Sunteți pe pagina 1din 234

GENETIC

ISTORIA GENETICII
Aparia geneticii ca tiin este asociat cu anul 1900, cnd germanul Carl
Correns, olandezul Hugo de Vries i austriacul Emil Tschermak au
confirmat, n mod independent, rezultatele publicate n anul 1866 de
Gregor Johann Mendel (un clugr Augustinian) n Lucrrile Societii
de Istorie Natural din Brno. Circulaia limitat a acestei publicaii
periodice este considerat ca fiind, pe lng alte circumstane, unul dintre
motivele neglijrii rezultatelor lucrrilor de hibridare realizate de Mendel
ntr-un interval de 8 ani, dei acestea fuseser aduse de el nsui la
cunotiina unora dintre cei mai faimoi biologi ai vremii, iar lucrarea sa
fusese expediat la 120 de biblioteci din cele mai importante centre
tiinifice i culturale ale lumii, printre care Paris, Londra, Berlin, Viena,
Praga, Petersburg, New-York, etc. Este general recunoscut faptul c, n
acum clasicul referat de 46 pagini asupra hibridrii la mazre (Versuche
ber Pflanzenhybriden Experine cu hibrizi de plante), Mendel a
interpretat propriile observaii n aproape exact acelai mod n care ar
face-o un genetician modern. Chiar i termenii folosii au fost foarte
asemntori cu cei utilizai n prezent. Totui, el a euat n a-i convinge
contemporanii de valabilitatea descoperirilor referitoare la transmiterea
ereditar a caracterelor de la plantele parentale la hibrizi. De altfel, chiar
dac rezultatele hibridrilor efectuate cu 22 de soiuri diferite de mazre
(Pisum) permiteau demonstrarea matematic clar a modului n care se
motenesc caracterele, Mendel a fost el nsui derutat de datele
contradictorii obinute la unele dintre celelalte 26 de specii folosite de el
n experienele de hibridare (Antirrhinum, Aquilegia, Calceolaria,
Campanula, Carex, Cheiranthus, Cirsium, Dianthus, Ficaria, Geum,
Hieracium, Ipomoea, Linaria, Lychnis, Matthiola, Mirabilis, Phaseolus,
Potentilla, Tropaeolum, Verbascum, Veronica, Viola, Zea, Malus, Prunus,
Pyrus) i, prin urmare, nu a putut s justifice generalizarea concluziilor
sale la toate speciile pe care le-a studiat. Chiar i rezultatele nregistrate
de el n experienele efectuate n paralel cu Phaseolus, au fost foarte
diferite de cele obinute cu Pisum i neconcludente. Trebuie fcut ns
precizarea c Gregor Mendel a fost norocos n alegerea celor 22 de soiuri
de mazre folosite n ncruciri, acestea fiind diferite prin doar unul sau
cteva caractere distincte, a cror ereditate era simpl.
In perioada dintre anul publicrii rezultatelor lui Mendel (1866) i
cel al redescoperirii lor (1900), au fost aduse cteva contribuii importante
5

AUREL POPESCU

la nelegerea ereditii. Alfred Weismann (1885) a sugerat conceptual


posibilitatea separrii a ceea ce este ereditar, de ceea ce nu este,
delimitnd plasma somatic de cea germinativ. Francis Galton, care a
studiat ereditatea uman folosind metodele de statistic, i-a rezumat
concluziile sub forma a dou legi care fac legtura dintre caracteristicile
unui individ i cele ale prinilor si, bunicilor, sau a ascendenilor mai
ndeprtai, dar i cu media populaiei creia i aparine.
In anul 1875, Hertwig i curnd dup aceea Strasburger, Fol i
alii, au descoperit cromozomii n nucleul celular i au studiat diviziunea
acestora. La vremea respectiv erau ns puini cei care au intuit rolul
cromozomilor n ereditate. In anul 1877, Boveri descrie diviziunea
reducional. In primii ani ai secolului al XX-lea, paralelismul dintre
comportamentul cromozomilor i rezultatele lui Mendel a devenit clar
pentru numeroi oameni de tiin angajai n studii de biologie. S-a ajuns
astfel la momentul important din anul 1902, cnd Carl Correns, William
Sutton i Thomas Boveri au formulat teoria cromozomial a ereditii,
pentru care descoperirea de ctre McClung a cromozomilor sexului a
reprezentat o dovad foarte convingtoare.
Dup 1900, relaia stabilit ntre tiina ereditii i citologie a
determinat apariia unui domeniu denumit citogenetic, al crui progres
rapid l-a situat printre aspectele centrale ale biologiei. Genetica constituie
n prezent tiina pe care se fundamenteaz ameliorarea plantelor i
animalelor. Progresele nregistrate n domeniul fascinant al geneticii au de
asemenea un impact considerabil n medicin. Nu n ultimul rnd,
domeniul ingineriei genetice, tiin interdisciplinar de mare
complexitate, se gsete la nceputul celui de al treilea mileniu ntr-o
ascensiune continu i remarcabil. De acest domeniu aflat la graniele
geneticii, biologiei moleculare i microbiologiei, se leag marile sperane
de depire a barierelor genetice care limiteaz posibilitile de ameliorare
a plantelor (n principal) i animalelor, dar i de gsire a unor ci eficiente
de terapie genic uman. Este de altfel relevant predicia fcut de
numeroi oameni de tiin i de unele organisme internaionale, potrivit
creia ingineria genetic, mai degrab dect tiina i ingineria
computerelor, va reprezenta domeniul care va revoluiona umanitatea n
acest mileniu.

GENETIC

1.

LEGILE MENDELIENE ALE EREDITII

Pe baza rezultatele studiilor privind modul de transmitere a


caracterelor de la o generaie la alta, T.A. Knight (1799) i J. Goss (1824)
au sesizat fenomenele de dominan, recesivitate i segregare a
caracterelor. Scopul lucrrilor de hibridare realizate de ei la mazre
(Pisum sativum) nu era ns acela de a nelege modul de transmitere a
caracterelor, ci de a obine descendene din care s poat selecta hibrizi cu
combinaii de caractere mai valoroase dect cele ale plantelor parentale.
Meritul de a nelege i explica mecanismul ereditii i revine ns n
ntregime naturalistului i matematicianului ceh Gregor Johann Mendel,
care a avut ideea genial de a studia statistic segregarea caracterelor
alternative i de a interpreta matematic rezultatele lucrrilor de hibridare.
Gregor Mendel a nceput experienele de hibridare la plante n
anul 1857 i rezultatele obinute au fost publicate 8 ani mai trziu n
Lucrrile Societii de Istorie Natural din Brno. Dintre numeroasele
specii de plante cu care a lucrat (Pisum, Phaseolus, Linaria, Melandrium,
Mirabilis, Zea, Antirrhinum, Tropaeolum, Verbascum, etc.), Mendel a
preferat mazrea (Pisum sativum), plant autogam cu caractere
morfologice distincte, uor de recunoscut.
Rezultatele obinute de Mendel la mazre, avnd la baz
observaiile asupra transmiterii n descenden a unor caractere alternative
simple i neafectate sau foarte slab afectate de condiiile de mediu
(Fig. 1.1), au fost primele n care mecanismul ereditii a fost clar neles.
Acestea au fost sintetizate n cele dou legi ale segregrii i anume:
1) Legea puritii gameilor sau a segregrii factorilor ereditari;
2) Legea segregrii independente a perechilor de caractere.
Legea puritii gameilor
Perechile de caractere studiate de Mendel la mazre au fost cele
privind culoarea (galben sau verde) i forma boabelor (neted sau
zbrcit), culoarea cotiledoanelor (galben sau verde) i a pstilor
(galben sau verde), tria pstilor (tari sau moi) dispoziia florilor pe
tulpin (terminal sau axilar), mrimea plantelor (nalte sau pitice).
In cazul hibridrilor ntre mazrea cu bobul galben i mazrea cu
bobul verde, Mendel a obinut n prima generaie numai plante cu boabe
galbene. Acest caracter a fost denumit dominant, iar caracterul bob
7

AUREL POPESCU

verde, care nu a aprut n prima generaie, a fost denumit recesiv. Prin


autopolenizarea plantelor din prima generaie (F1), au fost obinute n
generaia a doua (F2) att plante cu boabe galbene, ct i plante cu boabe
verzi (Fig. 1.2), raportul dintre caracterul dominant i cel recesiv fiind de
aproximativ 3:1.

Fig. 1.1. Pisum sativum specia aleas de Mendel pentru studiul


transmiterii caracterelor de la o generaie la alta.
Mendel a explicat segregarea celor dou caractere studiate (bob
galben i bob verde), ca fiind datorat prezenei n celule a dou tipuri de
factori ereditari, notate A i a, plantele din soiul cu boabe galbene
coninnd exclusiv factorul ereditar care determin acest caracter (AA),
iar cele din soiul cu boabe verzi coninnd exclusiv factorul ereditar al
caracterului respectiv (aa). La hibrizii din prima generaie, factorii
ereditari ai soiurilor parentale se altur (Aa), iar atunci cnd aceste plante
8

GENETIC

formeaz gamei, factorii ereditari se separ, fiecare gamet purtnd un


singur tip de factor ereditar (A sau a). Prin urmare, gameii sunt puri din
punct de vedere genetic. Prin unirea acestor gamei n procesul fecundrii,
pe baz de probabilitate, se obin plantele generaiei a doua, unele
prezentnd caracterul bob galben i altele prezentnd caracterul bob
verde, n urmtoarea proporie:
a) 25% plante cu boabe galbene, posednd un singur tip de
factori ereditari (AA), deci pure din punct de vedere al
factorilor ereditari;
b) 25% plante cu boabe verzi, posednd exclusiv cellalt tip de
factor ereditar (aa), deci de asemenea pure;
c) 50% plante cu boabe galbene, ns posednd ambii factori
ereditari implicai n determinarea formei bobului (Aa).
Rezultate similare au fost obinute de Mendel i pentru alte
perechi de caractere (Tabel 1.1).
Tabel 1.1 Rezultatele ncrucirilor ntre diferite soiuri de mazre
Insuirea
Forma boabelor
Culoarea cojii boabelor
Consistena pstilor
Culoarea pstilor
Dispoziia florilor
Mrimea plantei

Caractere*
D
neted
colorat
tare
verde
axilar
nalt

r
zbrcit
alb
moale
galben
terminal
pitic

D
5.474
705
882
428
651
787

r
1.850
224
299
152
207
277

Raport
D/r
2,9890 : 1,0104
3,0355 : 0,9645
2,9873 : 1,0127
2,9517 : 1,0483
3,0349 : 0,9651
2,9586 : 1,0414

* D = dominant; r = recesiv

O dovad a corectitudinii interpretrii rezultatelor sale a fost


furnizat de distribuia caracterului boabe galbene/boabe verzi la plantele
din generaia a treia (F3). Astfel, conform ateptrilor, 1/3 din boabele
galbene obinute n F2 au dat plante pure, n timp ce 2/3 din acestea au
segregat n acelai mod ca hibrizii F1.
Rezultatele lucrrilor de hibridare efectuate de numeroi ali
naturaliti la nceputul secolului al XX-lea, curnd dup redescoperirea
legilor Mendeliene, au confirmat segregarea caracterelor n descenden.
In Tabelul 1.2 sunt prezentate rezultatele referitoare la segregarea n F 2 a
9

AUREL POPESCU

culorii boabelor de mazre, care au demonstrat valabilitatea general a


descoperirilor lui Mendel.
Segregarea este produs de separarea perechii de factori ereditari,
cauzat de disjuncia cromozomilor pereche n procesul meiozei, gameii
purtnd ntotdeauna un singur factor ereditar dintr-o pereche. In timp ce
organismele pot fi pure sau impure din punct de vedere genetic, deoarece
pot conine o pereche de factori ereditari identici sau diferii, gameii nu
pot fi dect puri din punct de vedere genetic. In consecin, aceast prim
lege a lui Mendel se mai numete i legea puritii gameilor, general
valabil la plante i animale.
Tabel 1.2 Segregarea n F2 a culorii boabelor la mazre.
Referina
Mendel (1865)
Correns (1900)
Tschermak (1900)
Hurst (1904)
Bateson i colab. (1905)
Lock (1905)
Darbishire (1909)

Boabe galbene
6.022
1.394
3.580
1.310
11.903
1.438
109.060

Boabe verzi

Total

Raport

2.001
453
1.190
445
3.903
514
36.186

8.023
1.847
4.770
1.755
15.806
1.952
145.246

3.009 : 1
3.077 : 1
3.009 : 1
2.944 : 1
3.050 : 1
2.798 : 1
3.015 : 1

Fiecare pereche de factori ereditari determinnd caractere


contrastante, care se separ la formarea gameilor, a fost denumit ulterior
pereche de alelomorfe sau pereche de alele. Indivizii n care ambii factori
ai unei perechi sunt identici (fie dominani, fie recesivi) sunt numii
homozigoi. La heterozigoi cele dou alele responsabile de apariia
caracterelor contrastante sunt diferite: n cazurile studiate de Mendel una
era dominant, iar cellalt recesiv. Heterozigoii segreg n fenotipuri
diferite dup disjuncia alelelor n cursul gametogenezei i conjuncia din
timpul fertilizrii. In acest sens, termenii hibrid i heterozigot sunt
echivaleni. Aadar, Mendel a sesizat deosebirea care poate exista ntre
structura genetic a organismelor (genotip) i nfiarea lor (fenotip).
Intruct la organismele heterozigote se exprim numai o parte din factorii
ereditari (alelele dominante), cei recesivi rmnnd ascuni, exist o
deosebire ntre genotipul i fenotipul lor.
Prin autofecundarea generaiei F2 se obine generaia F3, n care,
n cazul perechii de caractere bob galben/bob verde, Mendel a observat
urmtoarea distribuie:
10

GENETIC

a) din plantele pure cu boabe galbene (AA) s-au obinut exclusiv


plante cu boabe galbene;
b) din plantele pure cu boabe verzi (aa) s-au obinut exclusiv
plante cu bobul verde;
c) plantele heterozigote cu bobul galben (Aa) segregau astfel:
25% plante homozigote (AA) cu boabe galbene;
50% plante heterozigote (Aa) cu boabe galbene;
25% plante homozigote (aa) cu boabe verzi.
Aceste rezultate demonstrau clar c plantele heterozigote din
generaia F2 au n generaia F3 un comportament identic cu cel al
hibrizilor din generaia F1.
Polenizarea florilor plantelor hibride din generaia F1 cu polen de
la plantele genitorului cu boabe galbene (rencruciare) avea ca rezultat
obinerea n generaia F2 de plante exclusiv cu boabe galbene (Fig. 1.2),
din care 50% erau homozigote (AA) i 50% heterozigote (Aa). In schimb,
polenizarea florilor plantelor hibride din generaia F1 cu polen de la
plantele genitorului cu boabe verzi, avea ca rezultat formarea a 50%
plante heterozigote (Aa) cu boabe galbene i 50% plante homozigote (aa)
cu boabe verzi.
Ansamblul rezultatelor lucrrilor de hibridare ntre plante care se
deosebeau printr-o singur pereche de caractere (monohibridare) i-a
permis lui Mendel enunarea primei sale legi i anume legea separrii
factorilor ereditari sau legea puritii gameilor. Conform acestei legi,
gameii sunt puri din vedere genetic, coninnd doar unul dintre factorii
ereditari pereche (alele). Prin combinarea probabilistic a acestor gamei
puri, n F2 are loc segregarea caracterelor pereche, ntr-un raport de 3:1
(dominant : recesiv).
Legea segregrii independente a caracterelor
Rezultatele lucrrilor de hibridare realizate ntre plante care se
deosebesc prin dou perechi de caractere (dihibridare) i-au permis lui
Mendel sesizarea segregrii independente a acestora. Astfel, n cazul
hibridrii unui soi de mazre cu boabe netede i de culoare galben, cu un
soi avnd boabe zbrcite i de culoare verde, toate plantele obinute n
generaia F1 au avut boabe netede i de culoare galben (caractere
dominante).

11

AUREL POPESCU

Prini
Fenotipuri
Genotipuri

Gamei
Uniformitate
a genotipurilor
i fenotipurilor

Descendena F1
(dup autofertilizare)
Gamei

Descendena F2

Raportul fenotipic n generaia F2

Descendena F2

Gamei

Descendena:
Raportul fenotipic:
1 neted : 1 zbrcit

Uniformitate
a genotipurilor i
fenotipurilor

Fig. 1.2. Sus: segregarea caracterelor n cazul monohibridrii; Jos:


segregarea n cazul rencrucirii monohibrizilor (dovada heterozigoiei
genotipice) i ncrucirii formelor homozigote (dup Urban, 2013).
12

GENETIC

Prin autofecundarea plantelor din generaia F1 s-au obinut n


generaia F2 o descenden care a segregat n felul urmtor dup forma i
culoarea boabelor:
9/16 plante cu boabe netede i de culoare galben
3/16 plante cu boabe zbrcite i de culoare galben
3/16 plante cu boabe netede i de culoare verde
1/16 plante cu boabe zbrcite i de culoare verde
Mendel a explicat acest mod de segregare prin aceea c hibrizii
din generaia F1, provenii din prini care se deosebesc prin dou perechi
de caractere, formeaz patru tipuri de gamei, n care se afl cte un
singur factor ereditar din fiecare pereche. De altfel, raportul n care
segreg cele dou perechi de caractere (9:3:3:1) reflect ntocmai cele 16
combinaii care rezult din combinarea acestor patru tipuri de gamei
(Tabel 1.3).
Tabel 1.3 Segregarea perechilor de caractere n generaia F 2, n cazul
dihibridrii.

AB*

Ab*

aB*

ab*

AB*

AABB **

AABb **

AaBB **

AaBb **

Ab*

AABb **

AAbb **

AaBb **

Aabb **

AB*

AaBB **

AaBb **

aaBB **

aaBb **

Ab*

AaBb **

Aabb **

aaBb **

aabb **

*
AB = bob neted i galben; Ab = bob neted i verde; aB = bob zbrcit i
galben; ab = bob zbrcit i verde
**
A = bob neted; a = bob zbrcit; B = bob galben; b = bob verde

In cazul trihibridrii, cnd se ncrucieaz organisme care se


deosebesc prin trei perechi de caractere (Aa, Bb, Cc), modul de segregare
este mai complicat dect n cazul dihibridrii. Prin unirea la ntmplare a
gameilor femeli i respectiv masculi din unul dintre cele opt tipuri de
gamei (ABC, ABc, AbC, Abc, aBC, aBc, abC, abc) sunt posibile 64 de
combinaii ale factorilor ereditari (Tabel 1.4), care au ca rezultat apariia a
8 tipuri de organisme:
13

AUREL POPESCU

1. 27/64 cu trei caractere dominante (ABC);


2. 9/64 cu dou caractere dominante i unul recesiv (ABc);
3. 9/64 cu dou caractere dominante i unul recesiv (AbC);
4. 9/64 cu dou caractere dominante i unul recesiv (aBC);
5. 3/64 cu un caracter dominant i dou recesive (Abc);
6. 3/64 cu un caracter dominant i dou recesive (aBc);
7. 3/64 cu un caracter dominant i dou recesive (abC);
8. 1/64 cu trei caractere recesive (abc).
Tabel 1.4. Segregarea perechilor de caractere n generaia F2, n cazul
trihibridrii.

ABC

ABc

AbC

aBC

Abc

aBc

abC

abc

AABBCC
AABBCc
AABbCC
AaBBCC
AABbCc
AaBBCc
AaBbCC
AaBbCc

AABBCc
AABBcc
AABbCc
AaBBCc
AABbcc
AaBBcc
AaBbCc
AaBbcc

AABbCC
AABbCc
AAbbCC
AaBbCC
AAbbCc
AaBbCc
AabbCC
AabbCc

AaBBCC
AaBBCc
AaBbCC
aaBBCC
AaBbCc
aaBBCc
aaBbCC
aaBbCc

AABbCc
AABbcc
AAbbCc
AaBbCc
AAbbcc
AaBbcc
AabbCc
Aabbcc

AaBBCc
AaBBcc
AaBbCc
aaBBCc
AaBbcc
aaBBcc
aaBbCc
aaBbcc

AaBbCC
AaBbCc
AabbCC
aaBbCC
AabbCc
aaBbCc
aabbCC
aabbCc

AaBbCc
AaBbcc
AabbCc
aaBbCc
Aabbcc
aaBbcc
aabbCc
aabbcc

ABC
ABc
AbC
aBC
Abc
aBc
abC
abc

Prin urmare, este evident independena ereditii perechilor de


caractere. De altfel, este uor de observat c dac n exemplul de mai sus
se analizeaz segregarea perechii de caractere bob neted/bob zbrcit
separat de perechea de caractere bob galben/bob verde, se obine acelai
raport de segregare de 3:1 ca n cazul monohibridrii. In mod similar,
dac se analizeaz segregarea culorii bobului (galben/verde) fr s se
in seama de forma bobului (neted sau zbrcit), se obine raportul de
segregare de 3:1.
Ansamblul rezultatelor obinute de Gregor Mendel n urma
experienelor de hibridare n care au fost folosite soiuri de mazre care
se deosebeau ntre ele prin trei pn la apte perechi de caractere, i-au
permis enunarea celei de a doua legi a transmiterii n descenden a
factorilor ereditari: legea segregrii independente a perechilor de
caractere. Conform acestei legi, factorii ereditari pereche (alele) segreg
independent de ali factori ereditari i prin combinarea lor pe baz de
probabilitate rezult un raport de segregare n F2 de 3:1 (dominant/
recesiv). Pentru c a fost descoperit la mazre, acest tip de segregare
a caracterelor a fost denumit segregare de tip Pisum. Principala
14

GENETIC

caracteristic a acestui tip de segregare este aceea c n F 2 heterozigoii


de tip Aa sunt identici fenotipic cu homozigoii AA (Aa = AA). In alte
cazuri, organismele heterozigote de tip Aa prezint caractere intermediare
ntre genitori, diferite fenotipic de cele ale homozigoilor AA (Aa AA).
Un astfel de caz a fost descoperit la porumb, unde raportul de segregare n
F2 este de tip 1:2:1, i a stat la baza denumirii acestui mod de segregare a
factorilor ereditari ca fiind segregare de tip Zea.
Modul de segregare n F2 a perechilor de factori ereditari poate fi
stabilit prin calcul matematic pentru orice numr de perechi de caractere
(Tabel 1.5).
Hibridarea ntre organisme ce se deosebesc prin dou sau mai
multe perechi de factori ereditari are ca rezultat apariia n descenden a
unor indivizi recombinai genetic, prezentnd combinaii ale caracterelor
ambilor prini (genitori). Frecvena recombinrilor se poate calcula prin
efectuarea de ncruciri ntre organismele dublu heterozigote din F1.
Tabel 1.5 Segregarea n generaia F2, n cazul unui numr variat de
perechi de factori ereditari.
Numrul
de perechi
de factori
ereditari
1
2
3
4
10
n

Numrul
de tipuri
de gamei
n F1
21 =
2
22 =
4
23 =
8
24 = 16
210 = 1024
2n = (2n)2

Numrul
de combinaii
n F2
(21)2 = 4
(22 )2 = 16
(23)2 = 64
(24 )2 = 256
(210)2 = 1048576
(2n)2 = (2n)2

Numrul
de genotipuri
n F2
31
32
33
34
310
3n

=
3
=
9
=
27
=
81
= 59049

Numrul
de
fenotipuri
n F2
21 =
2
22 =
4
23 =
8
24 = 16
210 = 1024
2n = (2n)2

Repartiia
combinaiilor
pe tipuri de
organisme n F2
3:1
9:3:3:1
27:9:9:9:3:3:3:1
(3+1)4
(3+1)10
(3+1)n

In cazul prezentat anterior, prin hibridarea ntre plantele


prezentnd dou caractere dominante (AB/AB) i cele care prezint dou
caractere recesive (ab/ab), se vor obine n generaia F1 exclusiv plante de
tipul AB/ab. Intruct ambii genitori produc patru tipuri de gamei (AB, Ab,
aB, ab), din care dou parentale i dou recombinate, prin ncruciarea
ntre hibrizii F1 va fi posibil calculul procentului de recombinare a
factorilor ereditari. Astfel, dac se noteaz cu p procentul de recombinare,
nseamn c gameii recombinai Ab i aB vor apare fiecare cu o frecven
de p/2, iar gameii nerecombinai cu frecvena (1-p)/2. Pe aceast baz se
poate calcula frecvena celor patru tipuri de descendeni i respectiv a
recombinrii genetice (Tabel 1.6).
15

AUREL POPESCU

Tabel 1.6 Calculul frecvenei indivizilor recombinai genetic n F1.

(1-p)/2 AB
p/2 Ab
p/2 aB

(1-p)/2 ab

(1-p)/2 AB

p/2 Ab

p/2 aB

(1-p)/2 ab

(1-p)2/4
AABB
p(1-p)/4
AABb
p(1-p)/4
AaBB

P(1-p)/4
AABb
p2/4
AAbb
p2/4
AaBb

p(1-p)/4
AaBB
p2/4
AaBb
p2/4
aaBB

(1-p)2/4
AaBb
p(1-p)/4
Aabb
p(1-p)/4
aaBb

(1-p)2/4
AaBb

p(1-p)/4
Aabb

p(1-p)/4
aaBb

(1-p)2/4
aabb

innd seama de dominana i recesivitatea caracterelor, cu


ajutorul acestui tabel poate fi calculat frecvena diferitelor fenotipuri.
Este aadar evident faptul c fenotipurile Ab i respectiv aB vor
avea aceeai frecven: p(2-p)/4. Fenotipul nerecombinat dublu recesiv va
avea o frecven egal cu (1-p)2/4, iar cel dublu dominant va avea o
frecven egal cu diferena pn la 100%.
Dac frecvena recombinrii este de exemplu de 20% (sau p =
0.2), se poate calcula uor proporia fenotipurilor parentale i
recombinate:
Fenotipul AB = (3 - 2p + p2) / 4 = (3 - 0.4 + 0.04) / 4 = 2.64 / 4 = 0.66
(sau 66%)
Fenotipul ab = (1 - p)2 / 4 = (1 - 0.2)2 / 4 = 0.82 / 4 = 0.64 / 4 = 0.16
(sau 16%)
Fenotipul Ab = p (2 - p) / 4 = 0.2 (2 - 0.2) / 4 = 0.2 x 1.8 / 4 = 0.36 / 4 =
0.09 (sau 9%)

Modificri ale Raportului Mendelian de Segregare

16

GENETIC

Unele tipuri de segregare nu pot fi explicate prin modelele simple


propuse de G. Mendel pe baza rezultatelor sale. Aceste tipuri de segregare
non-Mendelian sunt n prezent incluse n dou grupuri: primul include
cazurile n care sunt implicate relaii speciale ntre gene, sau alternativ,
viabilitatea sczut sau letalitatea, care tind s reduc sau s elimine unele
dintre clasele de segregare i care determin abateri (excepii) aparente
de la ereditatea de tip Mendelian i respectiv abateri de la rapoartele
simple de segregare Mendelian; cel de al doilea include cazurile n care
sunt implicate variate anomalii ale meiozei, sau particulariti ale
comportamentului gameilor i care determin abateri (excepii) reale de
la ereditatea de tip Mendelian, respectiv abateri reale de la raporturile
Mendeliene de segregare a caracterelor.
Abateri Aparente de la Raporturile Mendeliene de Segregare
Unele dintre abaterile de la raporturile de segregare de tipul 3:1,
9:3:3:1, etc., obinute de Gregor Mendel sunt numai aparente, formarea
genotipurilor i fenotipurilor care reprezint abateri putnd fi explicat
n mod mendelian folosind tabelele de combinaii. Modificarea raportului
de segregare mendelian este de asemenea aparent n cazul analizei
transmiterii n descenden a unor caractere influenate de aciunea
genelor letale, care determin moartea descendenilor cu un anumit
genotip.
Dominana incomplet
In cazul dominanei complete, organismele heterozigote (Aa)
prezint acelai fenotip cu cele homozigote (AA). In unele cazuri ns,
fenotipul organismelor ce conin genele alele n stare heterozigot se
deosebete de cel al organismelor ce conin genele respective n stare
homozigot (Aa AA). Acest fenomen a fost sesizat pentru prima dat de
Carl Correns (1912) la planta Mirabilis jalapa i este cunoscut n prezent
sub denumirea de dominan incomplet.
La specia mai sus menionat exist varieti cu flori roii i
varieti cu flori albe. Prin ncruciarea acestora s-au obinut n generaia
F1 exclusiv plante cu flori roz, iar n generaia F 2 segregarea s-a produs
astfel: 25% plante cu flori roii, 50% plante cu flori roz i 25% plante cu
flori albe (Fig. 1.3). Plantele heterozigote prezint aadar flori de culoare
intermediar ntre genitori datorit fenomenului de dominan incomplet.
17

AUREL POPESCU

Fig. 1.3. Segregarea culorii florilor n cazul dominanei incomplete.


Un fenomen similar a fost sesizat la specia Zea mays, la care din
ncruciarea unei varieti cu boabe albastre cu o varietate cu boabe
galbene au rezultat n F1 plante cu boabe violete, culoare intermediar
ntre genitori. In F2 s-a produs segregarea n raportul de 1 albastru : 2
violet : 1 galben. Acest tip de segregare (1:2:1) n care organismele
heterozigote prezint fenomenul de dominan incomplet, este cunoscut
sub denumirea de segregare de tip Zea, deosebit de segregarea de tip
Pisum (3:1) observat de Mendel.
Dominana incomplet poate fi prezent i la organismele animale.
Un exemplu bine cunoscut este acela al ginilor de Andaluzia, care au
penajul de culoare albstruie. Acestea provin din ncruciarea unei rase de
gini cu penajul negru, cu o ras cu penajul alb. In prima generaie toate
psrile au penajul albstrui, iar n F 2 se produce segregarea astfel: 25%
descendeni cu penaj negru, 50% cu penaj albstrui i 25% cu penaj alb.
Acest model de segregare constituie o dovad a faptului c ginile de
Andaluzia cu penajul albstrui sunt heterozigote, i totodat o explicaie a
segregrii lor continue n generaiile succesive. Acesta este de altfel
motivul pentru care nu s-a putut crea o ras de gini de Andaluzia.
Codominana
18

GENETIC

In cazul fenomenului de codominan, organismele heterozigote


prezint ambele gene n stare funcional, dei ele pot funciona cu
eficien diferit. Aceasta nseamn c ambele gene ale unui locus
contribuie la expresia fenotipic a heterozigotului.
Un exemplu clasic de codominan este cel al ereditii grupelor
sanguine de tip AB0 (Tabel 1.7), determinat de 3 gene alele notate IA, IB
i i. Grupurile sanguine A i B pot fi, din punct de vedere genetic,
homozigote (IAIA, respectiv IBIB) sau heterozigote (IAi, respectiv IBi).
Grupul sanguin O este ntotdeauna homozigot recesiv (ii).
Tabel 1.7. Ereditatea tipurilor (grupelor) sanguine la om (alelele IA i IB
sunt codominante).
Tipul sanguin

Genotipul

IAIA sau IAi

IBIB sau IBi

AB

IAIB

ii

Prezena pe perechea de cromozomi 9 (n locusul AB0) a genelor


I i I determin un nou grup sanguin, respectiv AB, ca o consecin a
faptului c nici una dintre alele nu este dominant n raport cu cealalt,
adic acestea sunt codominante.
Un alt exemplu de codominan este ntlnit la organismele umane
heterozigote pentru genele ce codific sinteza hemoglobinei. Unele
organisme produc att tipul normal de hemoglobin (HbA), ct i tipul
mutant (HbS), care cauzeaz o maladie a sngelui denumit anemie
falciform sau drepanocitoz. La persoanele heterozigote HbA/HbS,
ambele gene (perechea 11 de cromozomi) de la locusul pentru globina
beta sunt n stare funcional (ccea ce nseamn c ambele sunt transcrise
n ARNm), ns eficiena de funcionare a genei care codific sinteza
hemoglobinei normale este superioar celei a genei mutante, fapt reflectat
de ponderea mai ridicat a hemoglobinei HbA (circa 60%).
Supradominana
A

19

AUREL POPESCU

Uneori, fenotipul organismelor heterozigote nu este intermediar


sau identic, ci superior fenotipurilor genitorilor. Exemple de caractere
pentru care organismele heterozigote pot manifesta supradominana sunt
ritmul de cretere, productivitatea, viabilitatea, etc. Acest fenomen, poate
fi observat att la plante ct i la animale (Fig. 1.4) i determin abateri de
la raporturile Mendeliene de segregare a caracterelor.

Fig. 1.4. Heterozis la un hibrid de porumb (stnga)


i la un hibrid ntre un leu i o tigroaic liger (dreapta).
In apariia supradominanei sunt implicate, cel mai adesea, mai
multe gene cu caracter aditiv. Supradominana st la baza apariiei
heterozis-ului, fenomen cunoscut i sub denumirea de vigoare hibrid i
exploatat pe scar larg n agricultur (de exemplu, la porumb, sfecla de
zahr, spanac, brocoli, floarea soarelui, etc.) i zootehnie (de exemplu, la
animalele crescute pentru producia de carne).
Un exemplu foarte interesant de heterozis este cel al animalelor
hibride ntre Panthera leo i Panthera tigris, cunoscui sub denumirea
liger (Fig. 1.4) i respectiv tigon. Astfel, liger-ul (hibrid ntre un leu i
o tigroaic) este cea mai mare felin de pe glob, ce poate ajunge la o
lungime 3.5 m i o greutate de peste 400 kg, depind cu mult
organismele parentale.
Interaciunea genelor
20

GENETIC

Unul dintre fenomenele care determin modificarea raportului


mendelian de segregare sau chiar apariia la descendeni a unor fenotipuri
ce nu exist la genitori, este acela cunoscut n prezent sub denumirea de
interaciune a genelor. In exemplele prezentate anterior, caracterele
distincte cum sunt culoarea i forma au avut expresie independent.
Totui, toate caracterele sunt n fapt rezultatul unei serii complexe de
reacii biochimice, i multe fenotipuri sunt determinate de expresia alelic
combinat a dou sau mai multe gene. In aceste cazuri, fenotipul produs
de alelele unei gene este influenat de genotip, adic de alte gene.
Influena unei gene asupra expresiei unei gene diferite constituie
epistazia. Interaciunile epistatice dintre gene pot cauza abateri de la
raporturile simple Mendeliene de segregare a caracterelor.
Un tip de interaciune ntre gene diferite afecteaz culoarea florii
la mazre. Cnd se ncrucieaz un soi cu flori colorate cu oricare dintre
dou soiuri diferite cu flori albe, plantele din prima generaie (F1) au flori
colorate n ambele cazuri. Autopolenizarea hibrizilor F1 din fiecare
ncruciare are ca rezultat obinerea generaiei F2, n care 3/4 din plante au
flori colorate i 1/4 au flori albe. Explicai acestor rezultate este aceea c
ambele soiuri cu flori albe sunt homozigote pentru o alel recesiv a
aceleiai gene, caz n care ar fi de ateptat ca prin ncruciarea lor s se
obin n F1 exclusiv plante cu flori albe. Totui, prin ncruciarea celor
dou soiuri cu flori albe se obin n F1 plante cu flori colorate.
Tabel 1.8. Rezultatele ncrucirii ntre dou plante de mazre cu genotip
CcPp (din Nature Education, 2013).

CP
Cp
cP
cp

CP
CCPP
CCPp
CcPP
CcPp

Cp
CCPp
CCpp
CcPp
Ccpp

cP
CcPP
CcPp
ccPP
ccPp

cp
CcPp
Ccpp
ccPp
ccpp

Intr-un experiment, n generaia F2 (obinut prin autopolenizarea


hibrizilor din F1) s-au obinut 382 de plante cu flori colorate i 269 cu
flori albe, ceea ce corespunde unui raport apropiat de 9:7. Att apariia
plantelor cu flori colorate n F1, ct i raportul de 9:7 n F 2 pot fi explicate
prin efectele a dou perechi de gene care se combin independent, n
21

AUREL POPESCU

prezena a cel puin o alel dominant a ambelor gene, necesar pentru


producia de pigment (Tabel 1.8).
Explicaia biochimic a acestui rezultat poate fi ilustrat astfel:

Precursor

Gena C

Gena P

Enzim

Enzim

Compus
intermediar X

Compus
intermediar Y

Antociani

In absena genei C (adic n plantele homozigote cc), va fi produs


o cantitate mic de compus Y, sau acesta nu se va produce, ceea ce va
determina blocarea cii metabolice n acest punct. Compusul Y este
substratul pentru enzima codificat de gena P, care catalizeaz conversia
compusului Y ntr-un pigment antocianic. Prin urmare, absena genei P
(n plantele homozigote pp) ar bloca etapa final a sintezei pigmentului.
Relaia dintre cele dou gene deriv din faptul c producia de pigment
necesit ambele enzime, i acestea sunt codificate de alelele dominante
ale genelor.
Anumite gene au capacitatea de a suprima expresia unei gene
existente ntr-un alt locus. Un astfel de exemplu este producia de
malvidin la plantele din genul Primula. Att sinteza acestei substane
(controlat de gena K), ct i suprimarea sintezei (controlat de gena D)
sunt caractere dominante. Plantele din generaia F1 cu genotip KkDd nu
vor produce malvidin din cauza prezenei alelei dominate D (Tabel 1.9).
Tabel 1.9. Rezultatele ncrucirii ntre dou plante de Primula cu genotip
KkDd (din Nature Education, 2013).

KD
Kd
kD
kd

KD
KKDD
KKDd
KkDD
KkDd

Kd
KKDd
KKdd
KkDd
Kkdd

22

kD
KkDD
KkDd
kkDD
kkDd

kd
KkDd
Kkdd
kkDd
Kkdd

GENETIC

Atunci cnd sunt ncruciate plantele din F1, raportul de segregare


va fi de 13 (plante care nu produc malvidin) la 3 (plante care produc
malvidin).
Deoarece aciunea alelei dominante D mascheaz (acoper)
expresia genelor existente la locusul K, aceast interaciune este denumit
epistazie de supresie dominant.
In Tabelul 1.9 toate casetele haurate conin genotipuri ale
plantelor de Primula care nu produc malvidin. In cazul genotipurilor n
care exist cel puin o alel D, prezena alelei sau alelelor D suprim
producerea de malvidin. Plantele cu genotip kkdd nu au producia de
malvidin suprimat, dar nici nu produc aceast substan deoarece
lipsete alela K dominant. Cele trei casete albe conin singurele
genotipuri (KKdd i Kkdd) care permit producerea de malvidin, ceea ce
nseamn c plantele cu aceste genotipuri vor avea flori albastre.

Fig. 1.5. La oareci, culoarea marmorat a blnii (agouti) este dominant


fa de culoarea uniform, cum ar fi cenuie sau neagr. De producerea de
pigment este responsabil o gen separat (C), dintr-un alt locus. Alela
recesiv c nu produce pigment i de aceea un oarece cu genotip recesiv
23

AUREL POPESCU

homozigot (cc) este albino indiferent de alela prezent n locusul A.


Astfel, gena C este epistatic fa de gena A.
Pigmentarea blnii la oareci este un exemplu binecunoscut de
epistazie la animale. Culoarea de tip slbatic a blnii agouti (AA) este
dominant asupra culorii uniforme cenuii sau negre (aa). Totui, pentru
producerea pigmentului este necesar o gen separat (C). Un oarece cu
o alel recesiv c n locusul pentru acest caracter (culoarea blnii) este
incapabil s produc pigment i este albino indiferent de alela prezent n
locusul A (Fig. 1.5). De aceea, genotipurile AAcc, Aacc i aacc vor
produce acelai genotip albino. Incruciarea ntre heterozigoii pentru
ambele gene (AaCc x AaCc) va genera o descenden cu un raport
fenotipic 9:3:4 (Fig. 1.4), respectiv 9 agouti : 3 cenuiu/negru uniform : 4
albino. In acest caz, gena C este epistatic fa de gena A.
Un exemplu clasic de interaciune a genelor la animale a fost
observat la ncruciarea ntre dou rase de gini, ambele cu penaj de
culoare alb: Leghorn i Wyandotte (Tabel 1.10). La rasa Leghorn,
culoarea alb a penajului este dominant n cazul ncrucirii cu o ras cu
penaj colorat (negru, pestri, etc.). Dimpotriv, la rasa Wyandotte
culoarea alb a penajului este recesiv la ncruciarea cu o ras cu penaj
colorat. Aceste observaii reflect determinismul diferit al culorii
penajului la cele dou rase menionate, n sensul implicrii unor gene
diferite, nealele. Acesta este aadar un caz n care dou genotipuri diferite
se exprim fenotipic identic.
Tabel 1.10. Fenomenul de epistazie la gini n cazul ncrucirii raselor
Leghorn i Wyandotte.
Genitori

Leghorn x Wyandotte
CCII (alb)
ccii (alb)

F1

CcIi (alb)

CI

Ci

cI

ci

CCII
Alb
CCIi
Alb
CcII
Alb

CCIi
Alb
CCii
Colorat
CcIi
Alb

CcII
Alb
CcIi
Alb
ccII
Alb

CcIi
Alb
Ccii
Colorat
ccIi
Alb

CI
F2

Ci
cI

24

GENETIC

ci

CcIi
Alb

Ccii
Colorat

ccIi
Alb

ccii
Alb

Se consider c explicaia caracterului dominant al culorii albe


a penajului la ginile Leghorn const n originea genetic a acestei rase,
n sensul c penajul a fost iniial colorat (CC), dar expresia culorii nu mai
este posibil din cauza prezenei unei gene inhibitoare (II), aprut
ulterior n genom. Ca urmare, rasa Leghorn poate fi considerat genetic
CCII, celelalte rase cu penaj alb (Wyandotte, White Plymouth, etc.) fiind
ccii. Dup cum reiese din Tabelul 1.9, n cazul cnd gena inhibitoare se
afl n stare recesiv homozigot (ii), iar gena ce determin culoarea se
afl n stare dominant homozigot (CC) sau heterozigot (Cc), n
generaia F2 apar indivizi cu penaj colorat n raport de 3/16.
Gena I, care mpiedic sau acoper expresia genei C, se numete
gen epistatic, iar gena acoperit de numete gen hipostatic. Este prin
urmare evident faptul c penajul colorat apare numai ca un rezultat al
interaciunii celor dou gene nealele, fenomenul fiind cunoscut sub
denumirea de epistazie.

25

AUREL POPESCU

Fig. 1.6. Tipuri de creast la rasele de gini: trandafir (stnga sus);


mazre (dreapta sus); nuc (stnga jos); simpl (dreapta jos).
Un exemplu interesant de interaciune a genelor, care nu
determin modificarea raportului Mendelian de segregare, ci numai
apariia unor fenotipuri noi, deosebite de cele ale genitorilor, a fost
observat de W. Bateson i R.C. Punnett la ncruciarea ntre rase de gini
cu tipuri diferite de creast (Fig. 1.6). Acest caracter este ereditar, fiind
determinat de dou gene nealele (R i P). La rasa Leghorn, creasta este
de tip simplu, caracter recesiv (rrpp); rasa Brahmas prezint creast de
tip mazre, caracter dominant (rrPP) asupra tipului simplu; la rasa
Wyandotte, creasta este de tip trandafir, caracter de asemenea
dominant (RRpp) asupra tipului simplu.
Din ncruciarea raselor Brahmas i Wyandotte, ambele cu
creasta de tip dominant, caracterele fiind ns determinate de gene
diferite, rezult n F1 un tip nou de creast, n form de nuc (RrPp), iar
n F2 se produce segregarea n urmtorul raport: 9/16 indivizi cu creasta
n form de nuc; 3/16 indivizi cu creasta n form de trandafir; 3/16
indivizi cu creasta n form de mazre; 1/16 indivizi cu creasta simpl.
Acest exemplu demonstreaz n mod concludent c interaciunea
celor dou gene dominante (R i P) determin apariia unui tip nou de
creast (tipul nuc), deosebit de al genitorilor, iar din interaciunea celor
dou gene n stare recesiv (r i p) apare tipul simplu.
In sfrit, epistazia poate fi reciproc, aa nct fiecare dintre gene,
atunci cnd este prezent n form dominant (sau recesiv), exprim
acelai genotip. La traista ciobanului (Capsella bursa-pastoris), forma
seminei este controlat de dou gene aflate n relaie epistatic. Cnd
genele A i B sunt ambele n stare recesiv homozigot (aabb), seminele
sunt ovoide. Dac este prezent alela dominant a oricreia dintre aceste
dou gene, seminele sunt triunghiulare. Aceasta nseamn c orice alt
genotip posibil dect aabb are ca rezultat semine triunghiulare, iar o
ncruciare ntre heterozigoii pentru ambele gene (AaBb x AaBb) ar
genera o descenden cu un raport fenotipic de 15:1, respectiv 15
triunghiular : 1 ovoid.

Polialelia sau alelia multipl


Genele sau factorii ereditari exist, cel mai adesea, sub forma
perechilor de alele ce determin caractere definite i constante.
Denumirea de gene alele a fost propus de W. Johannsen n anul 1909.
26

GENETIC

Alela unei gene este rezultatul unei mutaii a tipului slbatic al acesteia,
produs ntr-un trecut mai mult sau mai puin ndeprtat.
Genele alele sunt plasate ntr-un anumit locus pe cromozomii
pereche, pe fiecare cromozom existnd exclusiv o singur gen alel.
Ca urmare, organismele diploide homozigote posed numai una dintre
alele pereche (fie AA, fie aa), iar cele heterozigote posed ambele gene
alele (Aa) plasate pe cromozomii aceleeai perechi.
Pe lng tipul de gene alele sau pereche (A i a) descris mai sus,
n unele populaii exist uneori mai mult de dou alele n acelai locus i
care determin variaii ale aceluiai caracter. Acest fenomen se numete
polialelie i este provocat de mutaii consecutive ale unei gene dintr-un
anumit locus. De exemplu, dac tipul slbatic este notat cu A, prin mutaii
succesive poate s apar o serie de alele, ce se noteaz cu a 1, a2, a3 ..... an,
i care afecteaz toate acelai caracter. Gena care determin tipul slbatic
mai poate fi notat cu prima sau primele litere ale caracterului respectiv la
care se adaug semnul + (a+), iar genele sale alele se noteaz cu aceeai
liter la care se schimb indicele (aa, ab, ac, ad .... etc.).
Un exemplu clasic de polialelie (alelie multipl) a fost observat de
ctre Thomas Hunt Morgan la Drosophila melanogaster. Culoarea ochilor
este determinat la aceast insect de un sistem de gene polialele, dintre
care unele determin apariia tipului slbatic cu ochi roii (w+), iar altele
apariia de fenotipuri mutante, cu o variaie de culori ntre alb i rou.
Toate aceste gene alctuiesc o serie alelomorf, n care fenotipul de tip
slbatic este dominant, iar fenotipurile mutante sunt recesive.
Intre alelele care determin fenotipuri mutante, ordinea de
dominan este legat de intensitatea culorii ochilor. Astfel, alela w, ce
determin culoarea alb a ochilor, este recesiv fa de toate celelalte alele
i respectiv fenotipuri mutante, iar gena we, ce determin culoarea de tip
eosin, este dominant fa de alelele w, wt, wa, wbt, care determin
fenotipuri mai deschise la culoare i recesiv fa de toate celelalte care
determin o culoare mai nchis a ochilor. Primele cercetri au dus la
identificarea unui numr redus de alele mutante, dar ulterior, prin
folosirea unor metode de laborator de mare sensibilitate pentru extracia
i dozarea pigmenilor din ochi, a fost posibil identificarea unei serii
largi de mutante, dintre care cele mai cunoscute sunt: eosin (e);
brown (bw); sepia (se); cinnabar (c); vermillion (v); scarlet
(st); ruby (rb); purple (pr); carnation (car); pink (p); apricot
(apr); garnet (g); light (l); white (w).
In cazul acestor alele multiple dominana este incomplet, fapt
reflectat de cantitatea intermediar de pigment prezent la genotipurile
27

AUREL POPESCU

heterozigote. S-a observat de asemenea c n cazul tipului slbatic, care la


prima vedere are ochi roii, exist o gam relativ mare de fenotipuri
diferite, care se deosebesc i genotipic. Diferenierea ntre acestea este
ns dificil de fcut cu ochiul liber, ea fiind posibil numai prin folosirea
metodelor de laborator de mare sensibilitate.
Un alt exemplu de polialelie este cel implicat n determinismul
culorii blnii la iepuri. Dependent de prezena alelelor multiple C, c, cch i
ch, culoarea blnii poate fi de tip slbatic (CC, Cc, Ccch sau Cch), tip
chinchila (cchcch, cchch sau cchc), tip himalaya (chch, sau chc), sau tip albino
(cc) (Fig. 1.7). Se constat c tipurile chinchila, himalaya i albino apar
doar n absena genei dominante C (de tip slbatic), adic atunci cnd
alelele cch, ch sau c se afl n stare homozigot (cchcch, chch, respectiv cc),
sau fac pereche cu o alel recesiv lor.

Fig. 1.7. Seria de polialele (alele multiple) implicate n determinismul


culorii blnii la iepuri.
Fenomenul polialeliei prezint urmtoarele particulariti:
1. Genele polialele sunt plasate n acelai locus de pe cromozom.
2. Genele polialele afecteaz ntotdeauna acelai caracter.
3. Incruciarea a dou mutante polialele are ca rezultat apariia
fenotipului unuia dintre genitori (dominant), i nu a celui
caracteristic tipului slbatic.
4. Tipul slbatic este cel mai adesea dominant, iar genele alele
corespunztoare sunt recesive. De la acest fenomen sunt ns i
excepii, ca n cazul seriei de gene polialele ce afecteaz
culoarea blnii la animale de tip agouti.
5. Intre genele polialele nu are loc fenomenul de crossing-over.
28

GENETIC

Pseudoalelia
In cazul cnd una sau mai multe caracteristici ale fenomenului
de polialelie lipsesc, genele recesive sunt pseudoalele sau alele false.
Pentru a explica pseudoalelia se consider c genele respective sunt
plasate n loci compleci, foarte aproape una de alta. Poziia lor apropiat
ntr-un locus complex determin transmiterea lor mpreun, dar este
posibil ca uneori s se produc o recombinare a lor, dar cu frecven
extrem de redus.
Un exemplu de gene pseudoalele a fost descoperit la Drosophila
melanogaster i se refer la culoarea ochilor, implicat fiind un locus de pe
cromozomul I. Pe baza unor prime cercetri s-a tras concluzia c gena ce
determin culoarea alb a ochilor (w) face parte dintr-un grup de gene
polialele, n care intr i gena ce determin pigmentaia de culoarea caisei
(wa) a ochilor. Ulterior s-a descoperit c din ncruciarea celor dou tipuri
de indivizi (ww x wawa) apar n descenden, cu o frecven foarte mic, i
indivizi de tip slbatic (w+) cu ochi roii. Aceste observaii au dovedit
existena unui locus compus, caracterizat prin distana foarte mic dintre
cele dou gene, i au determinat schimbarea denumirii genei wa n apr
(apricot = cais). Cnd cele dou gene (apr i w) sunt plasate diferit pe cei
doi cromozomi pereche (poziia trans), culoarea ochilor indivizilor
respectivi este cea a caisei (gena apr este dominant asupra genei w).
Dac ns are loc o recombinare genetic (crossing-over ntre cele dou
gene), i ele sunt plasate mpreun pe acelai cromozom din perechea
respectiv (poziia cis), indivizii vor avea ochi roii (tip slbatic), genele
pentru acest tip (+ +) fiind plasate, de asemenea, mpreun. Schematic,
cele dou poziii ale genelor pot fi prezentate astfel:
+

apr

apr

poziia trans
(culoarea caisei)

poziia cis
(culoarea roie)

Acest exemplu demonstreaz c fenotipul poate fi determinat nu


numai de prezena anumitor gene, ci i de poziia pe care o au genele pe
cromozomi. Fenomenul a primit denumirea de efect de poziie.
29

AUREL POPESCU

Pentru ca reaciile biochimice care duc la apariia culorii roii


normale a ochilor s aib loc, este necesar ca cele dou gene (apr i w)
s fie plasate alturat pe acelai cromozom, n poziia cis. Transferul uneia
dintre gene pe cromozomul pereche, n poziia trans, blocheaz reaciile
biochimice i duc la apariia unei alte culori a ochilor. Prin testul cis-trans
se poate aadar determina dac dou gene diferite sunt, sau nu sunt, alele.
Cistronul, unitatea funcional implicat n procesul de
recombinare, i datoreaz denumirea testului cis-trans. In cazul prezentat
mai sus, este evident faptul c cele dou gene nu fac parte din acelai
cistron, deoarece atunci cnd se afl n poziia cis (alturate pe acelai
cromozom) are loc o restabilire a funciei normale a organismului,
reflectat n sinteza pigmentului i apariia culorii roii a ochilor.
Pleiotropia
Dac n cazul polialeliei mai multe gene plasate n acelai locus
contribuie la realizarea unui anumit caracter (de exemplu, culoarea
ochilor la Drosophila, culoarea blnii la animale, etc.), n cazul
fenomenului opus, denumit pleiotropie, o anumit gen determin
schimbri majore n fenotip prin modificarea expresiei mai multor
caractere. Un exemplu de pleiotropie este acela al mutantei cu aripi
vestigiale de la Drosophila, la care gena vg determin modificarea i a
altor caractere (de exemplu fecunditatea i vitalitatea). In mod similar,
gena recesiv ca, care n stare homozigot determin apariia tipului
albinos la animale, este o gen pleiotropic, a crei activitate are ca
rezultat o vitalitate mai redus (sau o letalitate mai ridicat) a animalelor
respective, fapt care explic frecvena rar a albinismului n stare natural.
In prezent se consider c marea majoritate a genelor sunt
pleiotrope, dei n relativ puine cazuri exist dovezi pentru efectul multidirecional al unei anumite gene.
Poligenia sau polimeria
Inc n secolul al XVIII-lea, J. Klreuter a remarcat c prin
ncruciarea unor varieti de tutun pitic cu varieti nalte, n prima
generaie (F1) se obin hibrizi care au nlime intermediar ntre genitori,
iar n F2 are loc o segregare care duce la apriia unor forme ce prezint o
graduare continu a nlimii, de la pitice la nalte. Astfel de fenomene au
fost observate ulterior de numeroi experimentatori, ns numai n primele
decenii ale secolului al XX-lea s-a reuit gsirea unei explicaii genetice
30

GENETIC

pentru transmiterea ereditar a caracterelor cantitative (de exemplu,


nlimea plantelor, mrimea florilor, fructelor sau seminelor, etc).
Cercetrile lui H. Nilsson-Ehle la gru i ale lui E.M. East la
porumb (n perioada 1910-1913) au dus la descoperirea fenomenului de
poligenie, prin care se explic modul de segregare a caracterelor
cantitative. Pe baza rezultatelor acestor cercetri s-a ajuns la concluzia c,
la plante, caracterele cantitative sunt determinate de mai multe gene
nealele (poligene), care segreg independent, dar care influeneaz acelai
caracter, avnd efect cumulativ. In consecin, modul de segregare este
diferit de cel clasic, observat de G. Mendel.
Poligenia caracterizeaz toate organismele (plante, animale, om).
Un exemplu de efect cumulativ al genelor n motenirea unor caractere
cantitative l constituie ereditatea culorii pielii la om (Tabel 1.11). C.B.
Davenport a studiat extensiv problema ereditii culorii pielii la om, n
special n Jamaica i insulele Bermude, unde frecvena cstoriilor ntre
rase diferite este foarte mare.
Culoarea pielii este determinat de pigmentul melanin, care
variaz cantitativ la diferitele rase: 0-11% la rasa alb; 12-25% la mulatrii
deschii; 26-40% la mulatrii propriu-zii; 41-55% la mulatrii nchii; 5678% la negrii.
Tabel 1.11. Segregarea la ncruciarea ntre mulatrii n cazul a dou
perechi de gene pentru pigmentaie.

P1 P2

P1 p2

P1 P2

P1 p2

P1 P2
P1 P1 P2 P2
negru
P1 P1 P2 p2
mulatru
nchis
P1 p1 P2 P2
mulatru
nchis
P1 p1 P2 p2
mulatru

P1 p2
P1 P1 P2 p2
mulatru
nchis
P1 P1 p2 p2
mulatru

p1 P2
P1 p1 P2 P2
mulatru
nchis
P1 p1 P2 p2
mulatru

P1 p1 P2 p2
mulatru

P1 p1 P2 P2
mulatru

P1 p1 p2 p2
mulatru
deschis

P1 p1 P2 p2
mulatru
deschis

p1 p2
P1 p1 P2 p2
mulatru
P1 p1 p2 p2
mulatru
deschis
p1 p1 P2 p2
mulatru
deschis
p1 p1 p2 p2
alb

Pentru a explica faptul c descendena F 1 este relativ uniform,


alctuit din mulatrii cu o culoare a pielii intermediar, i c prin cstorie
31

AUREL POPESCU

Fracia de populaie

ntre mulatrii se obine n F2 o segregare n raport de 1:4:6:4:1 (1 alb,


4 mulatrii deschis, 6 mulatrii, 4 mulatrii nchis, 1 negru), Davenport a
sugerat c n apariia culorii pielii sunt implicate dou perechi de gene
alele: P1 p1 i P2 p2. Din cstoria dintre negrii (P1P1P2P2) i albi (p1 p1 p2
p2) rezult n F1 mulatrii propriu-zii (P1 p1 P2 p2), iar din cstoria ntre
mulatrii n F2 apar mai multe tipuri de indivizi (Tabelul 1.9).
Prin ncruciarea ntre mulatrii (P1p1P2p2) i albi (p1p1p2p2), adic
prin back-cross, rezult descendeni n urmtorul raport: 25% mulatrii
(P1p1P2p2), 25% albi (p1 p1p2p2), 50% mulatrii deschii, intermediari ntre
prini (P1p1p2p2 sau p1p1P2p2). Din ncruciarea ntre mulatrii (P1p1P2p2) i
negrii (P1P1P2P2) rezult: 25% mulatrii (P1p1P2p2; P1P1p2p2; p1p1P2P2),
25% negrii (P1P1P2P2), 50% mulatrii nchii, intermediari ntre prini
(P1p1P2P2; P1P1P2p2).

Fig. 1.8. Segregarea culorii pielii n cazul implicrii a trei perechi


de gene nealele (AaBbCc).
Conform ipotezei lui Davenport, cantitatea de pigment n piele
este determinat de efectul cumulativ al genelor P1 i P2, care la negrii se
32

GENETIC

afl n stare homozigot (P1P1P2P2); la mulatrii nchii exist trei gene


pentru pigmentare (P1p1P2P2 sau P1P1P2p2); la mulatrii propriu-zii exist
dou gene pentru pigmentare (P1p1P2p2; P1P1p2p2 sau p1p1P2P2), iar la
mulatrii deschii o singur gen (P1p1p2p2 sau p1p1P2p2).
S-a emis apoi ipoteza conform creia culoarea pielii la om ar fi
determinat de trei perechi de gene nealele, ulterior fiind analizate
matematic posibilitile de segregare dup culoarea pielii chiar n cazul
unui numr de pn la 20 perechi de gene.
De exemplu, n cazul n care culoarea pielii ar fi determinat de
trei perechi de gene nealele (Fig. 1.8), raportul de segregare este de
1:6:15:20:15:6:1.
Gene letale
O cauz important a modificrii raportului Mendelian de
segregare o constituie genele letale, care n stare homozigot determin
moartea individului respectiv.
In anul 1905, Lucien Cunot a observat un model neobinuit
atunci cnd a studiat transmiterea ereditar a unei gene pentru culoarea
blnii la oareci. Din ncruciarea a doi oareci cu blana de culoare
galben a rezultat o descenden al crei raport fenotipic nu era niciodat
cel normal. Astfel, n locul raportului normal de 3:1, rezulta de fiecare
dat un raport de 2:1, cu doi oareci galbeni pentru fiecare oarece de alt
culoare dect galben. Cunot a ajuns astfel la concluzia c culoarea
galben era caracterul fenotipic dominant i prin utilizarea ncrucirilor
test a stabilit c toi oarecii galbeni erau heterozigoi. Totui, Cunot nu a
reuit s obin niciodat un oarece galben homozigot, fapt pentru care
nu a gsit o explicaie. Civa ani mai tarziu, W.E. Castle i C.C. Little
(1910) au confirmat raporturile de segregare neobinuite obinute de
Cunot. Mai mult, ei au demonstrat c ncrucirile lui Cunot au avut ca
rezultat ceea ce preau s fie raporturi non-Mendeliene pentru c el
descoperise o gen letal. Castle i Little au artat c un sfert din
descendena din ncrucirile ntre heterozigoi a murit n cursul
dezvoltrii embrionare (Fig. 1.9). De aceea Cunot nu reuise niciodat s
obin oareci galbeni homozigoi. Astfel, lund n consideraie letalitatea
embrionar (sau moartea), poate fi restabilit raportul clasic de 1:2:1 al
genotipurilor.
Aa cum ilustreaz acest exemplu, genele letale pot cauza moartea
organismelor care le poart. Uneori, moartea nu este imediat, dependent
de gen ea putndu-se produce chiar dup mai muli ani. In orice caz,
33

AUREL POPESCU

dac o mutaie duce la letalitate, aceasta este o indicaie c gena afectat


are o funcie fundamental n creterea, dezvoltarea i supravieuirea unui
organism.

Fig. 1.9. Modificarea aparent a raportului Mendelian de segregare


ca rezultat al prezenei n genotip a unei gene (alele) letale.
Genele letale pot fi dominante, recesive, condiionale sau
semiletale, dependent de gena sau genele implicate. Genele letale
dominante sunt exprimate att la homozigoi, ct i la heterozigoi.
Se pune ns ntrebarea cum sunt transmise astfel de alele de la o
generaie la alta dac ele cauzeaz moartea. Genele dominante letale sunt
rar detectate datorit eliminrii lor rapide din populaii. Un exemplu de
boal cauzat de o alel dominant letal este boala Huntington, o
afeciune neurologic la oameni, care reduce durata ateptat a vieii.
Deoarece instalarea bolii Huntington este lent, indivizii purttori ai alelei
o pot transmite descendenilor lor. Aceasta permite meninerea ei n
populaie. Caracterele dominante pot fi de asemenea meninute n
populaii prin mutaii recurente, sau dac penetrana genei este mai mic
de 100%.
La numeroase specii de plante au fost identificate gene letale care
n stare homozigot provoac moartea embrionilor sau plantelor tinere
(nainte de maturitate).
La Antirrhinum majus exist o varietate, aurea, a crei frunze sunt
verzi-glbui; n urma autofecundrii segreg trei tipuri de plante - aurea,
verzi i galbene. Edwin Baur (1907) a descoperit c plantele galbene sunt
34

GENETIC

incapabile de germinare a seminelor sau mor ntr-un stadiu timpuriu.


