) o perioada fetal (fetogenesis) - n care se continu
dezvoltarea organelor pna la fatare (parturiio) sau ecloziune.
Embriogeneza constituie obiectul de studiu al embriologiei
generale, iar histogeneza, organogeneza i perioada fetal sunt
studiate de embriologia special (ce va fi prezentat odat cu
histologia esuturilor i organelor).

9.1. Gametogeneza

Gametogeneza (gametogenesis) cuprinde ansamblul de
transformari prin care trec celulele germinale primordiale (cellulae
germinales promordial)sau gonocitele primordiale pna la stadiul de
celula sexuala matura. (Fig.9.1)
222
Procesul de gametogeneza parcurge trei perioade,
asemanatoare la ambele sexe: 1) perioada germinativa (de
multiplicare sau de nmultire); 2) perioada de crestere; si 3) perioada
de maturare.

Gametogeneza

Perioade Spermatogeneza Ovogeneza
Perioada germinativ Spermatogonii
(prfoase-A

intermediare-I

crustoase-B)


Ovogonii
Perioada de cretere Spermatocit primar I Ovocit primar I




Perioada de maturare
Speramatocit
secundar II

SPERMATIDIE
(faza Golgi faza
cap faza
acrozomic faza
de maturare)

Spermatozoid



Ovocit secundar II
( + polocit primar)


Ovul
(+polocit
secundar)


9.1.1. Spermatogeneza

Spermatogeneza (spermatogenesis) cuprinde totalitatea
proceselor pe care le parcurg spermatogoniile (gonocite primordiale
mascule) pn devin celule sexuale mature (spermatozoizi), apte
pentru fecundaie. Se desfasoar la nivelul epiteliului seminal din
tubii seminiferi ai testiculului. (Fig.9.2)
1) Perioada germinativ (de multiplicare sau de nmultire)
este parcursa n timpul prepubertatii, cnd gonocitele primordiale se
divid mitotic, genernd doua categorii de spermatogonii: a) unele
mici, identice cu gonocitele primordiale; b) altele mai mari,
spermatogoniile prafoase (de tip A) (spermatogonium A), care se
vor divide mitotic, n mod repetat, trecnd spritr-un stadiu
intermediar (spermatogonium intermedium) i genernd
223
spermatogoniile crustoase (de tip B) (spermatogonium B), care vor
continua linia seminala.



















Fig. 9.2. Epiteliul tubului seminal
1-Spermatogonie; 2- Spermatocit I; 3- Spermatocit II, 4, 5, 6 Spermatide n
evoluie; 7- Spermatozoizi; 8- Celul Sertoli; 9 Membran bazal.


2) Perioada de cretere se declanseaz odat cu pubertatea
i const n creterea (dublarea n volum) a spermatogoniilor,
transformndu-se n spermatocite de ordinul I (spermatocytus
primarius).


Fig.9.3. Spermatogeneza
I-Perioada germinativ; II-Perioada de cretere;
III-Perioda de maturare.
1-Gonocit; 2- Spermatogonii;3-Spermatocit I;
4-Spermatocit II; 5-Spermatide; 6-Spermatozoizi


3) Perioada de maturare se
remarc prin faptul ca spermatocitul de
ordinul I se divide reducional (meiotic)
genernd doua spermatide de ordinul II
(spermatocytus secundarius) (cu set
haploid de cromozomi), care se divid
imediat (n mod mitotic), rezultnd n final
4 spermatide dintr-un spermatocit de
ordinul I sau dou spermatide dintr-un spermatocit de ordinul II.
(Fig.9. 3)
224
Spermatidele (spermatidium,a) parcurg o metamorfoz
celular, denumit spermiogeneza (spermiogenesis) , fiecare
spermatid devenind un spermatozoid (spermatozoon s. spermium).
Spermiogeneza are loc n cile genitale intratesticulare.
Spermatida apare ca o celula poliedric, n citoplasma careia
se gsete un nucleol situat central. Complexul Golgi i
mitocondriile sunt dezvoltate, iar centrul celular este reprezentat de
doi centrioli. Elementele reticulului endoplasmic neted sunt
numeroase i asociate cu lipide. Enzimele hidrolitice sunt active.
Transformarea spermatidei n spermatozoid, spermiogeneza,
se realizeaz n patru perioade succesive: a) perioada Golgi; b)
perioada cap; c) perioada acrozom; d) perioada de maturare.
(Fig.9.4)



Fig. 9.4. Spermiogeneza
1-Nucleu; 2- Complex Golgi; 3- Mitocondrii; 4- Centrioli; 5- Vacuol acrozomal;
6- Gtul spermatozoidului; 7- Centriol proximal; 8- Poriunea proximal a centriolului
distal; 9- Piesa intermediar; 10- Poriunea distal a centriolului distal; 11 Piesa
principal a cozii.

a) n perioada Golgi: 1. - nucleul spermatidei se deplaseaz
n sens axial, ctre un pol al celulei, se alungete i se aplatizeaz
uor; 2. - complexul Golgi, cuprinznd n interiorul sau granule
proacrozomice (granulum proacrosomaticum) i vezicule
proacrozomiale (vezicula proacrosomatica), se deplaseaza, n
cadrul citoplasmei, ctre polul anterior al nucleului; 3. - centriolii se
despart, dispunndu-se unul lng polul caudal al nucleului
(centriolul proximal), iar cellalt la o distan de 1-2 m (centriolul
distal), de nucleu - de la el desprinzndu-se filamentul axial al
viitoarei cozi.
225
b) n perioada cap: 1. proacrozomul (proacrosoma) sau
vezicula crozomal se detaeaz de complexul Golgi, se
aplatizeaz i ia forma unui capion ce mbrac jumatatea
anterioar a nucleului; 2. - complexul Golgi migreaz spre periferia
citoplasmei; 3. - microtubulii din citoplasm se grupeaz ntre cei doi
centrioli i structureaz filamentul axial, din care se va constitui
viitoarea axonem a spermatozoidului.
c) n perioada acrozomic: 1. - nucleul spermatidei se
alungete, devenind ovoidal; 2. vezicula acrozomal se
transform n acrozom i acoper jumtatea anterioar a nucleului;
3. nucleul devine compact, pierde o parte din ap, iar cromatina se
condenseaz; 4. - citoplasma se deplaseaz spre polul posterior al
nucleului; 5.-axonema crete n lungime, structurnd piesa de
conjugare i piesa intermediar; 6.- centriolul distal se desparte ntr-
o jumtate proximal, cu aspect discoidal, situat ntre piesa de
conjugare i piesa intermediar, si o jumtate distal, cu aspect
inelar, ce nconjoar axonema cozii, fiind situat ntre piesa
intermediar i piesa principal.
d) n perioada de maturare a spermiogenezei: 1. - jumtatea
inelar a centriolului distal (denumit si inelul Jensen) se
ndeprteaz, delimitnd lungimea piesei intermediare; 2. -
citoplasma spermatidei se reduce; 3. mitocondriile, n numr de
15-25, se dispun n helix (cu 14 ture), n jurul filamentului axial al
cozii; 4. - se contureaz aspectul morfologic al spermatozoizilor
maturi, care au capul nfundat n faldurile membranei apicale a
celulelor de susinere (Sertoli); 5. - pe msur ce se realizeaz
maturarea, spermatozoizii ncep s secrete hialuronidaza i se
desprind de celulele de sustinere, devenind liberi.
Nucleul spermatidei sufer o serie de modificri, precum:
condensarea cromatinei, formnd n stadiile iniiale fibre paralele
cu axul lung al nucleului, fibre care mai trziu se grupeaz n
lamele;
membrana nuclear si mrete suprafaa, formnd falduri care
sunt mai numeroase spre polul posterior (caudal) al nucleului, unde
i porii membranei sunt mai numeroi;
la polul anterior, cromatina nuclear ader la membrana nucleului,
iar la polul posterior se dispune sub aspectul unui material
filamentos ntre cutele membranei.
Citoplasma spermatidei este mai hialin i conine ribozomi,
lipide, glicogen i puine mitocondrii. Se realizeaz un trazit intens
ntre nucleu i citoplasm.Odat cu maturarea complet se
acumuleaz spre polul posterior al nucleului, sub forma unei
picturi, denumit relicvat citoplasmatic (sau corp rezidual), ce va fi
226
fagocitat de celule Sertoli. n viitorul spermatozoid, rmne numai o
fin pelicul citoplasmatic acoperit de plasmalem.

9.1.1.1.Morfologia spermatozoidului

Evideniat n 1667 la om, de Ham din Leyda i n 1679, la
animale, de van Leeuwenhoek, spermatozoidul (spermatozoon s.
spermium) este format din: cap i flagel (coad).





























Fig. 9. 5. Structura i ultrastructura spermatozoidului la taurine
A- Aspect la microscopul optic; B Aspecte electronomicroscopice.
I Capul spermatozoidului; II Gtul; III Piesa intermediar; IV Piesa principal;
V Peisa terminal.
1- Plasmalema; 2- Acrozom; 3- Membrana nuclear; 4 Nucleu; 5- Protuberane
bazale; 6- Placa bazal; 7- Capitelul; 8- Coloanele segmentate; 9- Centriolul proximal;
10-Mitocondrii; 11- Perechea central de microtubuli; 11- Perechile periferice de
microtubuli; 13- Fibre dense.


227
Capul spermatozoidului
Capul (caput) prezint forme i dimensiuni diferite, n funcie
de specie, aprnd ovalar (la hominide, armsar, taur, berbec, ap,
vier) sau cu form de: par (la iepure i cine), secer (la coco i
obolan), cu lungimi medii ntre 5 m (la bbat) i 9 m (la berbec),
grosimile medii atingnd ntre 2-5 m.
Nucleul spermatozoidului este nconjurat de un strat subire de
citoplasm i de o plasmalem periferic foarte delicat.
n componena capului intr: nucleul, acrozomul, capionul
cefalic, perforatorul, protuberanele bazale i membrana periferic.
Nucleul (nucleus) conine cromatina deshidratat i
condensat, n care ADN-ul (43%) este strns combinat cu
protamine bazice (57%). Ocup cea mai mare parte din capul
spermatozoidului. Cromatina apare mai condensat la baza
nucleului, granular n partea apexial i cu aspect clar, n regiunea
ecuatorial. Cantitatea de cromatin reprezint o caracteristic de
specie. Din cromatin se formeaz cromozomii autosomi i un
heterozom. Deoarece spermatozoizii sunt celule haploide conin
numai jumtate din numrul de cromozomi al unei specii ( n
cromozomi ). Se accept c, aproximativ, jumtate din numrul
total de spermatozoizi dintr-un testicul conin cromozomul sexual X,
iar cealalt jumtate cromozomul Y.(Fig.9.5)
Acrozomul este situat supranuclear, interpus ntre membran
i nucleu, pe care l acoper pn n zona inelului ecuatorial. Se
formez din complexul Golgi n timpul spermiogenezei. Cuprinde n
structura sa: o membrana acrozomic intern (membrana
acrosomatica interna),o membran acrozomic extern ( membrana
acrosomatica externa) i o substana acrozomic (substantia
crosomatica), n care se disting granulele acrozomice (granulum
acrosomale). Este considerat un lizozom specializat ce conine
multe enzime hidrolitice (ex: fosfataza acid, hialuronidaza) si o
protein nrudit cu tripsina. Aceste enzime depolimerizeaz acidul
hialuronic ce cimenteaz celulele foliculare din coroana radiat a
ovocitului, dispersndu-le . Joac un rol hotrtor n fecundaie i
fiind prezent la toate speciile de animale.
Capionul cefalic reprezint o pelicul foarte fin de
citoplasm condensat, ce se interpune ntre membrana periferic
i acrozomul pe care l acoper. Conine glicoproteine.
Perforatorul este situat ntre acrozom i membrana nuclerar,
avnd rolul s perforeze plamalema ovocitului. Formez un canal n
citoplasm, prin care se transfer coninutul nucleului
spermatozoidului.

228
Structura i ultrastructura spermatozoidului





Pari
componente
Structuri Ultrastructuri Observaii
Nucleul vezicule nucleare
saci nucleari




CAP
Acrosomul Membran
acrosomic intern
Membran
acrosomic extern
Substan acrosomic
Granule acrosomice

Capionul
cefalic
citoplasma dintre
plasmalem i acrozom
Perforatorul
Waldeyer
ctoplasma dintre acrozom
i membrana nuclear
Protuberanele
bazale
delimiteaz foseta de
implantaie
Plasmalema membrana periferic

Piesa de
conjugare
(gtul)


placa bazal
capitelul
coloanele segmentare
centriolul proximal
dispozitivul fibrilar
plasmalema







FLAGEL




Piesa
intermediar
jumtate proximal a
centriolului distal
axonema (filamentul
axial)
dispozitivul fibrilar
teaca mitocondril
jumtatea distal a
centriolului distal -
inelul




9 fibrile proteice dense


Piesa principal
axonema (filamentul
axial)
dispozitivul fibrilar
teaca fibroas

plasmalema



fibre circumfereniale + 2
coloane longitudinale
Piesa terminal Filamentul axial
plasmalema

229
Protuberanele bazale apar ca dou formaiuni osmiofile
semicirculare, formate din citoplasm condensat, dispuse la polul
caudal (bazal) al capului. Delimiteaz ntre ele fosa de implantare.
Fosa de implantare (fosulla articularis) apare ca o escavaie redus
ce servete pentru inseria extremitii proximale a filamentului axial
al cozii spermatozoidului.
Membrana periferic, trilaminat, foarte delicat i
transparent, acoper capionul cefalic i acrozomul, delimitnd
capul spermatozoidului. Prezint receptori specifici.

