Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Histologie
Embriologie
Semestrul I
Biologie (Organizare)Celulară
Embriologie
CUVÂNT ÎNAINTE
Manualul de „ Biologie celulară, Histologie,Embriologie
animală ” este destinat, în principal, studenţilor în medicină
veterinară şi în biologie, dar este util şi altor specialişti care se
ocupă de creşterea, reproducerea, exploatarea şi păstrarea
biosecurităţii animalelor domestice, precum medici
veterinari, ingineri zootehnişti, biologi şi biotehnologi.
Preluând datele de microscopie optică, microscopie
electronică, embriologie şi îmbinându-le cu rezultatele
ştiinţifice obţinute în activitatea, de peste treizeci de ani din
domeniul morfologiei normale (macro- şi microscopice) a
autorului, s-a elaborat o lucrare
structurată logic, ancorată în realităţile biologiei, creşterii,
exploatării şi medicinei animalelor domestice. Lucrarea prezintă
nivelul celular, tisular, organic şi sistemic de organizare a
organismului animal, împreună cu noţiunile de embriologie
aferente.
Se urmăreşte, astfel, ca instruirea actualilor studenţi să
se realizeze metodic, de la simplu la complex, încât însuşirea
cunoştiinţelor să se facă raţional şi gradual, rezultând o bază
solidă de cunoştiinţe fundamentale, cu implicaţii practice, care să
permită înţelegerea, perfecţionarea continuă şi îmbunătăţirea
eficacităţii activităţilor viitorilor absolvenţi.
Adresându-se, în primul rând, studenţilor din anii începători ,
lucrarea a fost concepută ţinând cont de programa programa
analitică a disciplinelor de Biologie celulară, histologie şi
embriologie de la Facultatea de medicină veterinară din Bucureşti
şi a disciplinelor de Oraganizare celulară ( citologie animală),
Histologie şi embriologie animală de la Facultatea de
Agricultură din Bucureşti, specializarea Biologie.
Celulele care intră în alcătuirea unui organ realizează
o structură stabilă, asemănătoare la specii diferite, fenomen
cunoscut sub denumirea de homeostazie structurală. Pentru
realizarea unei astfel de structură cooperează un mare număr
de celule de tipuri diferite, care comunică între ele, îşi
controlează forma, mărimea, poziţia, orientarea în spaţiu şi
activitatea în aşa fel, încât fiecare celulă şi structură, în
ansamblul său, să funcţioneze optim, obţinându-se efecte
maxime cu minimum de cheltuieli materiale şi energetice.
Funcţiile celulelor, ţesuturilor sau organelor pot fi
explicate numai după cunoaşterea în profunzime, până la
nivelul molecular, a structurilor, care formează baza lor
materială. A înţelege o structură, un ansamblu de fapte
observabile optic sau electronomicroscopic înseamnă să
descoperi interrelaţiile dintre elementele componente.
Domeniul ştiinţific prezentat în manual înregistrează o
gigantică explozie informaţională, încât a trebuit să selectez, din
multitudinea de date recente, numai pe acelea care prezintă o
importanţă majoră pentru latura formativă, instructivă şi
ştiinţifică a pregătirii studenţilor . Acest fapt limitează, de la
început orice pretenţii asupra cartacterului exhaustiv al lucrării
şi al indicaţiilor bibliografice.
Pentru a facilita însuşirea materialului teoretic, autorul a
desenat o serie de scheme după preparate histologice, iar alte
scheme au fost preluate, prelucrate şi modificate din lucrări
consacrate.
Mulţumesc tuturor celor care îmi vor adresa
sugestii şi idei ce vor duce la îmbunătăţirea acestui material
didactic, pe care îl doresc a fi cât mai util studenţilor.
Autorul
1.1 Repere istorice în evoluţia cunoştiinţelor despre
celule şi ţesuturi
Tehnici fizice:
- Fracţionarea celulei prin centrifugare diferenţiată permite obţinerea în
stare pură a unor componente celulare, precum complexul Golgi, aparatul mitotic,
ribozomi, etc.
O contribuţie deosebită la perfecţionare acestei tehnici a adus-o G.Em.Palade care a
pus la punct centrifugarea în gel de sucroză.
- Criofracturarea permite despicarea membranelor celulare îngheţate, la
nivelul planului median al bistratului lipidic.
- Autoradiografia localizează materialul radioactiv din ţesut.
- Historadiografia realizează o microradiografie cu raze X a unui preparat
histologic.
- Difracţia razelor X, care a permis descifrarea structurii spaţiale a
proteinelor şi a acizilor nucleici.
- Difracţia şi dispersia de neutroni, prin care s-a descifrat organizarea
moleculară a cromatinei.
- Rezonanţa magnetică nucleară de înaltă rezoluţie, ce se utilizează pentru
studierea interacţiunilor moleculare în membranele biologice.
- Rezonanţa magnetică în impulsuri, folosită la studiul permeabilităţii
membranelor pentru apă şi ioni.
- Rezonanţa electronică de spin, ce foloseşte ca markeri specifici substanţe
cu electroni impari care se ataşează şi evidenţiază molecule de ADN, de
proteine,etc.
- Spectrofluorometria,ce permite studierea vâscozităţii membranelor,
difuziunea, rotaţia proteinelor.
Tehnici biochimice
Invagină ri Cripte
Canalicule intracelulare
Flageli
Diferenţierile tranzitorii apar şi dispar în raport cu
anumite momente funcţionale ale celulei, având aspectul
unor învaginări (invaginatiocellularis) ale plasmalemei (în
endocitoză), sau al unor expansiuni (processus celularis),
cum ar fi pseudopodele sau vălurile ondulante, prin care se
realizează deplasarea celulelor.
Rădăcina (radix basalis) cilului este formată din dubletele sau tripletele
periferice ale corpusculului bazal care ajung în citoplasma polului apical al celulei
ciliate. Are rolul de a ancora cilul în citoplasmă, prezintă proprietăţi contractile şi
participă la conducerea stimulilor recepţionaţi de porţiunea liberă.
Joncţiunile celulare (junctio intercellulares) sunt structuri stabile prin care plasmalemele celulelor
interacţionează specific.
Spaţii intercelulare
Joncţiuni digitiforme
Joncţiuni de comunicare
C. Complexe joncţionale
Fig.3.13.Tipuri de joncţiuni celulare
A-Joncţiuni impermeabile - zonula occludens;
B-Desmozomi în bandă - zonula adherens;
C-Desmozomi în pată - macula adherens;
D-Joncţiuni permeabile -gap.
In raport cu structura lor, se descriu joncţiuni
simple, joncţiuni complexe şi complexe joncţionale
(jonctio intercellularis complex). În cazul
joncţiunilor simple (junctio intercelluaris simplex), între
plasmaleme există un spaţiu (de cel puţin 30 nm) prin
care pot trece toate tipurile de molecule existente în
mediul intercelular. După aspectul lor, joncţiunile simple
sunt de trei feluri : - spaţii intercelulare, - joncţiuni
intercelulare denticulate (junctio intercellularis
denticulata), şi - joncţiuni intercelulare digitiforme
(junctio intercelluaris digitiformes).
În raport cu funcţiile lor , se disting trei categorii de
joncţiuni complexe: -de adezivitate, - impermeabile şi
-de comunicare.(Fig.3.13)
3.4.1.Joncţiunile de adezivitate sau dezmozomii.
Desmozomii (desmosoma) sunt joncţiuni ce conferă o mare
rezistenţă mecanică unor ţesuturi şi organe, solicitate în acest
sens . Se prezintă sub trei forme, toate întâlnite în ţesuturile
epiteliale: 1-desmozomi în pată; 2-desmozomi în bandă; 3-
hemidesmozomi.
Desmozomii în pată (macula adherens) .Se mai numesc şi
desmozomi în "spot", în "nit", sau macula adherens (macula = pată,
în limba latină). Sunt prezenţi mai ales în ţesuturile epiteliale de
acoperire. În alcătuirea lor intră următoarele componente: 1-
plasmalemele adiacente, dispuse paralel, la o distanţă de 25-30 nm;
2-un material proteic, intercelular dens la fluxul de electroni, cu
aspect filamentos, bisectat de o densificare centrală,bogată în
glucide şi calciu; 3-densificări intracelulare, în formă de disc,
ataşate de plasmalele joncţionate; 4-dispozitive de legătură sau
linkeri, reprezentaţi de microfilamente, ce se detaşează din
materialul dens intercelular, străbat plasmalemele şi apoi discurile
intracelulare, pentru a se ancora la microfilamentele
citoscheletului;
5-elemente citoscheletale, respectiv microfilamente de actină sau
filamente intermediare de cheratină, care se numesc tonfilamente.
(Fig.3.14)
Fig.3.14 Desmozom în pată-schemă
1 - Plasmalemele adiacente;
2- Spaţiu şi material intercelular;
3-Discuri intracelulare;
4-Linkeri;
5-Tonofilamente.
Desmozomii în bandă (zonula adherens) sau în panglică (zonula=panglică, în latină)
sunt prezenţi la polul apical al celulelor epiteliale şi la nivelul segmentelor transversale
ale discurilor intercalare cardiace.
Prezintă o structură asemănătoare cu cea a desmozomilor în pată, cu următoarele
deosebiri: -spaţiul intercelular, de 15-25 nm este mai sărac în material electronodens;
-densificările intracelulare, de pe faţa internă a plasmalemelor joncţionate, nu au formă de
disc, ci de bandă sau panglică. (Fig.3.15)
Fig.3.18.Diagrama
schimburilor moleculare
prin joncţiunile gap.
Un conexon are o formă de prismă hexagonală cu diametrul
de 7-8 nm şi este alcătuit din 6 subunităţi proteice
(oligomeri). Subunităţile delimitează un canal hidrofil cu
diametrul reglabil. Ionii de calciu intracelular (Ca2+) modifică
diametrul canalului, controlând astfel comunicarea
intercelulară.
Canalul hidrofil al joncţiunii gap permite trecerea
dintr-o celulă în alta a ionilor şi a unor molecule cu greutate
sub 1.000-1500 daltoni, precum: glucide, aminoacizi,
nucleotide, hormoni, vitamine,etc. Nu pot să treacă
macromoleculele (proteine, acizi nucleici, etc.), dar sunt de
10.000 ori mai permeabile pentru ionii metalici decât restul
suprafeţei membranei.
În culturile de celule, joncţiunile de tip gap se
organizează foarte rapid, din proteinele existente în
plasmalemă, care se grupează în conexoni. Ele permit
schimbul unor molecule de mărimi medii, ca nucleotizii.
Joncţiunile gap sunt necesare mai ale în situaţiile în
care celulele trebuie să acţioneze simultan, în grup, cum este
cazul celulelor embrionare, pe cale de diferenţiere sau între
celulele musculare (cardiace şi netede), nervoase şi endocrine.
3.4.4.Complexele joncţionale
Cuprind joncţiuni strânse spre frontul luminal şi
desmozomi spre frontul latero-bazal. Sunt întâlnite, mai ales,
între celulele din epiteliile intestinale şi renale. În complexele
joncţionale sunt prezente toate tipurile de legături
intercelulare necesare pentru îndeplinirea funcţiilor specifice
ţesuturilor respective.(fig.3.19) Fig.3.19. Complexe
joncţionale
în epiteliul intestinului
subţire.
A-Micvrovili;
B-Joncţiuni impermeabile;
C-Desmozomi în bandă ;
D-Desmozomi în pată ;
E-Filamente din citoschelet;
F-Joncţiuni permeabile;
G-Hemidesmozomi;
H-Mebrana bazală .
3.5. Receptorii din membrane
Pori
A.Transport pasiv Difuziune simplă Canale moleculare
transmembranare
Fig.3.31.Mecanismele fagocitozei ;
A-Mecanisme moleculare; Realizarea
fagozomilor.
1-ImunoglobulinaG;
2-Receptor inactiv;
3-Receptor activat;
4-Proteină contractilă din citoschelet;
5-Pseudopode;
6-Fagozom.
Digestia intracelulară a particulelor fagocitate are loc în lizozomi şi se
produce prin: -sisteme dependente de oxigen, mediate de enzime
(mieloperoxidază, superoxidismutază); şi - prin sisteme independente de
oxigen ,ce presupun acţiunea lizozimului, a lactoferinei,etc..
3.6.2.2.2.Pinocitoza
Pinocitoza sau endocitoza particulelor în fază fluidă reprezintă
procesul de transport în masă a unei cantităţi variabile de fluid tisular,
împreună cu particulele pe care le conţine, prin intermediul unor
vezicule (vezicula pinocitocica), denumite pinozomi.