Plantele aurea trebuie prin urmare s fie heterozigote, ceea ce determin
producerea n F1 a unei descendene conform schemei urmtoare:
P

F1

aurea
Aa
aa
galbene
(neviabile)

Aa
aurea

aurea
Aa
Aa
aurea

AA
verzi
(normale)

Cunot i Baur au descoperit genele letale descrise mai sus


deoarece ele modificau raporturile Mendeliene de segregare. Genele
recesive letale pot cauza caractere dominante sau recesive, dar ele nu
cauzeaz moartea dect dac un organism poart dou copii ale alelei
letale. Exemple de boli umane cauzate de alele recesive letale sunt fibroza
chistic, anemia falciform i acondroplazia. Aceasta din urm este o
boal autozomal dominant a oaselor ce cauzeaz dwarfism. In timp ce
motenirea unei alele pentru acondroplazie poate cauza boala, motenirea
a dou alele recesive este fatal (letal).
La porumb sunt cunoscute cel puin 15 gene diferite care n stare
homozigot blocheaz formarea clorofilei i fotosinteza, ceea ce le face
incapabile s supravieuiasc. Genele implicate n incapacitatea plantelor
de sintez a clorofilei i respectiv de fotosintez, sunt gene subletale, care
nu determin moartea n faza de zigot sau embrion, dar plantele nu ajung
niciodat la maturitatea de reproducere (sexual). De exemplu, prin
autopolenizarea sau ncruciarea unor plante ce conin gena recesiv
pentru albinism (w) n stare heterozigot (Ww), descendena segreg
astfel: 1 WW : 2 Ww : 1 ww. Deoarece ultima categorie de indivizi pier,
segregarea plantelor are loc de fapt n raport de 1/3 WW : 2/3 Ww.
Dac la plantele heterozigote care se ncrucieaz (Ww x Ww)
frecvena genei recesive w este de 50%, la plantele din prima generaie
(1/3 WW : 2/3 Ww) frecvena genei recesive letale este de numai 33.3%.
S-a demonstrat experimental c prin polenizarea liber a plantelor primei
generaii, n generaia F2 frecvena genei recesive letale se reduce la 1/4,
n generaia urmtoare la 1/5, etc.
A fost elaborat o formul teoretic (qn+1 = qn/1+qn), cu ajutorul
creia poate fi exprimat matematic descreterea progresiv a frecvenei
unei gene recesive letale, ca urmare a faptului c indivizii homozigoi
35

AUREL POPESCU

pentru gena letal pier. Pe baza studiilor privind frecvena genelor letale
ntr-o populaie i descreterea lor n cazul cnd homozigoii dublu
recesivi sunt eliminai, s-au elaborat metode artificiale pentru controlul
frecvenei genelor respective.
Abateri Reale de la Raporturile Mendeliene de Segregare
Abaterile de la segregarea mendelian sunt considerate ca fiind
aparente atunci cnd mecanismul cromozomial care st la baza segregrii
i comportamentul celulelor haploide care formeaz zigotul sunt cele
ateptate conform rezultatelor lui Mendel, dar factori adiionali au
distorsionat proporia indivizilor n una sau mai multe clase ale
descendenei. In contrast, adevratele abateri de la legile lui Mendel apar
atunci cnd celulele haploide nu se formeaz n meioz n raportul tipic de
1:1, sau acestea nu se unesc randomizat pentru producerea zigoilor.
Prima situaie este rezultatul meiozei atipice, iar cea de a doua este
determinat de comportamentul difereniat al celulelor haploide.
Segregarea preferenial
Segregarea preferenial este cazul n care distribuia anumitor
cromozomi, respectiv a anumitor gene nu este randomizat n procesul
meiozei. Adevrata segregare preferenial apare cnd, n oogenez, un
anumit cromozom sau segment de cromozom este inclus preferenial n
celula ou, n timp ce omologul su merge la ceilali nuclei (nucleii polari,
sau nucleii echivaleni din macrosporul plantelor), care nu particip de
altfel la formarea zigotului. In formarea gameilor masculi, cazurile de
segregare preferenial apar atunci cnd meioza nu are ca rezultat
producerea a patru celule sexuale, sau cnd cele patru celule produse
nu sunt egal funcionale. Segregarea preferenial poate fi dedus din
comportamentul citologic al cromozomilor i din distorsionarea
rapoartelor genetice.
Chiar dac diferenele n ceea ce privete viabilitatea n faza
diploid i letalitatea observabil a gameilor sau celulelor haploide pot fi
excluse, comportamentul difereniat al celulelor haploide purtnd un
anumit cromozom sau o anumit gen poate s conduc la segregare
preferenial aparent, dar nu adevrat.
Segregarea preferenial a fost bine studiat la porumb (Zea
mays). La cteva varieti de porumb exist un cromozom (10) denumit
10 anormal (10a), care segreg preferenial n macrosporul plantelor
36

GENETIC

care sunt heterozigote pentru acest cromozom. Acest cromozom segreg


normal n timpul macrosporogenezei la formele homozigote (10a/10a)
i segreg de asemenea normal (n raport de 1:1) n microsporogenez,
att la formele homozigote ct i la cele heterozigote (10a/10n). Totui,
se pare c heterozigoii 10a/10n manifest un fenomen mai pronunat de
avortare a polenului, dect n mod obinuit (aproximativ 10% la plantele
10a/10n, comparativ cu 0-5% n mod obinuit la plantele 10n/10n).

Fig. 1.10. Segregarea preferenial a culorii boabelor la Zea mays.


Fenomenul segregrii prefereniale a fost pus n eviden
urmrindu-se transmiterea n descenden a genei R, care determin
formarea pigmentului antocianic n semine i plante. Prin ncruciarea
unei linii de porumb posednd cromozomii 10a purttori ai alelelor
recesive rr, cu o linie de porumb posednd cromozomii 10n purttori ai
alelelor dominante RR, s-au obinut n F1 plante heterozigote (Rr) cu
boabe de culoare roie. Prin retroncruciarea plantelor hibride
(heterozigote) cu genitorul posednd caracteristica recesiv (rr) nu s-au
obinut 50% descendeni cu boabe necolorate i 50% descendeni cu
boabe de culoare roie (deci un raport de segregare de 1:1), ci 70.2%
indivizi cu boabe necolorate i 29.8% indivizi cu boabe roii, ca urmare a
segregrii prefereniale a cromozomilor 10a.
Non-disjuncia cromozomilor n meioz

37

AUREL POPESCU

In mod obinuit, n meioz are loc separarea cromozomilor din


perechile de omologi i repartizarea lor n celulele haploide care se
formeaz. Uneori, prin non-disjuncia cromozomilor n cursul meiozei
(mai precis, n cursul anafazei I), dup prima diviziune se formeaz o
celul cu un cromozom n plus i o celul cu un cromozom n minus.
Celulele sexuale care se formeaz din acestea vor produce dup fecundare
zigoi cu 2n+1 i 2n-1 cromozomi (Fig. 1.10).
Non-disjuncia se poate produce i n cursul anafazei celei de a
doua diviziuni meiotice (anafaza II). Totui, studiile realizate la
numeroase specii de plante i animale au artat c non-disjuncia n
anafaza I este mai frecvent dect non-disjuncia n anafaza II. Rezultate
similare au fost raportate i pe baza studiilor realizate pentru stabilirea
cauzelor apariiei trisomiei 21 la om (care cauzeaz sindromul Down),
care au artat preponderena non-disjunciei cromozomilor 21 n meioza
1 matern (> 70%) (Antonarakis i colab., 1992).
Organismele care se vor dezvolta din zigoii cu 2n+1 cromozomi
vor fi trisomice, iar cele care se vor dezvolta din zigoii cu 2n-1
cromozomi vor fi monosomice.

Fig. 1.10. Non-disjuncia cromozomilor n meioz.


Frecvena cu care se produce non-disjuncia cromozomilor variaz
larg la organismele vegetale i animale. A devenit ns evident faptul c
acest gen de anomalie se produce cu frecven mai mare la organismele
triploide, fiind rar la cele diploide.
Formarea nerandomizat a zigoilor
38

GENETIC

De regul, n procesul fecundrii, gameii se ntlnesc ntre ei


randomizat. Uneori, gameii se ntlnesc nu la ntmplare ci preferenial
(nerandomizat). La plante, acest fenomen este favorizat de viabilitatea
inegal a celulelor sexuale mascule (microsporii) (Fig. 1.11) i de
capacitatea inegal de formare i de maturizare a stigmatului.
O alt cauz a formrii nerandomizate a zigoilor o constituie
barierele genetice de autopolenizare i autofecundare. De exemplu,
polenul ce poart alele identice cu cele existente n celulele pistilului va fi
incapabil s formeze tuburi polinice lungi i s participe la fecundare.

Polen
Stigmat
Stil
Tub polinic

Ovul

Fig. 1.11. Incompatibilitatea gametofitic o cauz a modificrii


raportului mendelian de segregare la unele specii de plante.
La porumb, spre exemplu, exist gene care controleaz creterea
tubului polinic n stil (Fig. 1.11). Polenul care conine alela dominant a
genei S dezvolt tubul polinic mai repede i formeaz un numr mai mare
de zigoi cu aceast gen, ceea ce are ca rezultat abateri de la raportul de
segregare de tip Mendelian.
In mod similar, la unele specii de plante, pe stigmat germineaz
numai grunciorii de polen ce conin cel puin o alel diferit de cele ale
pistilului (fenomen denumit incompatibilitate gametofitic), ceea ce duce
la absena unora dintre clasele de descendeni i, implicit, modificarea
raportului de segregare.

39

AUREL POPESCU

2.

TEORIA CROMOZOMIAL A EREDITII

Elaborarea teoriei celulare, de ctre botanistul M.J. Schleiden i


zoologul T. Schwann (1838), completat ulterior de R. Virchow (1855),
demonstrnd c toate organismele au o alctuire celular sau
pluricelular, a constituit unul din momentele care i-au lsat puternic
amprenta asupra dezvoltrii geneticii ca tiin. Studiul celulei i a
diviziunii celulare a fcut posibil identificarea materialului genetic, a
mecanismului prin care genele se transmit de la celula mam la celulele
fiice, de la ascendeni la descendeni, a modului cum se realizeaz
recombinarea genetic i cum se produc mutaiile la nivel genic, precum
i restructurrile la nivelul cromozomilor.
La cteva decenii de la apariia teoriei celulare, Hertwig (1875) i
curnd dup aceea Strasburger, Waldeyer i alii, au descoperit c n
momentul n care celula se divide, nucleul se mparte ntr-un numr
constant de structuri pe care le-a denumit cromozomi (corpusculi
colorai).
W. Flemming (1882) introduce n tiin denumirea de mitoz, n
urma descoperirii faptului c n cursul diviziunii celulare cromozomii
cliveaz longitudinal, avnd ca rezultat identitatea cromozomilor celulelor
fiice cu cei ai celulei mam.
Un moment important n evoluia geneticii l reprezint i
descoperirea de ctre E. van Beneden (1883) a existenei unui numr
redus la jumtate (haploid) de cromozomi n gamei, fiind astfel explicat
relaia ntre structura genetic a gameilor i respectiv aceea a zigotului
(diploid). Ulterior, H. von Winiwarter constata c meioza const din
dou diviziuni nucleare, dar una singur a cromozomilor, avnd ca
rezultat formarea a patru gamei haploizi.
In anul 1902, W.S. Sutton i T. Boveri descopereau independent c
diferiii cromozomi au dimensiuni i anumite caracteristici care se
pstreaz constante att n mitoz, ct i n meioz. Un an mai trziu
(1903), studiind meioza, Sutton observa c cromozomii omologi
aparinnd celor doi genitori (patern i matern) se asociaz n bivaleni, i
c n metafaza I cromozomii care formeaz bivalenii se orienteaz diferit,
independent de celelalte perechi. Aceast observaie l conducea la
concluzia c gameii prezint o multitudine de posibiliti de combinare a
cromozomilor. Astfel, pentru o specie cu 36 de cromozomi n celulele
somatice, Sutton a calculat c exist 2 18 = 262.144 combinaii posibile n
gamei, ceea ce poate avea ca rezultat un numr posibil de descendeni
diferii genotipic de 236 sau 6.87 x 1010.
40

GENETIC

Cercetrile privind mecanismul cromozomial al determinrii


sexelor au adus un argument important n sprijinul ipotezei c factorii
ereditari se gsesc plasai n cromozomi. In anul 1891, Henking a emis
prima ipotez potrivit creia determinismul sexelor este dependent de
diferenierea gameilor, pe baza observaiilor sale c gameii insectelor
din specia Pyrrhocoris apterus sunt de dou feluri, unii posednd nite
corpusculi necunoscui pe care i-a denumit X, iar alii lipsii de aceti
corpusculi. In primii ani ai secolului al XX-lea, aceast ipotez avea s fie
confirmat de numeroase alte studii. Astfel, C.E. McClung (1902)
descoper c la speciile de lcuste masculii (2n=31) i femelele (2n=32)
posed numr diferit de cromozomi, fapt pe care l explic prin
determinarea genetic a sexelor. Civa ani mai trziu, E.B. Wilson (1905)
observa c la genul de insecte Protenor masculii au 2n=13 cromozomi i
femelele 2n=14 cromozomi, iar gameii sunt de un singur tip la femele
(n=7) i de dou tipuri la masculi (n=6 i n=7). Prin fecundarea ovulelor
cu spermatozoizi cu 6 cromozomi apar indivizi masculi, iar prin
fecundarea cu spermatozoizi cu 7 cromozomi apar indivizi femeli.
Aceast descoperire demonstra concludent c sexul are determinare
ereditar cromozomial.

Fig. 2.1 Determinismul genetic al sexelor la speciile de insecte


Protenor i Drosophila.
Meritul de a fi stabilit legtura logic dintre factorii ereditari
(gene) ai lui Gregor Mendel i cromozomi, ca purttori ai acestora, a
41

AUREL POPESCU

revenit biologului american W.S. Sutton (1902) i celui german T. Boveri


(1904), care au emis ipoteza plasrii genelor pe cromozomi.
Thomas Hunt Morgan (profesor la Universitatea Columbia din
New York) a reuit s sintetizeze rezultatele tuturor aceste cercetri,
precum i pe cele ale unui impresionant volum de experimente proprii,
ntr-o teorie unitar, cunoscut sub denumirea de teoria cromozomial a
ereditii. Pentru contribuia sa la dezvoltarea geneticii, i n mod deosebit
pentru elaborarea acestei teorii, Morgan a fost distins cu premiul Nobel.
Cercetrile lui Morgan i ale colaboratorilor si au fost efectuate
n special asupra musculiei de oet (Drosophila melanogaster). Ritmul de
reproducere al acestei specii (o generaie la circa 12 zile), prolificitatea
foarte ridicat (o femel produce cteva sute de descendeni n fiecare
generaie) i numrul mic de cromozomi somatici (2n=8), uor de
identificat datorit deosebirilor de morfologie, au reprezentat avantaje
importante pentru reuita studiilor asupra mecanismelor ereditii.

Fig. 2.2 Musculia de oet (Drosophila melanogaster)


Studiind cteva sute de mii de indivizi timp de mai muli ani,
Morgan i colaboratorii si au reuit s identifice peste 500 de mutaii
care afectau toate organele insectei (Tabel 2.1). Aceste mutaii au servit ca
un excelent material pentru studiul transmiterii ereditare a caracterelor la
descendeni i respectiv a mecanismului cromozomial al ereditii.
42

GENETIC

Tabel 2.1. Cteva din mutaiile dominante i recesive identificate de


Morgan la Drosophila melanogaster.
Organul afectat

Caracterul

Ochii

Culoarea

Ochii

Forma

Aripile

Forma

Corpul

Culoarea

Mutaia
Alb
Purpurie
Sepia
Barai
In stea
Abseni
Trunchiate
Vestigiale
ndoite

Gena
implicat
W
Pr
Se
B
S
Ey
T
Vg
C

Galben
Portocalie
Neagr

Y
L
B

Fig. 2.3. Tipul slbatic (stnga sus) i cteva dintre mutantele comune
de Drosophila melanogaster.
Prin ncruciarea mutantelor ntre ele sau cu tipul normal
(slbatic) s-a studiat modul de transmitere ereditar a diferitelor gene n
43

AUREL POPESCU

cursul mai multor generaii. Rezultaele obinute, corelate cu cele ale


studiilor citologice, au constituit suportul tiinific al elaborrii celor mai
importante teze privind mecanismul cromozomial al ereditii.
Gene i Cromozomi
Importana nucleului i a coninutului su a fost recunoscut odat
cu observarea fuziunii nucleilor a doi gamei n cursul procesului de
fertilizare. Urmtorul pas important a fost descoperirea cromozomilor,
vizibili la microscopul optic cnd sunt colorai cu colorani bazici. S-a
descoperit apoi c cromozomii segreg att n gamei ct i n celulele
fiice. In sfrit, au fost observate trei reguli importante n ceea ce privete
complementul cromozomial (setul complet de cromozomi) al plantelor
superioare i animalelor:
1. Nucleul fiecrei celule somatice (o celul a corpului, n contrast
cu o celul germinal, sau gamet) conine un numr fix de cromozomi,
tipic pentru o anumit specie. Totui, numrul de cromozomi variaz
extrem de larg de la o specie la alta, fr a fi dependent de complexitatea
organismului (Tabel 2.2).
2. In nucleii celulelor somatice cromozomii sunt prezeni n mod
obinuit n perechi. De exemplu, cei 46 de cromozomi ai indivizilor
umani constau n 23 de perechi, iar cei 14 cromozomi ai plantelor de
mazre constau n 7 perechi. Unul din cromozomii fiecrei perechi
provine de la genitorul matern i cellalt de la genitorul patern. Celulele
cu nuclei de acest fel, coninnd dou seturi similare de cromozomi, sunt
denumite diploide.
3. Celulele germinale, sau gameii, care se unesc n cursul
fertilizrii pentru a produce stadiul diploid al celulelor somatice, au nuclei
care conin un singur set de cromozomi, constnd dintr-un membru al
fiecrei perechi. Aceti nuclei sunt haploizi.
La organismele complexe care se dezvolt din celule unice,
prezena unui numr diploid de cromozomi n celulele somatice i a unui
numr haploid de cromozomi n celulele germinale indic existena a
dou procese de diviziune nuclear. Unul dintre acestea mitoza menine numrul de cromozomi, pe cnd cellalt meioza - l reduce la
jumtate. Aceste dou procese sunt examinate n subcapitolele urmtoare.
44

GENETIC

Tabelul 2.2. Numrul somatic de cromozomi la cteva specii de plante i


animale.
Plante
Specia
Haplopapus gracilis
Crin
(Lilium sp.)

Animale
Numr
de
cromozomi
4
12

Specia

Numr
de
cromozomi
4
8

Mazre
(Pisum sativum)
Cire (Prunus avium)

14

Sfecl (Beta vulgaris)

18

Porumb (Zea mays)

20

Alun
(Corylus avellana)
Lalea
(Tulipa gesneriana)
Dud (Morus alba)
Mr
(Malus domestica)
Via de vie
(Vitis vinifera)
Gru
(Triticum aestivum)
Frasin
(Fraxinus excelsior)
Cartof
(Solanum tuberosum)
Cpun
(Fragaria ananassa)
Dalia
(Dahlia variabilis)
Tei (Tilia cordata)

22

Scorpion
Musculia de oet
(Drosophila
melanogaster)
Musc
(Musca domestica)
Triton
(Triturus vulgaris)
Broasca
(Rana esculenta)
Biban
(Perca fluvialtilis)
Hidr (Hydra vulgaris)

24

oprl (Lacerta agilis)

38

28
34

Pisic (Felix domestica)


oarece (Mus musculus)

38
40

38

Porc (Sus scrofa)

40

42

Capr (Capra hircus)

60

46

Cal (Equus cabalus)

66

48

Gin (Gallus gallus)

78

56

Cine (Canis familiaris)

78

64

Porumbel
(Columba livia)
Molia geometrid

80

16

82

Mitoza
45

12
24
26
28
32

224

AUREL POPESCU

Mitoza este un proces precis al diviziunii celulare care asigur ca


fiecare dintre cele dou celule fiice s primeasc un complement de
cromozomi identic cu cel al celulei parentale. Procesul este n mod
esenial acelai la toate organismele i este remarcabil de simplu:
1. Fiecare cromozom este deja prezent ca o structur replicat la
nceputul fiecrei diviziuni nucleare.
2. Fiecare cromozom se divide longitudinal n dou jumti
identice care se separ una de cealalt.
3. Jumtile de cromozomi separate se mic n direcii opuse,
fiecare fiind inclus n una dintre cele dou celule fiice care se
formeaz.
In celulele care nu sunt pregtite pentru mitoz cromozomii nu
sunt vizibili la microscopul optic. Acest stadiu al ciclului celular se
numete interfaza. In cadrul pregtirii pentru mitoz are loc sinteza
materialului genetic din cromozomi (ADN), care se realizeaz n cursul
unei perioade a interfazei trzii denumit S (Fig. 2.4). Sinteza ADN este
nsoit de replicarea cromozomilor. Perioada S este precedat de o
perioad denumit G1 i urmat de o perioada G2, n care nu se realizeaz
sinteza ADN.
M

G2
G1

G0
S

Fig. 2.4. Fazele ciclului celular.


Sinteza ADN se realizeaz numai n faza S, n timp ce n faza presintetic
(G1) i n cea postsintetic (G2) cantitatea de ADN rmne constant: simpl
n G1 i dubl n G2. Celulele care intr n G0 i nceteaz diviziunea.
Ciclul celular, sau ciclul de via al celulei, este n mod obinuit
descris n termenii acestor trei perioade ale interfazei, urmate de mitoz
46

GENETIC

(M), respectiv G1 S G2 M. In aceast reprezentare, diviziunea


citoplasmei n dou pri aproximativ egale coninnd nucleii este inclus
n perioada M. Durata ciclului celular variaz dependent de tipul de
celul. La majoritatea organismelor superioare ciclul celular dureaz ntre
18 i 24 de ore. Durata relativ a diferitelor perioade ale ciclului celular
variaz de asemenea considerabil n funcie de tipul de celul. De regul,
mitoza este perioada cea mai scurt a ciclului celular, care se realizeaz
ntr-un interval de 1/2 or pn la 2 ore.
INTERFAZA

cromozom

nucleol

cromozom
bicromatidic

fusul mitotic

METAFAZA

membrana
nucleara

cromozom

cromozom

centromer

ANAFAZA TIMPURIE

ANAFAZA TARZIE

TELOFAZA

Fig. 2.5. Fazele mitozei.

2. Metafaza. Dup ataarea la fibrele fusului, cromozomii se mic


spre centrul celulei pn ce toi centromerii se aeaz ntr-un plan
echidistant de polii fusului mitotic. Perioada n care cromozomii sunt
situai n planul central al fusului este denumit metafaz. In acest stadiu
cromozomii ating maximum de contractare i sunt cel mai uor de
numrat i de studiat sub aspect diferenelor de morfologie.
3. Anafaza. In anafaz centromerii se divid longitudinal i cele
dou cromatide surori ale fiecrui cromozom se mic opus spre cei doi
47

AUREL POPESCU

poli ai fusului. Odat ce centromerii se divid, fiecare cromatid sor


devine n fapt un cromozom separat. Micarea cromozomilor se realizeaz
n parte prin scurtarea progresiv a fibrelor fusului ataate la centromeri,
care trag cromozomii n direcii opuse spre poli. La ncheierea anafazei,
cromozomi sunt dispui n dou grupuri lng polii opui ai fusului.
Fiecare grup conine acelai numr de cromozomi care a fost prezent n
nucleul interfazic de origine.
4. Telofaza. In timpul telofazei, n jurul fiecrui grup compact de
cromozomi se formeaz un nveli, se formeaz nucleolii, iar fusul
dispare. Cromozomii parcurg procesul invers condensrii, pn cnd nu
mai sunt vizibili ca entiti distincte. Cei doi nuclei fii dobndesc uor
aspectul tipic interfazei, pe msur ce citoplasma celulei se divide n dou
pri care se separ prin sintetizarea unui perete celular nou ntre celulele
fiice.
Meioza
Meioza este modul de diviziune celular prin care se formeaz
celule cu un singur membru din fiecare pereche de cromozomi prezent n
celula premeiotic. Cnd o celul diploid cu dou seturi de cromozomi
parcurge meioza, rezult patru celule fiice, fiecare diferit din punct de
vedere genetic, i fiecare coninnd un set haploid de cromozomi.
Meioza const din dou diviziuni nucleare succesive, ale cror
detalii eseniale sunt prezentate n Figura 2.6.
1. Inainte de prima diviziune nuclear, cei doi membri ai fiecrei
perechi de cromozomi, despre care se spune ca sunt omologi unul altuia,
devin strns asociai pe toat lungimea lor. Deoarece fiecare cromozom
omolog este deja replicat, aceast asociere const n fapt dintr-un duplex
de dou cromatide surori unite n regiunea centromerului. Prin urmare,
mperecherea cromozomilor omologi produce o structur tetra-catenar.
2. In prima diviziune nuclear, cromozomii omologi mperecheai se
separ unul de cellalt. Se formeaz doi nuclei, fiecare coninnd un set
haploid de cromozomi duplicai.
3. A doua diviziune nuclear este oarecum asemntoare cu o
diviziune mitotic. Nu are loc nici o replicare a cromozomilor, dar n
48

GENETIC

metafaz cromozomii se aliniaz n zona central a fusului, iar n anafaz


cromatidele fiecrui cromozom se separ n nucleii fii.
PROFAZA I

leptoten

zigoten

pachiten

diploten

diachineza

METAFAZA I
ANAFAZA I

TELOFAZA I

METAFAZA II

TELOFAZA II

Fig. 2.6. Fazele meiozei.


Efectul net al celor dou diviziuni este formarea a patru nuclei
haploizi, fiecare coninnd echivalentul unei singure cromatide sor din
fiecare pereche de cromozomi omologi.
Dei procesul meiozei este similar la toate organismele cu
reproducere sexual, att la animalele ct i la plantele femele, doar
unul dintre cei patru nuclei se dezvolt ntr-o celul funcional (ceilali
trei se dezintegreaz). La animale, produii meiozei (gameii) sunt
spermatozoizii i ovulele. La plante, situaia este uor mai complicat:
1. Produii meiozei formeaz tipic spori, care parcurg una sau mai
multe diviziuni diviziuni mitotice pentru a produce organismul gametofit
haploid. Gametofitul produce gamei prin diviziunea mitotic a nucleului
haploid.

49

AUREL POPESCU

2. Fuziunea gameilor haploizi d natere zigotului diploid care se


dezvolt ntr-o plant sporofit, care parcurge meioza pentru a produce
spori i astfel se reia ciclul.
Meioza este un proces mult mai complex i considerabil mai lung
dect mitoza, necesitnd zile sau chiar sptmni. Esena meiozei const
n realizarea a dou diviziuni ale nucleului, n condiiile unei singure
duplicri a cromozomilor. Diviziunile nucleare - denumite prima
diviziune meiotic i a doua diviziune meiotic - pot fi separate ntr-o
secven de stadii similare celor descrise n cazul mitozei. Evenimentele
distinctive ale acestui important proces se produc pe parcursul primei
diviziuni a nucleului; aceste evenimente sunt descrise n subcapitolul
urmtor.
Prima diviziune meiotic
Cele patru stadii definite ale primei diviziuni meiotice sunt
profaza I, metafaza I, anafaza I, i telofaza I. In general, aceste stadii sunt
mai complexe dect cele corespunztoare n cazul mitozei.
1. Profaza I. Acesta este un stadiu lung, care la majoritatea
organismelor superioare dureaz cteva zile, i este mprit convenional
n cinci substadii - leptoten, zigoten, pachiten, diploten i diachineza.
In leptoten cromozomii devin vizibili ca structuri lungi
asemntoare unor iraguri. Perechile de cromatide surori pot fi distinse
prin microscopie electronic. In aceast faz iniial a condensrii
cromozomilor, la intervale neregulate de-a lungul lor apar numeroase
granule dense. Aceste contractri localizate, denumite cromomere, au
numr, mrime i poziie caracteristic pentru un cromozom dat.
Perioada zigoten este marcat prin mperecherea latur pe latur a
cromozomilor omologi, proces denumit sinaps. Imperecherea ncepe n
unul sau mai multe puncte de-a lungul cromozomilor i are ca rezultat o
asociere foarte precis ntre cromomere. Fiecare pereche de cromozomi
omologi aflai n sinaps este denumit ca fiind un bivalent.
Pe durata stadiului pachiten, condensarea cromozomilor continu,
i complementul cromozomial este reprezentat de numrul haploid de
bivaleni. Fiecare bivalent const dintr-o tetrad de patru cromatide, dar
n mod obinuit cele dou cromatide surori ale fiecrui cromozom nu pot
fi distinse. In cursul pachitenului apare un eveniment important din punct
50

GENETIC

de vedere genetic, denumit crossing-over, dar acesta nu este evident dect


dup trecerea la diploten.
In diploten, cromozomii aflai n sinaps ncep s se separe.
Totui, ei rmn asociai la anumite intervale de-a lungul lungimii lor prin
legturi n cruce. Fiecare legtur n cruce, denumit chiasm, este
rezultatul unei ruperi i reuniri ntre cromatide non-surori. Cu alte
cuvinte, o chiasm rezult din schimbul fizic ntre cromatidele
cromozomilor omologi (Figura 2.4). In meioza normal, fiecare bivalent
are cel puin o chiasm, ns bivalenii formai din cromozomi lungi au
adesea trei sau mai multe.
Pe parcursul perioadei finale a profazei I - diachineza cromozomii ating maximum de condensare. Cromozomii omologi
formnd bivaleni rmn conectai prin cel puin o chiasm, care persist
pn la prima anafaz meiotic. Aproape de sfritul diachinezei, este
iniiat formarea fusului i se produce ruperea nveliului nuclear.
2. Metafaza I. Bivalenii se poziioneaz cu centromerii celor doi
cromozomi omologi n pri opuse ale planului format de mijlocul fusului.
Orientarea perechilor de centromeri ai fiecrui bivalent spre polii fusului
este ntmpltoare (randomizat).
3. Anafaza I. In acest stadiu, cromozomii omologi, fiecare compus
din dou cromatide unite printr-un centromer nedivizat, se separ unul de
cellalt i se mic spre polii opui ai fusului.
Separarea cromozomilor omologi n cursul anafazei reprezint
baza fizic a legii Mendeliene a segregrii.
4. Telofaza I. La ncheierea anafazei I, lng fiecare pol al fusului se
afl cte un set haploid de cromozomi constnd din cte un omolog din
fiecare bivalent. In timpul telofazei, fusul se dezorganizeaz i, dependent
de specie, ori se formeaz foarte repede un nveli n jurul fiecrui grup de
cromozomi, ori cromozomii intr n cea de a doua diviziune mitotic dup
o uoar despiralizare.
A doua diviziune meiotic
La unele specii, cromozomii trec direct de la telofaza I la profaza
II fr pierderea condensrii; la altele, exist o scurt pauz ntre cele
dou diviziuni meiotice. Replicarea cromozomilor nu se produce
51

AUREL POPESCU

niciodat ntre cele dou diviziuni; cromozomii prezeni la nceputul celei


de a doua diviziuni meiotice sunt identici cu cei prezeni la sfritul
primei diviziuni. Dup o scurt profaz (profaza II) i formarea fusurilor
pentru a doua diviziune, centromerii cromozomilor se aliniaz n fiecare
nucleu n planul central al fusului n metafaza II. In anafaza II,
centromerii se divid longitudinal i cromatidele fiecrui cromozom se
mic spre polii opui ai fusului. Telofaza II este marcat de trecerea la
condiia din interfaz a cromozomilor, n patru nuclei haploizi, nsoit de
diviziunea citoplasmei. Astfel, a doua diviziune meiotic este ntr-un fel
asemntoare cu o diviziune mitotic. Totui, exist o diferen
important: de regul, cromatidele unui cromozom nu sunt surori identice
pe toat lungimea lor deoarece formarea chiasmelor n timpul profazei
primei diviziuni au ca rezultat producerea a unul sau mai multe crossingover.
Cromozomii i Ereditatea
Prima dovad clar c genele sunt pri ale cromozomilor a fost
obinut n urma experimentelor privind modelul transmiterii
cromozomilor sexului, responsabili pentru determinarea sexelor la unele
plante i la majoritatea animalelor superioare. Aceste rezultate sunt
examinate n subcapitolul care urmeaz.
Determinarea cromozomial a sexului
Cromozomii sexului sunt o excepie de la regula c toi
cromozomii organismelor diploide sunt prezeni n perechi de omologi
similari din punct de vedere morfologic. Cu multe decenii n urm,
analizele microscopice au artat c la unele specii de insecte unul dintre
cromozomii masculilor nu are un omolog. Acest cromozom fr pereche a
fost denumit cromozom X i era prezent n toate celulele somatice, dar
numai n jumtate din celulele spermatice. Semnificaia biologic a
acestor observaii a devenit clar cnd s-a constatat c femelele acelorai
specii au doi cromozomi X.
La alte specii la care femelele au doi cromozomi X, masculii au un
cromozom diferit ca morfologie. Acesta a fost desemnat ca fiind
cromozomul Y, i se mperecheaz cu cromozomul X n timpul meiozei la
masculi, deoarece X i Y sunt omologi pentru o regiune scurt.
Diferenele n ceea ce privete constituia cromozomal a masculilor i
femelelor este un mecanism cromozomial pentru determinarea sexului n
52

GENETIC

momentul fertilizrii, n sensul c n timp ce orice celul ou conine un


cromozom X, jumtate din celulele spermatice conin un cromozom X i
jumtate conin un cromozom Y. Fertilizarea unui ovul de ctre un
spermatozoid purttor al unui cromozom X are ca rezultat formarea unui
zigot XX, din care se dezvolt o femel; fertilizarea de ctre un
spermatozoid purttor al unui cromozom Y are ca rezultat formarea unui
zigot XY, din care normal se dezvolt un mascul. Intr-un astfel de model
de ereditate, masculii primesc cromozomul X de la mam i l transmit
exclusiv la fiice.
Tipul XX-XY de determinism cromozomial al sexelor se
ntlnete la mamifere (inclusiv omul), numeroase specii de insecte, alte
animale, precum i la unele specii de plante cu flori. Femela este
denumit sexul homogametic deoarece produce un singur tip de gamei
(purttori ai cromozomului X), iar masculul este denumit sexul
heterogametic deoarece produce dou tipuri de gamei (purttori de X i
purttori de Y). In cazul unirii randomizate a gameilor la fertilizare,
raportul previzibil al sexelor este de 1:1 deoarece masculii produc numr
egal de spermatozoizi purttori de X i respectiv de Y.
Cromozomii X i Y sunt denumii cromozomi ai sexului pentru a-i
deosebi de celelalte perechi de cromozomi, care sunt denumii autozomi.
Dei cromozomii sexului controleaz factorii care comut procesul de
dezvoltare nspre organisme femele sau mascule, n procesul de
dezvoltare n sine sunt implicate multe gene mprtiate n tot
complementul cromozomial, incluznd gene de pe autozomi. Aa cum se
va vedea n subcapitolul urmtor, cromozomul X conine de asemenea
multe gene care funcioneaz fr legtur cu diferenierea sexual. La
majoritatea organismelor, inclusiv la om, cromozomul Y poart cteva
gene care nu au nicio legtur cu determinarea sexului mascul.
Ereditatea caracterelor legate de sex
Incrucirile de tipul celor studiate n Capitolul I au ca rezultat
descendene similare cnd genotipurile prinilor masculi i femeli sunt
inversate, adic ncruciri reciproce. Una dintre primele excepii sesizate
de la aceast regul a fost cea observat de Thomas Hunt Morgan n 1910,
ntr-un studiu asupra culorii albe a ochilor la Drosophila melanogaster.
Aa cum s-a descris n Capitolul I, culoarea de tip slbatic a ochilor
musculiei de oet este o combinaie rou-crmiziu a pigmenilor rou i
brun. Dei ochi albi pot s apar ca rezultat al anumitor combinaii ale
unor gene autozomale care elimin pigmenii individual, alela pentru ochi
53

AUREL POPESCU

albi studiat de Morgan determin un blocaj metabolic care elimin ambii


pigmeni simultan. Studiul lui Morgan a nceput cu un singur mascul cu
ochi albi, aprut ntr-o populaie de tip slbatic meninut n laborator
timp de mai multe generaii. Din ncruciarea acestui mascul cu femele de
tip slbatic toi descendenii din generaia F1 au avut ochi roii, indicnd
c alela pentru ochi albi este recesiv. In generaia F 2 obinut prin
ncruciarea masculilor i femelelor din generaia F1, Morgan a observat
2.459 de femele cu ochi roii, 1.011 masculi cu ochi roii, i 782 masculi
cu ochi albi. Fenotipul ochi albi era cumva legat de sex, ntrucat toate
musculiele cu ochi albi erau masculi.
Totui, ochi albi nu apreau exclusiv la masculi. De exemplu, cnd
femele F1 cu ochi roii originare din ncruciarea femelelor de tip slbatic
cu masculi cu ochi albi au fost rencruciate cu taii lor cu ochi albi,
descendena a constat din femele cu ochi albi i ochi roii, i respectiv
masculi cu ochi albi i ochi roii, n numr aproximativ egal.
Incrucirile ntre femele cu ochi albi i masculi de tip slbatic au
permis o observaie de importan major, aceea c toate femelele din
descenden aveau ochi de tip slbatic, iar toi masculii aveau ochi albi.
Aadar, din ncruciarea reciproc a celei originale (femele de tip slbatic
x masculi cu ochi albi) au fost obinute rezultate diferite. Morgan i-a dat
seama c din ncrucirile reciproce se obin descendene diferite din
cauz c alela pentru ochi albi este prezent n cromozomul X. Se poate
spune deci c aceast gen este legat de sex.

Fig. 2.7. Complementul cromozomial


la musculia de oet (Drosophila melanogaster)
Figura 2.7 arat complementul cromozomial normal (2n = 8)
al speciei Drosophila melanogaster. Femelele au n complementul
cromozomial doi cromozomi X, iar masculii un cromozom X i unul Y.
Cromozomul Y nu conine un corespondent al genei pentru ochi albi.
Genotipul masculilor cu ochi albi este w / Y, iar acela al masculilor de tip
54

GENETIC

slbatic este w+ / Y. Simbolurile w i w+ denot forma mutant i


respectiv de tip slbatic ale genei pentru culoarea alb a ochilor prezent
n cromozomul X. Deoarece alela w este recesiv, femelele cu ochi albi
sunt de genotip w / w, iar cele de tip slbatic sunt fie heterozigote w+ /
w, fie homozigote w+ / w+.

F1

F2

Fig. 2.8. Transmiterea ereditar a culorii ochilor, caracter legat de sex,


la Drosophila melanogaster.
Figura 2.8 ilustreaz segregarea n F1 i F2 a descendenilor
rezultai din ncruciarea unui mascul de tip slbatic cu o femel cu
ochi albi. Ulterior s-a descoperit c la Drosophila multe alte gene
urmeaz acelai model de ereditate, legat de cromozomul X.
55

AUREL POPESCU

Caracteristicile ereditii legate de sex pot fi rezumate astfel:


1) Raporturile fenotipice diferite obinute n cazul ncrucirilor
reciproce indic adesea ereditatea legat de sex.
2) Femelele heterozigote transmit fiecare alel legat de
cromozomul X la aproximativ jumtate din fiicele i jumtate
din fii lor.
3) Masculii care motenesc alela recesiv legat de cromozomul
X au caracterul recesiv deoarece cromozomul Y nu conine
alela corespondent de tip slbatic. Masculii afectai transmit
alela recesiv tuturor fiicelor lor i nici unuia dintre fii.
Oricare dintre masculii care nu sunt afectai este purttor al
alelei de tip slbatic n cromozomul su X.
Un exemplu de caracter uman cu ereditate legat de sex este
hemofilia A, o anomalie serioas a coagulrii sngelui determinat de o
alel recesiv. Persoanele afectate sunt lipsite de proteina sanguin
necesar pentru coagularea normal i acestea sufer sngerri excesive,
care pot amenina viaa, dup orice rnire. Un pedigree faimos de
hemofilie a nceput cu Regina Victoria a Angliei (Fig. 2.9). Unul dintre fii
si a fost hemofilic, iar dou dintre fiicele sale au fost purttoare
heterozigote ale genei. Dou dintre nepoatele reginei au fost de asemenea
purttoare, i prin cstorie au introdus gena n familia arist a Rusiei i
familiile regale ale Prusiei i Spaniei. Actuala familie regal a Angliei este
descendent dintr-un fiu normal al Victoriei i este neafectat de boal.

Brbat hemofilic
Femeie purttoare

Fig. 2.9. Pedigree ilustrnd transmiterea ereditar a hemofiliei


boal cauzat de o gen plasat pe cromozomul X.
56

GENETIC

La unele organisme, sexele homogametice i heterogametice sunt


inversate; aceasta nseamn c masculii sunt XX i femelele sunt XY.
Acest tip de determinism al sexului este gsit la psri (ZZ i ZW)
(Fig. 2.10), fluturi, molii, unele reptile i peti.

Fig. 2.10. Determinismul sexului este inversat la psri.


Inversarea determinismului sexelor are ca rezultat un model opus
de transmitere ereditar nereciproc a genelor legate de cromozomul X.
Nondisjuncia ca Dovad pentru Teoria Cromozomial a
Ereditii
Paralelismul dintre transmiterea ereditar a alelei pentru culoarea
alb a ochilor la Drosophila i transmiterea genetic a cromozomului X
a constituit o dovad n sprijinul teoriei cromozomiale a ereditii,
conform creia genele sunt pri ale cromozomilor. Dovada definitiv a
fost furnizat de alte experimente realizate cu Drosophila.
Unul dintre studenii lui Morgan, Calvin Bridges, a descoperit
abateri rare de la modelul ateptat de transmitere ereditar n cazul
ncrucirilor n care erau implicate cteva gene legate de cromozomul
sexului. De exemplu, cnd femele cu ochi albi au fost mperecheate cu
masculi cu ochi roii (Fig. 2.11), cea mai mare parte a descendenei a fost
constituit aa cum era de ateptat din femele cu ochi roii i masculi cu
ochi albi. Totui, aproximativ unul din 2000 de indivizi F1 fcea excepie,
fiind ori femel cu ochi albi, ori mascul cu ochi roii. Bridges a artat c
aceti descendeni excepional de rari sunt rezultatul eecului ocazional al
separrii celor doi cromozomi X ai mamei n cursul meiozei.
Consecina nondisjunciei cromozomului X este formarea unor
ou cu doi cromozomi X i a altora cu nici unul. In urma fertilizrii
acestor ou anormale sunt de ateptat patru clase de zigoi. Indivizi fr
cromozom X nu pot fi obinui deoarece embrionii lipsii de X nu sunt
viabili, iar majoritatea descendenilor cu trei cromozomi X mor ntr-o faz
57

AUREL POPESCU

timpurie de dezvoltare. Examinarea microscopic a cromozomilor la


descendenii excepionali rezultai din ncruciarea femele cu ochi albi x
masculi cu ochi roii a artat c femelele cu ochi albi aveau doi
cromozomi X plus un cromozom Y, iar masculii cu ochi roii aveau un
singur cromozom X, i erau lipsii de cromozomul Y. Acetia din urm,
avnd o constituie cromozomial notat XO, erau masculi sterili.

Fig. 2.11. Rezultatul ateptat al ncrucirii ntre female cu ochii albi


(XwXw) i masculi cu ochii roii (XwY).
Rezultatele experienelor lui Bridges au demonstrat concludent c
genele sunt plasate pe cromozomi, pentru c exist un paralelism perfect
ntre comportamentul cromozomilor i transmiterea ereditar a genelor.
Determinismul Sexului la Drosophila
Printre organismele cu determinism al sexului de tip XX-XY,
Drosophila este unul mai puin obinuit n sensul c cromozomul Y nu
determin sexul mascul. Aceasta s-a demonstrat prin descoperirea faptului
58

GENETIC

c embrionii XXY se dezvolt n femele morfologic normale i fertile, iar


embrionii XO se dezvolt n masculi morfologic normali, dar sterili.
Sterilitatea masculilor XO arat c cromozomul Y, dei nu este necesar
pentru dezvoltarea indivizilor masculi, este esenial pentru fertilitatea
acestora. Intr-adevr, la Drosophila, cromozomul Y conine un numr de
factori necesari pentru formarea de sperm normal.
Determinismul genetic al sexului la Drosophila depinde de
numrul de cromozomi X prezeni ntr-un individ, raportat la numrul de
seturi de cromozomi. Masculii normali au un cromozom X i dou seturi
haploide de autozomi, raportul X/A fiind aadar de 1/2. Femelele normale
au doi cromozomi X i dou seturi haploide de autozomi, raportul X/A
fiind aadar 1. Musculiele de oet cu raport X/A mai mic de 1/2 (de
exemplu cu un cromozom X i trei seturi de autozomi) sunt masculi, iar
cele cu raport X/A mai mare de 1 (de exemplu cu trei cromozomi X i
dou seturi de cromozomi) sunt femele. Raporturile X/A intermediare,
cum ar fi 2/3 (de exemplu doi cromozomi X i trei seturi de autozomi) au
ca rezultat apariia de indivizi intersexuai, prezentnd caracteristici ale
fiecrui sex.
Inlnuirea Genelor (fenomenul de linkage)
Studiul celor peste 500 de mutante de Drosophila melanogaster
i-a dus pe T.H. Morgan i colaboratorii si nu numai la constatarea c
genele trebuie s fie plasate n cromozomi, dar i la ipoteza c mai multe
gene trebuie s existe n acelai cromozom, aceasta fiind de altfel singura
explicaie logic a existenei unui numr foarte mare de gene i a unui
numr relativ mic de cromozomi. Aceast ipotez implica transmiterea
nlnuit (legat) la descendeni a tuturor genelor plasate ntr-un
cromozom, fenomen denumit linkage.
Primele indicaii referitoare la transmiterea nlnuit a genelor i
respectiv transmiterea mpreun a caracterelor pe care le codific aceste
gene, apruser n fapt nc din anul 1906, cnd W. Bateson i R.C.
Punnett, ocupndu-se de transmiterea caracterelor la Lathyrus odoratus,
semnaleaz un fapt interesant. Din ncruciarea a dou soiuri ale acestei
specii, unul cu flori purpurii (R/R) i grunciori de polen alungii (Ro/Ro)
i altul cu flori roii i grunciori de polen rotunzi (ro/ro), s-au obinut
n prima generaie plante dublu heterozigote (Rr/Roro) cu flori purpurii i
polen alungit, ntruct aceste caractere sunt dominante. In generaia a
doua ns, segregarea nu s-a produs n raport mendelian de 9:3:3:1, ci n
alte proporii. Rezultatele lor dovedeau faptul c plantele cu florii purpurii
59

AUREL POPESCU

prezint ntr-o msur mai mare polen alungit, iar plantele cu flori roii
polen rotund, n detrimentul celorlalte dou variante. Aadar, cele dou
caractere (flori purpurii i polen alungit pe de o parte, i flori roii i polen
rotund pe de alt parte) tind s se transmit mpreun, fenomen denumit
atunci de W. Bateson coupling (cuplaj). Aceste constatri i-au dus pe
Bateson i Punnett la concluzia c genele R i Ro sunt plasate pe acelai
cromozom, iar genele alele corespunztoare r i ro sunt plasate pe
cromozomul pereche. Ca urmare, genotipul homozigot dominant trebuie
scris R Ro/R Ro, cel homozigot recesiv r ro/r ro, iar cel dublu heterozigot
R Ro/r ro.

Prini

Gamei

Descendeni

Fig. 2.12. Transmiterea nlnuit a genelor (linkage).


T.H. Morgan i colaboratorii si au constatat un fapt similar n
urma ncrucirii unor mutante de Drosophila. De exemplu, prin
ncruciarea unei musculie normale (ca genitor patern) cu o musculi
60

GENETIC

care prezint dou mutaii recesive (aripi vestigiale i ochi purpurii)


trebuia s obin n F2 conform legilor lui Mendel, 4 tipuri de indivizi:
1) normali; 2) cu aripi normale i ochi purpurii; 3) cu aripi vestigiale i
ochi normali; 4) cu aripi vestigiale i ochii purpurii, n proporie de
9:3:3:1. Spre surprinderea lor, n generaia F2 au fost obinute numai dou
tipuri de indivizi: 1) normali; 2) cu aripi vestigiale i ochii purpurii, n
proporie de aproximativ 1:1 (519/552). Constatnd c fenomenul se
repet i n cazul altor mutante, n anul 1910 T.H. Morgan a concluzionat
c faptul se datoreaz plasrii pe acelai cromozom a celor dou gene
(care determin caracterele aripi vestigiale i ochi purpurii), i transmiterii
lor nlnuite, fenomen pe care l-a denumit linkage (Fig. 2.12).
Cele peste 500 de mutante descoperite de grupul lui Morgan la
Drosophila melanogaster, sunt prin urmare mprite n 4 grupe de
linkage (nlnuire), corespunztor celor 4 perechi de cromozomi, dup
cum urmeaz: grupa a I-a - 141 mutante; grupa a II-a - 228 mutante;
grupa a III-a - 156 mutante; grupa a IV-a - 12 mutante.
Faptul c numrul de grupe de nlnuire a genelor este egal cu
numrul de perechi de cromozomi este nc un argument incontestabil n
sprijinul tezei c genele sunt plasate pe cromozomi. Aa cum s-a constatat
n decursul anilor, exist o corelaie logic ntre mrimea cromozomilor i
numrul de gene pe care le conin. Spre exemplu, grupa a IV-a de linkage
la Drosophila, care cuprinde numai 12 gene, corespunde celei mai mici
perechi de cromozomi.
Ansamblul acestor observaii a stat aadar la baza elaborrii uneia
dintre tezele de baz ale teoriei cromozomiale, conform creia toate
genele plasate pe acelai cromozom se transmit la descendeni mpreun,
n bloc, formnd o singur grup de linkage.
Recombinarea Genetic
Organismele vii se caracterizeaz, printre altele, prin faptul c
ntre indivizii unei populaii, respectiv ai unei specii, exist nenumrate
deosebiri, att genotipice, ct i fenotipice. Fiecare individ constituie o
entitate unic i nerepetabil (exceptnd indivizii clonai), datorit
faptului c el prezint o anumit configuraie a factorilor genetici.
Deosebirile genotipice dintre indivizi se realizeaz n primul rnd
prin fenomenul recombinrii genetice, prin care informaia ereditar are
capacitatea de a circula n cadrul unei populaii. Recombinarea, care
este unul dintre fenomenele de baz ale geneticii, poate s apar pe
parcursul meiozei, caz n care este denumit recombinare meiotic, dar
61

AUREL POPESCU

poate de asemenea s se produc i n celulele care parcurg mitoza, caz n


care poart denumirea de recombinare mitotic sau somatic. La speciile
evoluate, frecvena recombinrii mitotice este foarte sczut comparativ
cu aceea a recombinrii meiotice, dar n ambele tipuri de recombinare
procesul este reciproc, constnd n schimbul anumitor gene ntre un grup
linkage i grupul omolog din cromozomul pereche.
Fenomenul recombinrii genetice are o importan biologic
extraordinar, acesta determinnd diferenierile genotipice ntre indivizii
unei populaii i respectiv ai unei specii, i nu n ulimul rnd posibilitile
foarte largi de adaptare i de supravieuire a organismelor.
Recombinarea genetic se realizeaz n principal n cadrul
procesului sexual, fapt care explic rspndirea sa extraordinar nu numai
la organismele evoluate, dar chiar i la procariote, cum sunt de exemplu
bacteriile.
La organismele eucariote, fenomenul de recombinare genetic se
realizeaz, n cadrul procesului sexual, pe trei ci:
1) prin disjuncia independent a perechilor de cromozomi n
cursul meiozei (recombinare intercromozomial);
2) prin crossing-over ntre cromozomii pereche (recombinare
intra-cromozomial);
3) prin conversie (recombinare genetic nereciproc).
Disjuncia Independent a Perechilor de Cromozomi
Studiul comparativ al mitozei i meiozei a artat c al doilea tip de
diviziune este cel care asigur libera combinare a cromozomilor i, pe
aceast baz, o mare variaie genotipic a gameilor i a descendenilor.
Cromozomii omologi care se asociaz n metafaza I formnd
bivaleni, se separ ulterior, fiecare pereche independent de celelalte, fapt
care determin combinarea pe baz de probabilitate a cromozomilor
provenii de la bunici. In mod logic, posibilitile de a forma mai multe
combinaii n cadrul gameilor sunt direct corelate cu numrul de perechi
de cromozomi.
Spre exemplu, dac se ncrucieaz dou specii care au 2n=6 i
dac pe fiecare pereche de cromozomi se afl cte o singur pereche de
gene, hibridul care rezult va moteni jumtate din cromozomii i factorii
ereditari ai fiecruia dintre genitori. Astfel, dac genitorul matern posed
genele AA BB CC i cel patern genele aa bb cc, hibridul va fi Aa Bb Cc.
In cursul diviziunii reducionale, acest hibrid va forma 8 tipuri de gamei
62

GENETIC

datorit faptului c n metafaza meiozei cromozomii omologi se grupeaz


n bivaleni (cte doi) i apoi migreaz la polii celulei n mod diferit,
indiferent de originea lor. Rezultatul este formarea a 8 tipuri de gamei
masculi i femeli diferii genotipic (ABC, ABc, AbC, Abc, aBC, aBc, abC,
abc), prin a cror combinare se vor obine 64 de indivizi diferii din punct
de vedere ereditar.
Cu ct este mai mare numrul cromozomilor i respectiv al
genelor n cromozomi, cu att este mai mare numrul combinaiilor
posibile ale gameilor. Astfel, dac n cazul unei specii cu 8 cromozomi i
cte o singur gen n cromozom, probabilitatea ca un gamet s fie diferit
de altul este egal cu (1/2)4 = 1/16, iar ca un individ s fie diferit de altul
este n consecin de (1/2)8 = 1/256, la o specie cu 20 de cromozomi (ex.
Zea mays) probabilitatea ca un gamet s fie diferit de altul este de (1/2) 10
= 1/1.024, iar ca un individ s fie diferit genotipic este de (1/2) 20 =
1/1.048.576. Dac am considera c la porumb sunt numai trei gene,
plasate una de alta la o distan suficient de mare, astfel nct s se poat
separa uor prin crossing-over, probabilitatea ca un individ s fie diferit
genotipic de alii ar fi de (1/2)60. Conform aprecierii lui W.R. Singleton
(1964), pentru a oferi spaiu tuturor combinaiilor genotipice posibile ntrun astfel de caz, ar fi necesar o suprafa de teren de 2.000 ori mai mare
dect cea a Pmntului.
La om (2n=46), dac am considera c pe fiecare cromozom se afl
o singur gen, probabilitatea ca o celul sexual (ovul sau spermatozoid)
s fie diferit de alta, este de (1/2)23, adic 1/8.388.608, iar ca un individ
s fie diferit genotipic de altul, de (1/2) 46, cifr care depete de multe
mii de ori populaia planetei. tiut fiind ns faptul c la om pe fiecare
cromozom se afl un numr mare de gene, i c ntre cromozomii
pereche se pot produce schimburi de segmente cromatidice, este evident
concluzia c numrul de combinaii posibile ale factorilor ereditari n
gamei, i respectiv numrul posibil de indivizi diferii genotipic, tinde la
infinit.
Inmulirea sexuat a organismelor determin aadar o mare
variabilitate genotipic a descendenilor, n primul rnd prin mecanismul
de combinare pe baz de probabilitate a cromozomilor n cursul diviziunii
reducionale. Pe lng aceasta, un rol important n sporirea variaiei
genotipice individuale revine fenomenului de schimb de segmente
cromatidice ntre cromozomii pereche (crossing-over) precum i genelor
extranucleare.
Fenomenul variaiei genotipice are o valoare biologic extrem,
reprezentnd suportul pentru caracterul unic al indivizilor, pentru
63

AUREL POPESCU

asigurarea adaptrii organismelor la variatele condiii de mediu i, n


ultim analiz, pentru asigurarea supravieuirii speciilor.
Recombinarea Genelor ntre Cromozomii Pereche (crossingover)
Studiul mecanismului de transmitere ereditar a artat c nu
ntotdeauna genele care fac parte din aceeai grup de linkage, deci
plasate n acelai cromozom, se transmit nlnuite, i c de la acest mod
de transmitere a informaiei genetice exist unele excepii. Respectivele
abateri au fost explicate prin posibilitatea realizrii unui schimb reciproc
de gene ntre cromozomii pereche, printr-un proces care a fost denumit
crossing-over.

ovule

sperma

Fig. 2.13. Recombinarea genetic prin crossing-over la ncruciarea unei


femele de Drosophila de tip slbatic cu un mascul dublu-mutant.
64

GENETIC

Un astfel de caz a fost observat atunci cnd o femel de tip


slbatic (cu corp gri i aripi normale b+ b+ vg+ vg+) a fost mperecheat cu
un mascul dublu-mutant (cu corp negru i aripi vestigiale b b vg vg). In
prima generaie (F1) au rezultat descendeni (female i masculi) cu fenotip
normal (cu corp gri i aripi normale) (Fig. 2.13). Rencruciarea femelelor
heterozigote din F1 (b+ b vg+ vg) cu masculi dublu-mutani (b b vg vg) a
avut ns ca rezultat apariia n descenden a patru tipuri de indivizi, n
urmtorul raport: 965 femele de tip slbatic (cu corp gri i aripi normale
b+ b+ vg+ vg+); 944 masculi dublu-mutani (cu corp negru i aripi vestigiale
b b vg vg); 206 femele cu un caracter normal i unul mutant (corp gri i
aripi vestigiale b+ b vg vg); 185 masculi cu un caracter normal i unul
mutant (corp negru i aripi normale b b vg+ vg).
In mod similar, la ncruciarea femelelor de Drosophila
melanogaster care prezentau concomitent dou mutaii recesive (Xy w Xy
w), i anume corpul galben (y = yellow) i ochii albi (w = white), genele y
i w fiind plasate pe cromozomii sexului (X X), cu un mascul (la care
cromozomii sexului sunt diferii, respectiv X Y) normal, cu corpul gri i
ochi roii (Xy+w+ Y), s-au obinut n prima generaie (F1) femele
heterozigote normale (Xyw Xy+w+) i masculi ce prezentau ambele mutaii
(Xyw Y). Prin ncruciarea indivizilor masculi i a femelelor din F 1 s-a
obinut n a doua generaie (F2) o descenden la care caracterele
respective au segregat n raportul prezentat n Tabelul 2.3. In generaia a
doua (F2) ar fi trebuit s rezulte n proporii egale indivizi masculi i
femele cu corp galben i ochi albi (50%) i respectiv cu corp gri i ochi
roii (50%). Apariia ntr-o proporie redus (1.5%) a masculilor i
femelelor cu corp galben i ochi roii, sau cu corp gri i ochi albi,
demonstreaz c ntre genele y i y+ pe de o parte, i ntre w i w+ pe de
alt parte, s-a produs o recombinare, datorit faptului c genele yw plasate
pe un cromozom X, i y+w+ plasate pe cellalt cromozom X, nu s-au mai
transmis nlnuite, ci s-au separat una de alta. Aadar, ntre cromozomii
pereche a avut loc un schimb de gene alele, avnd ca rezultat
recombinarea genetic prin procesul de crossing-over.
Procesul de crossing-over nu se realizeaz exclusiv ntre genele de
pe cromozomii sexului, ci i ntre cele plasate n autozomi. Ca i n cazul
cromozomilor sexului, linkage-ul autozomal poate fi absolut (sau
complet), toate genele unei grupe de linkage segregnd mpreun, sau
poate fi relativ (sau incomplet), unele gene devenind separate de celelalte
ntr-un anumit procentaj de segregri. Efectul imediat al recombinrii este
disocierea dintr-o legtur a unor gene i formarea unei noi grupe linkage
cu genele cromozomului omolog.
65

AUREL POPESCU

Tabel 2.3. Segregarea n F2 a unor gene sex-linkate la Drosophila


melanogaster (n cazul unei descendene formate dintr-un numr egal de
masculi i femele).