Coada spermatozoidului sau flagelul
Flagelul (flagellum) cuprinde (dupa Nomina Histologica
1994) urmtoarele parti: gtul, piesa intermediar, piesa principal
i piesa terminal.
a) Gtul spermatozoidului (pars conjungens) apare foarte
scurt, circa 0,4 m, fiind delimitat ntre nucleu i jumtatea
proximal a centriolului distal.
Conine placa bazal, capitelul, coloanele segmentate,
centriolul proximal, mitocondriile i dispozitivul fibrilar, fiind delimitat
la periferie de o membran fin de natura lipoproteic. Este foarte
fragil, rupndu-se deseori.
Placa bazal (patella basalis) este o lam fix de citoplasm
osmiofil, dispus n fosa de implantare. Delimiteaz capul
spermatozoidului de gt, interpunndu-se ntre membrana nuclear
i capitel.
Capitelul (capitulum) este segmentul proximal al complexului
centriolar i reprezint zona de unire a bazelor coloanelor
segmentate (basis columnaris), care vine n contact cu faa distal a
plcii bazale.
Coloanele segmentate sau striate (columna striata), sunt
considerate ca fiind rdcinile axonemei flagelului. Apar formate
din elemente proteice fibroase, cu o structur periodic (perioada
este de 650 ). Sunt sintetizate n ribozomii spermatidei i
polimerizate radial n jurul centriolului proximal.
Dupa constituirea coloanelor segmentate, centriolul proximal
devine centriol cinetic al cozii spermatozoidului.
Centriolul proximal (centriolum proximale), situat sub capitel,
prezint o forma de cilindru (cu o lungime de 500nm i un diametru
de 250nm) i o nclinaie de 70, n raport cu axa lung a cozii. Are
peretele format din 9 triplete (A,B,C) de microtubuli.



230
Mitocondriile sunt alungite i dispuse n partea distal a
gtului, nconjurnd dispozitivul fibrilar.
Dispozitivul fibrilar este compus din 9 fibrile dense (aflate n
continuarea coloanelor segmentare), care nconjoar un complex
filamentos axial (axonema), alctuit din 10 perechi de microtubuli,
din care o pereche este central, iar celelalte 9 perechi sunt dispuse
periferic. (Fig. 9.6)


Fig.9.6. Seciuni transversale prin coada spermatozoidului
A Piesa intermediar; B- piesa principal; C Piesa terminal.
a- Filament axial; b Fibre externe; c Fibre satelit; d- Teaca mitocondrial;
e-Teaca fibroas; f- coloane longitudinale; g Plasmalema.

Spermatozoizii imaturi prezint la limita dintre piesa de
comjugare i piesa inmtermediar o pictur citoplasmatic, care va
fi fagocitat de celulele Sertoli pn la maturarea complet.
b) Piesa intermediara (pars intermedia), cu lungimi variabile
(5-10 m), este delimitat ntre cele dou jumati (proximal i
distal) ale centriolului distal. Cuprinde n structura sa: 1. o
membrana plasmatic periferic, ce prezint o margine inelar
(annulus) - la limita cu piesa principal; 2. o pelicula de citoplasm,
n care se gsesc particule mici ce formeaz rezerva de glicogen a
spermatozoidului; 3. mitocondriile - dispuse helicoidal ntr-un
filament dublu spiral (cu circa 25 de ture a 3-4 mitocondrii fiecare),
ce formeaz o teac mitocondrial (vagina mitochondrialis); 4.
fibre externe dense (fibra densa), groase si masive, n numar de
nou, inegal dezvoltate i n contact cu fibrele satelite axolemei,
plasate central; 5. filamentul axial (filamentum axiale s. axonema),
compus din 9 dublete periferice (diplomicrotubulus periphericus) si o
pereche de filamente centrale (microtubulus centralis).
Piesa intermediar joac rolul de central energetic a
spermatozoidului.

231
c) Piesa principal apare de aproximativ 9 ori mai lung
dect piesa intermediar. Cuprinde: 1. - filamentul axial (axonema),
format din cele 10 perechi (9+1) de microtubuli ; 2. nou fibre
dense (fibra densa) externe, groase; 3. - teaca fibroas (vagina
fibrosa) format din fibre circumfereniale (costa fibrosa), care se
prind prin capetele lor n dou coloane longitudinale (columna
longitudinalis) ce reprezint ngrori ale tecii, diametral opuse; 4. -
membrana plasmatic.
d) Piesa terminal (pars terminalis), cu o lungime de 3-4 m
cuprinde numai membrana plasmatic i complexul filamentos axial
(axonema), care si pierde aranjarea tipic a dubletelor.
Ciclul spermatogenetic (spermatogenesis) are o durat
variabil la diverse specii (13,5 zile la taur, 10,4 la berbec, 8 zile la
vier), iar dintr-o spermatogonie rezult un numar variabil de
spermatide (112 la oarece, 96 la hamster i 64 la taur i berbec).
Desfurarea spermatogenezei este influenat de numeroi
factori fizici, fiziologici, farmacologici, umorali. Astfel, temperatura
ridicat, aplicat local sau n condiii generale produce oligospermie,
iar razele X i gama atac spermatogoniile si cromozomii
spermatidelor. Alimentaia deficitar n proteine sau vitamine (A, E),
unii hormoni (FSH, LH) i sistemul nervos pot interveni, modificnd
funcia spermatogenetic.
Pentru a-si ndeplini functia de reproducere, spermatozoizii
trebuie s prezinte: mobilitate, putere fecundant i vitalitate.
Mobilitatea se datoreaz prezenei tubulilor n organizarea
flagelului (cozii) spermatozoidului. Suprimarea mobilitaii mpiedic,
n mod ireversibil fecundaia. Viteza de deplasare difer n funcie
de specie, atingnd: 6-7 mm/minut la taur; 5-10 mm/minut la berbec;
4-6 mm/minut la armasar; 3-6 mm/minut la vier.
Puterea fecundanta sau capacitatea vital (capacitaia) este o
nsuire pe care spermatozoizii o dobndesc cnd ajung n cile
genitale femele, dup o perioad de aclimatizare. Aceast nsuire
se dobndete prin pierderea unei caliti antagoniste
(decapacitaia) pe care spermatozoizii o folosesc ca protecie n
drumul lor prin cile genitale mascule. Ea permite spermatozoidului
s ptrund n ovul sau n mucoasa uterin.
Vitalitatea este proprietatea spermatozoizilor de a-i pstra
mobilitatea i puterea fecundant n condiii de conservare.





232
9.1.2. Ovogeneza

Ovogeneza (ovogenesis) cuprinde complexul de transformri
prin care trece ovogonia (celula germinativ iniial) pn devine
ovul (ovocit) apt de fecundare.
Se petrece n zona cortical a ovarului, n interiorul unor
formaiuni histologice complexe, denumite foliculi ovarieni.
n ovogenez sunt parcurse trei perioade: germinativ, de
cretere i de maturare.
1. Perioada germinativ (de nmulire) se desfoar n timpul
vieii embrionare, avnd ca punct de plecare ovogoniile din ovarul
embrionar. n perioada embrio-fetal, n ovar se formeaz ntreaga
rezerv de celule sexuale femele, pentru toat viaa (ce cuprinde
circa 60.000 - 100.000 ovocite de ordinul I). Ovocitele de ordinul I
(ovocytus primarius) rmn n stare de laten biologic (status
quiescent) pn la pubertate, fiind blocate n profaza diviziunii
meiotice (reducionale).
2. Perioada de cretere variaz foarte mult ca durat,
ncepnd imediat dupa natere i ajungnd s se ntind pe ani de
zile (exemplu: la hominide pn la 20-30 de ani). n cursul acestei
perioade se produce i se acumuleaz vitelus.
La psri, perioada de vitelogeneza cuprinde dou intervale:
a) unul lung de circa 180 de zile, la gin, n care se realizeaz 5-
10% din rezerv de vitelus i b) altul mai scurt, de circa 5 -12 zile, n
care se sintetizeaz 90-95% din vitelus.
Vitelogeneza const n formarea de plcue de vitelus n
citoplasma ovociilor primari. Vitelusul este format din substane
nutritive (glicogen, lipide, fosfolipide) care sunt produse n ficat
(vitelus exogen) apoi sunt vehiculate de snge i pinocitate n
ovocite prin microvilozitile care apar la suprafaa membranei
acestor celule.
3. Perioada de maturare a ovocitelor ncepe la pubertatea
animalului. Cuprinde cele dou diviziuni de maturare: a) prima
diviziune, care este meiotic (reducionala), din ovocitul de ordinul I
rezultnd dou celule inegale: una de talie mare (haploid) - ovocitul
de ordinul II (ovocytus secundarius) i alta de talie mic - primul
globul (polocytus primarius), ce se poate divide; b) a doua diviziune
de maturare este mitotic, din ovocitul secundar (ovocit de ordinul II)
rezultnd ovulul (ovocitul) matur i al doilea globul polar (polocytus
secundarius).
n acest fel, la sfritul perioadei de maturare, dintr-un ovocit
primar, rezult un ovocit cu set haploid de cromozomi i trei globuli
polari. (Fig. 9.7)
233


Fig.9.7. Ovogeneza
1- Ovogonie; 2- Ovocit I; 3-
Ovocit II; 4- Primul globul
polar; 5- Spermatozoid; 6_
Ovul matur; 7- Globuli
polari secundari.


Dehiscena (ruperea)
folicular i eliberarea
ovocitelor are loc n
momentul n care ovocitul
primar (ovocitul de ordinul I)
si formeaz fusul de
diviziune, intrnd n prima
diviziune de maturare
(meiotica), nct pavilionul
oviductului capteaz deja ovocitul secundar (ovocitul de ordinul II).
Posibilitile de supravieuire ale ovocitului secundar (ovocitul de
ordinul II) sunt de 24-48 de ore, iar a dou diviziune de maturare se
finalizeaz numai dac a avut loc penetraia zonei pelucide de ctre
spermatozoizi. n caz contrar, ovocitul secundar (de ordinul II)
rmne blocat n metafaza celei de-a doua diviziuni de maturare.
n momentul dehiscenei, ovocitul secundar (ovocitul de
ordinul II) este nconjurat de ovolem, zona pelucida i coroana
radiata.
Ovolema (ovolema sau membrana vitelin) este o membrana
citoplasmatic cu numeroi microvili.
Zona pelucid (zona pellucida) este o zon mucopoliglucidic,
traversat de microvili lungi ai celulelor foliculare, ce ajung la
microvilii ovolemei.
Coroana radiata (corona radiata) este format din 1-2 rnduri
de celule foliculare.