Se întâlneşte la toate tipurile de celule, apărând ca o modaliatate
împortantă prin care celulele captează din lichidul intercelular
substanţele necesare metabolismului lor.
Se deosebesc două forme de pinocitoză în funcţie de
mecanismele care intervin în procesul de preluare a sustanţelor: -
pinocitoza fară receptori şi - pinocitoza mediată de receptori.
Pinocitoza fără receptori este endocitoza cea mai frecvent
întâlnită la acele celule din organism, care folosesc pentru transport
suprafeţe mari nespecializate din membrana plasmatică.. Preluarea
substanţelor cu ajutorul veziculelor se face fără o legare prealabilă a lor
de membrana celulară prin receptori.
Pinocitoza se desfăşoară în mai multe etape:
Poziţia. În cele mai multe cazuri, nucleul ocupă o poziţie centrală , strategică
pentru rolul de coordonator al activită ţii celulare. Totodată există numeroase
excepţii, în care nucleul ocupă o poziţie: excentrică, în adipocite (celule care
acumulează gră simi în citoplasmă ); medio-bazală, în celulele secretoare din
pancreas sau parotidă ; bazală, în secretoare de mucus, în celulele caliciforme. În
general în celulele secretoare.(Fig.4.3.)
Număr. Ca regulă generală, o celulă prezintă un nucleu. Excepţiile
sunt însă numeroase. Astfel, hepatocitele sunt binucleate în proporţie de
7-8%, osteoclastele au 30-40 nuclei, iar fibra musculară striată
(rabdocitul) prezintă între 20-40 nuclei pentru fiecare centimetru.
În condiţii patologice, mai mulţi nuclei apar în:- celulele gigante
Langhans (prezente în tuberculoză, au câţva zeci de nuclei, dispuşi la
periferia celulei, în coroană sau potcoavă); -celulele gigante de corp străin,
care apar în cazul pătrunderii în organism a unor particule străine,
nedigerabile de către celule; - celulele tumorale.
Multinuclearitatea se produce în două moduri: 1- prin
multiplicare nucleară repetată (cariokineză), fără diviziunea citoplasmei
(citodiereză),rezultând un plasmodiu; 2-prin fuzionarea mai multor
celule mononucleate, rezultând un sinciţiu (cum este cazul
osteoclastelor, rabdocitelor,celulelor Langhans,etc.)
1-MN externă ;
2-MN-internă;
3-Spaţiu cisternal;
4-Filament intern;
5-Formaţiune conică ;
6-Granulă -anulus extern;
7-Granulă -anulus intern;
8-Granulă centrală .
Funcţiile membranei nucleare sunt: 1 - delimitează
conţinutul nucleului de cel al citoplasmei;2 - reglează
schimburile dintre nucleu şi citoplasmă; 3 - formează
membranele reticulului endoplasmic, reprezentând
rezerva de citomembrane în celule care se divid rapid; 4
- menţine şi stabilizează cromatina, care se ataşează de
faţa sa internă; 5 - rol mecanic în susţinerea organitelor,
acestea fiind legate de faţa sa externă prin fibrile de 18
nm.(Fig.4.8.)
Fig.4.8. Diagrama căilor de translocare a matrialului din nucleu (A) în citoplasmă (B).
1-Transport prin microvezicule;
2-Transport transmembranar
3-Transport combinat;
4-Translocare prin pori;
5-Extruzare prin delimitarea unor saci din învelişul nuclear.
4.3.Nucleoplasma
Nucleoplasma, matricea nucleară sau sucul nuclear (nucleoplasma)
reprezintă acea parte a nucleului, aparent lipsită de structuri (la microscopul
optic şi la cel electronic,de grosisment redus). La nivelul molecular apare
structurată, încât denumirea de suc nuclear apare impropie, fiind mai adecvată
denumirea de matrice nucleară. Nucleoplasma se prezintă ca un mediu de
natură proteică care în care "plutesc" nucleolii şi cromatina. Are rol esenţial în
organizarea nucleului, determinându-i forma, în sinteza de ADN şi ARN, în
medierea semnalelor hormonale (ale steroizilor).Conţine diverse enzime, ce
intervin în glicoliza anaerobă şi în realizarea unor legături macroergice.
Matricea nucleară cuprinde două componente: matricea nucleară
propiu-zisă şi fracţiunea labilă a matricei.
Matricea nucleară propiu-zisă sau scheletul nuclear reprezintă
echivalentul citoscheletului la nivel nuclear,fiind formată dintr-o reţea de
proteine stabile cu greutatea moleculară mare.Se poate izola după extragerea
cromatinei şi nucleolului. Este formată din trei componente: matricea fibrilară,
componentele fibrilare (nemembranoase) ale învelişului nuclear şi
componenta fibrilară a nucleolului.
Matricea fibrilară apare ca o reţea de fibrile intranucleare, întinsă în
toată masa nucleului. Este formată din granule sau particule matriceale,
electronodense, cu diametru de 15-20 nm şi din fibrile matriceale (sau matrixin),
cu diametru de 5 nm,dispuse în pachete. Matricea fibrilară conţine proteine (20%
din totalul proteinelor nucleare), ADN (1,2%), ARN (0,5%) şi fosfolipide, în
cantitate redusă. Lipsesc proteinenele histonice, în timp ce proteinele
nonhistonice ocupă 18,2%, predominând cele acide.
Componentele fibrilare (nemembranoase) ale învelişului nuclear sunt o formă
specializată a citoscheletului nuclear,fiind reprezentate de lamina densă internă
(sau lamina fibrosa) şi de complexul por.
Lamina densă internă este situată pe faţa nucleară a membranei interne
a învelişului nuclear. Are aspectul unei reţele de fibrile legate pe de o parte la
reţeaua matricei nucleare şi pe de altă parte la componentele fibrilare ale
complexului por. Complexul por este format din structuri inelare (matricea
anulară sau anulii), din granule centrale şi din filamente radiare.
Lamina densă internă împreună cu complexul por formează o
componentă a scheletului nuclear, denumită complex lamina-por. Acest complex
conţine 2-3% din totalul proteinelor din nucleu (95% din ele fiind nehistonice,
predominent acide). Pe faţa internă a complexului lamina-por a fost identificată o
nucleozid trifosfatază, implicată în transportul ARN către citoplasmă.
Componenta fibrilară nucleolară (matricea nucleolilor) este reprezentată
de o reţea de filamente ce ocupă aria ce corespunde părţii fibroase şi părţii
granuloase din nucleol.Este formată din polipeptide asemănătoare celor din
scheletul nuclear şi are rol de suport pentru depozitarea granulelor ribozomale.
Funcţiile matricei nucleare sunt: 1- menţine forma nucleului şi stabilitatea
acestuia în interfază; 2-asigură flexibilitatea nucleului, fapt ce permite realizarea
unor modificări structurale legate de organizarea cromatinei, replicarea ADN,
transcripţia şi transportul intranuclear de ARN; 3- contractilitatea, independentă
de ATP, dar influenţată de ionii bivalenţi (Ca2+,Mg2+) ce permite realizarea unor
variaţii ale volumlui nuclear; 4- suport pentru depozitarea granulelor ribozomale.
4.4. Cromatina
Cromatina nu este o substanţă chimică, ci o noţiune biologică,
fiind reprezentată de materialul intranuclear care se evidenţiază cu
coloranţi bazici. Este forma de existenţă a cromozomilor în interfază
, în celula aflată între două diviziuni. Cromatina şi cromozomii sunt
două forme de organizare ale unuia şi aceluiaşi material genetic
(ADN-ul).
Compoziţia chimică a cromatinei cuprinde ADN, proteine
histonice, mici cantităţi de ARN şi proteine nehistonice.
Cantitatea de ADN din nucleu este constantă pentru o
anumită specie şi reprezintă genomul speciei respective. Este dată
de numărul şi dimensiunile moleculelor de ADN.
Histonele sunt proteine bazice, prezente numai în genomul
eucariotelor. În funcţie de conţinutul în arginină şi lizină există cinci
tipuri de histone, denumite H1, H2A, H2B, H3, H4. La rândul său
fiecare tip prezintă mai multe subtipuri.
Histonele prezintă mai multe particularităţi: 1- au masă
moleculară mică; 2- sunt puternic bazice, datorită conţinutului mare
(10-20%) de aminoacizi bazici (lizine şi arginine); 3- sunt purtătoare
de sarcini electrice pozitive, care le permit să se lege de sarcinile
negative ale grupărilor fosfat din ADN; 4-sunt proteine cu evoluţie
filogenetică moleculară definitivă.
Histonele îndeplinesc un rol major în împachetarea ADN-ului în nucleu, în realizarea
organizării supramoleculare a ADN-ului sub formă de nucleozomi. În cursul ciclului
celular, histonele suferă o serie de modificări chimice ( acetilări,fosforilări, metilări).
În spermatozoid, histonele sunt înlocuite de protamine. Protaminele au o
greutate moleculară foarte mică (4200 daltoni), o lungime medie de numai 33 aminoacizi
şi sunt foarte bazice, conţinând multă arginină. Înlocuirea histonelor are loc în timpul
trecerii de la spermatidă la spermatozoid, permiţând realizarea unui înalt grad de
condensare şi compactare a cromatinei, pentru împachetarea ADN-ului într-un volum
foarte mic, cum este cel al capului spermatozoidului.
Fig.4.9. Aspecte ale cromatinei
nucleare
I. La microscopul optic:
1-Cruste;
2-Granule;
3-Nevuri;
4-Nucleu hipercromatic;
5-Nucleu hipocromatic.
II. La microscopul electronic:
1- Cromatină periferică ;
2-Cromatină insulară ;
3-Cromatina asociată nucleolui;
4-Nucleol;
5-Membrană nucleară ;
6-Spaţiu perinuclear;
7-Pori.
Aspectele histologice ale cromatinei. Datorită
conţinutului bogat în ADN,complexat cu histone,
cromatina se colorează întens cu coloranţi bazici
(hematoxilină,albastru de tripan), putând prezenta
aspecte variate: granule, grămezi neregulate, reţele
de filamente, corpusculi cromocentrici (sau
cariozomi). Aspectul morfologic al cromatinei este
asemănător în nucleii aparţinând aceluiaşi tip
celular, dar variază în funcţie de tipul celular şi de
stadiul funcţional,fiind un criteriu important pentru
identificarea celulelor la microscopul optic.
4.4.1. Eucromatina
Eucromatina (euchromatinum) reprezintă cromatina funcţională,
activă, purtătoare de gene structurale, pe care se face transcripţia
mesajului genetic. Poate fi de două feluri: 1- eucromatină activă,
pecare transcripţia se efectuează continuu, asigurându-se
deşfăşurarea normală a vieţii celulei; 2- eucromatină permisivă ,
potenţial activă, devenind activă în momentul în care acţionează
semnale specific modulatoare (de exemplu: hormonii).
Reglarea conformaţiei genetice se realizează pe eucromatină,
prin intervenţia unor agenţi biochimici, în principal proteine
nehistonice, ce pot acţiona ca represori sau derepresori, modulând
transcriptibilitatea materialului genetic activ şi nu structura acestuia.
Raportul dintre eucromatină şi heterocromatină se exprimă
funcţional prin raportul dintre transcriptibil şi netranscriptibil,
permiţând, în fapt, realizarea relaţiei dintre genotip şi fenotip. Astfel,
prin genotip se înţelege totalitatea materialului genetic cuprins în
cromatina interfazică, deci eucromatina împreună cu
heterocromatina. Fenotipul reprezintă expresia unei părţi din
genotip, care a fost transcrisă din eucromatină în interfază,
totalitatea trăsăturilor (însuşirilor morfologice,fiziologice,etc.)
exprimate din noianul de informaţii înscrise în genotip.
4.4.2. Heterocromatina
Heterocromatina este cromatina condensată, netranscriptibilă, inactivă
metabolic.Există două tipuri de heterocromatină: constitutivă şi facultativă.
Heterocromatina constitutivă este genetic inactivă, lipsită de gene
structurale. Pe ea nu se face transcripţie niciodată, rămânâd întotdeuna
condensată în interfază. Conţine ADN repetitiv sau satelit, un ADN în care
anumite secvenţe nucleotidice sunt repetate de un număr foarte mare de ori. La
mamifere, ADN-ul repetitiv reprezintă 15% din cantitatea totală de ADN. Există
două tipuri de ADN repetitiv:1- ADN înalt repetitiv (10%), în care secvenţele se
repetă de sute de mii de ori; 2-ADN mediu repetitiv (5 %), în care secvenţele se
repetă de 100 ori, de 1000 ori sau de zeci de mii de ori.