Xyw

Genotipuri

Xyw

Xyw Xyw
49.25%

Xyw Y
49.25%

Nerecombinate

Xy+w+

Xy+w+ Xyw
49.25%

Xy+w+ Y
49.25%

(98.5%)

Xyw+

Xyw+ Xyw
0.75%

Xyw+ Y
0.75%

Recombinate

Xy+w

Xy+w Xyw
0.75%

Xy+w Y
0.75%

(1.5%)

Un exemplu de crossing-over realizat la nivelul autozomilor a fost


oferit de studiul modului de transmitere ereditar a caracterelor la dou
mutante de Drosophila melanogaster, una care prezenta aripi vestigiale
(vg) i corp gri normal (b+) i alta cu aripi normale (vg+) i corp negru (b),
respectivele caractere fiind determinate de gene plasate n cromozomii
care formeaz perechea a II-a.
Prin ncruciarea femelei vg b+/vg b+ cu un mascul vg+ b/vg+ b, n
prima generaie au aprut numai indivizi normali (aripi normale i corpul
gri fiind caractere dominante). In urma retroncrucirii (back-cross) unei
femele din prima generaie cu un mascul care prezenta ambele caractere
mutante recesive, adic aripi vestigiale i corp negru (vg b/vg b),
descendena nu a segregat n raportul de 1/2 (sau 50%) indivizi cu aripi
vestigiale i corp normal, i 1/2 indivizi cu aripi normale i corp negru, ci
n proporiile urmtoare:
41.5% masculi i femele b b vg vg;
41.5% masculi i femele b+ b vg+ vg;
66

GENETIC

8.5% masculi i femele b b vg+ vg;


8.5% masculi i femele b+ b vg vg.
Apariia ultimelor dou categorii de indivizi este rezultatul
fenomenului de recombinare genetic, produs prin schimbul de gene ntre
cromozomii pereche.
Crossing-overul mitotic
Recombinarea furnizeaz informaia esenial pentru cartarea
genetic, prin care genele sunt ordonate pe baza relaiei lor n interiorul
grupelor de linkage. Fenomenul de crossing-over mitotic a fost utilizat
extensiv pentru alctuirea hrilor genetice la organismele la care n ciclul
de via predomin haplofaza (de exemplu: Saccharomyces cerevisiae,
Aspergillus nidulans, etc.), dar i la organismele la care diplofaza este
preponderent n ciclul de via.
Cercetrile realizate de Stern (1939) cu Drosophila melanogaster
au artat c prin ncruciarea unor indivizi normali ca fenotip, dar
heterozigoi pentru dou gene recesive (y+ sn / y sn+) care determin
culoarea galben a corpului (y) i respectiv lipsa perilor de pe corp (sn),
n procesul diviziunii mitotice apar celule homozigote pentru gena y
(y sn / y sn+) sau pentru gena sn (y+ sn / y sn). O astfel de recombinare a
genelor reprezint cauza apariiei la unii indivizi a fenomenului de
mozaicism, caracterizat prin prezena regiunilor de corp de culoare
galben sau lipsite de peri.
Geneticianul american J.H. Taylor (1957) a adus dovezi
incontestabile pentru existena crossing-overului somatic, bazate pe
rezultatele studiului diviziunii celulare la planta Bellevalia romana
(2n = 8) cu ajutorul metodei autoradiomicrografiei. Taylor a introdus timp
de 8 ore rdcini tinere (n care celulele se aflau n diviziune mitotic
activ) ale plantelor de Bellevalia ntr-o soluie nutritiv, la care a adugat
timidin marcat cu tritiu (3H = izotopul radioactiv al hidrogenului), prin
dezintegrarea cruia rezult heliu i emisia de particule de slab energie,
ce impresioneaz placa fotografic. Prin transferul rdcinilor ntr-o
soluie fr timidin marcat (mediu rece), la care s-a adugat
colchicin pentru blocarea diviziunii celulelor (clivajul cromozomilor
nefiind ns blocat), s-a putut determina cte diviziuni ale cromozomilor
au avut loc dup scoaterea rdcinilor din mediul radioactiv. Preparatele
microscopice de tip squash acoperite cu plci fotografice au artat c n
prima metafaz care urmeaz dup introducerea rdcinilor n mediul
67

AUREL POPESCU

rece, ambii cromozomi ai unei perechi sunt radioactivi n mod egal. S-a
constatat ns c n metafaza celei de a doua diviziuni n fiecare pereche
se afl un cromozom radioactiv i altul rece. Taylor a observat de
asemenea c n unele celule exist cromozomi n ntregime reci i alii
n ntregime calzi, dar reci la un capt. In mod similar, au fost
observate celule cu un cromozom n ntregime cald i altul rece n cea
mai mare parte, dar cald la un capt. Acest experiment a dovedit aadar
c n cursul diviziunii mitotice s-a produs un schimb de fragmente ntre
cromatidele cromozomilor omologi, deci recombinarea genelor plasate n
respectivele fragmente.
Frecvena crossing-overelor
Frecvena cu care se poate realiza recombinarea prin fenomenul de
crossing-over este dependent nu de genele n sine, ci de arhitectura
locilor n care sunt plasate. In general, aceasta este foarte redus i numai
n cazuri rare se apropie de limita superioar de 50%, valoare care
corespunde segregrii independente a caracterelor, conform legilor
mendeliene.
Rezultatele unui numr mare de experimente au demonstrat c la
Drosophila melanogaster, spre exemplu, frecvena recombinrii variaz
n limite largi, n funcie de genele implicate (afectate). Astfel, ntre
genele black i brown aceasta atinge 41.0%, ntre sepia i ebony
35.5%, ntre vestigial i brown 28.6%, iar ntre yellow i white
frecvena de recombinare este de aprox. 1.0%.
Calcularea direct a procentului de recombinare se poate efectua
prin analiza genetic, conform procedeului urmtor: se ncrucieaz un
organism care prezint dou gene, una dominant i una recesiv, n stare
homozigot (Ab/Ab), cu un altul care prezint de asemenea cele dou gene
n stare homozigot, gena recesiv i cea dominant fiind ns inversate
(aB/aB), i se obine n prima generaie (F1) o descenden n totalitate
dublu heterozigot (Ab/aB). In cazul cnd genele sunt plasate pe
cromozomi diferii, n urma efecturii unui backcross ntre o femel dublu
heterozigot din F1 i un mascul dublu recesiv homozigot (adic Ab/aB x
ab/ab), se va produce segregarea independent, conform legilor
mendeliene. Prin urmare, femela va produce 4 tipuri de gamei n
proporii egale (AB, Ab, aB, ab), iar masculul un singur tip de gamei
(ab). In descendena se vor obine patru tipuri de descendeni, n proporii
egale, dintre care dou tipuri parentale (25% Ab/ab; 25% aB/ab) i dou
tipuri recombinate (25% AB/ab; 25% ab/ab).
68

GENETIC

In cazul n care genele sunt plasate pe acelai cromozom, cele


dou categorii de indivizi de tip parental prezint o frecven mai mare
dect cele recombinate.
Frecvena recombinrilor poate fi de asemenea calculat pe baza
rezultatelor ncrucirilor ntre organisme dublu heterozigote din F1. In
cazul descris mai sus, aceasta nseamn ncruciarea ntre indivizi normali
i indivizi care prezint concomitent dou mutaii, adic AB/AB x ab/ab,
din care vor fi obinui n F 1 exclusiv descendeni de tipul AB/ab, care vor
produce patru tipuri de gamei (AB, Ab, aB, ab), din combinarea crora
vor rezulta att indivizi de tip parental, ct i de tip recombinat.
Mecanismul citologic al crossing-overului
Teoriile propuse pentru explicarea mecanismului crossingoverului pot fi incluse n dou categorii:
1. Teorii care consider c fenomenul de crossing-over se
datoreaz ruperii cromatidelor i schimbului reciproc de
segmente cromatidice (breakage theory);
2. Teorii care consider ca fenomenul de crossing-over este
cauzat de copierea (replicaia) selectiv a cromatidelor n
timpul sintezei materialului cromozomial (copy-choice
theory).
Dintre teoriile incluse n prima categorie, cea mai cunoscut este
teoria chiasmatipiei, elaborat de F.A. Jannsen (1924), dezvoltat de C.D.
Darlington i K. Mathei (1932) i verificat cu ajutorul izotopilor
radioactivi de J.H. Taylor ntre anii 1957-1963. Conform acestei teorii, n
profaza meiozei, ntre leptoten i pachiten, cromozomii omologi (unul de
origine matern i unul de origine patern) se mperecheaz formnd
sinapse, datorit faptului c conin gene alele. In fazele urmtoare, i
anume ntre pachiten i diploten, cromozomii se separ longitudinal, nct
fiecare apare ca fiind format din dou cromatide. Intre cele patru
cromatide ale unei perechi de cromozomi omologi exist puncte de
contact numite chiasme. Teoria chiasmatipiei se bazeaz pe ipoteza unui
schimb reciproc de segmente cromatidice egale ntre cromozomii pereche,
naintea fazei de diplonem, iar fenomenul a fost denumit chiasmata. Ca
urmare, din cele patru cromatide ce se transform n cromozomi
independeni i se distribuie n cei patru gamei, dou sunt nerecombinate
iar celelalte dou au suferit un proces de recombinare genetic, realizat
69

AUREL POPESCU

prin schimbul reciproc de gene (Fig. 2.14). Trebuie, n acest context,


menionat faptul c numai dou dintre cele patru cromatide ale unei
perechi de cromozomi pot fi afectate de chiasmata. Ca urmare, frecvena
crossing-overului ntre doi cromozomi omologi nu poate depi 50%.

Fig. 2.14 Schimbul de segmente de cromatide ntre cromozomii omologi


prin crossing-over.
Cercetrile de citologie i citogenetic au permis evidenierea
posibilitii realizrii mai multor chiasme simultan, n special ntre
cromatidele cromozomilor lungi, fapt care st la baza apariiei
fenomenului de crossing-over dublu, crossing-over triplu, etc. Astfel,
observaiile lui Mather (1937) au confirmat c la lcustele din genul
Stenobothrus, la care cromozomii au mrimi foarte variabile, ntre
lungimea cromozomilor i numrul mediu de chiasme exist o strns
corelaie, reflectat n existena unei singure chiasme la cromozomii
foarte scuri i n creterea numrului de chiasme la cromozomii lungi,
proporional cu lungimea acestora.
S-a constatat c repartiia chiasmelor de-a lungul cromozomilor se
face dup anumite reguli. Astfel, prima chiasm apare de obicei la o
anumit distan de centromer, denumit distan diferenial. Aceast
distan este mai mic la cromozomii scuri i mai mare la cei mai lungi.
Diferitele chiasme de pe acelai bra cromozomial sunt separate ntre
ele prin intervale constante la aceeai specie, denumite distane de
interferen.
Pentru a explica forele care determin ruperea cromatidelor i
respectiv schimbul de fragmente de cromatide, C.D. Darlington (1935) a
emis ipoteza c acestea ar fi cauzate de tensiunea creat asupra
cromatidelor externe, mai mare dect cea exercitat asupra cromatidelor
interne, n stadiul de zigonem, cnd cromozomii omologi sunt strns
rsucii unul n jurul altuia. Ca urmare, cromatidele se rup, se deruleaz
parial i apoi se sudeaz fie n cadrul aceleeai cromatide, astfel c
70

GENETIC

fenomenul de crossing-over nu are loc, fie cu cromatida pereche a


cromozomului omolog (Fig. 2.14), caz n care se produce crossing-overul
(schimbul de gene).
In anul 1942, M.J.D. White a emis o alt ipotez pentru explicarea
fenomenului de crossing-over, pornind de la premisa c, n timp ce are loc
fenomenul de sinaps, ntre cromatidele celor doi cromozomi omologi
exist o atracie care ulterior se transform n repulsie, odat cu clivarea
cromozomilor. In stadiul de diachinez, cromozomii omologi prezint
bucle succesive, datorit faptului c fisurarea lor este mpiedicat de
prezena chiasmelor. Ca urmare a tensiunii care se creaz n cazurile cnd
zone n care se manifest atracia se suprapun cu zone n care se manifest
repulsia cromatidelor, se poate produce ruperea cromatidelor interne i
sudarea invers a acestora, avnd ca rezultat schimbul de segmente de
cromatide ntre cromozomii pereche.
Teoria copierii selective a cromatidelor n timpul replicrii
cromozomului, consider c fenomenul de crossing-over se realizeaz de
fapt n timpul perioadei S din cursul ciclului celular, n care are loc
sinteza ADN. Intruct att sinteza ADN, ct i a materialului cromozomial
n ansamblu, se realizeaz dup tipul semiconservativ, se consider c la
un moment dat, replicaia cromozomului (prin care se formeaz cele dou
cromatide) se realizeaz nu dup matria proprie, ci dup matria
cromozomului pereche i invers. Ca urmare, cromatidele nou sintetizate
copiaz o parte a materialului genetic de pe un cromozom i o parte de pe
cromozomul pereche. Rezultatul este apariia de cromatide recombinate,
posednd gene de pe ambii cromozomi pereche. Aceast teorie a fost ns
infirmat prin demonstrarea producerii fenomenului de crossing-over i n
afara fazei S a ciclului celular.
Verificarea experimental a acestor ipoteze s-a realizat prin
marcarea cu 15N a ADN-ului unor bacteriofagi, cu care au fost infectate
bacterii cultivate pe mediu coninnd 14N, mediu pe care bacteriofagii nou
formai nu puteau conine dect 14N n ADN-ul lor. Analiza ADN-ului de
la bacteriofagii aprui prin liza bacteriilor cultivate pe mediu coninnd
14
N a artat prezena n acesta a unei anumite proporii de 15N, indicnd
aadar c ruperea i sudura moleculelor de ADN are loc n timpul n
care ele posed o structur bicatenar. Prin urmare s-a demonstrat c
dintre cele dou ipoteze, prima este cea exact. Pe baza rezultatelor
experimentale s-a demonstrat de asemenea c recombinarea genetic
poate afecta regiuni foarte mici ale ADN, chiar pn la o singur pereche
de nucleotide.
71

AUREL POPESCU

Recombinarea Genetic Nereciproc (Conversie)


Spre deosebire de recombinarea genetic reciproc, care se
realizeaz prin crossing-over, recombinarea genetic nereciproc apare ca
rezultat al fenomenului de conversie. Existena acestui fenomen a fost
sesizat de C. Lindgren (1919), n urma studierii recombinrii genetice
la diferite specii de ciuperci din genurile Saccharomyces, Neurospora,
Aspergillus, etc.
Conversia se manifest prin aceea c descendena haploid a
nucleului heterozigot diploid (a+ a) nu prezint raportul normal de
segregare, respectiv 1:1, una dintre alele avnd o frecven mai mare
dect cealalt (Fig. 2.15). Astfel, la ciuperci, n locul raportului de
segregare normal 4:4 se ntlnesc raporturile de 5:3; 6:2; 7:1; 8:0. S-a
demonstrat c frecvena recombinrii genetice nereciproce variaz la
diferite gene, iar n interiorul unei gene frecvena conversiei crete de la
un cap la altul. Fenomenul de polarizare a conversiei n interiorul
aceleeai gene a primit denumirea de polaron.

Fig 2.15. Conversia genic nlocuiete alela B- de pe cromozomul figurat


n partea de jos (linie ngroat) cu alela B+. Observai c aranjamentul
(distribuia) alelelor de pe cromozomul figurat n partea de sus
(linie subire) nu s-a schimbat.
La cteva gene implicate n determinismul pigmenilor din plante
heterozigote cum ar fi Licopersicum, Zea, etc., a fost pus n eviden
conversia somatic. La astfel de indivizi heterozigoi, mutaiile pe care
una dintre alele le sufer n anumite celule pot fi direcionate spre alela
pereche, sau ntr-o alt direcie, avnd ca rezultat apariia fenomenului de
mozaicism n ceea ce privete pigmentaia.
Fenomenul de conversie a fost observat i la bacteriile lizogene,
care conin profagi i din aceast cauz dobndesc caracteristici noi
privind producerea de toxine, sensibilitatea la infecii cu alte virusuri, sau
i modific particularitile antigenice. Acest tip de conversie se numete
conversie fagic i este cel mai probabil cauzat de adiia de material
genetic la genomul bacterian.
72

GENETIC

Conversia genic are loc n cursul meiozei i se consider c se


realizeaz n dou etape:
1. In prima etap are loc transferul a 100-200 nucleotide din
molecula de ADN de pe o cromatid, pe alta, formndu-se
astfel scurte secvene de ADN hibrid;
2. In cea de a doua etap are loc corecia mperecherilor greite
dintre nucleotide n cadrul ADN hibrid, n timpul sau imediat
dup recombinarea intergenic prin crossing-over. Ca urmare
s-a observat existena unei corelaii ntre fenomenul crossingover i frecvena conversiei n imediata vecintate.
Un mecanism similar determin conversia i n cazul diviziunii
mitotice (conversie somatic), precum i la organismele procariote
(conversie fagic).
Recent s-a descoperit c exist trei tipuri de conversie genic
(Fig. 2.16): a) nealelic sau interlocus n trans (ntre copii ale unor gene
nealelice rezidente pe cromatide surori sau cromozomi omologi);
b) nealelic sau interlocus n cis (ntre copii ale unor gene nealelice
rezidente pe aceeai cromatid). Evenimentele de conversie genic sunt
practic indistinctibile unul de altul; c) interalelic (ntre alele rezidente pe
cromozomi omologi).

Fig. 2.16. Tipuri de converise genic (recombinare genetic nereciproc)


(dup Chen i colab., 2007).
73

AUREL POPESCU

Mecanismul mperecherii
sinaptinemal

cromozomilor

complexul

Studiul electrono-microscopic al cromozomilor omologi a artat


c, n anumite faze, acetia conin o structur denumit complex
sinaptinemal.
Complexul sinaptinemal este alctuit din trei componente
longitudinale paralele: dou elemente laterale, avnd o grosime de
aproximativ 300-400 i un element central, cu o grosime de 120-200 .
Intre elementele laterale i cel central se gsesc numeroase filamente
transversale fine, cu diametrul de circa 20 . Din punctul de vedere al
compoziiei chimice, complexul sinaptinemal este o structur distinct de
cea a cromozomilor, fiind format n principal din proteine bazice bogate
n arginin.
In profaza timpurie, i anume n leptoten, cromatina se
condenseaz sub forma unor fire lungi i fine, n aceast faz cromozomii
fiind greu de identificat. In zigoten cromozomii apar sub form de
perechi, unii pe ntreaga lor lungime, iar n pachiten perechile de
omologi se scurteaz prin contracie, rmnnd ns strns unite. Ulterior
cromozomii omologi se separ formnd o configuraie numit diploten,
cu excepia ctorva regiuni n care se realizeaz ruperi-reuniri i ca
urmare schimburi reciproce de fragmente cromatidice. In aceast faz
cromatidele devin vizibile i locurile n care se produc schimburile de
material genetic ntre cromatide prezint o configuraie caracteristic
denumit chiasm (Fig. 2.17).
Complexele sinaptinemale tipice sunt caracteristice pentru
pachiten, dar ele pot fi observate parial la microscopul electronic i n
leptoten i zigoten. In leptoten, cromozomii nemperecheai dezvolt axe
singulare, dense, fiecare dintre ele corespunznd unui element lateral al
viitorului complex sinaptinemal. In pachiten, complexe sinaptinemale
deplin formate pot fi gsite de-a lungul ntregii lungimi a cromozomilor
omologi. In diploten, complexele sinaptinemale se dezagreg repede, pe
msur ce cromozomii omologi se deprteaz.
Primele cercetri de citogenetic au artat c fenomenul crossingover are loc n zigoten-pachiten. Cercetrile ulterioare au relevat c
crossing-overul coincide n timp cu formarea complexelor sinaptinemale
i sinapsa cromozomilor omologi. In prezent se consider c mecanismul
genetic al recombinrii genetice are ca suport existena complexelor
sinaptinemale. Trebuie ns menionat faptul c, dei prezena
complexelor sinaptinemale este necesar pentru producerea crossing74

GENETIC

overului, prezena acestui complex nu determin n mod obligatoriu


realizarea schimburilor de material genetic.
Sinapsele dintre braele cromozomilor i prezena chiasmelor n
diploten au un rol precis n crossing-over, dar precizia acestor mecanisme
este relativ redus. Astfel, s-a constatat c sinapse se pot forma i ntre
cromozomi non-omologi, sau ntre braele aceluiai cromozom.

Fig. 2.17. Formarea de chiasme ntre cromatidele cromozomilor omologi


(imagine electronomicroscopic).
Analizele moleculare au indicat c n complexul sinaptinemal,
ADN este absent n elementul central, dar prezent n cantiti foarte mici
n elementele laterale. Pentru disjuncia cromozomilor omologi este
necesar sinteza unui ADN adiional, care realizeaz separarea lor de
complexele sinaptinemale n faza de tranziie de la pachinem la diplonem.
Rezultatele unor cercetri au indicat c n ataarea cromozomilor omologi
de complexele sinaptinemale i n sinteza reparatoare consecutiv
fenomenelor de rupere-reunire, sunt implicate patru fracii mici de ADN,
care sunt sintetizate n profaza meiozei. Se consider c mperecherea
cromozomilor omologi n meioz se realizeaz n trei etape:
1) mperecherea premeiotic sau alinierea cromozomilor
omologi, urmat de sinaps mediat de complexul
sinaptinemal;
2) mperecherea molecular intim ntre segmente scurte de ADN
coninnd secvene similare de nucleotide;
3) formarea moleculelor de ADN heteroduplex, care determin
apariia crossing-overelor.
A fost emis ipoteza existenei unor gene ce codific proteine de
mperechere, cu rol n sinapsa cromozomilor, proteine alosterice capabile
s se uneasc specific cu o anumit secven de nucleotide.
Complementaritatea se realizeaz cu ajutorul unor configuraii ale
75

AUREL POPESCU

suprafeei cromozomilor, ce permit realizarea unor sinapse foarte intime.


Legtura dintre proteinele alosterice i secvenele specifice de baze ale
macromoleculei de ADN este suficient de puternic pentru a sigura o
mperechere stabil a cromozomilor.
Un alt model de mperechere a cromozomilor, are la baz ipoteza
existenei unor proteine de mperechere bivalente, cu dou regiuni
distincte pentru recunoaterea ADN. Se presupune c sinteza acestor
proteine ar fi codificat de ctre o gen de fuziune, rezultat dintr-un
crossing-over inegal.
Recombinarea genetic la eucariote are loc ntotdeauna dup ce
cromozomii s-au replicat, i implic numai cte o cromatid a fiecrui
cromozom omolog. Cercetrile de genetic molecular au permis
evidenierea sintezei n perioada premeiotic pn n faza de zigoten, de-a
lungul ntregului cromozom, a unei cantiti mici de ADN bogat n
legturi de tip guanin - citozin. Se consider c acest ADN nou
sintetizat, care reprezint numai 0.3% din cantitatea total de ADN, ar
avea un rol important n realizarea legturilor ntre cromozomii omologi,
deoarece adugarea n aceast faz a unui inhibitor al sintezei de ADN,
provoac fragmentarea cromozomului.
In procesul de recombinare genetic intervin mai multe enzime:
endonucleaze, care rup legturile monocatenei de ADN de la capetele
moleculei (5-hidroxil i 3-fosforil), o fosfataz, care defosforileaz
captul 3 al moleculei, o polinucleotid-kinaz, care fosforileaz captul
5 i o polinucleotid-ligaz, care determin legtura 3-hidroxil i
5-fosforil. Aceste enzime au activitate maxim n zigotenul trziu sau
pachitenul timpuriu i sinteza lor este corelat direct cu fenomenul
recombinrii genetice. Enzimele acioneaz de-a lungul complexului
sinaptinemal, determinnd recombinarea prin crossing-over n anumite
puncte fixe de deschidere a macromoleculei de ADN.

76

GENETIC

3.

STRUCTURA MOLECULAR A CROMOZOMULUI


LA EUCARIOTE

Cromozomii variaz ca mrime i proprieti structurale, i ADNul lor difer n compoziie i aranjamentul secvenelor de nucleotide. Cele
mai pronunate diferene n ceea ce privete structura i organizarea
genetic sunt ntre cromozomii eucariotelor i cei ai procariotelor. Unii
cromozomi virali sunt n special deosebii, constnd dintr-o singur
molecul monocatenar (mai degrab dect dublu catenar) de ADN sau,
la un numr mic de virusuri, din una sau mai multe molecule de ARN
n loc de ADN. De asemenea, celulele eucariotice conin mai muli
cromozomi, fiecare dintre acetia coninnd o molecul superrsucit de
ADN, pe cnd procariotele conin un singur cromozom (plus, ocazional,
cteva copii ale uneia sau mai multor molecule circulare mici de ADN,
denumite plasmide).
Complementul genetic al unei celule sau virus formeaz ceea ce se
numete genom. La eucariote, acest termen este utilizat n mod obinuit
(n genetic i biologia molecular) pentru a face referire la totalitatea
genelor i secventelor necodante ale ADN/ARN.
Mrimea Genomului i Complexitatea Evolutiv
Msurarea coninutului de acid nucleic al genomurilor virusurilor,
bacteriilor, i eucariotelor inferioare i superioare, a condus la urmtoarea
generalizare: mrimea genomului crete considerabil odat cu
complexitatea evolutiv. Aceasta nseamn c molecula unic de acid
nucleic a unui virus tipic este mai mic dect molecula de ADN dintr-un
cromozom bacterian; eucariotele unicelulare, cum sunt drojdiile, conin
mai mult ADN dect o bacterie tipic, iar ADN este organizat n mai muli
cromozomi; eucariotele multicelulare au cea mai mare cantitate de ADN
(Fig. 3.1). Totui, la eucariotele superioare nu exist o corelaie ntre
complexitatea evolutiv i cantitatea de ADN, coninutul de acid nucleic
nefiind direct proporional cu numrul de gene (Tabel 3.1).
Bacteriofagul MS2 este unul dintre virusurile cele mai mici, avnd
numai patru gene coninute ntr-o molecul monocatenar de ARN
format de 3.569 de nucleotide. Virusul SV40 care infecteaz celulele de
maimu i umane, are un complement genetic de cinci gene, acestea fiind
coninute ntr-o molecul circular dublu catenar de ADN constnd din
aproximativ 5.000 de perechi de nucleotide (Tabel 4.1). Moleculele mari
77

AUREL POPESCU

de ADN sunt msurate n perechi de kilobaze (kb), sau mii de perechi de


baze. Genomul virusului SV40 are o mrime de circa 5 kb.
Fagii mai compleci i virusurile animalelor au pn la 250 de
gene i molecule de ADN a cror mrime variaz de la 50 la 300 kb.
Genomurile bacteriene sunt considerabil mai mari. De exemplu,
cromozomul de E. coli conine aproximativ 3.000 de gene ntr-o molecul
de ADN compus din circa 4.700 kb.

Fig. 3.1. Mrimea genomurilor (n numr de perechi de baze / genom


haploid). Se constat c genomul mamiferelor (incluznd omul) este mai
mic dect cele ale protistelor, plantelor, petilor cartilaginoi i
amfibienilor (dup Hardin, Bertoni & Kleinsmith, 2012).
Eucariotele au un aparat genetic mai complex. Genomurile lor
sunt mpachetate n cromozomi. Numrul de cromozomi este caracteristic
unei specii particulare, aa cum s-a menionat n Capitolul 2. Pe msur ce
se nainteaz pe scara evolutiv a animalelor sau plantelor, coninutul de
ADN per genom haploid are tendina general de cretere, dar exist
78

GENETIC

destule excepii. Unul dintre cele mai mici genomuri la un animal


multicelular este cel al nematodului Caenorhabditis elegans, care conine
o cantitate de ADN de aproximativ 20 de ori mai mare dect cea din
genomul de E. coli. Genomurile de Drosophila melanogaster i Homo
sapiens conin o cantitate de ADN de aproximativ 40 i respectiv 700 de
ori mai mare dect aceea din genomul de E. coli. Genomurile unor
amfibieni i peti sunt foarte mari, depind de multe ori mrimea
genomurilor de mamifere.
Tabel 4.1 Coninutul de ADN n unele genomuri virale, bacteriene i
eucariotice reprezentative.
Genomul

Nr. aproximativ de (kb)*

Virusul
SV40
X174
M13

Herpes simplex
T2

5
5
6
50
152
165

Bacteria
Mycoplasma hominis
Escherichia coli
Eucariota
Saccharomyces cerevisiae
Caenorhabditis elegans (nematod)
Arabidopsis thaliana
Drosophila melanogaster
Homo sapiens
Zea mays
Amphiuma sp.

760
4.700
Numr haploid
de cromozomi
16
6
10
4
23
10
14

15.000
100.000
100.000
165.000
3.200.000
4.500.000
76.500.000

* kb = kilobaze, sau mii de perechi de baze. Lungimea molecular


aproximativ n m poate fi calculat prin mprirea lungimii n perechi
79

AUREL POPESCU

de baze la 3.000. Masa molecular aproximativ poate fi calculat prin


nmulirea lungimii n perechi de baze cu 660.
Genomurile organismelor superioare sunt extrem de mari
teoretic suficient de mari pentru cele aproximativ 106 gene ale indivizilor
umani sau 25 x 106 ale salamandrelor din specia Amphiuma (Tabel 3.1).
Totui, din motive variate, numrul actual de gene este la aceste dou
specii mult mai mic dect cel maxim teoretic. De exemplu, coninutul de
ADN per celul al unor specii strns nrudite de salamandre difer de
pn la 30 de ori, dei ele trebuie s aib cam acelai numr de gene.
Se pare c la organismele superioare cea mai mare parte din ADN are alte
funcii dect aceea de nregistrare a informaiei genetice.
O trstur remarcabil a aparatului genetic al eucariotelor este
divizarea precis n fiecare diviziune celular a cantitii enorme de
material genetic coninut n nucleul fiecrei celule. Genomul haploid
uman coninut ntr-un gamet are un coninut de ADN echivalent unei
molecule liniare cu lungimea de 1 metru (106 m). Cel mai mare dintre cei
23 de cromozomi ai genomului uman conine o molecul de ADN cu
lungimea de 82 mm (8.2 x 10 4 m). Totui, n metafaza diviziunii
mitotice, molecula de ADN este condensat ntr-o structur compact de
aproximativ 10 m lungime i mai puin de 1 m n diametru.
Genomurile procariotelor i virusurilor, dei sunt mult mai mici dect
genomurile eucariotelor, sunt de asemenea foarte compacte. De exemplu,
un cromozom de E. coli, care conine o molecul de ADN lung de
aproximativ 1.500 m, este coninut ntr-o celul lung de aproximativ
2 m i cu diametrul de 1 m. Modul n care se ajunge la aceast
compactare va fi descris ntr-unul din subcapitolele urmtoare.
Superrsucirea ADN
ADN din cromozomii procariotelor i eucariotelor este superrsucit, adic segmentele dublu catenare sunt rsucite unul n jurul altuia.
Geometria superrsucirii poate fi ilustrat printr-un exemplu simplu.
Considerai nti o molecul liniar dublu catenar de ADN ale crei
capete sunt unite astfel nct fiecare caten formeaz un cerc continuu.
O astfel de molecul de ADN este denumit cerc covalent i se spune c
este relaxat dac nu este supus n continuare rsucirii. Catenele
polinucleotidice individuale ale unui cerc relaxat formeaz structura
spiral obinuit, cu orientare de dreapta (pozitiv) cu 10 perechi de
nucleotide per tur a spiralei (helixului). Inainte de unirea capetelor
80

GENETIC

moleculei liniare, dac unul dintre capete este rotit odat sau de mai multe
ori cu 360 n raport de cellalt capt n direcia care determin
despiralizarea dublului helix, unirea capetelor are ca rezultat formarea
unui helix circular parial afectat. Un rol esenial n superrsucirea
helixului ADN l au enzimele numite topoizomeraze, care au capacitatea
de a cliva i apoi de a reface o caten (topoizomeraza de tip I) sau
simultan ambele catene (topoizomeraza de tip II). Topoizomerazele de tip
I i II au fost descoperite att la procariote, ct i la eucariote, dar difer
mult ntre ele. Astfel, topoizomerazele de tip I de la procariote relaxeaz
uor structurile superrsucite negativ i foarte greu pe cele superrsucite
pozitiv, n timp ce la eucariote ele relaxeaz la fel de uor ambele tipuri de
structuri superspiralizate. La eucariote, topoizomerazele acioneaz asupra
moleculelor circulare de ADN (mitocondrial, cloroplastic) sau, n cazul
replicrii, acioneaz ntre limitele unui replicon pentru relaxarea
structurii superspiralizate a ADN naintea furcii de replicare sau, n final,
pentru separarea moleculelor fiice. Trebuie menionat faptul c
topoizomerazele, prin capacitatea lor de a da natere unor forme
topologice diferite ale ADN, joac un rol important n desfurarea
proceselor de replicare, transcripie (transcriere) i recombinare genetic.
Superspiralizarea este ntlnit i la moleculele de ADN dublucatenare liniare de la eucariote, ns nu este rezultatul aciunii unor
enzime de tipul izomerazelor, ci apare ca efect al cuplrii fibrei de ADN
cu proteinele histonice; complexul ADN-histone dicteaz structura
fundamental a cromatinei la eucariote i joac un rol important n
reglajul genetic.
Structura Cromozomilor la Eucariote
Un cromozom eucariotic conine o singur molecul de ADN cu o
lungime enorm. De exemplu, cel mai mare cromozom din genomul
speciei Drosophila melanogaster are un coninut de ADN de aproximativ
65.000 kb (6.5 x 107 perechi de nucleotide), care este echivalentul unui
duplex liniar continuu cu o lungime de circa 22 mm. Aceste molecule
lungi se fractureaz de obicei in timpul izolrii, dar chiar i n acest caz
mai pot fi gsite unele fragmente foarte lungi. Astfel, la Drosophila,
autoradiografiile ADN-ului marcat radioactiv au permis evidenierea unor
fragmente cu o lungime mai mare de 36.000 kb.
ADN-ul tuturor cromozomilor eucariotici este asociat cu
numeroase molecule de proteine ntr-un agregat ordonat denumit
cromatin. Unele dintre proteinele prezente n cromatin determin
81

AUREL POPESCU

structura cromozomilor i modificrile structurale care apar n cursul


ciclului de diviziune celular. Alte proteine ale cromatinei par s aib un
rol important n reglarea funciilor cromozomului.
Nucleosomul - unitatea structural de baz a cromatinei
Cea mai simpl form a cromatinei este prezent n celule
eucariotice care nu se divid, cnd cromozomii nu sunt suficient de
condensai pentru a fi vizibili prin microscopie optic. Cromatina izolat
din astfel de celule este un agregat complex de ADN i proteine, dintre
care cele mai importante sunt proteinele histonice (histone).
Histonele sunt responsabile n mare msur pentru structura
cromatinei. Cinci tipuri majore - H1, H2A, H2B, H3, i H4 - sunt
prezente n cromatina majoritii eucariotelor, n cantiti aproximativ
egale ca mas cu aceea a ADN. Histonele sunt proteine mici (100-200
aminoacizi), care difer de majoritatea celorlalte proteine prin aceea c
20% pn la 30% dintre aminoacizi sunt lizina i arginina, ambii avnd o
ncrctur pozitiv (doar cteva procente din aminoacizii unei proteine
normale sunt lizina i arginina). Incrcturile pozitive permit moleculelor
de histone s se lege de ADN, n primul rnd prin atracia electrostatic
fa de gruprile fosfat din structura ADN, care au ncrctur negativ.
Histonele se leag de asemenea strns unele de altele; att legturile
ADN-histone, ct i cele histon-histon sunt importante pentru structura
cromatinei.
Similaritatea histonelor de la diferite organisme este remarcabil,
excepie fcnd doar H1. In fapt, secvenele de aminoacizi ale
moleculelor de H3 sunt aproape identice chiar i la organisme foarte
ndeprtate din punct de vedere filogenetic. De exemplu, secvenele de
aminoacizi ale histonei H3 din cromatina de vac difer de cele din
cromatina de mazre prin doar 4 dintre cei 135 de aminoacizi. Proteinele
H4 sunt de asemenea aproape identice la majoritatea organismelor. Astfel,
diferenele ntre cromatina de vac i cea de mazre sunt limitate la doar 2
dintre cei 102 aminoacizi. Exist foarte puine alte proteine ale cror
secvene de aminoacizi s varieze aa de puin de la o specie la alta. Cnd
variaia este foarte redus ntre diferitele organisme, se spune c avem de
a face cu o secven nalt conservat. Conservarea extraordinar a
compoziiei histonelor pe parcursul sutelor de milioane de ani de evoluie
divergent este o dovad incontestabil a rolului acestor proteine n
organizarea structural a cromozomilor eucariotici.
La microscopul electronic, cromatina se aseamn cu un irag de
mrgele. Tratamentul de scurt durat al cromatinei cu anumite ADN-aze
82

GENETIC

are ca rezultat obinerea unei colecii de particule mici, cu mrime foarte


uniform, constnd doar din histone i ADN. Cnd histonele sunt
ndeprtate din aceste particule, rezult fragmente de ADN cu lungimi de
aproximativ 200 de perechi de nucleotide (mrimea precis variaz
dependent de specie i esut). Unitile cromatinei de tipul mrgelelor sunt
denumite nucleosomi. Fiecare unitate are o compoziie definit, mai
concret o molecul de H1, dou molecule ale fiecreia dintre histonele
H2A, H2B, H3 i H4, si un segment de ADN coninnd aproximativ 200
de perechi de nucleotide. Digestia prelungit a acestor uniti cu o
nucleaz cauzeaz pierderea unei pri a ADN i, de asemenea, determin
pierderea histonei H1. Structura rezultat, denumit particula miez, const
dintr-un octamer de perechi de H2A, H2B, H3 i H4, n jurul cruia
segmentul de ADN rmas, format din 145 de perechi de nucleotide, se
rotete cu o tur i aproximativ trei ptrimi (Fig. 3.2). Astfel, un
nucleosom este format dintr-o particul miez, ADN adiional care leag
particulele adiacente (ADN-ul care este ndeprtat prin digestie cu
nucleaz) i o molecula de H1; H1 se leag de octamerul de histone i de
ADN-ul de legare (ADN linker). Mrimea linkerului variaz de la 20 la
100 de perechi de nucleotide dependent de specie i, la aceeai specie,
chiar de tipul de celule (mrimea medie este considerat a fi n mod
obinuit de 200 145 = 55 perechi de nucleotide). Se cunoate foarte
puin despre structura ADN linker i nu se tie dac acesta are o funcie
genetic special i nici care este cauza variaiei lui n lungime.
Aranjarea fibrelor de cromatin n cromozomi
Molecula de ADN a unui cromozom este mpachetat i
rempachetat n aa fel nct se poate vorbi despre existena mai multor
nivele de organizare a cromozomilor, fiecare dintre acestea fiind
responsabil pentru scurtarea ntr-un anumit grad a lungimii enorme a
catenei. Ansamblul de ADN i histone poate fi considerat ca primul nivel
respectiv o reducere de apte ori a lungimii ADN i formarea unei fibre
flexibile, avnd aspectul iragului de mrgele (Fig. 3.2), cu o grosime de
110 (11 nm), adic aproape de cinci ori grosimea ADN liber.
Un al doilea nivel de compactare este cel n care are loc
organizarea fibrei de nucleozomi de 110 ntr-o fibr mai scurt i mai
groas, cu un diametru mediu care variaz ntre 300 i 350 , denumit
fibra de 30 nm (Fig. 3.2). Pentru formarea acestei structuri, fibra de 110
se rsucete ntr-un fel de super-helix cu orientare spre stnga, sau
asemntoare unui solenoid cu ase nucleozomi pe tur (Fig. 3.2). Se
83

AUREL POPESCU

consider c cea mai mare parte a cromatinei intracelulare are


configuraia solenoidului superrsucit.

84

GENETIC

Figura 3.2. Modelul general al asocierii histonelor i ADN n nucleosom,


ilustrnd modul n care fibra de cromatin se rsucete ntr-o structur
mai condensat, formnd n final cromozomul mitotic (dup Hartl, 1997).
Nivelul final de organizare este acela n care fibra de 30 nm se
condenseaz ntr-o cromatid a cromozomului metafazic compact (Fig.
3.2). Se cunoate foarte puin despre acest proces n afara faptului c se
produce n etape. In microfotografiile electronice cu cromozomi
metafazici izolai din care au fost ndeprtate histonele, partea de ADN
nempachetat are forma unui numr enorm de bucle care par s porneasc
dintr-un miez central, sau schel, compus din proteine cromozomale
nonhistonice. Studiile de microscopie electronic asupra condensrii
cromozomilor n mitoz i meioz sugereaz c schela se extinde de-a
lungul cromatidei i c fibra de 30 nm particip la formarea unui helix de
bucle care radiaz din schel. Nu sunt ns cunoscute detaliile
mpachetrii adiionale necesare pentru fibra fiecrei bucle, pentru a
produce cromozomul metafazic deplin condensat.
Semnificaia genetic a compactrii ADN i proteinelor n
cromatin i apoi n cromozom este aceea c aceasta faciliteaz
determinant micarea materialului genetic n timpul diviziunii nucleare.
Fr condensarea cromozomilor, ar fi foarte multe anomalii n distribuirea
materialului genetic n celulele fiice.
Cromozomii Politenici
Un cromozom eucariotic tipic conine o singur molecul de
ADN. Totui, n nucleii celulelor glandelor salivare i n anumite esuturi
ale larvelor de Drosophila i ale altor dou insecte diptere, exist
cromozomi gigantici (Fig. 3.3), denumii cromozomi politenici, care
conin aproximativ 1000 de molecule de ADN aliniate lateral. Fiecare
dintre aceti cromozomi are un volum de multe ori mai mare dect cel al
cromozomului corespunztor n metafaza mitotic a celulelor somatice
obinuite, precum i un model constant i distinctiv de bandare
transversal. Structurile politenice sunt formate prin replicarea repetat a
ADN ntr-o pereche de cromozomi omologi legai strns prin sinaps, fr
separarea catenelor de cromatin replicate sau a celor doi cromozomi.
Cromozomii politenici sunt cromozomi atipici i se formeaz n
celule terminale; aceasta nseamn c celulele larvale care i conin nu
se mai divid pe parcursul dezvoltrii mutelor i ulterior sunt eliminate la
formarea pupei. Totui, acestea au avut o valoare deosebit pentru studiul
geneticii Drosophilei.
85

AUREL POPESCU

In nucleii politenici ai Drosophilei melanogaster i ai altor specii,


blocuri mari de heterocromatin adiacent centromerelor sunt agregate
ntr-o singur mas compact denumit cromocentru. Deoarece cei mai
mari doi cromozomi (2 i 3) au centromerii localizai central, cromozomii
apar n configuraia artat n Fig. 3.3: perechea de cromozomi X (la
femele), braele stng i drept ale cromozomilor 2 i 3, i un cromozom
scurt (cromozomul 4) pornind din cromocentru. La un mascul,
cromozomul Y, care const aproape n ntregime din heterocromatin, este
incorporat n cromocentru. Benzile transverse de culoare ntunecat ale
cromozomilor politenici rezult din alinierea latur pe latur a regiunilor
strns mpachetate ale catenelor individuale de cromatina. In interiorul
benzilor este prezent mai mult ADN dect n regiunile dintre benzi
(interbenzi). Aceasta este de altfel explicaia slabei lor colorri. In
cromozomii politenici ai Drosophilei melanogaster au fost identificate
aproximativ 5.000 de benzi. Acest aranjament liniar de benzi, care are un
model constant i caracteristic fiecrei specii, furnizeaz o hart
citologic fin detaliat a cromozomilor. Modelul de bandare permite
identificarea chiar i a unor regiuni foarte scurte ale oricrui cromozom.

Fig. 3.3 Cromozomii politenici din celulele glandei salivare de


Drosophila melanogaster. Regiunile centromerice ale tuturor
cromozomilor sunt unite ntr-un cromocentru comun.
Datorit mrimii lor i a morfologiei fin detaliate, cromozomii
politenici sunt extrem de utili pentru hibridizarea in situ a acizilor
86

GENETIC

nucleici. Procedeul hibridizrii in situ se realizeaz prin denaturarea ADN


din cromozomii politenici, dup care este adugat o prob marcat
radioactiv de ADN sau ARN, n condiii care favorizeaz renaturarea.
Dup splare, singura prob care a rmas n cromozomi a format
duplexuri hibride cu ADN cromozomial i poziia sa poate fi identificat.
Organizarea Secvenelor de Nucleotide n Genomurile
Eucariotice
La bacterii, variaia compoziiei medii de baze dintr-o parte n alta
a genomului este foarte redus. Totui, la eucariote, unele componente ale
genomului pot fi detectate deoarece compoziia lor n baze este destul de
diferit de media restului genomului (de exemplu, o component a ADN
de la crab este n proporie de doar 3% G+C). Aceste componente sunt
denumite ADN satelit. La oarece, ADN satelit reprezint 10% din
genom. O trstur distinctiv a ADN satelit este aceea c el const din
secvene scurte de nucleotide care se pot repeta de pn la un milion de
ori n genomul haploid. In ADN eucariotic sunt prezente i alte secvene
repetitive. Unele dintre trsturile speciale ale ADN repetitiv sunt
discutate n subcapitolul urmtor.
Compoziia Secvenei de Nucleotide
Organismele eucariotice difer larg n ceea ce privete proporia
din genom care const n secvene de ADN repetitiv i tipul acestor
secvene. Un genom eucariotic const n mod tipic din trei componente:
1. Secvene unice, sau ntr-o singur copie. Aceasta este de regul
componenta major i conine n mod tipic de la 30 pn la 75 de procente
din ADN cromozomial la majoritatea organismelor.
2. Secvene nalt repetitive. Aceast component constituie de la 5
pn la 45 de procente din genom. Unele dintre aceste secvene sunt ADN
satelit la care ne-am referit anterior. Secvenele din aceast clas sunt
formate n general din 5 pn la 300 de perechi de baze i sunt duplicate
de pn la 105 ori per genom.
3. Secvene mediu-repetitive. Aceast component constituie 1 pn
la 30 de procente dintr-un genom eucariotic i include secvene care sunt
repetate de cteva ori, pn la 105 ori per genom.
Aceste componente diferite pot fi identificate dup numrul de
benzi care apar n hibridizrile Southern cnd sunt folosite probe
87

AUREL POPESCU

adecvate, sau prin alte metode. Trebuie s se rein c delimitarea dintre


secvenele mediu-repetitive i cele nalt repetitive este arbitrar.
Secvene Unice
Majoritatea secvenelor de gene i secvenele de nucleotide
adiacente necesare pentru exprimarea lor fac parte din componenta
secvenelor unice. Cu rare excepii (de exemplu, repetiia uneia sau a
ctorva gene), genomurile virusurilor i procariotelor sunt compuse n
ntregime din secvene ntr-o singur copie; n contrast, astfel de secvene
reprezint numai 38% din genomul total al unor specii de arici de mare,
puin mai mult de 50% din genomul uman, i aproximativ 70% din
genomul speciei D. melanogaster.
Secvene Inalt Repetitive
Multe dintre secvenele nalt repetitive sunt localizate n blocuri de
repetiii n tandem, pe cnd altele sunt dispersate n tot genomul. Un
exemplu pentru tipul dispersat este acela al familiei de secvene nrudite
din genomul uman, denumit familia Alu deoarece secvenele conin un
situs de restricie caracteristic pentru enzima AluI. Secvenele Alu au o
lungime de 300 de perechi de baze i sunt prezente n aproximativ
500.000 de copii n genomul uman; aceast familie de ADN repetitiv
reprezint singur circa 5% din ADN uman.
Majoritatea secvenelor nalt repetitive sunt n general scurte.
Secvenele de acest tip reprezint aproximativ 6% din genomul uman i
18% din genomul de D. melanogaster, dar 45% din ADN al speciei
D. virilis. Una dintre secvenele repetitive cele mai simple posibil este
compus dintr-o secven alternant .... ATAT.... ntre care intercalrile de
G+C reprezint circa 3%. O astfel de secven reprezint pn la 25% din
genomurile unor specii de crabi. In genomul de D. virilis, componentele
majore ale clasei nalt repetitive sunt trei secvene diferite dar nrudite
formate din apte perechi de baze:
5-ACAAACT-3
5-ATAAACT-3
5-ACAAATT-3
Blocurile de secvene satelit (nalt repetitive) din genomurile unor
organisme au fost localizate prin hibridizarea in situ cu cromozomi
88

GENETIC

metafazici. Secvenele satelit localizate prin aceast metod au fost gsite


n regiuni ale cromozomilor denumite heterocromatina. Acestea sunt
regiuni care se condenseaz mai devreme n profaz dect restul
cromozomului i se coloreaz intens cu muli dintre coloranii standard
folosii pentru a face cromozomii vizibili; uneori heterocromatina rmne
nalt condensat n tot cursul ciclului celular. Eucromatina, care formeaz
cea mai mare parte a genomului, este vizibil numai n ciclul mitotic.
Regiunile heterocromatinice majore sunt adiacente centromerului; blocuri
mai mici sunt prezente la capetele braelor cromozomilor (telomere) i
intercalate cu eucromatina.
La multe specii, un cromozom ntreg, cum este cromozomul Y la
Drosophila melanogaster, este aproape complet heterocromatinic.
Hibridizarea in situ cu diferite secvene nalt repetitive purificate de la
D. melanogaster a artat c fiecare secven are o distribuie a sa
distinctiv n cromozomi.
Coninutul genetic al heterocromatinei este rezumat n urmtoarea
generalizare: numrul genelor localizate n heterocromatin este mic n
raport cu cel al genelor localizate n eucromatin. Numrul relativ mic de
gene nseamn c multe blocuri mai mari de heterocromatin sunt
aproape inerte genetic, sau lipsite de funcie. Intr-adevr, blocurile
heterocromatinice pot fi adesea rearanjate n genom, duplicate, sau chiar
deletate, fr consecine fenotipice majore.
Secvene Mediu-Repetitive
Secvenele mediu-repetitive reprezint circa 12 procente din
genomul speciei D. melanogaster i 40 de procente sau mai mult din
genomurile uman i al altor eucariote. Aceste secvene difer mult n ceea
ce privete numrul de copii i distribuia lor n interiorul genomului. Ele
conin multe familii de secvene nrudite i includ cteva grupuri de gene.
De exemplu, genele pentru componentele ARN ale ribozomilor
(particulele pe care sunt sintetizate proteinele) i genele pentru moleculele
de ARNt (care de asemenea particip la sinteza proteinelor) sunt repetate
n genomul tuturor organismelor. Cele dou molecule majore ale ARN
ribozomal provin dintr-o pereche de gene n tandem care sunt repetate de
cteva sute de ori n majoritatea genomurilor eucariotice. Genomurile
tuturor eucariotelor conin de asemenea copii multiple ale genelor pentru
histone. Fiecare gen pentru histone este repetat de aproximativ 10 ori
per genom la gini, de 20 de ori la mamifere, de aproximativ 100 de ori la
Drosophila, i de aproape 600 de ori la anumite specii de arici de mare.
89

AUREL POPESCU

Componenta ADN mediu-repetitiv dispersat din genomul speciei


D. melanogaster const din aproximativ 50 de familii de secvene
nrudite, i de la 20 pn la 60 de copii ale fiecrei familii sunt rspndite
n cromozomi. Poziiile acestor secvene difer de la un individ la altul, cu
excepia celor complet homozigoi obtinui n laborator. Variaia n ceea
ce privete poziia este determinat de faptul c multe dintre aceste
secvene sunt capabile s se mute dintr-un locus n altul n cromozom i
chiar ntre cromozomi; astfel de secvene, denumite elemente genetice
transpozabile, au fost identificate n genomurile majoritii organismelor.
Structura Centromerelor i Telomerelor
Centromerul este o regiune specific a cromozomului eucariot
care devine vizibil ca o entitate morfologic distinct de-a lungul
cromozomului n cursul condensrii. El este responsabil de micarea
cromozomilor n mitoz i meioz, funcionnd, cel puin n parte, prin
jucarea rolului de loc de ataare pentru una sau mai multe fibre ale fusului
(Fig. 3.4). Centromerul este de asemenea locul n care fibrele fusului se
scurteaz, determinnd micarea cromozomilor spre poli.

Fig. 3.4. Structura centromerului i ataarea unei fibre a fusului mitotic


(http://web.mst.edu/~rfrank/Molecular_Genetics/331figures.html).
Analiza electrono-microscopic a artat c la unele organisme - de
exemplu la drojdia Saccharomyces cerevisiae - o singur fibr proteic a
fusului este ataat cromatinei centromerice. Majoritatea celorlalte
90

GENETIC

organisme au multiple fibre ale fusului ataate de fiecare regiune


centromeric.
ADN centromeric este cuprins ntr-o structur (miezul
centromerului) care conine mai mult ADN dect un miez centromeric
tipic pentru drojdii (care conine 160 de perechi de baze) i este mai mare.
Aceast structur este responsabil pentru rezistena ADN centromeric la
ADN-az. Se consider c fibra fusului se ataeaz direct la aceast
structur.
Aranjamentul secvenei de baze a centromerilor de la drojdii nu
este cel tipic celorlali centromeri eucariotici. La eucariotele superioare,
cromozomii sunt de aproximativ 100 de ori mai mari dect cei ai
drojdiilor i de regul mai multe fibre ale fusului se ataeaz
fiecrui cromozom. Mai mult, regiunile centromerice ale cromozomilor
multor eucariote superioare conin cantiti mari de heterocromatin,
constnd din ADN satelit repetitiv. De exemplu, regiunile centromerice
ale cromozomilor umani conin o secven de ADN repetat n tandem de
aproximativ 170 de perechi de baze, denumit alpha-satelit. Numrul de
copii ale acestor secvene n regiunea centromerului variaz de la 5.000 la
15.000, dependent de cromozom. Secvenele de ADN necesare pentru
ataarea de fibrele fusului pot fi intercalate printre secvenele alphasatelit. Nu se cunoate nc dac secvenele alpha-satelit contribuie la
activitatea centromerului.
Cromatid

Telomer

Centromer
Kinetocor

Fig. 3.5. Centromerul, kinetocorii si telomerele structuri de importan


major ale cromozomilor organismelor eucariote.

91

AUREL POPESCU

Telomera este o secven special de ADN la captul fiecrei


cromatide, respectiv fiecrui cromozom eucariotic (Fig. 3.5), esenial
pentru stabilitatea cromozomului. Dovada faptului c telomerele au un rol
special este evident din observaiile genetice i microscopice. De
exemplu, capetele cromozomilor rupi, lipsiti de telomere, devin progresiv
mai scurte cu fiecare generaie. Mai mult, capetele cromozomilor rupi au
tendina s fuzioneze oricnd apare aceast posibilitate. Dac un capt al
unui singur cromozom metafazic este rupt i pierdut, adesea cromatidele
surori fuzioneaz, formnd un cromozom cu doi centromeri.
Secvenele speciale de ADN ale telomerelor sunt adugate la
capetele cromozomilor eucariotici de ctre o enzim denumit
telomeraz. Substratul pentru telomeraz este o secven de adugare a
telomerelor constnd dintr-o scurt secven repetitiv. La mamifere,
secvena telomeric const din numeroase repetiii n tandem ale
secvenei 5-TTAGGG-3.
Catena complementar de ADN a telomerei este sintetizat de
ctre ADN polimeraz. In majoritatea regiunilor telomerei, exist
secvene secvente de ADN mai lungi, moderat repetitive, care preced
secvenele repetitive terminale. Aceste secvene difer de la un organism
la altul i chiar ntre diferiii cromozomi ai aceluiai organism.

92

GENETIC

4.

STRUCTURA MOLECULAR I FUNCIILE


GENEI

Conceptul de gen a fost introdus n tiin de ctre Wilhelm


Johannsen (1909) pentru a desemna unitatea ereditar de baz, localizat
n cromozomi.
Genele sunt plasate n cromozomi ntr-un anumit locus, i n
acelai locus de pe cei doi cromozomi omologi exist sub form de alele.
In cazul cnd o gen care determin un anumit caracter a suferit un numr
mare de mutaii, n locusul pentru aceasta de pe cromozom, gena
respectiv se poate gsi sub forma alelelor multiple sau a polialelelor,
care determin o expresie modificat a caracterului codificat. Genele sunt
reprezentate cu ajutorul unor simboluri formate din 1-4 litere, care sunt
abrevieri ale termenilor (de regul, din limba englez) desemnnd
caracterele codificate. De asemenea, tipul normal (slbatic) al caracterului
respectiv se poate nota cu semnul plus (+).
In conceptul clasic, gena are trei caracteristici de baz: unitate
funcional, determinnd producerea unui anumit fenotip; unitate
mutaional, n sensul c prin mutaii genele se transform n alela sau
alelele lor; unitate de recombinare genetic, prin care genele pot fi
transferate de pe un cromozom pe omologul su prin fenomenul de
crossing-over. Conform ipotezei o gen, o enzim, propus de Beadle i
Tatum (1941), ntre gene i enzime exist raportul de 1:1. Prin urmare se
consider c fiecare enzim se afl sub control genetic att n ce privete
sinteza i fucionarea sa, ct i n ce privete specificitatea.
Progresele remarcabile nregistrate n cercetrile de genetic
molecular au determinat schimbarea fundamental a concepiei despre
gen, sub aspectul structurii moleculare i a funcionrii sale. In prezent,
gena este definit ca fiind un segment din macromolecula de ADN sau
ARN (n cazul unor virusuri) format dintr-o secven anumit de
93

AUREL POPESCU

nucleotide, care conine o cantitate de informaie genetic necesar


pentru sinteza unei polipeptide sau a altor biomolecule (ARNr, ARNt,
etc). Informaia genetic dintr-o gen este transferat prin transcripie n
ARN, iar prin translaie este decodificat ntr-o secven de aminoacizi
(care formeaz un polipeptid). In ceea ce privete mrimea genelor, se
apreciaz c aceasta este foarte variabil n funcie de cantitatea de
informaie genetic pe care o conin.
Cercetrile de genetic molecular au infirmat concepia despre
funcionarea exclusiv a genei ca o unitate, aducnd dovezi prin care s-a
demonstrat n mod incontestabil c unitatea mutaional i de recombinare
genetic este perechea de nucleotide din segmentul de ADN
corespunztor genei. Acest nou concept admite aadar posibilitatea
producerii mutaiilor punctiforme, care afecteaz o singur pereche de
baze din ADN, i a crossing-overului intragenic.
Structura Molecular a Genelor
Pornind de la constatarea lui Philip Allan Sharp (1977), c genele
virale au o lungime mai mare dect a ARNm corespunztor, i de la
similaritatea structurii moleculare a genelor virusurilor cu cea a genelor
organismelor gazd, Walter Gilbert (1978) a lansat ipoteza structurii
discontinue a genelor organismelor eucariote i a celor virale. Conform
acestui model de organizare structural, genele sunt alctuite dintr-o
alternan de segmente informaionale, care sunt transcrise n ARNm i
care sunt denumite exoni, i segmente non-informaionale, denumite
introni, care sunt eliminate n procesul transcripiei (Figura 5.1).
Numrul de introni este foarte variabil de la o gen la alta. Astfel,
a fost demonstrat existena a numeroase gene care conin un singur
intron, cum este cea care determin sinteza ARNt de la Sacharomyces, dar
i a unor gene n care numrul de introni ajunge la cteva zeci,
cum
este, de exemplu, gena pentru distrofin (cea mai mare gen din genomul
uman, ce codific sinteza unei proteine formate din circa 3.500
aminoacizi), care conine 78 de introni.
Dac structura continu a genelor bacteriene i absena aparatului
enzimatic necesar pentru excizarea intronilor, caracteristic organismelor
cu gene discontinue, erau bine cunoscute de mai mult timp, rezultatele
cercetrilor de genetic molecular mai recente au artat c gene fr
introni pot exista i la eucariote, aa cum sunt genele care codific sinteza
proteinelor histonice.
94

GENETIC

De regul, intronii sunt mai lungi dect exonii, astfel c la o gen


la care exonii au circa 1.000 pb, intronii reprezint ntre 5.000 i 20.000
pb. De exemplu, exonii reprezint numai 1/4 din gena ovalbuminei de la
gin, care are o lungime total de aproximativ 7.700 pb i este format
din 8 exoni i 7 introni (Fig. 4.2). Gena care codific sinteza proteinei de
coagulare a sngelui la om (factorul VIII), a crei absen determin
hemofilia A, conine 26 de exoni cu o mrime cuprins ntre 69 i 3.106
pb, i 25 de introni cu o mrime care variaz de la 200 la 32.400 pb.
I1

I2

I3

I4

I5

I6

ADN
E1

E2

E3

E4

E5

transcripie
5

ARN precursor
(metilare i adenilare)

- AAA

Membrana nuclear

ARNm

E1 E2 E3 E4

E5

- AAA

Fig. 4.1 Structura discontinu a genei, format din ADN informaional


(exoni = E) i ADN non-informaional (introni = I). In procesul de
transcripie se formeaz mai nti un ARN precursor, apoi cu ajutorul
unor enzime se elimin secvenele de nucleotide non-funcionale i apare
ARNm.
Cea mai mare gen este considerat a fi gena uman pentru
distrofin, localizat pe braul scurt al cromozomului X, care reprezint
0.07% din genomul uman. Transcriptul primar al acestei gene de 2.2
megabaze msoar circa 2.400 kb, iar ARNm matur msoar 14 kb. Cei
79 de exoni codific o protein format din peste 3.500 de aminoacizi.
95

AUREL POPESCU

Unele gene discontinue sunt transcrise n diferite moduri, ceea ce


determin producerea unor tipuri distincte de ARNm, fiecare codificnd o
alt protein sau forme diferite ale aceleiai proteine. Diferenierile care
apar n procesul transcripiei sunt controlate genetic i sunt asociate cu
diferitele etape de dezvoltare a organismului, fiind corelate direct cu
necesarul de proteine al diferitelor tipuri de celule.

Fig. 4.2. Structura molecular a genei ce codific sinteza ovalbuminei.