9.1.2.1. Morfologia ovulei

Ovula sau ovocitul matur (ovum) reprezint celula sexual
femel matur, haploid, cu o form sferic i cu un diametru de
pn la 200 m. Conine, pe lng materialul genetic inclus n
cromozomi i material nutritiv necesar pentru perioada iniial de
dezvoltare a embrionului.
a) Nucleul celulei apare sferic, veziculos, nucleolat, cu
cromatina fin granular, situat central sau excentric i delimitat de o
234
membran dubl cu pori, n al cror lumen este prezent un material
electronodens, ce intervine selectiv n reglarea tranzitului nucleo-
citoplasmatic. Prin porii membranei nucleare trec n citoplasm
granule electronodense de 350.(Fig.9. 8)





Fig. 9.8. Structura i ultrastructura ovocitului
A- Aspect la microscopul optic; B- Aspect electronomicroscopic.
1- Citoplasma ovocitului; 2- Nucleu; 3- Reticul endoplasmic neted; 4- Reticul
endoplasmic rugos; 5- Mitocondrii; 6- Plcue viteline; 7- Ovolema; 8-Zona pelucida;
9- Celule foliculare.

b) Citoplasma ovulei (ovoplasma) este acidofil i fin
granular. Conine, pe lng organitele comune, aglomerate n zona
perinuclear, mult ARN liber i nucleul vitelin (Balbiani)
(deuteroplasma s. vitellus), o formaiune ovoid format din
mitocondrii, dictiozomi i lamele inelare. Mitocondriile alctuiesc o
coroan perinuclear incomplet. La bovidee, mitocondriile au o
prelungire n forma de glug, ce cuprinde n concavitatea ei o
picatur lipidic. Cristele mitocondriale lipsesc n prelungire dar se
menin n restul mitocondriei. (Fig.8.9)

Fig. 8.9. Aspectul mitocondriei n ovocitul de la
bovidee
1- Matrice mitocondrial; 2- Criste mitocondriale; 3-
Prelungire n form de glug;
4- Pictur n form de lipide.



c) Complexul Golgi se extinde i n zona cortical a
citoplasmei, unde este constituit din granule corticale, nconjurate de
endomembrane. Granulele corticale particip la formarea lichidului
perivitelin, ndeplinind un rol important n fecundaie. Complexul
235
Golgi particip activ la concentrarea vitelusului i la sinteza lipidelor,
procese n care sunt implicate i mitocondriile.
Reticulul endoplasmic este de tip neted, cu elemente dispuse
lax. Ribozomii sunt liberi sau ataai reticulului endoplasmic. De
asemenea, sunt prezeni n citoplasm: lizozomi primari, corpi
multiveziculari (ca urmare a pinocitozei intense) i numeroase
granule (plcue de vitelus).
d) Membrana vitelina a ovocitului ( ovolemma s.plamalemma)
este de natura lipoproteic trilaminat i prezint numeroase
prelungiri - sub forma de microviloziti fine, care se angreneaz
cu prelungirile rare i groase ale celulelor foliculare. Se pare c
formaiunile microviloase nu sunt permanente, apariia lor fiind
legat de stadiul funcional al celulei. La nivelul membranei viteline
se observ numeroase vezicule pinocitice, ceea ce demonstreaz
schimbul intens de substane ce se efectueaz ntre celulele
foliculare ale coroanei radiata i ovul. (Fig.9.10)


Fig. 9.10. Relaia dintre ovocit i
celulele foliculare
1- Prelungirile celulelor foliculare;
2- Microvilii ovocitului;
3- Zona pelucida;
4- Desmozomi;
5- Vezicule de pinocitoz





Zona pelucida (zona pellucida) prezint un aspect striat,
datorat microvilozitilor membranei viteline i ale celulelor
foliculare, n care se realizeaz jonciuni celulare de tipul zonulei
adherens.
Capacitatea vital a gametului femel difer, n raport cu specia
i se menine: 10 ore la iap, 20 ore la vac, 5 ore la oaie, 12 ore la
scroaf i 6 ore la iepuroaic.
Clasificarea ovocitelor se face n funcie de cantitatea de
vitelus pe care o conin, existnd urmtoarele tipuri: oligolecite,
lecite, telolecite i centrolecite.
Ovulele oligolecite conin vitelus n cantitate mic, iar segmentaia
lor este total i inegal. Sunt prezente la cefalocordate (la
amfioxus)si la mamifere. (Fig.9.11)


236


9.11. Tipuri de ovocite
A- Ovocit oligolecit; B- Ovocit centrolecit;
C- Ovocit mezolecit (lecit); D-Ovocit telolecit;
1-Disc germinativ;
2- Latebr Purkinje;
3- Vitelus nutritiv.

Ovulele lecite sau mezolecite se ntlnesc la batracieni i
cuprind mai mult vitelus dect cele oligolecite. Vitelusul se
aglomereaz la polul vitelin sau vegetativ al celulei, n timp ce polul
vitelin al celulei este srac n vitelus i conine nucleul. Segmentaia
este total, rezultnd blastomere inegale.
Ovulele telolecite sunt caracteristice petilor, reptilelor i
psarilor. Vitelusul, n cantitate mare, ocup aproape ntreaga
mas a ovulei, n timp ce nucleul (sau vezicula germinativ)
mpreun cu o cantitate redus de citoplasm formeaza discul
germinativ. Segmentaia este parial i discoidal interesnd numai
Ovulele centrolecite sunt caracteristice artropodelor. Vitelusul
nutritiv ocupa centrul ovulei, n timp ce vitelusul formativ
(hialoplasma) formeaz un strat periferic subire. Segmentaia
intereseaz numai vitelusul formativ, aprnd de tip superficial.





9.2.FECUNDAIA

237
Fecundatia este un proces biologic complex, format dintr-o
succesiune de fenomene interdependente prin care, cei doi gamei
de sex opus (spermatozoidul i ovula) se contopesc i se asimileaz
reciproc, rezultnd zigotul (sau oul), prima celula a unui viitor
organism.
Fazele fecundaiei

Faze Intervin: Se produce: Observaii:
Faza de
apropiere
-fertilizina
( ginogamon)
-antifertilizina
(androgamon)
-disociere celulelor
foliculare
-este
nespecific
Faza de
penetraie
-acrozina
(=hialuronidaza
)
-penetraia membranei
pelucida
-eliberarea polocitului
secundar
- ptrunderea
spermatozoidului n
ovula
- la
homonide
i roztoare
penetraia
este total
Faza de
amfimixie
-rotaia capului
spermatozoidului
-formarea asterului
spermatic
-cariogamia
-singamia
-refacerea setului
diploid
determinarea sexului


Fecundaia se realizeaz n trei faze succesive: de apropiere,
de penetraie i de amfimixie.
a) Faza de apropiere are loc datorit atraciei reciproce dintre
cei doi gamei ntruct membrana pelucida a ovocitului conine o
glicoprotein denumit fertilizin sau ginogamon, care reacioneaz
cu o protein acid de pe suprafaa spermatozoizilor, denumit
antifertilizin sau androgamon. n felul acesta se produce o reacie
similar reaciei dintre antigen i anticorp.
S-a demonstrat ca anticorpii IgG pot impiedica ataarea
spermatozoizilor i penetrarea zonei pelucide (denumit i
membran pelucida). Pot aprea autoanticorpi pentru zona
pellucida care s genereze infecunditate.
Spermatozoizii care au capacitate fecundant (capacitatio)
produc disocierea celulelor foliculare din coroana radiata cu
238
ajutorul hialuronidazei, deschiznd drumul spre membrana (zona)
pelucida. La vac, oaie, capr disocierea are loc imediat dup
ovulaie. Disocierea celulelor foliculare nu este specific, realizndu-
se i sub aciunea enzimelor eliberate de spermatozoizii altor specii.
Apropierea celor doi gameti are loc n treimea superioara
oviductului. Ataarea spermatozoidului de zona pelulucida are loc n
urma formrii unor legturi ntre o glicoprotein din membrana
plamatic a spermatozoidului (o galactosyltransferaz) i receptorii
pentru aceasta din zona pellucida .(Fig.9.12)




Fig. 9.12.
Etapele realizrii fecundaiei
A- Penetrarea zonei pelucide, a speiului perivitelin i a membranei viteline;
B- Ptrunderea spermatozoidului n ovul; C-Formarea pronucleilor mascul i femel;
D-Amfimixia; E- Metafaza primei diviziuni
1- Ovocitul; 2- Nucleul; 3- Ovolema; 4- Spaiul perivitelin; 5- Zona pelucid cu
spermatozoizi.

b) Faza de penetraie (penetratio spermii) const n
ptrunderea ctorva spermatozoizi, numai din aceeai specie sau
din specii foarte apropiate, ca de exemplu: cal-mgar.
Spermatozoizii trec prin zona (membrana) pelucida i ajung n
spaiul perivitelin (spatium perivitellinum), plin cu lichid perivitelin
(liquor perivitellinus).
n urma contactului dintre acrozom i membrana (zona)
pelucida, se rupe membrana acrozomului (reactio acxrosomalis),
eliberndu-se acrozina (sau hialuronidaza), ce produce o hidroliz
localizat, realiznd un canal (via spermatica) tangenial la ovolem.
239
Micrile spermatozoizilor (motus spermii) de traversare a zonei
pelucide dureaz circa 5 minute.
Ovocita reacioneaz la ptrunderea unui numr redus de
spermatozoizi n zona pelucida, prin realizarea celei de-a doua
diviziuni de maturare, rezultnd al doilea globul polar (polocitul
secundar), celul care va fi eliminat i ovula, apt pentru
fecundare. Dupa ce primii spermatozoizi au ptruns n zona
pelucid se produce reacia zonei pelucide, adic: granulele
corticale din ovocit i vars coninutul n spatiul perivitelin, ceea ce
face ca din acest moment zona pelucida s devin impermeabil i
rezistent fa de acrozina altor spermatozoizi. Impermeabilizarea
se poate realiza lent, in circa 60 secunde (la vac, iap, oaie,
scroaf, cea, hamster), sau rapid n1-2 secunde (la iepuroaic). n
felul acesta se asigura fecundaia monospermic (monospermia) i
se evit polispermia (polyspermia).
Spermatozoizii cei mai viguroi se orienteaz spre orificiul
membranei viteline prin care a fost expulzat cel de-al doilea globul
polar. Numai un singur spermatozoid, denumit spermatozoid
privilegiat ptrunde n ovul.
La taurine, ovine, canide i leporide, n ovul ptrunde numai
capul spermatozoidului, gtul i coada rmnnd n zona pelucida.
La hominide i la unele roztoare ( oarece, cobai) penetraia este
total.
La mamifere, producerea contactului dintre cei doi gamei i
realizarea fecundaiei depinde de supravieuirea spermatozoizilor,
depui n cile genitale femele. Supravietuirea variaz n funcie de
specie, fiind de: 44 ore la armsar, 25-30 ore la taur, 30-35 ore la
berbec, 8 -12 ore la iepure.
c) Faza de amfimixie sau concepie (conceptio) are loc dup
ptrunderea spermatozoidului n ovul. n aceast faz se produc
urmtoarele fenomene: 1. capul spermatozoidului migreaz spre
centrul ovulului, unde se afla nucleul, suferind o rotaie de 180,
nct acrozomul se orienteaz spre membrana vitelin, iar gtul
spermatozoidului se orienteaz spre nucleul ovulului; 2. centriolul
proximal se detaeaz de baza capului, formnd spermocentrul, iar
citoplasma ovulei se condenseaz n jurul spermocentrului sub
form de raze citoplasmatice, dnd natere la asterul spermatic
(aster spermaticus); 3. capul spermatozoidului, respectiv nucleul,
ncepe sa asimileze foarte repede citoplasma ovulei, crete n volum
i devine pronucleu mascul (pronucleus masculinus); 4. nucleul
ovulei sufer modificri infrastructurale i mai ales biochimice,
transformndu-se n pronucleu femel(pronucleus femininus); 5. cei
doi pronuclei se apropie reciproc, membranele lor vin n contact, se
240
alipesc (realiznd cariogamia), se dizolv n acest punct i se
formeaza o singur membran nuclear, n interiorul creia se
asimileaz reciproc (realiznd singamia ) componentele
infrastructurale i biochimice ale celor doi pronuclei, obinndu-se
astfel o celula nou, zigotul (zygota s. conceptus) sau oul fertilizat
(ovum fertilizatum s.spermovium).
n timpul amfimixiei se reface setul diploid al zigotului,
realizndu-se setul de cromozomi caracteristic speciei i stabilindu-
se bazele ereditii ale noului organism. Se determin sexul i se
declaneaz segmentaia.
Durata total a fecundaiei variaz n funcie de specie, fiind n
medie de 12-16 ore, la animalele domestice. Cel mai mare numr
de ore (10-12 ore) este ocupat de fenomenele care au loc la nivelul
pronucleilor.
Exist unle specii de animale nevertebrate (albine,furnici,
purici de plante) sau vertebrate (o specie de oprl, Lacerta
saxatilis), la care dezvoltarea ovulei se poate produce fr a fi
avut loc fecundaia, prin fenomenul de partenogenez. De
asemenea, la unele specii de peti (la caras - Carassius auratus
gibelio), a fost observat fenomenul de pseudogamie sau
ginogenez , o form de fecundaie incomplet, cnd nu se produce
amfimixia, dei spermatozoidul ptrunde n ovul. Puii rezultai au
motenit i unele caractere de la tai, ceea ce demonstrez influena
substanelor din spermatozoizi asupra metabolismului i dezvoltrii
oului,chiar i n cazul, n care nu s-a produs amfimixia.
n patologia fecundaiei se ntlnesc aspecte precum: a)
himerismul - cnd are loc o fecundaie dispermic: un spermatozoid
face amfimixie cu nucleul ovulei, iar cellalt spermatozoid face
amfimixie cu nucleul globulului polar, antrenndu-se ntr-o
dezvoltare anarhic; b) aberaiile cromozomiale, datorate greelilor
din meioz i mitoz, ce pot interesa att gonozomii, ct i
autozomii, producndu-se diferite malformaii cromozomiale.
9.3. SEGMENTATIA
Prin segmentaie se nelege ansamblul diviziunilor pe care le
urmeaz zigotul i n urma crora se realizeaz edificii pluricelulare.
Se declaneaz la un interval variabil de timp dup fecundare (la
circa 30 de ore la hominide).La sfritul ei embrionul este schiat,
fiind constituit din primele dou foie embrionare. Se desfaoar n
timp ce zigotul coboar prin oviduct n uter i cuprinde urmtoarele
stadii embrionare: morula, blastula, gastrula i neurula.
Ca model didactic pentru explicarea segmentaiei, se prezint
segmentaia la amfioxus (de la grecescul amphi = dublu; oxys =
241
ascuit), Branchiostoma lanceolatum, un cefalocordat. Este cea mai
simpl segmentaie i prezint asemnri cu cea de la pasre i
mamifere.