Pe cromozomii omologi (care formează o pereche), heterocromatina
constitutivă se localizează identic, de regulă, în imediata vecinătate a
centromerului, putând fi detectată prin tehnica de bandare a cromozomilor.
Rolul heterocromatinei constitutive este incomplet elucidat, atribuindu-
se o semnificaţie de "protecţie" sau de "suport", sugerându-se ipoteza că ea
determină specificitatea centromerică, respectiv poziţia centromerului în
cromozomi.
Heterocromatina facultativă este o cromatină condensată, care conţine
gene structurale represate (inactive) pe care nu se face transcripţia. Pe aceste
gene, transcripţia s-a efectuat sau nu într-o perioadă anterioară, sau se va putea
efectua, dacă se transformă în eucromatină, sub influenţa unui agent derepresor.
Astfel, transformarea unei părţi din heterocromatina autozomală în eucromatină
determină sinteza de imunoglobuline şi transformarea limfoblastică a
limfocitelor.
În funcţie de cromozomi
în care se găseşte,
heterocromatina poate fi: 1-
autozomală (autosoma),
prezentă în perechile de
cromozomi autozomi, sub
forma porţiunilor
condensate,
heterocromatice, ce conţin
lanţuri de gene, inactive
transcripţional; 2-
gonozomală (gonosoma),
prezentă numai în
cromozomii ce determină Fig.4.10. Aspectele cromatinei X
sexul , reprezentată de 1-Satelit nucleolar;
cromatina X, la femelă şi de 2-Drumstick;
corpusculul Y, la mascul 3-Corpuscul cromocentric
Cromatina X sau corpusculul Barr a fost descrisă de
M.L.BARR şi de E.G.BERTRAM în 1949, în neuronii din
nucleul nervului hipoglos la pisică. Este folosită ca marker
genetic pentru recunoaşterea sexului genetic. In mod
normal este prezentă numai în nucleii celulelor somatice
ale femelelor sub forma unui corpuscul cromatidian,
denumit corpuscul Barr. Acesta reprezintă condensarea
interfazică a unuia din cei doi gonozomi X. Prin
condensare, eucromatina se transformă în
heterocromatină facultativă inactivă. În situaţia în care
ambii gonozomi X ar fi activi (transcripţionabili), în
celulele femelei ar trebui să existe o cantitate dublă de
enzime, controlate de genele situate pe cromozomul X.
Cromatina X este prezentă şi detectabilă la toate
femelele mamiferelor, cu excepţia femelei de opussum
(mamifer marsupial), unde este prezentă la ambele sexe.
Lipseşte la toţi masculii normali.
Corpusculul Barr are un diametru de cca. 1µm şi poate prezenta
forme diferite: plan-convex, convex-concav, biconvex, triunghiular.
Poziţia sa variază după tipul celular, apărând situtat adiacent
membranei nucleare interne ( în celulele epidermale şi ale
epiteliului mucoasei bucale) sau ataşat nucleolului (în unii
neuroni). În neutrofilele femelelor este prezentă o formaţiune
echivalentă corpusculului Barr, denumită, după aspectul său "băţ
de tobă" (drumstick), formată dintr-un cap cu diametrul de 1,5 m,
ataşat printr-un filament cromatic extrem de subţire la unul din
lobii nucleului. Frecvenţa drumstick-ului est de 7/500 neutrofile,
sau chiar mai mult.
Cromatina Y sau corpusculul F se poate observa în nucleii
celulelor provenite de la masculii normali, examinate în lumină
ultravioletă, după colorare cu fluorocrom. Are aspectul unui
corpuscul intens fluorescent. A fost descpoperit de PEARSON, în
1970 şi reprezintă expresia citologică a cromozomului Y. La indivizii
ce prezintă doi cromozomi Y se observă doi corpusculi F. În acest
mod se pot diagnostica unele anomalii cromozomiale (trisomia
XXY) la masculi, care predispun la un comportament dur, înrăit.
4.4.3. Cromozomii
Cromozomii sunt structuri celulare cu număr, forme şi
mărimi caracteristice pentru fiecare specie. Ei devin vizibili la
microscopul optic în celulele care se pregătesc pentru
diviziune sub forma unor filamente lungi, cu mare afinitate
pentru coloranţi bazici, de unde îşi trag denumirea, croma
însemnând în limba greacă culoare, iar soma - corp. (Fig.4.11.)
În funcţie de posibilităţile de a fi observaţi la
microscopul optic, cromozomii pot fi clasificaţi în : -
cromozomi interfazici, necondensaţi şi neobservabili la
microscop; -cromozomi mitotici, uşor observabili la microscop,
mai ales în cursul metafazei şi de aceea denumiţi cromozomi
metafazici. Structura cromozomilor metafazici cuprinde:
cromatidele, centromerul, kinetocorii, constricţiile secundare
şi sateliţii.
Cromatidele sunt cele două jumătăţi longitudinale,
genetic identice ce formează fiecare cromozom metafazic.
Fiecare cromatidă corespunde unei molecule de ADN.
Fig.4.11. Cromozomi interfazici şi cromozomi mitotici
Extremităţile terminale ale cromatidelor se numesc telomere
(telomerus) şi sunt absolut necesare pentru structura şi
funcţionarea normală a cromozomilor, deoarece previn fuziunea şi
menţin o anumită ordine a cromozomilor interfazici în interiorul
nucleului prin ataşarea lor la membrana nucleară internă.
Centromerul (centromerus ) sau constricţia primară este regiunea
cea mai îngustă din lungimea cromozomului, unde cele două
cromatide se unesc. Centromerul este slab colorat sau acromatic,
având un conţinut scăzut de ADN. În vecinătatea centromerului se
găseşte heterocromatina constitutivă. Cei mai mulţi cromozomi
sunt monocentrici ( cromosoma monocentricum), prezentând un
singur centromer. În cazul unor anomalii cromozomiale apar
cromozomi dicentrici ( cromosoma dicentricum) sau policentrici
(cromosoma polycentricum).
Kinetocorii (kinetocorus, i) sunt în număr de doi pentru un
cromozom şi reprezintă locul prin care fiecare cromatidă se
ataşează de microtubulii fusului de diviziune. La microscopul
electronic un kinetocor are forma unui oval cu dimensiunile de
5/25 nm. (fig.4.12.)
Fig.4.12.Ultrastructura cromozomului
1-Centromer; 2-Cromatide; 3-Cromoneme; 4-Cromomere.
Satelitul este un corpuscul sferic, cu diametrul egal cu al
cromozomului sau mai mic, ataşat de restul cromozomului printr-un
filament subţire de cromatină de lungime variabilă. Cromozomii ce
prezintă satelit se numesc SAT-cromozomi.
În funcţie de poziţia centromerului, cromozomii se clasifică în: 1-
telocentrici, la care centromerul este situat la o extremitate a
cromozomului,lipsindu-i braţele scurte; 2-acrocentrici, cu braţe scurte
abia vizibile, centromerul fiind situat în apropierea extremităţii
cromozomului;3-submetacentrici, la care centromerul este situat în
apropierea mijlocului lungimii cromozomului, prezentând un braţ scurt
şi un braţ lung; 4- metacentrici, cu braţele aproximativ egale,
centromerul fiind situat la mijlocul lungimii cromozomului.
Constricţiile secundare sunt zone ale cromozomilor ce nu reţin
colorantul bazic. Servesc drept criteriu morfologic de indiviudalizare a
cromozomilor. În comparaţie cu constricţiile primare, la nivelul
costricţiilor secundare nuse produc deviaţii angulare ale segmentelor pe
care le unesc. Unele din zonele de constricţie secundară sunt legate de
formarea nucleolilor şi se numesc zone nucleolare sau organizatori
nucleolari. iar cromozomii care participă la formarea nucleolilor sunt
denumiţi cromozomi nucleolari.
Fig.4.13. Schema unui cromozom.Tipuri de
cromozomi.
1-Centromer:
2-Constricţie secundară ;
3-Satelit;
a-Cromozom telocentric;
b-Cromozom acrocentric;
c-Cromozom submetacentric;d-Cromozom metacentric.
Dimensiunile cromozomilor sunt cuprinse între 1,5-10 m, lungime şi 0,2-2 m
diametru, putându-se întâlni cromozomi giganţi şi cromozomi pitici.
Numărul cromozomilor apare constant pentru aceiaşi specie, existând:
60 cromozomi la bovine, 54 la ovine, 38 la suine, 64 la cabaline, 63 la catâr, 38 la
felide, 78 la canide şi 46 la primate.
Celulele sexuale sau gameţii sunt haploide (haplos= simplu), conţinând
un singur set de cromozomi, notat cu "n",faţă de celulele somatice care sunt
diploide (diplos=dublu) şi conţin două seturi (2n) de cromozomi (un set matern
şi altul patern). Fiecare cromozom dintr-un set are în setul opus un cromozom
complementar, identic structurat morfologic şi genetic, alcătuind o pereche de
cromozomi omologi. Asfel, taurinele prezintă 58 cromozomi autozomi (29
perechi) şi 2 cromozomi de sex ( heterocromozomi sau gonozomi). Taurinele
femele au în celulele somatice doi cromozomi X, ,iar formula cromozomială este
60,XX. Masculii taurinelor au formula cromozomială 60,XY şi prezintă în celulele
somatice un cromozom X şi altul Y. În formula cromozomială, prima cifră indică
numărul total de cromozomi, după virgulă fiind indicaţi cromozomii de sex
(gonozomii). La taurine, fiecare din cele 29 perechi de cromozomi autosomi este
formată din 2 cromozomi omologi, cu aceiaşi morfologie şi dispunere a genelor.
Heterocromozomii ( gonozomii) nu sunt omologi. La taur, diferenţa de formă
între cromozomul X şi cel Y este evidentă, cromozomul Y fiind un cromozom
submetacentric mic. La vaci, cei doi cromozomi X submetacentrici nu sunt
omologi, deoarece numai unul este activ genetic, iar celălalt este inactiv, rămâne
condensat în interfază şi formează cromatina sexuală (corpusculul Barr).
Diferenţierea celor doi cromozomi X în unul activ şi altul inert genetic se face
într-un stadiu precoce al dezvoltării embrionare.
Compoziţia chimică a cromozomilor include ADN, proteine (histonice şi
nonhistonice) şi o cantitate redusă de ARN
Fig.4.14.Modalităţi de
plicaturare a
fibrei de cromatină în
cromozom
1-Plicaturare transversală ;
2-Plicaturare longiutdinală ;
3-Plicaturare combinată ;
4-Structură cuaternară .
4.4.3.3. Nucleozomii
Conceptul de nucleozom a fost elaborat de KÖRNBERG, în
anii 1975-1977. Un nucleozom este un octamer histonic de forma
unui cilindru scurt , cu un diametru de 11 nm şi o înălţime de 5,5
nm, pe care duplexul de AND îl înconjoară de două ori.(Fig.4.15.)
Deşi a fost observat încă din 1836 de către VALENTIN, ca o granulă densă în
interiorul nucleului, rolul său a fost dezlegat mult mai târziu, abia în 1960, precizându-se
rolul esenţial pe care îl are în biogeneza ribozomilor
Dimesiunile nucleolilor sunt între 1-2 µm, ocupând circa 30% din volumul
nucleului. Ele variază în funcţie de implicarea celulelor în sinteza de proteine. Celulele
care sintetizează cantităţi mari de proteine (neuronii, celulele embrionare, limfocitele
stimulate antigenic) au nevoie de mulţi ribozomi,ceea ce face ca nucleolii să aibă
dimensiuni mari. În celule în care sinteza de proteine este redusă (în spermatozoizi),
nucleolii au dimensiuni mai mici. Nucleolul apare hipertrofiat în anabolism, în perioada
de diferenţiere embrionară şi se reduce în catabolism şi în inaniţie.
Raportul nucleolo / nuclear. Numărul şi volumul
nucleolilor depind de starea funcţională a celulei. Cu cât
celula este mai activă în sinteza proteinelor, cu atât raportul
nucleolo/nuclear este mai mare. Acest raport este folosit
drept criteriu pentru aprecierea vârstei celulelor. Astfel
celula tânără prezintă un nucleu mare eucromatic, cu un
nucleol mare, cu o citoplasmă redusă şi bazofilă, iar o celulă
adultă prezintă un nucleu mai mic, hipercrom, cu nucleoli
mici şi o citoplasmă abundentă.