Printr-un mecanism de excludere a unora dintre exoni de la
formarea transcriptului de ARNm (exon skiping), este posibil
combinarea n diferite moduri a exonilor pentru a forma proteine cu
diferite domenii funcionale, fiecare domeniu fiind responsabil pentru o
anumit funcie a proteinelor, de exemplu cuplarea cu un anumit substrat
sau cu un cofactor. In cazul imunoglobulinelor, de exemplu, fiecare
domeniu este codificat de un anumit exon.
Genele organismelor eucariote se afl sub un reglaj transcripional
strict, mediat de 3 tipuri de ARN-polimeraze. Astfel, ARN-polimeraza I
transcrie numai genele ce codific ARNr de tip 18S, 5.8S i 28S, ARNpolimeraza II transcrie toate genele ce codific proteine, precum i ARNr
mic nuclear care constituie particulele mici de ribonucleoproteine
(snRNPs), iar ARN-polimeraza III transcrie genele ce codific ARNr 5S
i pe cele ce codific ARNt. In conformitate cu tipul ARN-polimerazelor
implicate n transcrierea lor, genele eucariotelor pot fi mprite n trei
clase.
96

GENETIC

In prezent se cunoate faptul c ARN-polimeraza III transcrie i


gene ce determin sinteza altor gene (cu o mrime medie de 300 pb i
aflate ntr-un numr mare de copii), ce codific diverse tipuri de ARN cu
rol structural. S-a demonstrat de asemenea c n unele cazuri intronii
reprezint gene funcionale, care codific alte gene, a cror transcripie se
realizeaz ntotdeaun n direcie opus fa de aceea pentru gena
proximal.
Transcripia genelor la procariote i eucariote
Procesul de transcripie al genelor discontinue este mai complex
dect al celor continue. Acesta ncepe cu sinteza unui ARNm precursor
sau primar, care copiaz integral gena (exoni i introni), dup care are loc
eliminarea intronilor n una sau mai multe etape. De exemplu, n cazul
genei ovalbuminei ntr-o prim etap se elimin 5 introni, ceilali doi
introni fiind eliminai ntr-o a doua etap. Procesul de excizie a intronilor
are loc n nucleu, astfel c numai ARN matur, care rezult din asamblarea
exonilor, migreaz n citoplasm (Figura 5.1). Eliminarea intronilor se
realizeaz cu ajutorul unor enzime de restricie capabile s recunoasc i
s taie molecula de ADN n anumite regiuni. Studiul structurii intronilor a
artat c acetia ncep ntotdeauna cu bazele GT i se termin cu bazele
AG, care servesc aadar ca locus de recunoatere pentru enzimele de
restricie.
La procariote, sinteza ARN este catalizat de un singur tip al
enzimei ARN-polimeraza i ncepe ntr-o regiune a genei care prezint o
anumit secven de nucleotide, care constituie promotor-ul, cu care
ARN-polimeraza se cupleaz specific pentru iniierea transcripiei.
Incepnd cu regiunea promotorului, enzima se mic n sensul 5 3 dea lungul matriei reprezentat de o caten ADN a genei, pn ntlnete un
semnal de terminare (o anumit secven de nucleotide), care determin
separarea enzimei de ADN i eliberarea ADN nou-sintetizat.
La eucariote, transcripia este mult mai complex, n aceasta fiind
implicate toate cele 3 tipuri diferite de ARN-polimeraze, fiecare realiznd
transcripia unui set diferit de gene. Spre deosebire de ARN-polimeraza
specific procariotelor, care este alctuit din 5 catene polipeptidice,
ARN-polimerazele eucariotelor sunt formate din 9-11 lanuri de
polipeptide.
Cele 3 tipuri de ARN-polimeraze de la eucariote sunt capabile s
recunoasc secvene diferite de ADN ale promotorului, n amonte de
locusul de iniiere a transcripiei. De exemplu, ARN-polimeraza II este
capabil s recunoasc o secven de nucleotide care se ntinde pn la
97

AUREL POPESCU

aproximativ 150 de nucleotide n amonte de locusul de ncepere a


transcripiei. Semnalul de recunoatere a ARN-polimerazei II include
dou secvene diferite de nucleotide: una care ncepe cu 25 de nucleotide
n amonte i alta cu 50 de nucleotide mai departe n amonte fa de startul
transcripiei. Promotorul eucariotelor este aadar mult mai complex, fapt
reflectat de altfel i de numrul mare de molecule ale ARN-polimerazei I
i II (cte 40.000), precum i ale ARN-polimerazei III (20.000).
In timp ce la procariote transcripia se realizeaz exclusiv pe baza
moleculelor de ADN, la eucariote ADN este asociat cu histonele
nucleosomale, astfel c transcripia are loc la nivelul fibrei de cromatin.
Se consider c la eucariote procesul de transcripie are loc fr ca
proteinele histonice s se separe de molecula de ADN. Viteza de sintez a
moleculei de ARN este de aproximativ 30 de nucleotide per secund i se
realizeaz n direcia 5 3 pn cnd se ajunge la semnalul de
terminare a transcripiei.
Moleculele de ARN nou sintetizate sunt cuplate cu molecule de
proteine cu o greutate molecular de 30.000-40.000 daltoni, formnd
complexe de ribonucleoproteine. Cu ajutorul ARN-polimerazei II se
sintetizeaz ARN-nuclear heterogen (ARNnh), caracterizat printr-o larg
variaie a greutii moleculare, din care o fracie mic migreaz din nucleu
n citoplasm sub forma ARNm. Lungimea moleculelor nou sintetizate
de ARN descrete rapid la scurt timp dup iniierea transcripiei
(aproximativ 30 minute), avnd loc conversia moleculelor foarte lungi de
ARNnh (care ajung pn la 50.000 de nucleotide) n molecule scurte de
ARN citoplasmatic, formate de regul din 500 pn la 3.000 de
nucleotide.
In nucleul eucariotelor are loc un proces de eliminare a intronilor
genelor discontinue, adic a secvenelor non-informaionale. Se apreciaz
c la mamifere numai 7-10% din cantitatea total de ADN nuclear este
transcris n ARN, dar ntruct din moleculele de ARN precursor (care
constituie transcriptul primar i reprezint copia ntregii gene) sunt
eliminate secvenele non-informaionale prin excizia realizat de enzime
de restricie, numai secvenele de nucleotide incluse n exoni sunt legate
ntre ele pentru a forma moleculele de ARNm (reprezentnd transcriptul a
1-2% din secvenele de ADN) care migreaz n citoplasm.
Deoarece intronii nu posed informaie genetic, producerea de
mutaii la nivelul acestora nu ar trebui s aib efecte asupra genomului.
Totui s-a constatat c la captul terminal al fiecrui intron exist o
secven de cteva nucleotide a crei modificare prin mutaie afecteaz
funcia genei din care face parte. Se consider c aceste secvene intronice
98

GENETIC

scurte constituie semnalele pentru tierea ARN, care are ca rezultat


eliminarea intronilor.
Cuplarea secvenei terminale de nucleotide a unui exon cu cea
iniial a exonului urmtor, pentru a realiza molecula de ARNm care
migreaz din nucleu n citoplasm, are loc prin aa-numita procesare a
ARN-primar. Prin aceast procesare, care are loc n direcia 5 3,
majoritatea transcriptului ARN-primar este degradat n nucleu, rezultatul
fiind acela c din masa total a ARN transcris, ARNm care migreaz n
citoplasm reprezint numai circa 5%.
La captul 5 al moleculei de ARN, care este primul sintetizat, se
gsete o structur special care permite ulterior cuplarea cu un ribozom
n vederea sintezei proteice. La cellalt capt al moleculei de ARN (3)
are loc un proces de adugare a 100-200 de molecule de acid adenilic, cu
ajutorul unei enzime denumite poli-A-polimeraza. Aceast structur care
completeaz transcriptul ARN-primar are rolul de a media procesarea
ulterioar a ARN i exportul de ARNm matur n citoplasm.
Spre deosebire de procariote, la care ARN rezultat din procesul de
transcripie este translat imediat i direct ntr-o secven de aminoacizi
dintr-un lan polipeptidic, la eucariote translaia are loc numai dup
realizarea procesrii ARN-primar.
Pe baza rezultatelor cercetrilor de genetic molecular a fost
propus principiul o gen, un lan polipeptidic. Prin prisma acestui
principiu, se poate considera c la sinteza unor enzime cum sunt ARNpolimerazele, care sunt constituite din mai multe lanuri polipeptidice,
particip mai multe gene.
La procariote, ARNm este de regul policistronic, adic codific
mai multe proteine care sunt translate separat din aceeai molecul de
ARNm. Din contr, la eucariote ARNm este monocistronic, coninnd
informaia genetic pentru sinteza unui singur tip de lan polipeptidic.
Gena este deci un segment din macromolecula de ADN care poart
informaia genetic pentru sinteza unui anumit tip de lan polipeptidic.
Amplificarea genic
Replicarea independent a anumitor secvene de ADN, denumit
amplificare genic, se poate realiza pe ci variate, cum sunt
poliploidizarea (inclusiv endopoliploidia i politenia), eliminarea ADN
sau a unor cromozomi, diferenierea replicrii ADN prin amplificare i
subreplicare, restructurarea unor segmente de ADN (n special prin
aciunea transpozonilor), restructurarea unor cromozomi, etc. Unitile de
99

AUREL POPESCU

amplificare genic, adic orice secven de nucleotide implicat n


amplificarea genic i care devine amplificat (ADN repetitiv), au primit
denumirea de ampliconi.
Se consider c fenomenul de amplificare genic are un rol
important n procesul diferenierii celulare, n primul rnd prin afectarea
reglajului genetic al funcionrii genelor.
S-a demonstrat c stresul este n egal msur un fenomen
perturbator al replicaiei ADN i un factor declanator al amplificrii
genice. Este relevant n acest sens constatarea c prezena unor toxine n
culturile de celule determin (ca rezultat al unui proces de selecie)
amplificarea unor secvene de ADN. Producerea amplificrii genice n
condiii de stress este probabil i explicaia pentru apariia rezistenei la
diveri ageni (de exemplu, methotrexatul) n culturile de celule animale
i umane.
Existena fenomenului de amplificare genic constituie o dovad
a plasticitii genomului. Cunoaterea mecanismelor amplificrii genice
poate contribui ntr-o msur important la apariia unor strategii noi de
ameliorare prin manipularea in vitro a genomului, de exemplu pentru
inducerea rezistenei la factorii abiotici de stres. Nu n ultimul rnd,
cunoscut fiind faptul c amplificarea genic a fost evideniat cu frecven
ridicat n celulele tumorale i n anumite celule oncogene, descifrarea
mecanismelor semnal implicate n declanarea acestui fenomen poate
contribui la contracararea factorilor care determin formarea tumorilor i
carcinogeneza.
Familii multigenice i pseudogene
Genele ce codific proteine necesare n cantiti mari pentru
dezvoltarea i diferenierea celular a organismelor eucariote, sunt
prezente ntr-un numr mare de copii. Familia genelor pentru sinteza
histonelor include 5 gene majore ce codific histonele H1, H2A, H2B, H3
i H4. La eucariotele inferioare, aceste 5 gene se gsesc ntr-un bloc de
5.000-6.000 pb, fiecare bloc fiind repetat ntre 100 i 1.000 de ori. Ca
urmare, pot fi sintetizate rapid cantitile mari de histone necesare pentru
constituirea fibrei de cromatin.
La eucariotele superioare, familia de gene a histonelor se gsete
numai ntre 10 i 40 de copii per genom.
La drojdia de bere (Sacharomyces cerevisiae) exist numai cte
dou copii ale fiecrei gene pentru histonele H2A, H2B, H3 i H4, ntre
fiecare grup aflndu-se o regiune spaiatoare (spacer DNA) care nu este
100

GENETIC

transcris. Genele care se gsesc ntr-un numr mare de copii, cum sunt
cele aproximativ 450 de gene identice, dispuse n tandem, ce codific
ARNr din celulele somatice de Xenopus laevis, sau cele 2.000 de gene
identice ce codific ARNr de tip 5S la om, formeaz familii multigenice
repetitive.
Genele ce codific subunitile i ale hemoglobinei umane
alctuiesc dou familii de gene care au o structur nrudit, fiind
rezultatul duplicaiei unei gene ancestrale. Prin duplicaiile ulterioare ale
fiecrei gene s-au format cele dou familii genice actuale, situate pe
cromozomi diferii, respectiv pe cromozomul 16 genele pentru -globine
i pe cromozomul 11 genele pentru -globine. Genele -globinei sunt
dispuse ntr-o regiune de 25 kb, n care se gsesc 3 gene, dintre care una
este funcional n embrion i dou la adult. Genele familiei -globinei
sunt dispuse ntr-o regiune de 50 kb, i includ 5 gene: una funcional n
perioada embrionar, dou la fetus i dou la adult. Intre produsele de
translaie ale diferitelor gene care aparin aceleeai familii exist diferene
att sub aspectul etapei ontogenice n care sunt necesare, ct i al
proprietilor. Este relevant n acest sens faptul c hemoglobina fetal, de
exemplu, ofer fetusului un avantaj important datorit afinitii mai mari
pentru oxigen comparativ cu cea sintetizat n faza de adult. Aceste gene
formeaz aa numitele familii multigenice non-repetitive.

Fig. 4.3. Ordinea i aranjarea genelor pentru globine la om. (a) Clusterul
globinic de pe cromozomul 16; (b) Clusterul globinic de de cromozomul
11. Casetele gri reprezint genele funcionale, iar casetele albe reprezint
pseudogene (dup Walsh i Stephan, 2001)
In general, genele unei familii sunt aliniate de-a lungul
cromozomului n ordinea n care vor funciona n cursul dezvoltrii
organismului.
101

AUREL POPESCU

In genomul eucariotelor se gsesc i secvene scurte repetitive de


ADN, dispersate n ntreg genomul i care sunt transcrise n ARN. Astfel,
la unele organisme exist o clas de 5-200 de nucleotide, repetate n
tandem, care nu sunt transcrise n ARN. La om exist de asemenea o clas
de astfel de secvene, denumit minisatelit ADN, alctuit din 15-100 pb
repetate de 20-50 de ori. Intruct aceste secvene sunt variabile la indivizi
diferii, evidenierea modului lor de dispersie prin metoda amprentelor
ADN (DNA fingerprinting) este frecvent utilizat n medicina legal.
S-a constatat c n genomul eucariotelor exist cantiti mari de
ADN non-informaional, reprezentat de introni, de secvene repetate de
nucleotide (ADN repetitiv) i de secvene ce separ genele. In genomul
uman, de exemplu, care conine circa 50.000 de gene, numai aproximativ
10% din cantitatea total de ADN este informaional. Pe msura
evoluiei are loc o cretere a numrului de gene discontinue, spaiile
intergenice devin mai mari, secvenele repetitive devin tot mai numeroase
i se gsesc tot mai des familii multigenice.
Familiile multigenice sunt utile pentru organism, deoarece acestea
asigur sinteza unor cantiti mari de proteine sau sinteza unor proteine
foarte nrudite, care determin mrirea variabilitii i complexitii
organismelor, precum i adaptarea lor mai eficient la mediu. Redundana
n ansamblu a materialului genetic la eucariote determin aadar mari
posibiliti de variaie a informaiei genetice.
In familiile multigenice exist i gene nefuncionale, nrudite ca
structur cu cele funcionale, denumite pseudogene. De exemplu, n
familia -globinei umane exist pseudogena psi 1, nrudit structural cu
genele funcionale pentru -globin. Pseudogenele includ numeroase
mutaii punctiforme, deleii, etc., care le fac nefuncionale. Pseudogene au
fost identificate i n familia genic a -globinei, cum sunt psi 1 i psi 2.
Se consider c aceste pseudogene reprezint adevrate relicte ale
procesului de evoluie, ele fiind gene non-funcionale, silenioase, care
prezint o omologie de 70-80% cu genele funcionale ce determin
sinteza globinelor.
Gene suprapuse i gene antisens
In mod normal, genele sunt alctuite dintr-o secvena de codoni ce
codific diveri aminoacizi, codonii fiind decodificai n procesul sintezei
ntr-o anumit ordine de-a lungul genei.

102

GENETIC

La fagul X174 s-au descoperit recent gene suprapuse, ceea ce


nseamn c o anumit secven de nucleotide poate fi citit n mod
repetat, realizndu-se astfel sinteza a dou catene polipeptidice diferite.
Cromozomul fagului X174 este reprezentat de o macromolecul
circular de ADN monocatenar alctuit dintr-o secven de 5.386 de
nucleotide, a cror ordine a fost identificat. Genomul circular al fagului
X174 este constituit din 10 gene, deoarece s-a constatat c prin infecia
bacteriei E. coli este indus sinteza a 10 proteine diferite, cu o greutate
molecular total de circa 250.000 de daltoni. Teoretic, s-a constatat ns
c un genom de aceast mrime are o capacitate maxim de codificare
echivalent cu circa 200.000 de daltoni de proteine. Diferena ntre
capacitatea real de codificare a genomului viral i cea teoretic a sugerat
posibilitatea existenei unor gene suprapuse, care ar permite mrirea
substanial a capacitii de codificare, a cror existen a fost de altfel
descoperit ulterior. Identificarea precis a secvenei nucleotidelor n
genomul viral a permis delimitarea celor 10 gene, care au fost notate cu
primele litere mari ale alfabetului: A, B, C, D, E, F, G, H, J i K. Genele A
i B determin sinteza a dou proteine diferite, cu greutatea molecular de
60.000 i respectiv 35.000 de daltoni. S-a constatat c gena B reprezint
partea terminal a genei A, care este mai mare. In acest fel, genele A i B
sunt suprapuse, gena B fiind translat ncepnd de la un punct de iniiere
intern. Genele D i E sunt de asemenea suprapuse, prima dintre ele
determinnd sinteza unei proteine cu greutatea molecular de 15.000 de
daltoni, necesar pentru asamblarea proteinelor virale, i cea de a doua
determinnd sinteza unei proteine cu o greutate molecular de 10.000 de
daltoni, necesar pentru liza bacteriei. In sfrit, codonul terminal TAA al
genei D se suprapune parial cu o nucleotid a genei J, al crei codon
iniiator este ATC. Descifrarea independent a secvenei nucleotidelor
genelor D i E a artat nu numai c ele se suprapun, dar i c
decodificarea mesajului genetic se face decalat cu o singur nucleotid.
Gena G din genomul fagului X174 conine informaia genetic
pentru sinteza a 4 proteine diferite, notate cu G 1, G2, G3 i G4. Acest
fenomen poate fi explicat prin existena a 4 puncte diferite de iniiere a
translaiei informaiei genetice.

103

AUREL POPESCU

Iniiere

Iniiere

Fig. 4.5. Genele suprapuse codific produi diferii de transcripie i


respectiv produi diferii de translaie (polipeptide), datorit iniierii
acesteia la nivelul codonilor AUG situai n poziii diferite.
Genele suprapuse determin o mrire substanial a capacitii de
codificare a genomului viral. In aceste cazuri particulare genele nu se
succed, ci se suprapun parial, avnd acelai punct de iniiere a translaiei
sau puncte diferite (Fig. 4.4). Existena genelor suprapuse mai are i o alt
semnificaie genetic deosebit, deoarece producerea unei mutaii la
nivelul uneia dintre ele afecteaz i gena sau genele suprapuse cu aceasta.
Ca urmare economia de material genetic pentru nregistrarea unei cantiti
mari de informaie genetic reprezint doar un avantaj relativ, datorit
riscului sporit de afectare a genelor n cazul unei mutaii.
De regul, numai una dintre catenele ADN este transcris i
translat, aceasta fiind catena sens, n timp ce catena pereche
(antisens) prezerv integritatea secvenelor codificatoare. Deci se
poate considera c genele se gsesc de fapt numai pe catena sens.
S-a demonstrat c dou gene pot ocupa acelai segment de ADN, fiind
plasate fa n fa pe cele dou catene cu sensuri contrare. De exemplu,
n esuturile cerebrale de obolan a fost identificat gena GnRH
(gonadotropin releasing hormone), care determin sinteza hormonului
ce elibereaz gonadotropina, dar totodat s-a descoperit c i catena
pereche opus cu secvena genei GnRH este transcris i translat.
Aceast caten formeaz aadar o gen antisens, care a fost denumit SH
(sweet heart) deoarece transcripia i translarea sa n proteine are loc
n inim. Intruct GnRH codific un hormon necesar pentru dezvoltarea
sexual (absena sa nsemnnd sterilitate), aceast gen este foarte stabil.

104

GENETIC

5.

ELEMENTE GENETICE TRANSPOZABILE

In genomul multor specii vegetale i animale sunt prezente copii


multiple ale unor secvene de ADN care au capacitatea de a-i schimba
poziia dintr-un locus n altul. Intruct aceste secvene de ADN, care au
primit denumirea de transpozoni, pot fi integrate n noul locus n cadrul
genomului prin alte mecanisme dect omologia secvenelor de nucleotide,
se consider c ele pot determina recombinarea genetic nelegitim, pot
cauza mutaii, modificri n reglajul genetic al unor gene, activarea sau
inactivarea unor gene i a celor adiacente locusului de integrare,
restructurri cromozomiale (deleii, duplicaii, inversii, translocaii). Aa
cum se va arta n acest capitol, urmare a mobilitii lor, transpozonii sunt
considerai responsabili pentru o parte considerabil a evenimentelor
mutaionale i capabili s regleze simultan activitatea unor gene
independente, acionnd n momente diferite ale dezvoltrii.
Fenomenul de instabilitate somatic observat la porumb,
caracterizat prin apariia de mozaicuri de culoare pe frunze, tulpini,
inflorescene i endospermul boabelor, a stat la baza descoperirii de ctre
Barbara McClintock (1940) a elementelor genetice mobile sau
transpozabile. Pentru explicarea fenomenului mai sus menionat,
McClintock a emis ipoteza existenei anumitor elemente de control care
au capacitatea de a circula dintr-o regiune n alta a genomului i se pot
insera n diferite locusuri determinnd mutaii ale genelor i chiar
restructurri ale cromozomilor. Aceste elemente au fost iniial considerate
gene sritoare (jumping genes) i ulterior au primit denumirea de
elemente genetice transpozabile sau transpozoni. Studierea fenomenului
de instabilitate somatic a fost reluat de ctre Robertson (1978), care prin
105

AUREL POPESCU

utilizarea metodelor de genetic molecular a identificat la o linie de


porumb (cu o frecven de peste 50 de ori mai mare dect cea normal a
mutaiilor spontane) peste 10 clase diferite de elemente genetice
transpozabile.
Elementele genetice transpozabile sunt secvene ale
macromoleculei de ADN avnd capacitatea de a se deplasa n genom
dintr-o poziie (locus) n alta, independent de gradul de omologie a
acestora. Existena transpozonilor a fost demonstrat att la eucariote ct
i la procariote, dimensiunea lor fiind ns extrem de variabil (ntre 750
i 40.000 pb).
La Drosophila melanogaster au fost identificate mai multe tipuri
de elemente genetice transpozabile, cum sunt Copia, FB (fold back),
Hobo, etc., care sunt considerate ca fiind responsabile pentru apariia a
circa 50% din mutaiile cunoscute la aceast specie.
La Rhododendron simsii au fost descrise recent elementele
transpozabile din familia hAT, responsabile de coloraia ptat a florilor
de azalee.
Pn n prezent au fost bine descrise patru categorii de
transpozoni: 1) elemente de control, din care au fost deja descoperite 8
familii; 2) elemente de tip retroviral; 3) Mu (abreviere pentru mutator);
4) inserii biologic necaracterizate, cu structur similar transpozonilor.
Elementele de control pot fi la rndul lor grupate n dou clase: prima
include elementele autonome, care conin toat informaia necesar pentru
propria lor transpoziie, dar a cror activitate (n ciuda autonomiei) poate
fi afectat att de fondul genotipic ct i de factorii de mediu; a doua clas
conine elementele neautonome, care pot fi mobilizate doar n prezena
(oriunde n genom) unui element activ nrudit. Astfel, fragmentul inactiv,
mobilizat, i activatorul formeaz un sistem dublu-element. Cel mai bine
cunoscut sistem de acest fel este Ac-Ds. Majoritatea elementelor Ds sunt
considerate a fi elemente Ac degenerate, n sensul c sunt nrudite cu
elementele active Ac, dar au suferit mutaii i/sau deleii care le-au
inactivat funcia de transpoziie (Fig. 5.1). Totui, multe elemente Ds sunt
omologe cu elementele active Ac doar n secvenele terminale repetate,
care sunt inte necesare n procesul de transpoziie. Astfel, un membru
neautonom al unei familii dublu-element poate fi construit din segmente
terminale adecvate care definesc capetele fragmentelor de mobilizat,
separate de orice secven.
Limita superioar de mrime a fragmentelor care pot fi mobilizate
de transpozoni nu a fost nc determinat, dar se apreciaz c mrimea
acestora poate fi de ordinul sutelor de kb. Secvena de baze pentru
106

GENETIC

integrare pare s fie n mod esenial randomizat, dar relaia dintre situsul
de origine al elementului i situsul n care se transpozeaz nu este n mod
necesar randomizat. Astfel, Ac se deplaseaz mult mai frecvent n poziii
apropiate celei de origine, dect n poziii ndeprtate i rareori se
transpozeaz ntre cromozomi. Ac este n mod obinuit prezent n genom
ntr-un numr redus de copii, aa nct este relativ simplu de urmrit
transpoziia, att n termeni genetici ct i moleculari. In fapt, frecvena de
transpoziie este cu att mai redus cu ct numrul de copii ale Ac este
mai ridicat. In mod contrastant, Mu pare s se deplaseze randomizat n
interiorul genomului, fr a fi limitat la transpoziii scurte. Fagul Mu este
capabil s se insereze n diverse locusuri n cromozomul bacterian,
provocnd o gam larg de mutaii diferite. Ulterior s-a descoperit c
acesta este de fapt un transpozon, care poate s existe i sub forma unui
virus temperat. Capacitatea de replicare a fagului Mu este asociat cu cea
de transpoziie, ceea ce poate determina o serie remarcabil de
rearanjamente cromozomiale, cum sunt fuziunea ntre dou molecule
separate i autoreplicabile independent (repliconi), deleia unor secvene
de nucleotide, inversia unor astfel de secvene, etc.

Fig. 5.1. Structura molecular a elementelor transpozabile Ac i Ds.

107

AUREL POPESCU

Se afirm c transpoziia poate avea sau nu efecte detectabile, ns


inseria unui element genetic transpozabil ntr-o secven de codificare
determin cu mare probabilitate inactivarea genei respective. Totodat,
s-a sugerat c excizia imprecis a elementelor transpozabile poate genera
rearanjamente (deleii, inversii) ale secvenelor cromozomale adiacente.
Structura Molecular a Transpozonilor
Transpozonii difer n mrime i omologia de ansamblu, dar au ca
trstur comun aceeai secven de flancare, format din 11 pb invers
repetate (Fig 5.1). Dou dintre tipurile cele mai frecvente de transpozoni
sunt cele notate Ac i Ds. Se pare c tipul Ds, care cuprinde subtipurile a,
b i c cu mrimi cuprinse ntre 0.4 i 4 kb, provine prin deleii ale tipului
Ac cu o mrime de 4.5 kb (Fig. 5.1).
Cei mai simpli transpozoni sunt cei descoperii la bacterii i
cunoscui acum sub denumirea de secvene de inserie sau elemente IS.
Similar elementelor transpozabile de la eucariote, aceti transpozoni mici
posed secvenele invers repetate la capetele lor i codific propria
transpozaz (proteina enzim necesar pentru producerea exciziei i
realizarea transpoziiei); transpozonii bacterieni codific de asemenea una
sau mai multe proteine implicate n reglarea ratei transpoziiei. Structura
molecular a unei secvene de inserie este prezentat n Fig. 5.2
Transpozonii compleci au dimensiuni mai mari, deoarece pe
lng genele necesare transpoziiei conin i una sau mai multe gene
mobile transpozabile, cum ar fi gene pentru rezistena la antibiotice,
toxine, etc. Ca structur, un transpozon complex include un segment de
ADN mai mare, avnd la extremiti cte un transpozon simplu (IS), iar n
partea central gena sau genele ce sunt transpozate (Fig. 5.2).
Transpozonii sunt n mod obinuit desemnai prin abrevierea Tn
urmat de un numr (de exemplu Tn5). Cnd trebuie s se fac referire la
genele purtate de un astfel de element, se folosete i abrevierea pentru
acestea. De exemplu Tn5 (neo-r ble-r str-r) conine genele pentru
rezistena la trei antibiotice diferite: neomicin (kanamicin), bleomicin
i streptomicin (Fig. 5.2). Aceste gene reprezint markeri, care fac uoar
detectarea transpoziiei unui element complex.

108

GENETIC

IS50L
IS50R

Neo-r

Ble-r

Str-r

Fig. 5.2 Structura molecular a transpozonului Tn5


(dup Hartl i Jones., 1998).
La Escherichia coli sunt cunoscui mai muli transpozoni
compleci, cum sunt Tn3 (Fig. 5.3), Tn5 (Fig. 5.2), Tn10 (Fig. 5.3), etc.
De exemplu, transpozonul Tn3 este constituit dintr-un segment de ADN
de 4.957 pb, care are n partea central gena pentru rezistena la
ampicilin, iar transpozonul Tn10 are o mrime de 9.300 pb i posed
gena pentru rezistena la tetraciclin. Exist i transpozoni compleci mai
mari, cum este transpozonul Tn2571, care are o mrime de 23.000 pb i
posed concomitent mai multe gene de rezisten (la streptomicin,
cloramfenicol, sulfonamide, etc.).

segment mobil

segment
de transfer

Fig. 5.3. Structura molecular a transpozonilor Tn3, Tn10 i Tn55.


Retrotranspozonii
Majoritatea elementelor transpozabile genereaz repetiii directe
de flancare pe fiecare parte a punctului de inserie n ADN int. Multe
elemente transpozabile posed de asemenea repetiii inversate terminale.
Spre deosebire de elementele din clasa 2, elementele din clasa 1
cunoscute sub denumirea de retrotranspozoni se mic prin intermediul
109

AUREL POPESCU

ARN. Cu alte cuvinte, elementele transpozabile din clasa 1 nu codific


transpozaza; ele produc n schimb transcripte ARN i se bazeaz pe revers
transcriptaze pentru a transcrie invers secvenele de ARN n ADN, care
sunt apoi inserate n situsul int.
Element transpozabil

Repetitie inversata terminala


Repetitie terminala de flancare

Fig. 5.4. Retrotranspozonii prezinta repetitii terminale lungi (LTR)


Exist dou tipuri majore de elemente transpozabile de clasa 1:
retrotranspozonii LTR, care se caracterizeaz prin prezena repetiiilor
terminale lungi (LTRs) la ambele capete (Fig. 5.4); elementele
transpozabile non-LTR, crora le lipsesc repetiiile terminale.
Cele mai cunoscute elemente transpozabile non-LTR sunt cele din
familiile LINE1 (sau L1) i Alu. Spre deosebire de elementele LINE1,
care au o lungime de circa 6 kb, elementele Alu au n medie doar cateva
sute de nucleotide, ceea ce le face elemente transpozabile scurte
dispersate, sau SINE. Analizele de genetic molecular au artat c Alu au
avut o expansiune impresionant, fiind prezente n fiecare celul uman n
circa 1 milion de copii. Elementele LINE1 sunt de asemenea comune la
om; dei nu sunt prezente n numr aa de mare ca elementele Alu,
datorit mrimii lor aceste elemente formeaz 15-17% din genomul uman
(Slotkin i Martienssen, 2007).
Dei existena lor nu a fost dovedit pn n prezent dect la un
numr restrns de specii, se apreciaz c elementele genetice
transpozabile sunt ubiquitare n natur i c acioneaz ca reglatori ai
activitii genelor. Un singur element transpozabil este capabil s regleze
simultan activitatea unor gene independente, acionnd n momente
diferite ale dezvoltrii. Prin inserie, elementele transpozabile cauzeaz
duplicarea a 6-8 pb care par s rmn ca o amprent genetic dup
excizia acestora. In virtutea mobilitii lor, elementele transpozabile pot
inactiva gene structurale, altera reglarea genic, reactiva (posibil) gene
silenioase i genera duplicaii i rearanjamente cromozomale. Dei
110

GENETIC

mutaiile induse de multe elemente transpozabile sunt n fapt instabile


genetic, n egal msur ele pot produce mutante stabile. Prin urmare,
elementele genetice transpozabile sunt recunoscute n prezent ca o for
major n modelarea structurii genomului i totodat sunt considerate ca
fiind responsabile pentru o parte considerabil a evenimentelor
mutaionale.
Tipuri de Transpoziie
De regul, transpozonii pot migra i se pot insera n orice locus
din genom, dei uneori prefer s se insereze n anumite secvene de
nucleotide. S-a demonstrat existena a trei moduri distincte de realizare
a transpoziiei elementelor mobile (transpozabile): 1) transpoziie simpl;
2) transpoziie replicativ; 3) retrotranspoziie.
Prin transpoziia simpl (Fig. 5.5) are loc migrarea unui element
genetic transpozabil ntr-un alt locus din genom, determinnd astfel
apariia unui gol (gap) n vechiul loc de inserie. Inseria sa n noul locus
are ca rezultat inducerea unor restructurri cromozomiale, inactivarea
unei gene sau a genelor adiacente, mutaii, etc.

Fig. 5.5. Transpoziia simpl (nereplicativ)

Transpoziia replicativ (Fig. 5.6) se realizeaz prin replicarea


transpozon-ului, urmat de migrarea copiei sale ntr-un alt locus. Spre
deosebire de transpoziia simpl, acest tip de transpoziie nseamn o
mrire a numrului de copii ale transpozonului respectiv per genom.

111

AUREL POPESCU

Fig. 5.6. Transpoziia replicativ

Retrotranspoziia se realizeaz prin transcripia transpozon-ului


n ARN, urmat de migraia n noul locus, unde cu ajutorul enzimei
revers-transcriptaza se produce transcripia invers n ADN. Sub aceast
form, retrotranspozonii sunt inserai n noul locus printr-un proces de
recombinare. Un exemplu de retrotranspozon este Ty de la specia de
drojdie Saccharomyces cerevisiae, care se pare c este nrudit cu
retrovirusurile care au genom ARN, cum este cazul virusului imunodeficienei umane (HIV).
De regul, mobilitatea transpozonilor este determinat de condiii
de stres (de exemplu iradierea cu radiaii ionizante sau neionizante, ocuri
de temperatur, aciunea unor ageni chimici mutageni, cultura in vitro a
celulelor, esuturilor sau organelor), iar inserarea lor n genom se
realizeaz probabilistic. Exist ns i cazuri cnd transpoziia se produce
programat. Un exemplu de transpoziie programat este cel cunoscut sub
denumirea de modelul casetei, prin care se realizeaz schimbarea sexului
la drojdia de bere (Saccharomyces cerevisiae). La aceast specie, celulele
haploide prezint dou tipuri sexuale (a i ) care n momentul fuzionrii
dau natere unor celule diploide. La unele tulpini de drojdii tipul sexual
este stabil, ns la altele acesta se schimb. Schimbarea sexului este
explicat prin modelul casetei dup cum urmeaz: pe cromozomul 3 al
drojdiei exist un locus de mperechere MAT n care gena ce determin
sexul este activ; la o distan de 200 kb de locusul MAT (spre dreapta) se
afl locusul HMR cu gena a i la aceeai distan (spre stnga) se afl
locusul HML cu gena . Cnd una dintre aceste gene (considerate a fi
silenioase) doneaz o caset care migreaz i se plaseaz n locusul de
mperechere, ea nlocuiete gena existent. Ca urmare, gena a nlocuiete
gena n proporie de 90% i invers, schimbndu-se astfel rapid sexul
tulpinii de drojdie. Cele 10% care nu se schimb sunt reprezentate de 5%
112

GENETIC

gene ce nu sunt nlocuite i 5% gene nlocuite cu altele de acelai sex.


Migrarea copiilor genelor silenioase i inserarea lor n locusul de
mperechere se realizeaz prin intermediul transpozonilor.
Intruct elementele genetice transpozabile pot fi integrate n
noul locus n cadrul genomului prin alte mecanisme dect omologia
secvenelor de nucleotide, ele pot determina recombinarea genetic
nelegitim, pot cauza mutaii, modificri n reglajul genetic al unor gene,
activarea sau inactivarea unor gene i a celor adiacente locusului de
integrare, restructurri cromozomiale (deleii, duplicaii, inversii,
translocaii).
Retrovirusurile care infecteaz celulele eucariote sunt nrudite la
origine cu retrotranspozonii. Aceste virusuri au dobndit capacitatea de a
se insera n genomul celular sub form de provirusuri, iar sub form
liber, adic de virioni sau particule virale, pot circula de la o gazd la
alta, spre deosebire de retrotranspozoni care pot circula numai n cadrul
genomului celular. Retrovirusurile i retrotranspozonii se aseamn n
mod deosebit prin faptul c mobilitatea lor se realizeaz prin intermediul
ARN. Recent s-a demonstrat c ntre retrovirusuri, provirusuri i
elementele genetice transpozabile exist similariti structurale
considerabile. S-a observat c dup transpoziie transpozonii sunt legai
de o secven repetitiv inversat de pn la 1.500 pb. Secvena repetitiv
direct ia forma unei duplicaii de 4 pn la 12 pb la locusul de inserie n
genom. Studiul locusurilor de inserie a unor provirusuri i retrovirusuri a
dus la constatarea c inseria n genomul celular se realizeaz n regiuni
unde exist o secven repetitiv de 5 pb, alturi de o secven inversat
format din 3 pb, secvenele respective fiind ns diferite pentru diferitele
virusuri.
Rezultatele studiilor de genetic molecular au dus la ipoteza
provenienei retrovirusurilor din elemente genetice transpozabile. Se
consider c n cursul procesului evolutiv, prin captarea de ctre
transpozoni a unor gene pentru sinteza unor proteine (evident, proteine
pentru construcia capsidei), ele au dobndit capacitatea de a circula nu
numai n cadrul genomului, ci i extracelular, devenind retrovirusuri. Mai
mult, s-a constatat c transpozonii pot fi transportai de ctre virusuri
peste barierele de specie, virusurile fiind de obicei capabile s infecteze
mai multe specii. Transpozonii pot deci circula orizontal de la o specie la
alta prin intermediul virusurilor, devenind un factor important pentru
procesul evolutiv, ca urmare a modificrilor importante pe care le pot
determina n materialul genetic al diverselor specii. Influena elementelor
genetice transpozabile n modelarea genomului se realizeaz prin sporirea
113

AUREL POPESCU

variabilitii genetice i prin frecvena mai ridicat cu care organismele


pot suferi mutaii.
Se poate concluziona c n celule pot exista mici secvene de
ADN care au ajuns la o anumit autonomie fa de genomul celular.
Aceste secvene, devenite elemente genetice transpozabile, au o replicaie
diferit de a ansamblului genomului, i mediaz recombinarea genetic
nereciproc, determinnd asamblarea unor segmente de ADN disparate
neomoloage. Studiul elementelor genetice transpozabile arat aadar c
organizarea ADN n genom este mai fluid i mai dinamic dect s-a
crezut pe baza informaiilor oferite de genetica clasic, fapt care are mare
importan pentru procesul de restructurare a genomului, pentru
intensificarea variabilitii n condiii de stres i pentru adaptarea la
condiii noi de mediu.
Transpozonii n Analiza Genetic
Transpozonii pot fi folosii ntr-o varietate de moduri pentru
analiza genetic. Trei trsturi i fac foarte utili pentru acest scop:
1. Transpozonii pot s se insereze ntr-un numr extrem de mare
de situsuri int, a cror distribuie n genom este n esen
randomizat (ntmpltoare).
2. Muli transpozoni codific propria transpozaz necesar
exciziei.
3. Transpozonii conin una sau mai multe gene pentru rezistena
la antibiotice care servesc ca markeri genetici pentru selecie.
Analiza genetic bazat pe folosirea transpozonilor este
important n mod deosebit la speciile de bacterii patogene, la care acetia
ofer posibilitatea identificrii i manipulrii factorilor implicai n
patogenez. De regul, transpozonii sunt introdui n bacteria patogenic
prin intermediul unui bacteriofag mutant incapabil de replicare n gazda
patogenic, dar numeroase alte metode pot fi folosite n acest scop.
De exemplu, dup introducerea transpozonului Tn (neo-r) i selecia pe
mediul coninnd antibioticul neomicin, singurele celule bacteriene care
supravieuiesc sunt cele care au transpozonul inserat n cromozomul
bacterian, deoarece fagul ADN n care a fost introdus este incapabil de
replicare. Apoi sunt folosite oricare dintre metodele care permit selecia
celulelor n care o anumit gen patogenic a devenit nefuncional
(inactivat) ca rezultat al inseriei transpozonului n gena respectiv. Acest
114

GENETIC

tip de metod de selecie este cunoscut sub denumirea de etichetare cu


transpozon (transposon tagging).
Odat ce gena patogenic a fost etichetat prin inseria
transpozonului, aceasta poate fi folosit n cartarea genetic, deoarece
prezena genei etichetate va avea ca rezultat rezistena la antibiotic
(neomicin n acest caz), ceea ce permite identificarea i selecia ei.
Ulterior, ADN de la tulpina patogenic este purificat, tiat cu enzime de
restricie n fragmente de mrimi adecvate, care sunt inserate n plasmide
de dimensiuni mici, capabile de replicare n E. coli. Rezultatul este o
colecie heterogen de plasmide, majoritatea coninnd alte fragmente de
ADN dect cel de interes. Totui, plasmidele coninnd fragmentul de
interes conin de asemenea i transpozonul etichet, i prin urmare sunt
capabile s confere celulelor gazd rezistena la antibiotic. Colecia
heterogen de plasmide este introdus n celule de Escherichia coli prin
transformare, i acestea sunt cultivate pe mediu solid coninnd antibiotic.
Singurele celule care supravieuiesc sunt cele coninnd plasmida dorit,
adic aceea care conine transpozonul, mpreun cu secvenele de ADN
din gena de interes. Clonarea acestei gene n E. coli faciliteaz
considerabil studiile ulterioare la nivel molecular.

6.

ORGANIZAREA I FUNCIONAREA GENOMULUI


EXTRANUCLEAR

Existena genelor citoplasmatice a fost sugerat nc din anul 1909


de ctre biologul german Carl Correns, ca suport genetic pentru
explicarea transmiterii non-mendeliene a unor caractere ereditare. Ulterior
s-a constatat c la numeroase specii de plante i animale anumite
caractere se transmit ereditar exclusiv pe linie matern, iar confirmarea
existenei genelor extranucleare a fost realizat prin demonstrarea
prezenei n unele dintre principalele organite celulare, respectiv n
mitocondrii (Fig. 6.1) i cloroplaste, a ADN i totodat a ntregului aparat
de sintez proteic. Aceste organite, responsabile de producerea i
stocarea energiei n celul, conin nu numai propriul ADN, dar i ARN,
enzime i ribozomi, deci ntregul echipament necesar transcripiei i
translaiei informaiei genetice.
Primele informaii asupra existenei ADN n organitele celulare au
fost furnizate n anul 1951 pe baza observaiilor care au relevat apariia
coloraiei Feulgen, specific pentru ADN, n unele regiuni ale
cloroplastelor de la muchiul Selaginella. Studiile de microscopie optic
i electronic, precum i tratamentele enzimatice i hidrolitice, au
115

AUREL POPESCU

demonstrat clar existena ADN n mitocondrii i cloroplaste. Aadar, la


eucariote, n afar de genomul nuclear, exist cel puin dou genoame
extranucleare, respectiv unul cloroplastic, specific plantelor verzi
fotosintetizatoare, i altul mitocondrial, comun plantelor i animalelor.
La baza ereditii extranucleare st dublul helix de ADN care codific
macromolecule ce condiioneaz creterea i specificitatea organitelor
celulei eucariote implicate n fotosintez i respiraie.
Genomul mitocondrial i cel cloroplastic (nu ns i organitele
corespunztoare) sunt comparabile cu plasmidele bacteriene. In acest
context trebuie precizat faptul c plasmidele bacteriene sunt molecule
circulare de ADN (implicate n rezistena la antibiotice, parasexualitatea
bacteriilor sau proprietatea lor colicinogenic), mult mai mici dect
cromozomul bacterian (aproximativ 1/100), prezente n numr diferit n
celula bacterian i avnd replicare autonom.
Analiza chimic a ADN cloroplastic (ADNcp) i a ADN
mitocondrial (ADNmt) a demonstrat c aceti acizi nucleici difer ntr-o
msur important de ADN nuclear (ADNn) n ceea ce privete
compoziia de baze. Cercetrile realizate la o mare varietate de organisme
au artat c moleculele de ADNcp i ADNmt sunt ntotdeauna dublu
catenare, dar spre deosebire de ADNn de la eucariote nu formeaz
complexe nucleo-proteice cu histonele sau cu alte proteine bazice.
Demonstrarea existenei ADN n mitocondrii i cloroplaste a jucat
rolul central n acceptarea existenei genelor extranucleare i totodat a
dus la ipoteza c n celula eucariot interacioneaz sisteme genetice
multiple, respectiv cel puin dou la animale (nucleu i mitocondrii) i cel
puin trei la plante (nucleu, mitocondrii i cloroplaste).

116

GENETIC

Mitocondrii

ADN mitocondrial

Fig. 6.1. ADN mitocondrial


Genele citoplasmatice (extranucleare) nu prezint lincaj cu genele
nucleare. Fenomenele de ereditate extranuclear sunt foarte complexe i,
n consecin, au un comportament non-mendelian. Caracterele codificate
de gene extranucleare, manifest o transmitere preferenial, de regul pe
cale citoplasmatic sau matern. Prin urmare, non-identitatea hibrizilor
reciproci reprezint un criteriu cert al ereditii extranucleare.
In prezent se cunoate c ereditatea citoplasmatic st la baza
rezistenei la antibiotice a bacteriilor, a androsterilitii la plantele de
cultur (determinat de alterri n ADN mitocondrial, i nu cloroplastic
cum s-a crezut mult timp), a rezistenei la parazii vegetali, a senescenei
la unele organisme vegetale (de exemplu, Podospora), animale i om,
precum i a unor maladii umane cum este acefalia.
Trebuie precizat c nu ntotdeauna aspectele de ereditate
citoplasmatic au la baz activitatea genelor extranucleare. Un exemplu n
acest sens l constituie caracterul killer la parameci, care are ca substrat
material prezena n citoplasma acestora a unor particule kappa, n fapt
prezena unor bacterii endosimbiotice (Caedobacter taeniospiralis).
Caracteristicile Materialului Genetic din Mitocondrii i
Cloroplaste
Mitocondriile i cloroplastele nu pot aprea de novo, ci numai din
organite preexistente. Ele conin sisteme genetice relativ independente,
117

AUREL POPESCU

n sensul c unele proteine necesare pentru realizarea propriei arhitecturi


sunt importate din citosol, fiind produse ale translaiei unor gene nucleare.
Se consider c n organitele celulare exist trei tipuri de molecule
de ADN: molecule lineare, molecule circulare deschise i molecule
circulare rsucite. ADN-ul mitocondrial de la vertebrate a fost primul
ADN extranuclear caracterizat satisfctor, acesta fiind o molecul relativ
mic (4.5-6.0 m), n comparaie cu ADNmt de la fungi i plantele
superioare (20-30 m) i cu ADNcp (40-60 m). Molecule circulare
deschise sunt considerate cele la care exist o ruptur pe una dintre
catenele moleculei dublu catenare, dar nu i pe catena complementar. In
cazul denaturrii ADN extranuclear, din molecula circular deschis
se obin dou molecule unicatenare (una nchis i una deschis), pe
cnd molecula circular superrsucit renatureaz rapid n forma ei
natural. ADNmt linear a fost identificat numai la unele procariote ciliate
(de exemplu, Paramecium, Tetrahymena) i molecula sa are o lungime de
14-15 m.
De regul, genomurile mitocondriilor i cloroplastelor sunt
formate din molecule circulare de ADN (Fig. 6.1) de dimensiuni variabile
(Tabel 6.1), au structur similar genomului bacterian i sunt prezente n
respectivele organite n mai multe copii.
Tabel 6.1 Mrimea genomului mitocondrial i/sau cloroplastic la unele
grupe de organisme.
Grupa de organisme
Saccharomyces
cerevisiae
Alge verzi
Plante superioare
Mamifere

Mrimea genomului
ADN mitocondrial
ADN cloroplastic
78.000 pb
160.000 pb
(genom linear)
150.000 - 2.500.000 pb
cca 16.500 pb

180.000 pb
120.000 - 200.000 pb

In comparaie cu ADNcp care este relativ uniform ca greutate


molecular, moleculele de ADNmt variaz mult sub raportul greutii n
funcie de sursa de la care provin. Numrul de molecule de ADNmt per
organit este de 2-50, n timp ce n cazul ADNcp numrul de molecule este
mult mai mare (de exemplu 20-40 la porumb, 80 la Chlamydomonas).
Replicarea moleculelor de ADN din mitocondrii i cloroplaste
118

GENETIC

Mitocondriile i cloroplastele sunt capabile s-i replice propriul


ADN, autonom, independent de nucleu. Se cunoate c ADN-polimeraza
mitocondrial i cloroplastic este diferit de cea din nucleu. O dovad
incontestabil a replicrii independente de nucleu a ADN din organitele
celulare a fost furnizat de experimentele de marcare a ADN cu azot
radioactiv (15N) efectuate de Meselson i Stahl. S-a constatat c replicarea
ADNmt i ADNcp se realizeaz semi-conservativ i c exist cteva
modele de replicare, care de altfel sunt asemntoare cu cele descrise
pentru replicarea ADN nuclear.
Modelul de replicare a ADNmt linear de la Tetrahymena este
similar cu cel identificat la bacteriofagul T7, care este considerat a fi cel
mai simplu model de replicare cunoscut n natur. Cromozomul acestui
virus este o molecul de ADN dublu catenar, n care replicarea ADN este
bidirecional i ncepe dintr-un punct de origine situat la o distan de
17% de unul din capetele duplexului. Catenele duplexului parental se
separ ncepnd cu punctul de origine (ori C) i formeaz o bucl sub
form de ochi. Pe msur ce replicarea continu, buclele se mresc pn
ce formeaz dou noi duplexuri. La Paramecium, care are de asemenea
ADNmt linear, replicarea este unidirecional i ncepe dintr-un punct de
origine de la capt, formndu-se o configuraie n form de arcan i apoi
de dimer linear.
Au mai fost descrise alte dou modele de replicare a ADN-ului din
organite: modelul lui Cairns i modelul inelului rotativ. Modelul lui
Cairns seamn cu cel descris la bacteriofagul T7 sau la Tetrahymena, cu
deosebirea c cele dou capete ale moleculei de ADN care se replic
rmn legate covalent n timpul procesului de replicare. Aceasta creaz
probleme, deoarece avansarea procesului de dezrsucire din punctele de
replicare determin formarea unei bucle care este transmis mereu spre
poriunea nereplicat a moleculei, fcnd ca aceasta s devin
superrsucit. Se pare c problema blocrii naintrii replicaiei ca urmare
a superrsucirii este rezolvat cu ajutorul unei proteine (enzime) care
produce tieri pe o caten a duplexului, permind lanurilor parentale s
se roteasc liber unul n jurul celuilalt. Replicaia este ulterior continuat,
dup rotaie, prin legarea rupturilor de ctre aceeai protein.
ADNmt de la animale se pare c se replic conform unui model
Cairns modificat, caracterizat prin formarea unei bucle de deplasare
(bucla D-ADN). Acest model de replicare elaborat pe baza studiului
electronomicroscopic al ADNmt implic ntr-o prim etap ndeprtarea
la un anumit situs a uneia dintre catenele complementare ale ADNmt (de
regul catena uoar - L) care nu este activ ca matri i care apare ca o
119

AUREL POPESCU

bucl (displacement loop). Prin mrirea acestei bucle, denumit bucla D,


are loc conversia ADNmt n D-ADNmt fcnd posibil replicarea catenei
complementare (catena grea - H). Replicarea catenei uoare, respectiv a
buclei D are loc mai trziu, dar n aceeeai direcie (replicare
unidirecional). Se separ dou molecule fiice i , una circular i
dublu-catenar i alta circular parial monocatenar, care n urma
activitii ulterioare a ADN-polimerazei i ADN-ligazei formeaz dou
molecule fiice circulare, covalent nchise. Aceast replicare asimetric a
ADNmt a fost descris pentru prima dat la metazoare i dureaz circa
120 minute. Bucla D a fost ns descris i n cazul replicrii ADNcp de la
mazre.
La mazre i porumb, replicarea ADNcp implic att modelul
Cairns modificat ct i modelul inelului rotativ. Nu se cunoate ns dac
acest model complex de replicare este general n lumea plantelor.
In sfrit n legtur cu perioada din ciclul celular n care se
desfoar replicarea ADN-ului din organitele celulare, se pare c
replicarea ADNcp are un maxim la nceputul perioadei de lumin i un al
doilea la sfritul acesteia, cnd are loc replicarea ADNn. Se consider c
replicarea ADNmt este probabil concomitent cu aceea a ADNn, avnd
loc discontinuu la o mic diferen n timp de replicarea ADNn, sau
continuu n tot cursul ciclului celular.
Genele Cloroplastice
Biogeneza cloroplastelor se afl sub un dublu control genetic: al
genomului nuclear i al genomului cloroplastic. Cloroplastele au un
sistem propriu de sintez proteinic, n care particip ribozomi
cloroplastici care reprezint 20-50% din populaia de ribozomi ai
celulelor fotosintetice, i conin un numr mare de diferite tipuri de
proteine. Unele dintre aceste proteine (ex. enzimele din ciclul Calvin) sunt
prezente n stroma organitului sub form solubil sau semisolubil, iar
altele, precum componentele fotosistemelor I i II, sunt asociate
complexelor hidrofobice ale sistemelor membranare. Proteina numit
fraciunea I (care reprezint enzima ribulozo-1,5-difosfat carboxilaza),
ce intervine n prima etap a fixrii (reducerii) dioxidului de carbon fiind
deci esenial n fotosintez, constituie cea mai mare parte (cca 40%) din
proteinele cloroplastice. Aceast protein major solubil a cloroplastului
este compus din dou subuniti: subunitatea mare (5.5 x 10 4 daltoni) i
subunitatea mic (1.4 x 104 daltoni). Analiza genetic a artat c
subunitatea mic este codificat de gene nucleare, pe cnd subunitatea
120

GENETIC

mare este controlat extranuclear, de gene localizate probabil n


cloroplast. Izolarea subunitii mari a ARNm pentru aceast protein i
hibridizarewa ei cu un ADNcp a artat c are loc hibridarea molecular a
fragmentului ARNm cu segmentul ADNcp. S-a demonstrat aadar c
subunitatea mare a acestei enzime este codificat de ctre o gen
cloroplastic i este sintetizat pe ribozomii cloroplastici. Subunitatea sa
mic este codificat de o gen nuclear, fiind sintetizat pe ribozomi
citoplasmatici i apoi transportat prin membrana cloroplastului n
organit. In urma asocierii subunitii mari cu cea mic este asamblat
enzima funcional, aceasta fiind deci un produs al cooperrii genelor
nucleare i respectiv genelor cloroplastice.
ADN cloroplastic are o mrime de 85-190 kb sau chiar mai mult,
dar la majoritatea plantelor superioare studiate pn n prezent, acesta are
aproximativ 150 kb. Mrimea moleculelor de ADNcp permite aplicarea
relativ uoar a tehnicii ADN recombinant, oferind posibilitatea crerii
bibliotecilor de fragmente de restricie, a clonrii lor, a identificrii
genelor i alctuirii hrilor de restricie. Determinarea ordinii consecutive
a fragmentelor de restricie n molecula intact de ADNcp reprezint baza
pentru cunoaterea aa numitei arhitecturi moleculare a cromozomilor
organitelor celulare.
ADNcp are o compoziie specific de nucleotide, diferit de
aceea a ADNn, n primul rnd datorit faptului c ADNcp este bogat
n AT, spre deosebire de ADNn care este bogat n GC. De asemenea, spre
deosebire de ADNn, ADNcp nu conine 5-metil citozin.
ADNcp de la majoritatea speciilor studiate conine o secven
repetitiv inversat de 20-28 kb, separat n molecula de ADNcp circular
prin regiuni de ADN monocatenar. Exist totui i plante care fac excepie
de la acest mod de organizare a moleculei de ADNcp, printre acestea fiind
Vicia faba i Pisum sativum, la care nu sunt prezente secvenele repetitive.
S-a constatat c ntre specii nenrudite exist un anumit grad de
omologie ntre ADNcp, aa cum s-a demonstrat prin experienele de
hibridare molecular. De regul, cel puin 30% din secvenele de ADNcp
sunt omologe, ele alternnd cu secvene neomologe. Aceast alternan
corespunde probabil celei a regiunilor care codific sau nu proteine.
Studiile moleculare au indicat existena unui conservatorism marcant n
pstrarea poziiilor diferitelor secvene n ADNcp, fapt care confer o
mare stabilitate genomului cloroplastic.
Potenialul de codificare al genomului cloroplastic este mai mare
dect al celui mitocondrial, fiind suficient pentru cteva sute de
polipeptide cu greutatea molecular de aproximativ 20.000 daltoni.
121

AUREL POPESCU

La Euglena, din capacitatea de codificare a genomului cloroplastic,


suficient pentru sinteza a 150 polipeptide cu greutatea molecular de
circa 50.000 daltoni, doar 10% reprezint gene structurale, restul fiind
implicat n reglare.
Sistemul de sintez proteinic cloroplastic este cel mai bine
studiat la Chlamydomonas reinhardtii. In cadrul acestui sistem intr
ribozomi cloroplastici care, similar celor bacterieni, prezint sensibilitate
la rifampicin, spectinomicin, streptomicin, cloramfenicol i ali
inhibitori ai transcrierii i traducerii (translaiei). ARN-polimeraza
cloroplastic, spre deosebire de cea nuclear, este sensibil la rifampicin.
Ribozomii cloroplastici se deosebesc de cei citoplasmatici, avnd o
constant de sedimentare mai mic (60-68S), apropiat de cea a
procariotelor. Ei sunt asamblai n interiorul cloroplastelor, dar
componenta lor proteic este sintetizat pe ribozomii citoplasmatici. Se
apreciaz c concentraia de ribozomi cloroplastici i intensitatea
proceselor de translaie ce se desfoar pe acetia condiioneaz
capacitatea fotosintetizatoare a celulei.
La plantele superioare, genomul cloroplastic conine aproximativ
120 de gene i include 4 gene pentru ARNr, 20 de gene pentru proteine
ribozomale cloroplastice, gene ce codific subuniti ale polimerazei
cloroplastice, gene ce codific proteine ale fitosistemelor I i II, gene ale
subunitilor ATP-sintetazei, 30 de gene pentru ARNt i circa 40 de gene
ce codific proteine cu funcii necunoscute.
Pentru 8 gene cloroplastice, funciile fotosintetice pot fi afectate n
cazul producerii de mutaii, cel mai adesea prin incapacitatea de a
sintetiza unele polipeptide ale membranelor tilacoide. Este de asemenea
cunoscut faptul c mutaia uneia dintre genele cloroplastice duce la
blocarea formrii ribozomilor cloroplastici, cu afectarea sintezei
proteinice cloroplastice i absena activitii fotosintetice.
Genele pentru ARN ribozomal
Genele responsabile cu sinteza ARN ribozomal (ARNr) din
cloroplaste sunt aranjate, ca i cele de la Escherichia coli i alga albastrverde Euglena viridis, n urmtoarea ordine: ADNr 16S - ADN de spaiere
- ADNr 23S - ADN de spaiere - ADNr 5S. La plantele superioare s-a mai
gsit un ARNr de 4.5S asociat cu subunitatea ribozomal 50S.
In genomul cloroplastic al plantelor superioare, genele ADNr sunt
prezente ntr-o singur copie. Mrimea genelor cloroplastice pentru ADNr
122

GENETIC

16S a fost estimat la 1.491 pb, iar cea a genelor ADNr 23S la 1.804 pb.
O comparaie a ADNcp cu ADNr 23S de la E. coli, a relevat o omologie
de 67% n cazul tutunului i de 71% n cazul porumbului. S-a constatat de
asemenea c n ADNr 23S de la porumb exist 3 secvene de inserie
(25 pb, 65 pb i respectiv 78 pb) similare structural cu elementele de
inserie din genomul bacterian. ADN 23S de la Chlamydomonas
reinhardtii este singura gen cloroplastic identificat pn n prezent,
care conine un intron format din 870 perechi de baze.
Genele pentru ARN de transfer
Pe baza rezultatelor experienelor de hibridare molecular total
ntre ARNt cloroplastic i ADNcp s-a dedus c n genomul cloroplastic
exist 25-45 cistroni de ARNt. Se presupune c toate tipurile de ARNt
(32) implicate n sinteza proteic cloroplastic sunt codificate de ctre
genomul cloroplastic. Genele cloroplastice pentru ARNt se deosebesc de
cele ARNt de la E. coli prin lipsa codonului CCA 3 terminal, acest aspect
indicnd o asemnare mai mare a genelor ARNt cloroplastic cu cele de la
organismele eucariote.
Studiile moleculare au reflectat existena la cel puin dou dintre
speciile de plante superioare studiate (porumb i tutun) a intronilor n
genele pentru ARNt. S-a constatat totodat c ntre intronii coninui de
genele ARNt din genomul cloroplastelor de la porumb (2) i cei de la
tutun (2) gradul de omologie a succesiunii de baze este foarte mare,
respectiv 95%.
Genele care codific sinteza proteinelor
Cu ajutorul tehnicilor de clonare a ADN au fost identificate toate
genele din ADNcp responsabile cu sinteza proteinelor cloroplastice.
Prin sinteza de proteine n cloroplaste izolate experimental, s-a
demonstrat c n genomul cloroplastic exist gene pentru codificarea a
5 proteine: subunitatea mare a carboxilazei RuBP (rbeL), polipeptida de
32.000 daltoni asociat cu membrana tilacoidal i 3 din cele 5 subuniti
ale ATP-azei.
Genele Mitocondriale

123

AUREL POPESCU

Studiile asupra ADNmt la eucariote au artat c acesta are aceeai


funcie n toate celulele, care este limitat, dar esenial pentru biogeneza
mitocondriilor.
ADNmt conine gene pentru ARN de transfer (ARNt) i ARN
ribozomal (ARNr), care folosesc la translaia unui numr mic de molecule
de ARN mesager (10-15), implicate n sinteza unui numr similar de
polipeptide ce formeaz complexul enzimatic al membranei mitocondriale
interne (aproximativ 10% din totalul proteinelor mitocondriale).
Majoritatea proteinelor mitocondriale, inclusiv cele responsabile pentru
replicarea, transcripia i translaia informaiei coninute n ADNmt, sunt
codificate de ADN nuclear, sintetizate pe ribozomii citoplasmatici i
importate n mitocondrii.
Prin aplicarea tehnicilor de biologie molecular implicnd
clonarea, hibridarea i secvenarea ADN, au fost obinute rezultate
remarcabile, cum este acela al determinrii complete a secvenei de
16.549 de perechi de baze n genomul mitocondrial uman. Completarea
acestor tehnici cu analiza genetic a recombinrii i mutaiei a permis
identificarea i cartarea majoritii genelor mitocondriale la drojdii
(Saccharomyces cerevisiae). Din rezultatele acestor studii s-a desprins
concluzia c n timp ce proteinele funcionale produse de genele
mitocondriale sunt bine conservate, structura, organizarea, codificarea i
modalitile de exprimare a genelor mitocondriale sunt diferite la
diversele specii de eucariote.
Genele mitocondriale la mamifere
ADNmt de la mamifere codific 2 ARN-uri ribozomale, 22 ARNuri de transfer i 13 proteine. Regiunile care codific sunt plasate alturat
sau sunt separate prin numai cteva nucleotide. Secvenele de spaiere
(intronii) sunt absente, iar la captul fiecrei secvene ce codific ARNr
sau ARNm exist o gen pentru ARNt care are i rol de semnal de
recunoatere pentru enzime.
Genele mitocondriale la drojdii
ADNmt de la drojdii (aproximativ 75-78 kb) conine regiuni
bogate n perechi de baze A-T (peste 50% din genom) i este srac n
perechi de baze G-C (18%).
Genomul mitocondrial include 2 gene pentru ARNr, 25 gene
pentru ARNt i codific acelai numr de proteine ca i la mamifere, cu
deosebirea c ordinea genelor i a secvenelor de spaiere este diferit. S-a
124

GENETIC

constatat c ntre genele care codific proteinele membranei


mitocondriale interne de la drojdii i om exist o omologie de aproape
50%, dei structura lor poate fi foarte diferit.
Analiza genetic a artat c doar dou dintre genele mitocondriale,
respectiv cea care determin sinteza proteinelor apocitocromului b i
citocrom-oxidazei, i gena pentru subunitatea mare a ARNr (21S), conin
introni. De exemplu, gena pentru apocitocromul b conine 5 introni care
separ 6 exoni, gena respectiv avnd de 6 ori lungimea necesar pentru
codificarea proteinei structurale.
Genele mitocondriale la plantele superioare
Mrimea genomului mitocondrial de la plantele superioare este
comparabil cu aceea de la drojdii. ADNmt de la plante are ns un
coninut relativ mai ridicat de perechi de baze G-C (47%) dect cel de la
drojdii, nu are regiuni foarte bogate n A-T i nici secvene de spaiere
(introni). In consecin, potenialul informaional al ADNmt la plante este
considerat a fi mult mai mare dect la animale. Dac se estimeaz c
ADNmt al plantelor superioare msoar minimum 25 m pentru o mas
molecular de 70 milioane de daltoni, se poate considera c acest ADN
trebuie s dirijeze sinteza a mai mult de 100 polipeptide diferite cu o mas
molecular medie de 30.000 de daltoni.
Primele gene mitocondriale identificate la plantele superioare au
fost genele structurale din ADNmt de la Triticum aestivum, responsabile
cu sinteza ARNr 26S, 18S i 5S. La fel ca i la fungi, dar deosebit de
animale, genele ARNr 26S i 18S sunt situate la distan n genomul
mitocondrial de la T. aestivum. In schimb, genele ARNr 5S i 18S sunt
legate fizic unele de altele i desprite de genele ARNr 26S. Acest mod
de aranjare a genelor ARNr ntlnit la T. aestivum i Secale cereale este
deosebit de cel de la procariote, de la cloroplaste, sau de cel nuclear. Ca i
la procariote i cloroplaste, din genomul mitocondriilor lipsesc genele
pentru sinteza moleculelor de ARNr 5.8S, caracteristice genomului
mitocondrial al eucariotelor.
O constatare interesant este aceea c genele mitocondriale de la
plante care codific o subunitate a citocrom c oxidazei nu conin codonul
UGA (prezent la drojdii i om), acesta fiind substituit de codonul CGG.
Genele Mitocondriale i Androsterilitatea Citoplasmatic

125

AUREL POPESCU

Dependena androsterilitii la plantele superioare de activitatea


unor factori ereditari citoplasmatici a fost presupus nc din anul 1950
de ctre M. Rhoades. Ulterior, J. Rogers i J. Edwardson (1952) au
descoperit c fenomenul de androsterilitate la porumb se produce prin
avortarea polenului ca urmare a alterrii structurii mitocondriilor.
La plantele superioare androsterilitatea citoplasmatic este foarte
important pentru selecia plantelor mai productive, mai precoce i mai
rezistente la boli. De exemplu la porumb, aa cum se cunoate, fecundarea
este alogam. In acest context, folosirea sistemului genetic de
androsterilitate ofer posibilitatea reducerii considerabile a costului
programelor de selecie, precum i a cheltuielilor pentru producerea de
smn hibrid, deoarece permite obinerea de linii consangvinizate
(homozigote), de mare utilitate n crearea de hibrizi performani, prin
autofecundare, n condiiile evitrii operaiei foarte costisitoare de
suprimare a inflorescenelor mascule (panicule).
Exist mai multe sisteme genetice de androsterilitate, dar cel mai
avantajos este androsterilitatea citoplasmatic produs de gene
mitocondriale n interaciune cu genele nucleare. Prin folosirea acestui
sistem nu este afectat fertilitatea organului de reproducere femel, iar
fertilitatea polenului hibrizilor F1 este restaurat de genele nucleare prin
supresia genelor mitocondriale pentru androsterilitate.
La porumb exist trei tipuri de androsterilitate citoplasmatic,
desemnate T, C i S, pe baza genelor nucleare specifice (genele Rf)
restauratoare a fertilitii polenului. Pentru ca planta s fie androsteril
trebuie s intervin dou gene nucleare recesive (rf1 i rf2), astfel nct
citoplasma s imprime fenotipul steril (St); orice alt combinaie are ca
efect fertilitatea plantelor. Din ncruciarea unei plante femele de tip St
(cu genotipul rf1/rf1; rf2/rf2) cu o plant mascul fertil restauratoare de
fertilitate (cu genotipul Rf1/Rf1; Rf2/Rf2), rezult hibrizi fertili (Rf1/rf1;
Rf2/rf2) deoarece genele Rf1 i Rf2 sunt dominante i se exprim fenotipic.
In prezent se cunosc foarte bine sistemele de androsterilitate la
peste 150 de specii de plante cultivate.

7.