9.3.1.Segmentaia la amfioxus

Amfioxus are ovul de tip oligolecit, care va realiza o
segmentaie total holoblastic (fissio holoblastica s. fissio totalis) i
inegal ( fissio inequalis) , parcurgnd fazele de: morul, blastul,
gastrul i neurul. (Fig. 9.13)


















Fig. 9.13. Segmentaia la amfioxus
A- Zigot; E,C,D Apariia blastomerelor; E- Morula;
F- Invaginarea blastulei; G- Formarea gastrulei.
1- Polul animal; 2- Polul vegetal;

9.3.1.1.. Faza de morula

Faza de morul (morulatio) ncepe la cteva ore dup
fecundare, cnd zigotul (zygota s. conceptus) sau celula ou intr n
diviziune. Prima diviziune se realizeaz dup un plan vertical,
meridional (planul fissionis meridionalis), rezultnd dou blastomere
(blastomerus) egale, al cror volum total nu depsete volumul
zigotului (a celulei ou). A doua diviziune este tot meridional
(vertical), ns perpendicular pe planul primei diviziuni, rezultnd
patru blastomere. A treia diviziune este transversal, planul de
diviziune fiind paralel cu ecuatorul, dar situat supraecuatorial
(planum fissionis tangentiale). Rezult opt blastomere inegale: patru
blastomere mici, micromere (micromerus), n emisfera polului
animal i patru blastomere mai mari, macromere (macromerus),
242
situate n emisfera polului vegetativ. Prin diviziunile ulterioare,
numrul blastomerelor crete n proporie geometric (16, 32, 64,
128) att n cazul micromerelor ct i n al macromerelor. Celulele
rezultate n urma acestor diviziuni vor genera o formaiune
sferoidal (spheroideum s. sphaeroideum), plin de celule cu aspect
muriform, denumit morula (morula).
Morula este mai mare, ca volum, dect celula ou din care s-a
format. n cadrul ei, micromerele se dispun spre polul animal, iar
macromerele spre polul vegetal al morulei.
Se consider c, pn n stadiul de cteva (8-10) blastomere,
toate celelele sunt omnipotente (cellula omnipotens) sau
pluripotente (cellula pluripotents), avnd aceeai valoare n
difereniere. n acest stadiu celulele sunt nedeterminate (cellula
indetermniata) i indiferent de poziia lor, dac sunt detaate i puse
n condiii propice, evolueaz pn la sfritul dezvoltrii
embrionare, putnd genernd un organism ntreg.

9.3.1.2. Faza de blastula (blastulatio)

Blastomerele din interiorul morulei ncep s produc un lichid
blastocelic ce le mpinge la periferie, unde se dispun sub forma unui
singur strat de celule, ce delimiteaz cavitatea blastocelic (cavum
blastocystis). Rezult, astfel, stadiul monoblastic (blastocystis
unilaminaris) sau blastula (blastula) s.blastocystis).
Blastula sau blastocistul (blastocystis) cuprinde circa 128
blastomere, Este sferoidal i nu depsete, la amfiox, volumul
iniial al zigotului. n cazul acestei formaiuni, micromerele au mai
puin vitelus i formeaz peretele emisferei animale, iar
macromerele sunt mai bogate n vitelus, alctuind peretele emisferei
vegetale.
n aceasta faz se produce determinarea (determinatio) prin
poziie, blastomerele ocupnd prin diviziuni repetate, anumite poziii.
Blastomerele vor evolua diferit,n funcie de factorii de mediu
ambiant i n raport cu interrelatiile intercelulare. Aceasta faz este
denumita i preludiul diferenierii, pentru ca, dup intrarea celulelor
n faza de determinare, conform poziiilor i relaiilor intercelulare
noi, n fiecare celul sau ntr-un grup de celule s nceap sinteze
specifice. n acest fel sunt activate anumite protein-enzime, care vor
iniia sinteza unei proteine specifice sau a unui anumit teritoriu
morfogenetic din care fac parte celulele respective.

9.3.1.3. Faza de gastrul (gastrulatio)

243
Faza de gastrul (gastrulatio) se caracterizeaz printr-o
proliferare intens, o cretere volumetric i prin deplasri
morfogenetice (motus morphogenetici) ample de celule sau grupuri
de celule, n urma crora rezult foiele embrionare (strata
germinalia).
Micromerele se divid mai rapid i alunec (immigratio) la
suprafaa blastulei prin epibolie (epibolia), realiznd foia celular
extern (epiblastus) sau ectoblastul (ectoblastus). Macromerele
care conin vitelusul se divid mai puin intens i se invagineaz
(invaginatio), prin embolie, realiznd foia intern (endoderma) sau
endoblastul (endoblastus). Embolia const ntr-o invaginanare n
cavitatea blastocelic a macromerelor. Cavitatea format n urma
invaginrii se numete arhenteron i comunic cu exteriorul prin
blastopor, care marcheaz extremitatea caudal a corpului viitorului
animal, fiind delimitat de dou buze, una superioar, alta inferioar.
Spre sfritul fazei are loc o alungire (elongatio) a gastrulei, n
sensul axului antero-posterior.

Factorii ce intervin n diferenierea i dezvoltarea
embrionului.
n evenimentele complexe ale diferenierii i dezvoltrii
embrionare, un rol important, n afara controlului genetic permanent,
l au influenele din mediul extracelular, interaciunea celulelor
nvecinate, micarile celulare morfogenetice i adezivitatea celular.
Astfel, accesibilitatea diferit la factorii din mediul extracelular,
determin potenialiti evolutive diferite. Acioneaz un gradient de
mediu, care se refer la faptul c lichidul extracelular este mai bogat
n substane nutritive la periferia masei de celule, n timp ce n
centrul masei de celule este mai srac n substante nutritive i mai
bogat n produi de excreie ai celulelor.
Interaciunile celulare cu rol inductiv apar foarte de timpuriu n
embriogenez, nc din faza de 8 blastomere. n etapa de morul,
celulele sunt cuplate electric, membranele celulare avnd o foarte
mare permeabilitate ionic. Curentul electric realizeaz un cuplaj,
chiar n absena jonciunilor specializate. ntr-o faz mai avansat,
permeabilitatea pentru ioni scade foarte mult, rmnnd nealterate
la nivelul jonciunilor de tip gap, care apar imediat dupa primele
determinri.
Micrile celulare (motus morphogenetici) sunt foarte intense
n embriogenez, fiind determinate de factori greu de definit,
asemntori, ca efect, cu factorii chimio-tactici pentru leucocite.
Micrile celulare ncep n faza de gastrul i permit celulelor s
244
ajung n contact cu un alt tip de celule cu care pot stabili
interaciuni cu rol inductiv.
Adezivitatea celular joac un rol deosebit n evenimentele
complexe ale diferenierii i dezvoltrii embrionare, fiind mediat de
molecule de proteine, denumite molecule de adezivitate (n limba
engleza: cell adhesion molecules, prescurtat: CAM). Acestea
aparin membranei celulare i matricei extracelulare. (Fig.9.14)




Fig.9.14. Regiunile blastocistului n
funcie de prezena moleculelor
adezivitii celulare (CAM)
A-Regiuni cu N-CAM; B- Regiuni cu L-CAM;
C-Regiuni fr CAM.
1-Linia primitiv; 2- Ectoderm; 3- Sistem
nervos; 4- Notocord; 5- Somite;6- Cord;
7- Aparat urinar; 8-Muchi neted; 9-
Endoderm; 10- Tesuturi hematoformatoare.


Moleculele adezivitii celulare
activeaz selectiv n cursul
desfurrii proceselor dinamice care au loc, modificnd
comportamentul celulelor angajate n micari morfogenetice. Ele au
fost identificate sau izolate prin metode ale imunologiei i au fost
definite dup celulele pe care au fost depistate, astfel, existnd:
molecule de adezivitate interneuronale ( N-CAM ), molecule ale
adezivitatii celulelor hepatice ( L-CAM ) i molecule ale adezivitatii
dintre neuron i nevroglie ( NG-CAM ). Ele sunt glicoproteine, iar N-
CAM conin cantitti foarte mari de acid sialic. N-CAM, L-CAM si NG-
CAM nu au specificitate ncruciat, deoarece nu se leag ntre ele
pentru a media adezivitatea dintre celule.
n funcie de repartiia moleculelor adezivitii celulare (CAM),
embriologii au conceput hrti ce indic esuturile i structurile care
se vor forma din fiecare regiune. Astfel, regiunile blastocistului care
exprim N-CAM vor da natere plcii neurale, notocordului i
somitelor, iar cele care exprim L-CAM vor genera ectodermul non-
neural i endodermul. Cu ajutorul metodelor de imunofluorescen
s-a observat c 2/3 din suprafaa blastomerului este pozitiv pentru
cele dou tipuri de molecule ale adezivitii.

9.3.1.4. Faza de neurul

245
Faza de neurul (neurulatio) sau perioada iniial a anului
neural (periodus sulci neuralis initialis) se caracterizeaz prin
formarea din ectoblast, n mod succesiv a plcii neurale (lamina
neuralis), a canalului i a tubului neural . Astfel, faza neurulrii
marcheaz constituirea tubului nervos, dar, totodat i nceputul
histogenezei, precum i a diferenierii primordiilor de organe. n
aceast faz se petrec dou evenimente morfogenetice majore: a)
formarea tubului neural si b) cordomezoblastului.
a) Formarea tubului neural
Micromerele ectoblastice din zona dorso-central a
embrionului devin mai nalte dect ectoblastul, se ngroa,
formndu-se placa sau lama neural (neuroectoblastul) orientat n
axul longitudinal al embrionului.


Fig. 9.15. Neurulaia la Amfioxus Etape iniiale
A,B,C Seciuni transversale
1-Ectoderm, 2-Endoderm, 3- Arhenteron, 4- an i tub neural;
5-Notocord; 6-Diverticuli mezoblastici.

Celulele plcii neurale se divid n continuare cu mare intensitate,
nct placa neural se ndoaie i se invagineaz puin, formnd
jgheabul (sulcus neuralis) i canalul neural (canalis neuralis) cu
forma literei U sau V (pe seciune transversal) delimitat de
crestele neurale (crista neuralis). Ulterior, jgheabul neural se
nchide prin apropierea i sudarea marginilor sale superioare,
realizndu-se tubul neural (tubus neuralis) .





Neurulaia la Amfioxus

246
b) Formarea cordomezoblastului
Se desfoar concomitent cu formarea tubului neural i
const n formarea coardei dorsale i a mezoblastului primar.
Coarda dorsal sau notocordul (notochorda) se formeaz n
axul sagital dorsal al endoblastului prin diviziuni rapide i proliferri
puternice, dup care se detaeaz de endoblast i se dispune
ventral de tubul neural.
Concomitent, paramedian se produce o ngroare a celor
dou margini laterale ale jumtii dorsale a endoblastului,
Evenimente Etape Formaiuni
specifice
Formaini
terminale
Observaii:
Placa neurala




La psri i
mamifere, n
ectoblast, n aria
pelucid apar:
linia primar,
nodulul anterior,
prelungirea
cefalic,
semiluna
gonocitar,
nodulul
posterior
Fomarea
tubului neural
(origine n
ectoblast)
Jgheab neural Creste neurale Ganglionii
nervoi
Nervii



Tub neural
Vezicula
cerebral
primar
(encefalul)
Telencefal
Diencefal
Mezencefal
Mielencefal
Metencefal

Tubul neural Mduva
spinrii

Coarda
dorsal
Notocordul Coloana
vertebral
La pasri si
mamifere se
dezvolt din
ectoblast-
prelungirea
cefalic
Formarea
cordomezo-
blastului
(origine n
endoblast)
Mezoblastul
primar
Somitele
Nefrotomul
Hipoblastul
Miotoamele
Sclerotoa-
mele
Hipoblastul
(somatopleu
ra i
splanchno-
pleura)
La psri i
mamifere se
dezvolt din
ectoblast de pe
laturile liniei
primitive i din
prelungirea
cefalic
247
realizndu-se dou creste paramediane cu aspect triunghiular, care
se vor detaa de endoblast i vor forma, pe ambele laturi,
mezoblastul primar.
Mezoblastul primar sau mesodermul paraaxial (mesoderma
paraaxiale) se dezvolt, ptrunznd, pe fiecare parte, printre
ectoblast i endoblast, constituind cea de-a treia foi embrionar,
ce marcheaz apariia stadiului triblastic (tridermic), care ncheie
embriogeneza, marcnd trecerea spre histogenez i
organogenez.(fig.9.16)




Fig.9.16. Neurulaia la Amfioxus Etape finale
A,B,C Seciuni transversale
1- Tub neural; 2- Coard dorsal; 3- Saci celomici; 4- Intestin; 5- Cavitate
celomic; 6- Splanchnopleura; 7- Somatopleura.