Fig.5.3. Tonofilamentele
A-Aspect la microscopul optic; B-Aspect la electronomicroscop:
1-Material fibrilar; 2-Material granular.
Aplicaţii medicale. Identificarea tipului de filament intermediar cu
ajutorul anticorpilor monoclonali, permite diagnosticarea tumorilor
maligne, deoarece: carcinoamele au filamente de cheratină ,
sarcoamele de vimentină , iar rabdomiosarcoamele de desmină .
Glioamele au filamente gliale, iar neuroblastoamele au
neurofilamente.
5.2.3.Microtrabeculele.
Microtrabeculele au fost descrise în celule examinate prin
microscopie electronică de voltaj supraînalt, la mă riri de 300.000 ori.
Sunt structuri fibrilare mai subţiri de 4-6 nm, decâ t microfilamentele.
Microtrabeculele formează o reţea ce stră bate întreaga
citoplasmă , înterconectâ nd microfilamentele,microtubulii, practic
toate componentele subcelulare prezente în celula animală . Pot fi
considerate ca fiind expresia fenomenului de gelificare, deşi uneori se
contestă realitatea lor biologică , fiind considerate un artefact.
.
Microtrabeculele menţin poziţia în spaţiul intracelular a citoscheletului şi
organitelor,fiind considerate suportul matricii biostructurate. De reţeaua
microtrabeculară se leagă enzimele din citosol, asigurâ ndu-se trecerea
substratului de la o enzimă la alta în mod coordonat. În ochiurile reţelei se
gă seşte apă şi ioni , încâ t microtrabeculele protejează celula în cazul
fluctuaţilor conţinutului în apă . Atunci câ nd apa pă trunde în celulă , spaţiile
se dilată , în timp ce în cazul deshidrată rii celulei, spaţiile se contractă . Un alt
rol al reţelei de microtrabecule constp în mişcarea intracelulară a granulelor
de pigment.
Fig.5.11. Aspectul
sarcomerului
a-în muşchiul contractat;
b- în muşchiul relaxat;
c-în muşchiul întins.
Glisarea se datorează faptului că fiecare cap al moleculelor de
miozină "păşeşte" în lungul filamentului de actină, de pe un monomer
pe următorul "trăgând" filamentul de actină pas cu pas.
Contracţia muşchiului scheletic se declanşează în momentul în care
excitarea nervului motor al muşchiului determină apariţia unui potenţial
de acţiune în sarcolemă ( plasmalema fibrei musculare striate), la
nivelul joncţiunii neuromusculare. Semnalul electric se transmite rapid
în jurul fiecărei miofibrile prin tubii transverşi ce se întind de la
sarcolemă la miofibrilă. În acest fel, semnalul electric ajunge la
reticulul sarcoplamic ( o formă specifică a reticulului endoplasmic în
fibra musculară), producând eliberarea din cisternele reticulului în
citosol, a unei cantităţi mari de ioni de calciu ( Ca2+).Creşterea bruscă a
concentraţiei de ioni de calciu declanşează contracţia miofibrilei,
datorită efectului pe care Ca2+ îl produc asupra troponinei şi
tropomiozinei. În repaus, tropomiozina se interpune între actină şi capul
miozinei, blocând interacţiunea dintre ele. Troponina C leagă ionul de
calciu şi prin aceasta modifică poziţia tropomiozinei, făcând posibilă
interacţiunea actinei cu miozina. (Fig.5.12).
Fig.5.12. Relaţiile actină- miozină- tropomiozină
a - în repaus; b- în activitate;
1- miozina; 2- actina; 3 – tropomiozina
În momentul în care capul miozinei atinge actina este eliberat ADP şi gruparea fostfat,
ceia ce determină o flexare a capului miozinei care trage de filamentul de actină,
rezultând glisarea filamentului şi contracţia musculară. După acest moment, de capul
miozinei se leagă o moleculă de ATP, producându-se desprinderea miozinei de
actină.Miozina hidrolizează ATP-ul în ADP şi gruparea fosfat, iar capul miozinei îşi
recapătă conformaţia iniţială, după capul se repetă.
Miscările de "păsire" a capetelor de miozină în lungul filamentelor subţiri (de
actină) sunt efectuate de către fiecare moleculă şi de către fiecare lob al capului. Într-
un muşchi în contracţie, la un moment dat există capete ale moleculelor de miozină
care sunt ataşate de actină, iar altele sunt detaşate. Într-o contracţie rapidă, fiecare din
cele 500 capete de miozină ale unui filament gros parcurge ciclul de 5 ori într-o
secundă
După terminarea contracţiei, ionii de calciu sunt recaptaţi în cisternele
reticulului sarcoplasmic printr-o enzimă (Ca2+ - ATP - ază ), ceea ce produce
relaxarea muşchiului.
Pe lâ ngă actină şi miozină , în miofibrile se mai gă sesc proteine accesorii cu rol
structural. Astfel, în stria Z, se gă sesc proteine (-actina şi desmina) ce
ancorează filamentele de actină şi aliniază miofibrilele adiacente, asigurâ nd
contracţia sincronizată a miofibrilelor. Alte proteine accesorii îndeplinesc un rol
funcţional mediind efectul pe care Ca2+ îl are în contracţia musculară .
În muşchiul cardiac, filamentele de actină şi miozină prezintă o
dispunere asemă nă toare cu din muşchiul scheletic, fiind evidente striaţiile.
5.3.3.1. Microtubulii
Fig.5.22.Ultrastructura centriolilor
1-Tripletă de microtubuli
Centrul celular (sau centrozomul ) joacă rolul de organizator al
microtubulilor, datorită faptului că materialul pericentriolar format din
proteine şi ARN, determină polimerizarea tubulinelor şi asamblarea
microtubulilor, care au capătul negativ ( - ) în materialul pericentriolar
din centrozom, în timp ce capătul pozitiv
( + ) dispus distal prezintă o creştere intensă.
Datorită funcţiei sale de organizator temporar, spaţial şi
vectorial al microtubulilor, centrul celular este implicat în toate
procesele în care aceştia apar ca organizatori ai citoscheletului.
Centrul celular intervine şi în direcţionarea mişcărilor de
locomoţie ameboidală ( a fibroblastelor şi leucocitelor), situându-se
înaintea nucleului pe direcţia mişcarii celulelor.Tot odată, centrul
celular participă şi definirea polarităţii celulei, dispunându-se ca şi
complexul Golgi, apical faţă de nucleu în celulele epiteliale.
Fusul de diviziune
5.3.3.3. Fusul de diviziune
Fusul de diviziune (fusus mitoticus) este o structură intra
celulară, formată din microtubuli (microtubuli fusalis) ce
realizează o legătură între centriolii care se despart şi migrază
la cei doi poli ai celulei, în timpul diviziunii celulare.
În interfază, centrozomul este situat în vecinătatea
nucleului şi din el pleacă microtubuli în toată citoplasma. În
timpul fazei "S" a ciclului celular începe dublarea centrului
celular prin separarea centriolilor, în vecinătatea fiecăruia din
centriolii vechi producându-se asamblarea unui centriol, nou
perpendicular pe cel vechi. Concomitent cu deplasarea spre
polii celulei a centrilor celulari, microtubulii formează filamente
ce se dispun sub forma unui fus de diviziune.
Fiecare filament este alcătuit din circa 100
microtubuli şi proteinele asociate lor.Între
microtubuli din fus şi moleculele de tubulină
din citosol se stabileşte un echilibru dinamic.
(Fig.5.22)
Fig.5.29. Organizarea
particulelor elementare
1-Factorul de cuplare;
2-Citocromi;
3-Succinat dehidrogenaza.
Ribozomii mitocondriali au diametrul de 15 nm şi sunt asemănători celor
de la procariote, de tip 70 S, cu cele două subunităţi: mare, de 50S şi mică, de 30S.
Mitocondria are autonomie genetică parţială, întrucât posedă un
cromosom (cromosoma mitochondrialis) ce conţine programul genetic (ADN-ul
mitocondrial), şi este capabilă să-şi sintetizeze singură, fără ajutorul nucleului
unele protein-enzime (datorită înzestrării cu ribozomi proprii, ce biosintetizează
proteine).Codul genetic folosit de mitocondrie diferă parţial de codul genetic
nuclear.
5.4.3.Procesele metabolice mitocondriale
Aparţin pe de o parte metabolismului energetic, iar pe de altă parte
metabolismului sintetetic.
Mitocondria este sediul metabolismului celular aerob, dependent de
oxigen, care include: 1- ciclul acidului citric (KREBS); 2- oxidarea acizilor graşi şi 3-
fosforilarea oxidativă. Prin aceste procese, în mitocondrii se produce întreaga
cantitate de energie (sub formă de ATP) necesară creşterii,funcţionării şi vieţii
celulei, încât mitocondriile se comportă ca nişte centrale energetice celulare.
Într-un caz ipotetic, în care celulele animale ar fi lipsite de mitocondrii,
producerea de energie ar depinde de glicoliza anaerobă, în care fiecare moleculă
de glucoză generează două molecule de ATP. În realitate, în mitocondrii,
metabolismul glucozei este complet, oxidarea mergând pănă la CO2 şi H2O, încât
fiecare moleculă de glucoză produce 36 molecule de ATP.Prin hidroliza ATP-ului se
eliberează o cantitate importantă de energie (8.000-10.000 Kcal/mol) necesară
proceselor
În cazul acizilor graşi, aceştia trec din citosol în matricea mitocondrială, unde
intră în ciclul beta-oxidării,pierzând în mod repetat câte doi atomi de carbon de la
capătul carboxil şi rezultând o moleculă de acetil-coenzimă A. Totodată, în urma
glicolizei ce are loc în citosol,rezultă două molecule de piruvat, care în matricea
mitocondrială este convertit de către complexul piruvat dehidrogenază în acetil
coenzima A.
Acetil coenzima A, rezultată din acizii graşi sau din glucoză intră în ciclul
acidului citric (ciclul KREBS), ce are loc în matricea mitocondrială.La acest nivel cu
ajutorul oxigenului molecular, produs de respiraţia celulară, au loc oxidări în urma
cărora rezultă energie ce este folosită pentru sinteza de ATP, de către complexul
ATP- sintetazei, prezent în membrana mitocondrială internă.
Celulele dispun de depozite de lipide (trigliceride) în ţesutul adipos şi de
glucide (glicogen), în ficat şi muşchi, prin care se asigură o sursă continuă de
piruvat.
Participarea mitocondriilor la efectuarea unor procese metabolice este
posibilă datorită existenţei unui mozaic complex de enzime,localizate în diferite
structuri mitocondriale, precum membrana externă, membrana internă cu criste şi
particule elementare, compartimentul extern (sau spaţiul intermembranar) şi
compartimentul intern (sau matricea mitocondrială).Astfel, enzimele care intervin
în ciclul acidului citric şi în beta -oxidarea acizilor graşi sunt localizate în
membrana externă şi în matricea mitocondriilor.
Enzimele şi alţi factori care participă la procesul de fosforilare oxidativă
(generatoare de ATP) sunt localizate în membrana internă,respectiv în criste.În
particulele elementare ale membranei interne se află localizată enzima denumită
factorul de cuplare F1, care posedă activitate ATP-azică şi catalizează ultima etapă
a formării ATP-ului.
Procesele metabolice biosintetice pot avea loc, datorită faptului că
mitocondriile conţin ADN, ARN, ribozomi şi toate enzimele necesare exprimării
genelor mitocondriale.În mitocondrii se desfăşoară unele etape din sinteza
hemului şi a hormonilor steroizi, ca de exemplu în celulele interstiţiale din ovar şi
testicul, în corticosuprarenală.
Structura chimică a mitocondriilor cuprinde 65-70% proteine (din care
30% structurale şi 70% enzime), 25-28% lipide (fosfolipide, lecitine, trigliceride,
cardiolipin), 0,5% ARN, AND (în cantitate mică),glucide,ioni,apă şi uneori vitamina
c. Într-o mitocondrie, toate proteinele, ca şi toate lipidele sunt în locuite la
aproximativ 20 de zile, încât mitocondria se reînoieşte continuu, iar când iese din
funcţie, este îndepărtată prin autofagie cu ajutorul lizozomilor.
5.4.4. Originea mitocondriilor
În celulă, noile mitocondrii apar prin condrodiereză
(clivaj,despicare), încât dintr-o mitocondrie funcţională rezultă două
organite asemănătoare. Se menţioneaz şi posibilitatea de formare a
mitocondriilor din molecule proteice şi lipidice sintetizate în celulă sau din
alte citomembrane, în special din cele ale reticulului endoplasmic.