TRADUCEREA INFORMAIEI GENETICE I


SINTEZA PROTEIC

La scurt timp dup descoperirea structurii macromoleculei de


ADN de ctre James Watson i Francis Crick (1953), a aprut ideea
existenei unui cod genetic. Intruct s-a presupus c secvena
126

GENETIC

nucleotidelor de-a lungul macromoleculei de ADN trebuie s conin sub


o form codificat informaia genetic a organismelor, s-a pus problema
legturii dintre secvena celor 4 tipuri de nucleotide, ce conin diferite
baze azotate purinice i pirimidinice (adenina, guanina, citozina i timina)
i secvena aminoacizilor din catenele polipeptidice.
Ciberneticianul George Gamow (1954) a fost primul care a emis
ipoteza c n macromolecula acizilor nucleici se gsete codificat
biochimic informaia genetic necesar sintezei moleculelor de proteine.
Ipoteza sa a avut la baz un studiu teoretic, innd seama de existena n
macromolecula de ADN a celor 4 tipuri de nucleotide care se pot succeda
ntr-o infinitate de moduri, i de faptul c n molecula proteic sunt 20 de
tipuri de aminoacizi care, de asemenea, se pot succeda ntr-o infinitate de
moduri. Pornindu-se de la imposibilitatea codificrii celor 20 de tipuri de
aminoacizi de ctre o singur nucleotid (41=4) sau prin combinarea a
cte dou nucleotide (42=16), deoarece numrul total de combinaii este
mai mic dect numrul aminoacizilor, s-a ajuns la concluzia c numai
combinaiile de 3 nucleotide (43=64) pot realiza codificarea celor 20 de
aminoacizi.
Macromoleculele de acizi nucleici conin un numr mare de
nucleotide, astfel c prin modificarea secvenei nucleotidelor se poate
nregistra o cantitate enorm de informaie genetic. Dac se consider
c o gen este format n medie dintr-o secven de 1.000 nucleotide,
numrul posibil de schimbri n succesiunea acestora este imens, fiind
egal cu 41000 sau cu 10602 (S. Wright, 1966). In condiiile n care prin
nlocuirea unei singure nucleotide din cele 1.000 ale unei gene, se pot
produce 3.000 de tipuri de gene alele, este evident faptul c macromoleculele de acizi nucleici au o capacitate practic infinit de variaie i
respectiv de nregistrare a informaiei genetice.
Rezultatele primelor experimente privind natura codului genetic
au artat c formarea unui anumit aminoacid este determinat de mai mult
dect o pereche de nucleotide. Ulterior s-a demonstrat c unitatea care
codific un aminoacid este o triplet de nucleotide, denumit codon.
M.W. Niremberg i J.H. Mathew (1961) au avut o contribuie
important la descifrarea codului genetic, prin demonstrarea realizrii
biosintezei in vivo a polifenilalaninei cu ajutorul unui ARN artificial
coninnd numai nucleotide de uracil (poli-U). S-a dovedit astfel
experimental c tripleta de nucleotide UUU codific aminoacidul fenilalanin.
Experimentele bazate pe folosirea ARNm artificiali pentru
demonstrarea sintezei proteice au prezentat ns dificulti n cazul
127

AUREL POPESCU

folosirii ARNm artificial coninnd dou tipuri de baze, datorit apariiei


structurilor secundare. Astfel, n cazul ARNm coninnd adenin i uracil
(poli-AU) sau guanin i citozin (poli-GC), datorit afinitii chimice
dintre bazele respective apar structuri secundare, ntruct ARNm nu mai
este constituit dintr-o singur caten ci formeaz structuri duble sau triple.
innd seama de acest fapt, Niremberg a reuit ulterior s determine
codonii necesari incorporrii diferiilor amonoacizi n lanul polipeptidic.
De exemplu, poli AG determin incorporarea lizinei, iar poli CG
determin incorporarea alaninei, argininei i prolinei n lanul polipeptidic. Aceti poli-AG i poli-CG sunt activi numai n cazul cnd
guanina nu depete 45%, probabil din cauza structurilor secundare care
se formeaz. In mod similar s-a reuit ulterior ca folosindu-se un poli
ACG s se realizeze incorporarea alaninei, argininei, acidului aspartic,
acidului glutamic i lizinei.
Prin folosirea unor ARNm sintetizai artificial s-au putut identifica
codonii pentru mai muli aminoacizi. De exemplu, ARNm artificial n
care ordinea nucleotidelor este UGUGUG determin sinteza unui lan
polipeptidic n care alterneaz cisteina i valina. Ulterior s-a stabilit c
sinteza cisteinei este codificat de codonul UGU, iar a valinei de codonul
GUG.
Una din cile folosite pentru depistarea ordinei nucleotidelor din
codoni o constituie studiul mutaiilor de substituie a unor aminoacizi din
molecula unor proteine mai bine cunoscute, cum sunt hemoglobina,
triptofansintetaza colibacilului, sau proteina virusului mozaicului
tutunului (VMT). De exemplu, o mutaie de substituie foarte frecvent
const n nlocuirea valinei cu izoleucina. innd seama de faptul c
mutaiile de acest tip care se produc la nivelul lanului polinucleotidic
afecteaz de obicei o singur nucleotid, s-a ajuns la concluzia c
izoleucina are drept secven a nucleotidelor AUU. Este prin urmare
evident c nlocuirea valinei cu izoleucina se realizeaz prin schimbarea
codonului GUU pentru valin n AUU pentru izoleucin. In mod similar
s-au descoperit secvenele nucleotidelor i pentru codonii altor
aminoacizi.
Codul Genetic i Caracteristicile Sale
Informaia genetic este codificat n ADN sau, n cazul unor
virusuri, n ARN, sub forma unor secvene de 3 nucleotide, denumite
codoni. Prin transcripie informaia genetic este transferat ARNm, i
apoi prin translaie (traducere) este transformat ntr-o secven de 20
128

GENETIC

tipuri de aminoacizi n catena polipeptidic. In prezent, codul genetic este


descifrat complet, fiind cunoscute toate tripletele de nucleotide (codonii)
din ARNm ce codific diferii aminoacizi (Fig. 7.1). Aceti codoni sunt
formai din 4 tipuri de nucleotide coninnd bazele azotate adenin (A),
uracil (U), guanin (G) i citozin (C).
Codul genetic coninut n macromolecula de ADN poate fi foarte
uor cunoscut prin nlocuirea nucleotidelor din ARNm cu complementul
lor: citozina (C) prin guanin (G), guanina (G) prin citozin (C), adenina
(A) prin timin (T) i uracilul (U) prin adenin (A). Codonii AUG (care
codific sinteza formilmetioninei la E. coli) i GUG (care codific sinteza
metioninei la eucariote) marcheaz iniierea sintezei unei catene
polipeptidice, iar codonii UAA, UAG i UGA sunt codoni fr sens,
adic nu codific nici un aminoacid. Se cunoate de asemenea c codonul
UGA repar genele n cadrul unui mesaj genetic policistronic. Se pare c
cel puin unul dintre aceti 3 codoni marcheaz terminarea sintezei unei
catene polipeptidice. Ca urmare, din cei 64 de codoni (4 3 = 64), un numr
de 3 au rol de punctuaie.
Codul genetic are 5 caracteristici eseniale: este universal,
neacoperit (nu este suprapus), fr virgule, degenerat i ambiguu.
Codul genetic este universal pentru c un anumit codon
codific un acelai aminoacid la orice organism, indiferent de
treapta evolutiv pe care se afl (de la virusuri pn la om).
Aceast caracteristic a fost demonstrat experimental n
sisteme acelulare provenite de la bacterii i mamifere sub
influena unui aceluiai ARNm sintetizat artificial, obinnduse aceeai protein, indiferent dac sistemul acelular provenea
de la bacterie, sau de la mamifer. In acest sens sunt relevante
rezultatele unui experiment n care injectarea n ovocite de
broasc (celule specializate, care nu sintetizeaz niciodat
hemoglobin) a ARNm care codific sinteza hemoglobinei,
purificat din reticulocite de iepure, a determinat sinteza de
ctre acestea a hemoglobinei stabile de iepure. Deci, mesajul
genetic (nscris n succesiunea codonilor) al oricrui sistem
biologic poate fi tradus n citoplasma oricrui alt sistem
biologic.
2. Codul genetic nu este suprapus (non overlaping code),
adic, n succesiune, codonii nu se acoper, nu au nici o
nucleotid comun, ei reprezentnd uniti de codificare de
sine stttoare.
1.

129

AUREL POPESCU

Codul genetic nu are virgule (commaless code), adic


succesiunea codonilor este continu, fr spaii, fr
nucleotide intercalate.
4. Codul genetic este degenerat pentru c mai multe triplete pot
codifica acelai aminoacid (deci sunt sinonime). Astfel,
fenilalanina este codificat de 2 codoni, respectiv UUU i
UUC; alanina este codificat de 4 codoni, respectiv GCU,
GCC, GCA i GCG; serina este codificat de 6 codoni,
respectiv UCU, UCC, UCA, UCG, AGU i AGC, etc. Se pare
ns c degenerarea este relativ, deoarece codonii nu sunt la
fel de eficieni n procesul de biosintez proteic; primele dou
nucleotide din codon sunt cele mai importante, cea de a treia
putnd fi nlocuit cu alt baz azotat de acelai tip (A cu G
sau invers; C cu U sau invers), sau cu oricare alta din cele
patru.
5. Codul genetic este ambiguu deoarece anticodonul dintr-un
ARNt recunoate mai muli codoni din ARNm. Codonul AUG
este recunoscut att de anticodonul pentru metionin (ARNtmet,
ct i de anticodonul fenilmetioninei (ARNtfmet). Ambiguitatea
este determinat i de faptul c aminoacizi cu proprieti
structurale similare pot avea codoni nrudii. De exemplu,
acidul aspartic i acidul glutamic, care difer doar printr-o
grupare (-CH2-), sunt codificai de codonii GAU sau GAC,
respectiv GAA sau GAG, In mod similar, aminoacizii
aromatici fenilalanina, tirozina i triptofanul sunt codificai de
triplete care ncep cu U. Aceast proprietate a fost i este foarte
important pentru evoluie, deoarece nlocuirea unui
aminoacid, determinat de o mutaie punctiform, cu un alt
aminoacid, ntr-o caten polipeptidic, este cu att mai puin
duntoare cu ct aminoacidul nlocuit este mai asemntor
(din punct de vedere structural i implicit al proprietilor sale
fizico-chimice) cu aminoacidul iniial.
3.

Descifrarea (citirea) mesajului genetic coninut ntr-o succesiune


de nucleotide se face ntr-un singur sens. Orice modificare determinat de
adiia, deleia sau modificarea unei nucleotide are ca rezultat, prin citirea
ca atare a informaiei, obinerea unui alt produs (aminoacid).

130

GENETIC

Fig. 7.1 Codul genetic universal. Fiecare set de trei baze nucleotidice
din ARN (deci fiecare codon) este tradus ntr-un aminoacid legat n lanul
polipeptidic n cursul biosintezei proteinelor. De exemplu, codonul
GUG este tradus n valin, GAG n acid glutamic, etc. Abrevierile
aminoacizilor sunt urmtoarele: Phe = fenilalanin, Ser = serin, Tyr =
tirozin, Cys = cistein, Leu = leucin, Trp = triptofan, Pro = prolin, His
= histidin, Arg = arginin, Gln = glutamin, Ile = izoleucin, Thr =
treonin, Asp = asparagin, Lys = lizin, Val = valin, Ala = alanin, Glu
= acid glutamic, Gly = glicin.
Transcripia i Translaia Informaiei Genetice
Transferul informaiei genetice coninut n macromolecula de
ADN se realizeaz prin transcripie i translaie. Prin transcripie,
informaia unei catene de ADN este transmis la ARN-mesager (ARNm),
precum i altor tipuri de ARN. Ulterior, prin translaie are loc
transformarea unei secvene de nucleotide i respectiv de codoni din
ARNm ntr-o secven de aminoacizi n catena polipeptidic.
Proteinele, al cror rol structural i funcional este extrem de
important, sunt foarte variate n natur, pn n prezent fiind identificate
131

AUREL POPESCU

peste 100.000 de proteine diferite (vegetale i animale). In linii mari, toate


aceste proteine sunt alctuite prin variaia secvenei a 20 de aminoacizi
mai importani.
In fiecare celul bacterian, genele se gsesc, n general, ntr-un
singur exemplar, n timp ce numrul moleculelor proteice este foarte
mare, chiar de sute de mii. Aceasta nseamn c decodificarea informaiei
genetice se realizeaz cu vitez foarte mare, nct celula poate sintetiza
rapid cantiti mari de molecule proteice. Pentru aceasta exist un sistem
de amplificare, care rezolv problema i prin care genele sunt copiate n
numeroase exemplare de ARNm. In felul acesta, prin transcripie
informaia genetic este transferat ARNm i apoi prin translaie este
transformat n secvena de aminoacizi.
In procesul de sintez proteic la nivel celular, intervin trei tipuri
de acizi ribonucleici: ARN mesager, ARN ribozomal i ARN de transfer
(ARN solubil), fiecare avnd un rol bine determinat. Rolul ARN n
decodificarea informaiei genetice a fost pus n eviden nc din
perioada 1950-1955 de ctre J. Brachet i T. Caspersson, care au
demonstrat c n celul sinteza proteic este acompaniat de o mrire
considerabil a cantitii de ARN. Ulterior s-a reuit identificarea precis
a celor trei tipuri de ARN i s-au fcut progrese importante privind nu
numai structura lor chimic dar i rolul lor funcional. Toate cele trei
tipuri de ARN celular sunt complementare cu anumite regiuni ale ADN
din celula respectiv, adic sunt sintetizate pe baza informaiei genetice
coninute de acesta.
ARN mesager i transcripia genetic
Acest tip de ARN este reprezentat de molecule de dimensiuni
variabile, n funcie de cantitatea de informaie pe care o conin. Astfel, n
celula bacterian mai muli codoni dispui ntr-o anumit ordine
alctuiesc o gen, care conine informaia necesar sintezei unei catene
polipeptidice. Genele sunt i ele grupate n uniti funcionale mai mari,
denumite operoni. Transcripia operonilor se face n bloc, i ARNm
transcris corespunde mai multor gene i respectiv catene polipeptidice.
Numai n cazuri relativ rare sinteza ARNm corespunde unei singure gene.
Existena ARN mesager (ARNm) a fost descoperit prima dat de
E. Wolkin i L. Astrachan (1958). S-a constatat c acest ARN are
caracteristici proprii, care permit diferenierea sa de alte fracii de ARN.
Aceste caracteristici sunt urmtoarele: este sintetizat rapid n celul;
este heterogen sub aspectul vitezei de sedimentare i respectiv al greutii
132

GENETIC

moleculare; este capabil de hibridare cu o caten de ADN a crei secven


de nucleotide o copiaz; este responsabil de asocierea ribozomilor n
poliribozomi. Cantitatea de ARNm n celul este de numai circa 2-5% din
totalul ARN celular.
Se pare c heterogenitatea vitezei de sedimentare i a greutii
moleculare se datoreaz mrimii genelor copiate din ADN. Prin separarea
celor dou catene de ADN s-a reuit realizarea de hibrizi ARNm-ADN
numai cu una din catene, fapt care indic posibilitatea de copiere a
mesajului genetic coninut doar de una din catene. Rolul ARNm n sinteza
proteic a fost demonstrat experimental prin adaosul de ARNm de la
ADN bacteriofagic la un sistem celular liber de E. coli coninnd
metabolii i ribozomi, acesta determinnd o sintez rapid de proteine
specifice bacteriofagului.
Studiul in vitro al sintezei proteice a indicat c moleculele de
ARNm conin o regiune care iniiaz sinteza lanului polipeptidic i care
este reprezentat de o triplet iniiatoare (codonii AUG sau GUG) ce
codific aminoacidul N-formilmetionina.
ARN-polimeraza
ARN-polimeraza, enzim descoperit n anul 1960 de ctre
S. Weiss, J. Hurwitz i A. Stevens n extracte celulare de tip procariotic i
eucariotic, are un rol important n procesul de transcripie a informaiei
genetice de la o caten de ADN la o molecul de ARNm. In regiunea n
care enzima este activ, cele dou catene de ADN sunt separate prin
ruperea legturilor de H i ca urmare se formeaz o caten de ARNm
complementar cu una din catenele ADN. Apare astfel un hibrid
molecular efemer de tip ADN-ARN, care ieind din zona de activitate a
enzimei se separ, ARNm rmne liber, iar molecula de ADN este
reconstituit prin refacerea legturilor de tip H.

Catena
codificatoare

Gen

Catena
matri

Catena
codificatoare

133

AUREL POPESCU

Catena
matri

Fig. 7.2. Transcripia unei gene (RNAP = ARN-polimeraza).


Sinteza ARNm n procesul transcripiei se realizeaz de la captul
5 spre captul 3 al catenei de ADN, enzima ARN polimeraza cataliznd
conversia ribonucleotidelor trifosfat din mediu ntr-o caten ribonucleotidic de tip ARN. Prin urmare are loc polimerizarea ATP, GTP,
CTP i UTP ntr-o caten de ARNm. ARN-ul transcrie o singur caten a
ADN, de care rmne legat uor prin intermediul enzimei i probabil
printr-un numr limitat de mperecheri la nivelul punctului de cretere al
catenei de ARN. In timpul transcripiei, enzima are rolul de a provoca o
desprire local a catenelor de ADN numai la nivelul acestui punct de
cretere, sinteza realizndu-se ntotdeauna polarizat 5 3.
ARN polimeraza este o enzim cu o greutate molecular foarte
mare, ea fiind format din mai muli constituieni polipeptidici:
enzima minimal, ce catalizeaz formarea legturilor fosfodiester ntre
nucleotide; factorul sigma (), care are o greutate molecular mai redus
(95.000) dect enzima minimal, cu rol de iniiator al catenelor n cursul
transcripiei; factorul ro (), care are rolul de a marca terminarea
catenelor. Factorul sigma este utilizat numai n etapa iniierii sintezei de
ARN, dup care el se disociaz de enzima minimal i se refixeaz de o
alt molecul a enzimei respective, fapt ce permite iniierea sintezei unei
noi catene de ARN.
Urmeaz apoi etapa alungirii, care corespunde creterii catenei de
ARN i se realizeaz cu ajutorul enzimei minimale. Etapa final, n care
intervine factorul ro (o protein cu greutatea molecular de aprox.
200.000), este etapa n care acesta blocheaz creterea ARN. Totodat, n
prezena factorului ro, catenele de ARN nou formate se detaeaz de
matria de ADN.
ARN ribozomal i structura ribozomilor
ARN ribozomal (ARNr) reprezint circa 85% din cantitatea total
de ARN din celule i se gsete exclusiv dispus n ribozomi. Sinteza
diferitelor fracii de ARNr se realizeaz pe matria de ADN, pentru
134

GENETIC

aceasta existnd gene specializate (ADNr). Astfel, la organismele


procariote exist un numr relativ redus de gene care se repet pentru
toate cele trei fracii de ARNr (5S, 16S i 23S). La organismele eucariote
ns, genele ribozomale se gsesc ntr-un numr mare de exemplare, fapt
explicabil prin necesitatea unei cantiti mrite de ARNr. La plante, de
exemplu, genele ce determin sinteza ARNr sunt prezente ntr-un numr
de copii de ordinul miilor (2.200 la Nicotiana tabacum, 2.500 la Taxus
bacata, 10.700 la Pinus silvestris, 12.700 la Triticum aestivum, 32.000 la
Hyacinthus orientalis, etc.).
Ribozomii sunt structuri submicroscopice celulare prezente n
toate celulele procariote i eucariote. Existena lor a fost descoperit de
cercettorul american de origine romn George Emil Palade, laureat al
Premiului Nobel. Studiile de microscopie electronic au artat c la
eucariote ribozomii pot fi liberi n citoplasm sau ataai reticulului
endoplasmatic, i apar de form relativ oval, cu dimensiuni de 20-30 nm.
Izolarea ribozomilor prin ultracentrifugare cu gradient de densitate a adus
primele dovezi care atest c acetia sunt alctuii din 2 subuniti, una
mare i alta mic, ale cror constante de sedimentare (S = constanta de
sedimentare Svedberg) sunt la organismele eucariote de 60S i respectiv
40S. Ribozomii bacterieni i ribozomii mitocondriali i cloroplastidiali ai
celulelor vegetale sunt asemntori sub raportul mrimii de ansamblu i a
subunitilor lor, subunitatea mic 30S fiind alctuit din ARNr 16S i din
21 proteine distincte, iar subunitatea mare 50S din ARNr 28S, 5S i 34 de
proteine distincte.
Ribozomii celulelor eucariote au n subunitatea 60S trei specii de
ARNr (5S, 5.8S i 28S) i 45 proteine distincte, iar subunitatea mic
conine ARNr 18S i 33 proteine distincte.
Componentele din care se autoasambleaz ribozomii au
capacitatea de a se recunoate i de a se asocia. Asamblarea lor ncepe n
nucleol, unde are loc transcrierea ARNr pe baza matrielor pe care le
constituie genele pentru ARN ribozomal, aflate n copii multiple. Imediat
dup sinteza ARNr, acesta este complexat cu proteine, formnd
precursorii ribozomali care migreaz n citoplasm, unde vor fi asamblai
ribozomii, suporturi mecano-structurale i organizatorice specifice
sintezei lanurilor polipeptidice.
ARN de transfer (ARN solubil)
Acest tip de ARN formeaz complexe efemere cu aminoacizii pe
care i transfer la locul sintezei proteice, adic la ribozomi. Denumirea
135

AUREL POPESCU

de ARN solubil se datoreaz solubilitii ARNt ntr-o soluie 1M de NaCl,


fiind binecunoscut faptul c ARNr nu este solubil. ARNt a fost izolat
pentru prima dat de M.B. Hoagland (1957), dei existena sa fusese
sugerat de F. Crick cu mult timp nainte. Molecula de ARNt este relativ
mic, fiind format dintr-o secven de aproximativ 75-90 nucleotide, cu
o greutatea molecular medie de 25.000.
O caracteristic important a ARNt este aceea c conine
numeroase nucleotide neobinuite. Astfel, n cazul ARNt ce transfer
alanina la drojdia de bere, exist 9 nucleotide care conin baze azotate
puin obinuite cum sunt: 1-metilhipoxantina, 1-metilguanina, N2-dimetilguanina, hipoxantina, dihidro-uracilul, pseudouracilul, etc.
Analiza structurii macromoleculei de ARNt arat c ea are un bra
acceptor de aminoacid, format din 7 nucleotide, un bra opus unde se afl
anticodonul format din 5 nucleotide, un bra T unde se afl timina, format
din 5 nucleotide, i un bra D unde se afl dehidrouracilul, format din 3-4
nucleotide. Macromolecula de ARNt mai include o regiune variabil
alctuit din 4-21 nucleotide, care se schimb n funcie de tipul de ARNt.
Sinteza ARNt se realizeaz cu ajutorul genelor respective din
cromozomii celulei, gene care se gsesc ntr-un numr oarecare de copii.
Macromolecula de ARNt are trei regiuni caracteristice necesare pentru
recunoaterea moleculelor sau structurilor celulare cu care vine n contact:
1. Regiunea pentru recunoaterea aminoacidului este situat pe
braul cu codonul CCA de la un capt al moleculei de ARNt.
Fixarea aminoacidului de ARNt specific este catalizat de
enzima aminoacil ARNt-sintetaza. Aceast enzim are o
variabilitate foarte larg n celule, existnd cte o astfel de
enzim pentru fiecare tip de aminoacid.
2. Regiunea anticodonului este reprezentat de o triplet de
nucleotide complementar unui anumit codon din ARNm. Este
aadar evident faptul c numrul de anticodoni este identic cu
cel al codonilor.
3. Regiunea pentru recunoaterea ribozomului este alctuit
dintr-o secven de 5 nucleotide: G-T-P-C-G, n care cu litera
P este marcat pseudo-uracilul. Cu ajutorul acestei regiuni se
realizeaz o legtur temporar a ARNt cu ribozomul n cursul
sintezei proteice.

136

GENETIC

Structura bine definit a moleculei de ARNt permite acesteia


realizarea de interrelaii bazate pe recunoaterea reciproc a unor regiuni
stereoscopice ale altor molecule sau structuri celulare cum este ribozomul.
Mecanismul Molecular al Biosintezei Proteinelor n Ribozomi
Asocierea subunitilor, deci formarea ribozomilor funcionali, are
loc numai atunci cnd ncepe sinteza lanurilor polipeptidice. In sinteza
unui lan polipeptidic, care se consider c ar fi un proces relativ similar
la procariote i eucariote, se disting cteva etape:
1. Activarea aminoacizilor i formarea complexelor amino-acilARNt. In aceast etap, aminoacizii (AA) liberi aflai n citosol sunt
preparai specific i energetic pentru a fi selectiv rnduii n conformitate
cu codonii din ARNm i pentru a avea nivelul energetic necesar formrii
legturii peptidice. Reaciile de activare implic AA liberi, molecule de
ATP, ARNt specifici pentru diferii AA i sunt catalizate de o familie de
enzime denumite AA-ARNt-sintetaze datorit funciei lor de a sintetiza
complexe specifice de AA-ARNt. Pentru fiecare aminoacid i ARNt
corespunztor acestuia, exist cel puin o enzim separat: Ala-ARNtsintetaza, Ile-ARNt-sintetaza, Val-ARNt-sintetaza, etc. Fiecare AA-ARNt
-sintetaz are trei situri active: un sit pentru ATP, comun tuturor tipurilor
de enzim; un sit specific pentru AA; un sit specific pentru ARNt
corespunztor AA.
2. Activarea aminoacizilor i formarea complexelor AA-ARNt;
rolul esenial al AA-ARNt-sintetazelor n traducere.
Formarea complexelor AA-ARNt este o reacie de aminoacilare i
decurge n dou etape:
1) enzima leag mai nti ATP i AA n siturile corespunztoare,
cataliznd o reacie de esterificare a gruprii carboxil la nivelul
restului fosforic din ATP mai srac n electroni. Se formeaz
un complex AA-AMP dup urmtoarea reacie:
AA + ATP + Enzim AA-AMP-Enzim + Pirofosfat
2) enzima pstreaz compusul AA - AMP i leag selectiv ARNt
corespunztor captat din citoplasm, conform reaciei:
AA-AMP-Enzim + ARNt AA-ARNt + Enzim + AMP

137

AUREL POPESCU

Specificitatea de interaciune a AA-ARNt-sintetazei cu AA, pe de


o parte, i cu ARNt corespunztor, pe de alt parte, constituie prima
treapt a specificrii AA n procesul complex al traducerii. Fidelitatea cu
care fiecare aminoacid este incorporat ntr-o secven peptidic specific
n etapele ulterioare ale traducerii este dependent de activitile specifice
ale diferitelor AA-ARNt-sintetaze.
Etapele sintezei catenelor polipeptidice
Etapa de iniiere a sintezei catenelor polipeptidice. Pentru
incorporarea organizat a aminoacizilor ntr-o secven specific a unui
lan polipeptidic, este necesar constituirea unui agregat n care diferitele
complexe AA-ARNt din citoplasm s interacioneze prin intermediul
anticodonilor cu codonii din ARNm. Att ARNm, ct i complexele AAARNt sunt macromolecule expuse micrilor browniene din citoplasm.
Asigurarea stabilitii celor dou macromolecule, ct i orientarea lor n
configuraii spaiale favorabile pentru interaciuni specifice sunt date de
ribozom, care se complexeaz cu ARNm la nivelul unor situri specifice i
formeaz un agregat capabil s ataeze complexul AA-ARNt. Formarea
primului agregat tripartit ARNm-ribozom-AA-ARNt necesar n sinteza
unui lan polipeptidic se numete iniiere, iar agregatul format se numete
complex iniiator.
Codonul iniiator. Tripleta de ribonucleotide din ARNm care
particip la alctuirea sitului de interaciune a mesagerului cu ribozomul,
cu complexul AA-ARNt iniiator i cu factorii iniiatori, poart numele de
codon iniiator. Att la procariote, ct i la eucariote, acesta este constituit
din tripleta 5-AUG-3, care specific incorporarea metioninei. Datele
experimentale obinute in vitro cu ajutorul poliribonucleotizilor sintetici
au indicat c i codonii GUG i GUA pot iniia sinteza de polipeptide, dar
n sintezele naturale numai codonul AUG poate fi iniiator. Tot cu ajutorul
poliribonucleotizilor sintetici s-a observat c formarea complexului de
iniiere are loc la extremitatea 5 a mesagerului, iar citirea se continu n
direcia 5 3. La nceput s-a emis ipoteza simpl c poziia codonului
AUG la extremitatea 5 i confer calitatea de iniiator, iar poziia intern
n secvena codonic a ARNm i confer calitatea de codon de
incorporare. Aceast ipotez a fost infirmat ns de determinrile
secvenelor nucleotidice care au demonstrat c n mesagerii naturali
codonul AUG iniiator nu se afl la extremitatea 5 a ARNm natural, ci se
gsete interiorizat de telosegmente extracodonice (netraductibile).
Secvena telosegmentului 5 mpreun cu codonul iniiator formeaz un
138

GENETIC

sit de recunoatere pentru factorii de iniiere participani n formarea


complexului iniiator. Cu alte cuvinte, situl de iniiere din ARNm nu este
constituit numai din codonul AUG, ci i din telosegmentul 5 care-i
imprim primului calitatea de iniiator.
ARNt iniiator. Cercetrile efectuate n sisteme bacteriene au
demonstrat existena a dou tipuri de ARNt pentru metionin (ARNtMet):
unul care particip numai la iniiere i altul care incorporeaz metionina
interiorizat i nu la extremitatea amino. Drept urmare, primul tip de ARNt
a fost numit ARNt-iniiator. Ulterior, s-a descoperit c i eucariotele
posed tot dou tipuri de ARNtMet. Gruparea amino a metioninei fixat de
acest ARNt este blocat de un radical formil, rezultnd deci complexul
formilmetionin - ARNt. Ca urmare aminoacidul respectiv nu poate fi
incorporat dect n poziia iniial a catenei polipeptidice, ncepnd astfel
translaia (traducerea).
Factorii de iniiere, simbolizai cu iniialele IF (initiation factor)
sunt proteine bazice cu greutate molecular diferit (IF-1 = 9.400 daltoni;
IF-2 = 80.000 daltoni; IF-2b = 100.000 daltoni), care conin n molecul
un numr variabil de aminoacizi (90 la IF-1).
La eucariote, factorii de
iniiere manifest diferene remarcabile ca numr, structur i implicaii
funcionale n controlul ntregului proces de traducere ct i n
difereniere. Sunt descrii cel puin 6 factori de iniiere, toi fiind de
natur proteinic, cu o mare diversitate structural. Sensul biologic al
multitudinii factorilor de iniiere const n necesitatea de a edifica n mod
specific complexul ribozom-ARNm, de a rndui subunitile ribozomale
i ARNm ntr-un edificiu apt de a ncepe sinteza polipeptidului propriuzis. S-a demonstrat c IF-1 i IF-2 sunt necesari pentru fixarea ARNt i
intervin n stabilizarea complexului, n timp ce factorul IF-3 servete la
recunoaterea regiunilor iniiatoare ale diferitelor gene.
Imediat dup sinteza catenelor polipetidice, gruparea formil a
metioninei este ndeprtat de o enzim specific i n 50% din cazuri
nsi metionina este eliminat.
Etapa de alungire a catenei polipeptidice constituie cea de a doua
etap a procesului de sintez. In aceast etap, dou molecule de ARNt se
asociaz cu ribozomul i respectiv cu ARNm. Prima molecul de ARNt
poart catena polipeptidic complet (peptidil ARNt) i ocup locusul
donor denumit peptidil (P), iar cealalt ocup locusul acceptor denumit
aminoacil (A). Se formeaz apoi legtura peptidic ntre grupul aminat al
aminoacil - ARNt i esterul carboxilic al peptidil - ARNt, reacie
139

AUREL POPESCU

catalizat de enzima peptidil transferaz, una dintre proteinele subunitii


50S a ribozomului.
Dup ce se formeaz legtura peptidic, peptidil - ARNt ocup
locusul A i trebuie transferat (translocat) ctre locusul P nainte ca un alt
aminoacid ARNt s poat fi fixat de locusul A. Simultan, ARNt dezacilat
este expulzat din locusul P i ARNm se deplaseaz cu trei nucleotide
n
raport cu ribozomul, astfel nct n locusul A poate fi plasat codonul
urmtor.

Creterea lanului polipeptidic


ARNt deacilat
eliberat din
situsul E

Centrul pentru peptidiltransferaz

Centrul de decodificare
Micarea ribozomului

Fig. 7.3. Alungirea catenei polipeptidice.


Alungirea catenei polipeptidice se realizeaz cu ajutorul a trei
factori de alungire: EF-Tu, EF-Ts i EF-G (EF = elongation factors).
Dintre acetia, primii doi factori faciliteaz fixarea aminoacil - ARNt
pe ribozom, iar ultimul determin deplasarea grupului respectiv corelat
cu GTP, peptidil ARNt i ARNm. Aceti trei factori se fixeaz pe
subunitatea 50S a ribozomului ntre proteinele L7 i L12. Ansamblul
acestor reacii necesit cel puin o molecula de GTP degradat n
GDP i (P).
Incheierea sintezei catenei polipeptidice, cea de a treia etap, se
realizeaz cu ajutorul a doi factori proteici notai RF-1 i RF-2 (RF =
releasing factors), care sunt activai n prezena codonilor de ncheiere a
sintezei, respectiv UAG, UAA i UGA.
140

GENETIC

La eucariote, sinteza proteic se realizeaz de asemenea n cele


trei etape sus-menionate, numai c ribozomii sunt mai mari, coninnd
ARNr cu o greutate molecular superioar i proteine mai numeroase.
Intruct numeroase antibiotice reacioneaz cu ribozomul i cu
sinteza proteic, prin folosirea lor au putut fi studiate etapele sintezei.
De exemplu, tetraciclina inhib fixarea formil metioninei - ARNt,
streptomicina perturb specificitatea citirii codonului ARNm, cloramfenicolul inhib formarea legturii peptidice, eritromicina mpiedic
translocarea, puromicina determin ncheierea artificial a catenei
polipeptidice nainte de timp.
Viteza sintezei proteice
Viteza cu care se realizeaz transcripia i translaia informaiei
genetice s-a studiat la unele gene de la procariote i eucariote. Astfel, la
E. coli gena ce determin sinteza enzimei care intervine n producerea
triptofanului este transcris cu viteza de 28 nucleotide/sec. la 37C, iar
viteza cu care cei 30 ribozomi asigur translaia este de 7 aminoacizi/sec.
Genele ce determin sinteza hemoglobinei umane, formate dintr-o
secvena de 670 nucleotide, sunt decodificate cu viteza de 4 aminoacizi/
secund, ceea ce nseamn c sinteza unei molecule complete de
hemoglobin se realizeaz la fiecare 35 secunde. Aceasta demonstreaz c
viteza sintezei proteice este similar la organismele procariote i
eucariote.

141

AUREL POPESCU

8.

VARIAIA NUMRULUI DE CROMOZOMI


LA
EUCARIOTE

Numrul de cromozomi variaz n limite relativ mari la diferitele


specii de organisme eucariote i, de regul, este caracteristic fiecrei
specii de plante sau animale. Astfel, se cunoate c planta Haplopapus
gracilis posed 2n=4 cromozomi, n timp ce dudul (Morus nigra) are
2n=308 cromozomi. In mod similar, la animale, numrul de cromozomi
din celulele somatice variaz de la 2 n cazul nematodului Ascaris
megalocephala univalens, la aproximativ 1.600 la radiolarul Aulacantha.
De la regula existenei unui numr caracteristic de cromozomi, dublu (2n)
n celulele somatice i simplu (n) n celulele gametice (sexuale), exist
ns numeroase excepii. De exemplu, stuful (Phragmites communis)
reprezint o specie complex, n cadrul creia exist populaii cu
numr variat de genomuri: 2n=36 (3x); 2n=48 (4x); 2n=72 (6x); 2n=84
(7x); 2n=96 (8x). Mai mult, au fost identificate i clone la care numrul
de cromozomi variaz n jurul tipului cu 2n=48, respectiv 2n=44, 46, 49,
50, 52.
In unele cazuri, chiar la nivelul aceluiai individ exist o variaie a
numrului de cromozomi, celulele din diferite esuturi sau organe avnd
numr diferit de cromozomi. Un astfel de exemplu l ofer spanacul
(Spinacea oleracea), la care celulele esuturilor meristematice ale
rdcinii au 2n=12 cromozomi, n timp ce n esuturile altor organe au
fost identificate celule cu 2n= 24, 48 i 96 cromozomi.
Variaiile numerice ale numrului de cromozomi pot fi clasificate
n mai multe grupe mari i anume:
1) Modificri prin care are loc o multiplicare a numrului de
genomuri (x) n celulele somatice (Fig. 8.1). Acest fenomen poart
numele de poliploidie i n funcie de numrul de genomuri organismele
respective pot fi: triploide (3x), tetraploide (4x), pentaploide (5x),
hexaploide (6x), octoploide (8x), decaploide (10x), etc. Poliploizii care
conin un numr par de genomuri sunt denumii artioploizi (2x, 4x, 6x,
8x, etc.), iar cei care conin un numr impar sunt denumii perisoploizi
(3x, 5x, 7x, etc.)
Organismele rezultate prin multiplicarea propriilor garnituri de
cromozomi (genomuri) se numesc autopoliploizi, iar n acest caz seturile
de cromozomi sunt omoloage. Dac mrirea numrului de garnituri de
142

GENETIC

cromozomi s-a realizat prin hibridare interspecific, organismele rezultate


poart denumirea de alopoliploizi.
Organismele care nglobeaz genomuri de la dou sau mai multe
specii, rezultate prin hibridare interspecific, urmat de dublarea
numrului de cromozomi pe cale natural sau artificial, se numesc
alopoliploizi (amfiploizi). Este ns posibil ca amfiploizi s apar i prin
dublarea iniial a numrului de cromozomi n celulele somatice ale
speciilor genitoare, urmat de hibridarea acestor autopoliploizi.
In sfrit, organismele care prezint n toate celulele somatice
acelai numr de cromozomi se numesc euploide, n timp ce organismele
cu numr variat de cromozomi, multiplu al numrului de baz, se numesc
endopoliploide. Uneori, la acelai organism, a fost semnalat existena
(chiar i n acelai esut) a unor celule cu grade variate de ploidie, acest
fenomen fiind cunoscut sub denumirea de mixoploidie.
In timp ce poliploidia este asociat cu o mrire a cantitii de
material genetic (ADN), pseudopoliploidia este fenomenul prin care are
loc mrirea numrului de genomuri datorit unui proces general de
fragmentare a cromozomilor, ceea ce, evident, nu implic schimbri n
cantitatea de ADN comparativ cu genotipul de origine.

Fig. 8.1. Mrirea numrului de seturi de cromozomi are ca rezultat


apariia de forme poliploide.
2) Modificri prin care organismele eucariote prezint n celulele
somatice numai un set de cromozomi. Acest fenomen se numete
monoploidie (x) sau haploidie. Haploizii provenii dintr-un organism
tetraploid se numesc dihaploizi, iar cei care rezult din organisme
poliploide se numesc polihaploizi. Indiferent de numrul de seturi de
cromozomi (unul n cazul haploizilor i mai multe n cazul
polihaploizilor) organismele haploide sunt de regul sterile.
143

AUREL POPESCU

3) Modificri prin care organismele prezint n celulele somatice


nu un multiplu al numrului de baz (x), ci unul sau mai muli cromozomi
n plus sau n minus. Acest fenomen se numete aneuploidie sau
heteroploidie. Pentru reducerea numrului de cromozomi se folosete
noiunea de hipoploidie, iar pentru mrirea acestuia, noiunea de
hiperploidie.
In timp ce aneuploidia este nsoit de o cretere sau micorare a
cantitii de material genetic, fenomenul de pseudoaneuploidie const
ntr-o variaie a numrului de cromozomi ca rezultat al fisionrii i/sau
fuzionrii cromozomilor din genomul de origine. Intruct acest proces are
loc cel mai adesea n regiunea centromeric, numrul de cromozomi (2n)
variaz, n timp ce numrul fundamental de brae cromozomiale (NF)
rmne constant.
4) Variaia numrului de cromozomi prin adiia la complementul
normal a unui numr variabil de cromozomi (denumii cromozomi B,
accesorii, sau supranumerari). Cromozomii B sunt, n general, mai mici
dect cromozomii complementului normal, nu sunt omologi cu acetia i,
datorit unui comportament mitotic i meiotic particular, prezint o
variaie numeric intraindividual, i intra- sau interpopulaional.
Poliploidia
Multiplicarea numrului de genomuri constituie o mutaie
genomic cu o deosebit importan genetic, deoarece:
-

prin poliploidie are loc o mrire a cantitii de material genetic


(ADN) i respectiv a posibilitilor de variaie genotipic prin
efectul de doz, prin mutaie i selecie, fapt care determin
apariia fenomenului de diploidizare adaptativ a poliploizilor;
prin poliploidie se realizeaz apariia de combinaii hibride
stabile, la care fenomenul heterozis are un caracter constant; n
timp ce hibrizii interspecifici sunt, n general, sterili, datorit
unor bariere de natur genetic, amfidiploizii sunt fertili i
prezint heterozigoie i homeostazie constant;
poliploidia a avut i are un rol important n procesul de
evoluie; existena seriilor poliploide intraspecifice i
interspecifice, precum i frecvena mare a poliploizilor n
natur, constituie dovezi c poliploidia a contribuit la sporirea
diversitii organismelor vegetale i animale.
144

GENETIC

Denumirea de poliploidie a fost folosit pentru prima dat de


Winkler (1916), pentru a desemna plantele care prezentau un numr
multiplicat de genomuri.
La plante, n general, numrul de cromozomi ntr-un genom nu
este foarte mare i n majoritatea cazurilor acesta nu depete 12. De
altfel, chiar i la unele genuri cum sunt Populus sau Pyrus, la care
numrul de cromozomi dintr-o garnitur este mai mare (19, respectiv 17),
pe baza constatrilor c formele triploide aparinnd speciilor de plop i
pr au o fertilitate aproape normal (cunoscut fiind faptul c triploizii sunt
cel mai adesea total sterili), s-a concluzionat c acestea au suferit un
fenomen de poliploidie secundar, i c numrul de baz este mai mic
dect cel aparent. Spre exemplu, n cazul genotipurilor de pr triploide se
consider c numrul de baz de cromozomi a fost iniial 8.
Fenomenul poliploidiei este foarte rspndit la plante i se
apreciaz c speciile poliploide reprezint 47% din totalitatea
angiospermelor. Frecvent, speciile aparinnd aceluiai gen prezint
o mare variaie a numrului de genomuri, alctuind adevrate serii
poliploide (Tabel 8.1). Spre exemplu, n genul Chrysanthemum exist
specii cu 2n=18, 36, 54, 72, 90, 126 i 144 cromozomi.
La plante, poliploidia este corelat cu modificri importante
morfologice, fiziologice i biochimice, care se reflect ntr-o mrire a
habitusului formelor poliploide (incluznd o vigoare mai mare a
frunzelor, tulpinilor, rdcinilor, inflorescenelor i florilor, precum i a
seminelor sau fructelor). S-a evideniat de asemenea corelarea pozitiv a
poliploidiei cu dimensiunea stomatelor, cu numrul de cloroplaste n
stomate, cu mrimea grunciorilor de polen i cu numrul de pori
germinativi.
Din punct de vedere fiziologic i biochimic, plantele poliploide
prezint o cantitate mai mare de clorofil i o capacitate sporit de
fotosintez, o capacitate mai mare de producie a substanelor proteice,
glucidelor, vitaminelor, pigmenilor, etc., o rezisten sporit la ger,
secet, boli i duntori.
Exist ns numeroase excepii, n care formele poliploide nu sunt
caracterizate prin fenomenul de vigoare ridicat, dar prezint n schimb o
adaptabilitate foarte bun la condiii extreme de mediu. Se consider de
altfel c aceasta este principala explicaie pentru frecvena mare a
speciilor i populaiilor poliploide n regiunile montane, arctice, deerturi,
terenuri srturate, etc. S-a constatat de asemenea c perioada de vegetaie
a poliploizilor este mai lung, comparativ cu diploizii corespunztori.
145

AUREL POPESCU

Tabel 8.1. Evoluia numrului de baz de cromozomi (x) i exemple de


serii poliploide la unele genuri de plante.
Genul

Numr
de baz de
cromozomi
(x)

Triticum
Rosa
Rubus
Fragaria
Dahlia
Prunus
Chrysanthemum
Senecio
Lycopersicon
Solanum
Nicotiana
Tulipa
Rhododendron
Malus
Pyrus
Vitis

7
7
7
7
8
8
9
10
12
12
12
12
13
17
17
19

2x

4x

6x

8x

10x

12x

14x

16x

+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+

+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+

+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
-

+
+
+
+
+
+
+
-

+
+
-

+
-

+
-

+
-

La animale poliploidia este mai puin frecvent, mai ales la cele


mai evoluate, la care diferenierea heterozomilor i apariia
determinismului cromozomial al sexelor fac aproape imposibil mrirea
numrului de garnituri cromozomiale.
Autopoliploidia
Autopoliploidia este un fenomen spontan la plante, prin care se
realizeaz o multiplicare a complementului cromozomial. Acest fenomen
a fost sesizat pentru prima dat la planta Oenothera lamarckiana n anul
1900, cnd Hugo de Vries a identificat o form cu habitus foarte
dezvoltat, pe care a denumit-o gigas, i care s-a dovedit a fi tetraploid
(2n=28).
Frecvena n natur a formelor autopoliploide este relativ mare, i
unele dintre aceste forme au fost selecionate de om pentru caracteristicile
lor. Printre acestea pot fi menionate cartoful (Solanum tuberosum,
2n=28), lucerna (Medicago sativa, 2n=32), arborele de cafea (Coffea
146

GENETIC

arabica, 2n=22, 44, 66, 88), mrul (Malus domestica, 2n=68), prul
(Pyrus communis, 2n=68), via de vie (Vitis vinifera, 2n=76), etc.
De asemenea, n cultur au fost introduse unele forme triploide,
care manifest heterozis i nu au semine, cum este cazul bananierului
(Musa sapientum, 3n=33), mrului (Malus domestica, 3n=51), prului
(Pyrus communis, 3n=51), pepenelui (Citrullus vulgaris, 3n=33),
ananasului (Ananas sativus, 3n=75), viei de vie (Vitis vinifera, 3n=57),
etc. In prezent, la numeroase specii horticole importante se cultiv soiuri
cu nivele variate de ploidie. Mai mult, la unele specii ornamentale,
formele autopoliploide au nlocuit n cultur speciile diploide originare,
datorit calitilor lor decorative superioare conferite de mrimea, forma
i culoarea florilor, sau chiar a frunzelor i tulpinilor.
Mecanisme citologice de apariie a autopoliploizilor
Este un fapt bine cunoscut c mecanismele citologice care
determin apariia autopoliploizilor pe cale natural, sau sub influena
unor factori artificiali, sunt foarte variate. Cel mai adesea fenomenul
poliploidiei are ca suport afectarea diviziunii celulare mitotice sau
meiotice.
Se consider c exist 3 tipuri de modificri la nivel celular, care
conduc la apariia poliploizilor:
a) diviziuni de reducere cromozomial (meioze) anormale, care
determin formarea de celule sexuale diploide (2n), prin a
cror unire n procesul fecundaiei se formeaz un organism
tetraploid (4n);
b) diviziuni mitotice anormale datorit nerealizrii migrrii la
poli a nucleilor, care au ca rezultat apariia nucleilor de
restituie i n final a celulelor somatice tetraploide, acestea
fiind la rndul lor punct de plecare pentru formarea de celule
sexuale diploide (2n);
c) diviziuni mitotice anormale imediat dup formarea zigotului,
care au ca rezultat autopoliploidizarea ntregului organism.
Analiznd cauzele care pot determina formarea de autopoliploizi,
a fost sugerat existena mai multor mecanisme:
1. Un factor important este considerat a fi endomitoza,
consecin a incapacitii de formare a fusului de diviziune i a
147

AUREL POPESCU

2.

3.
4.

5.

nerealizrii dezintegrrii membranei nucleare, avnd ca


rezultat multiplicarea numrului de cromozomi din nucleul
iniial diploid. Dac din celulele respective se formeaz apoi
celule reproductoare, sau dac acestea servesc la formarea
mugurilor sau lstarilor (n cazul plantelor cu propagare
vegetativ), are loc apariia de forme autopoliploide.
Un al doilea factor care poate determina apariia poliploidiei
este considerat a fi mitozele anormale, n cazul crora dei
membrana nuclear este dezintegrat, nu are loc formarea unui
fus nuclear funcional. In celulele respective, gruprile
anafazice i telofazice ale materialului genetic nu se separ n
doi nuclei fii i se reface membrana nuclear (nucleu de
restituie).
Fuziunile somatice ale celulelor sau nucleilor n esuturi
difereniate, pot constitui un alt factor implicat n generarea
autopoliploidiei.
Fuziunile nucleare sau cromozomiale n celulele germinale pot
avea de asemenea ca rezultat apariia autopoliploidiei. In acest
caz, meioza se desfoar normal pn la o anumit faz, dup
care nucleii sau cromozomii telofazici fuzioneaz formnd
celule diploide, triploide, etc.
Procesele regenerative prin care n fazele normale 2n ale
ciclului de via sunt formate din faze diploide sunt
considerate ca fiind alte ci posibile de realizare a
autopoliploidiei. La Briophyta i Pteridophyta, esuturile
gametofitului normal haploid dau natere sporofitului diploid,
iar prin repetarea acestor procese se pot forma organisme 4n,
8n, etc.

Aadar erorile care pot determina apariia de celule


autopoliploide sunt foarte numeroase, aceastea explicnd frecventa
producere spontan a organismelor (mai ales plante) poliploide. Foarte
adesea aceste organisme se dovedesc a avea capacitate adaptativ
superioar formelor iniiale, aa nct prin selecie natural are loc
conservarea lor.
Intruct organismele poliploide (n special cele vegetale) pot
prezenta importan economic, n ultimele decenii au fost elaborate
metode foarte variate i eficiente pentru inducerea experimental a
autopoliploidiei. Rezultatele numeroaselor cercetri ce au avut ca scop
148

GENETIC

inducerea autopoliploidiei au artat c unele tipuri de plante sunt mai


susceptibile la dublarea genomului, i anume:
1) plantele care prezint n mod natural un numr relativ redus de
cromozomi n celulele somatice;
2) plantele alogame, a cror poliploidizare se poate realiza mai
uor comparativ cu cele autogame;
3) plantele care sunt cultivate pentru organele lor vegetative
(frunze, tulpini, rdcini, flori).
Dup tipul agenilor implicai (fizici, chimici, biologici), metodele
de generare a poliploidiei pot fi clasificate n:
A. Metode fizice.
Metoda centrifugrii, elaborat de D. Kostoff (1937), const n
centrifugarea plantelor n faza embrionar cu o vitez suficient de mare
pentru ca n esutul meristematic s se produc distrugerea fusului nuclear
n celulele n diviziune, apariia de poliploizi fiind n acest caz posibil
prin npiedicarea migrrii cromozomilor spre polii celulei.
Metoda ocurilor de temperatur, propus de L.F. Randolph n
anul 1932, se bazeaz pe influena expunerilor de scurt durat la
temperatur ridicat n perioada primelor mitoze dup fecundare. Prin
utilizarea acestei metode la speciile Triticum aestivum, Triticum
compactum, Secale cereale i hibrizi Triticum x Secale, respectiv prin
aplicarea unui oc de temperatur de 42-43C timp de 20 ore, Dorsey
(1936) a obinut 3% plante poliploide din totalul plantelor tratate termic.
Metoda iradierii se bazeaz pe efectul negativ al radiaiilor asupra
organizrii i funcionrii fusului nuclear, i n consecin pe
imposibilitatea migrrii cromozomilor spre polii celulei, care are ca
rezultat formarea nucleului de restituie cu numr dublu de garnituri de
cromozomi.
B. Metode biologice.
Metoda poliembrioniei, se bazeaz pe constatarea c, la
majoritatea plantelor superioare, seminele conin cu o frecven variabil
doi sau mai muli embrioni, unii dintre acetia fiind poliploizi (n special
triploizi). La Vitis vinifera de exemplu, n urma analizei realizate la 35
genotipuri, Bouquet (1980) a raportat o valoare medie a poliembrioniei de
0.054%. A fost ns remarcat faptul c un hibrid V. vinifera x V. riparia a
prezentat o valoare semnificativ mai mare a poliembrioniei, respectiv 5%.
149

AUREL POPESCU

O frecven relativ ridicat a poliembrioniei (2-7%) a fost sesizat de


asemenea la unele soiuri aparinnd speciilor Prunus domestica i Prunus
avium. Intruct capacitatea natural de germinare a embrionilor gemeni
este cel mai adesea sczut, metoda poliembrioniei se poate dovedi foarte
util pentru selecia de plante poliploide atunci cnd se apeleaz la
recuperarea embrionilor prin germinarea pe mediu de cultur in vitro
(embriocultur).
Metoda regeneraiei, elaborat de Winkler (1916), const n
producerea de rni n calusul ce se formeaz n zona de sutur dintre altoi
i portaltoi, i se bazeaz pe constatarea c unii dintre lstarii regenerai
din acest calus sunt poliploizi (cel mai adesea tetraploizi). Metoda poate fi
aplicat nu numai plantelor care se propag prin altoire (pomi fructiferi,
vi de vie, trandafiri, etc.), ci i celor cu nmulire generativ. S-a raportat
de altfel c metoda regeneraiei a fost folosit cu succes pentru obinerea
de poliploizi la genurile Solanum i Nicotiana.
Metoda culturilor in vitro de celule i esuturi, pare a fi una dintre
metodele cu cea mai mare eficien pentru obinerea de plante cu grade
variate de ploidie. Apariia de forme poliploide printre plantele regenerate
din cultura in vitro de celule (inclusiv protoplati) i esuturi somatice este
unul dintre evenimentele nregistrate cu frecven relativ ridicat la
numeroase specii vegetale. De altfel, cultura de esuturi somatice a fost
sugerat ca o cale eficient pentru generarea de poliploizi, cu peste trei
decenii n urm (Murashige i Nakano, 1966). Este un fapt bine cunoscut
n prezent c frecvena celulelor poliploide crete considerabil n cultura
de calus de lung durat. Factorii care pot determina instabilitatea
genomului celular n condiiile de cultur in vitro i generarea poliploidiei
sunt numeroi i probabil c n majoritatea cazurilor acioneaz sinergic.
Unii dintre regulatorii de cretere folosii frecvent pentru regenerarea de
plante din celule i esuturi vegetale cultivate in vitro, i anume auxinele
2,4-D (acid 2,4-diclorofenoxiacetic) i ANA (acid -naftilacetic), sunt
ns considerai a fi responsabili ntr-o msur important de apariia
plantelor poliploide.
Un exemplu de poliploidizare indus in vitro a fost semnalat de
Nyman i Wallin (1992) la genotipuri de Fragaria. Astfel, printre cele 51
de plante regenerate din protoplati aparinnd unor genotipuri de
F. x
ananassa (octoploide), au identificat 15 hexadecaploizi (16x), 8
mixoploizi i un diplodecaploid (12x). Plantele cu numr dublu de
cromozomi s-au difereniat clar de plantele normale (octoploide) prin
frunzele mai groase i mai puin numeroase, peiolul mai scurt i mai
gros, precum i prin florile mai mari. Apariia poliploidiei a fost
150

GENETIC

semnalat i n cazul regenerrii de plante din calus derivat din antere.


Astfel, Simon i colab. (1987) au raportat c, n mod surprinztor, toate
somaclonele obinute prin organogenez din calusul de antere la soiul
remontant de cpun Bordurella au avut numr dublu de cromozomi
(2n = 16x = 112). Observaiile efectuate asupra acestor somaclone au
relevat o cretere semnificativ a grosimii laminei foliare i peiolului,
precum i a coninutului de substan uscat solubil n fructe, comparativ
cu plantele genotipului de origine, octoploid.
Metoda fuzionrii protoplatilor (celule vegetale lipsite de
peretele pecto-celulozic) s-a dovedit a fi foarte eficient, i poate fi
folosit pentru inducerea autopoliploizilor la toate speciile vegetale la
care sunt ntrunite urmtoarele condiii: un randament ridicat de izolare
enzimatic a protoplatilor, viabilitate ridicat a acestora dup tratamentul
enzimatic, capacitate nealterat de refacere a peretelui celular dup
fuzionarea protoplatilor, potenial ridicat de regenerare de plante din
calusurile formate din protoplati. Fuzionarea protoplatilor vegetali poate
fi stimulat de anumii ageni inductori, cum sunt polietilenglicolul
(PEG), sau impulsurile electrice de frecven sczut (2-20 Mhz),
intensitate ridicat (0.5-5.0 kV/cm) i durat foarte scurt (20-50 s).
C. Metode chimice. Este general recunoscut faptul c pn n
prezent cele mai bune rezultate n inducerea poliploidiei la plante s-au
obinut prin tratarea seminelor sau plantelor n diferite faze de vegetaie
cu o gam variat de substane chimice. Dup modul lor de aciune aceste
substane sunt incluse n dou grupe principale:
a) substane cu aciune de tipul colchicinei, care inhib formarea
fusului de diviziune i, prin urmare, blocheaz migrarea
cromozomilor metafazici spre polii celulei. Nucleii de
restituie autotetraploizi care se formeaz sub aciunea unor
astfel de substane, reprezint aadar punctul de pornire n
apariia de celule, esuturi, organe, sau plante n ntregime
autopoliploide. Alturi de colchicin, din acest grup mai fac
parte cumarina, acenaftenul, clorhidratul, -monobromnaftalena, -monoclornaftalena, -monoiodnaftalena, etc.
b) substane cu aciune de tipul para-diclorbenzenului, care nu
blocheaz formarea fusului de diviziune, ci interfereaz
negativ cu procesul de formare a membranei nucleare. Apariia
celulelor poliploide este n acest caz rezultatul fuzionrii a doi
151

AUREL POPESCU

sau mai muli nuclei. Pe lng para-diclorbenzen, din acest


grup de substane mai fac parte monoclorbenzenul, ortodiclorbenzenul, meta-diclorbenzenul, mono-brombenzenul,
orto-clortoluenul, meta-clortoluenul, etc.
D. Metode chimico-biologice. Combinarea culturii in vitro de
esuturi vegetale cu tratamentul cu ageni chimici pentru inducerea
autopoliploidiei s-a dovedit a avea o eficien extrem de ridicat. De
altfel, se apreciaz c dublarea numrului de cromozomi prin tratamentul
cu colchicin in vitro prezint avantaje importante comparativ cu
poliploidizarea in vivo, ntruct lstarii in vitro sunt uor de manipulat,
meristemele acestora sunt compuse dintr-un numr mai redus de celule,
comparativ cu cele ale plantelor in vivo, i sunt mai puin protejate de
primordiile foliare, fapt care permite mutagenilor chimici n faza lichid
s intre uor n contact cu celulele meristematice. De exemplu,
Niemirowicz-Szczytt i colab. (1986) au raportat succesul n restaurarea
fertilitii unor hibrizi interspecifici de cpun prin autopoliploidizare,
respectiv prin dublarea numrului de cromozomi n plantele regenerate
din meristemele tratate cu colchicin.
Utilizarea embrionilor maturi sau imaturi pentru obinerea de
poliploizi prin colchicinizare in vitro, a fost de asemenea raportat ca
fiind foarte eficient. Niemirowicz-Szczytt i colab. (1984) au obinut
poliploizi ai soiului Baron Solemacher (Fragaria vesca) prin cultura
achenelor pe mediu cu colchicin. Recent, pentru aceeai specie, Bors i
Sullivan (1995) au raportat optimizarea tehnicii de colchicinizare prin
pictur, bazat pe tratamentul cu soluii de colchicin (1-5%), timp de
6-26 ore, a plantulelor aflate n faza de prima frunz adevrat, formate
din achenele de cpun plasate pe mediul de cultur in vitro.
Colchicina i mecanismul su de aciune. Efectul statmocinetic
al colchicinei a fost descoperit de A.F. Blakeslee i A.G. Avery n anul
1937, care au constatat c acest alcaloid extras din bulbul plantei
Colchicum autumnale (brndua de toamn) inhib formarea tubulilor
fusului de diviziune sau l distruge. Colchicina este o substan de culoare
alb, foarte solubil n ap, care se degradeaz rapid sub influena luminii
(fotolabil) i cldurii (termolabil). Cel mai frecvent, pentru inducerea
autopoliploidiei sunt tratate cu soluii apoase de colchicin (0.01-2.0%)
semine n curs de germinare, sau meristemele terminale (vrfuri de
cretere) sau axilare (muguri axilari) ale plantelor.
152

GENETIC

De exemplu, la speciile de Fragaria tehnica dublrii numrului de


cromozomi prin tratamente cu soluii de colchicin a fost utilizat nc din
anul 1938 de ctre Dermen i Darrow, care au reuit s obin in vivo
forme 4x de F. vesca i forme 16x de F. x ananassa. Succesul dublrii
genomului prin tratamentul apexului sau a mugurilor axilari cu 1-2%
colchicin, timp de 16-28 ore, a fost ulterior confirmat la numeroase alte
specii i hibrizi interspecifici de Fragaria. Prin prisma procentului de
poliploizi indui prin colchicinizare, rezultatele au indicat ns o larg
variabilitate, aceasta fiind atribuit factorilor genetici, care pot influena
sensibilitatea diferitelor genotipuri la colchicin.
Sub influena colchicinei, diviziunea celular mitotic se modific
n mod esenial i poart denumirea de C-mitoz, colchimitoz sau
statmocinez. In funcie de specie, de intensitatea i durata tratamentului,
fusul nuclear este influenat ntr-o msur variat, astfel:
1) formarea fusului celular este blocat total i se formeaz un
nucleu de restituie (fenomenul este denumit statmocinez).
2) formarea fusului celular este blocat parial (fenomenul este
denumit merostatmocinez).
3) fusul celular este orientat neregulat (fenomenul este denumit
tropocinez).
Mecanismul C-mitozei este foarte bine cunoscut de peste o
jumtate de secol. Sub influena colchicinei fusul de diviziune este
inactivat i are loc o ntrziere a diviziunii centromerului, fr ns ca
replicaia cromozomilor i separarea lor n cromatide s fie afectat.
C-profaza mitozei nu se deosebete fundamental de cea normal. In
schimb, n C-metafaz (pseudometafaz), n absena fusului de diviziune,
cromozomii nu se dispun n plac ecuatorial, ci se disperseaz n
citoplasm. Cromozomii sunt puternic contractai (mai scuri i mai
groi), iar cromatidele omoloage unite prin centromer se resping n partea
distal a braelor, ceea ce determin forma caracteristic de X. Inactivarea
centromerilor (nu se divid) cauzeaz acumularea de metafaze i ca urmare
dublarea cromozomilor. In C-anafaz (pseudoanafaz) are loc diviziunea
centromerilor i individualizarea cromatidelor omoloage, care rmn ns
dispuse paralel (aspect asemntor perechii de schiuri); n C-telofaz
(pseudotelofaz) fiecare cromozom, datorit dublrii i neseparrii, este
format din 4 cromatide, care sunt incluse ntr-un singur nucleu (nucleu de
restituie). In cursul diviziunilor urmtoare, n absena influenei
colchicinei, acest nucleu va sta la baza apariiei unor esuturi sau plante
ntregi autopoliploide (tetraploide).
153

AUREL POPESCU

Prelungirea influenei colchicinei poate produce repetarea


C-mitozei n aceleai celule, ceea ce are ca rezultat apariia de nuclei
8-ploizi, 16-ploizi, etc. Mrirea continu a gradului de ploidie a celulelor
aflate sub influena colchicinei este n mod concludent demonstrat de
observaiile fcute de Levan (1938) la Allium cepa (2n=16), respectiv de
identificarea unor celule cu 256 cromozomi (de 16 ori mai muli dect n
celulele diploide normale), dup un tratament cu durata de 72 ore.
Dublarea succesiv a genomului are ns efecte puternic negative asupra
capacitii de diviziune a celulelor cu nivel foarte ridicat de
autopoliploidie, deci obinerea unor plante viabile din astfel de celule este
foarte puin probabil.
Colchicina afecteaz de asemenea diviziunea reducional
(meioza), care se deosebete ntr-o msur important de cea normal, i
este denumit C-meioz. Aciunea colchicinei se manifest nc din
profaz, cromozomii rmnnd n totalitate sub form de univaleni. Dup
dezintegrarea membranei nucleare, cromozomii univaleni (uneori apar i
civa bivaleni, ca urmare a omologiei unor segmente ale braelor
cromozomiale) apar n C-metafaza meiozei dispersai n ntreaga celul.
In C-anafaza meiozei bivalenii se separ formnd figuri similare literei
X, iar apoi se dispun paralel; n C-telofaz, n loc s formeze o diad
normal, cromozomii sunt inclui ntr-un singur nucleu de restituie.
Celulele cu nucleu de restituie conin un numr redus de cromozomi i,
n loc s se formeze o tetrad n care fiecare celul s aib n cromozomi,
printr-o diviziune homotipic se formeaz diada cu acelai numr neredus
de cromozomi. Prin urmare, n loc s fie haploizi, gameii ce se formeaz
sub influena colchicinei sunt diploizi.
Meioza i disjuncia cromozomilor la autopoliploizi. In prezent
este unanim acceptat faptul c slaba fertilitate a autopoliploizilor este
determinat n mare msur de o diviziune meiotic anormal i de o
disjuncie neechilibrat a materialului genetic n gamei. La organismele
diploide (2n) meioza se desfoar normal, n sensul c cromozomii
omologi se asociaz sub forma de bivaleni, iar n anafaza I ei se
distribuie (disjuncia cromozomial) echilibrat, rezultnd gamei haploizi.
Din cauz c la autopoliploizi exist mai mult dect doi
cromozomi omologi, n meioz apare un numr variat de asociaii de tip
multivalent, care cuprind atia cromozomi cte seturi haploide de
cromozomi sunt prezente n celula respectiv (3x, 4x, 5x, 6x, etc.).
Desigur, pe lng multivaleni exist i un numr variabil de bivaleni i
univaleni. Consecina acestui fenomen este o disjuncie neechilibrat a
154

GENETIC

materialului genetic n gamei, care devin astfel ntr-o proporie ridicat


nefuncionali.
Asocierea cromozomilor n multivaleni n cursul meiozei este
influenat de urmtorii factori:
1) lungimea cromozomilor, n sensul c probabilitatea asocierii
este mai mare cu ct acetia sunt mai lungi;
2) numrul total redus de cromozomi nflueneaz negativ
asocierea lor n multivaleni, n timp ce numrul total mare de
cromozomi n celul influeneaz pozitiv formarea de
multivaleni;
3) frecvena mare a chiasmelor ntre cromozomii omologi
mrete ansa ca ei s rmn mpreun ca multivaleni i
invers.
Imperecherea cromozomilor omologi se realizeaz nc n faza de
zigoten numai la nivelul regiunilor eucromatinice ale cromozomilor, att
la diploizi, ct i la poliploizi. La organismele poliploide, cromozomii
omologi asociai nc din zigoten se pot separa sau rmn asociai n
fazele urmtoare ale meiozei, n funcie de absena sau prezena
chiasmelor ntre cromatidele alturate. Dac aceste regiuni sunt scurte,
probabilitatea de a se forma chiasme este mic i atunci n diachinez i
metafaz anumii cromozomi, care mai timpuriu erau asociai, apar ca
univaleni.
In zigoten, asocierea cromozomilor la poliploizi poate fi definit
ca o mperechere primar, deoarece n metafaza I se observ o
mperechere secundar, care const n tendina bivalenilor de a se plasa
alturat cu univaleni omologi. Uneori, o astfel de mperechere secundar
se observ i la diploizi ntre cromozomii neomologi ntre care au avut loc
ns translocaii anterioare. Asociaiile secundare, att la poliploizi ct i
la diploizi, tind s provoace migrarea cromozomilor asociai la acelai
pol, i astfel determin formarea n urma meiozei de gamei neechilibrai.
Ca regul, numrul tetravalenilor este mai mic dect numrul
haploid de cromozomi, deoarece ntotdeauna se formeaz un numr
variabil de univaleni, bivaleni i trivaleni. Prezena tetravalenilor,
trivalenilor i univalenilor n meioza autotetraploizilor constituie sursa
iniial pentru repartizarea inegal a cromozomilor n gamei. De
exemplu, migrarea unui trivalent spre un pol i a univalentului respectiv
155

AUREL POPESCU

spre cellalt pol al celulei constituie o cauz a repartizrii inegale a


cromozomilor. De asemenea, trebuie menionat c unii cromozomi
univaleni nu migreaz spre polii celulei, rmnnd n placa ecuatorial
sub form de cromozomi ntrziai (retardatari), sau dac migreaz nu
sunt inclui n nucleul gametului, ci rmn n citoplasm unde formeaz
aa-numiii micronuclei.
Din cele prezentate reiese c autotetraploidia indus artificial este
asociat cu reducerea fertilitii plantelor. Acest inconvenient nu scade
utilitatea tetraploidiei (i n general a autopoliploidiei), ntruct n cazul
plantelor cu propagare vegetativ disjuncia neechilibrat a cromozomilor
n gamei nu are nici o importan, iar n cazul plantelor cu nmulire
generativ, printr-un proces genetic de diploidizare a poliploizilor meioza
se poate regulariza, n sensul c i la tetraploizi cromozomii se pot asocia
sub form de bivaleni astfel nct disjuncia lor n gamei s se realizeze
normal, rezultatul fiind bineneles fertilitatea normal.
Alopoliploidia (Amfiploidia)
In prezent este bine cunoscut faptul c numeroase specii vegetale
(de exemplu Triticum aestivum, Gossypium hirsutum, Nicotiana tabacum,
Brassica napus, etc.) sunt la origine hibrizi interspecifici poliploizi, adic
alopoliploizi (Fig. 8.2).