Prin dezvoltarea mezoblastului, vor rezulta trei formaiuni
(somitele, nefrotomul i hipoblastul) dispuse dorso-ventral i iniial
legate ntre ele. Tot din mezoblast deriv i mezenchimul.
Somitele(somiti) apar ca dou mase celulare, triunghiulare pe
seciune transversal ce flancheaz lateral tubul neural i coarda
dorsal. Ele se vor segmenta transversal, printr-un proces denumit
metamerizare. Din somite se vor diferenia: a) miotoamele
(myotomi),din partea dorso-lateral a somitelor, formate din
mioblati, care se vor transforma n fibre musculare; b)
sclerotoamele (sclerotomi),din partea medial a somitelor, din care
se vor dezvolta oasele.
Nefrotomul (nephfrotomi) se segmenteaz transversal (se
metamerizeaz) genernd primordiile (primordia) sau mugurii
embrionari ai aparatului urinar.
Hipoblastul nu se metamerizeaz, ci se delamineaz
(delaminatio) (despic) longitudinal, genernd splanchnopleura i
248
somatopleura, ce vor delimita cavitatea celomic primar (celoma s.
coeloma) i vor da natere membranelor seroase ale cavitilor
(pleura, peritoneul, pericardul). (Fig.9.16)
Splanchnopleura (splanchnopleura) sau foia visceral va
acoperi intestinul primitiv i toate organele ce se vor forma din el.
Somatopleura (somatopleura) sau foia parietal va cptui
ectoblastul care delimiteaz embrionul.
Mezenchimul (mesenchyma) este un derivat mezoblastic ce
se formeaz din celulele migrate de pe faa intern a somitelor i a
splanchnopleurei. El va da natere: sngelui, esutului conjunctiv
propriu-zis, sistemului macrofagic monocitar i muchilor netezi.
Dup ncheierea stadiului de morul, n locul termenilor de
ectoblast, endoblast i mezoblast, se vor folosi termenii de
ectoderm, endoderm i mezoderm. Din foiele embrionare se
vor diferenia esuturile, sistemele i aparatele organismului.
Din ectoderm (ectoderma) se formeaz: epiderma, epiteliul
mucoasei bucale i anale, sistemul nervos, hipofiza, epifiza,
medulosuprarenala, epiteliul cornean i cristalinian, epiteliul
senzorial auditiv, retina i epiteliul olfactiv. Se remarc apariia unor
ngrori ectoblastice denumite placode: placoda olfactiv, placoda
cristalinian i placoda auditiv.
Placoda olfactiv (placoda olfactoria) difereniaz, prin
evoluie, neuronii olfactivi i celulele de susinere din mucoasa
olfactiv. Placoda cristalinului (placoda lentis) va genera cristalinul,
iar din placoda auditiv (placoda otica)se va diferenia vezicula
auditiv din care se va dezvolta labirintul membranos.
Din mezoderm (mesoderma) se difereniaz: epiteliile rinichilor
i gonadelor, mezoteliile cavitilor pleurale, pericardiace i
peritoneale; endoteliile vaselor sanguine i limfatice; celulele
corticosuprarenalei; celulele Leydig din testicul, celulele luteale ale
ovarului; esuturile conjunctive, sistemul macrofagic monocitar;
scheletul osos; sngele, muchii; vasele; aparatul urinar; unele
poriuni ale aparatelor genitale.
Din endoderm (endoderma) se difereniaz: epiteliile
aparatului respirator (cu excepia mucoasei nazale); epiteliul tubului
digestiv (exceptnd epiteliile cavitii bucale i canalului anal);
ficatul, pancreasul i vezica biliar; glandele tiroid i paratiroid;
epiteliul cavitii timpanice i ale tubei auditive; timusul.



Histogeneza i organogeneza

249
Foia
embrionar
esuturi Aparate sau
sisteme
Organe
Ectoderm Epidermul
Epiteliul mucoasei
bucale i nazale
Epiteliul mucoasei
anale
Epiteliul cornean
Epiteliul cristalinian
Epiteliul senzorial
auditiv
esutul nervos
Sistemul
nervos
Hipofiza
Medulosupra-
renala
Retina
Placoda
olfactiv
Placoda
cristalinian
Placoda auditiv
Mezoderm Celulele sistemului
macrofagic
Celulele
corticosuprarenalei
Celulelor glandelor
interstiiale
Epiteliile renale
Epiteliile gonadelor
Mezotelii seroaselor
Endoteliile
vasculare
esuturile
conjunctive
esutul sanguin
esutul muscular

Scheletul
Sistemul
vascular
Sistemul
limfatic
Aparatul
urinar
Segmente
ale
aparatelor
genitale


Oasele
Muchii
Endoderm Epiteliul cavitii
timpanice
Epiteliul tubei
auditive
Epiteliile tubului
digestiv
Epiteliile aparatului
respirator
Aparatul
respirator
Aparatul
digestiv

Tiroida
Paratiroida
Ficat
Pancreas
Vezic biliar
Timusul (parial)




9.3.2.SEGMENTAIA LA PSRI

250
Datorit oului, care este de tip telolecit, segmentaia este
meroblastic sau parial, iar dup aspectul su este polar sau
discoidal.
La psri, celula sexual femel matur (sau ovulul) este
reprezentat numai de glbenu. Nucleul ovulei este situat la polul
animal al glbenuului, fiind nconjurat de o cantitate redus de
citoplasm activ (sau vitelus formativ) mpreun cu care alctuiete
o formaiune discoidal, denumit discgerminativ (cicatricula) sau
pat germinativ (nucleul Pander). Numai discul germinativ va intra
n segmentaie.
Restul ovoplasmei este format din vitelus alb formativ (ce conine
granule mici, cu compoziie predominant proteic 43%) i din
vitelus galben nutritiv, ce cuprinde granule mari, formate n principal
din lipide i proteine, n cantitate mai redus (28%). Depunerea
vitelusului ncepe de sub discul germinativ, cu un strat de vitelus alb
care se prelungete spre centrul oului cu o formaiune cu aspect de
limb de clopot, denumit latebra Purkinje. n afara acestui vitelus
alb se se dispune un strat de vitelus galben, iar n continuare are loc
o dispunere a celor dou tipuri de vitelus n straturi concentrice
alternative. La periferie, oul este nvelit de o membran vitelin (de
ovolem). (Fig.9.17)


Fig.9.17. Oul la
psri
1- Latebr; 2- Disc
germinativ; 3- Membrana
vitelin; 4- Vitelus galben; 5-
Vitelus alb;; 6- Albu dens;
7- alaze; 8- Albu fluid; 9-
Albu dens; 10- Albu fluid,
al treilea strat; 11-
Membrana cochilier
intern; 12- Membrana
cochilier extern; 13-
Camera cu aer; 14- Camera
calcaroas; 15- Cuticula.

Fecundarea oulor are loc n poriunea iniial a oviductului
sau pe suprafaa ovarului, nainte de a fi acoperit cu albu,
membrane cochiliere i cochilie. Dup fecundare ovula (oul
nefecundat) devine ou fecundat (ovum fertilisatum s. sperovium)
sau zigot (zygota s. conceptus).
nceputul segmentaiei este marcat de apariia unui an linear
ce marcheaz planul de separare dintre cele dou celule fiice, plan
ce cade perpendicular pe suprafaa discului germinativ, fr s-i
ating marginile. Celulele rezultate sunt identice i de talie egal
251
(diviziune homoplastic). A doua mitoz are anul i planul de
separare dispuse perpendicular pe primul an. n cea de-a treia
mitoz apar dou anuri verticale, ambele perpendiculare pe primul
an. Este urmat de alte diviziuni verticale, rezultnd un singur strat
de celule prismatice, reprezentnd ectoblastul. Formarea primelor
dou blastomere are loc dup 30 de minute de la singamie, iar dup
patru ore embrionul are 8 blastomere, ajungnd la 152 blastomere
dup 7 ore.
Segmentarea este sincron, deoarece toate diviziunile
celulare se desfoar simultan. Intercineza este scurt, fr
sintez de acizi nucleici, acetia existnd deja. n plus, vitelusul
formativ este bogat n aminoacizi, enzime, glucide i lipide,
asigurnd necesarul proceselor de multiplicare.
Ectoblastul este desprit de vitelus printr-o cavitate plin de
lichid, denumit cavitatea subgerminal sau de segmentare. Acest
aspect (ectoblastul i cavitatea subgerminal) reprezint stadiul
embrionar monoblastic (comparabil cu blastula de la amfiox), avnd
la psri forma de disc, de unde i denumirea de discoblastul (sau
de disc embrionar sau bnu). (Fig.9. 18)



Fig.9.18. Segmentaia zigotului la psri.
A-Discul germinativ nesegmentat; B-Stadiul cu dou blastomere; C-Stadiul cu patru
blastomere; D-Stadiul cu opt blastomere; F,G-Discoblastula.

Privit de sus, discul embrionar apare ca o suprafa relativ
circular care prezint: 1) o zon mai transparent aria pelucid
(area pellucida), situat uor excentric; i 2) o zon mai ntunecat
aria opac (area opaca), ce nconjoar aria pelucid.
n stadiul diblastic se formeaz endoblastul.
Unele dintre celulele ectoblastice iau form cubic i
migreaz la limita dintre ectoblast i cavitatea subgerminal. n
continuare, aceste celule se multiplic i formeaz un strat continuu
subectoblast, denumit hipoblast (hypoblastus), mprind cavitatea
de segmentare n dou spaii, o cavitate blastocelic i o cavitate
subgerminal propiuzis, delimitat ntre vitelus i hipoblast,umplut
cu lichid blastocelic i particule de vitelus. Procesul de de separare
252
a celulelor ce formeaz hipoblastul se numete delaminare
(delaminatio), iar ectoblastul devine epiblast (epiblastus).
Hipoblastul are un rol temporar, fiind nlocuit de endoblast
(endoblastus). Celulele endoblastice imping celulele hipoblastice in
aria extraembrionar, unde particip la formare peretelui vezicii
ombilicale.(Fig.9.19)
Stratul diblastic se realizeaz n intervalul de 24-48 de ore, ct
dureaz parcurgerea oviductului, pn n momentul eliminarii oului
din corpul psrii (pontei). Evoluia embrionului se oprete prin
meninerea acestuia la 5-7C i continu prin incubaie la 38-39C,
n condiii de umiditate, aerare i ntoarcere periodic.



Fig.9.19. Discoblastula la psri, nainte de nceperea gastrulaiei
A, B- Discoblastule, aspecte dorsaleC,D,E Seciuni transversale
1-Aria opac;2- Aria clar (pelucida), 3- Nodul posterior;4- Ectoblast;
5- Endoblast;6- Cavitate subgerminal

Procesele de multiplicare celular se reiau dup ase ore de
la nceperea incubaiei,cnd ncepe perioada de gastrulare. Celulele
epiblastice i cele ale hipoblastului realizeaz: micri de
convergen (pentru a forma linia primitiv i nodulul
caudal),migrri n profunzime (n cavitatea blastocelic i n aria
extraembrionar), micri de deplasare lateral (pentru a forma
mezoblastul).
Gastrularea la psri cuprinde: formarea nodulului posterior,
formarea liniei primitive cu nodulul anterior, formarea mezodermului,
formarea notocordului i regresia liniei primitive.
Dup 24 de ore de incubaie, discul embrionar (discus
embryonicus) i modific forma, devenind oval (din rotund), apoi cu
253
aspect piriform (cu lungimea de 3,5-5 mm), prezentnd o
extremitate cefalic i o extremitate caudal, cu o proliferare
ectoblastic, de form triunghiular, cu aspect ntunecat, denumit
nodul caudal sau posterior. Aceast proliferare ectoblastic se
prelungete pe linia median, n sens cranial, formnd linia primitiv
(linea primitiva), care este parcurs n sens longitudinal de o
depresiune ngust, denumit anul liniei primitive (sulcus
primitivus). (Fig.9. 20)
Extremitatea cefalic a liniei primitive se termin printr-o
formaiune nodular denumit nodul cranial sau anterior (Hensen)
(nodus primitivus), aprut datorit proliferrilor mai intense. n
centrul nodulului anterior se observ o depresiune denumit foset
primitiv (fovea primitiva).
De la nodulul anterior, prin proliferri celulare, ia natere o
formaiune prelungirea cefalic (processus cephalicus s.processus
notochordalis) dirijat cranial, care va ptrunde sub forma unui
deget de mnu ntre ectoblast i endoblast, fr a se atinge limita
discului (plica limtans areae et sulcus limitans disci embryonici).
Aceast prelungire va genera cordomezoblastul, respectiv coarda
dorsal (notochorda) i mezoblastul (mesoderma embryonicum)
anterior. (Fig.20)












Fig. 9.20. Aspecte evolutive ale ariei embrionare la psri
1- Vitelus; 2- Aria opac; 3-Aria pelucid; 4- Linia primar; 5- Nodul anterior;
6- Prelungire cefalic; 7- Semiluna gonocitar; 8- Creste neurale; 9- Plica limitant
anterioar; 10- Nodul posterior.