În filogeneză, primele mitocondrii au apărut în celulele animale prin
transformarea unor bacterii care, odată pătrunse în celulă animală şi-au
pierdut virulenţa, şi-au structurat o a doua membrană (membrana
mitocondrială externă), şi-au adoptata metabolismul la celula gazdă,
devenind un organit endo-simbiont. Mitocondria,ca şi bacteriile prezintă o
moleculă de AND circular, iar unele enzime sunt prezente atât în bacterii, cât
şi în mitocondrii.
Organizarea ultrastructurală . La
eucariote, un ribozom este format din
două subunită ţi inegale, ca dimensiuni
asimetrice: a) o subunitate mare (cu
diametrul de aproximativ 30nm), de
formă sferoidală , cu constanţă de
sedimentare de 60S. ; b) o subunitate
mică , alungită , cu o constantă de
sedimentare de 40S.(Fig.5.33).
Fig.5.33.Schema ribozomilor şi a formelor lor de
organizare
1-Subunitatea mică ; 2-Subunitatea mare; 3-Ribozomi; 4-
Dimer; 5-Poliribozomi.
Ribozomul de la procariote este asemă nă tor cu ribozomul
mitocondrial de la eucariote, avâ nd o constantă de
sedimentare de 70S, cu o subunitate mică , de 30S şi o
subunitate mare, de 50S.
Cele două subunită ţi ribozomale sunt separate atunci
câ nd nu participă la sinteza de proteine sau câ nd, în
citoplasmă , concentraţia ionilor de magneziu (Mg2+) scade
sub 10-3 sau în prezenţa unor inhibitori ai sintezei de
proteine ca puromicina sau etionina. Atunci, câ nd
concentraţia ionilor de magneziu creşte peste 10-3 se
produce agregarea ribozomilor în grupuri denumite polimeri
(di, tri, tetra) care nu au o funcţie specială în celulă . Odată cu
revenirea la normal a concentraţiei ionilor de magneziu în
citoplasmă se produce desfacerea polimerilor şi
individualizarea ribozomilor.
În cursul proceselor de biosinteză a proteinelor mai mulţi
ribozomi se dispun de-a lungul unei molecule de ARN mesager
(ARNm), formâ nd cu un poliribozom (polirybozoma), sau un
polizom. ARNm se amplasează în spaţiul dintre cele două
subunită ţi ale ribozomului şi introduce mesajul genetic în secvenţa
de aminoacizi a proteinelor ce se sintetizează . Numă rul de
ribozomi ce se grupează variază în funcţie de mă rimea moleculei
proteice ce urmează a fi sintetizată , fiind necesari 100 ribozomi
pentru o moleculă de colagen şi de 5 ribozomi pentru o moleculă
de globină din hemoglobină . Molecula de ARN mesager are forma
unui filament sinuos, gros de 2nm, ce înşiră ribozomii, precum
mă rgelele pe aţă , trecâ nd prin fiecare ribozom, printre subunitatea
mică şi cea mare. După ce proteina a fost sintetizată , lanţul
poliribozomal se rupe, iar ribozomii se dispersează în citoplasmă .
Compoziţia chimică a ribozomilor cuprinde ARN ribozomal
(ARNr) şi proteine în pă rţi aproximativ egale, cantită ţi mici de apă
şi diferiţi ioni metalici (de magneziu şi calciu).
Molecula de ARN ribozomal prezintă segmente bicatenare elicoidale, dispuse la suprafaţa
subunită ţilor ribozomale, ce alternează cu segmente monocatenare nespiralate, dispuse în
interiorul subunită ţilor, unde sunt situate şi proteinele ribozomale. Prin conţinutul lor în
ARNr, ribozomi conferă bazofilia celulelor. (Fig.5.34).
În subunitatea mare de 60S sunt prezente 3 specii de ARNr (de 5,8S, de 28S şi de 5S), în
timp ce, subunitatea mică conţine numai o singură specie de ARNr (de 18S). În moleculele
de ARNr, bazele apar asimetrice, fiind reprezentate de baze purinice (guanină şi adenină )
mai abundente şi de baze pirimidinice (uracil şi citozină ).
Proteinele ribozomale sunt legate mai strâ ns sau mai lax de ARNr şi îndeplinesc
un rol structural, unele intervenind în asamblarea unită ţilor ribozomale, iar altele sunt
implicate în realizarea funcţiilor specifice ribozomilor. Proteinele ribozomale sunt bogate în
radicali specifici de tipul argininei şi lizinei în subunitatea mare existâ nd 45 proteine şi în
subunitatea mică 33 proteine (Fig.5.35).
Biogeneza ribozomilor începe în nucleol, la nivelul moleculelor de AND nucleolar din
componenta cromozomală , unde pe o porţiune a cromozomului denumită organizator
nuclear se gă sesc genele pentru producerea ARNr. Iniţial se produce un precursor al ARNr
cu constantă de 45S ce se localizează în componenta fibrilară a nucleolului. O parte din
ARNr 45S dă naştere la ARNr 28S şi ARNr 18S, care trece în componenta granulară a
nucleolului, iar cealaltă parte de ARN 41S se transformă sub acţiunea exonucleazelor în
ARNr 28S şi ARNr 20S (din care rezultă rapid un ARNr 18S). ARNr 28S şi ARNr 18S,
împreună cu o parte din proteinele ribozomale venite în nucleu din citoplasmă , migrează
separat în citoplasmă prin porii membranei nucleare. ARNr 58S se sintetizează în afara
nucleolului în nucleoplasmă după tiparul ADN-ului, iar ARNr 5S şi ARNr 5,8S migrează în
citoplasmă ataşaţi de molecula de ARNr 28S.
Odată trecute în citoplasmă , cele două subunită ţi, încă
imature se maturează foarte repede, se asamblează şi se
asociază cu proteine citoplasmatice specifice ribozomului,
structurâ nd în final ribozomii. Funcţia ribozomilor constă în
sinteza proteinelor. Ribozomii ataşaţi membranelor reticulului
endoplasmic sintetizează proteinele de export (enzime,
hormoni, anticorpi, tropocolageni- ca în cazul celulelor seroase
din pancreas, limfocitelor, plasmocitelor şi fibroblastelor), în
timp ce poliribozomii liberi neataşaţi sintetizează proteine de
structură (ce se consumă în diviziune şi creştere, în înlocuirea
organitelor uzate), precum şi unele proteine speciale (proteine
contractile, proteinele din mioglobină şi hemoglobină
5.5.2.RETICULUL ENDOPLASMIC
Există două momente denumite puncte de restricţie a că ror depă şire permite parcurgerea
etapelor urmă toare. Primul şi cel mai important punct de restricţie este între perioadele G1
şi S1, iar cel de-al doilea este între perioadele G2 şi M. Într-o populaţie de celule, momentul
depă şirii punctului de restricţie (punctul R) diferă de la o celulă la alta, încâ t nu toate
celulele parcurg în acelaşi timp etapele ciclului celular, gă sindu-se în diferite etape. Datorită
acestui aspect populaţiile celulare sunt asincrome.
Nu se cunoaşte precis care este factorul care determină trecerea unei celule de
mamifer dincolo de punctul R. Practic se consideră că depă şirea punctului de restricţie
G1/S depinde de realizarea unei concentraţii prag a unei proteine instabile, denumită
proteina U de la “unstable”. Într o celulă, proteina U poate trece pragul concentraţiei numai
câ nd este sintetizată rapid. În momentul realiză rii pragului de concentraţie, proteina U
determină începerea replică rii ADN şi în consecinţă trecerea celulei din faza G1 în S.
Inhibarea sintezei proteinelor şi în mod implicit a sintezei proteinei U poate explica
prelungirea fazei G1.
Existenţa punctului de restricţie G1/S constituie o rezervă de
supravieţuire a celulei, care în condiţii vitrege, sintetizează în primul
râ nd “proteine de întreţinere”, iar sinteza proteinei U va fi redusă , încâ t
deşi celula nu se divide, ea ră mâ ne vie pentru perioade lungi de timp,
chiar şi în condiţii de “inaniţie severă ”. În condiţii în care celula este
lipsită de aport nutritiv în alte perioade ale ciclului celular, ea nu va
supravieţui. În acest mod, punctul de restricţie G1/S apare ca un “punct
de odihnă ” sigur pentru celulele care din cauza condiţiilor de creştere
sau interacţiunilor cu alte celule trebuie să şi oprească diviziunile.
Celulele care se află oprite în această stare stabilă se află în faza “G0” a
ciclului celular.
Un alt punct de restricţie se află la sfâ rşitul perioadei G2. Inhibarea
sintezei proteinelor în această fază împiedică intrarea celulei în
diviziune. Se consideră că la sfâ rşitul perioadei G2 este activată o
proteinkinază solubilă , care catalizează fosforilarea proteinelor din
membrana nucleară şi a histonelor H1. Fosforilarea proteinelor din
membrana nucleară induce dezasamblarea învelişului nuclear, iar
fosforilarea histonelor H1 produce condensarea cromozomilor,
fenomen caracteristic diviziunii.
În raport cu modul în care parcurg ciclul celular, se disting trei categorii de
celule:
I - Celulele care şi-au pierdut capacitatea de a se divide, după parturiţie,
fiind oprite în faza G1, ca de exemplu: neuronii, celulele musculare.
II - Celulele care au o capacitate scă zută de a se divide (hepatocitele, unele
celule endocrine), dar care în condiţii speciale se pot divide rapid. Astfel,
hepatocitele se divid rapid după hepatectomie, refă câ nd celulele pierdute.
III - Celulele care se divid rapid, ca de exemplu celulele mă duvei osoase
hematogene, din epiderm, din epiteliul mucoasei intestinale, celulele liniei
germinative spermatogene. Aceste celule se pot gă si în ţesuturi în două
compartimente (grupe) celulare: a) un compartiment proliferativ, ce cuprinde
celulele care se divid rapid şi b) un compartiment neproliferativ, ce cuprind celule
care nu se divid decâ t în anumite condiţii. Astfel, se petrec fenomenele în
ţesuturile în care o parte din celulele materne se pierd în mod fiziologic, ca de
exemplu celulele din epiteliul mucoasei intestinale, care se descuamează după 3-5
zile; hematiile care se distrug după 120 zile de viaţă . Pierderile de celule mature
sunt compensate prin trecerea constantă a unor celule de rezervă , numite şi celule
sursă , sau celule stem, aflate în faza G0, din compartimentul neproliferator în
compartimentul proliferator. Trecerea din faza G0 se face sub acţiunea unor
stimuli specifici, reprezentaţi de substanţele mitogene, adică de cele ce induc
mitoza, precum: eritropoietina, factorii de creştere ai unor celule (ai nervilor, ai
fibroblastelor), poliamina (exemplu putrescina), hormoni (estrogeni). Pot acţiona
însă şi factori tisulari, cum sunt chalonele (peptide sau glicoproteine), care inhibă
diviziunile celulare.
Tip Modalitati Faze Etape Stadii
Inmugurire
Diviziunea Clivaj
directă Sciziparitate
(amitoza)
Profaza
Mitoza Prometafaza
(Diviziunea Metafaza
nereducţională) Anafaza
Telofaza
Profaza I Leptonema
Zigonema
Pachinema
Meioza I Diplonema
(reductională) Diachineza
Prometafaza I
Diviziunea Meioza Metafaza I
indirectă (Diviziunea Anafaza I
reducţională) Telofaza I
Interfaza
Profaza II
Meioza II Prometafaza
(nereducţională) II
Metafaza II
Anafaza II
Telofaza II
6.2. DIVIZIUNEA CELULARĂ
Diviziunea celulară (divisio cellularis) este acea perioadă a ciclului celular în care
se realizează distribuirea materialului genetic la cele două celule fiice. Există două
modalită ţi de realizare a diviziunii celulare: a) diviziunea directă (sau amitoza) şi b)
diviziunea indirectă , care poate fi de două feluri: mitoză sau meioză .
6.2.1.Diviziunea directă
Dacă fusul este distrus nu se mai produce diviziunea celulară , pe acest fapt
bazâ ndu-se utilizarea unor medicamente citostatice (ca vinblastina sau vincristina).
Anafaza
Se caracterizează prin deplasarea cromatidelor devenite cromozomii fii spre cei
doi poli ai celulei. Deplasarea spre polii celulei este rezultatul a două evenimente
independente: a) mişcarea spre poli a fibrelor cinetocorice prin depolimerizarea
capetelor libere (negative) ale microtubulilor şi antrenarea cu ele a cromatidelor
ataşate; b) alungirea prin polimerizare la capă tul pozitiv (+) a fibrelor polare,
producâ ndu-se distanţarea celor doi poli. Alunecarea fibrelor polare are la bază
sistemul motil microtubul-dineină .