Fig. 8.2. Originea unor specii alopoliploide de Brassica.


156

GENETIC

In funcie de modul n care se produce, alopoliploidia


(amfiploidia) este clasificat n:
a) Alopoliploidie genomic, care este fenomenul apariiei de
poliploizi prin hibridarea ntre specii cu genomuri diferite
(de exemplu AA i BB), caz n care cromozomii celor dou
specii nu se pot mperechea unii cu ceilali, iar planta rezultat
este steril. Fertilitatea plantelor alopoliploide/amfiploide este
ns normal dac are loc dublarea numrului de cromozomi
provenii de la speciile genitoare (AABB), ceea ce face ca n
meioz cromozomii s se asocieze sub form de bivaleni i
disjuncia acestora s se realizeze la fel ca la plantele diploide;
b) Alopoliploidie segmental, care este fenomenul prin care
poliploizii (alopoliploizi) apar ca rezultat al hibridrii unor
specii cu genomuri parial sau complet omoloage, astfel c
dup dublarea numrului de cromozomi acetia nu formeaz
bivaleni n cursul profazei meiozei I, ci mai ales tetravaleni,
trivaleni i univaleni, ca n cazul autopoliploidiei. O astfel de
mperechere anormal a cromozomilor determin un grad
ridicat de sterilitatea a hibrizilor.
c) Autoalopoliploidia, care este rezultatul dublrii numrului de
cromozomi ai unui alotetraploid (amfidiploid). De exemplu,
un alotetraploid AABB poate deveni autoalooctoploid
(AAAABBBB). Hibridarea ntre doi genitori autotetraploizi
(AAAA i BBBB) poate avea de asemenea ca rezultat apariia
de autoalooctoploizi.
Speciile Primula kewensis, Delphinum gypsophilum, sau Aesculus
carnea, sunt exemple clasice de amfiploizi segmentali. De exemplu,
amfidiploidul Primula kewensis (2n=36) este rezultatul ncrucirii
experimentale a speciilor P. floribunda (2n=18) i P. verticillata (2n=18),
i ca efect al formrii de numeroi multivaleni n meioz are un grad
ridicat de sterilitate.
In cazul cnd cromozomii ce se mperecheaz n procesul meiozei
provin de la genitori diferii, are loc formarea de bivaleni, iar fenomenul
(caracteristic alopoliploidiei genomice) se numete alosindez. Dac
cromozomii ce se mperecheaz n meioz provin de la genitori originari
157

AUREL POPESCU

din acelai strmo, are loc formarea de multivaleni, iar fenomenul se


numete autosindez i este caracteristic alopoliploidiei segmentale.
Un exemplu binecunoscut de alopoliploidie este acela al hibridului
tetraploid (2n=4x=68) de Helianthus, obinut prin hibridarea ntre
H. tuberosus (2n=6x=102) i H. annuus (2n=2x=34).
Dintre diferitele tipuri de alopoliploizi (amfiploizi), o importan
deosebit o prezint amfiploidia genomic, numeroase specii avndu-i
originea n hibrizi poliploizi interspecifici. De altfel, grul (Triticum
aestivum), cea mai cultivat specie pe glob, este un amfiploid (AABBDD)
la formarea cruia au participat trei specii diferite (genomul A de la
Triticum monococcum sau T. aegilopoides, genomul B de la Aegilops
speltoides sau Agropyron triticeum, i genomul D de la Aegilops
squarrosa).
Haploidia
Haploidia este termenul general pentru desemnarea indivizilor sau
esuturilor care au n celulele somatice numrul gametic de cromozomi
(n). Totui, ntruct n special la plante apar serii poliploide care posed
multipli ai setului de baz de cromozomi (x), termenul de haploidie
trebuie s fie subdivizat n dou categorii principale:
1. monohaploizi (x), pentru indivizii care provin dintr-o specie
diploid;
2. polihaploizi (2x, 3x, 4x, etc.), pentru indivizii care provin din
orice specie poliploid (4x 2x; 6x 3x, etc.).
Haploizii pot apare spontan, prin dezvoltare asexual, dar originea
lor este cel mai adesea neclar. La animale, frecvena de apariie spontan
a indivizilor haploizi este foarte rar deoarece, n mod obinuit, acetia
prezint anomalii fiziologice severe, care le cauzeaz moartea n cursul
dezvoltrii embrionare. S-a constatat c la unele specii animale cum sunt
Drosophila, salamandra, tritonul, broasca, oarecele, i chiar gina,
embrioni haploizi apar ns frecvent.
La plante, haploizi spontani au fost identificai la numeroase
specii, printre care tomate, bumbac, arborele de cafea, sfecla de zahr,
secar, gru, palmierul de cocos, rapi, arborele de cacao, asparagus, etc.
Haploidia poate fi de asemenea indus printr-o varietate de
metode, incluznd: hibridarea intergeneric; hibridarea interspecific;
iradierea polenului; tratamentul cu ageni chimici; stimularea poli158

GENETIC

embrioniei i analiza embrionilor gemeni; polenizarea cu polen purttor al


unei gene marker; cultura de antere sau polen, etc.
Hibridarea intergeneric sau interspecific. Atunci cnd omologia
dintre cromozomii plantelor utilizate n ncruciri intergenerice sau
interspecifice este foarte redus, poate avea loc formarea embrionului fr
fecundare. In unele cazuri se poate produce eliminarea setului de
cromozomi al genitorului patern imediat dup fecundare, ceea ce conduce
de asemenea la formarea de semine haploide. Unul dintre primele
rezultate de obinere experimental de haploizi prin hibridare
interspecific a fost raportat de Jorgensen (1928), care a identificat 7
haploizi printre cele 35 de plante viabile rezultate din ncruciarea
speciilor Solanum nigrum i Solanum luteum. Gametul mascul a avut doar
rolul de a participa la formarea endospermului i de a stimula formarea
embrionului, el dezvoltndu-se ns direct din celula ou, n absena
fertilizrii. Ulterior, metoda hibridrii interspecifice i-a gsit o larg
aplicare n ameliorarea cartofului, care fiind o specie autotetraploid
(4x=48) nu prezint complicaii ale ereditii n cazul formelor diploide
(2x=24). Eficiena metodei de inducere a apariiei haploizilor prin
hibridare interspecific a fost demonstrat prin numeroase rezultate
experimentale, mai ales n cazul folosirii unor specii cu grad mai sczut
de nrudire.
Eliminarea de cromozomi, fenomen care apare cu frecven
ridicat n cazul unor hibridri ntre specii nrudite ndeprtat din punct de
vedere filogenetic, este o metod folosit pe scar foarte larg pentru
producerea de haploizi la unele genuri de plante. Un exemplu este
hibridarea dintre speciile Hordem vulgare (2x=14) i H. bulbosum
(2x=14), care are ca rezultat eliminarea cromozomilor n cursul mitozei,
ulterior fertilizrii. Eficiena acestei metode poate fi considerat a fi foarte
ridicat, dac avem n vedere c n diferitele lucrri au fost obinute
procente de plante haploide cuprinse ntre 11% i 68.5%. Una dintre
cauzele suspectate pentru producerea eliminrii cromozomilor genitorului
patern n cazul hibridrilor ndeprtate, deriv din durata diferit a ciclului
celular n celulele prinilor implicai.
Iradierea polenului. Metoda iradierii cu raze X, propus nc din
anul 1929 (Goodspeed i Avery), s-a dovedit a fi foarte eficient pentru
inducerea de haploizi n cazul unor specii cum sunt tutunul, grul, plopul
i mrul. Principiul metodei se bazeaz pe pierderea capacitii de
fertilizare a polenului iradiat, fiind ns neafectat capacitatea de
stimulare a dezvoltrii pe cale partenogenetic a oului nefecundat.
159

AUREL POPESCU

Tratamentul cu ageni chimici. Rezultatele unor cercetri au


relevat faptul c para-fluorofenilalanina (PFP), analog structural al
fenilalaninei i tirozinei cu efect toxic dovedit asupra celulelor procariote
i eucariote, acioneaz antagonic colchicinei, determinnd reducerea
numrului de cromozomi la plantele regenerate din cultura in vitro de
esuturi somatice (Griesbach, 1986). Baza biochimic a acestui efect
implic nlocuirea aminoacizilor fenil-propanoidici n timpul sintezei
proteice i/sau interferena cu procesele feed-back de reglare. Totui,
ntruct n experimente cu specii tetraploide, PFP a permis obinerea de
plante dihaploide i aneuploide, n timp ce la specii diploide reducerea
numrului de cromozomi nu a fost posibil, Fukui i Niizeki (1982) au
sugerat c efectul acestui compus poate fi dependent de specie i/sau de
nivelul de ploidie.
Haploidia a fost de asemenea indus cu succes la cteva specii
(tomate, porumb, plop, Vinca rosea) prin tratarea polenului cu un colorant
vital i anume albastru de toluidin. Acest tratament a fost cel mai eficient
atunci cnd colorantul a fost aplicat pistilului dup polenizare, n
momentul cnd tuburile polinice sunt formate, dar nu s-a realizat nc
fecundarea. La plop, folosind aceast metod, Illes (1974) a reuit s
induc apariia a 282 haploizi ginogenetici dintr-un total de 1.192 puiei
de plop (23.6%).
Stimularea poliembrioniei i analiza embrionilor gemeni. Metoda
analizei embrionilor gemeni (provenii dintr-o singur smn) pentru
selecia de haploizi a fost eficient la un numr limitat de specii. La ardei
(Capsicum sp.), la care s-a demonstrat c frecvena embrionilor gemeni
este controlat de genotipul matern (n condiiile n care se cunoate c
frecvena haploizilor este direct corelat cu accea a embrionilor gemeni),
selecia pentru astfel de genotipuri a permis creterea considerabil a
ponderii seminelor cu mai muli embrioni. Seminele poliembrionice pot
produce gemeni de tipul haploid-haploid, diploid-diploid, sau diploidhaploid. Se consider c n cazul gemenilor diploid-haploid formarea
celor doi embrioni are loc prin dezvoltarea concomitent dintr-un zigot
diploid normal i dintr-o celul sinergid haploid.
Polenizarea cu polen purttor al unei gene marker. Folosirea ca
genitor patern n hibridrile interspecifice, sau chiar intraspecifice, a unor
genotipuri purttoare ale unei gene marker (cel mai adesea pentru
pigmentaie), a oferit acestei metode i avantajul unei identificri uoare a
haploizilor cu origine matern (haploizi gino-genetici). Markerii utilizai
la diferitele specii pentru trierea formelor haploide ginogenetice sunt
foarte variai. Astfel, la tutun s-a folosit gena marker recesiv pentru
160

GENETIC

culoarea galben-verzuie (yg) a printelui femel, iar la lucern s-a folosit o


gen marker pentru pigmentarea hipocotilului. Un exemplu recent l
reprezint n acest sens folosirea speciei Malus pumila var.
niedzweckiana, care posed o gen marker dominant n stare homozigot
pentru culoarea roie a frunzelor i tulpinii (RR), pentru selecia de
haploizi ginogenetici rezultai prin ncruciarea su soiuri comerciale
aparinnd speciei Malus domestica. In mod normal, n cazul n care se
produce fecundarea toi hibrizii trebuie s prezinte fenotip rou (frunze i
tulpini cu pigmentaie roie), aceast caracteristic oferind aadar
posibilitatea seleciei uoare a eventualelor forme haploide care, nefiind
rezultatul hibridrii, au fenotip verde, caracteristic genitorului matern.
Cultura in vitro de antere i polen. Metoda inducerii haploidiei
prin cultura in vitro de antere i polen, propus cu aproape jumtate de
secol n urm (1964) de Guha i Maheshwari pe baza rezultatelor obinute
n experimentele realizate cu Datura innoxia, a fost utilizat extensiv la
numeroase specii pentru obinerea de haploizi androgenetici. Anterele
cultivate ofer posibilitatea regenerrii de haploizi fie direct din
microspori, fie prin formarea de calus, urmat de regenerarea de embrioni
(embriogenez) sau de lstari (organogenez). In prezent, numrul
speciilor la care s-a raportat obinerea de plante haploide (monoploizi
sau polihaploizi) depete 160. Acestea aparin la 52 genuri i 23 de
familii de di- i monocotiledonate i includ unele specii importante pentru
cultur, cum sunt Triticum, Zea, Oryza, Nicotiana, Solanum, Phaseolus,
Lycopersicum, Fragaria, Coffea, Prunus, Malus, Vitis, etc.
Comportamentul meiotic al monohaploizilor. Pentru ca meioza
s se realizeze normal, este necesar prezena a doi cromozomi omologi
pentru fiecare tip de cromozomi ai complementului. Monoploizii posed
doar unul dintre genomurile de baz (x), i n consecin comportamentul
lor meiotic este foarte neregulat. Intruct studiile realizate la numeroase
specii (porumb, orez, tomate, tutun, etc.) au artat c i la monoploizi
poate s apar mperecherea cromozomilor (mperechere intragenomic),
s-a considerat c aceasta trebuie s fie consecina duplicrii cromozomilor
i a redundanei genetice. Chiar dac studiile de microscopie electronic
au confirmat posibilitatea apariiei unoror complexe sinaptinemale
similare n natur cu cele observate la formele diploide corespunztoare,
n diachineza monoploizilor cromozomii apar n majoritate ca univaleni.
Alturi de univaleni au fost observai uneori i bivaleni. De exemplu, la
monoploizii de porumb, frecvena celulelor cu unul sau mai muli
bivaleni ajunge la, sau chiar depete 50%.
161

AUREL POPESCU

La monoploizi (haploizi), metafaza I este puternic afectat de


puternica dezorganizare a fusului nuclear. Chiar i atunci cnd acesta
funcioneaz slab, mecanismul distribuiei cromozomilor spre polii opui
este dereglat i distribuia se realizeaz la ntmplare (randomizat).
Dei a fost emis o ipotez interesant, potrivit creia toi
cromozomii au o anumit tendin de mperechere n profaza meiotic,
mecanismul mperecherii cromozomilor neomologi n meioza
monoploizilor nu este nc pe deplin clarificat. Se consider totui c,
dac nu exist cromozomi omologi n celul, tendina de mperechere este
satisfcut de fore care pot uni segmente ale cromozomilor neomologi.
Comportamentul meiotic al polihaploizilor. Ca o consecin a
faptului c poliploizii pot fi fie autopoliploizi (de exemplu AAAA), fie
alopoliploizi (de exemplu AABB), n funcie de originea lor, polihaploizii
pot fi clasificai n autopolihaploizi (de exemplu AA), sau alopolihaploizi
(de exemplu AB).
Studiul meiotic al polihaploizilor poate sau nu s ajute la
determinarea tipului de polihaploidie n cazul unei specii poliploide date.
Dac nu are loc mperecherea cromozomilor sau a unor segmente de
cromozomi, se poate considera c speciile implicate au cu cea mai mare
probabilitate origine alopoliploid.
Imperecherea cromozomilor la polihaploizi constituie o indicaie
asupra existenei unor relaii fie de omologie, fie de omeologie ntre
cromozomi (termenul de omeologie se folosete pentru cromozomii
parial omologi i desemneaz omologia rezidual a cromozomilor care la
origine au fost complet omologi). Intruct mperecherea cromozomilor
este considerat ca fiind preferenial, majoritatea mperecherilor
observate la polihaploizi sunt probabil cauzate de omologia parial sau
complet ntre genomuri (mperechere intergenomic).
Apariia haploidiei este corelat cel mai adesea cu reducerea
volumului nucleului i respectiv a ntregii celule, fapt care determin o
talie mai redus a organismelor haploide. La haploizii plantelor autogame,
care au un grad mai ridicat de homozigoie, lipsa unei garnituri de
cromozomi nu are consecine morfologice prea severe. In schimb la
plantele alogame, fenomenul haploidiei este corelat cu o reducere mult
mai accentuat a taliei i a vitalitii dect la cele autogame. Acest efect se
explic prin existena la haploizii plantelor alogame a unei singure
garnituri de cromozomi, care determin manifestarea mutaiilor recesive
negative, n timp ce la diploizi aceste caractere se afl n stare recesiv i
nu se manifest.
162

GENETIC

Utilizrile posibile ale haploizilor. Principalul motiv al


amelioratorilor pentru obinerea de haploizi este acela de a crea rapid linii
homozigote diploide sau poliploide. Homozigotarea plantelor prin
consangvinizarea repetat necesit multe generaii, deci este un proces de
lung durat. Deoarece haploizii conin doar unul din cei doi cromozomi
omologi, fiecare gen este unic i, n consecin, dublarea cromozomilor
trebuie s aib ca rezultat homozigoia complet. Dublarea cromozomilor
se poate produce spontan, sau poate fi indus prin cultura in vitro sau prin
colchicinizare.
Pe lng informaiile importante pe care le pot oferi n ceea ce
privete ereditatea caracterelor dorite (prin analiza generaiilor F1 i F2 ale
genotipurilor homozigote), plantele obinute prin dublarea haploizilor pot
constitui linii parentale eficiente pentru programele de ameliorare,
ntruct clonele homozigote selectate pot transmite genele dorite n
fiecare gamet, sporind astfel frecvena indivizilor incorpornd caracterul
urmrit de ameliorator. Seleciile homozigote diploide pot fi de asemenea
utilizate ca linii pure pentru inducerea efectului heterozis sau pentru
ameliorarea rezistenei la stresul mineral i la boli (Zhang i Lespinasse,
1992). Numeroase experimente au relevat c diferenele n ceea ce
privete rezistena la stresul mineral i la boli sunt exprimate n aceeai
manier n celulele cultivate i n plantele ntregi. Prin urmare
genotipurile rezistente pot fi identificate i izolate n culturile de celule
haploide sau diploide homozigote, rezistena fiind ulterior exprimat n
plantele haploide sau diploide homozigote regenerate din aceste celule.
Protoplatii haploizi pot constitui un material ideal pentru
strategiile de transfer de gene, n condiiile n care sunt disponibile
metode eficiente de regenerare, ntruct prin dublarea numrului de
cromozomi pot fi obinute plante transgenice homozigote diploide.
In irul de multiple aplicaii, hibridarea somatic a protoplatilor
haploizi deine un potenial considerabil. O variant a acestei aplicaii,
viznd fuziunea de protoplati haploizi cu protoplati diploizi, poate gsi
n egal msur o larg utilizare n programele de ameliorare a unor specii
importante de plante.
Tratamentul mutagenic al plantelor haploide, urmat de dublare, ar
permite ca mutaiile induse (inclusiv cele recesive) s se exprime n
totalitate, contribuind astfel la lrgirea gamei de selecie de genotipuri cu
configuraii noi i utile de caractere.
Una dintre aplicaiile poteniale ale formelor haploide se refer la
simplificarea interpretrii polimorfismului fragmentelor de restricie
(RFLP), prin compararea genotipurilor diploide i respectiv haploide,
163

AUREL POPESCU

oferind astfel posibilitatea identificrii directe a variaiilor alelice. De


asemenea, genotipurile haploide pot facilita clonarea genic cu ajutorul
transpozonilor, ca urmare a exprimrii oricrei modificri a alelelor
recesive sau dominante.
Aneuploidia
Aneuploidia reprezint o variaie cromozomial noneuploid, n
sensul c organismele afectate de acest fenomen nu prezint n celulele
somatice un multiplu exact al numrului de baz (x) de cromozomi, ci
unul sau mai muli cromozomi n plus sau n minus. Variaia noneuploid
a numrului de cromozomi apare de regul ca rezultat al nondisjunciei n
meioz. Fenomenul aneuploidiei a fost sesizat de Blakeslee (1928) la
Datura stramonium, pe baza observaiilor citogenetice care au artat
apariia unor plante cu 2x+1 cromozomi (trisomie).
Datorit fenomenului aneuploidiei, la un organism diploid la care,
de exemplu, numrul normal de cromozomi n celulele somatice este
2x=6 (cele trei perechi de cromozomi fiind AABBCC), se pot ntlni
urmtoarele variaii mai importante ale ploidiei: monosomie, monosomie
dubl, nulisomie, monosomie-nulisomie, trisomie, trisomie dubl,
tetrasomie, trisomie-tetrasomie, trisomie-monosomie (Tabel 8.2).
Tabel 8.2. Principalele variaii aneuploide la organismele vegetale i
animale.
Tipul
de aneuploidie
Oligosomie
monosomie
monosomie dubl
nulisomie
monosomie-nulisomie

Numr
de cromozomi

Variante cromozomiale posibile

2x=6-1
2x=6-1-1
2x=6-2
2x=6-2-1

AABBC, AABCC, ABBCC


AABC, ABBC, ABCC
AABB, AACC, BBCC
BBC, AAC, AAB, ABB,
ACC, BCC

Polisomie
trisomie

2x=6+1

trisomie dubl

2x=6+1+1

tetrasomie

2x=6+2

AAABBCC, AABBBCC,
AABBCCC
AAABBBCC, AAABBCCC,
AABBBCCC
AAAABBCC, AABBBBCC,
AABBCCCC,

164

GENETIC

trisomie-tetrasomie

2x=6+1+2

Trisomie-monosomie

2x=6+1-1

Tetrasomie-nulisomie

2x=6+2-2

AAABBBBCC, AAABBCCCC,
AABBBCCCC, AABBBBCCC,
AAAABBBCC, AAAABBCCC
AAABBC, AAABCC, AABBBC,
AABCCC, ABBBCC, ABBCCC
AAAABB, AAAACC, AABBBB,
AACCCC, BBBBCC, BBCCCC

Monosomia i nulisomia sunt tipurile de aneuploidie (cunoscute i


sub denumirea de hipoploidie) caracterizate prin lipsa unui cromozom sau
a ntregii perechi, iar trisomia i tetrasomia sunt tipurile de aneuploidie
(hiperploidie) caracterizate prin prezena n plus a unui cromozom sau a
unei perechi de cromozomi.
Toate tipurile de ploidie pot apare spontan, dar pot fi i induse
experimental sub aciunea unei game variate de ageni fizici, chimici i
biologici.
Mecanismele citologice de apariie a aneuploizilor. Deoarece
fenomenul aneuploidiei apare cel mai frecvent la descendenii
organismelor poliploide (aprute spontan, sau induse) recente,
mecanismul su este relativ bine cunoscut. Aneuploidia este o consecin
prezenei univalenilor i a asociaiilor cromozomice multiple (trivaleni,
tetravaleni) n cursul diviziunii reducionale (meioza) la diferitele tipuri
de poliploizi, care au ca rezultat distribuia neechilibrat a cromozomilor
n gamei.
O alt cale posibil de apariie a aneuploizilor este nondisjuncia
cromozomial n diviziunea reducional, concretizat n formarea de
gamei, respectiv celule diploide, cu numr modificat de cromozomi.
Exemple clasice de nondisjuncie a autozomilor sau heterozomilor sunt
cele de trisomie i monosomie care pot afecta organismul uman, respectiv
trisomia autozomal caracteristic sindromului Down, trisomia
heterozomal specific sindromului Klinefelter la brbai (prezena a 3
cromozomi ai sexului - XXY), i monosomia heterozomal caracteristic
sindromului Turner la femei (un singur cromozom al sexului - XO).
Aneuploizi pot s apar cu frecven variat i n descendena
organismelor iradiate, ca o consecin a afectrii omologiei dintre
cromozomi.
Importana genetic a aneuploizilor. In corelaie cu gradul de
ploidie al organismelor afectate, aneuploidia poate determina reducerea
considerabil a viabilitii i vitalitii. Astfel, la Triticum aestivum
165

AUREL POPESCU

(2n=6x=42) au fost obinute serii complete de nulisomici, monosomici,


trisomici i tetrasomici viabili, n timp ce la organisme cu grad redus de
ploidie, cum este Drosophila melanogaster (2n=8), se obin foarte rar
aneuploizi viabili.
Dei organismele aneuploide nu au importan economic, aa
cum au poliploizii, lucrrile de obinere experimental de aneuploizi sunt
considerate a fi de mare importan pentru descifrarea determinismului
genetic al unor caractere i pentru ameliorare.
Inc din anul 1959, Sears a sugerat cteva metode pentru
localizarea genelor de pe un anumit cromozom cu ajutorul analizei
nulisomice:
Absena manifestrii unui caracter la nulisomici. Caracterul
controlat de o gen plasat pe cromozomul care lipsete, poate
fi absent la plantele nulisomice pentru perechea respectiv de
cromozomi. Astfel, s-a stabilit c cromozomul XIV de la soiul
hexaploid de gru Chinese Spring poart o gen dominant
pentru culoarea roie a seminelor, ntruct plantele nulisomice
pentru acest cromozom au semine de culoare alb, aceasta
fiind expresia genei recesive pentru culoarea seminelor.
2) Analiza populaiilor n F2. Localizarea unor gene dominante la
soiuri de gru hexaploid (Triticum aestivum) se poate stabili
prin ncruciarea acestor soiuri cu fiecare din cele 21 linii
nulisomice sau monosomice ale unui soi bine cunoscut
genetic, cum este soiul Chinese Spring, urmat de analiza
segregrii n F2. Aa cum s-a menionat anterior, la gru
plantele nulisomice apar n ca descendeni ai monosomicilor
din F1. Insuirile recesive se vor manifesta numai la plantele
nulisomice din descendena monosomicilor F1. Gsirea
cromozomului respectiv (cromozomul nulisomic care poart
gena sau genele care codific respectivele caractere recesive)
se poate considera rezolvat cnd n descendena unor astfel de
ncruciri apare un foarte mic numr de indivizi recesivi, care
n urma analizelor citologice se dovedesc a avea constituie
nulisomic.
3. Substituia i adiia de cromozomi. Aceast metod a fost
folosit la gru n dou scopuri principale, respectiv pentru
analiza efectelor genetice ale unor cromozomi individuali
substituii (transferai) ntr-un fond genetic cunoscut, i pentru
transferul unor cromozomi purttori ai genelor care codific
1)

166

GENETIC

nsuiri valoroase (rezisten la boli, rezisten la condiii


nefavorabile de mediu) de la o varietate (sau chiar de la o
specie) la o alt varietate (sau specie) la care aceste nsuiri
sunt absente. In primul caz, de exemplu, la grul hexaploid se
poate analiza constituia genetic a unor cromozomi de la o
nou varietate (soi), prin substituia lor n genomul soiului
Chinese Spring.
Un exemplu clasic de lucrri n scopul adiiei i substituiei de
cromozomi este acela al cercetrilor realizate de Jenkins (1956), care au
pornit de la ideea utilitii adiiei la gru a unei perechi de cromozomi de
la secar, specie care posed unele caractere valoroase (rezisten la ger,
rezisten la duntori), absente sau slab exprimate n genotipurile de
gru. Prin ncruciarea soiului hexaploid de gru Harkov cu soiul
diploid de secar Dakold au fost obinui hibrizi sterili, care prin
colchicinizare (pentru dublarea genomului) au fost transformai n
amfiploizi cu 2n=56 cromozomi. Prin retroncruciarea repetat a unui
amfiploid cu soiul de gru Harkov au fost obinute 7 linii de adiie
(2n=42+2 cromozomi de la secar) i, n sfrit, cei 21 de monosomici ai
soiului Harkov au fost hibridate cu cele 7 linii de adiie. Rezultatul
acestor lucrri a fost obinerea de linii de substituie cu 2n=42
cromozomi, dintre care 40 de cromozomi ai grului i 2 cromozomi de la
secar, purttori ai diferitelor caractere valoroase dorite de amelioratori.

167

AUREL POPESCU

9.

CONSANGVINIZAREA I HETEROZISUL

Organismele consangvine sunt rezultatul autofecundrii (n cazul


celor autogame) sau ncrucirii ntre indivizi nrudii (n cazul celor
alogame) i se caracterizeaz printr-un grad ridicat de homozigoie.
Consangvinizarea are cel mai adesea un efect puternic depresiv asupra
vitalitii i vigorii organismelor.
Primele observaii asupra efectelor consangvinizrii au fost
efectuate la porumb de ctre E.M. East (1901), care a remarcat o reducere
considerabil a vigorii plantelor obinute prin autofecundarea
(consangvinizarea) repetat n generaii succesive. East a observat
totodat c indivizii care rezult din ncruciarea unor linii
consangvinizate manifest o cretere considerabil a vitalitii.
Consangvinizarea are ca principal efect genetic mrirea gradului
de homozigoie. De exemplu, prin autofecundarea indivizilor heterozigoi
(Aa) rezultai din ncruciarea a dou varieti deosebite printr-o
pereche de gene alele, n prima generaie de consangvinizare, respectiv I 1
(I = inbreeding), segregarea are loc astfel: 25% AA; 50% Aa; 25% aa.
In generaiile urmtoare de consangvinizare (I 2, I3, I4, etc.), proporia
plantelor heterozigote din populaie se reduce cu cte 50%, reprezentnd
25% n I2, 12.5% n I3, 6.25% n I4, 3.12% n I5, etc., mrindu-se
corespunztor procentul homozigoilor.
Reducerea gradului de heterozigoie are o importan foarte mare
pentru procesul de selecie natural. In condiiile n care n natur se
produc permanent mutaii (n majoritate letale, semiletale, sau cu
influen negativ) care afecteaz organismele vegetale i animale,
mutantele dominante sau semidominante sunt eliminate rapid prin selecia
natural, n timp ce mutaiile recesive (care reprezint majoritatea) sunt
pstrate n organismele heterozigote. Prin consangvinizare se reduce rapid
numrul de organisme heterozigote, care conin o proporie mare de gene
recesive duntoare.
La plantele autogame, prin autopolenizare are loc o
consangvinizare foarte rapid i strict, care nu este posibil la plantele
alogame. La animale, consangvinizarea este mult mai lent deoarece nu se
poate realiza dect ntre organisme cu grade mai mult sau mai puin
nrudite (ex. frate-sor, tat-fiic, mam-fiu, veri primari, etc.). Prin
autofecundare homozigoia total se realizeaz n 7-8 generaii, n timp ce
prin ncruciarea de tip frate-sor (sib) dup 8 generaii se ajunge la un
168

GENETIC

grad de homozigoie de 90%. In cazul ncrucirilor ntre veri primari,


dup 16 generaii se ajunge la o homozigoie de 65%.
Rezultatele lucrrilor de hibridare reciproc a unor plante
consangvinizate i linii homozigote, efectuate la nceputul secolului al
XX-lea (n special la porumb) au stat la baza fundamentrii unei aplicaii
deosebit de importante pentru ameliorarea plantelor. Astfel, s-a constatat
c hibrizii obinui din aceste ncruciri depeau considerabil nu numai
liniile consangvinizate folosite, dar i soiul iniial din care fuseser
obinute aceste linii. Fenomenul de sporire a vitalitii i vigorii hibrizilor
rezultai din ncruciarea unor plante cu grad ridicat de homozigoie a
fost denumit de Shull (1914) heterozis, i a fost descris ca o mrire a
vigurozitii, dimensiunilor, productivitii, o dezvoltare rapid, rezisten
la boli i insectele duntoare, sau la diferite condiii nefavorabile, care
deosebesc formele hibride de formele consangvinizate corespunztoare i
care iau natere ca un rezultat al unirii gameilor genitorilor difereniai
genetic.
Efectele genetice ale consangvinizrii
Consangvinizarea are ca rezultat conservarea strict a unui fond
genetic (fixitate genetic), care favorizeaz populaiile de indivizi
homozigoi ntr-un mediu ambiant stabil, dar reduce posibilitile de
adaptare la un mediu variabil.
Efectul genetic cel mai important al consangvinizrii const n
reducerea heterozigoiei i mrirea corespunztoare a gradului de
homozigoie a unei populaii panmictice, ceea ce determin manifestarea
n fenotip a genelor recesive. Prin consangvinizare exist astfel
posibilitatea determinrii variabilittii genetice ascunse, adic a
evidenierii genelor recesive care, fiind cel mai adesea n stare
heterozigot, nu se manifest.
La plantele care se autofecundeaz n mod normal, precum i la
celelalte organisme care se consangvinizeaz natural, variabilitatea
genetic ascuns determinat de existena unor gene recesive n stare
heterozigot este redus i prin urmare depresiunea de consangvinizare
este minim. La plantele alogame, ca de altfel la toate organismele cu
fecundare ncruciat, care n mod normal sunt heterozigote, exist ns
o mare variabilitate genetic ascuns i ca urmare depresiunea de
consangvinizare este foarte puternic. De exemplu, prin ncruciarea de
tip sib (sor-frate), n F2 coeficientul de consangvinizare este F = 1/4,
169

AUREL POPESCU

ceea ce nseamn c un sfert din variabilitatea genetic ascuns se va


manifesta.
In timp ce la plante i animale determinarea variabilitii genetice
ascunse se poate realiza prin consangvinizare i studiul descendenei, la
om acest lucru nu este posibil. Studiile comparative asupra descendenilor
rezultai din cstoriile ntre indivizi nrudii i respectiv nenrudii au
artat c mortalitatea infantil este aproape dubl n primul caz.
Fiecare individ uman are 2 prini, 4 bunici, 8 strbunici, etc.,
adic n cazul generaiei ascendente n vor fi 2n strmoi, ceea ce nseamn
c pe durata unui mileniu, n care se succed aproximativ 35 generaii, un
individ ar trebui s aib 235 (aproximativ 30 miliarde) strmoi. Intruct,
n realitate, n urm cu un mileniu nu existau pe glob dect cteva sute de
milioane de indivizi, se poate concluziona c fiecare om are un anumit
grad de consangvinizare.
La unele populaii mici i izolate, cum sunt cele din regiuni
geografice greu accesibile, sau la unele triburi sau secte religioase, gradul
de consangvinizare este relativ ridicat din cauza cstoriilor frecvente
ntre rude. Studiile statistice au demonstrat c n astfel de situaii crete
considerabil frecvena maladiilor genetice, a malformaiilor congenitale,
are loc o reducere a fertilitii i a rezistenei la boli. Sunt cunoscute ns
i unele excepii de la aceste consecine, cum a fost cazul faraonilor
egipteni sau al familiilor regale incae, la care cstoriile frecvente de tip
frate x sor nu au avut efecte negative evidente de-a lungul multor
generaii.
Un exemplu concludent de efect negativ al exprimrii genelor
recesive ca rezultat al consangvinizrii este acela al fenilcetonuriei,
maladie uman provocat de o gen recesiv ce determin metabolizarea
fenilalaninei n acid fenilpiruvic, care este toxic pentru organism.
Frecvena acestei gene este de 0.01%, adic 1/10.000, ceea ce nseamn
c ntr-o populaie n echilibru 9.801/10.000 indivizi sunt normali (AA),
198/10.000 sunt purttori heterozigoi (Aa) i 1/10.000 prezint maladia
fiind purttori ai genei respective n stare homozigot (aa). In cazul
cstoriilor ntre veri primari heterozigoia se reduce cu 1/16, ceea ce face
ca n situaia descris anterior 12 din cei 198 de purttori heterozigoi s
devin homozigoi (AA i aa), dintre care 6 vor manifesta boala.
Mecanismul genetic al heterozisului
Pentru a explica mecanismul genetic al heterozisului au fost
elaborate mai multe teorii:
170

GENETIC

Teoria superdominanei pornete de la premisa c dac genitorii


homozigoi se deosebesc ntre ei printr-o singur pereche de gene (aa i
aa), atunci hibridul (aa), datorit interaciunii genelor respective, poate
s depeasc ambii prini homozigoi n exprimarea caracterului
respectiv.
Teoria dominanei pornete de la premisa c dac unul dintre
genitori se deosebete de cellalt prin mai multe perechi de gene (ex.
AAbbCCddEEff i aaBBccDDeeFF), n organismul hibrid se pot acumula
dominante favorabile (Aa, Bb, Cc, Dd, Ee, Ff).
Evident, ipoteza superdominanei exclude posibilitatea ca
heterozisul s poat fi conservat n generaiile urmtoare prin autofecundare. In cazul ipotezei dominanei ar trebui ca n generaiile
urmtoare s reapar tipul heterozigot i, ca urmare, fenomenul heterozis
s se manifeste. In realitate ns, acest fenomen nu se manifest din cauz
c dac genitorii se deosebesc ntre ei prin n perechi de gene, frecvena
organismelor homozigote dominante n F2 este (1/4)n sau (0.25)n, iar
frecvena fenotipurilor dominante este (3/4)n sau (0.75)n.
Fenomenul pstrrii heterozisului la un numr foarte redus de
indivizi n F2 i n generaiile urmtoare se numete transgresiune. Partea
slab a teoriei dominanei const n faptul c nu poate explica de ce nu
este posibil fixarea heterozisului, deoarece conform cu cele susinute ar
trebui s apar, este adevrat cu o frecven redus, organisme
homozigote cu caractere dominante, de tipul AA, BB, CC, etc.
Teoria heterozigoiei sau teoria stimulrii (elaborat de Shull i
East, 1916), susine c vigoarea hibrid din F 1 se datoreaz strii
heterozigote. Ca urmare, n cazul homozigoiei produse prin
consangvinizare, vitalitatea se reduce, n timp ce prin hibridare, mai ales
n cazul unor genitori deosebii printr-un numr mare de gene nealele,
vitalitatea crete considerabil. Pe baza acestei teorii, East a elaborat
ulterior teoria alelomorfismului multiplu, conform creia n cazul unor
gene polialele de tipul a1, a2, a3, a4, a5, ..... an sau b1, b2, b3, b4, b5, ..... bn,
heterozisul cel mai puternic se manifest n cazul prezenei unor gene mai
ndeprtate din seria polialel. De exemplu, genele a1a5 sau b1b5 determin
un efect heterozis mai puternic dect a1a2 sau b1b2.
Teoria echilibrului genetic (elaborat de Mather, 1943), susine c
heterozisul se datoreaz echilibrului dintre plusgene, ce influeneaz n
mod pozitiv un caracter, i minusgene, care influeneaz negativ
caracterul respectiv. Prin consangvinizare, echilibrul genetic al populaiei
se modific, datorit acumulrii minusgenelor, ce provoac depresiunea
biologic (dpresiune de consangvinizare), n timp ce prin hibridare
171

AUREL POPESCU

echilibrul genetic se restabilete datorit acumulrii plusgenelor cu


aciune favorabil.
Teoria polimorfismului balansat (elaborat de T. Dobjanski,
1951), susine c fenomenul heterozis se datoreaz realizrii la nivelul
populaiei a unui polimorfism echilibrat, astfel nct ntr-o populaie
panmictic n care ncruciarea are loc randomizat (ntmpltor), deci
probabilistic, exist att organisme homozigote de tipul AA i aa, precum
i organisme heterozigote de tip Aa. De exemplu, se consider c dac
pe fiecare dintre cei 10 cromozomi ai porumbului ar exista numai cte 3
gene (la capete i n poziie median) care manifest un linkage redus, o
plant heterozigot pentru cele 30 de gene nu poate da natere la un
individ homozigot pentru toate aceste gene dect cu o probabilitate foarte
redus, respectiv de 4-30. Este foarte sugestiv n acest sens calculul fcut
de W.R. Singleton (1964), potrivit cruia, ntr-o astfel de situaie, pentru
obinerea unui singur individ homozigot ar fi necesar cultivarea cu
porumb a unei suprafee de 2.000 de ori mai mari dect cea terestr.
Teoria interaciunii nucleu-citoplasm (elaborat de F.A. Lints,
1960), se bazeaz pe observaiile efectuate asupra hibrizilor reciproci,
care arat c pentru apariia fenomenului heterozis organismul matern are
o importan mai mare. Efectele interaciunii nucleu-citoplasm variaz
de la incompatibilitate complet ntre gamei, la un echilibru aproape total
ntre nucleu i citoplasm. Se apreciaz c apariia heterozisului este
provocat chiar de o uoar tulburare a echilibrului ntre nucleu i
citoplasm, fenomenele de heterozis produse prin heteroalelie i
heterogenomie fiind doar cazuri particulare ale heterozisului produs prin
heterocitomie.
Lints consider aadar c exist trei nivele de heterozis i anume:
1) Heteroalelia, care apare la ncruciarea ntre organisme ce se
deosebesc printr-o pereche de gene majore i n care
heterozisul s-ar datora acumulrii de elemente de tip
dominant-dominant i dominant-recesiv, n detrimentul tipului
recesiv-recesiv;
2) Heterogenomia, care apare la ncruciarea ntre organisme ce
se deosebesc prin genomul lor, adic printr-un complex de
gene;
3) Heterocitomia, care apare la nivelul interaciunii nucleucitoplasm, i care este de fapt tipul de baz n manifestarea
heterozisului.
172

GENETIC

Mecanisme de pstrare a heterozisului


Importana biologic deosebit a heterozisului pentru existena speciilor a
determinat apariia unor mecanisme variate de pstrare a sa la
descendeni. Pe baza unor ample studii realizate la plante, Gustaffsson
(1951) consider c exist trei tipuri principale de heterozis:
a) heterozis somatic, care se manifest prin creterea luxuriant a
organelor vegetative;
b) heterozis reproductiv, caracterizat printr-o dezvoltare puternic
a organelor de reproducere, respectiv a florilor, fructelor i
seminelor;
c) heterozis adaptativ, exprimat prin rezistena sporit la factorii
de stres (ageni patogeni, condiii nefavorabile de mediu).
Fenomenul de heterozis la organismele cu reproducere
asexuat, partenogenetic sau apogamic. In timp ce la speciile ce se
reproduc sexuat exist diferite mecanisme genetice care favorizeaz
heterozigoia i respectiv heterozisul, la speciile cu reproducere asexuat,
partenogenetic sau apogamic noua generaie posed genomuri i
complexe de gene identice cu cele ale organismelor din care provin, fiind
astfel conservat fenomenul de heterozis. De exemplu, la speciile de pomi
i arbuti fructiferi, numeroase soiuri sunt hibrizi cu originea n prini cu
grade variabile de homozigoie, pstrarea caracterelor de soi i a
heterozisului se realizeaz prin reproducerea exclusiv pe cale vegetativ.
Organismele cu reproducere partenogenetic sau apogamic au un
nalt grad de heterozigoie, care se conserv prin reproducerea asexuat
natural sau artificial. La astfel de organisme, la care descendenii se
formeaz din diferite celule diploide sau haploide aprute fr fecundare
(ex. lmi, portocal, mandarin, etc.), seminele sunt produse apogamic,
dei plantele au flori i polenizarea favorizeaz dezvoltarea seminelor i
fructelor.
Se consider c n natur exist ns foarte puine specii care se
nmulesc exclusiv asexuat, n majoritatea cazurilor generaiile asexuate
alternnd cu cele sexuate, ceea ce d speciilor respective posibilitatea s
combine avantajele heterozigoiei pentru mrirea vitalitii i fertilitii,
cu cele ale reproducerii asexuate prin care se conserv aceast stare
heterozigot.

173

AUREL POPESCU

Heterozisul la organismele cu autosterilitate genetic. La unele


specii de plante (de exemplu cireul, mrul, trifoiul, tutunul, etc.) exist
un sistem genetic de autosterilitate care asigur fecundarea ncruciat i
respectiv apariia fenomenului heterozis. Mai mult, s-a constatat c la
unele dintre aceste specii prin autopolenizare nu se obin deloc semine.
Studiul mecanismului genetic al acestei autoincompatibiliti
ereditare a artat c fecundarea ncruciat este determinat de prezena
unei serii de gene alele: S1, S2, S3, ..... Sn. In cazul autofecundrii, planta
respectiv are att n ovule ct i n polen aceeai pereche de alele, de
exemplu S1S2 sau S2S3, etc. Deoarece tuburile polinice nu pot crete pe un
stil cu acelai genotip, fecundarea nu are loc. Dimpotriv, n cazul
fecundrii ncruciate ntre plante diferite genotipic, polenul poate
germina, tuburile polinice cresc normal i poate avea loc fecundarea.
De exemplu, prin polenizarea plantei cu alelele S 1S2 cu polen de la planta
cu alele S2S3, numai o parte din polen, respectiv cel coninnd alela S 3
(care nu este prezent la ambii prini) germineaz normal i produce
fecundarea. Dac planta mam conine alelele S1S2, iar planta tat alelele
S3S4, tot polenul germineaz (ntruct nu exist alele comune) i poate
participa la fecundare.
Este evident c fiecare plant poate conine numai dou alele, care
sunt localizate opus ntr-o pereche de cromozomi. Acest mecanism de
autoincompatibilitate ereditar asigur polenizarea ncruciat la speciile
respective i determin manifestarea heterozisului n fiecare generaie.
Heterozisul la triploizi. Plantele triploide, obinute prin
ncruciarea unor forme tetraploide (4n) cu forme diploide (2n), manifest
ntotdeauna heterozis. Acesta este de altfel principalul motiv pentru care
la numeroase specii (ex. mrul, prul, zmeurul, bananierul, portocalul,
etc.) au fost introduse n cultur soiuri triploide. La toate aceste specii,
conservarea n generaiile succesive a heterozisului prezent n soiurile
triploide (complet, sau aproape complet sterile) nu ridic probleme,
datorit propagrii lor exclusiv pe cale vegetativ.
Exist ns i specii vegetale la care formele triploide nu se
reproduc vegetativ, ci prin ncruciarea n fiecare an a formelor 2n i 4n.
Astfel, la sfecla de zahr (Beta vulgaris) se fac ncruciri libere ntre
plante tetraploide i diploide, obinndu-se un procent ridicat de triploizi
(2n=27) care manifest heterozis. In mod similar, la numeroase specii,
printre care pepenele verde (Citrullus vulgaris) i tomatele (Lycopersicum
esculentum), se obin forme triploide la care se exprim efectul de
heterozis, i care au n plus i avantajul pentru consum de a fi lipsite de
semine. In ultimii ani, exploatarea fenomenului heterozis a devenit de
174

GENETIC

asemenea o practic curent pentru numeroase specii ornamentale (ex.


Lilium, Tulipa, Petunia, Hyacinthus, Phleum, etc.), n scopul creterii
valorii lor decorative prin
mrimea florilor.
Heterozisul la amfidiploizi. Amfidiploizii rezultai pe cale
natural sau obinui artificial prin hibridare urmat de dublarea
numrului de cromozomi, manifest un tip constant de heterozis. Printre
amfidiploizii aprui natural pot fi citai tutunul (Nicotiana
tabacum = N. sylvestris x N. tomentosa), bumbacul (Gossypium hirsutum
= G. arboreum x G. thurberi), prunul (Prunus domestica = P. divaricata x
P. spinosa), etc.
Un exemplu foarte cunoscut de amfidiploidie indus experimental
este acela al speciei Triticale (Triticum aestivum x Secale cereale).
Amfidiploizii au posibilitatea de a se reproduce sexuat datorit
eliminrii prin dublarea numrului de cromozomi a sterilitii aprute n
urma hibridrii interspecifice, ceea ce le permite s manifeste un tip de
heterozis care se manifest la toi descendenii i se pstreaz nealterat la
generaiile succesive.
Ereditatea Caracterelor Cantitative
Studiul fenomenelor consangvinizrii i heterozisului are o
deosebit importan practic pentru ameliorare, fiind la baza stabilirii
ereditii caracterelor cantitative, cum sunt, producia de semine, fructe,
mas vegetativ, etc (n cazul plantelor), carne, lapte, ou, etc (n cazul
animalelor).
Evaluarea cu exactitate a msurii n care un astfel de caracter este
determinat de genotip pe de o parte, i de condiiile de mediu pe de alt
parte, precum i determinarea probabilitii cu care un anumit caracter
cantitativ se transmite la descendeni, reprezint obiectul de studiu al unui
domeniu relativ distinct al geneticii, i anume genetica cantitativ.
Spre deosebire de caracteristicile calitative ale organismelor,
caracterele cantitative sunt determinate poligenic, fiind deci rezultatul
expresiei a dou sau mai multe gene cu efect aditiv.
Pentru estimarea numrului de gene implicate n determinismul
genetic al caracterelor cantitative, se studiaz modul de segregare n F2.
Astfel, dac n F2 fenotipurile parentale apar cu o frecven de
(1/2)4=1/16, se poate estima c n exprimarea caracterului cantitativ
analizat sunt implicate dou perechi de gene alele (de exemplu Aa i Bb).
Dac segregarea fenotipurilor parentale are loc n cu o frecven de (1/2)6
= 1/64, se poate estima c sunt implicate trei perechi de gene alele (de
175

AUREL POPESCU

exemplu Aa, Bb i Cc), iar dac fenotipurile parentale apar cu o frecven


de (1/2)8 = 1/256 sunt implicate patru perechi de gene alele.
In cazul n care un caracter cantitativ este determinat de un numr
mai mare de gene, pentru estimarea numrului de gene implicate n
exprimarea respectivului caracter se folosesc metodele de statistic
matematic.
Genele care intervin n determinismul caracterelor cantitative pot
fi de mai multe feluri. Astfel, genele pot avea efecte cumulative i egale
(polimerie), sau pot avea efecte cumulative (aditive) i inegale
(anisomerie). In sfrit exist i gene modificatoare, care intensific sau
inhib manifestarea genelor implicate direct n determinismul caracterelor
cantitative.
Cu ajutorul metodelor de statistic matematic s-a elaborat o
formul pentru studiul transmiterii la descendeni a caracterelor
cantitative, cunoscut sub denumirea de coeficient de heritabilitate (h2).
Coeficientul de motenire sau heritabilitate (h 2) a caracterelor
cantitative poate fi definit ca raportul dintre media caracterului respectiv
la genitori i la descendeni. Variabilitatea fenotipic dintr-o populaie este
egal cu suma variaiilor ereditare (determinate de genotip) i a celor
provocate de mediu (factorii climatici, de sol, relaiile trofice, etc.).
2P = 2G + 2M ,
n care: 2 (sigma ptrat) reprezint dispersia sau variana indivizilor; P =
populaia; G = genotipul; M = mediul.
Prin urmare, coeficientul de heritabilitate (h2) se poate calcula
uor cu ajutorul formulei:
2G
h2 = -----2M
Valoarea coeficientului de heritabilitate (h2) variaz ntre 0, atunci
cnd caracterul respectiv depinde numai de influena mediului i nu se
transmite ereditar, i 1 atunci cnd caracterul se transmite la descendeni
i nu este influenat n nici o msur de condiiile de mediu. Acest din
urm caz nu se ntlnete la caracterele cantitative, ele fiind ntotdeauna
nfluenate, ntr-o msur mai mic sau mai mare, de mediu.
Coeficientul de heritabilitate (h2) mai poate fi definit cu ajutorul
coeficientului de corelaie (r) ntre media valorii fenotipice a caracterului
176

GENETIC

cantitativ la genitori i la descendeni. De exemplu, pe baza analizei


produciei de fructe la soiul de cpun Redgauntlet ntr-un mare numr
mare de generaii (la genitori i la descendeni), s-a constatat c h 2 = 0.66.
Aceasta nseamn c producia de fructe este determinat n proporie de
66% de genotip i n proporie de 34% de factorii de mediu.
In general se consider c numai atunci cnd h2 > 0.5 descendenii
vor moteni cu mare probabilitate caracterele cantitative ale genitorilor.
Importana practic a consangvinizrii i heterozisului
Inducerea fenomenului heterozis prin hibridarea unor linii
homozigote obinute prin consangvinizare are o mare importan pentru
cultura plantelor i, ntr-o anumit msur, pentru creterea animalelor.
Un exemplu concludent n acest sens este oferit de porumbul hibrid
obinut prin ncruciarea unor linii consangvinizate, a crui introducere n
cultur a fost preconizat nc de la nceputul secolului XX de ctre
geneticianul american S.H. Shull. Recomandarea sa a fost aplicat n
practic de abia dup 1917, cnd D.F. Jones a elaborat metoda producerii
de hibrizi dubli prin ncruciarea ntre hibrizi simpli ntre linii
consangvinizate. Dup anul 1930 procesul de creare de hibrizi de porumb
prin folosirea liniilor consangvinizate a luat o amploare deosebit n SUA,
astfel nct n interval de un deceniu suprafaa cultivat cu astfel de hibrizi
a depit 50%, iar dup dou decenii a ajuns la 86%. In prezent, n SUA,
ca de altfel n numeroase state ale lumii, pe ntreaga suprafa cultivat cu
porumb se folosesc n exclusivitate hibrizi ntre linii consangvinizate.
Modelul hibrizilor simpli sau dubli de porumb obinui prin
hibridarea unor linii consangvinizate, i care prin urmare manifest
efectul heterozis, a fost aplicat n ultimele decenii la numeroase specii de
plante alogame cu importan economic (floarea soarelui, secar, sfecl
de zahr, ceap, varz, castravei, pepene verde, etc.).
Procesul de creare a hibrizilor ntre linii consangvinizate are trei
etape mai importante: 1) crearea de linii consangvinizate; 2) alegerea
celor mai bune linii consangvinizate; 3) ncruciarea ntre linii
consangvinizate n vederea producerii de hibrizi simpli (A x B), de hibrizi
ntre 3 linii consangvinizate (A x B) x C, de hibrizi dubli (A x B) x
(C
x D), sau ntre mai multe linii consangvinizate, pentru obinerea de hibrizi
sintetici. Generalizarea producerii de hibrizi de porumb de nalt
productivitate (datorit efectului heterozis) prin folosirea liniilor
consangvinizate a fost facilitat considerabil de exploatarea fenomenului
de androsterilitate citoplasmatic, care a permis folosirea liniilor
177

AUREL POPESCU

consangvinizate androsterile i a liniilor consangvinizate restauratoare de


fertilitate.
La plantele autogame, reproducerea natural se realizeaz prin
autofecundare, astfel c ele manifest un grad nalt de homozigoie. S-a
constatat ns c i aceste plante manifest vigoare hibrid n urma
ncrucirii. Descoperirea fenomenului de androsterilitate i a unor gene
restauratoare de fertilitate la o serie de plante autogame a deschis
perspectiva producerii rapide de semine hibride i a unor plante ce
manifest heterozis. Printre plantele autogame la care se efectuiaz n
mod curent lucrri pentru inducerea heterozisului pot fi citate: tomatele,
ardeiul, mazrea, fasolea, soia, grul, etc.
Un grup important de plante care a beneficiat ntr-o msur foarte
important de posibilitatea inducerii artificiale a efectului heterozis este
acela al speciilor forestiere. Astfel, la stejar exist n cultur att
hibrizi naturali, ct i artificiali, valoroi prin ritmul rapid de cretere
i prin calitatea foarte bun a lemnului. In pdurile din Romnia pot fi
ntlnii numeroi hibrizi care manifest heterozis, rezultai din
ncruciarea diferitelor specii de stejar, cum sunt: Quercus romanica =
Q. pedunculiflora (stejarul brumriu) x Q. robur (stejarul pedunculat);
Q. rosacea = Q. robur x Q. petraea (gorunul); Q. vilmoriana = Q. petraea
x Q. dentata; Q. haynaldiana = Q. frainetto (grnia) x Q. petraea. O alt
specie forestier la care sunt cunoscui numeroi hibrizi naturali i
artificiali ce manifest heterozis este plopul. De exemplu, plopul canadian
(Populus canadensis), foarte rspndit n cultur n ultimele decenii,
este o specie hibrid ntre plopul negru european (P. nigra) i speciile de
plop negru american, respectiv P. deltoides i P. angulata. In mod similar,
specia de larice Larix eurolepis este un hibrid rezultat din ncruciarea
laricelui european (L. decidua) cu laricele japonez
(L. leptolepis),
iar din ncruciarea invers a acestor dou specii s-a obinut hibridul L.
lepteuropa.
Consangvinizarea are aplicaii practice importante i la animale.
Prin consangvinizare (inbreeding) se mrete considerabil constana
morfologic, fiziologic, biochimic, etc. a tipului respectiv, n timp ce
prin ncruciare (outbreeding) se micoreaz constana tipului respectiv
i se mrete vigoarea indivizilor. Un exemplu concludent al importanei
efectului heterozis la animale este acela oferit de numeroasele rase de oi
create prin ncruciarea unor linii parentale cu grad ridicat de
consangvinizare.
Consangvinizarea se realizeaz prin hibridarea ntre indivizi mai
nrudii ntre ei dect media nrudirii din cadrul populaiei respective. In
178

GENETIC

funcie de gradul de nrudire se pot deosebi urmtoarele tipuri de


consangvinizri:
a) consangvinizare strns (incest), cnd mperecherea se face
ntre rude de gradul nti (de exemplu frate x sor, tat x fiic,
mam x fiu);
b) consangvinizare apropiat, cnd pentru mperechere se
folosesc indivizi cu gradul doi de nrudire (de exemplu vr x
var, bunic x nepoat);
c) consangvinizare moderat, cnd mperecherea se face ntre
rude de gradul trei;
d) consangvinizare ndeprtat, cnd se mperecheaz rude de
gradul patru sau mai ndepartate.
In general, la animalele domestice se folosete consangvinizarea
moderat, n scopul conservrii unor caractere valoroase, mai ales ale
unor masculi. Limitarea numrului animalelor din grupul supus
consangvinizrii, o condiie important pentru sporirea eficienei acesteia,
duce la micorarea variabilitii i la creterea uniformitii tipului
respectiv. Uneori consangvinizarea are ns efecte negative, prin aceea
c determin homozigotarea unor gene recesive ce codific apariia unor
caractere negative.
In prezent, n ameliorarea animalelor, pentru exploatarea efectului
heterozis, se folosesc pe scar larg aa numitele linii de mperechere
(line breeding), n sensul c pentru inducerea heterozisului se
ncrucieaz indivizi nrudii, din descendena unui mascul foarte valoros.
Acest sistem de ameliorare este folosit n mod curent la ovine, bovine,
porcine, iepuri, psri, etc. In cazul ginilor, de exemplu, prin ncruciarea
unor psri nrudite, provenite din descendena aceluiai coco, a fost
posibil selecia unor forme foarte productive, cu destinaie special
pentru producia de carne sau de ou.

179

AUREL POPESCU

10.