Spre deosebire de Amfioxus, unde mezoblastul are origine
endodermic, la psri, mezoblastul se formeaz din ectoblast.
(Fig.9. 21, 9.22 )








254



Fig. 9.21. Seciune transversal prin prelungirea cefalic a liniei primare la gin
1-Ectoblast; 2- Endoblast;
3-Mezoblast;
4-Prelungire cefalic


Exist la psri dou focare de mezoblastogenez: a) la
nivelul liniei primitive, unde are loc o proliferare celular care se
ndreapt spre laturile discului embrionar (mesoderma paraaxiale)
i, ptrunznd ntre ectoblast i endoblast, genereaz o parte a
mezoblastului embrionar (mesoderma embryonicum ) i mezoblastul
extraembrionar (mesoderma extraembryonicum); b) la nivelul
prelungirii cefalice, de unde ia natere, aproape n totalitate
mezoblastul ce invadeaz discul embrionar, genernd coarda
dorsal i mezoblastul anterior (mesoderma capitis).


























Fig.9.22. Seciuni transversale prin aria embrionar la psri
A, B, C Etape succesive
1- Linia primar; Sanul liniei primare; 3- Ectoblast; 4- Endoblast; 5- Mezoblast

Mezoblastul anterior, situat pe prile laterale ale coardei
dorsale formeaz lamele mezodermale (mesoderma laterale) care
vor evolua n somite, nefrotoame i lame laterale. Printr-un proces
de clivaj, din lamele laterale apare cavitatea celomic (cavum
celomicum) delimitat de: a) somatopleur, format din elementele
255
celulare mezoblastice aflate n contact cu ectoblastul i de b)
splanchnopleur, aflat n contact cu endoblastul. (Fig.9.23)
Neurulaia se desfoar n mod asemntor cu cea de la
amfiox. Ectoblastul situat la nivelul prelungirii cefalice (median i
oral de nodul anterior), va genera prin ngrori proliferative, placa
neural, anul neural, canalul (tubul) neural i crestele neurale.
n partea anterioar a extremitii cefalice a discului
embrionar, n aria extraembrionar vascular apare o formaiune cu
aspect semilunar semiluna gonocitar sau conul germinativ, ce
constituie locul de difereniere a celulelor gonocitare la psri.




Fig. 9.23. Stadii succesive de dezvoltare embrionar la psri Scheme ale
seciunilor transversale
1- Ectoblast; 2- Endoblast; 3- Mezoblast; 4- Coarda dorsal; 5- an neural; 6- Somite;
7- Cavitate celomic; 8- Canal Wolf; 9- Somatopleura; 10- Splanchnopleura; 11- Aorta.

La incheierea stadiului de neurul, embrionul capt forma
literei C i se delimiteaz de sacul vitelin, de care va rmne
ataat prin canalul vitelin. Formarea corpului embrionului se
realizeaz n dou etape: n prima etap, tubul neural crete mai
intens dect ectodermul i endodermul,aparnd un buzunar
subencefalic i un proces cranial; n etapa a doua, capul i corpul
embrionului se delimiteaz de zona extraembrionar, n ziua a IIIa
de incubaie.
9.3.3.SEGMENTAIA LA MAMIFERE

Prezint particulariti generate de faptul c la mamifere oul
este oligolecit. Segmentaia este total (ntreaga mas a oului intr
n diviziune), subegal (rezultnd blastomere aproape egale ca
256
mrime) i de tip asincron (mitozele se succed fr o anumit ordine
n timp).
Prezint trei perioade: 1) o perioad iniial, asemntoare cu
segmentaia de la amfioxus; 2) o perioad specific mamiferelor i
3) o perioad asemntoare cu segmentaia la psri.
Prima diviziune a oului duce la formarea unei celule
voluminoase macromera (macromerus), cu aspect clar i a unei
celule mici, micromera (micromerus), ntunecat, ambele ocupnd
spaiul delimitat de zona pelucid. (Fig.9.24)



Fig.9.24. Segmentaia la mamifere
A- Zigotul oligolecit; B- Stadiul cu dou blastomere; C- Stadiul cu trei blastomere;
C- Stadiul cu patru blastomere; E- Formarea blastocistului.
1- Macromera; 2- Micromera; 3- Zona pelucida; 4-Trofoblast; 5- Buton embrionar.


Macromera se divide naintea micromerei, rezultnd stadiul cu
3 blastomere (foarte scurt ca existen), pentru ca, imediat, unul din
blastomerele clare (macromere) se divide, rezultnd stadiul de 4
blastomere, dintre care 3 sunt clare (macromere) i una este
ntunecat (micromer). n continuare, ritmul de diviziune al
blastomerelor devine cu totul neregulat, iar planurile de segmentaie
nu sunt ordonate spaial, nct dispar i diferenele volumetrice ntre
blastomerele clare i cele ntunecate.
n final se edific morula (morula), alctuit dintr-un bloc
compact de celulentunecate, cu contururi poligonale.
Diferena fa de ceea ce se ntmpl la amfiox, const n
aceea c micromerele i macromerele nu se polarizeaz la antipozi,
nici n morul, nici n blastul. Astfel, micromerele se dispun
periferic nvelind macromerele i genernd trofoblastul
(trophoblastus), ce va servi la hrnirea embrionului pn la formarea
placentei. Macromerele se dispun central, alctuind embrioblastul
embrionar (embryoblastus s.massa cellularis interna) sau butonul
embrionar.
257
Toate transformrile desfurate pn n acest moment se
petrec n spaiul delimitat de membrana pelucid, care se va subia
treptat i va dispare definitiv. Prin dispariia membranei pelucide,
trofoblastul ia contact intim cu membrana uterin, intervenind
ulterior n nutriia embrionului.
Celulele embrioblastului secret un lichid albuminos, care se
acumuleaz ntr-o cavitate, denumit lecitocel, ce mpinge
macromerele spre polul superior (animal). La acest pol,
macromerele vor forma un mugure embrionar (nodus embryonicus
s. massa embryonica), suspendat parc de trofoblast, asemntor
unei picturi de ap condensat pe tavan.
Aceast formaiune ce cuprinde trofoblastul (format din
micromere dispuse periferic), lecitocelul i mugurele embrionar
poart denumirea de blastocist (blastocystis s. blastula) i este
analog blastulei de la amfiox, aprnd dup aproximativ 7 zile de la
fecundaie. (Fig.9.25)

Fig.9.25. Seciuni prin blastocistul de
leporide
A, B Etape evolutive
1- Buton embrionar; 2- Trofoblast; 3-
Membrana pelucid; 4- Cavitatea
vitelin;

Blastocistul ajunge n
cavitatea uterin i se fixeaz
de mucoasa uterin prin
procesul de nidaie (la om i
la roztoare) sau implantaie
(la restul animalelor).
Concomitent cu
nceputul nidaiei sau
implantaiei ncep procesele
de difereniere n butonul
embrionar i n trofoblast.
Din trofoblast se vor diferenia 2 straturi: a) un strat extern,
sinciiotrofoblastul (sycytiotrophoblastus), alctuit din celule cu limite
celulare slabe i cu o citoplasm mai ntunecat; i b) un strat
intern, citotrofoblastul (cytotrophoblastus), format din celule cu limite
distincte.
Ca rezultat al diferenierilor ulterioare, din trofoblast se va
forma componenta fetal a placentei, iar din butonul embrionar se
vor diferenia cele trei foie embrionare: ectoblastul, endoblastul i
mezoblastul.
Gastrulaia
258
La mamiferele placentare, gastrulaia se desfoar n dou
etape: n prima etap se formeaz ectoblastul i endoblastul, iar n a
doua mezoblastul. (Fig.9.26)



Fig. 9.26. Blastocist de
leporide n timpul
gastrulaiei
1-Trofoblast;2-Ectoblast;
3-Endoblast;
4- Cavitate vitelin



Formarea ectoblastului i endoblastului.
Din stratul unic de macromere prismatice care reprezint
ectoblastul se difereniaz pe faa sa profund cteva celule mai
intunecate. Acestea se vor nmuli i vor genera, similar cu ceea ce
se ntmpl la psri, un al doilea strat, format din celule turtite,
denumit endoblast. Apare, n acest fel, stadiul diblastic, care datorit
aspectului su se mai numete i gastrodisc, sau pat embrionar.
Odat ce endoblastul s-a format complet i cptuete ntreaga
cavitate a a lecitocelului, n blocul de celule care formeaz buttonul
embrionar se produce o clivare (delaminatio), aprnd un spaiu
nou, cavitatea amniotic (cavum amnii).



9.27. Dezvoltarea endoblastului la leporide
1- Trofoblast; 2- Ectoblast;
3- Endoblast; 4- Cavitate vitelin.

La suine,ovine, cervide i leporide,
ectoblastul se formeaz din podeaua
cavitii amniotice,disprd tavanul
acesteia mpreun cu trofoblastul
adiacent.Tavanul cavitii amniotice
rmne intact la cobai, oarece,
obolan, veveri, arici i liliac, unde formeaz ectoblastul, ce este
acoperit n totalitate de trofoblast. La ecvine, taurine i carnivore, nu
apare cavitate amniotic primar, iar ectoblastul se formeaz din
celulele superficiale ale butonului embrionar.(Fig.9. 27)
n stadiul incipient al gastrulaiei, cnd ectoblastul i
endoblastul sunt complet formate, aria embrionar ( cmp
embrionar sau zon embriogen ) are un aspect piriform, cu
extremitatea caudal mai ascuit i cu cea cranial mai rotunjit. La
259
extremitatea caudal, se realizeaz prin proliferare, o formaiune
mai opac, denumit nodul posterior, ce se continu n sens cranial
cu linia primitiv. La mijlocul ariei embrionare, linia primitiv prezint
o dilataie, nodulul anterior (Hensen), dup care se continu spre
extremitatea cefalic cu prelungirea cefalic. (Fig.9.28)
De pe prile laterale ale liniei primitive, se desprind
numeroase celule cu contur neregulat (stelat), ce vor forma
mezoblastul (mesoblastus), ntre ectoblast i endoblast.

Fig. 9.28. Aria embrionar la mamifere - aspecte
dorsale evolutive
1-Aria embrionar; 2- Linia primitiv;
3- Nodul posterior; 4- Nodul anterior;
5- Prelungire cefalic.

Mezoblastul embrionar prezint
trei poriuni distincte: a) o poriune
cefalic, nesegmentat; b) o poriune
mijlocie, sau mezoblastul trunchiului; c)
o poriune caudal, nesegmentat.
Mezoblastul trunchiului cuprinde
trei zone (regiuni) distincte: 1) o zon dorsal; 2) o zon
intermediar; 3) o zon lateral. (Fig.9.29)
1) Zona dorsal se va fragmenta transversal, genernd
somitele (somiti). Fiecare somit prezint, la rndul ei, trei poriuni:
1) miotomul (myotomus), poriunea medio-dorsal din care vor lua
natere mioblatii i ulterior muchii; 2) sclerotomul (sclerotomus),
poriunea medio-ventral, din care se desprind celulele
mezenchimale, care migreaz n jurul tubului neural, structurnd
mezenchimul (mesenchyma); 3) dermatomul (dermatomus),
poriunea lateral a somitei care va genera dermul (dermis) i
hipodermul.
2) Zona intermediar (zona nefrogen) (mesoderma
intermedium) se segmenteaz transversal n veziculele nefrogene
ale pronefrosului, ale mezonefrosului i ale metanefrosului.


260



Fig. 9.29. Gastrulaia la mamifere stadiu avansat. Seciuni transversale
A (a a) naintea nodulului anterior; B (b b ) Prin nodulul anterior;
C (c c) Prin linia primitiv
1- Ectoblast; 2- Endoblast; 3- Mezoblast; 4- Nodul anterior; 5- Linia primitiv;
6-an primitiv.