Telofaza
Începe în momentul în care cele două grupe cromozomiale au ajuns la cei
doi poli celulari şi fuzionează aparent formâ nd câ te un spirem. În jurul
spiremului se reface învelişul nuclear prin defosforilarea proteinelor
laminare. Totodată se refac nucleolii, datorită acţiunii cromozomilor SAT,
iar nucleul îşi recapă tă structura din interfază , cromatina luâ ndu-şi aspectul
de reţea şi granule.
Clivarea citoplasmei la nivelul plă cii ecuatoriale, în cursul fenomenului
denumit citodiereză sau citokineză (cytokinesis), începe prin apariţia unui
şanţ pe suprafaţa celulei (constrictio cytoplasmatica), datorită activită ţii
unui inel contractil, prezent sub plasmalemă .
Inelul contractil (anulus equatorialis) este format dintr-un mă nunchi de
filamente de actină , ce începe să fie asamblat încă de la începutul anafazei.
Inelul îşi micşorează diametrul prin depolimerizarea filamentelor sale,
necesitâ nd prezenţa ionilor de calciu.
Suprafaţa totală a celor două celule fiice este mai mare decâ t a celulei
mamă , fapt ce necesită o biogeneză de plasmalemă . Se constată că
biogeneza plasmalemei începe înaintea diviziunii, observâ ndu-se prin
microscopia de baleaj că pe mă sură ce celula trece din faza G1 în faza S şi
apoi în faza G2, suprafaţa ei devine din ce în ce mai “pă roasă ” prezentâ nd
microvilozită ţi care reprezintă rezerva de membrană necesară pentru
învelirea celulelor fiice, ce au foarte puţini microvili.
În urma mitozei, dintr-o celulă mamă rezultă două celule fiice avâ nd
aceeaşi cantitate de ADN şi acelaşi numă r de cromozomi ca şi celula mamă .
Gradul de asemă nare al celulelor fiice cu celula mamă permite să se distingă
patru forme de mitoză : homotipică , heterotipică , asimetrică şi de întinerire.
În mitoza homotipică ( sau homoplastică ) celulele fiice sunt
asemă nă toare între ele şi cu celula mamă . Este întâ lnită la celulele
nediferenţiate (foarte tinere).
În mitoza heterotipică ( sau heteroplastică ), celulele fiice sunt
asemă nă toare între ele, dar sunt mai mature, mai diferenţiate decâ t celula
mamă , fapt pentru care se mai numeşte şi mitoză de diferenţiere.
În mitoza asimetrică ( homo-heteroplastică ), una din celulele fiice
seamă nă cu celula mamă , iar cealaltă este diferită .
În mitoza de întinerire (sau de dediferenţiere), celula mamă dă naştere la
celule „mai tinere” (active), cu potenţialită ţi biologice caracteristice
formelor tinere (active) ale celulei mamă . Se întâ lneşte la limfocit, care prin
diviziune dă naştere la două limfoblaste.
Factorii care determină mitozele sunt încă insuficient precizaţi. Mitoza
apare ca o fază obligatorie a ciclului celular ( în situaţia în care s-au depă şit
punctele de restricţie) şi ca o consecinţă a dublă rii masei şi componentelor
celulei, fiind declanşaţi de o serie de factori ce pot fi încadraţi în trei grupe:
a) factori generali, ca: temperatura, lumina, hormonii (tiroidieni, hipofizari),
vitamine; b) factori intracelulari, ca: modificarea raportului nucleo-
citoplasmatic şi nucleolo-nuclear (ca şi cum volumul crescut al citoplasmei
nu ar mai putea fi controlat de nucleu, fă câ nd necesară diviziunea celulei);
c) factori intercelulari, precum raportul care trebuie să existe, în fiecare
ţesut, între celulele uzate şi cele care se divid. Sunt cei mai importanţi în
cazul în care un grup de celule moare, se declanşează diviziunea unui alt
grup de celule printr-un mecanism de retro acţiune (“feed back”), încâ t
raportul între cele trei categorii de celule să ră mâ nă aproximativ acelaşi.
6.2.2.2. Meioza
6.3.3.1.Mecanismul molecular al
biosintezei proteinelor
În viaţa sa, celula parcurge urmă toarele stadii (sau faze): 1) un stadiu de
funcţionare normală; 2) îmbătrânirea (sau senescenţa); 3) agonia; 4) moartea
celulară.
Celule îmbă trâ nite suferă o serie de modificări morfologice precum: a)
scă derea volumului celular; b) scă derea ritmului mitotic şi creşterea procentului de
celule moarte, într o populaţie de celule; c) modifică ri ale nuceului şi d) modifică ri
ale citoplasmei.
Modificările nucleului sunt reprezentate de: 1) picnoza nucleară , care
constă în retractarea şi condensarea nucleilor, colorare intensă (hipercromie) şi
dispariţia detaliilor de structură ; 2) cariorexis sau fragmentarea nucleului; 3)
carioliza sau dispariţia (dizolvarea) nucleului.
Modificările citoplasmei constau în: scă derea bazofiliei, vacuolizarea
citoplasmei, acumularea de pigmenţi de uzură şi lipide ca urmare a scindă rii
moleculelor lipoproteice. (Fig.7.1)
În celulele în agonie se observă : a) modifică ri nucleare asemă nă toare
celor întâ lnite în celulele îmbă trâ nite; b) modifică ri ale organitelor citoplasmatice,
cu eliberare de fosfolipide şi formarea de figuri mielinice; c) modificarea stă rii
coloidale a citoplasmei (fluidificare sau gelificare) şi modifică ri ale curenţilor
citoplasmatici.
Ipotezele şi teoriile privind îmbă trâ nirea şi moartea celulelor se pot
grupa în două categorii: a) o teorie a erorilor şi b) o teorie a morţii programate a
celulelor.
Teoria erorilor consideră că senescenţa celulară (îmbă trâ nirea) este o
consecinţă a acumulă rii defectelor genetice în urma acţiunii radiaţiilor, agenţilor
mutageni sau radicallor liberi din mediu asupra ADN-ului sau asupra diferitelor
etape din transcrierea şi traducerea informaţiei genetice. Rezultatul acestei acţiuni
este producerea unor “erori” în sinteza unor proteine şi în funcţionalitatea lor. O
variantă a teoriei erorilor o reprezintă teoria invaziei virale care consideră
senescenţa celulară ca fiiind o consecinţă a încorporă rii ADN-ului viral în genomul
celulei. Prin teoria erorilor nu se poate explica însă variabilitatea duratei de viaţă a
diferitelor tipuri de celule.
Teoria morţii programate susţine că fiecare tip de celulă are înscris în
programul genetic o anumită durată de viaţă , după care celula moare. Această teorie
este sprijinită de rezultatele experimentale obţinute de HAYFLICK (1986), care, în
culturi de celule, a observat că fibroblastele provenite din ţesutul embrionar se divid
de 50 de ori, în timp ce la fibroblastele provenite de la persoane de diferite vâ rste,
numă rul diviziunilor scade treptat cu vâ rsta. Dacă culturile de celule sunt îngheţate
mai mulţi ani, la dezgheţare, culturile se divid exact de atâ tea ori, ca şi celulele de
aceeaşi generaţie neîngheţate. Descifrarea mecanismului programă rii morţii în
celulele normale poate oferi cheia vindecă rii cancerului şi prelungirea vieţii.
Îmbătrâ nirea celulară apare ca un proces cu semnificaţii structurale şi
funcţionale variate pentru diferitele tipuri de celule existente în organism. Astfel,
celulele cu ritm rapid de diviziune au un proces de îmbă trâ nire cu un mecanism
de producere diferit faţă de unele celule nedivizibile. Orice tip celular diferenţiat
divizibil parcurge în cursul viaţii organismului un număr precis de diviziuni
programate genetic, încâ t îmbă trâ nirea poate să se traducă prin scă derea ritmului
sau chiar oprirea completă a procesului de diviziune. În cazul celulelor nedivizibile
în cursul vieţii organismului (neuronul, celulele musculare) îmbă trâ nirea se traduce
prin acumularea de macromolecule cu proprietă ţi diferite de cele iniţiale sau prin
acumularea de substanţe nedegradabile (ca lipofuscină etc.).
Între senescenţa celulară şi îmbă trâ nirea organismului întreg este o mare
diferenţă , organismul animal fiind format din mai multe sisteme. Astfel
îmbătrânirea organismului este rezultatul îmbătrânirii fiecărui sistem în parte
şi mai ales rezultatul îmbă trâ nirii moleculelor, celulelor, ţesuturilor şi organelor,
fiecare dintre acestea îmbă trâ nind într-un mod specific, diferit.
Moartea celulei
Studierea mecanismelor şi a cauzelor care produc moartea celulei constiuie
obiectul de studiu al tanatologiei celulare.
Moartea celulei se produce instantaneu, încâ t post mortem se poate observa: a)
retractarea pseudopodelor şi adoptarea unei forme sferice; b) o colorare difuză
a nucleului şi citoplasmei cu coloranţi vitali; c) balonarea şi dispariţia
mitocondrilor; d) picnoză, cariorexis şi carioliză nucleară. Aceste modifică ri sunt
rezultatul eliberă rii enzimelor din lizozomii alteraţi, ca urmare a încetă rii circulaţiei
sanguine şi constituie un semn cert al morţii organismului animal.
Sunt descrise trei tipuri de moarte a celulelor: moartea celulară programată ,
apoptoza şi necroza.
Moartea celulară programată sau oncoza constă în autodistrugerea
celului prin activarea unui program genetic propriu şi specific. Se întâ lneşte în.
cursul dezvoltă rii ontogenetice embrio-foetale, pe parcursul dezvoltă rii sau
funcţionă rii unor organe (de exemplu: involuţia glandei mamare, la încheierea unui
ciclu de lactaţie sau involuţia uerului la încetarea stă rii de gestaţie
Apoptoza este o moarte celulară lentă, care intervine după primirea
unor semnale intrinseci şi se realizează prin mecanisme proprii. Prin acest tip de
moarte celulară , organismul se eliberează de anumite celule care nu-i mai sunt utile
(celule lezate, celule în exces, celule cu ADN-ul modificat şi nereparat, etc)
În producerea apoptozei se pot distinge patru stadii evolutive : un stadiu
molecular, un stadiu de contractare, un stadiu de clivaj şi un stadiu de fagocitoză.
În stadiul molecular sau de preangajare apar modifică ri ale membranei
şi citoplasmei care îi permit celulei să recepţioneze semnale (de obicei chimice:
AMP-c, inozitol trifosfatul, ioni de calciu, etc), ce produc modificarea permeabilită ţii
membranelor celulare, dispariţia microvililor , dispariţia joncţiunilor şi pierderea
contactului cu celulele adiacente. Ca o consecinţă a acestor fenomene se produce
activarea unor „gene de liză” sau „gene letale” (protooncogene c-fos, c-myc,
antioncogena P 53). Aceste gene induc sinteza de macromolecule efectoare sau
activatoare ale apoptozei (proteina de stress hsp 70, catepsina D etc.) Celulele
pă ră sesc angrenajul tisular, citosolul se condensează , plasmalema prezintă
invaginaţii adâ nci, iar în nucleu apare o hipercromatoză marginală , datorită
dispunerii periferice a eucromatinei nucleare. În acest stadiu ribozomii şi
mitocondriile nu sunt modificate,iar celula este încă capabilă să elimine coloranţii
vitali
În stadiul urmă tor, de clivaj în corpi apoptotici, cisternele reticulului endoplasmic
şi unii saci golgieni se vacuolizează , iar fibra de cromatină este fragmentată , sub
acţiunea unor endonucleaze, dependente de calciu şi sensibile la zinc. Apar „ corpii
apototici ” cu aspectul fragmente celulare delimitate de plamalemă şi conţinâ nd
citosol, organite şi oligonucleozomi.
Stadiul de fagocitoză şi de eliminare a corpilor apoptotici este de scurtă
durată , deoarece corpii apoptotici sunt recunoscuţi imediat de lectine şi receptorii
macrofagelor şi eliminaţi prin fagocitoză .
Citonecroza sau necroza sau necrobioza este o moarte celulară violentă.
