UNIVERSITATEA TRANSILVANIA DIN BRAOV

Facultatea de Silvicultur i Exploatri Forestiere

Genetic i
Selecie
Alexandru Lucian CURTU Nicolae OFLETEA












1. INTRODUCERE

1.1. Genetica tiina ereditii i variabilitii

Genetica este tiina cu caracter fundamental care studiaz legile generale ale
ereditii i variabilitii organismelor, capacitatea primordial a acestora de a
forma i transmite caractere la descendeni. Ereditatea asigur continuitatea, pe
cnd variabilitatea asigur discontinuitatea n evoluia lumii vii, oferind
seleciei naturale material pentru transformarea evolutiv a speciilor.

Ereditatea este o caracteristic fundamental care asigur transmiterea cu
fidelitate a trsturilor morfologice, fiziologice, biochimice i de comportament
de la prini la descendeni. Variabilitatea reprezint fenomenul devierii
organismelor ntr-o direcie sau alta de la tipul original, adic fa de prini. n
consecin, genotipic i fenotipic fiecare organism reprezint practic un unicat
determinat de combinaia particular a informaiei genetice primit de la prini
i modalitatea n care aceasta se traduce i se transpune n caractere.

1.2. Scurt istoric al geneticii

n anul 1865, clugrul Gregor Mendel enun pentru prima dat legile
transmiterii caracterelor pe baza unor ncruciri la mazre, publicate n lucrarea
Experiene asupra hibrizilor vegetali.

n anul 1900, pe baza unor experiene efectuate la plante, Hugo de Vries
(Olanda), Carl Correns (Germania) i Erich Tschermak (Austria) confirm
valabilitatea legilor descoperite de Gregor Mendel, consemnndu-se astfel
apariia tiinei geneticii.

Dintre momentele care au marcat ulterior descoperiri epocale i apariia unor
noi concepii n aceast tiin extrem de dinamic merit a fi consemnate
urmtoarele:

* ntre 1902 i 1909, W. Bateson descoper valabilitatea legilor
mendeliene la animale, introducnd totodat termeni ca: homozigot, heterozigot,
generaie, F
1
, F
2
etc., gene epistatice .a.
1
* n anul 1903, W. S. Sutton formuleaz o prim variant a teoriei
cromozomale a ereditii.
* n anul 1905, R. C. Punnet i W. Bateson public primul caz de
nlnuire a genelor.
* n anul 1909, W. L. Johannsen elaboreaz teoria liniilor pure. Tot el
definete noiunile de gen, genotip, fenotip i populaie.
* n anul 1910 apare tiina citogeneticii, care studiaz fenomenul
ereditar la nivel celular, fondat de Th. H. Morgan, care, mpreun cu
colaboratorii si, elaboreaz teoria cromozomal a ereditii i introduce
noiunea de linkage (genele localizate n acelai cromozom au tendina de a se
transmite mpreun la descendeni).
* Apariia geneticii cantitative pe baza cercetrilor lui H. Nilsson - Ehle
(dup 1906) i ale lui E. M. East i colab. (dup 1910) i a geneticii populaiilor
(1908), n urma cercetrilor i determinrilor lui S. H. Hardy i W. Weinberg.
* Punerea la punct a metodologiei de ntocmire a hrilor genetice pe
baza analizei genetice (n anul 1913, de ctre A. H. Sturtevant, colaborator al lui
Th. H. Morgan).
* Punerea la punct n anul 1924 a celebrei metode de evideniere a
cromozomilor prin colorare cu fucsin bazic, de ctre R. Feulgen i H.
Rosenbeck (metoda Feulgen se utilizeaz i astzi).
* Efectuarea n 1928 de ctre bacteriologul englez E. Griffith a celebrelor
experiene de transformare a pneumococilor neviruleni n pneumococi viruleni,
care provoac pneumonia la oareci, fr a putea ns justifica natura
agentului care a determinat transformarea.
* ntre 1940 i 1941 se pun fundamentele geneticii biochimice de ctre
Beadle i Tatum, pe baza unor experiene anterioare derulate pe circa un
deceniu, elaborndu-se principiul o gen o enzim.
* ncepe astfel etapa geneticii moleculare, care se soldeaz n anul 1944
cu descoperirea rolului genetic al ADN de ctre O. T. Avery, C. M. Mc Leod i
M. Mc Carty.
* n anul 1953, J. D. Watson i F. H. Crick, pe baza cercetrilor
anterioare asupra macromoleculelor de ADN, propun modelul bicatenar de
structur helicoidal, intuiie epocal verificat ulterior prin cercetrile efectuate
de M. Willkins.
* n anul 1955, G. Gamow, prin calcule matematice i abordri din teoria
informaiei, stabilete principiile generale ale codificrii informaiei genetice, pe
care apoi s-au sprijinit cercetrile efectuate n perioada 1961 1967 de Ochoa,
Nirenberg i Khorana, finalizate cu descifrarea codului genetic, deschizndu-se
astfel o nou etap n dezvoltarea tiinei geneticii prin manipulri la nivel
molecular, care devin posibile ntr-un viitor foarte apropiat.
* n anul 1956, A. Kornberg explic mecanismul biosintezei (replicaiei)
ADN.
2
* n anul 1961, geneticienii francezi F. Jacob i J. Monod sugereaz
existena procesului de copiere a informaiei genetice din ADN n ARN mesager
(ARNm) i, de asemenea, elaboreaz modelul de reglaj genetic la procariote.
* n 1969 se reuete de ctre J. B a c k w i t h izolarea primei gene (la E.
Coli, gena lac pentru metabolizarea lactozei), pentru ca n anul urmtor (1970)
s se reueasc sinteza artificial a primei gene (G. Khorana) iar n anul 1971 A.
M. Lewis s realizeze prima manipulare genetic prin crearea unui hibrid ntre
virusul gripal i virusul SV 40.
* n 1972, G. Khorana descoper endonucleazele de restricie, enzime
care fac posibil chirurgia genetic (segmentarea ADN), devenite foarte utile
pentru obinerea organismelor transgenice i n studiul markerilor ADN, foarte
larg utilizai n prezent pentru decriptarea genomului speciilor.
* ntre 1973 1974, Olins i Kornberg elaboreaz modelul nucleosomic
de structurare a fibrei de cromatin, cu implicaii att n cunoaterea organizrii
materialului genetic, ct i n funcionarea acestuia.
* Anul 1973 reprezint, fr ndoial, unul de referin pentru aportul
tiinei romneti la dezvoltarea geneticii, prin decernarea Premiului Nobel
savantului american de origine romn George Emil Palade, care s-a remarcat
prin cercetrile sale din domeniul citochimiei, rolului mitocondriilor n respiraia
(oxidarea) celular, a structurii unor organite i, n primul rnd, prin
descoperirea ribozomilor (nc din anul 1953) i a rolului lor n biosinteza
proteic.
* n 1976 se reuete crearea unei bacterii productoare de insulin, prin
transferul unei gene de la oarece (H. G o o d m a n i colaboratorii).
* n anul 1981 este secveniat complet genomul mitocondrial la om -
16159 bp (perechi de baze).
* La mijlocul anilor 80 se fac mari progrese n tehnica secvenierii
ADN-ului, tehnica PCR (engl. Polymerase Chain Reaction reacia de
polimerizare n lan) i a automatizrii.
* n anul 1990 este lansat proiectul secvenierii genomului uman.
* n anul 1997 este publicat secvena complet a genomului de drojdie
(12 Mbp).
* n anul 2000 este este complet descifrat secvena genomului la
Drosophila melanogaster i Arabidopsis thaliana (180 Mbp & 125 Mbp).
* n anul 2001 este finalizat secvena genomului la om (3400 Mbp).
3