3) Zona lateral a mezoblastului (mesoderma laterale) se
cliveaz, dnd splanchnopleura i somatopleura, ntre care se
delimiteaz celomul primitiv embrionar (cavum coelomicum) .
Concomitent acestor transformri, embrionul ia aspect tubular
i apoi sufer o ncurbare, sub forma literei C, ale crei capete se
apropie i nchid o parte din cavitatea blastocelic ce va deveni
cavitate toraco-abdominal, iar ceea ce rmne din cavitatea
blastocelic va forma extraembrionar, vezicula vitelin (ombilical)
a embrionului.
Odat realizate fenomenele de proliferare i difereniere, n
dezvoltarea embrionului ncepe o nou etap, denumit
histogenez i organogenez, iar embrionul i continu dezvoltarea
devenind fetus (foetus). Cele trei foie embrionare i schimb
denumirea n ectoderm, endoderm i mezoderm.




261

9.4.Anexele embrionare i fetale

Sunt formaiuni morfologice cu rol n protecia, nutriia i
epuraia embrionului i fetusului. Ele sunt o continuare n exteriorul
embrionului a componentelor embrionare (ectoderm, endoderm i
mezoderm), alctuind, n totalitatea lor, aria extraembrionar.
Anexele embrionare i fetale (membranae fetales) sunt
reprezentate de: a) vezicula vitelin (sau ombilical); b) alantoid; c)
amnios; d) corion.

9.4.1. Vezicula vitelin (ombilical)

Vezicula vitelin sau sacul vitelin (saccus vitellinus) este
anex embrionar care deriv din endoderm, dup ce acesta
nlocuiete hipoblastul. Este desprit de trofoblast prin lecitocel
sau blastocel. Ocup o parte din spaiul cavitatii lecitocelice care,
odat cu ncurbarea embrionului (sau a ariei embrionare) se mparte
n dou compartimente: - un compartiment cuprins n corpul
embrionului, reprezentnd intestinul primitiv (enteron primitivum)
cptuit de endoderm; i - un compartiment mai spaios, situat
extraembrionar, care va forma vezicula ombilical, cptuit de
endodermul extraembrionar, ce delimiteaz cavitatea vitelin
(cavum vitellinum). Comunic cu intestinul embrionar prin canalul
ombilical (vitelin) (ductus pedunculi vitellini), care strbate
pedunculul vitelin (pedunculus vitellinus), de legtur cu embrionul
i fetusul. Peretele vezicii viteline este format din dou straturi: unul
intern, format de celulelele endodermale ( care au nlocuit
hipoblastul) i altul extern format din splanchnopleur (din
mezoderm extraembrionar). Aici celulele mezenchimale se se
grupeaz i formeaz insule sanguine (hemato- i vasculo-
formatoare).
n etapa timpurie a embriogenezei ndeplinete rolul de organ
vasculo i hematoformator, precum i de rezervor de substane
nutritive, regresnd ulterior.

9.4.2. Amniosul

Amniosul (amnion) se formeaz (amniogenesis) din ndoiturile
ectodermului i ala somatopleurei care l cptuete, cute ce apar n
urma coborrii embrionului n cavitatea lecitocelic. n acest mod
se formeaz patru cute (plica limitans): anterioar, posterioar i
dou laterale, care se vor suda n planul median, delimitnd o
262
cavitate amniotic (cavum amnii) ntre ectodermul embrionar i foia
amniotic realizat. n lichidul amniotic (liquor amnioticus) plutete
embrionul i apoi fetusul cruia-i confer att mobilitate ct i
protecie. (Fig.9.30)

9.4.3. Alantoida

Este o anex format din endoderm i splanchnopleur. Se
dezvolt (allantogenesis) din endodermul intestinului caudal, care
prin proliferare i evaginare genereaz iniial un mugure alantoidian
digitiform (processus allantoicus). Pe msur ce mugurele
embrionar crete, se insinueaz i se interpune ntre amnios i
vezicula ombilical, reducnd spaiul ocupat de cavitatea vitelin i
antrennd cu el i splanchnopleura care ocup intestinul primitiv.

Fig.9.30. Formarea anexelor embrionare la psri
1- Ectoblast; 2- Endoblast; 3- Mezoblast; 4- Cavitate amniotic; 5- Alantoid;
6- Vezicul ombilical; 7- Vitelus; 8- Splanchnopleura; 9- Intestin primitiv;
10- Somatopleura.

Alantoida rmne legat de locul de origine printr-un pedicul ,
strbtut de canalul urac (urachus),denumit i canal alantoidian
(ductus allantoicus). n splanchnopleura, ce acoper endodermul se
dezvolt o bogat reea vascular ce se va conecta la vasele
viteline pe care le nlocuiete treptat, alctuind cea de-a doua
circulaie fetal (circulaia alantoidian) ce cuprinde dou artere i
dou vene alantoidiene.
Cavitatea (vezicula) alantoidian (cavum allantoicum), plin cu
lichid, este delimitat de dou foie: una intern, n contact cu
263
amniosul (allantoamnion) i alta extern, n contact cu corionul
(allantochorion).

9.4.5.Corionul

Cea mai extern anex (nvelitoare) din aria extraembrionar,
corionul, provine din micromerele morulei. Dup dispariia
membranei pelucide, acestea vor forma corionul primar (chorion
primarium) sau procorionul sau trofoblastul. Pe suprafaa sa extern
prezint viloziti (villi chorii primarii) ce sunt repartizate n diferite
moduri, n funcie de specie.
O vilozitate corial este constituit din: axul conjunctiv de
esut lax i din trofoblastul care acoper axul conjunctiv. Trofoblastul
este format din dou rnduri de celule, morfologic distincte:
citotrofoblastul i sinciiotrofoblastul.
Sinciiotrofoblastul (syncytiotrophoblastus), stratul extern, are
o culoare mai nchis i numeroi nuclei dispersai ntr-o mas de
citoplasm, fr limite celulare. Citoplasma are un aspect spumos,
conine lipide, colesterol i mucopoliglucide i prezint un
citoschelet filamentos.
Are aspectul unui epiteliu cubic simplu, cu margine n perie.
Examinat la microscopul electronic, marginea n perie prezint
microviloziti dispuse la intervale de 8-20 nm. Microvilozitile nu
sunt structuri rigide, prezentnd lungimi ce variaz ntre 1-2 m i
un diametru de 150-250 nm.
Nucleii sinciiotrofoblastului apar deseori grupai, polimorfi,
prezentnd un nucleol excentric, cu citoplasma clar i cromatina
granular, rspndit neuniform.
Citotrofoblastul (cytotrophoblastus) (stratul intern sau stratul
celular Langhans) cuprinde celule mari cu limite celulare distincte,
cu nuclei veziculoi, cu nucleoli evideni, cu citoplasm clar, cu
numeroase mitocondrii, reticul endoplasmic rugos, complex Golgi
perinuclear, numeroase microvezicule i granule cu fier. La limita cu
sinciiotrofoblastul prezint numeroi desmozomi.
Membrana bazal a trofoblastului are un aspect neregulat,
discontinuu i o grosime de 150 nm. Este desprit de polul bazal
al celulelor citotrofoblastice printr-un spaiu de 25 nm, plin de o
mas amorf cu o densitate electronic sczut.
Axul conjunctiv al vilozitii coriale este format din esut
conjunctiv embrionar, cu celule mezenchimatoase stelate. Cuprinde
o arteriol care se capilarizeaz sub membrana bazal a epiteliului
vilozitii. Din estura de capilare se desprinde o venul care va fi
colectat de venele membranei coriale. Endoteliul acestora, extrem
264
de fin, este nconjurat de fibre delicate, ce aparin esutului
conjunctiv embrionar al axului vilozitii.

9.4.5.Particulariti ale anexelor embrionare i fetale la
mamifere

Vezicula vitelin are o dezvoltare redus, rolul su nutritiv
limitndu-se la fazele timpurii ale embriogenezei, datorit faptului c
ovulele mamiferelor sunt oligolecite. Dup atrofia veziculei viteline,
se menine o formaiune vestigial, denumit diverticulul Meckel.
Prezint o funcie vasculoformatoare i hematoformatoare
timpurie. Astfel, celulele mezoblastice din peretele veziculei viteline
vor forma insule vasculo i hemato-formatoare (insulele Wolff i
Pander) (insulae sanguineae). Aici apar primele elemente figurate
sanguine i reeaua extraembrinar de capilare, care se va conecta
la circulaia sanguin intraembrionar. Circulaia vitelin a
embrionilor, denumit i omfalomezenteric, va fi nlocuit treptat cu
circulaia placentar, iar hematopoeza este preluat de ficat.

Anexele embrionare si fetale

Anexa Origine n: Structuri Formaiuni
specifice
Corion Micromerele
morulei
Sinciiotrofoblastul
Citotrofoblastul
Membrana bazal
Viloziti coriale
Alantoida Endoderm Cavitatea
alantoidian
Splanchnopleur
Reea vascular
Canalul urac
Vezicula
ombilical
(vitelin)
Endoderm Compartiment
intraembrionar
Compartiment
extraembrionar
Canal
ombilical(vitelin)
Amniosul Ectoderm Cavitate
amniotic
Lichid amniotic
Cute amniotice

La mamiferele cu schizamnios (primate, cobai, arici, liliac)
vezicula ombilical este mai redus dect la mamiferele cu
plectamnios (rumegtoare, carnivore, roztoare).
Amniosul se formeaz foarte timpuriu. Modul de formare a
amniosului difer n funcie de modul de implantare (nidaie).
Formarea poate avea loc n dou moduri: prin plicaturare
265
(plectamnios) i prin clivaie (schizamnios). Prin plicaturarea
ectodermului se formeaz amniosul la leporide, carnivore, suine i
rumegtoare, unde nidaia este de tip central. La hominide i la alte
specii de mamifere (cobai, arici,liliac,tatu),unde nidaia este de tip
interstiial, formarea amniosului are loc n faza de embrion diblastic
(gastrodisc) printr-un proces de clivaj orizontal al celulelor
ectoblastului. Rndul superior va forma amniosul, iar spaiul dintre
cele dou straturi de celule ectoblastice va genera cavitatea
amniotic, n care se va acumula lichid amniotic. La mamiferele cu
nidaie de tip excentric, ntr-o prim faz apare un scizamnios,care
va fi nlocuit de un plectamnios.
Lichidul amniotic, nghiit de fetus, este resorbit n intestin,
ajunge n circulaia fetal alantoidian i, prin traversul placentei, n
circulaia matern, dar nu ptrunde n cile respiratorii. Este
mucilaginos, limpede i sporete cantitativ n prima parte a gestaiei.
Acumularea de lichid amniotic este mai lent n a doua parte a
gestaiei, cnd lichidul devine tulbure i conine pr, celule
descuamate etc. n apropierea parturiiei este galben datorit
meconiului format din luna a aptea de gestaie.
Amniosul mamiferelor se dezvolt foarte mult, revenindu-i mai
multe roluri: - de protecie a embrionului mpotriva ocurilor
mecanice; - de lubrefiere a cilor de expulzare a fetusului i dec
urirea a acestora de bacterii i micei; -rol trofic, fiind bogat n
ap, sruri minerale, proteine;-rol metabolic ntervenind n
glicogenez (la rumegtoare) i n lipogenez; -rol de depozit pentru
produide dezasimilaie (acid uric,uree). Gradul de dezvoltare al
amniosului, respectiv suprafaa i volumul de lichid amniotic
(raportat la talia speciei) crete progresiv la marsupiale, la carnivore,
la rumegtoare i la primate.
La iap, amniosul ncepe s se formeze la 21 de zile, iar
cantitatea de lichid ajunge la 3-7 litri, formnd a doua pung a
apelor. La rumegtoare, la nivelul amniosului se descriu formaiuni,
cu form neregulat, denumite plaje amnitotice cu rol neelucidat,
(probabil glicogenogenetic).Plajele amniotice lipsesc la scroaf i
cea, iar la iap i oaie sunt rar nrtlnite.
La scroaf, lichidul amniotic, ajunge la 40-300ml, dar scade
dup sptmna a 12-a de gestaie, iar la carnivore (cea i pisic)
la parturiie rmn numai cteva picturi (8-30 ml). (Fig.9.31)



266


Fig. 9.31. Schema unui fetus de mamifer, mpreun cu anexele sale
1- Fetus; 2- Intestin primitiv; 3- Cordon ombilical; 4- Cavitate amniotic; 5- Alantoida;
6- Vezicula vitelin; 7- Corion; 8- Vilozitate corial.