Se produce sub o acţiune patogenă intensă ce depă seşte posibită ţile de adaptare ale
celulei şi cuprinde un numă r mai mare de celule. Într-o primă fază celula se
tumefiază , apoi lizozomii eliberează hidrolazele acide, încâ t celulele se lizează în
totalitate,generâ nd o reacţie inflamatorie în teritorillie învecinate. Nucleul trece prin
modifică ri profunde (picnoză , carirexis şi carioliză ).Celulele necrozate îşi mă resc
volumul, contrar faţă de ceea ce se întâ mplă în apoptoză .
7.5. Recunoaşterea celulară
Sunt gene, care pot să determine transformarea unei celule normale într-o celulă
canceroasă . Sunt considerate o formă mutantă a unei gene normale (proto-
oncogenă) implicată în creşterea şi diviziunea celulelor.
Modifică rile de membrană ale celulelor maligne se datoresc modifică rilor
intervenite în exprimarea unor gene, care determină compoziţia şi proprietă ţile
membranei celulare periferice, ceeace face ca celulele maligne să aibă o capacitate
de creştere autonomă , ele reproducâ ndu-se şi proliferâ nd independent de
mecanismele normale de reglare.
Un model al genezei cancerelor (cancerogenezei) propus de HUEBNER şi
TODARO (1969) susţine că în toate celulele normale există un virus integrat în cromozomi
(un provirus). La un moment dat se produce activarea uneia din genele virale (denumită
oncogenă ) care codifică proteine capabile să transforme o celulă normală într-o celulă
malignă .
S-a constatat că , în cromozomii umani, există gene care au secvenţe foarte
asemă nă toare cu oncogenele virusurilor cu ARN (denumite v oncogene). Astă zi se ştie că
nu oncogenele celulare provin din cele virale (deci nu sunt virusuri integrate), ci dimpotrivă
virusurile au preluat din celulele normale aceste gene.
Oncogenele celulare au fost denumite şi proto-oncogene şi se pare că s-au
conservat, în evoluţie, un timp foarte îndelungat, îndeplinind funcţii foarte importante. Pâ nă
în prezent nu se cunoaşte ce rol au în celula normală şi nici ce este modificat, atunci câ nd se
produce cancerul, determinâ nd perturbă ri în exprimarea oncogenelor. În cancer s-au
descris modifică ri ale cromozomilor ca ruperi de cromozomi şi transferuri ale
fragmentelor pe alţi cromozomi, oncogenele fiind localizate tocmai în locul în care se rup
cromozomii sau în fragmentele translocate.
Sunt cunoscute 18 proto-oncogene, care se pot clasifica în două clase: myc şi ras.
Oncogenele myc intervin în codificarea proteinelor nucleare, reglează
transcrierea şi induc transcrierea unor gene esenţiale, critice pentru proliferarea
celulară.
Oncogenele ras codifică o serie de proteine ce se localizează în citoplasmă şi
determină modificări de formă, de adezivitate şi de recepţionare a unor semnale de
creştere. O celulă devine transformată malignă secretă în exces un factor stimulator al
creşterii celulare, care printr-un mecanism “autocrin” suprastimulează
însă şi creşterea celulei care l-a produs.
Date recente par a indica că o singură oncogenă nu poate produce
cancer, fiind necesară colaborarea mai multor oncogene care intră în activitate în
fiecare din etapele carcicogenezei. Cunoscâ ndu-se mecanismele moleculare ale
maligniză rii se pot identifica punctele unde aceasta va putea fi întreruptă încâ t se
speră că biologia moleculară va contribui la adoptarea unei adevă rate terapii a
cancerelor.
8. MATRICEA
EXTRACELULARĂ
Matricea extracelulară sau intercelulară este
mediul în care tră iesc şi îşi desfă şoară
activitatea diferitele tipuri de celule ale
organismelor pluricelulare. În acest mod,
celulele se află în contact cu o reţea de
macromolecule, denumită matricea
extracelulară , care ocupă spaţiul intercelular
continuâ ndu-se cu glicocalixul.
Componente Ultrastructuri Compoziţie moleculară
A.Lamina bazală
Membrana (lamina lucida + colagen IV
bazală lamina reticularis) proteoglicani (perlecan)
B. Lamina fibronectină
reticulară laminină
Există 25 lanţuri α care pot fi asamblate în mai mult de 10.000 tipuri de molecule de
colagen, dintre care numai 15 sunt mai bine cunoscute. Principalele tipuri de colagen din
ţesutul conjuctiv sunt colagenul de tip I, II, III,IV, V şi XI (Fig.8.3).
Colagenul de tip I, fibrilar, este cel mai comun,fiind principalul colagen din
piele, tendoane, oase şi capsule. Prezintă o structură moleculară tipică , în triplu helix
(Fig.8.4).
Colagenii de tip IV şi VII formează reţele.Moleculele de colagen IV formează o ţesă tură
care ocupă o parte importantă din membrana bazală. Moleculele de colgen de tip VII
formează dimeri, care întră în structura fibrilelor de ancorare , mai abundente în piele şi
care ajută la ancorarea membranei bazale a epidermului la ţesutul conjunctiv subiacent
. Colagenii de tip IX şi XII, denumiţi colageni asociaţi fibrilelor acoperă suprafaţa
acestora şi participă la legarea fibrilelor atâ t între ele, câ t şi de alţi componenţi ai matricei
extracelulare
Fibrele elastice sau fibrele galbene sunt mai subţiri decâ t cele de colagen
avâ nd diametrul de numai 1 nm. Ele sunt monofibrilare, se ramifică şi se
anastomozează formâ nd reţele neregulate. Sunt de cel puţin cinci ori mai extensibile
decâ t o fibră de cauciuc de aceeaşi secţiune transversală . Se pot colora electiv cu
orceină ( în roşu brun întunecat ), cu rezorcin fuxină WEIGERT (în roşu aprins), cu
aldehidfuxină GÖMÖRI (în negru) şi cu hematoxilină -eozină (câ nd se colorează slab
şi inconstant). Sunt rezistente şi extensibile (cu 100-200%), revenind la lungimea
iniţială , după ce tracţiunea asupra lor a încetat. Se gă sesc în pereţii vaselor sanguine,
în pulmon, în piele şi în ţesutul conjunctiv lax. Odată cu înaintarea în vâ rstă se
ră resc provocâ nd disfuncţia organelor respective. Au o compoziţie în amino-acizi
asemă nă toare cu a fibrelor de colagen.
Fibrele elastice sunt de trei feluri:
- oxitalanice,
- de elaunină
- elastice propiu-zise.(Fig.8.7)
Fibrele de reticulină se caracterizează printr-un diametru mai redus (între 0,5 şi 2 m),
apă râ nd foarte subţiri. Nu sunt grupate în fascicule, dar sunt ramificate şi formează reţele,
în mod frecvent. Pot fi observate în contrast de fază şi în microscopul de polarizaţie, după
colorare cu roşu Sirius. Pe preparatele fixate, se colorează ca şi cele de colagen (cu
albastru de anilină ). Fiind fibre argirofile, se pot evidenţia în condiţii bune cu să ruri de
argint. Datorită conţinutului mai mare în glicoproteine, fibrele de reticulină sunt PAS-
pozitive. Astfel, hexozele sunt în procent de 6-12% în fibrele de reticulină , faţă de 1% în
fibrele de colagen.
Fibrele de reticulină conţin, în principal, molecule de colagen de tip III, asociat cu
glicoproteine, proteoglicani şi alte tipuri de colagen. La microscopul electronic apar
formate din fibrile groase de 35 nm, strâ ns împachetate şi legate între ele prin punţi de
proteoglicani şi glicoproteine. Fibrele de reticulină iau naştere, ca şi celelalte două tipuri
de fibre conjunctive, în fibroblaste, unde are loc sinteza de molecule de colagen tip III, ce
vor fi exocitate şi polimerizate extracelular.
Sunt ră spâ ndite în: muşchii netezei, în ţesuturile hematopoetice şi limfopoetice
(mă duva osoasă , splină şi organele limfoide), în jurul capilarelor, în membranele bazale,
în glandele endocrine, în ficat, în rinichi, iar,în condiţii patologice, apar în ţesuturi după
lezionă ri.Diametru redus şi dispunerea în reţea laxă şi flexibilă a fibrelor reticulare
permite modifică ri de formă şi volum a unor organe,precum splina, ficatul, arteerele,
musculatura uterină şi intestinală . În cursul embriogenezei, în procesele inflamatorii şi de
cicatrizare, firbrele de reticulină pot fi înlocuite de fibre de colagen.
8.3Substanţa fundamentală a matricei extracelulare.
Substanţa fundamentală , interfibrilară sau intercelulară , apare amorfă , incoloră ,
transparentă , omogenă şi vâ scoasă . Din punct de vedere chimic, conţine diferite molecule
de glicozaminoglicani, de obicei legaţi covalent de o proteină , formâ nd proteoglicani şi
proteine fibroase, care sunt de două feluri: structurale (colagen, elastină ) şi
glicoproteine structurale adezive (fibronectina şi laminina).
8.3.1.Glicozaminoglicanii
Etape Faze
PERIOADE
Gametogeneza multiplicare
creştere
maturare
Fecundaţia apropiere
penetrare
amfimixie
Dezvoltarea morulă
intramaternală Embriogeneza blastulă
(preeclozionala) (segmentaţia) gastrulă
Histogeneza Neurulă
(formarea ţesuturilor)
Organogeneza
Dezvoltarea fetală
(preeclozională)
Dezvoltarea Postnatală (posteclozională)
postpartum Tinereţe
(posteclozională) Maturitate
Imbătrânire
În cazul mamiferelor, unele din aceste faze sunt parcurse în organismul matern, alcă tuind
dezvoltarea intrauterină , ce cuprinde: fecundaţia, segmentarea, gastrularea, histogeneza şi
organogeneza.
Dezvoltarea intrauterină (genesis praenatalis) se continuă dupa actul parturiţiei
(parturitio), în afara organismului matern cu o perioada denumita extrauterină sau
postnatală .
În cazul pă să rilor, perioada dezvoltă rii în organismul matern este înlocuită ,
aproape în totalitatea sa (exceptâ nd fecundatia) de perioada dezvoltă rii în ou, iar după
ecloziune se continua cu o perioada posteclozionala.
Fig.9.1. Formarea şi evoluţia gameţilor în cursul unei generaţii
1- Ovul; 2-Spermatozoid; 3-Zigot; 4 – Celule somatice; 5- Celulă
sexuală primordială; 6- Gonocite; 7- Ovogonii; 8- Ovocit I, 9- Ovocit
II; 10- Globuli polari; 11- Ovocit matur; 12- Spermatogonii; 13-
Spermatocit I, 14- Spermatocit II; 15- Spermatidă.
9.1. Gametogeneza
Fig.9.3. Spermatogeneza
I-Perioada germinativă; II-Perioada de creştere;
III-Perioda de maturare.
1-Gonocit; 2- Spermatogonii;3-Spermatocit I;
4-Spermatocit II; 5-Spermatide; 6-Spermatozoizi
Spermatidele (spermatidium,a) parcurg o metamorfoză celulară , denumită
spermiogeneza (spermiogenesis) , fiecare spermatidă devenind un spermatozoid
(spermatozoon s. spermium).
Spermiogeneza are loc în că ile genitale intratesticulare.
Spermatida apare ca o celula poliedrică , în citoplasma careia se gă seşte un
nucleol situat central. Complexul Golgi şi mitocondriile sunt dezvoltate, iar centrul
celular este reprezentat de doi centrioli. Elementele reticulului endoplasmic neted sunt
numeroase şi asociate cu lipide. Enzimele hidrolitice sunt active.
Transformarea spermatidei în spermatozoid, spermiogeneza, se realizează în
patru perioade succesive: a) perioada Golgi; b) perioada cap; c) perioada acrozom; d)
perioada de maturare. (Fig.9.4)
Capul spermatozoidului
c) Piesa principală apare de aproximativ 9 ori mai lungă decâ t piesa intermediară .
Cuprinde: 1. - filamentul axial (axonema), format din cele 10 perechi (9+1) de microtubuli ;
2. – nouă fibre dense (fibra densa) externe, groase; 3. - teaca fibroasă (vagina fibrosa)
formată din fibre circumferenţiale (costa fibrosa), care se prind prin capetele lor în două
coloane longitudinale (columna longitudinalis) ce reprezintă îngroşă ri ale tecii, diametral
opuse; 4. - membrana plasmatică .
d) Piesa terminală (pars terminalis), cu o lungime de 3-4 m cuprinde numai
membrana plasmatică şi complexul filamentos axial (axonema), care îsi pierde aranjarea
tipică a dubletelor.