2. APARATUL I STRUCTURILE BIOCHIMICE ALE
EREDITII
2.1. Acidul dezoxiribonucleic

n anul 1928, urmrind obinerea de noi vaccinuri, bacteriologul englez E.
Griffith a efectuat experiene de inoculare la oareci a bacteriei Streptococcus
pneumoniae (pneumococ) agentul pneumoniei. La momentul respectiv s-a reuit
doar s se consemneze un caz de transformare genetic, fr a se cunoate care a
fost agentul care a determinat fenomenul respectiv. n cazul dat, pneumococii vii
neviruleni de tip R (engl. rough), n amestec cu pneumococii viruleni de tip S
(engl. smooth), omori n prealabil prin cldur, au determinat pneumonia la
oarecii injectai Abia n anul 1944, n urma unor experiene efectuate timp de
10 ani, prin care s-a urmrit elucidarea transformrii genetice efectuate de E.
Griffith, un grup de microbiologi americani alctuit din O. T. Avery, C. Mc Leod
i M. Mc Carty a reuit s evidenieze rolul genetic al acidului dezoxiribonucleic
(presc. ADN). Bacteriile de tip S au fost tratate cu diverse substane care
nlturau pe rnd componentele organice i a urmrit dac mai are loc
transformarea pneumococilor (=bacterii) neviruleni n pneumococi viruleni.
Tratamentul cu o enzim de tipul deoxiribonucleaz care elimin ADN-ul a
artat c transformarea nu a mai avut loc.
Degradarea cu acizi, baze, enzime a artat c ADN-ul conine 3 tipuri de
componeni: acid fosforic, pentoze i baze azotate, care, la rndul lor, sunt de
dou categorii: purine i pirimidine. Bazele purinice sunt adenina (A) i
guanina (G), n timp ce dintre bazele pirimidinice sunt reprezentate de citozin
(C) i timin (T).
Sub aspectul structurii moleculare, ADN prezint o structur primar, o
structur secundar i una teriar.
ADN-ul este polimer, adic o macromolecul alctuit din uniti
monomerice care se repet. n ADN, fiecare baz azotat, purinic i
pirimidinic, este legat chimic cu dezoxiriboza formnd cea mai mic unitate
de structur denumit nucleozid sau nucleozid. Legtura chimic se realizeaz
ntre carbonul 1' al dezoxiribozei i atomul de azot din poziia 3 al bazei
pirimidinice sau din poziia 9 al bazei purinice. n felul acesta se formeaz
dezoribonucleozidele (fig. 2-1).
O grupare fosfat se ataeaz de fiecare nucleozid i astfel se obine un
nucleotid sau nucleotid. Cu alte cuvinte, un nucleotid este un fosfat de
nucleozid sau un nucleozid fosfat.
4


Fig. 2-1: Componentele unui dezoxiribonucleotid

Convenional, atomii de carbon din glucide (n cazul de fa,
dezoxiriboza) se numeroteaz ncepnd cu cel care se ataeaz de baza azotat,
adugndu-se semnul prim, adic C
1
'
.
n funcie de felul bazelor azotate, n structura macromoleculei de ADN intr
4 tipuri principale de nucleotide: acidul dezoxiadenilic, acidul dezoxiguanilic,
acidul dezoxitimidilic i acidul dezoxicitidilic. Nucleotidele sunt desemnate i
prin numele de monofosfai. De exemplu, acidul dezoxiadenilic este denumit i
dezoxiadenozin monofosfat, prescurtat dAMP. Celelalte nucleotide vor fi
denumite dGMP, dCMP i dTMP.
Orice nucleotid prezint o regiune specific reprezentat de baza azotat i o
regiune nespecific reprezentat de dezoxiriboz i radicalul fosforic.
Nucleotidele se leag ntre ele pentru a forma un lan
polidezoxiribonucleotidic, n care carbonul 5
'
al dezoxiribozei unui nucleotid
este legat printr-un radical fosforic de carbonul 3
'
al dezoxiribozei nucleotidului
urmtor, realizndu-se legtura 5
'
- 3
'
. Legturile chimice prin care nucleotidele
vecine se asociaz ntre ele prin grupri fosfatice se numesc legturi
fosfodiesterice i sunt covalente. Legturile fosfodiesterice sunt foarte puternice,
stabile, pe seama lor obinndu-se o structur liniar: lanul
polidezoxiribonucleotidic monocatenar. Gruprile terminale ale unui lan
polidezoxiribonucleotidic sunt: gruparea fosforil 5
'
(5
'
P) la un capt i
gruparea hidroxil 3
'
(3
'
OH) la cellalt capt (fig. 2-2).
Prin urmare, n cadrul macromoleculei de ADN, legturile fosfodiesterice se
stabilesc ntotdeauna ntre gruprile nespecifice, ceea ce confer o mare
regularitate i uniformitate tuturor moleculelor de ADN.
n ceea ce privete bazele azotate, acestea se succed de-a lungul catenei
polidezoxiribonucleotidice n secvena care variaz de la o molecul de ADN la
alta, adic de la o specie la alta i de aceea ele reprezint regiunea specific a
ADN care poart informaia genetic caracteristic fiecrei specii.
5

Fig. 2-2: Reprezentare n plan a unui segment din macromolecula de ADN care permite
observarea orientrii antiparalele a celor 2 lanuri polinucleotidice complementare. Sgeile
indic direcia fiecrui lan.