MUTAIILE
MOLECULAR

MECANISMUL

LOR

Mutaia (noiune introdus de H. de Vries n anul 1901) definete


orice modificare ereditar i detectabil a materialului genetic, care nu
este cauzat de recombinarea genetic sau de segregare. Modificrile care
constituie suportul genetic al mutaiilor pot apare n mod spontan (mutaii
naturale), sau pot fi induse experimental (mutaii artificiale). Dei agenii
mutageni implicai n apariia mutaiilor naturale i respectiv a mutaiilor
artificiale pot fi foarte diferii,ntre aceste dou tipuri de mutaii nu sunt
deosebiri de ordin calitativ.
Conform definiiei propuse de E. Mayr (1963), mutaiile sunt
modificri discontinue cu efect genetic, care pot afecta diferite uniti
ale materialului genetic. Pe aceast baz, s-a sugerat urmtoarea
clasificare a mutaiilor:
a) mutaii genice, cnd sunt afectate genele;
b) mutaii cromozomiale, cnd sunt afectai cromozomii;
c) mutaii genomice, cnd este afectat ntregul genom (mutaii
multiple, la nivelul mai multor perechi de cromozomi).
In funcie de genele care sunt afectate, implicnd deci exprimarea
fenotipic, mutaiile pot fi clasificate n mutaii dominante, codominante, semidominante i recesive. Evident, o astfel de clasificare se
refer n special la organismele diploide, la care mutageneza a creat relaii
de alelism ntre gene. La organismele haploide, ca o consecin a
prezenei unui singur cromozom din perechea de omologi, i implicit a
absenei relaiilor de dominan i recesivitate, orice mutaie se exprim n
fenotip.
Mutaiile au fost de asemenea clasificate i n funcie de locul
unde sunt plasate genele afectate, respectiv pe autozomi sau heterozomi,
n mutaii autozomale i mutaii heterozomale (care manifest sexlinkage). Exist i mutaii ale genelor din citoplasm, denumite mutaii
extranucleare.
O categorie relativ distinct a mutaiilor o constituie mutaiile
letale i mutaiile semiletale, care afecteaz gene de importan major
n organism, prin a cror blocare se cauzeaz moartea individului, cel mai
adesea n perioada embrionar, sau nainte de maturitatea sexual.
180

GENETIC

Mutaiile pot afecta toate tipurile de gene (structurale, operatoare,


reglatoare) care iau parte la realizarea reglajului genetic. Cercetrile de
genetic molecular au furnizat suficiente dovezi care arat c cea mai
mic unitate mutaional este perechea de nucleotide. Mutaiile care se
produc la nivelul perechilor de nucleotide sunt denumite mutaii
punctiforme i sunt evident mutaii intragenice.
Indiferent de nivelul la care se produc (genic, cromozomial,
genomic), mutaiile au frecven variabil. Se apreciaz ns c pot exista
gene mutabile, caracterizate printr-o mare instabilitate i care, n
consecin, prezint o frecven mai mare a mutaiilor, comparativ cu
celelalte gene din organism. O astfel de ipotez este de altfel susinut de
existena seriilor de gene polialele, care sunt considerate ca fiind
rezultatul instabilitii pronunate a unor gene sub influena anumitor
condiii ale mediului abiotic. S-a sugerat de asemenea posibilitatea
existenei unor gene mutatoare, care mresc frecvena mutaiilor altor
gene.
Studiul aprofundat al fenomenului mutaiei a artat c aceasta
poate avea loc n
dou sensuri. Astfel, dac prin mutaie nainte
(forward mutation) gena normal a tipului slbatic se transform ntr-o
alel diferit, prin mutaie de reversie (back-mutation) aceast gen
(alel) se poate retransforma n tipul iniial. Trebuie menionat c, n
general, mutaiile directe (nainte) i cele de reversie apar n paralel, ns
frecvena lor este diferit. Astfel, s-a calculat c la Drosophila
melanogaster frecvena mutaiilor directe care au ca rezultat modificarea
culorii rou deschis a ochilor (w) n culoarea rou nchis (we) este de
aproximativ 1.3 x 10-4, n timp ce mutaia de reversie are o frecven mai
mic, respectiv 4.2 x 10-5.
Dac mutaiile afecteaz celulele liniei germinale, ele se pot
transmise ereditar la noua generaie. Ca urmare, la descendeni vor fi
afectate de mutaia respectiv att celulele germinale, ct i celulele
somatice. La organismele care se nmulesc pe cale asexuat (de exemplu,
plantele cu nmulire vegetativ), pentru ca mutaiile aprute n celulele
somatice s fie transmise descendenilor nu este necesar ca ele s fie
prezente i n celulele generative. Aceasta reprezint de altfel explicaia
numrului mare de soiuri de pomi (de exemplu, mr) sau plante
ornamentale care i au originea n mutaii ale mugurilor vegetativi, care
prin altoire, butire, etc., au putut fi meninute i transmise n generaiile
succesive.

181

AUREL POPESCU

Mutaiile Naturale i Frecvena lor


Apariia de mutaii naturale, n special la plante, a fost sesizat nc din
secolul al XVI-lea. Este cunoscut de exemplu descoperirea n acea
vreme de ctre farmacistul Sprenger din Heidelberg a unei mutaii stabile
la specia Chelidonium majus, exprimat fenotipic prin forma anormal a
frunzelor i petalelor, care a stat la baza apariiei unei forme noi, denumit
Chelidonium laciniatum. Un alt exemplu binecunoscut de mutaie
descoperit cu muli ani n urm (1855) este acela al salcmului monofil,
care spre deosebire de specia de origine (Robinia pseudoacacia) nu are
frunzele compuse.
In lucrarea sa Originea speciilor (1859), dar mai ales n lucrarea
Variaia animalelor i plantelor n stare domestic, Charles Darwin a
evideniat variaiile ereditare denumite sporturi. Acestea au o frecven
relativ mare la plante i au la baz variaii mugurale determinate de factori
de stres din mediul ambiant. Exemple clasice ale variaiilor mugurale sunt
cele care au stat la originea piersicului cu fructe nepubescente, i a
prunului cu fructe roii (dintr-un lstar al unui prun cu fructe galbene).
Fenomenul mutaiei a nceput s fie cu adevrat luat n seam
numai dup apariia n anul 1901 a lucrrii Teoria mutaiilor, publicat
de Hugo de Vries. Teoria mutaionist elaborat de acesta, dei insuficient
de bine fundamentat, a avut un rol important n explicarea evoluiei
speciilor.
Se consider c una dintre cauzele mutaiilor naturale care apar la
organismele vegetale i animale este radiaia cosmic, o surs permanent
de nuclei de carbon, azot i oxigen, care ciocnindu-se cu nuclei ai unor
atomi din aer dau natere radiaiei cosmice secundare, format din radiaii
electromagnetice i corpusculare. Aceste radiaii acioneaz permanent
asupra Pmntului, mpreun cu radiaiile care se produc prin
dezintegrarea natural a elementelor radioactive din scoara pmntului i
cu gazul radon din atmosfer, alctuind fondul natural de radiaii terestre.
Frecvena mutaiilor. Mutaiile naturale au o frecven foarte
variat n funcie de condiiile de mediu i de genele afectate. De
exemplu, s-a demonstrat c la Drosophila melanogaster, n condiii
normale de via, frecvena mutaiilor recesive letale sex-linkate (deci
care afecteaz genele plasate pe cromozomul X) este de 0.1%, n timp ce
pentru cromozomii 2 i 3, care au dimensiuni aproximativ egale, frecvena
mutaiilor este de aproximativ 5 ori mai mare (0.5%). Frecvena
182

GENETIC

mutaiilor letale recesive este la aceast specie de aproximativ 1%, dar


dac se iau n calcul i mutaiile semiletale i subvitale, atunci rata de
ansamblu a mutaiilor crete la 5%, ceea ce nseamn c n medie unul din
20 de gamei este afectat de o astfel de mutaie.
Desigur c frecvena mutaiilor per locus este mult mai mic,
innd seama de numrul mare al locilor. H.J. Muller a estimat rata
mutaiilor per locus la aproximativ 1/100.000 pentru o generaie.
Diferitele gene prezint o variaie n limite foarte largi a frecvenei
mutaiilor (Tabel 10.1). De exemplu, rata mutaiilor care afecteaz gena
waxy la porumb este foarte redus, aproape nedetectabil, n timp ce gena
sh se modific cu frecven relativ mare (n medie12 mutaii la 100.000
gamei).

Tabel 10.1 Frecvena mutaiilor la diferite gene din genomul unor specii
diferite.
Specia
Escherichia coli
Drosophila
melanogaster
Zea mays

Homo sapiens

Tipul de mutaie

Numr de gamei
testai

leu (leucin
try (triptofan)

Mutaii la 104
gamei
0.07
5.61

y (yellow)
w (white)
ct (cut)
wx (waxy)
sh (shrunken)
su (sugacy)
Distrofie muscular
Condrodistrofie
Hemofilie

70.000
70.000
60.000

29
29
150

1.503.744
2.469.285
1.678.731

0
12
2.4
8
10-140
20-30.2

Rata mutaiilor se calculeaz diferit, n funcie de tipul


organismului. Astfel, la mamifere (specii diploide) o mutaie dominant
aprut cu frecvena de 1/1.000, determinat de o modificare ntr-unul din
cei doi gamei care au participat la fecundare, nseamn de fapt o mutaie
dominant la 2.000 de gamei. Se subnelege aadar c pentru a afla rata
mutaiilor per gamet se nmulete frecvena mutaiilor la indivizi cu 1/2.
In exemplul de mai sus frecvena mutaiilor este de 1/1.000 x 1/2 =
1/2.000.
183

AUREL POPESCU

La om, rata calculat a mutaiilor per gen este de 4 la 10.000


gamei, fiind de patru ori mai mare dect cea calculat pentru Drosophila
melanogaster.
Plantele superioare prezint o rat a mutaiei comparabil cu aceea
de la animalele superioare i de la om. In schimb, microorganismele au o
rat a mutaiei mult mai redus, explicaia constnd probabil n numrul
mare de diviziuni celulare succesive implicate de ciclul de dezvoltare a
organismelor superioare, care sporete considerabil ansele de apariie a
unor modificri la nivelul genelor.
Rata mutaiilor se poate calcula numai pentru o anumit gen, dar
nsumnd valoarea ratei mutaiilor pentru toate genele se poate estima
frecvena mutaiilor per genom.
Gene mutatoare. Rata mutaiilor nu este constant, ci depinde de
diferii factori, printre cei mai importani fiind genotipul, condiiile de
mediu, sexul, etc. Genotipul poate influena ntr-o msur foarte
important rata mutaiilor, mai ales la acele organisme la care s-a
demonstrat existena aa-numitelor gene mutatoare, care mresc
frecvena mutaiilor la diferite alte gene. Astfel, variaiile foarte mari ale
frecvenei mutaiilor letale recesive constatate la sue cu origini diferite de
Drosophila melanogaster, determinate de modificri ale genelor de pe
cromozomul X, au fost explicate de M. Demerec (1937) prin prezena
unei gene recesive mutatoare pe cromozomul 2. Aceast ipotez a fost
confirmat experimental prin reducerea considerabil a frecvenei
mutaiilor letale recesive de pe cromozomul X (0.07%) dup eliminarea
genei mutatoare.
Pentru a explica activarea la nivel molecular a mecanismului de
aciune al genelor mutatoare, Ch. Janofsky (1964) a sugerat c printre
cauzele posibile pot fi:
a) prezena unei polimeraze anormale, care determin erori n
replicaia ADN;
b) producerea unor analogi ai bazelor azotate cu caracter
mutagen, care n cursul replicaiei ADN sunt inclui n
macromolecula respectiv;
c) modificarea unor baze azotate din macromolecula de ADN,
avnd ca rezultat apariia de erori n cursul replicaiei.
Descoperirea de ctre J. Spever a unei gene care codific
producerea unei polimeraze anormale la organisme caracterizate printr-o
184

GENETIC

frecven mrit a mutaiilor reprezint o dovad experimental n


sprijinul acestei ipoteze.
Frecvena mutaiilor naturale poate fi influenat i de diferii
produi normali ai metabolismului celular. Astfel, s-a demonstrat c
adugarea n mediul de cultur a bacteriei Escherichia coli a unor
ribonucleoside purinice (adenosin sau guanosin) reduce frecvena
mutaiilor naturale (la 1/3 n cazul adenosinei).
Unii derivai purinici sau purine, cum sunt cafeina, azaguanina,
sau adenina, au efecte mutagene demonstrate, de la foarte puternic
(cafeina) la redus (adenina). In contrast, ribonucleosidele purinice nu
numai c reduc frecvena mutaiilor naturale, dar au chiar efect protector
fa de aciunea adeninei sau cafeinei, fapt pentru care au fost denumite
substane antimutagene.
Mutaii Artificiale i Factori Mutageni
Dei primele lucrri privind efectul radiaiilor asupra plantelor au fost
iniiate de C. Stuart Gager la scurt timp dup descoperirea razelor X
(1895), iar numeroi ali cercettori au ncercat n primele trei decenii ale
secolului XX s induc mutaii la diferite organisme, dovada concludent
a efectului mutagen al radiaiilor a fost fcut abia n anul 1927 de ctre
H.J. Muller, care a demonstrat creterea semnificativ a frecvenei
mutaiilor induse artificial n raport cu aceea a mutaiilor spontane. In
aceeai perioad L.J. Stadler a raportat inducerea de mutaii stabile prin
iradiere cu raze X i raze gamma la porumb i orz, T.H. Goodspeed la
Nicotiana tabacum, A.F. Blakeslee la Datura stramonium, etc.
Dezvoltarea rapid a metodelor de iradiere, de studiu a
mecanismelor moleculare ale mutagenezei i de selecie a organismelor
cu modificri stabile ale unor caractere, induse prin tratament cu ageni
mutageni fizici, a determinat apariia unui domeniu nou al geneticii,
respectiv radiogenetica. Ulterior s-a descoperit c numeroase substane
chimice au efect mutagen i, ca urmare, pot fi folosite pentru inducerea
artificial de mutaii. S-a demonstrat c ocurile termice pot de asemenea
induce apariia de mutaii la unele organism, prin favorizarea instabilitii
materialului genetic i a replicrii sale eronate.
Factorii mutageni pot fi clasificai aadar n: factori mutageni
fizici, factori mutageni chimici i factori mutageni biologici. Trebuie
fcut meniunea c indiferent de categoria din care fac parte, agenii
mutageni determin a mrire considerabil a frecvenei mutaiilor
185

AUREL POPESCU

comparativ cu cea natural, dar ntre mutaiile induse artificial i cele


aprute spontan nu exist deosebiri calitative.
Factorii mutageni fizici
In grupa factorilor mutageni fizici sunt incluse radiaiile ionizante i
neionizante, precum i ocurile de temperatur. Radiaiile ionizante s-au
dovedit a fi ns a fi cele mai eficiente i, ca urmare, sunt folosite cu cea
mai mare frecven n lucrrile de mutagenez experimental.
Radiaiile mutagene utilizate n scopul inducerii de mutaii la
plante i animale, i seleciei de mutante stabile cu caractere modificate n
sens favorabil, pot fi clasificate astfel:
Radiaii neionizante (care genereaz reacii fotochimice):
- raze ultraviolete (UV)
Radiaii ionizante (care genereaz reacii radiochimice):
Radiaii electromagnetice:
- raze X (Rntgen)
- raze gamma ()
Radiaii corpusculare
- raze beta (electroni)
- protoni (nuclei de hidrogen)
- neutroni leni sau rapizi
- raze alfa (nuclei de heliu)
- particule grele
Radiaiile neionizante, al cror efect mutagen a fost pus n
eviden de E. Altenburg n anul 1934 n urma unor experimente efectuate
cu ou de Drosophila melanogaster, sunt radiaiile ultraviolete (UV), care
fac parte din spectrul solar invizibil, fiind constituite din fotoni cu energie
joas (circa 3-5 ergi/m2) i cu o lungime de und cuprins ntre 136 i
4.000 .
Aciunea radiaiilor UV se exercit prin absorbia energiei
fotonilor cu diferite lungimi de und de ctre moleculele substratului, care
intr ntr-o stare de excitaie. Consecina acestei stri este apariia unor
reacii chimice fluorescente i fosforescente, i transmiterea energiei
moleculei excitate unei alte molecule. Asemenea fenomene provoac
reacii chimice secundare variate n funcie de substratul asupra cruia se
exercit aciunea i de lungimea de und a razelor UV. Radiaiile UV au o
186

GENETIC

capacitate penetrant redus, i de aceea se folosesc pentru inducerea de


mutaii la microorganisme i microspori (polen).
Radiaiile ionizante includ radiaiile electromagnetice i radiaiile
corpusculare, care au un efect similar asupra substratului. Acestea se
exercit ca unde sau ca particule ncrcate cu energie diferit i acioneaz
la nivelul atomilor, fiind capabile s dezorganizeze sferele de electroni
care nconjoar nucleul atomic. Se tie c atomul neutru este ntr-un
echilibru electrostatic, numrul sarcinilor electrice pozitive din nucleul
atomic fiind egal cu cel al sarcinilor electrice negative ale electronilor.
Radiaiile electronomagnetice, datorit energiei i a vitezei lor foarte
mare, sunt capabile s smulg unul sau mai muli electroni de pe orbita
exterioar a atomilor neutri ntlnii n drumul lor. Prin pierderea unui
electron, atomul rmne cu o sarcin electric pozitiv n plus, devenind
ion pozitiv sau cation. Electronul eliberat nu rmne liber, ci se ataeaz
unui alt atom care, primind o sarcin electric negativ, devine ion
negativ sau anion. Acest proces poart numele de ionizare. Dei ionii
produi n urma iradierii au o via foarte scurt, de ordinul a 10-6 dintr-o
secund, totui ei au posibilitatea de a intra ntr-o serie de reacii chimice
cu substanele din materia iradiat, determinnd apariia unor compui
noi. Dintre radiaiile ionizante, cele mai puternice sunt radiaiile
electronomagnetice i n special razele gamma i razele Rntgen, care au
o lungime de und mic i putere foarte mare de penetraie.
Razele gamma, care iau natere n cursul dezintegrrii radioactive
au lungimea de und cea mai mic, cuprins ntre 0.005 i 1.4 , iar cea
mai folosit surs de radiaii gamma este cobaltul radioactiv ( 60Co). In
scopul iradierii (cel mai adesea cronic), materialul vegetal sau animal
este plasat n cercuri concentrice n jurul unei surse de radiaii gamma
60
Co, n aa-numitele cmpuri gamma sau laboratoare gamma.
Razele Rntgen (X) sunt radiaii electronomagnetice cu aciune
similar razelor gamma, avnd o lungime de und cuprins ntre 0.06 i
100 i o energie de activare de 0.01-0.1 MeV. Puterea lor de penetraie
este mai mic dect aceea a radiaiilor gamma, dar suficient de mare
pentru a provoca o ionizare puternic. Folosirea frecvent a acestui tip de
iradiere poate fi explicat prin accesibilitatea surselor (disponibile n
numeroase instituii medicale), prin dozarea uoar i, nu n ultimul rnd,
prin posibilitatea ntreruperii sursei de radiaii, lucru imposibil n cazul
surselor gamma, a cror emisie de radiaii este continu.
Tot din grupa radiaiilor ionizante fac parte radiaiile corpusculare
cum sunt razele (electroni), razele (nuclei de heliu), protonii (nuclei
187

AUREL POPESCU

de hidrogen), neutronii i diverse particule grele, emise de asemenea n


timpul dezintegrrii radioactive a unor elemente.
Razele alfa () sunt formate din nuclei de heliu, alctuii fiecare
din doi protoni, cu o mas de circa 7.000 de ori mai mare dect electronul,
ceea ce le confer o putere de penetraie foarte mic. Distana maxim de
ptrundere a particulelor alfa emise de exemplu de radium este de
aproximativ 4 cm n aer i aproximativ 0.07 mm n esuturile biologice,
ceea ce face ca utilizarea lor n lucrrile de mutagenez s fie limitat.
Razele beta () reprezint un flux de electroni expulzai de
nucleele atomice cu o vitez de 10.000-300.000 km/sec, avnd o mas
mic i o putere penetrant de circa 200 de ori mai mare ca a razelor alfa.
Ca surs de raze beta pentru inducerea de mutaii se folosesc de obicei
izotopii radioactivi ai fosforului (32P) sau sulfului (35S). Manipularea
acestor izotopi impune ns msuri speciale i foarte severe de protecie a
experimentatorului, ceea ce face ca radiaiile beta s fie rar utilizate n
lucrrile de inducere a mutaiilor.
Neutronii sunt particule elementare neutre emise n cursul unor
reacii nucleare, n special n reaciile de dezintegrare a nucleului de
uraniu i de plutoniu. Fiind lipsii de sarcin electric ei sunt atrai sau
respini de electroni sau nuclei materiei prin care trec. In funcie de
energia pe care o posed, neutronii pot fi rapizi (cu energii mai mari de
0.5 MeV), cu o vitez medie (avnd o energie care variaz ntre 0.5 MeV
i 1 KeV), leni (cu energie cuprins ntre 1 KeV i 1 eV) i termici (cu
energie sub 0.1 eV). In urma ciocnirilor cu nucleii atomici ai materiei pe
care o strbat, acetia ncep fie s emit protoni (ca n cazul iradierii cu
neutroni rapizi), fie pot ptrunde n nucleu, fiind capturai de acesta (ca n
cazul iradierii cu neutroni leni sau termici). In ambele situaii, iradierea
cu neutroni duce la producerea unui numr de particule ncrcate electric
i ioni, care genereaz reacii chimice noi, caracteristice materialelor
ionizate.
Msurarea radiaiei. Unitatea de msur folosit n mod curent
pentru doza absorbit de radiaii este gray-ul (Gy), reprezentnd
depunerea unei cantiti de energie de 1 joule per kilogram de esut.
Aceast unitate a nlocuit rad-ul (radiation absorbed dose, R),
reprezentnd cantitatea de energie absorbit de 1 gram de materie vie sau
nevie (1 Gy = 100 R). Totui, deoarece neutronii i particulele alfa
cauzeaz daune mai mari per gray dect radiaia gamma sau beta, n
standardele de protecie radiologic se utilizeaz o alt unitate sievertul
(Sv). Aceast unitate ia n consideraie efectele diferitelor tipuri de
radiaii. Un gray de radiaie beta sau gamma are efect biologic de 1 Sv, un
188

GENETIC

gray de particule alfa are efect de 20 Sv, iar un gray de neutroni este
echivalentul a circa 10 Sv (dependent de energia lor). Deoarece sievert-ul
este o unitate relativ mare, doza de radiaii pentru om este msurat n
mod normal n milisieveri (mSv), adic n miimi de sievert.
O unitate mai veche i rar folosit este rntgen-ul (r). Un rntgen
este egal cu cantitatea de radiaii capabile s produc 2.08 x 10 9 perechi de
ioni ntr-un cm3 de aer la 0C i la presiunea atmosferic de 760 mm Hg.
Cantitatea de radiaii corespunztoare unei uniti rntgen este capabil s
provoace ntr-un esut viu formarea unei cantiti de ioni de aproximativ
1.000 de ori mai mare, respectiv 2,08 x 10 12. De asemenea, pentru studiul
efectelor radiaiilor asupra organismului uman se folosete rem-ul
(rntgen equivalent in man), o variant rntgen-ului.
Radiosensibilitatea organismelor. Rezultatele unui numr foarte
mare de lucrri de inducere a mutaiilor au artat n mod concludent c
diferitele organisme prezint diferene considerabile n ce privete
radiosensibilitatea (Tabel 10.2).
Pentru msurarea radiosensibilitii se folosesc noiunile de doz
letal 100 (DL 100) i doz letal 50 (DL 50), care reprezint doza la care,
ntr-un interval de 30 zile, mor toi subiecii supui iradierii, sau circa
50%.
Tabel 10.2
animale.

Variaia radiosensibilitii la unele organisme vegetale i

Tipul de organisme

Plante

Animale

Om

Specia
Linum usitatissimum
Lycopersicum aesculentum
Brassica napus
Secale cereale
Phaseolus vulgaris
Abies alba
Paramecium
Drosophila melanogaster
Ambystoma maculatum
Rattus sp.
Rana sp.
Mus musculus
Canis lupus familiaris
Homo sapiens
189

DL 50
40.000 - 50.000
30.000 - 40.000
25.000 - 30.000
10.000 - 15.000
8.000
600 - 900
350.000
46.000
3.000
850
700
530
325
450

AUREL POPESCU

Efectele radiaiilor la nivel celular sunt, de asemenea, foarte


variate, ele determinnd ncetinirea sau blocarea diviziunilor mitotice,
pierderea definitiv a capacitii de diviziune nensoit de moartea
celulelor (sterilizarea celulelor), moartea celulelor dup mai multe ore de
la iradiere (fr ca ele s mai intre n diviziune mitotic) sau, n cazul
dozelor foarte mari de radiaii (iradiere acut), moartea instantanee a
celulelor. Indiferent de tipul de iradiere, respectiv cronic (de intensitate
sczut i durat lung) sau acut (de intensitate mare i durat scurt),
cele mai afectate componente ale celulei sunt nucleul i cromozomii, deci
materialul genetic.
In general, frecvena mutaiilor crete proporional cu doza de
iradiere. De exemplu, la Drosophila melanogaster frecvena mutaiilor
letale la o doz integrat de iradiere de 750-770 r este de 2.7%, dar la
doza de 9.000 r atinge 18.3%. In mod similar, la Antirrhinum majus,
frecvena mutaiilor la 400 r este de 1.24%, iar la doza de 800 r crete
pn la 4.41%.
Efectele Genetice ale Radiaiilor
Efectele genetice ale radiaiilor ionizante sunt dependente de doz, debitul
dozei, tipul radiaiei, viteza diviziunii celulare (durata ciclului mitotic),
numrul i lungimea cromozomilor, concentraia oxigenului intracelular
i extracelular, reversibilitatea leziunilor cromozomiale, eficiena
mecanismelor de reparare molecular a ADN.
Modificrile structurale ale cromozomilor provocate de aciunea
radiaiilor ionizante pot fi corelate sau nu cu mutaii. Acestea constituie
ns o surs important de informaii pentru estimarea raportului cantitativ
dintre doza de iradiere i daunele produse celulelor supuse iradierii. In
general, studiul producerii de rupturi cromozomiale prin iradiere folosete
ca model experimental pentru cercetarea mecanismelor implicate n
procesele de refacere (reparare). Totui, procesul de rupere-reunire nu
presupune reversia prin reunire la o stare identic cu cea anterioar ruperii
i nici o revenire care urmeaz n mod obligatoriu calea invers celei pe
care a evoluat ruperea cromozomului.
Restructurrile cromozomiale care se produc sub influena
radiaiilor ionizante sunt variate. Astfel, ca urmare a unei singure rupturi
cromozomiale apare un fragment acentric, care de obicei are tendina de a
se uni cu captul liber al cromozomului care a fost afectat de rupere. Dac
prin aceast reunire, care poart denumirea de restituie, secvena
normal a genelor nu este alterat, cromozomul va fi normal att
190

GENETIC

structural ct i funcional. Dac ns nainte de reunire fragmentul


acentric face o rotaie de 180, cromozomul va fi modificat din punct de
vedere structural, n sensul schimbrii ordinii locilor. Acest tip de
modificare poart denumirea de inversie terminal sau paracentric
(Fig. 10.1). In cazul n care cromozomul sufer dou ruperi, cu
producerea a trei segmente, dintre care numai segmentul care poart
centromerul i schimb orientarea, modificarea poart denumirea de
inversie pericentric.
Un alt tip de modificare structural a cromozomilor care se poate
produce ca urmare a radiaiilor ionizante este deleia (Fig. 10.1), caz n
care ruperea nu este urmat de reunirea fragmentului acentric cu restul
cromozomului. Efectele genetice ale deleiei depind de mrimea
fragmentului pierdut i de importana genelor situate pe el.
Au fost constatate situaii n care fragmentul acentric formeaz un
cromozom inelar (circular) prin unirea celor dou capete ale sale, acesta
fiind pierdut la urmtoarea diviziune celular ca urmare a lipsei
centromerului. Alteori, un astfel de fragment se poate suda la captul unui
cromozom neomolog determinnd o translocaie terminal.

Deleia

Duplicaia

Inversia

Translocaia

Fig. 10.1. Tipurile de restructurri cromozomiale cauzate de mutaii.


Prin sudarea fragmentului acentric la cromozomul omolog se
produce un alt tip de restructurare intracromozomial denumit
duplicaie (Fig. 10.1). Evident, n funcie de modificarea sau nu a ordinii
genelor nainte de sudur, aceasta poate fi duplicaie n tandem, cnd
sudura nu schimb ordinea genelor, sau duplicaie n tandem invers,
191

AUREL POPESCU

cnd ordinea iniial a genelor este schimbat ca urmare a rotirii


fragmentului acentric nainte de sudur. Duplicaia n tandem invers poate
avea efecte genetice majore, ntruct prin efectul de poziie poate fi
afectat expresia caracterelor codificate de genele afectate de
restructurarea intra-cromozomial. Duplicaiile au o frecven mai mare
dect deleiile, dar spre deosebire de acestea sunt foarte rare cazurile n
care au efect letal.
In cazul producerii de ruperi simultane n doi cromozomi
neomologi poate avea loc schimbul reciproc de fragmente acentrice, acest
tip de restructurare intracromozomial fiind denumit translocaie
reciproc (Fig. 10.1), care, n general, are o frecven mai mare dect
translocaia terminal. Dac fragmentele translocate au centromeri, se
vor forma cromozomi dicentrici sau policentrici. Fragmentele acentrice se
pot suda i ele, dar vor lipsite de viabilitate ca urmare a lipsei
centromerului. Adeseori, cromozomii dicentrici sau policentrici formeaz
puni n anafaz, acest tip de aberaii cromozomiale determinnd apariia
de gamei nefuncionali.
Translocaiile reciproce pot fi identificate prin analiza citogenetic
n cursul meiozei, deoarece datorit transferului de gene ntre cromozomi
neomologi acetia devin parial omologi i formeaz figuri caracteristice,
n form de cruce.
In cazul prezenei lor ntr-un numr mare, fragmentele acentrice
sau fragmentele centrice ntrziate ale cromozomilor pot forma
micronuclei, cu forma unor nuclei cu volum redus, situai la o oarecare
distan de nucleul celular.
Un efect secundar al iradierii const n diviziunea incorect a
centromerului, n sensul clivrii n unghi drept fa de axul longitudinal al
cromozomului, ceea ce are ca rezultat apariia a doi izocromozomi, dintre
care unul singur este viabil.
Este un fapt incontestabil c plantele cu cromozomi mari sunt mai
susceptibile la apariia de ruperi ale cromozomilor sau cromatidelor, dect
cele cu cromozomi mici, deci au o radiosensibilitate mai ridicat. Se
consider ns c aprox. 90-95% dintre rupturile primare se reunesc n
configuraia iniial (proces denumit restituie) ntr-un interval cuprins
ntre cteva minute i cteva ore. Celelalte rupturi, care nu refac
configuraia iniial, pot evolua pe urmtoarele dou ci:
a) pot rmne deschise;
b) se pot suda nelegitim cu capetele rupte ale altor cromozomi,
avnd ca rezultat producerea de translocaii.
192

GENETIC

Aberaiile de primul tip apar ca simple rupturi detectabile n


mitoz, iar fragmentele de cromozomi fr centromer se pot pierde, caz n
care poate avea loc i o pierdere de informaie genetic.
Aberaiile de al doilea tip presupun existena simultan a dou
rupturi deschise, aflate n imediata apropiere. Pe baza relaiei ntre
frecvena aberaiilor i doza de iradiere s-a ajuns la concluzia c n cazul
radiaiilor X i gamma, o singur particul are o probabilitate mic de a
produce dou rupturi, fapt care este ns perfect posibil n cazul radiaiilor
dens ionizante. Din aceast cauz, n cazul radiaiilor X sau gamma,
existena a dou rupturi deschise presupune producerea a dou rupturi
independente i de aceea frecvena aberaiilor de acest tip este egal cu
produsul frecvenelor celor dou rupturi simple pe care le presupune.
Aadar, dac frecvena aberaiilor de primul tip este dependent de doz,
frecvena celor de al doilea tip este funcie de ptratul dozei.
Pentru a explica apariia unor astfel de aberaii cromozomiale ca
urmare a iradierii, exist dou ipoteze:
Ipoteza rupturii primare consider c efectul primar al unui agent
exogen este o ruptur cromatidic sau cromozomic la nivelul unui
cromozom interfazic. Ipoteza presupune c, de obicei, capetele de ruptur
se reunesc pentru a restaura configuraia original (restituie), dar pot
exista cazuri n care capetele de ruptur pot rmne deschise sau se pot
suda cu capetele altei rupturi. Rezultatul unei astfel de fuziuni a capetelor
de la diferite rupturi ale cromatidelor duce la realizarea a diferite
schimburi cromatidice.
Ipoteza schimburilor consider c efectul primar al iradierii nu
este o ruptur, ci un alt tip de leziune la nivelul cromozomului, care poate
reveni la starea normal sau poate da natere unui schimb. Cnd astfel de
leziuni coincid n timp i spaiu cte dou, ele se pot transforma (ntr-un
stadiu ulterior al evoluiei cromozomului) n schimb cromatidic.
Refacerea cromozomilor. Se consider c leziunile produse de
iradierea cu ageni mutageni pot suferi un proces de restructurare
spontan, dar aceasta poate fi provocat i de factori fizici, sau de anumite
substane cum sunt unii aminoacizi sau proteine, derivai purinici i
pirimidinici, nucleoside i nucleotide, diferite enzime, etc.
Ipotezele referitoare la mecanismele moleculare ce stau la baza
reparrii leziunilor cromozomice sau cromatidice i la reunirea
cromozomilor rupi se bazeaz fie pe replicarea ADN ca proces esenial al
restaurrii, fie pe implicarea unor proteine (enzime) n refacerea
cromozomilor, fie pe ambele procese. In acest sens s-a demonstrat de
altfel c o serie de enzime de tipul endonucleazelor, exonucleazelor,
193

AUREL POPESCU

polimerazelor, etc., au un rol foarte important n procesul de refacere a


cromozomilor afectai de iradiere.
Aplicaii Practice ale Mutagenezei cu Ageni Fizici
Este un fapt general recunoscut c majoritatea mutaiilor induse prin
iradiere sunt nefavorabile, deci au un caracter mai mult sau mai puin
duntor. Totui, se consider c aproximativ 1/1.000 din mutaiile
radioinduse pot fi folosite direct sau indirect n practic. Frecvena redus
a mutaiilor de interes practic implic aadar selecia n populaii foarte
numeroase de mutante. Acest inconvenient este ns compensat de
posibilitatea identificrii unor genotipuri cu expresie modificat a unor
caractere foarte importante din punct de vedere economic, n condiiile
meninerii nealterate a ansamblului de caractere favorabile, lucru
imposibil prin metoda hibridrii datorit fenomenului de linkage, deci a
transmiterii legate a genelor care codific caracteristici pozitive cu cele
care codific caracteristici negative.
Gama caracterelor care au fost modificate prin mutagenez cu
ageni fizici la diferitele specii de plante de interes agricol este foarte
variat i include rezistena la boli i duntori, coninutul n proteine,
glucide (zaharuri), uleiuri, alcaloizi, etc. din semine, momentul maturrii
fructelor, habitusul i vigoarea plantelor, etc. Modificrile induse prin
mutagenez pot afecta att morfologia, ct i procesele biochimice i
fiziologice, deci metabolismul plantelor, utilizarea radiaiilor fiind aadar
una dintre cile cele mai importante pentru realizarea unei mari
variabiliti genotipice i pentru crearea unei baze largi de material
biologic, necesar pentru selecia de genotipuri valoroase.
Avantajul inducerii instabilitii genetice de ctre diferitele tipuri
de radiaii este i mai important n cazul plantelor autogame, la care
permite depirea limitelor asociate cu homozigotarea, deci cu pierderea
variabilitii genetice din cauza autofecundrii repetate, i ofer
posibilitatea obinerii unor forme variate ca material iniial de selecie.
Folosirea agenilor mutageni fizici n scopul obinerii de forme noi
cu nsuiri valoroase, care prin selecie sau cu asociat cu alte metode de
ameliorare s duc la crearea unor soiuri cu valoare practic superioar
formelor iniiale, este creditat deja cu succese remarcabile la unele specii
cultivate de plante (grau, orz, ovz, orez, soia, mazre, fasole, tomate,
ceap, cartof, tutun, bumbac, garoafe, crizanteme, dalie, crizanteme,
alstroemeria, azalee, trandafir, protocal, piersic, cais, cire, mr, etc).
194

GENETIC

Factori mutageni chimici


Gama substanelor chimice capabile s induc restructurri cromozomiale
i mutaii este foarte larg. Deoarece multe dintre aceste substane au
asupra cromozomilor efecte similare radiaiilor, provocnd de exemplu
ruperi, au primit denumirea de substane radiomimetice. Totui, spre
deosebire de agenii mutageni fizici, substanele chimice respective au un
efect specific, provocnd ruperea cromozomilor mai ales n regiunile
heterocromatice, i anume n regiunile paracentice i ale constriciilor
secundare.
Substanele chimice pot induce aberaii variate de tip cromatidic,
subcromatidic i cromozomial. In general ns, substanele chimice
mutagene induc aberaii de tip cromatidic i numai puine substane
(de exemplu, 8-etoxicofeina i streptonigrina) produc aberaii de tip
cromozomial sau subcromatidic.
Agenii chimici care produc rupturi i reorganizri cromozomiale
sunt clasificai astfel:
a)
b)
c)
d)

precursori ai ADN i analogi ai bazelor azotate;


ageni alkilani;
unele antibiotice;
ali factori mutageni chimici

Se consider c efectul agenilor mutageni chimici este dependent


de perioada de tratament (durata), doza utilizat, i de o serie de factori
fizici externi. Astfel, pentru obinerea unui efect optim, perioada de
tratament trebuie s fie ct mai scurt, dar corelat cu durata ciclului de
diviziune, doza utilizat trebuie s fie ct mai sczut pentru a evita
inhibarea puternic a diviziunii celulare, iar factorii care ar putea influena
efectul substanei mutagene (pH, concentraia O 2, temperatura) trebuie s
aib nivelul adecvat.
Este cunoscut faptul c agenii mutageni chimici afecteaz mai
ales interfaza i profaza timpurie, iar cei cu aciune n timpul interfazei
influeneaz diferit perioadele G1, S i G2. Substanele chimice cu efect n
perioadele G1 sau S vor inhiba replicarea cromozomilor prin aciunea lor
asupra sintezei de ADN, pe cnd cele cu efect n G 2 vor afecta numai
formarea cromatidelor libere, ntruct n acest stadiu ADN i cromozomii
sunt deja replicai.
Unii ageni chimici, cum sunt adenina, 5-fluordeoxiuridina,
azaserina, aminopterina, etc., blocheaz sinteza ADN i a precursorilor
195

AUREL POPESCU

si. Ali ageni, cum sunt mitomicina-C, actinomicina-D, hidrazida


maleic, agenii alkilani, etc., modific proprietile chimice i fizice ale
ADN. Se consider c blocarea sintezei unei anumite baze azotate (Tabel
10.3) determin probabil apariia unor erori n procesul de mperechere
normal a nucleotidelor purinice i a celor pirimidinice n macromolecula
de ADN. Cel mai puternic agent mutagen chimic s-a dovedit a fi
antibioticul azaserina, care blocheaz sinteza bazelor azotate purinice,
acesta fiind, n acelai timp, i un puternic alkilant.
Tabel 10.3. Ageni mutageni chimici care blocheaz sinteza bazelor
azotate
Agentul mutagen
Bazele azotate a cror sintez este inhibat
Adenina
Guanina
Timina
5-Aminouracilul
x
Azaserina
x
x
Benzimidazolul
x
x
Cofeina
x
x
8-Etoxicofeina
x
Etiluretanul
x
x
6-Mercaptopurina
x
x
5-Nitroxinoxalina
x
x
Paraxantina
x
x
Acidul tetrametiluric
x
x
Teobromina
x
x
Teofilina
x
x
O categorie distinct de ageni chimici mutageni este aceea a
substanelor care acioneaz asupra fusului de diviziune. Inhibarea
formrii fusului celular are ca efect oprirea diviziunii celulei, fr a fi ns
afectai cromozomii, care i continu diviziunea n mod normal. Din
aceast categorie de substane, cea mai cunoscut este colchicina, a crei
eficacitate n aciune este nsoit de o toxicitate redus. Alte substane din
aceast categorie sunt: vincristina, vinblastina, orizalina, acidul benzoic,
trifluralinul, pendimethalinul, fosforotiamidatul, propiconazolul.
O alt categorie de substane chimice cu efect mutagen este aceea
care include derivaii halogenai ai benzenului i toluenului, aminopurinele, cafeina, teofilina i teobromina, care inhib citochineza la
196

GENETIC

plante, avnd ca efect inhibarea diviziunii celulare fr a afecta diviziunea


cromozomului sau respectiv a nucleului.
Precursori ai ADN i analogi ai bazelor azotate
Din aceast grup fac parte un numr relativ mare de substane chimice cu
efect de rupere a cromozomilor i care induc mutaii, cum sunt: adenina,
dezoxiadenozina, 5-fluordezoxiuridina, 5-bromdezoxiuridina, 5-clordezoxiuridina, 5-iododezoxiuridina, citozina arabinozid, oxipurinele
N-metilate (cafeina, 8-etoxicafeina, teobromina, teofilina, acidul 1,3,7,9tetrametiluric), 5-bromuracilul, 5-cloruracilul, 5-ioduracilul, 5-floruracilul, 2-aminopurina, 2-6-diaminopurina, etc.
Ageni alkilani
Din grupul agenilor alkilani (avnd una, dou, sau mai multe grupe alkil
funcionale) fac parte numeroase substane chimice mutagene, printre care
iperita, dietilsulfatul, epoxizii, -propiolactona, azaserina, etc.
Modul de aciune al agenilor alkilani. In general, dei exist
mai multe ipoteze privind procesele care duc la apariia aberaiilor
cromozomiale, se consider c acestea sunt cel mai probabil rezultatul
sensibilitii foarte mari la alkilare a ADN. Agenii alkilani acioneaz
numai n perioada S a ciclului mitotic, deoarece n celelalte perioade ADN
cromozomial este protejat de alte substane.
Sub aciunea agenilor alkilani, ADN este denaturat, devenind
monocatenar. Fenomenul de alkilare a ADN continu apoi prin separarea
bazelor purinice alkilate de lanul format de zaharuri i radicali fosforici.
Ca urmare are loc ruperea lanului polinucleotidic al ADN. Printre
reaciile chimice mai importante ale agenilor alkilani la nivelul acizilor
nucleici pot fi citate:
1. Alkilarea grupelor fosfat din macromolecula ADN i ARN,
fenomen care mpiedic replicaia normal a acizilor nucleici sau duce la
apariia de erori de mperechere a bazelor azotate n macromoleculele
nou sintetizate.
Alkilarea grupelor fosfat duce la formarea triesterfosfatului, care
este instabil i se poate deci hidroliza, cu punerea n libertate a grupelor
alkil, care pot reaciona mai departe cu acizii nucleici. In acest caz, poate
avea loc ruperea legturilor ntre grupele fosfat i zaharuri din lanul
197

AUREL POPESCU

polinucleotidic, fapt care determin fragmentarea macromoleculelor de


ADN.
2. Alkilarea unor baze azotate din macromolecula de ADN sau
ARN, care duce la apariia unor analogi ai acestora, cum sunt: 7metilguanina, 1-metiladenina, 3-metiladenina, 1,3-dimetiladenina, 7etilguanina, etc., are consecine importante nu numai din punct de vedere
chimic, ci i genetic, determinnd modificri ale informaiei genetice
datorit unor erori n mperecherea bazelor azotate i replicarea acizilor
nucleici.
3. Depurinizarea macromoleculelor de ADN i ARN, care se
realizeaz prin alkilarea bazelor purinice i ruperea legturilor dintre
bazele purinice alkilate i zaharurile alturate, avnd ca rezultat
eliminarea unor baze purinice din macromolecula acizilor nucleici i
apariia de mutaii.
Uneori, procesul de depurinizare a acizilor nucleici, mai ales n
cazul unui pH acid (< 4), este nsoit de fenomenul ruperii unor legturi
din lanul polinucleotidic i de fragmentarea macromoleculei. In alte
cazuri, prin alkilarea mai ales a guaninei, se formeaz derivai care se
leag transvers n macromoleculele acizilor nucleici i mpiedic
replicaia macromoleculelor.
Antibiotice cu efect mutagen
Este un fapt bine cunoscut c mitomicina C, un antibiotic produs de
ciuperca Streptomyces caespitotus, induce aberaii cromozomiale cu o
frecvena apreciabil, att la plante, ct i la animale. Acest antibiotic are
un puternic efect inhibitor asupra sintezei de ADN, fr a influena
marcant sinteza ARN i a proteinelor. De asemenea, mitomicina C induce
degradarea ADN i acioneaz ca un agent alkilant, afectnd preferenial
regiunea constriciilor secundare.
Ali factori mutageni chimici
In aceast categorie de factori mutageni este inclus o multitudine de
substane chimice al cror mecanism de aciune asupra acizilor nucleici
este foarte variat i n mare msur necunoscut. Printre aceste substane se
numr acidul nitros, hidroxilamina, hidrazina, clorura de mangan,
198

GENETIC

peroxidul de hidrogen, unele metale grele, unii alcaloizi, unii colorani


(ex. acridin orange), etc.
Acidul nitros (HNO2) este unul dintre agenii mutageni al crui
efect este cunoscut de foarte mult timp (pus n eviden la virusuri,
bacterii, ciuperci, etc.), dar al crui mod de aciune la nivelul acizilor
nucleici a fost descoperit abia n urm cu 3 decenii. Acidul nitros este
capabil s induc modificri att n macromolecula de ADN, ct i n cea
de ARN, mecanismul su molecular de aciune constnd n dezaminarea
unor baze azotate, ceea ce determin transformarea adeninei n
hipoxantin, a citozinei n uracil i a guaninei n xantin.
Mecanismul Molecular al Mutaiilor
In anul 1953, J.D. Watson i F.C.H. Crick (descoperitorii structurii
macromoleculei de ADN) au emis ipoteza c mutaia este consecina unei
erori n secvena nucleotidelor acizilor nucleici (Fig. 10.2-10.3). In esen,
ipoteza Watson-Crick consider c apariia mutaiilor poate fi cauzat de:
a) modificarea structurii macromoleculei de ADN;
b) deleia sau adiia uneia sau mai multor nucleotide n
macromolecula de ADN;
c) substituia uneia sau mai multor nucleotide n macromolecula
de ADN;
d) inversia unei secvene de nucleotide din macromolecula de
ADN.
Secvena original de nucleotide n ADN

Aminoacid
Deleia unei singure nucleotide

Secven incorect de aminoacizi, avnd ca rezultat


producerea unei proteine alterate funcional

Fig. 10.2. Mutaia genic prin deleia unei nucleotide.


199

AUREL POPESCU
Secvena original de nucleotide n ADN

Aminoacid

Inseria unei singure nucleotide

Secven incorect de aminoacizi, avnd ca rezultat


producerea unei proteine alterate funcional

Fig. 10.3. Mutaia genic prin adiia (inseria) unei nucleotide.


Mult mai recent, s-a descoperit c n unele genele structurale se
pot produce expansiuni ale unor repetiii dinucleotidice (de exemplu, AC)
sau trinucleotidice (de exemplu CAG, CCG, CGG), genernd mutaii
care au ca rezultat adugarea n secvena de aminoacizi a proteinei a unor
iruri ale aceluiai aminoacid. In exemplul prezentat n Fig. 10.4,
repetarea secvenei trinucleotidice CAG adaug n serie aminoacidul
glutamin.
Secvena original de nucleotide n ADN

Repetiie trinucleotidic
(CAG)

Aminoacid

Repetiia trinucleotidic adaug n secvena


de aminoacizi o serie de glutamin (Gln)

Fig. 10.4. Mutaia genic prin expansiunea repetiiilor de nucleotide


(Genetics Home Reference).
200

GENETIC

Sub influena diverilor factori mutageni se produc erori n


procesul de replicaie a acizilor nucleici, care duc la apariia de mutaii.
Inlocuirea unei baze purinice n macromolecula de ADN sau ARN cu o
alt baz purinic (A G), sau a unei baze pirimidinice cu o alt baz
pirimidinic (T C) este denumit tranziie (Fig. 10.5), n timp ce
schimbarea unei baze purinice cu o baz pirimidinic sau invers (A T;
A C; G T; G C) este denumit transversie (Fig. 10.5).

purine
Tranziii
guanina

adenina

Transversii

Transversii

Tranziii
pirimidine
citozina

timina

Fig. 10.5. Tranziii i transversii posibile n secvena de nucleotide


a unei gene.
O cauz a unor astfel de erori o constituie existena unor baze
azotate sub form tautomeric rar (Fig. 10.6), aprute prin schimbarea
poziiei unui atom de hidrogen. In mod normal, adenina se mperecheaz
n lanul polinucleotidic cu timina, ns forma tautomeric a adeninei se
poate mperechea cu citozina, adic A-T devine A-C. innd seama c
citozina are afinitate chimic pentru guanin, la replicaia urmtoare a
macromoleculei de ADN, legtura A-C se transform n G-C. Aceasta
nseamn n fapt c perechea de baze azotate A-T este nlocuit de
perechea de baze G-C, fiind astfel modificat informaia genetic.
201

AUREL POPESCU

Cercetrile privind mecanismul molecular al procesului de


mutagenez au artat aadar c factorii mutageni acioneaz, de obicei, la
nivelul acizilor nucleici, determinnd consecine genetice importante.
Modul de aciune al agenilor mutageni este foarte variat, acetia
provocnd diferite modificri, cum sunt nlocuirea unor nucleotide, adiia
sau deleia de nucleotide, rupturi sau chiar depolimerizri ale
macromoleculei de ADN, etc. O parte dintre aceste modificri se
stabilizeaz n procesul replicaiei acizilor nucleic. Ca urmare, apar
modificri ale informaiei genetice i respectiv ale procesului de
biosintez a proteinelor.
Erorile de includere a unor nucleotide n macromolecula de ADN
i erorile de replicaie a ADN constituie, la nivel molecular, mecanismele
de baz implicate n modificarea informaiei genetice i respectiv apariia
procesului mutaional.
A

Timin (ceto)

Adenin (amino)

Citozin (amino)

Guanin (ceto)

Timin (enol)

Guanin (ceto)

Citozin (imino)

Adenin (imino)

Fig. 10.6. Imperecherea normal a bazelor azotate: timina cu adenina,


respectiv citozina cu guanina (A); mperecherea anormal a formelor
tautomerice ale bazelor azotate: timina cu guanina, respectiv citozina cu
adenina (B).
202

GENETIC

Secvena original de nucleotide n ADN

Aminoacid

Inlocuirea unei singure nucleotide

Secvena incorect cauzeaz sinteza


unei catene polipeptidice mai scurte

Polipeptid

Fig. 10.7. Mutaia nonsens (dup Genetics Home Reference).


Secvena original de nucleotide n ADN

Aminoacid

Inlocuirea unei singure nucleotide

Aminoacid incorect ce cauzeaz


sinteza unei proteine modificate

Fig. 10.8. Mutaia cu sens greit (dup Genetics Home Reference).


Dintre cei 64 de codoni, trei (UAA, UAG, UGA) servesc pentru
marcarea terminrii secvenei de aminoacizi a unei catene polipeptidice.
O mutaie a acestor 3 codoni nu are efecte asupra secvenei de aminoacizi
i ca urmare o astfel de mutaie a fost denumit mutaie nonsens. Dac
ns are loc o mutaie care determin transformarea ntr-un codon terminal
a unuia dintre ceilali 61 de codoni, aceasta poate avea ca efect ncheierea
prematur a secvenei de aminoacizi i deci formarea unei catene
polipeptidice mai scurte (Fig. 10.7).
203

AUREL POPESCU

Mutaiile care afecteaz unul dintre cei 61 de codoni i determin


de obicei nlocuirea unui aminoacid cu altul, se numesc mutaii cu sens
greit (Fig. 10.8). Datorit fenomenului colinearitii, mutaia unui codon
dintr-o anumit poziie din secvena de nucleotide are ca rezultat
nlocuirea unui aminoacid cu altul n poziia corespunztoare din catena
polipeptidic.
Pornind de la ipoteza teoretic potrivit creia cei 64 codoni au o
frecven egal n genom, iar probabilitatea nlocuirii unei nucleotide este
egal pentru toate nucleotidele ADN, M. Nei (1975) a calculat procentul
nlocuirii nucleotidelor n ADN care pot fi detectate prin nlocuirea unui
aminoacid cu altul n catena polipeptidic. Numrul total de modificri
ale celor 64 codoni este de 64 x 3 x 3 = 576, din care 27 (3 x 3 x 3)
afecteaz cei trei codoni nonsens. Din totalul de 549 (576-27) mutaii
posibile ale celor 61 codoni, doar 415 (cca 76%) determin modificri n
secvena aminoacizilor. Mutaiile care afecteaz codonii, dar care nu duc
la nlocuirea unui aminoacid cu altul, se mai numesc mutaii sinonime
sau mutaii neutre.
Mecanismul de rupere a cromozomilor sub aciunea factorilor
mutageni. O ipotez interesant privind fenomenul de rupere a
cromozomilor este aceea elaborat de G. Ahnstrom i A. Natarajan
(1966), care consider c inhibarea sintezei ADN este numai parial
rspunztoare de ruperea cromozomilor, n schimb n acest proces un rol
mai important revine enzimei ADN-polimeraza. Dup cum se tie, pentru
sinteza macromoleculei de ADN sunt necesare mononucleotide bogate n
energie, adic nucleozide trifosfat. Aceasta nseamn c n prezena
precursorilor ADN, a ADN-polimerazei i a unei cantiti de ADN
matrice, sunt sintetizate noi molecule de ADN. Pentru ca reacia s se
desfoare rapid este necesar ca pirofosfatul s fie transformat n
ortofosfat de ctre o enzim (pirofosfataz) i n acest fel s fie continuu
eliminat. Reacia este reversat cnd concentraia uneia sau mai multor
nucleozide trifosfat este sub nivelul de echilibru i n prezena ADNpolimerazei. Aadar, conform acestei ipoteze, ruperea cromozomilor se
datoreaz inversrii reaciei catalizate de ADN-polimeraz.
Dei cercetrile dureaz de mai multe decenii, mecanismul
molecular al aberaiilor cromozomiale nu este nc neles n ntregime.
In principal, exist dou teorii clasice i una mai recent care ncearc s
explice cum sunt generate aberaiile cromozomiale: (1) teoria ruperii i
reunirii (Sax, 1941; Lea, 1946); (2) teoria schimbului (Revell, 1963);
teoria molecular (Chadwick i Leenhouts, 1981, 1998). Teoriile teoria
204

GENETIC

ruperii i reunirii i respectiv schimbului sunt nespecifice n ceea ce


privete inta molecular n care se formeaz o ruptur primar i au
fost elaborate n special pe baza interpretrii relaiilor doz-efect pentru
diferitele tipuri de radiaii ionizante (Fig. 10.9).

Fig. 10.9. Ruperea cromatidelor i cromozomilor ca efect al iradierii


gamma (dup Bogomazova i colab., 2011).
Teoria ruperii i reunirii propune ruperi n axul cromozomului care
pot: (i) fi reunite la structura de origine (restituie); (ii) conduce la aberaii
de tipul schimbului prin reunirea diferitelor rupturi; (iii) aprea ca ruperi
cromozomiale, dac nu se reunesc.
Teoria schimbului pleac de la asumarea formrii de leziuni
instabile. Dac dou astfel de leziuni vin n contact, ele pot iniia un
mecanism de schimb ce poate duce la: (i) aberaii de tip schimb, cnd sunt
complete; (ii) rupturi deschise, cnd sunt incomplete.
Teoria molecular sugereaz c aberaiile de tip schimb pot rezulta
dintr-o singur ruptur dublu-catenar a ADN (double-strand break =
DSB). Totui, se consider c schimburile complexe sunt dificil de
explicat prin micarea la ntmplare a capetelor rupte i eventual lor
reunire reciproc. Totodat, se admite posibilitatea ca teoria clasic a
schimbului s fie greit, i ca schimburile s apar ca rezultat al
interaciunii unei singure rupturi dublu-catenare cu cromatina proximal
neafectat, printr-un process de recombinare reciproc.
205

AUREL POPESCU

11.

GENETICA POPULAIILOR

Genetica populaiilor a aprut ca ramur a geneticii cu peste 9 decenii n


urm, fondatorii si fiind considerai Ronald Fisher, Sewall Wright i
John B.S. Haldane. Unul dintre obiectivele importante ale geneticii
populaiilor este studiul constituiei ereditare a organismelor i respectiv
al caracterelor manifestate de indivizii unei populaii ca efect al
interaciunii dintre genotip i mediu, fcnd distincie ntre variaiile
ereditare, care afecteaz genotipul, i variaiile epigenetice, care afecteaz
exclusiv fenotipul i nu sunt ereditare. Este important cunoaterea att a
nivelului variaiei genetice n populaii, ct i a schimbrilor care se pot
produce dup multe generaii.
Variaia genetic existent n cadrul populaiilor sau polimorfismul
genetic al populaiilor, consecin a recombinrii genetice i mutaiilor
(genice, cromozomiale i genomice), a fluxului de gene intra- i
interpopulaional, a derivei genetice i a eroziunii genetice, constituie
baza adaptrii la condiiile de mediu i totodat condiia esenial pentru
meninerea populaiei i/sau supravieuirea speciei.
Genele n populaii
In genetic, populaia reprezint un grup de indivizi ai aceleiai specii,
care se pot ncrucia liber, unul cu altul. Multe specii ocup areale
geografice largi i sunt divizate n populaii a cror mrime poate varia.
Populaii ale unei specii pot exista pe continente diferite, sau pe un singur
continent, dar n regiuni diferite, sau n zone diferite ale aceleiai regiuni.
O populaie mare este format n mod obinuit din grupuri mai mici de
indivizi, denumite subpopulaii, populaii locale sau deme. Subpopulaiile
sunt adesea separate unele de altele prin bariere geografice (de exemplu,
un fluviu, ru, munte, etc). De aceea, membrii unei subpopulaii au o
probabilitate mult mai mare de a se ncrucia ntre ei, dect cu ali
membrii ai unei subpopulaii nvecinate sau ai populaiei generale.
Populaiile sunt n mod tipic uniti dinamice, care se modific de
la o generaie la alta. O populaie i poate modifica mrimea, localizarea
geografic i constituia genetic. Mrimea populaiei este dependent de
condiiile climatice, nivelul surselor de hran, raportul sexelor, prdtorii
naturali, boli, duntori, etc. Intreaga populaie, sau numai o parte dintre
indivizii unei populaii, pot migra ntr-un areal nou, n care condiiile de
mediu pot fi diferite de cele din arealul de origine. In msura n care
206

GENETIC

mrimea i localizarea populaiei se modific, se poate modifica i


compoziia genetic a acesteia.
Toate alelele fiecarei gene existente ntr-o populaie formeaz
fondul de gene al populaiei (gene pool). Fiecare individ dintr-o populaie
a primit genele sale de la prini i, dac este capabil de reproducere, le va
transmite descendenilor lui, contribuind la fondul de gene al generaiei
urmtoare.
Gene monomorfice i gene polimorfice
In genetica populaiilor, termenul de polimorfism (cu semnificaia multe
forme) se refer la observaia c multe caractere manifest variaie n
cadrul unei populaii. Iniial, polimorfismul se referea la variaia
caracterelor ce puteau fi observate cu ochiul liber, cum sunt culoarea sau
modelul de culori. De aceea, crile mai vechi de genetica populaiilor
conin, aproape n totalitate, exemplul speciei Biston betularia (o molie
nocturn, rspndit n cea mai mare parte a emisferei boreale), ai crei
indivizi au culori diferite, ca adaptare la condiii diferite de mediu (Fig.
11.1). La aceast specie, variaia culorii, dependent de cantitatea de
melanin sintetizat la indivizii diferitelor forme, este un caracter de
maxim importan pentru supravieuire, avnd rol n camuflaj. Variaia
culorii este consecina prezenei la aceste forme a unor alele diferite ale
genei ce codific sinteza pigmentului melanin.
Iniial, marea majoritate a moliilor grizonate (B. betularia) aveau
culoare deschis, ceea ce le asigura camuflajul pe scoara de culoare
deschis a arborilor i lichenilor pe care se aezau. Poluarea industrial a
cauzat n multe regiuni ale Europei dispariia lichenilor i nnegrirea
scoarei arborilor, ceea ce a dus la dispariia masiv a indivizilor de
culoare deschis (forma typica) ca urmare a detectrii lor uoare (prin
contrast) de ctre prdtori (psri). In aceste condiii, indivizii formei de
culoare nchis (moliile melanice, sau forma carbonaria) au proliferat ca
rezultat al camuflrii lor pe scoara de culoare nchis a arborilor.
Modificarea dramatic produs n populaiile de molie grizonat
n ceea ce privete culoarea indivizilor este consecina unei modificri
genetice, i datorit circumstanelor uor de neles ale adaptrii la condiii
schimbate de mediu a devenit un exemplu comun folosit pentru explicarea
sau demonstrarea seleciei naturale.
Un alt exemplu folosit frecvent pentru ilustrarea polimorfismului
este acela al variaiei culorii cochiliilor de melci (Brooker, 2005).
207

AUREL POPESCU

Fig. 11.1. Indivizi de Biston betularia: forma typica (stnga), cu corpul de


culoare albicioas (modelul scoarei de mesteacn), i forma carbonaria
(dreapta), cu corpul de culoare neagr (melanism industrial).
La nivel molecular (nivelul ADN), polimorfismul se datoreaz
existenei a dou sau mai multe alele care influeneaz fenotipul
individului care le motenete. Cu alte cuvinte, polimorfismul se
datoreaz variaiei genetice. Termenul polimorfic este folosit de asemenea
pentru a descrie o gen ce exist n mod obinuit ca dou sau mai multe
alele ntr-o populaie. Spre deosebire de o gen polimorfic, o gen
monomorfic exist n mod predominant ca o alel unic ntr-o populaie.
Prin convenie, atunci cnd n cel putin 99% din cazuri se gsete o
singur alel, gena este considerat monomorfic. Altfel spus, gena
polimorfic trebuie s aib una sau mai multe alele ce formeaz cel puin
1% din alelele unei populaii.