Ciclul spermatogenetic (spermatogenesis) are o durată variabilă la diverse specii
(13,5 zile la taur, 10,4 la berbec, 8 zile la vier), iar dintr-o spermatogonie rezultă un
numar variabil de spermatide (112 la şoarece, 96 la hamster şi 64 la taur şi berbec).
Desfă şurarea spermatogenezei este influenţată de numeroşi factori fizici,
fiziologici, farmacologici, umorali. Astfel, temperatura ridicată , aplicată local sau în
condiţii generale produce oligospermie, iar razele X şi gama atacă spermatogoniile si
cromozomii spermatidelor. Alimentaţia deficitară în proteine sau vitamine (A, E), unii
hormoni (FSH, LH) şi sistemul nervos pot interveni, modificâ nd funcţia spermatogenetică .
Pentru a-si îndeplini functia de reproducere, spermatozoizii trebuie să prezinte:
mobilitate, putere fecundantă şi vitalitate.
Mobilitatea se datorează prezenţei tubulilor în organizarea flagelului (cozii)
spermatozoidului. Suprimarea mobilitaţii împiedică , în mod ireversibil fecundaţia. Viteza
de deplasare diferă în funcţie de specie, atingâ nd: 6-7 mm/minut la taur; 5-10 mm/minut
la berbec; 4-6 mm/minut la armasar; 3-6 mm/minut la vier.
Puterea fecundanta sau capacitatea vitală (capacitaţia) este o însuşire pe care
spermatozoizii o dobâ ndesc câ nd ajung în că ile genitale femele, după o perioadă de
aclimatizare. Această însuşire se dobâ ndeşte prin pierderea unei calită ţi antagoniste
(decapacitaţia) pe care spermatozoizii o folosesc ca protecţie în drumul lor prin că ile
genitale mascule. Ea permite spermatozoidului să pă trundă în ovul sau în mucoasa
uterină .
Vitalitatea este proprietatea spermatozoizilor de a-şi pă stra mobilitatea şi
puterea fecundantă în condiţii de conservare.
9.1.2. Ovogeneza
Fig.9.7. Ovogeneza
1- Ovogonie; 2- Ovocit I; 3- Ovocit II; 4- Primul globul polar; 5-
Spermatozoid; 6_ Ovul matur; 7- Globuli polari secundari.
Dehiscenţa (ruperea) foliculară şi eliberarea ovocitelor are loc în momentul în
care ovocitul primar (ovocitul de ordinul I) îsi formează fusul de diviziune, intrâ nd în
prima diviziune de maturare (meiotica), încâ t pavilionul oviductului captează deja
ovocitul secundar (ovocitul de ordinul II). Posibilită ţile de supravieţuire ale ovocitului
secundar (ovocitul de ordinul II) sunt de 24-48 de ore, iar a două diviziune de maturare se
finalizează numai dacă a avut loc penetraţia zonei pelucide de că tre spermatozoizi. În caz
contrar, ovocitul secundar (de ordinul II) ră mâ ne blocat în metafaza celei de-a doua
diviziuni de maturare.
În momentul dehiscenţei, ovocitul secundar (ovocitul de ordinul II) este
înconjurat de ovolemă , zona pelucida şi coroana radiata.
Ovolema (ovolema sau membrana vitelină ) este o membrana citoplasmatică cu
numeroşi microvili.
Zona pelucidă (zona pellucida) este o zonă mucopoliglucidică , traversată de
microvili lungi ai celulelor foliculare, ce ajung la microvilii ovolemei.
Coroana radiata (corona radiata) este formată din 1-2 râ nduri de celule
foliculare.
9.1.2.1. Morfologia ovulei
Ovula sau ovocitul matur (ovum) reprezintă celula sexuală femelă matură ,
haploidă , cu o formă sferică şi cu un diametru de pâ nă la 200 m. Conţine, pe lâ ngă
materialul genetic inclus în cromozomi şi material nutritiv necesar pentru perioada
iniţială de dezvoltare a embrionului.
a) Nucleul celulei apare sferic, veziculos, nucleolat, cu cromatina fin granulară ,
situat central sau excentric şi delimitat de o membrană dublă cu pori, în al că ror lumen
este prezent un material electronodens, ce intervine selectiv în reglarea tranzitului
nucleo-citoplasmatic. Prin porii membranei nucleare trec în citoplasmă granule
electronodense de 350Å .(Fig.9. 8)
9.2.FECUNDAŢIA
9.3.1.Segmentaţia la amfioxus
Moleculele adezivită ţii celulare activează selectiv în cursul desfă şură rii
proceselor dinamice care au loc, modificâ nd comportamentul celulelor angajate în
mişcari morfogenetice. Ele au fost identificate sau izolate prin metode ale
imunologiei şi au fost definite după celulele pe care au fost depistate, astfel, existâ nd:
molecule de adezivitate interneuronale ( N-CAM ), molecule ale adezivitatii celulelor
hepatice ( L-CAM ) şi molecule ale adezivitatii dintre neuron şi nevroglie ( NG-CAM ).
Ele sunt glicoproteine, iar N-CAM conţin cantitţti foarte mari de acid sialic. N-CAM, L-
CAM si NG-CAM nu au specificitate încrucişată , deoarece nu se leagă între ele pentru
a media adezivitatea dintre celule.
În funcţie de repartiţia moleculelor adezivită ţii celulare (CAM), embriologii
au conceput hă rti ce indică ţesuturile şi structurile care se vor forma din fiecare
regiune. Astfel, regiunile blastocistului care exprimă N-CAM vor da naştere plă cii
neurale, notocordului şi somitelor, iar cele care exprimă L-CAM vor genera
ectodermul non-neural şi endodermul. Cu ajutorul metodelor de imunofluorescenţă
s-a observat că 2/3 din suprafaţa blastomerului este pozitivă pentru cele două tipuri
de molecule ale adezivită ţii.
Datorită oului, care este de tip telolecit, segmentaţia este meroblastică sau
parţială , iar după aspectul să u este polară sau discoidală .
La pă sări, celula sexuală femelă matură (sau ovulul) este reprezentat
numai de gă lbenuş. Nucleul ovulei este situat la polul animal al gă lbenuşului, fiind
înconjurat de o cantitate redusă de citoplasmă activă (sau vitelus formativ)
împreună cu care alcă tuieşte o formaţiune discoidală , denumită discgerminativ
(cicatricula) sau pată germinativă (nucleul Pander). Numai discul germinativ va
intra în segmentaţie.
Restul ovoplasmei este format din vitelus alb formativ (ce conţine granule mici, cu
compoziţie predominant proteică – 43%) şi din vitelus galben nutritiv, ce cuprinde
granule mari, formate în principal din lipide şi proteine, în cantitate mai redusă
(28%).
Depunerea vitelusului începe de sub discul germinativ, cu un strat de
vitelus alb care se prelungeşte spre centrul oului cu o formaţiune cu aspect de limbă
de clopot, denumită latebra Purkinje. În afara acestui vitelus alb se se dispune un
strat de vitelus galben, iar în continuare are loc o dispunere a celor două tipuri de
vitelus în straturi concentrice alternative. La periferie, oul este învelit de o
membrană vitelină (de ovolemă). (Fig.9.17)
Fig. 9.21. Secţiune transversală prin prelungirea cefalică a liniei primare la găină
1-Ectoblast; 2- Endoblast;
3-Mezoblast;
4-Prelungire cefalică
Gastrulaţia
Vezicula vitelină sau sacul vitelin (saccus vitellinus) este anexă embrionară care
derivă din endoderm, după ce acesta înlocuieşte hipoblastul. Este despă rţită de
trofoblast prin lecitocel sau blastocel. Ocupă o parte din spaţiul cavitată ţii
lecitocelice care, odată cu încurbarea embrionului (sau a ariei embrionare) se
împarte în două compartimente: - un compartiment cuprins în corpul embrionului,
reprezentâ nd intestinul primitiv (enteron primitivum) că ptuşit de endoderm; şi - un
compartiment mai spaţios, situat extraembrionar, care va forma vezicula ombilicală ,
că ptuşită de endodermul extraembrionar, ce delimitează cavitatea vitelină (cavum
vitellinum). Comunică cu intestinul embrionar prin canalul ombilical (vitelin)
(ductus pedunculi vitellini), care stră bate pedunculul vitelin (pedunculus vitellinus),
Peretele vezicii viteline este format din două straturi: unul intern, format
de celulelele endodermale ( care au înlocuit hipoblastul) şi altul extern format din
splanchnopleură (din mezoderm extraembrionar). Aici celulele mezenchimale se se
grupează şi formează insule sanguine (hemato- şi vasculo-formatoare).
În etapa timpurie a embriogenezei îndeplineşte rolul de organ vasculo şi
hematoformator, precum şi de rezervor de substanţe nutritive, regresâ nd ulterior
9.4.2. Amniosul
9.4.5.Corionul
La pă să ri, sacul vitelin (vezicula vitelină ) are o importanţă mult mai mare
decâ t la mamifere, deoarece ovula este de tip telolecit. Este prima anexă embrionară
care se organizează ( din ziua a treia de incubaţie). În ziua a 5-a de incubaţie,
vitelusul conţinut în vezicula ombilicală este acoperit în întregime de endodermul şi
mezodermul extraembrionar, încâ t peretele sacului vitelin este structurat din
endoderm, membrana vitelină şi mezoderm.
În mezodermul sacului vitelin se formează insulele sanguino- şi vasculo-formatoare
(Wolff şi Pander), din care iau naştere celulele sanguine şi vasele primei circulaţii
embrionare (circulaţia omfalomezenterică ). Această reţea vasculară transportă
substanţele absorbite de că tre endodermul vitelin, care prezintă vilozită ţi. Rezorbţia
vitelusului continuă şi în primele zile după ecloziune. Tot prin reţeaua vasculară se
realizează transferul pasiv al anticorpilor maternali existenţi în vitelus, precum şi al
unor proteine virale sau virusuri. Acest fapt permite transmiterea pe verticală
(transembrionară ) a unor infecţii şi vaccinarea “in ovo” , aplicată pentru
imunoprofilaxia unor boli ( Boala Marek, bursita infecţioasă aviară ).
Sacul vitelin este complet dezvoltat după 5-6 zile de incubaţie şi comunică cu
intestinul embrionului prin canalul vitelin (ductus vitellinus), fă ră ca vitelusul să
treacă prin acest canal în intestin. Vestigiile canalului vitelin persistă sub forma
diverticulului vitelin ( diverticulum intestinale jejuni) sau a tubercului Meckel, care
prezintă o structură (cu patru tunici), asemă nă toare peretelui intestinal, şi o
populaţie limfocitară şi plasmocitară bogată , încât este considerat organ limfoid
secundar.
Sacul vitelin îndeplineşte mai multe roluri, precum:-absorbţia din vitelus a
substanţelor nutritive şi plastice, necesare dezvoltarii embrionului pâ nă la
ecloziune; - organizează reţeaua de capilare omfalomezenterice; - produce primele
celule sanguine; - are funcţie de apărare imună locală şi generală .
Amniosul se formează de timpuriu (din a doua zi de incubaţie),prin
plicaturare, fiind complet închis în ziua a treia (la gă ină ) sau a patra (la curcă şi la
gâ scă ) de incubaţie. Peretele amniosului este format din două straturi:- un strat
intern, orientat că tre embrion, reprezentat de ectodermul extraembrionar şi altul
extern, reprezentat de mezodermul extraembrionar (respectiv de somatopleură ), în
care vor apare vase de sâ nge şi fibre musculare. Fibrele musculare generează
contracţii ritmice.Amniosul este despă rţit de corion printr un spaţiu denumit
cavitate celomică extraembrionară (celoma extraembryonicum).
Ectodermul amniosului secretă lichidul amniotic (liquor amnioticus) care
umple cavitate amniotică (cavum amnii). În acest lichid se acumulează uraţi,
produşi de rinichiul embrionar, fulgi şi secreţii ale glandelor din cavitatea bucală şi
tractusul respirator. Din ziua a 5-a de incubaţie, lichidul amniotic este înghiţit de
pui.
Amniosul şi lichidul amniotic asigură : -protecţia mecanică ; libertate de
mişcare pentru embrion; -nutriţia embrionului cu albuş, care este transferat din
sacul cu albuş (albumen) – delimitat de corion – într un canal sero amniotic şi
înghiţit de embrion;-asigură necesarul de apă ; detoxifică embrionul de uraţi şi
să ruri minerale; stimulează funcţiile de deglutiţie şi respiraţie.
. După 11 zile de incubaţie, amniosul începe să regreseze, se atrofiază şi dispare.