J. D. Watson i F. C. H. Crick au propus, n 1953, modelul de structur
secundar a ADN-ului. Conform acestui model macromolecula de ADN este
alctuit din dou lanuri polinucleotidice, antiparalele, rsucite sub form de
spiral, constituind un dublu helix sau elice dubl, orientat spre dreapta.
Structura seamn cu o scar n spiral n care balustradele sunt reprezentate de
moleculele de dezoxiriboz esterificate, iar treptele sunt formate din perechi de
6
baze azotate: una purinic i cealalt pirimidinic, unite prin legturi de
hidrogen. Astfel, adenina se leag de timin prin dou puni de hidrogen (A=T,
respectiv T=A), iar guanina se leag de citozin prin trei puni de hidrogen
(GC, respectiv CG). Bazele se afl n interiorul helixului, iar grupele fosfat n
afar.
Cele dou lanuri polidezoxiribonucleotidice sunt antiparalele, adic la un
lan legturile fosfodiesterice se realizeaz ntre C
3
'
al dezoxiribozei unui
nucleotid i C
5
'
al dezoxiribozei nucleotidului vecin, pe cnd n cellalt lan
polinucleotid legturile fosfodiesterice se realizeaz n sens invers C
5
'
- C
3
'
.
n spaiu (fig. 2-3), cele dou catene de ADN nfurate elicoidal descriu un
cilindroid cu diametrul constant de 20 (1 = 10
-10
m), cu un pas al elicei
(nfurare complet prin rsucirea i avansarea catenelor cu 360
o
) de 3,4 ,
rezultnd un numr de 10 perechi de nucleotide pe o spir complet, aa nct
fiecare nucleotid se deplaseaz spre dreapta fa de cea precedent cu 36
o
.
Ca unitate de lungime pentru ADN se folosete perechea de baze (din engl.
base pairs - bp), avnd ca multipli kilobaza Kbp (1 Kb = 1000 bp) i megabaza
Mbp (1 Mbp = 1 000 000 bp).

Fig. 2-3: Structura secundar a macromoleculei de ADN. Reprezentare spaial.

Cantitatea de ADN din nucleu determin mrimea genomului unei specii.
Mrimea acestuia variaz foarte mult de la specie la specie (fig. 2-4). S-a
constatat lipsa unei legturi ntre cantitatea de ADN dintr-o celul somatic i
gradul de complexitate al unui organism. Astfel, pare puin probabil ca
amfibienii s aib mai multe gene dect oamenii.

7

Fig. 2-4: Cantitatea de ADN la diferite grupe de organisme

2.2. Replicaia ADN

Replicarea ADN n interfaza diviziunilor celulare reprezint o reacie
chimic primordial, unic pentru toate sistemele biologice, cu excepia
ribovirusurilor, la care se replic acidul ribonucleic (pres. ARN). Ea conduce la
dublarea informaiei genetice, urmat de distribuia echilibrat a acesteia n
celule fiice, ceea ce asigur acestora acelai bagaj genetic informaional. Se
realizeaz dup modelul semiconservativ (fig. 2-5).

Replicarea semiconservativ, fundamentat prin cercetrile lui J. D.
Watson i F. H. Crick (1953), pornete de la proprietatea structural a ADN
privind complementaritatea bazelor azotate i de la modelul de structur al
ADN, stabilit de cei doi cercettori. Potrivit acestei ipoteze, n macromolecula
de ADN se produce la un moment dat ruperea legturilor de hidrogen dintre cele
dou lanuri polinucleotidice, care, pe anumite sectoare, devin independente.
Fiecare caten servete ca matri pentru sinteza unei catene noi,
complementare, printr-un fenomen de autocataliz. n final, dintr-o molecul
veche de ADN se formeaz dou macromolecule fiice, n care o caten este
veche (cea care a servit ca matri)i o caten este nou sintetizat (replica). Ca
urmare, o macromolecul model i pierde individualitatea (unicitatea) prin
sinteza a dou noi molecule identice cu originalul, asigurndu-se astfel
transferul informaiei genetice de la o celul (iniial) la alta (fiic) i, deci,
conservarea acesteia de-a lungul generaiilor.
8
Replicarea ADN se face n prezena unui aparat enzimatic complex, i
anume n prezena ADN polimerazelor, care, mpreun cu molecula de ADN
n replicare, constituie aa-numitul replisom.