Fig. 11.2. Efectul fenotipic al polimorfismului genei pentru culoarea


blnii la specia Peromyscus polionotus.
208

GENETIC

In majoritatea populaiilor naturale, un procent substanial de gene


sunt polimorfice (Fig. 11.2). Totui, n populaiile mici, aflate aproape de
dispariie (sau extincie), este de ateptat ca variaia genetic s fie
sczut, deoarece fondul de gene este derivat de la un numr mic de
indivizi. Un exemplu extrem este acela al populaiilor de zimbru
european, la care variaia genetic este foarte redus, sau chiar aproape
de zero. Pentru comparaie, circa 30% din genele umane (ceea ce
nseamn circa 9.000 de gene) sunt polimorfice.
Frecvena alelelor
Frecvena alelelor este o msur a frecvenei relative a unei alele la un
locus ntr-o populaie. In mod obinuit este exprimat ca o proporie sau
ca un procentaj. In genetica populaiilor, frecvenele alelelor arat
diversitatea genetic a populaiei unei specii sau, echivalent, bogia
ansamblului de gene. Frecvena alelelor este definit dup cum urmeaz:
Date fiind urmtoarele:
1. un locus particular pe cromozom i o gen ocupnd acel locus
2. o populaie de indivizi purttori ai n loci n fiecare dintre
celulele lor somatice (de exemplu doi loci n celulele unei
specii diploide, care conin dou seturi de cromozomi)
3. o variant sau alel a unei gene,
atunci frecvena alelelor este fracia sau procentajul de loci pe care le
ocup alelele n cadrul populaiei.
Cnd alelele unei gene nu difer n ceea ce privete adecvarea,
numrul de purttori dintr-o generaie este n medie proporional cu
numrul de purttori din generaia anterioar. Dar media nu este niciodat
concordant, deoarece fiecare generaie reprezint ascendena pentru
urmtoarea o singur dat. De aceea, frecvena unei alele difer adesea la
descenden de frecvena sa la generaia parental. In generaia
descendenilor, alela ar putea prin urmare s aib o frecven p, uor
diferit de p. In aceast situaie, se spune c frecvenele alelelor au suferit
o deriv (drift). Trebuie menionat faptul c n generaiile urmtoare
frecvena alelei nu va fi determinat de noua frecven p, ceea ce
nseamn c driftul este un proces fr memorie. Tria efectului de deriv
genetic este guvernat de mrimea populaiei efective. Cnd mrimea
populaiei efective este mic, driftul genetic va fi mai puternic. Alele n
209

AUREL POPESCU

deriv au de obicei o durat de via finit. Deriva se ncheie atunci cnd


alelele fie ating o frecven zero i dispar din populaie, fie ating frecvena
de 100% i devin alele unice n populaie. Ulterior unui astfel de
eveniment, frecvena alelelor se poate schimba doar prin introducerea sau
apariia unei noi alele, rezultat dintr-o nou mutaie.
Durata de via a unei alele este guvernat de mrimea efectiv a
populaiei. Intr-o populaie foarte mic, vor fi necesare doar cteva
generaii pn la stabilizarea derivei genetice. Intr-o populaie mare,
stabilizarea va avea loc dup mult mai multe generaii. In medie, o alel
va fi fixat n 4Ne generaii, unde Ne este mrimea efectiv a populaiei.
Conform principiului Hardy-Weinberg, care susine c frecvenele
genelor ntr-o populaie de gene nu se schimb peste timp, o populaie
trebuie s fie suficient de larg pentru a preveni ca deriva genetic s
schimbe frecvenele alelelor n timp. Aa se explic de ce legea este
instabil ntr-o populaie mic.
Driftul genetic i selecia natural acioneaz rar separat, ambele
fore fiind active ntr-o populaie. Totui, gradul n care alelele sunt
afectate de deriva genetic i selecie variaz dependent de mprejurare.
Intr-o populaie mare, n care deriva genetic apare foarte ncet, chiar i o
selecie slab asupra unei alele va mpinge frecvena sa n sus sau n jos
(dependent de faptul dac alela este favorabil sau duntoare). Totui,
dac populaia este foarte mic, deriva genetic va predomina. In acest
caz, efectele selective mici pot s nu fie vizibile n nici o msur, ntruct
micile schimbri ale frecvenei care s-ar produce ar fi mascate de deriva
genetic.
Calcularea frecvenei alelelor pe baza frecvenei genotipurilor
Dac f(AA), f(Aa), i f(aa) sunt frecvenele celor trei genotipuri la un
locus cu dou alele, atunci frecvena p a alelei A i frecvena q a alelei a
poate fi obinut prin numrarea alelelor. Deoarece fiecare homozigot AA
const numai din alele A, i deoarece jumtate dintre alelele fiecrui
heterozigot Aa sunt alele A, frecvena total p a alelelor A n populaie se
calculeaz ca:
frecvena lui A
In mod similar, frecvena q a alelei a este dat de:
210

GENETIC

frecvena lui a
Ar fi de ateptat ca suma lui p i q s fie 1, ntruct ele sunt frecvenele
singurelor dou alele prezente. Intr-adevr, suma lor este 1:

i din aceasta obinem:


q = 1 p i p = 1 q
Dac exist mai mult de dou forme alelice diferite, frecvena
fiecrei alele este simplu frecvena homozigoilor plus jumtate din suma
frecvenelor tuturor heterozigoilor n care apar.
Este interesant de remarcat c frecvena alelei poate fi ntotdeauna
calculat pornind de la frecvena genotipului. Reciproca, totui, cere
ntrunirea condiiei mperecherii (polenizrii, n cazul plantelor) la
ntmplare (randomizate), luat n calcul de legea Hardy-Weinberg.
Aceasta se datoreaz n parte frecvenelor celor trei genotipuri i
frecvenelor celor dou alele.
Exemplul urmtor este foarte relevant. Considerai o populaie de
zece indivizi i un locus dat, cu dou alele posibile, A i a. Presupunei c
genotipurile indivizilor sunt urmtoarele:
AA, Aa, AA, aa, Aa, AA, AA, Aa, Aa, i AA
Atunci, frecvenele alelei A i respectiv alelei a sunt:

Modificarea frecvenei alelelor datorit derivei genetice


Deriva genetic (driftul genetic) este termenul folosit n genetica
populaiilor pentru a face referire la deriva statistic n timp a frecvenei
alelelor ntr-o populaie finit datorit efectelor de selecie ntmpltoare
211

AUREL POPESCU

n formarea generaiilor succesive. Intr-un sens mai ngust, deriva


genetic se refer la dinamica ateptat a alelelor neutre n populaie
(acelea care nu au nici efect pozitiv, nici efect negativ asupra adecvrii)
care pot ajunge la o frecven de 100% n absena mecanismelor ce
afecteaz distribuia lor. In timp ce selecia natural descrie tendina
alelelor benefice de a deveni mai comune cu trecerea timpului (i a celor
detrimentale de a deveni mai puin comune), deriva genetic se refer la
tendina fundamental a oricrei alele de a varia ntmpltor ca frecven
n timp (random genetic drift). Deriva genetic poate fi modelat ca un
proces stochastic care ia natere ca urmare a seleciei ntmpltoare n
producerea descendenilor. Genele fiecrei noi generaii nu sunt simple
copii ale genelor indivizilor din generaia anterioar care au avut succes n
reproducere, ci mai degrab o selecie, care include unele erori statistice.
Deriva este efectul cumulativ n timp al acestei erori de selecie asupra
frecvenei alelelor n populaie.
Prin definiie, deriva genetic nu are o direcie preferat. O alel
neutr poate s creasc sau s scad ca frecven n orice generaie dat cu
aceeai probabilitate (probabilitate egal). Totui, dac timpul este
suficient de lung, alela (aa cum prezice analiza matematic a derivei
genetice) fie va disprea, fie va deveni 100% prezent n populaie, dup
care nu mai exist variaie a frecvenei genei respective. Din acest punct
de vedere, deriva genetic tinde s elimine n timp din populaie
variantele genei, astfel nct toi indivizii speciei vor deveni eventual
homozigoi pentru aceast gen. Deriva genetic este aadar opus
fenomenului mutaional, prin care, n populaie, sunt introduse noi
variante (mutaii ntmpltoare). Ca i selecia, deriva genetic acioneaz
asupra populaiilor, alternd frecvena alelelor i predominana
caracterelor. Deriva este observat cel mai puternic n populaiile mici i
determin modificri care nu trebuie s fie n mod necesar adaptative.
In natur exist cteva moduri interesante n care mrimea
(mic a) populaiei i deriva genetic afecteaz compoziia genetic a unei
specii. De exemplu, unele specii ocup areale largi n care populaiile
mici devin izolate din punct de vedere geografic de restul populaiilor
speciei. In astfel de populaii mici, frecvena alelelor este mai predispus
la deriva genetic. Deoarece acest proces este unul ntmpltor,
populaiile mici izolate tind s fie mult mai diferite de celelalte populaii.
Un tip particular de deriv genetic este cel cauzat de efectul
gtului de sticl (bottleneck effect), denumit i de trangulare a
populaiei sau gtuire genetic. In natur, o populaie poate fi redus
drastic din punct de vedere numeric de evenimente cum ar fi seceta,
212

GENETIC

incendiile, inundaiile, distrugerea habitatului prin intervenia antropic,


etc. Astfel de evenimente pot elimina randomizat (la ntmplare)
majoritatea membrilor populaiei indiferent de constituia genetic
(Fig. 11.3). Perioada de trangulare a populaiei, cnd mrimea
populaiei este foarte mic, poate fi influenat de deriva genetic.
Indivizii supravieuitori pot avea frecvene ale alelelor care difer de cele
ale populaiei originale. In plus, este de ateptat ca frecvenele alelelor s
devieze n mod substanial n cursul generaiilor din intervalul de timp n
care populaia are mrime redus. In cazuri extreme, alelele pot fi chiar
eliminate.

Populaia originala
Alela

Nr.

Frecvena

Eveniment intamplator
Alela

Nr.

Frecvena

Noua populaie
originala
Alela

Nr.

Frecvena

Fig. 11.3. Efectul de trangulare a populaiei


Chiar dac populaia trangulat revine n timp la mrimea
iniial, noua populaie va avea un fond genetic mai restrns comparativ
cu populaia de origine (deci variaia genetic va fi limitat). Exemplele
de specii, respectiv populaii, care i-au pierdut o mare parte, sau aproape
toat variaia genetic, sunt numeroase (de exemplu, zimbrul n Europa,
tigrul siberian n Asia, sau ghepardul n Africa).
Un caz interesant de deriv genetic este efectul de fondator
(founder effect). Acesta se refer la fenomenul (cazul) n care un grup mic
de indivizi se separ de populaia mare (Fig. 11.4) i nfiineaz o colonie
ntr-o locaie nou.
213

AUREL POPESCU

20 indivizi verzi
10 indivizi bruni

1 individ verde
3 indivizi bruni

Fig. 11.4. Deriva genetic poate fi rezultatul efectului de fondator.


Efectul de fondator are dou consecine importante: 1) este de
ateptat ca populaia fondat s aib o variaie genetic mai restrns
dect populaia de origine (din care a derivat); 2) probabilistic, n
populaia fondat, frecvenele alelelor pot s difere considerabil de cele
din populaia de origine.
Modificarea frecvenei alelelor datorit migraiei
Migraia ntre dou populaii poate modifica frecvena alelelor.
De exemplu, o specie de psri sau insecte poate ocupa dou areale
(regiuni) geografice separate printr-un curs mare de ap (fluviu, ru).
Vnturile (sau curenii puternici de aer) dau posibilitatea indivizilor dintro populaie s zboare dincolo de cursul de ap i s devin membrii ai
altei populaii. Dac cele dou populaii au frecvene diferite ale alelelor,
i dac migraia implic un numr semnificativ de indivizi, aceasta poate
cauza modificarea frecvenei alelelor n populaiile respective (Fig. 11.5).

Fig. 11.5. Migraia indivizilor dintr-o populaie n alta - una dintre cile pe
care se poate modifica frecvena alelelor.
214

GENETIC

Dup producerea migraiei, populaia n care s-a produs aceasta


este denumit conglomerat (Brooker, 2005). Pentru calcularea frecvenei
alelelor n conglomerat, sunt necesare dou informaii. In primul rnd,
trebuie s se cunoasc frecvenele iniiale ale alelelor n populaiile donor
i respectiv recipient. In al doilea rnd, trebuie s se cunoasc proporia
imigranilor n populaia conglomerat. Folosind aceste date, se poate
calcula modificarea frecvenei alelelor n populaia conglomerat, cu
ajutorul ecuaiei:
pC = m(pD - pR)
unde
pC este modificarea frecvenei alelelor n populaia conglomerat
pD este frecvena alelelor n populaia donor
pR este frecvena alelelor n populaia receptor
m este proporia imigranilor n populaia conglomerat
Numrul de indivizi din populaia donor n populaia conglomerat

m=
Numrul total de indivizi n populaia conglomerat

Ca exemplu, s presupunem c frecvena alelei A este 0.7 n


populaia donor i 0.3 n populaia receptor (primitoare). Un grup de 20
indivizi a migrat n populaia receptor, care avea iniial 80 de indivizi.
Astfel,
20
m=
= 0.2
20 + 80
pC = m(pD - pR) = 0.2(0.7-0.3) = 0.08
Acum putem calcula frecvena alelei n conglomerat:
pC = pR + pC = 0.3 + 0.08 = 0.38
Prin urmare, n populaia conglomerat, frecvena alelei A s-a
schimbat de la 0.3 (valoarea nainte de migraie) la 0.38. Aceast cretere
a frecvenei alelei s-a produs ca urmare a frecvenei mai mari a alelei A n
populaia donor. Deoarece pe specialitii n genetica populaiilor i
intereseaza mai degrab frecvenele alelelor dect migraia indivizilor,
acest fenomen este denumit flux de gene (gene flow). El apare oricnd
indivizii migreaz ntre populaii avnd frecvene diferite ale alelelor.
215

AUREL POPESCU

In exemplul anterior am luat n consideraie consecinele migraiei


unidirecionale dintr-o populaie donor ntr-o populaie receptor. In natur
este ns obinuit migraia indivizilor n ambele direcii. Migraia
bidirecional are dou consecine importante: 1) Dependent de rata sa,
migraia tinde s reduc diferenele existente ntre frecvenele alelelor n
populaiile nvecinate; 2) Populaiile care i amestec frecvent fondurile
de gene pe calea migraiei tind s aib frecvene similare ale alelelor, n
timp ce populaiile izolate sunt de ateptat s aib frecvene ale alelelor
mult diferite. In plus, migraia poate spori diversitatea genetic n cadrul
unei populaii. Trebuie luat n consideraie i faptul c ntruct mutaiile
noi sunt evenimente rare, o anumit mutaie care apare (numai) ntr-o
populaie, poate fi introdus prin migraie n populaiile nvecinate.
Genetica populaiilor - component esenial a teoriei moderne a
evoluiei
Frecvena alelelor se schimb sub influena celor patru fore implicate n
procesul evoluiei: selecia natural, driftul genetic, mutaia i fluxul de
gene (Fig. 11.6). Genetica populaiilor ia de asemenea n considerare
subdivizarea populaiei (Fig. 11.7) i structura populaiei n spaiu. In
primul rnd se ncearc explicarea unor fenomene cum sunt adaptarea i
speciaia.
Deriva
genetic
Selecia
natural
Evoluie

Izolarea
geografic

Suprareproducerea

Sursele
de hran

Condiiile
de mediu

Variaia
genetic

Competiia
pentru resurse

Mutaia
Speciai
e

Migraia

Fig. 11.6. Populaiile se adapteaz prin mutaii ntmpltoare


(dup Waldovski i Rhorick, 2009).
216

GENETIC

Fig. 11.7. Subdivizarea populaiei poate fi implicat n schimbarea


frecvenei alelelor i implicit n evoluie.
Lewontin i-a imaginat dou spaii: un spaiu genotipic i un
spaiu fenotipic. Misiunea unei teorii complete a geneticii populaiilor este
aceea de a pune la dispoziie un set de legi care ofer posibilitatea
elaborrii unei hri predictibile a genotipurilor unei populaii (G1)
corespunztoare unui spaiu fenotipic (P1), n care are loc selecia, i a
unui alt set de legi ce permite cartarea populaiei care rezult (P 2) n
funcie de spaiul genotipic (G2), n care genetica Mendelian poate
prezice genotipurile urmtoarei generaii, completnd astfel ciclul.
Exprimarea ntr-o formul matematic a acestui ciclu este urmtoarea
(dup Lewontin, 1974):

Relaia descris mai sus este cunoscut sub formularea harta


genotip - fenotip, unde T1 reprezint legile genetice i epigenetice,
aspectele biologiei funcionale sau ale dezvoltrii, care transform un
genotip ntr-un fenotip. T2 este transformarea datorat seleciei naturale,
T3 sunt relaiile epigenetice care prezic genotipurile pe baza fenotipurilor
selectate i, n sfrit, T4 legile geneticii Mendeliene.
Selecia natural
Selecia natural este procesul prin care organismele individuale cu
caractere favorabile au o probabilitate mai ridicat de a supravieui i
reproduce dect cele cu caractere nefavorabile (Fig. 11.8).
217

AUREL POPESCU

Mutaia creaz variaie


Selecia acioneaz mpotriva
mutaiilor nefavorabile
Unele mutaii au valoare reproductiv
Mutaiile favorabile au probabilitate
mai mare de supravieuire
si reproducere

Fig. 11.8. Soarta mutaiilor depinde de valoarea lor adaptativ.


Selecia natural acioneaz asupra individului ca ntreg, dar
numai componenta ereditar va fi trecut la descendeni, rezultatul fiind
acela c caracterele favorabile, ereditare, vor deveni mai comune n
generaia urmtoare. Dup o perioad lung de timp, acest proces pasiv d
natere la adaptri i duce la speciaie.
Un exemplu binecunoscut de selecie natural n aciune este acela
al dezvoltrii rezistenei la antibiotice de ctre microorganisme.
Antibioticele au fost folosite pentru a lupta mpotriva bolilor bacteriene
nc de la descoperirea penicilinei, n anul 1928, de ctre Alexander
Fleming. Totui, folosirea larg i mai ales greit a antibioticelor a
condus la creterea rezistenei bacteriilor fa de antibiotice, pn la
situaia n care Staphylococcus aureus rezistent la meticilin a fost descris
ca un superduntor din cauza pericolului pentru sntate i a relativei
sale invulnerabiliti fa de medicamentele existente.
Populaiile bacteriene naturale conin, printre indivizii al cror
numr este incalculabil, o variaie considerabil la nivelul materialului lor
genetic, n primul rnd datorit mutaiilor. Atunci cnd sunt expuse la
antibiotice, majoritatea bacteriilor mor rapid, dar unele pot s posede
mutaii care le fac mai puin susceptibile. Dac expunerea la antibiotic
este scurt, aceti indivizi vor supravieui tratamentului. Aceast eliminare
a indivizilor neadaptai sau slab adaptai dintr-o populaie este un exemplu
concludent de selecie natural n aciune. Bacteriile care supravieuiesc
se vor reproduce n continuare producnd urmtoarea generaie. Datorit
218

GENETIC

eliminrii indivizilor neadaptai din generaia trecut, aceast populaie


conine mai mult bacterii care au o anumit rezisten fa de antibiotic. In
acelai timp, se produc mutaii noi, adugnd variaie genetic n plus la
cea existent. Mutaiile spontane sunt foarte rare, foarte puine au vreun
efect i de regul orice efect (dac exist) este negativ (nefavorabil).
Totui, populaiile de bacterii sunt enorme i se ntmpl ca un numr mic
de celule bacteriene s dobndeasc mutaii benefice. Dac o mutaie
nou reduce susceptibilitatea unor bacterii la un antibiotic, ele vor avea o
probabilitate mult mai mare de supravieuire cnd vor fi confruntate cu un
antibiotic. Dup o perioad de timp suficient de lung i expuneri repetate
la antibiotic, va apare o populaie de bacterii rezistente la respectivul
antibiotic. Recent au aprut cteva tulpini noi de Staphylococcus aureus
care sunt rezistente la vancomicin i teicoplanin. Ecesta este un
exemplu de ceea ce se numete cursa narmrii, n care bacteria
continu s formeze tulpini care sunt mai puin susceptibile la antibiotic,
n timp ce cercetarea medical continu s dezvolte noi antibiotice care le
pot omor. O situaie similar este aceea a rezistenei pe care o dezvolt
insectele la pesticidele folosite pentru protecia plantelor de cultur.
Selecia natural acioneaz asupra fenotipului. Fenotipul este
rezultatul de ansamblu al constituiei genetice a unui individ (genotip),
mediului, i a interaciunilor dintre gene i dintre gene i mediu. Adesea,
selecia natural acioneaz asupra caracterelor specifice ale unui individ.
Unele caractere sunt determinate de o singur gen, dar majoritatea sunt
determinate i influenate n exprimare de mai multe gene diferite.
Variaia are n cazul majoritii acestor gene efecte slabe asupra
fenotipului.
Elementul cheie n nelegerea seleciei naturale este conceptul de
adecvare la condiiile de via (mediu). Selecia natural acioneaz
asupra indivizilor, dar efectul su mediu asupra tuturor indivizilor cu un
genotip particular este adecvarea acelui genotip. Adecvarea este msurat
ca proporia descendenei care supravieuiete, multiplicat cu media
fecunditii, i este echivalentul pentru succesul reproductiv al
genotipului. O valoare a adecvrii mai nalt de 1 indic c frecvena
acelui genotip crete n populaie, n timp ce o valoare mai mic de 1
indic c aceasta scade. Adecvarea relativ a genotipului este estimat ca
proporia adecvrii unui genotip de referin. Coeficientul de selecie este
o msur a adecvrii relative, reprezentnd diferena dintre adecvarea
relativ a dou genotipuri. Cu ct coeficientul de selecie este mai mare,
cu att selecia natural va aciona mai puternic mpotriva genotipului cu
cea mai sczut adecvare.
219

AUREL POPESCU

Selecia natural se produce n fiecare stadiu de via al unui


individ i ea poate afecta n oricare dintre aceste stadii posibilitatea ca un
individ s supravieuiasc i s se reproduc. Dup natere, un individ
trebuie s supravieuiasc pn la vrsta adult nainte de a se putea
reproduce, i selecia celor care ating acest stadiu este denumit selecia
pentru viabilitate. La multe specii, adulii trebuie s concureze unii cu
alii pentru mperechere (selecia sexual), i succesul n aceast
competiie asigur participarea la formarea urmtoarei generaii. Cnd
speciile se reproduc mai mult de o dat, o supravieuire mai lung n etapa
de reproducere are ca rezultat creterea numrului de descendeni
(selecia pentru supravieuire). Fecunditatea femelelor (de exemplu, cte
ou depune o pasre) i a masculilor (de exemplu, sperma gigantic la
anumite specii de Drosophila) poate fi limitat (selecia pentru
fecunditate). Viabilitatea gameilor produi poate s difere, n timp ce
conflictul intragenomic dintre gameii haploizi poate avea ca rezultat
selecia gametic sau selecia genic. In sfrit, unele combinaii ale
gameilor pot fi mai compatibile dect altele (selecia dup
compatibilitate).
Selecia are ca inte caractere specifice ale individului, i dac un
astfel caracter are o component ereditar se constat tendina ca el s
devin mai comun n urmtoarea generaie. Formele sub care se poate
manifesta selecia pentru caracterele specifice pot fi considerate ca
selecia pentru i selecia de. Selecia pentru se refer la caracterele
int ale seleciei, respectiv la cauzele seleciei, pe cnd selecia de se
refer la efectele sale. Selecia pentru un caracter specific determin prin
urmare selecia anumitor indivizi. Selecia pentru un caracter specific
poate s aib de asemenea ca rezultat selecia indirect a altor caractere.
Aceasta se poate ntmpla cnd dou sau mai multe caractere sunt legate
genetic prin mecanisme cum sunt pleiotropia (o singur gen afecteaz
caractere multiple) i dezechilibrul de linkage (asocierea nerandomizat a
dou gene).
Direcionarea seleciei
Cnd o component a unui caracter este ereditar, selecia va
altera frecvenele diferitelor alele (variante ale genei) implicate. Selecia
poate fi divizat n trei clase, pe baza efectului asupra frecvenei alelelor.
Selecia pozitiv sau direcional apare cnd o anumit alel are o
adecvare mai mare dect celelalte, determinnd o cretere a frecvenei
220

GENETIC

acelei alele pn la adecvarea total la mediu, ceea ce face ca ntreaga


populaie s exprime fenotipul adecvat.
Mult mai comun este selecia stabilizatoare, care scade frecvena
alelelor care au efecte nefavorabile asupra fenotipului (ceea ce ar nsemna
o mai slab adecvare), pn la eliminarea lor din populaie. Selecia
purificatoare determin conservarea peste timp a trsturilor genetice
funcionale (de exemplu, secvene de codificare a proteinelor sau secvene
reglatoare) datorit presiunii asupra variantelor duntoare (negative).
In sfrit, exist un numr de forme de selecie de echilibrare, care
nu determin adecvarea total dar permit meninerea unei alele la
frecvene intermediare ntr-o populaie. Aceasta poate s apar la speciile
diploide cnd indivizii cu o combinaie de dou alele diferite ntr-un locus
de pe cromozom (heterozigoi) au o adecvare mai ridicat dect indivizii
care au dou alele identice (homozigoi). Aceasta se numete avantajul
heterozigoiei asupra supradominanei. Meninerea variaiei alelice poate
s apar de asemenea prin selecia disruptiv sau diversificatoare, care
favorizeaz genotipurile care se abat (deprteaz) de la medie n orice
direcie, i poate determina o distribuie bimodal a valorilor caracterului.
In sfrit, poate s apar prin selecia dependent de frecven, n cazul
creia adecvarea unui fenotip particular depinde de distribuia n populaie
a celorlalte fenotipuri.
Selecia i variaia genetic
O parte din ntreaga variaie genetic este neutr din punct de
vedere funcional; de exemplu, ea nu produce efecte fenotipice sau
diferene semnificative n adecvare. Anterior se considera c partea cea
mai mare a variaiei genetice este coninut n ADN necodificator, dar
studii recente au artat c pri largi ale secvenelor care l alctuiesc sunt
nalt conservate i aflate sub aciunea puternic a seleciei purificatoare;
de exemplu ele nu variaz prea mult de la un individ la altul, indicnd c
mutaiile n aceste regiuni au consecine negative. Cnd variaia genetic
nu determin diferene de adecvare, selecia nu poate afecta direct
frecvena acesteia.
Inlnuirea genelor condiioneaz ntr-o msur important
rezultatul seleciei, n special cnd sunt implicate gene plasate foarte
aproape pe cromozom. n cursul formrii gameilor, recombinarea
materialului genetic determin regruparea alelelor. Totui, ansa ca o
astfel de regrupare s aib loc ntre dou alele depinde de distana dintre
acele alele; cu ct sunt mai aproape una de alta, cu att este mai puin
221

AUREL POPESCU

probabil ca s se produc regruparea. In consecin, cnd selecia intete


o alel, aceasta va determina automat i selecia celeilalte alele.
Mutaiile ca surs a variaiei genetice
Aa cum s-a prezentat anterior, mutaiile implic modificri n secvenele
de nucleotide ale genelor, structura cromozomilor i/sau numrul
cromozomilor. Acestea sunt evenimente care apar la ntmplare, n mod
spontan, cu o rat sczut, sau sunt cauzate de mutageni (caz n care rata
mutaiilor este mai mare). Geneticianul rus Serghei Cetverikov a fost
primul care a sugerat c variabilitatea indus de mutaii furnizeaz
materialul brut pentru evoluie, dar nu constituie evoluia nsi. Cu alte
cuvinte, mutaia poate furniza alele noi unei populaii, dar nu acioneaz
ca o for major n dictarea echilibrului final al frecvenei alelelor.
Cetverikov a concluzionat c populaiile naturale absorb mutaiile ca un
burete i le rein n stare heterozigot, asigurnd astfel o surs de
variabilitate pentru modificarea ulterioar.
O mutaie nou poate fi benefic, neutr, sau duntoare.
Dependent de aceasta, mutaia respectiv poate afecta supravieuirea i
potenialul de reproducere al individului care o motenete. In cazul
genelor structurale ce codific proteine, efectele noilor mutaii vor
depinde de impactul lor asupra funciei proteinei. Mutaiile duntoare i
neutre au o probabilitate de apariie mult mai ridicat dect cele benefice.
De exemplu, alelele pot fi modificate n multe moduri diferite, ce au drept
consecin codificarea de proteine defective. Aa cum s-a prezentat n
capitolul 10, deleiile, adiiile i substituiile de nucleotide, inversiile de
secvente de nucleotide, mutaiile nonsens, mutaiile cu sens greit
(missense mutations) i mutaiile cu schimbarea cadrului de citire
(frameshift mutations) pot cauza exprimarea de ctre o gen a unei
proteine care este nefuncional sau mai puin funcional dect proteina
normal (de tip slbatic).
Rata mutaiei
Rata mutaiei este probabilitatea ca o gen s fie modificat
printr-o mutaie nou i se exprim ca numrul de mutaii noi pentru
o gen dat, per generaie (n mod obinuit n gama de la 1 la 100.000 la
1 la 1.000.000, sau de la 10-5 la 10-6 per generaie.
Studiile asupra ratei mutaiei urmresc de regul modificarea unei
gene normale (funcionale) ntr-o alel duntoare (nefuncional). Rata
222

GENETIC

mutaiilor ce produc alele benefice este de ateptat s fie substanial mai


redus.
S considerm rata de mutaie a alelei A la o alel a
(probabilitatea ca o copie a genei A s devin a n cursul replicrii ADN
ce precede meioza). Dac pt este frecvena alelei A n generaia t, dac qt =
1 pt este frecvena alelei a n generaia t, i dac nu exist alte cauze ale
modificrii frecvenei genei (de exemplu, nu acioneaz selecia natural),
atunci schimbarea n frecvena alelei ntr-o generaie este:

unde pt 1 este frecvena la generaia anterioar. Aceasta ne spune c


frecvena lui A descrete (i frecvena lui a crete) cu o msur ce este
proporional cu rata de mutaie i cu proporia p a tuturor genelor care
sunt nc disponibile pentru mutaii. Astfel, p devine mai mic pe msur
ce frecvena lui p nsi descrete, deoarece sunt din ce n ce mai puine
alele A care pot fi transformate prin mutaie n alele a.
S analizm cazul unei alele funcionale A (a crei frecven este
denotat de variabila p), care poate fi convertit printr-o mutaie
duntoare ntr-o alel a (a crei frecven este denotat de variabila q).
Conversia alelei A n alela a prin mutaie se va produce cu o rat pe care o
denumim u. Dac considerm c rata mutaiei de reversie (de la a la A)
este neglijabil, creterea frecvenei alelei a dup o generaie va fi
q = up
De exemplu, s considerm urmtoarele condiii:
p = 0.8 (adic frecvena alelei A este de 80%)
q = 0.2 (adic frecvena alelei a este de 20%)
u = 10-5 (adic rata mutaiei de conversie de la A la a)
q = (10-5) (0.8) = (0.00001) (0.8) = 0.000008
De aceea, n urmtoarea generaie
qn+1 = 0.2 + 0.000008 = 0.200008
pn+1 = 0.8 0.000008 = 0.799992
Aa cum reiese din calcul, noile mutaii nu modific semnificativ
frecvenele alelelor ntr-o singur generaie.
223

AUREL POPESCU

Pentru calcularea modificrii frecvenei unei alele dup orice


numr de generaii se poate folosi ecuaia:
(1 u)t = pt / p0
unde
u este rata mutaiei de conversie a alelei A n alela a
t este numrul de generaii
p0 este frecvena alelei A n generaia de start
pt este frecvena alelei A dup t generaii
S presupunem c frecvena alelei A este 0.8, u = 10-5, i dorim s
tim care va fi frecvena alelei dup 1.000 de generaii (t = 1000).
Introducnd aceste valori n ecuaia precedent i rezolvnd pentru pt
(1 0.00001)1.000 = pt / 0.8
Aadar, pt = 0.792
Prin urmare, frecvena alelei A va scdea dup 1.000 de generaii
de la 0.8 la 0.792.
Este clar c mutaiile furnizeaz variabilitate genetic, dar este
important de tiut cum afecteaz rata mutaiilor, n timp, frecvena alelelor
ntr-o populaie. Rezultatele studiilor realizate n decursul anilor au artat
c n populaiile naturale rata mutaiilor noi este foarte rar un factor
capabil s schimbe radical frecvena alelelor. In schimb, alte procese cum
sunt migrarea, deriva genetic i selecia natural, au efecte considerabil
de mari asupra frecvenei alelelor.
Modelele Bi-Locus i Linkage-ul
Analiza modificrii frecvenei alelelor la un singur locus este cel
mai simplu model de analiz genetic a populaiilor. Este ns puin
probabil ca adecvarea unui organism s depind de fenotipul su
determinat de alelele de la un singur locus, ceea ce face ca astfel de
modele de analiz s fie limitate n conturarea unei imagini clare a
procesului evolutiv.
Modelele bi-locus (i n mod mai general, multi-locus) urmresc
modificrile simultane n frecvena genelor la mai mult de un locus. Astfel
de modele sunt n mod invariabil mai complicate dect cele mono-locus,
dar au un grad mai ridicat de realism.
224

GENETIC

Cel mai simplu model bi-locus ia n consideraie doi loci


autozomali, A i B, fiecare cu dou alele, A1 i A2, respectiv B1 i B2.
Astfel, exist patru tipuri de gamei haploizi n populaie - A1B1, A1B2,
A2B1 i A2B2 ale cror frecvene le notm cu x1, x2, x3 i respectiv x4.
(Trebuie s se in cont de faptul c xi nu reprezint frecvena alelelor;
n cazul analizei bi-locus, nu putem considera egal frecvena gameilor
cu frecvena alelelor, aceasta fiind posibil numai pentru un singur
locus). Organismele diploide se formeaz prin fuziunea a doi gamei. De
aceea sunt posibile zece genotipuri diploide n populaie ce rezult din
combinaiile posibile ale gameilor.
In cazul unui singur locus (mono-locus), s-a constatat c ntr-o
populaie mare n care mperecherile se produc la ntmplare, exist o
relaie simpl ntre frecvenele tipurilor de gamei i cele ale genotipurilor
zigoilor pe care acetia i formeaz. In cazul bi-locus, este valabil
aceeai relaie. Astfel, de exemplu, frecvena genotipului A1B1 / A1B1 va fi
(x1)2; frecvena genotipului A1B1 / A2B1 va fi 2x1x3, i aa mai departe.
Primul aspect al legii Hardy-Weinberg frecvenele genotipice
date de ptratul sumelor frecvenelor gametice poate fi transpus
ntocmai cazului bi-locus. Ins, aa cum vom arta n continuare, cel de al
doilea aspect al legii Hardy-Weinberg stabilitatea frecvenelor
genotipice dup o rund de mperecheri la ntmplare nu se aplic n
mod general n cazul bi-locus.
Un concept cheie n analiza genetic populaional bi-locus este
acela de linkage, sau de lips a independenei ntre doi loci. Pentru a
nelege linkage-ul (nlnuirea), luai n calcul un set de gamei produi
de un organism cu genotip A1B1 / A2B2, adic un dublu-heterozigot. Dac
cei doi loci sunt nenlnuii, atunci compoziia acestui set va fi { A1B1,
A1B2, A2B1, A2B2}, adic toate cele patru tipuri vor fi reprezentate
n mod egal (presupunnd c prima lege a lui Mendel este valabil pentru
ambii loci). Dac locii sunt nenlnuii, deci independeni - ce alel are
un gamet la locusul A nu ne spune nimic despre ce alel are la locusul B.
Situaia opus este linkage-ul perfect. Dac doi loci sunt perfect nlnuii
(lincai), atunci set-ul de gamei produi de heterozigotul dublu A1B1 /
A2B2 are compoziia { A1B1, A2B2}; aceasta nseamn c dac un
gamet primete alela A1 la locusul A, el primete negreit i alela B1 la
locusul B i vice versa.
In termeni fizici, linkage perfect nseamn c locii A i B sunt
situai aproape unul de altul pe acelai cromozom; alelele de la cei doi
loci sunt prin urmare metenii ca o singur unitate. Locii nelincai sunt
fie pe cromozomi diferii, fie pe acelai cromozom, dar separai de o
225

AUREL POPESCU

distan considerabil, ceea ce face posibil separarea lor prin


recombinare.
Gradul de linkage este msurat prin fracia de recombinare r, unde
0 r . Compoziia unui set de gamei produi de un organism cu
genotip A1B1 / A2B2 poate fi scris n termenii fraciei de recombinare r,
dup cum urmeaz:
A1B1
A1B2
A2B1
A2B2

(1 r)
r
r
(1 r)

Este uor de observat c r = nseamn c locii sunt nelincai, aa


nct toate cele patru tipuri de gamei sunt produse n proporie egal, n
timp ce r = 0 nseamn c ei sunt perfect lincai.
In cazul modelului bi-locus, frecvenele gametice (i prin urmare
genotipice) trebuie s fie constante n decursul generaiilor, chiar i n
absena seleciei, mutaiei, migraiei i derivei genetice, spre deosebire de
cazul uni-locus (mono-locus) (considerm c frecvenele alelice vor fi
desigur constante, n absena oricrei fore ale evoluiei). Este posibil s
scriem ecuaiile recurente pentru frecvenele gameilor, ca o funcie a
frecvenelor lor n generaia anterioar plus fracia de recombinare.
Ecuaiile sunt:
x1
=
x1
x2
=
x2
x3
=
x3
x4 = x4 + r(x2x3 x1x4)

+
+
+

r(x2x3
r(x2x3
r(x2x3

x1x4)
x1x4)
x1x4)

Din ecuaiile de recuren, este uor de observat c frecvenele


gametice (i deci genotipice) vor fi stabile n cursul generaiilor, adic xi
= xi pentru fiecare i, n oricare dintre cele dou condiii: (i) r = 0, sau
(ii) x2x3 x1x4 = 0. Condiia (i) nseamn c cei doi loci sunt perfect
nlnuii (lincai), i de aceea se comport efectiv ca un locus; condiia
(ii) nseamn c cei doi loci sunt n echilibru de nlnuire (linkage
equilibrium), ceea ce nseamn c alelele de la locusul A sunt ntr-o
asociere ntmpltoare cu alelele de la locusul B. Mai precis, echilibrul de
nlnuire nseamn c frecvena la nivel populaional a gametului AiBi
este egal cu frecvena alelei Ai multiplicat cu frecvena alelei Bi.
Un rezultat important al teoriei bi-locus este acela c arat c, dat
fiind mperecherea la ntmplare (randomizat), cantitatea (x2x3 - x1x4) va
226

GENETIC

descrete n fiecare generaie pn va ajunge la zero punct n care


frecvenele genotipice vor fi n echilibru. Astfel, o populaie aflat iniial
n dezechilibru de nlnuire (linkage disequilibrium) se va apropia de
echilibrul de nlnuire peste un numr de generaii. Rata de apropiere
depinde de valoare lui r, fracia de recombinare. Reamintim c n cazul
unui singur locus, o singur rund de mperechere randomizat este
suficient pentru a aduce frecvenele genotipice n echilibru.
Echilibrul mutaie selecie
Selecia natural determin reducerea variaiei genetice prin
eliminarea indivizilor neadaptai i, prin aceasta, a mutaiilor care
cauzeaz inadaptarea. Totodat, se produc mutaii noi, determinnd un
echilibru ntre mutaii i selecie. Rezultatul exact al celor dou procese
depinde att de rata cu care se produc mutaii noi ct i de tria seleciei
naturale. In consecin, modificri ale ratei mutaiilor sau presiunii de
selecie vor determina schimbarea echilibrului mutaii - selecie.
Lund n calcul modelul uni-locus cu dou alele, s presupunem
c alela A1 este superioar din punct de vedere selectiv alelei A2, dar
mutaia recurent de la A1 la A2 mpiedic A1 s se rspndeasc pn la
fixare. Rata mutaiei per generaie de la A1 la A2, adic proporia de alele
A1 care sunt afectate de mutaie n fiecare generaie, este notat u
(estimrile empirice ale ratelor mutaiilor sunt de regul n jurul valorii de
10-6). Mutaia napoi (de reversie) de la A2 la A1 poate fi ignorat,
deoarece presupunem c alela A2 are o frecven foarte sczut n
populaie, datorit seleciei naturale. Ce se ntmpl cu dinamica
frecvenei genelor n aceste condiii?
In cazul modelului uni-locus, frecvena alelei A1 n a doua
generaie, n stadiul zigotic, este:
p = [N p2 w11 + (N 2pq w12)] / Nw
= (p2 w11 + pq w12) / w

(1)

Ecuaia (1) este cunoscut ca o ecuaie de recuren - ea exprim


frecvena alelei A1 n generaia a doua n termenii frecvenei sale n prima
generaie. Schimbarea frecvenei ntre generaii poate fi scris ca:
p = p p
= (p2 w11 + pq w12) / w p
= pq [p(w11 w12) + q(w12 w22)] / w
227

(2)

AUREL POPESCU

Dac p > 0, selecia natural a dus la creterea frecvenei alelei


A1; dac p < 0, selecia a dus la creterea frecvenei alelei A2. Dac
p = 0, nu s-a produs nici o schimbare n frecvena genei, deci sistemul
este n echilibru alelic.
Ecuaia (2) ne spune c p trebuie s fie negativ, atta timp ct
nici p nici q nu este zero, aa nct alela A2 va nainta repede spre fixare,
eliminnd alela A1.
O situaie mai interesant apare atunci cnd heterozigotul A1B2
este superior din punct de veder al adeecvrii ambilor homozigoi, adic
w12 > w11 i w12 > w22 - un fenomen cunoscut ca heterozis. Prin deducie,
este clar ce ar trebui s se ntmple n aceast situaie: ar trebui s se
ating o stare de echilibru, n care ambele alele sunt prezente n populaie.
Ecuaia (2) confirm aceast deducie. Este uor de observat c p = 0
dac oricare alel a ajuns la fixare (deci dac p = 0 sau q = 0), sau, n al
treilea rnd, dac este ndeplinit urmtoarea condiie:
p(w11 w12) + q(w12 w22) = 0

care se reduce la
p = p* = (w12 w22) / (w12 w22) + (w12 w11)

(Asteriscul indic c aceasta este o condiie a echilibrului). Intruct


p trebuie s nu fie negativ, aceast condiie poate fi ndeplinit
numai dac exist o superioritate a heterozigotului sau o inferioritate a
heterozigotului; ea reprezint o stare de echilibru a populaiei n care sunt
prezente ambele alele. Acest echilibru este cunoscut ca polimorfic, spre
deosebire de echilibrul monomorfic care apare atunci cnd niciuna dintre
alele nu a ajuns la fixare. Posibilitatea echilibrului polimorfic este destul
de semnificativ. Ea ne nva c selecia natural nu va produce
ntotdeauna omogenitate genetic; n unele cazuri, selecia conserv
variaia genetic gsit ntr-o populaie.
Aadar, ecuaia (1) de mai sus, exprim frecvena alelei A1 n
termenii frecvenei sale n generaia anterioar. Intruct o anumit fracie
(u) a alelelor A1 va fi fost mutat la A2, n cazul modelului bi-locus,
aceast ecuaie de recuren trebuie modificat la:
p = (p2 w11 + pq w12) (1 u) / w

pentru a ine cont de mutaie. Ca mai nainte, echilibrul este atins cnd
= p, adic p = 0. Condiia pentru echilibru este de aceea:
228

GENETIC

p = p* = (p2 w11 + pq w12) (1 u) / w

(3)

O simplificare util a ecuaiei (3) poate fi obinut fcnd cteva


presupuneri despre adecvarea genotipului i adoptnd o notare nou. S
presupunem c alela A2 este complet recesiv (aa cum este adesea n
cazul mutaiilor duntoare). Aceasta nseamn c genotipurile A1A1 i
A1A2 au adecvare identic. De aceea, adecvarea genotipic poate fi scris
w11 = 1, w12 = 1, w22 = 1 s, unde s denot diferena de adecvare a
homozigotului A2A2 fa de cea a celorlalte dou genotipuri (s este
cunoscut ca coeficient de selecie fa de A2A2). Intruct presupunem c
alela A2 este duntoare, se deduce c s > 0. Substituind adecvarea acestor
genotipuri n ecuaia (3) rezult c:
p* = p (1 u) / p2 + 2pq + q2(1 s)

care se reduce la:


p* = 1 (u/s)

sau, n mod echivalent, la (deoarece p + q = 1):


(4)

q* = (u/s)

Ecuaia (4) d frecvena n echilibru a alelei A2, presupunnd c


aceasta este complet recesiv. Trebuie s luam n consideraie faptul c
pe msur ce crete u, crete de asemenea i q*. Putem intui aadar c cu
ct mai mare va fi rata de mutaie de la A1 la A2, cu att mai mare va fi
frecvena lui A2 ce poate fi meninut la echilibru, pentru o valoare dat a
lui s. In mod reciproc, pe msur ce s crete, q* descrete. Aceasta ne
permite de asemenea s intuim c cu ct mai puternic va fi selecia
mpotriva homozigotului A2A2, cu att mai sczut va fi frecvena la
echilibru a alelei A2, pentru o valoare dat a lui u.
Este uor de vzut de ce se spune c ecuaia (4) descrie echilibrul
selecie-mutaie selecia natural ndeprteaz continuu alelele A2 din
populaie, n timp ce mutaia le recreaz continuu. Ecuaia (4) ne spune
frecvena de echilibru a A2 ce va fi meninut, ca o funcie a ratei de
mutaie de la A1 la A2, i mrimea dezavantajului selectiv suferit de
homozigoii A2A2. Este important de menionat c ecuaia (4) a derivat n
condiia asumrii c alela A2 este complet recesiv, deci c heterozigoii
A1A2 sunt identici din punct de vedere fenotipic cu homozigoii A1A1.
Totui, este prea devreme s derivm ecuaii similare pentru cazurile n
care alela este dominant, sau parial dominant. Dac A2 este dominant,
229

AUREL POPESCU

sau parial dominant, frecvena sa de echilibru va fi mai sczut dect


dac ea este complet recesiv; selecia o va ndeprta mai eficient din
populaie. O alel duntoare care este recesiv se poate ascunde n
heterozigoi, i astfel poate scpa puterii de selecie, dar o alel dominant
nu poate.
Mutaiile duntoare reduc adecvarea organismelor purttoare.
Aceasta este explicaia importanei date acestor mutaii n genetica
populaiilor, chiar dac se consider c pentru procesul evolutiv, mutaiile
benefice sunt cele care joac un rol crucial. In cunoaterea i nelegerea
cauzelor variabilitii genetice existente n populaiile biologice trebuie s
se aib n vedere faptul c, dac o gen este benefic, selecia natural
este probabil determinantul major al frecvenei sale de echilibru; rata
mutaiei sporadice la aceast gen va juca n majoritatea cazurilor un rol
minor. Doar n cazul n care o gen este duntoare, mutaia joac un rol
major n meninerea ei n populaie.

BIBLIOGRAFIE SELECTIV

230

GENETIC

1. Acquaah G., 2007. Principles of Plant Genetics and Breeding.


Wiley-Blackwell.
2. Alberts B., Bray D., Hopkin K., Johnson A., Lewis J., Raff M.,
Roberts K., Walter P., 2009. Essential Cell Biology. Third Edition.
Garland Science, London.
3. Alberts B., Johnson A., Lewis J., Raff M., Roberts K., Walter P.,
2002. Molecular Biology of the Cell. Fourth Edition., Garland
Science., Taylor & Francis Group, New York.
4. Aminetzach Y.T., Macpherson J.M., Petrov D.A., 2005. Pesticide
resistance via transposition-mediated adaptive gene truncation in
Drosophila. Science 309 (5735): 764-767.
5. Antohi t., Gavril L., 1981. Progrese n Genetica Molecular. Ed.
tiinific i Enciclopedic, Bucureti.
6. Auerbach A.D., Verlander P.C., 1997. Disorders of DNA
replication and repair. Curr. Opin. Pediatr. 9:600-616.
7. Barton N.H., Keightley P.D., 2002. Understanding quantitative
genetic variation. Nat. Rev. Genet. 3 (1): 11-21.
8. Benzer S., 1969. The fine structure of the gene. Proc. Natl. Acad.
Sci. 47:410-414.
9. Brooker R.J., 2005. Genetics: Analysis and Principles. Second
Edition. McGraw Hill. Higher Education.
10. Chen Z., 2010. Molecular mechanisms of polyploidy and hybrid
vigor. Trends Plant Sci. 15:57-71.
11. Cohen S.N., 1976. Transposable genetic elements and plasmid
evolution. Nature 263:731.
12. Comai L., 2005. The advantages and disadvantages of being
polyploid. Nature Reviews. Genetics 6:836-846.
13. Conner J.K., Hartl D.L., 2004. A Primer of Ecological Genetics.
Sinauer Associates, Sunderland.
14. Covic M., tefnescu D., Sandovici I., 2011. Genetica Medical.
Ed. Polirom, Iai, Bucureti.
15. Crane M.B., Lawrence W.J.C., 1952. The Genetic of Garden
Plants. MacMillan, London.
16. Crciun T., Tomozei I., Cole N., Nasta A., 1978. Genetica. Ed.
Didactic i Pedagogic, Bucureti.
17. Crciun T., 1981. Genetica Plantelor Horticole. Ed. Ceres,
Bucureti.
18. Crciun T., 1983. Geniul Genetic i Ameliorarea Plantelor. Ed.
Ceres, Bucureti.
231

AUREL POPESCU

19. Crick F.H.C., 1966a. Codon-anticodon pairing: The wobble


hypothesis. J. Mol. Biol. 19:458-463.
20. Crick F.H.C., 1966b. The genetic code: III. Sci. Am. 215(4):55-62.
21. Crick F.H.C., 1971. General model for the chromosome of higher
organisms. Nature 234:25.
22. Cristea M.D., 1991. Genetica Ecologic i Evoluia. Ed. Ceres,
Bucureti.
23. Crow J.F., Kimura M., 1970. An Introduction to Population
Genetics Theory, Harper and Row, New York.
24. Davey M.J., ODonnell M., 2000. Mechanisms of DNA
replication. Curr. Opin. Chem. Biol. 4 :581-586.
25. De Jesus-Gonzalez L., Weathers P., 2003. Tetraploid Artemisia
annua hairy roots produce more artemisinin than diploids. Plant
Cell Rep. 21:809-813.
26. Diaconu P., 1974. De la Factorii Ereditari la Codul Genetic. Ed.
Ceres, Bucureti.
27. Drake J.W., Charlesworth B., Charlesworth D., Crow J.F., 1998.
Rates of spontaneous mutation. Genetics 148:1667-1686.
28. DuPraw E.J., 1970. DNA and Chromosomes. Holt Rinehart
Winston, New York.
29. Ellstrand N.C., Elam D.R., 1993. Population genetic consequences
of small population size: implications for plant conservation. Ann.
Rev. Ecol. Syst. 24:217-242.
30. Enescu V., 1985. Genetica Ecologic. Ed, Ceres, Bucureti
31. Eyre-Walker A., Keightley P.D., 2007. The distribution of fitness
effects of new mutations. Nature Reviews. Genetics 8(8): 610618.
32. Falconer D.S., 1995. Introduction to Quantitative Genetics. Fourth
Edition, Longman, London.
33. Finch J.T., Lutter L.C., Rhodes D., Brown R.S., Rushton B., Levitt
M., Klug A., 1977. Structure of nucleosome core particles of
chromatin. Nature 269:29.
34. Fisher R.A., 1958. The Genetical Theory of Natural Selection,
Second Edition, New York, Dover.
35. Gamow G., 1954. Possible relation between DNA and protein
structure. Nature 173:318.
36. Gavril L., 1986. Genetica I. Principii de Ereditate. Tipografia
Universitii Bucureti.
37. Gavril L., 1986. Genetica II. Ameliorare. Genetic uman.
Psihogenetic. Tipografia Universitii Bucureti.
232

GENETIC

38. Gavril L., 1990. Bazele Genetice ale Evoluiei Biologice. Ed.
tiinific i Enciclopedic, Bucureti.
39. Gavril L., Dbal I., 1975. Genetica Diviziunii Celulare. Ed.
Dacia, Cluj-Napoca.
40. Gilbert J., Kaempfer R., 1974. Sequence of events in initiation of
translation. A role for initiator transfer RNA in the recognition of
messenger RNA. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 71:3199.
41. Gillespie J.H., 2004. Population Genetics: A Concise Guide,
Second Edition. Johns Hopkins University Press, Baltimore.
42. Goodenough U., Levine R.P., 1974. Genetics. Ed. Holt, Rinehart
and Winston Inc., New York.
43. Goodman M.F., Fygenson D.K., 1998. DNA polymerase fidelity:
from genetics toward a biochemical understanding. Genetics
148(4): 1475-1482.
44. Grant V., 1975. Genetics of Flowering Plants. Columbia
University Press, New York, London.
45. Grierson D., 1976. RNA structure and metabolism. In: Molecular
Aspects of Gene Expression in Plants. J.A. Bryant (Ed.),
Academic Press, London, New York, San Francisco.
46. Hamilton M.B, 2009. Population Genetics, Wiley-Blackwell.
47. Hartl D.L., 1994. Genetics. Third Edition, Jones and Bartlett
Publishers, Boston, London.
48. Hartl D.L., Clark A.G., 2006. Principles of Population Genetics,
Fourth Edition. Sinauer, Sunderland.
49. Hartl D.L., Jones E.W., 1998. Genetics. Principles and Analysis.
Fourth Edition, Jones and Bartlett Publishers, Boston, Toronto,
London, Singapore.
50. Hartwell L.H., Hood L., Goldberg M.L., 2000. Genetics: from
Genes to Genomes. McGraw Hill, Boston.
51. Hartwell L., Hood L., Goldberg M.L., Reynolds A.E., Silver L.M.,
2010. Genetics: from Genes to Genomes. Fourth Edition. McGraw
Hill Science.
52. Hastings P.J., Lupski J.R., Rosenberg S.M., Ira G., 2009.
Mechanisms of change in gene copy number. Nature Reviews.
Genetics 10(8):551-564.
53. Hatzoglan E., Rodakis G.C., Lecanidan R., 1995. Complete
sequence and gene organization of the mitochondrial genome.
Genetics 140:1353-1366.
54. Hearst J.E., Botchan M., 1970. Eukaryotic chromosome. Ann.
Rev. Biochem. 39:151.
233

AUREL POPESCU

55. Hedrick P.W., 2004. Genetics of Populations. Third Edition. Jones


and Bartlett.
56. Hoagland M.B., Stephenson M.L., Scott J.F., Hecht L.I.,
Zamecnik F.C., 1958. A soluble ribonucleic acid intermediate in
protein synthesis. J. Biol. Chem. 231:241
57. Holland P.W., 1999. Gene duplication: past, present and future.
Semin. Cell. Dev. Biol. 10:541-547.
58. Holley R.W., Apgar J., Everett G.A., Madison J.T., Marquisee M.,
Marrill S.H., Fenswick J.R., Zamir A., 1965. Structure of a
ribonucleic acid. Science 147:1462.
59. Holliday R., 1974. Molecular aspects of genetic exchange and
gene conversion. Genetics 78:273.
60. Holmes D.S., Mayfield J.E., Sander G., Bonner J., 1972.
Chromosomal RNA: its properties. Science 177:72.
61. Hotchkiss R.D., 1974a. Molecular basis for genetic
recombination. Genetics 78:247.
62. Hotchkiss R.D., 1974b. Models for genetic recombination. Ann.
Rev. Microbiol. 28:445.
63. Howard-Flanders P., 1968. DNA repair. Ann. Rev. Biochem.
37:175.
64. Hurles M., 2004. Gene Duplication: The Genomic Trade in Spare
Parts. PLoS Biol. 2(7): E206.
65. Hurwitz J., Furth J.J., Anders M., Oritz P.J., August J.T., 1962. The
enzymatic incorporation of ribonucleotides into RNA and the role
od DNA. Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 26:91.
66. Jacob F., Brenner S., 1963. Sur la regulation de la synthese du
DNA chez les bacteries: lhypothese du replicon. C.R. Acad. Sci
(Paris) 256:298.
67. Jacob F., Monod J., 1961. Genetic regulatory mechanisms in the
synthesis of proteins. J. Mol. Biol. 3:318-356.
68. Jones J.R., Ranney T.G., Eaker T.A., 2008. A novel method for
inducing polyploidy in Rhododendron seedlings. J. Amer.
Rhododendron Soc. 62: 130-135.
69. Kasamatsu H., Robertson D.L., Vinograd J., 1971. A novel closed
circular mithocondrial DNA with properties of a replicating
intermediate. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 68:2252.
70. Kasamatsu H., Vinograd J., 1974. Replication of circular DNA in
eukaryotic cells. Ann. Rev. Biochem. 43:695-719.
71. Keightley P.D., Lynch M., 2003. Toward a realistic model of
mutations affecting fitness. Evolution 57 (3): 683-689.
234

GENETIC

72. Khorana H.G., 1979. Total synthesis of a gene. Science 203:614625.


73. Kimura M., 1994. Population Genetics, Molecular Evolution and
the Neutral Theory. University of Chicago Press, Chicago.
74. Klug W.S., Cummings M.R., 1997. Concepts of Genetics. Fifth
Edition, Prentice Hall International Inc.
75. Kolodner R.D., 2000. Guarding against mutation. Nature 407:687689.
76. Kornberg A., 1974. DNA Synthesis. Stanford University, W.H.
Freeman & Co., San Francisco.
77. Kornberg A., 1980. DNA Replication. W.H. Freeman Co.
78. Kornberg R.D., 1974. Chromatin structure: a repeating unit of
histones and DNA. Science 184:868.
79. Kornberg R.D., Klug A., 1981. The nucleosome. Scientific
American 244:52-64.
80. Kunkel T.A., Bebenek K., 2000. DNA replication fidelity. Annu.
Rev. Biochem. 69:497-529.
81. Lamkey K., Edwards J., 1999. Quantitative genetics of heterosis.
In: J.G. Coors and S. Pandey (eds.) Proceedings of the
International Symposium on the Genetics and Exploitation of
Heterosis in Crops, 17-22 Aug. 1997, Mexico City, Mexico, p. 3148.
82. Lehman I.R., Uyemura D.G., 1976. DNA polymerase I: essential
replication enzyme. Science 193:963.
83. Levan A., Fredga K., Sandberg A., 1964. Nomenclature for
centromeric position on chromosomes. Hereditas 52:201-220.
84. Lewin B., 2000. Genes VII. Oxford University Press.
85. Lewontin R.C., 1974. The Genetic Basis of Evolutionary Change.
Columbia University Press, New York.
86. Lima de Faria A., 1975. The relation between chromosomes,
replicons, operons, transcription units, genes, viruses and
palindromes. Hereditas 81:249.
87. Lowry D.B., Modliszewski J.L., Wright K.M., Wu C.A., Willis
J.H., 2008. The strength and genetic basis of reproductive
isolating barriers in flowering plants. Philos. Trans. R. Soc.
London Ser. B 363:3009-3021.
88. Maynard Smith J., 1989. Evolutionary Genetics. Oxford
University Press, Oxford.
89. McEachern M.J., Krauskopf A., Blackburn E.H., 2000. Telomeres
and their control. Ann. Rev. Genet. 34:331-358.
235

AUREL POPESCU

90. Mettler L.E., Gregg T.G., 1974. Genetica Populaiilor i Evoluia.


Ed. tiinific, Bucureti.
91. Mizuuchi K., 1992. Transpositional recombination: mechanistic
insights from studies with mu and other elements. Annu. Rev.
Biochem. 612: 1011-1051.
92. Mooney R.A., Landick R., 1999. RNA polymerase unveiled. Cell
98: 687-690.
93. Moses M.J., 1968. Synaptinemal complex. Ann. Rev. Genetics
2:363.
94. Nagl W., 1975. Organization and replication of the eukaryotic
chromosome. I. Replication. Progress in Botany, Springer Verlag,
39:186.
95. Niremberg M., Leder P., 1964. RNA codewords and protein
synthesis. I. The effect of trinucleotides upon binding of sRNA to
ribosomes. Science 145:1399.
96. Niremberg M., Leder P., Bernfield M., Brimacombe R., Trupin J.,
Rottman F., ONeal C., 1965. RNA codewords and protein
synthesis. VII. On the general nature of the RNA code. Proc. Natl.
Acad. Sci. U.S.A. 53:1161.
97. Ogawa T., Okazaki K., 1980. Discontinous DNA replication.
Annu. Rev. Biochem. 49:421-457.
98. Okazaki R.T., Okazaki K., Sakabe K., Sugimoto K., Sugino A.,
1968. Mechanism of DNA chain growth. I. Possible discontinuity
and unusual secondary structure of newly synthesized chains.
Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 59:598.
99. Otto S.P., Whitton J., 2000. Polyploid incidence and evolution.
Annual Review of Genetics 34:401-437.
100.
Ozkan H., Feldman M., 2009 Rapid cytological
diploidization in newly formed allopolyploids of the wheat
(Aegilops-Triticum) group. Genome 52:926-934.
101.
Painter R.B., 1974. DNA damage and repair in eukaryotic
cells. Genetics 78:139.
102.
Panfil C., 1974. Genetica. Ed. Didactic i Pedagogic,
Bucureti.
103.
Peck J.R., Barreau G., Heath S.C., 1997. Imperfect genes,
Fisherian mutation and the evolution of sex. Genetics 145 (4):
1171-1199.
104.
Petre A., Negruiu E., 1974. Genetic Animal. Ed.
Didactic i Pedagogic, Bucureti.
236

GENETIC

105.
Pierce B., 2005. Genetics: A Conceptual Approach. Second
Edition. W.H. Freeman and Company, New York.
106.
Popescu A., 2005. Genetica. Metode de Laborator.
AcademicPres, Cluj-Napoca.
107.
Popescu A., 2012. Dicionar de Genetic Molecular i
Inginerie Genetic Englez - Romn. Ed. AcademicPres, ClujNapoca.
108.
Price H.J., 1976. Evolution of DNA content in higher
plants. Bot. Rev. 42(1):27.
109.
Raicu P., 1992. Genetica. Ed. Didactic i Pedagogic.,
Bucureti.
110.
Raicu P., 1997. Genetic General i Uman. Ed.
Humanitas, Bucureti.
111.
Raicu P., Stoian V., 1991. Genetica Dezvoltrii la
Eucariote. Ed. Acad. Romane, Bucureti.
112.
Reich E., Luck D.J.L., 1966. Replication and inheritance
of mitochondrial DNA. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 55.
113.
Rhodes D., 1997. Chromatin structure. The nucleosome
core all wrapped up. Nature 389:231-233.
114.
Rieger R., Michaelis A., Green M.M., 1976. Glossary of
Genetics and Cytogenetics. Classical and Molecular, VEB Gustav
Fischer Verlag, Jena.
115.
Roberts J.W., 1969. Termination factor for RNA synthesis.
Nature 224:1168.
116.
Roughgarden J., 1979. Theory of Population Genetics and
Evolutionary Ecology. Macmillan, New York.
117.
Russell P., 2001. Genetics. Benjamin Cummings, New
York.
118.
Sarabhai A.S., Stretton A.C.V., Brenner S., Bolle A., 1964.
Co-linearity of the gene with the polypeptide chain. Nature
201:13.
119.
Schluter D., Conte G.L., 2009. Genetics and ecological
speciation. Proc. Nat. Acad. Sci. USA 106:9955-9962.
120.
Serra J.A., 1965. Modern Genetics. Academic Press,
London, New York.
121.
Snustad D.P., Simmons M.J., 2006. Principles of

Genetics. Fourth Edition. John Wiley & Sons, Inc.


122.
Stnescu V., 1977. Genetica i Ameliorarea Speciilor
Forestiere. Ed. Didactic i Pedagogic, Bucureti.
237

AUREL POPESCU

123.
Stewart A., 1990. The functional organization of
chromosome and the nucleus a special issue. Trends Genet.
6:377-379.
124.
Szostak J.W., Orr-Weaver T.K., Rothstein R.J., 1983. The
double-strand break repair model for recombination. Cell 33:2535.
125.
Thomas M.J., Platas A.A., Hawley D.K., 1998.
Transcriptional fidelity and proofreading by RNA polymerase II.
Cell 93(4):627-637.
126.
Wade M.J., 2005. Evolutionary and Ecological Genetics.
In: Stanford Encyclopedia of Philosophy (Spring 2005 Edition),
Edward N. Zalta (ed.)
127.
Wang J.C., 1996. DNA topoisomerases. Annu. Rev.
Biochem. 65: 635-692.
128.
Watson J.D., 1974. Biologia Molecular a Genei. Ed.
tiinific, Bucureti.
129.
Watson J.D., Crick F.H.C., 1953. Molecular structure of
nucleic acids. A structure for deoxyribose nucleic acid. Nature
171:737-738.
130.
Zhimulev F., 1998. Morphology and structure of polytene
chromosomes. Adv. Genet. 37:1-566.

238