Alantoida prezint un grad de dezvoltare ce difer foarte mult
n raport cu specia. Astfel, exist specii cu: a) alantoida redus la un
diverticul n deget de mnu (la primate); b) alantocorion, n care
alantoida apare ca o pung aplatizat, a crei fa intern acoper
aproape n totalitate amniosul ( la mamiferele aplacentare); c)
amniocorionul, la care alantoida acoper numai parial amniosul,
aceasta venind n contact cu corionul. Foia extern a alantoidei va
cptui corionul pe o suprafa mai mare sau mai mic.
La mamifere, alantoida prezint trei zone: 1) zona
intraembrionar, din care se va forma vezica urinar; 2) zona
mijlocie, din care va rezulta canalul urac, zona este cuprins n
cordonul ombilical; 3) zona extraembrionar sau sacul alantoidian
propriu-zis, interpus ntre amnios i corion.
Lichidul alantoidian apare nainte ca rinichii fetali s devin
funcionali. Este limpede, apos, brun glbui. Conine albumin,
fructoz i uree, deoarece filtratul renal fetal ajunge n sacul
alantoidian prin canalul urac. La vac, iap, oaie,capr i scroaf,
se ntlnesc calculi alantoidieni (formai din detritusuri celulare,
fosfat de calciu i mucoproteine)ceplutesc n lichidul alantoidian.
La mamifere, reeaua vascular alantoidian (a doua circulaie
embrionar) este mai dezvoltat dect la psri i particip la
realizarea circulaiei placentare. La vrsta de 2 luni (la ecvine,
267
taurine), circulaia vitelin este complet atrofiat i nlocuit de
circulaia alantoidian.
Din fuzionarea mezodermului extraembrionar ce acoper
alantoida cu troblastul se formeaz corionul alantoidian ce
gzduiete o reea vascular bogat ce asigur conexiunea ntre
endometru maternal i reeua vascular alantoidian.
Alantoida ndeplinete la mamifere mai multe roluri: -de
rezervor de substane toxice i deeuri metabolice; - organizator al
reelei vasculare embrio-fetale ce nlocuiete reeaua vascular
vitelin; -furnizeaz mezenchim pentru axul vilozitilor coriale;-
pregtete i lubrefiaz tractusul genital pentru parturiie; - particip
la formarea cordonului ombilical.
Cordonul ombilical face legtura dinte placent i fetus. La
structurarea lui particip: vezica vitelin cu canalul ombilical,
alantoida cu canalul alantoidian, peretele sacului amniotic adiacent
zonei ombilicale, mezodermul extraembrionar (celule
mezenchimale, substan fundamental mucoid-gelatin
Wharton), arterele i venele ombilicale. Lungimea cordonului
ombilical este, n medie de 50-60 cm la iap, 30-40 cm la bovine, 25
cm la scroaf, 8-12 cm la cea i pisic. La rumegtoare i
cabaline n cordonul ombilical sunt prezente i fibre musculare
netede, care produc vasoconstricie n momentul parturiiei.
La iap, mugurele alantoidian apare la 21 de zile i ajunge n
contact cu corionul la 55-60 de zile, cnd are reeaua vascular
dezvoltat i nlocuiete circulaia vitelin (omfalo-mezenteric)
pn la 70-80 de zile. Cantitatea de lichid alantoidian ajunge la 8-18
litri, fiind clar i constituit iniial din transsudat sanguin. n apropierea
parturiiei, din cauza urinii fetale devine glbui murdar.
La scroaf, alantoida lipsete n mare parte la nivelul zonei
centrale, unde amniosul, venind n contact cu corionul, realizeaz
un amniocorion. Cantitatea de lichid alantoidian crete (ajunge la
100-200 ml), pn la jumtatea gestaiei, dup care se resoarbe
treptat, devenind de culoare brun-murdar i, la parturaie, rmnnd
doar civa mililitri.
La rumegtoare, alantocorionul se gsete pe cea mai mare
parte a suprafeei, exceptnd zona central, unde predomin
amniocorionul (ca la scroaf).
La cea i pisic, alantoida separ complet amniosul de
corion (alantocorion). Cantitatea de lichid alantoidian ajunge la 40-
110 mililitri (la cea),iar la pisic este ntre 5-15 ml.
Corionul la mamifere prezint viloziti coriale primare, cu
aspect de formaiuni filiforme sau digitiforme orientate spre exterior.
Concomitent cu vascularizarea i dezvoltarea alantoidei, vilozitile
268
coriale primare se repartizeaz diferit, n raport cu specia, se
vascularizeaz i ptrund n criptele mucoasei, devenind viloziti
coriale secundare i participnd la constituirea placentei. Astfel, o
vilozitate corial secundar este o prelungire a corionului ( trofoblast
cu mezoderm extraembrionar) n care au ptruns vasele
alantoidiene (n cazul alantocorionului) sau vasele viteline (n cazul
omfalocorionului).
Vilozitile coriale secundare pot fi rspndite: a) difuz, cu
rspndire uniform complet (pe toat suprafaa), la iap sau
incomplet (lipsind la capetele corionului), la scroaf; b) zonal, sub
forma unui bru circular median, la carnivore; c) grupate n
formaiuni denumite cotiledoane, la rumegtoare; d) discoidal, sub
forma unei zone circulare la roztoare i primate.
Vilozitile coriale lipsesc la marsupiale, care au un corion
avilos i sunt denumite mamifere aplacentare.
La iap, corionul este cptuit n ntregime de alantoid, dup
55-60 de zile, cnd apare i circulaia placentar. Complexul
corio-alantoidian prezint cute care se pot desprinde, cad n lichidul
alantoidian i constituie hipomamele. Corionul are un aspect
catifelat, datorit vilozitilor fine (microcotiledoane), dispuse uniform
pe toat suprafaa sa. La nivelul contactului corio-alantoidian pot
apare depuneri de fosfat de calciu, denumite plci opace.
La scroaf, sacul corial este iniial alungit-fusiform, (msurnd
15 mm la 17 zile) dup care se scurteaz (prin necroza
extremitilor) i se dilat dup 20 de zile. Vilozitile lipsesc la
capetele sacilor corionici.
La vac, sacul corial fusiform ajunge la 50-60 cm lungime.
Vilozitile coriale se grupeaz n cotiledoane, dispuse pe 4 rnduri,
fiind n numr de 80-120, n dreptul fiecrui corn uterin. n zona
central a sacului, corionul nu este cptuit de alantoid, stabilindu-
se un raport amnio-corial. n restul suprafeei uterine a corionului,
raportul este alanto-corial. La extremitile sale, corionul este
necrotic, ca i la scroaf. La oaie i capr, angrenarea vilozitilor
coriale n criptele uterine are loc n a 44-a zi de gestaie.
La cea i pisic, iniial corionul este acoperit n totalitate cu
viloziti coriale primitive, dintre care se dezvolt numai cele cin
zona circular central (reprezentnd 1/3 din suprafaa corionului).
n totalitatea sa, corionul este cptuit de alantoid (alantocorion).

269




9.4.6.Particularitile anexelor embrionare la psri

La psri, sacul vitelin (vezicula vitelin) are o importan
mult mai mare dect la mamifere, deoarece ovula este de tip
telolecit. Este prima anex embrionar care se organizeaz ( din
ziua a treia de incubaie). n ziua a 5-a de incubaie, vitelusul
coninut n vezicula ombilical este acoperit n ntregime de
endodermul i mezodermul extraembrionar, nct peretele sacului
vitelin este structurat din endoderm, membrana vitelin i
mezoderm.
n mezodermul sacului vitelin se formeaz insulele sanguino-
i vasculo-formatoare (Wolff i Pander), din care iau natere celulele
sanguine i vasele primei circulaii embrionare (circulaia
omfalomezenteric). Aceast reea vascular transport substanele
absorbite de ctre endodermul vitelin, care prezint viloziti.
Rezorbia vitelusului continu i n primele zile dup ecloziune. Tot
prin reeaua vascular se realizeaz transferul pasiv al anticorpilor
maternali existeni n vitelus, precum i al unor proteine virale sau
virusuri. Acest fapt permite transmiterea pe vertical
(transembrionar) a unor infecii i vaccinarea in ovo , aplicat
pentru imunoprofilaxia unor boli ( Boala Marek, bursita infecioas
aviar).
Sacul vitelin este complet dezvoltat dup 5-6 zile de
incubaie i comunic cu intestinul embrionului prin canalul vitelin
(ductus vitellinus), fr ca vitelusul s treac prin acest canal n
intestin. Vestigiile canalului vitelin persist sub forma diverticulului
vitelin ( diverticulum intestinale jejuni) sau a tubercului Meckel, care
prezint o structur (cu patru tunici), asemntoare peretelui
intestinal, i o populaie limfocitar i plasmocitar bogat, nct
este considerat organ limfoid secundar.
Sacul vitelin ndeplinete mai multe roluri, precum:-absorbia
din vitelus a substanelor nutritive i plastice, necesare dezvoltarii
embrionului pn la ecloziune; - organizeaz reeaua de capilare
omfalomezenterice; - produce primele celule sanguine; - are funcie
de aprare imun local i general.
Amniosul se formeaz de timpuriu (din a doua zi de
incubaie),prin plicaturare, fiind complet nchis n ziua a treia (la
gin) sau a patra (la curc i la gsc) de incubaie. Peretele
amniosului este format din dou straturi:- un strat intern, orientat
270
ctre embrion, reprezentat de ectodermul extraembrionar i altul
extern, reprezentat de mezodermul extraembrionar (respectiv de
somatopleur), n care vor apare vase de snge i fibre musculare.
Fibrele musculare genereaz contracii ritmice.Amniosul este
desprit de corion printr-un spaiu denumit cavitate celomic
extraembrionar (celoma extraembryonicum).
Ectodermul amniosului secret lichidul amniotic (liquor
amnioticus) care umple cavitate amniotic (cavum amnii). n acest
lichid se acumuleaz urai, produi de rinichiul embrionar, fulgi i
secreii ale glandelor din cavitatea bucal i tractusul respirator. Din
ziua a 5-a de incubaie, lichidul amniotic este nghiit de pui.
Amniosul i lichidul amniotic asigur: -protecia mecanic;
libertate de micare pentru embrion; -nutriia embrionului cu albu,
care este transferat din sacul cu albu (albumen) delimitat de
corion ntr-un canal sero-amniotic i nghiit de embrion;-asigur
necesarul de ap; detoxific embrionul de urai i sruri minerale;
stimuleaz funciile de deglutiie i respiraie. Dup 11 zile de
incubaie, amniosul ncepe s regreseze, se atrofiaz i dispare.


Fig.9.32. Schema unei seciuni prin
oul de gin, la nceputul incubaiei
1-Camera cu aer;2- Amnios;
3- Alantoid; 4- Sacul vitelin; 5- Coaja
calcaroas; 6- Membrana cochilier;
7- Albu; 8- Corion

Alantoida se formeaz
ncepnd cu a 46 ore de
incubaie, cnd mugurele
endodermic alantoidian,
detaat din zona caudo-
ventral a intestinului
prsete aria embrionar,
devenind o vezicul (dup
72 ore de incubaie) plin cu
lichid, ce comunic cu
intestinul primitiv printr-un
pedicul strbtut de canalul urac. Pe msur ce se dezvolt,
vezicula alantoidian se insinueaz ntre sacul vitelin, amnios i
corion, antrennd splanchnopleura i ocupnd ntreg celomul
extraembrionar. nconjoar albuul pe care l cuprinde ntr-un sac.
Din corion se formeaz un diverticul tubular care trece printre
alantoid i sacul vitelin,devenind canal seroamniotic, prin care
albuul este transferat n amnios i nghiit de pui.
271
Mezodermul splanchnic al foiei externe, se sudeaz cu
somatopleura corionului, realiznd membrana corioalantoidian , n
care se dezvolt o reea vascular (dup 5-6 zile de incubaie), care
se va lega de reeaua vitelin pe care o va nlocui treptat, realiznd
circulaia alantoidian care se va racorda la circulaia embrionar
Rolul alantoidei este foarte important n a doua jumtate a
incubaiei cnd asigur: protecia embrionului prin lichidul
alantoidian; consumarea albuului (rol nutritiv); excreia metaboliilor
(prin canalul urac); respiraia (prin intermediul circulaiei
alantocoriale, ncepnd cu ziua a 6-a).
Corionul este anexa cea mai puin important la psri. Se
formeaz de timpuriu, o dat cu amniosul, din partea extern a
cutelor amniotice. Are origine ectodermic i parial mezodermic
(din somatopleur). Este mpins de alantoid i ajunge n contact
(dup 7-8 zile de incubaie) cu membranele cochiliere i cu
alantoida, cnd somatopleura corionului se sudeaz cu
splanchnopleura alantoidei, realiznd membrana corioalantoidian
(alantocorionul). Membrana corioalantoidian asigur, ncepnd cu
zillele 9-10 de incubaie, respiraia embrionului prin circulaia
alantocorial i schimburile de ap ntre embrion i mediul exterior.
n timpul incubaiei: - nutriia se face pe seama vitelusului
coninut n vezicula ombilical i prin intermediul alantoidei (din
sacul de albu); -respiraia se face prin intermediul vascularizaiei
alantoidine direct din camera de aer; - excreia se face prin
alantoid. Pe msur ce rezerva de vitelus este consumat, sacul
vitelin se retracteaz i dispare, nchizndu-se ombilicul. n
momentul ecloziunii puiul sparge cu ciocul resturile de alantoid,
corionul, membranele cochiliere i coaja calcaroas.