Fig. 2-5: Reduplicarea ADN dup tipul semiconservativ: catenele replic sunt
noi modelul Watson Crick (dup G. S. Stent, 1963)



2.3. Transcripia genetic

Transcripia reprezint procesul prin care informaia genetic de pe catena
ADN este transferat la ARNm, precum i la alte tipuri de ARN (ARNt, ARNr).
Ca i ADN, ARN este o macromolecul polimeric alctuit dintr-un lan
de nucleotide, compui care la rndul lor sunt formai din subuniti numite
nucleozide. Spre deosebire de ADN, ns, nucleotidele, coninnd riboz, sunt
ribonucleotide, iar nucleozidele sunt ribonucleozide. Un ribonucleotid,
monomer de ARN, este compus dintr-o molecul de acid fosforic, o molecul de
glucid de tip pentozic (riboz) i o molecul de baz azotat purinic sau
pirimidinic. Bazele purinice ce intr n alctuirea ARN sunt: adenina (A) i
9
guanina (G), iar bazele pirimidinice sunt: uracilul (U) i citozina (C). Deci
constituia chimic a ARN-ului se deosebete de cea a ADN-ului prin aceea c
n locul dezoxiribozei conine riboz, iar timina este nlocuit de uracil.
n celula eucariot exit mai multe tipuri de ARN: mesager, de transfer i
ribozomal.


ARN mesager (ARNm)

n procesul de transmitere a mesajului genetic, ADN folosete ca intermediar
un tip de ARN care este denumit, din aceast cauz, ARN mesager. ARNm
transport informaia coninut n codonii secvenelor dezoxiribonucleotidice la
locul de sintez a lanurilor polipeptidice.
Formarea complementar a filamentului de ARNm pe o matri de ADN
monocatenar se numete transcripie sau transcriere, iar ARNm format se
numete transcript primar.
ARNm ese tipul cel mai heterogen, structura sa primar depinznd de
mesajul genetic pe care l copiaz de pe matria ADN.
Procesul de copiere a mesajului genetic de ctre ARN mesager, de fapt
formarea ARNm, este un proces enzimatic realizat cu ajutorul enzimei numit
ARN polimeraza, dependent de ADN.


ARN de transfer (ARNt)

S-a constat c acizii ribonucleici de transfer sunt reprezentai de cele mai
mici molecule de acizi nucleici naturali i c rolul lor este acela de a se lega
specific de un anumit aminoacid i de a-l transporta la locul de sintez al
proteinelor.
Lanul polinucleotidic de ARNt este alctuit dintr-un numr de 73 93 de
ribonucleotide (fig. 2-6).
Exist peste 40 de tipuri de ARNt n celule speciilor eucariote. Prin urmare,
exist muli ARNt pentru fiecare din cei 20 aminoacizi eseniali componeni ai
lanurilor polipeptidice. S-au identificat, de exemplu, 6 tipuri de ARNt care
fixeaz leucina (leucina, la rndul ei, este specificat de 6 codoni diferii).
ARNt este constituit dintr-o singur caten ce execut meandre, cu scurte
poriuni alturate, aezate pe baza complementaritii bazelor, i poriuni
neasociate care au forma unor bucle. Din aceast cauz, forma tuturor tipurilor
de ARNt este de frunz de trifoi.
Se disting 4 regiuni de mperechere de baze complementare i 3 bucle care
reprezint regiuni nemperecheate.

10

Fig. 2-6: Structura tipic a unui ARN de transfer.


ARN ribozomal (ARNr)

n 1953, s-a descoperit de ctre George Emil Palade c majoritatea ARN
procariotic, ca i cel eucariotic, este asociat cu proteine formnd particule mici.
Aceste particule cu localizare citoplasmatic au fost denumite ribozomi, iar
ARN-ul care i compun a fost denumit ARN ribozomal. La procariote, ribozomii
sunt distribuii n toat celula, iar la eucariote numai n citoplasm, deseori
numai n reticulul endoplasmatic.
Ribozomii conin circa 40 % proteine ribozomale i 60 % ARN ribozomal.
Ribozomii procariotelor se deosebesc de ribozomii eucariotelor, n primul
rnd prin constanta de sedimentare, msurat n uniti Svedberg (S). Astfel,
ribozomii de la procariote au constanta de sedimentare de 70 S, iar ribozomii de
la eucariote se caracterizeaz prin constanta de sedimentare de 80 S.
ARNr este transcris de gene speciale aflate n mai multe copii. La procariote,
de exemplu la Escherichia coli, exist 5 10 copii ale genei pentru ARNr
situate n 3 locuri diferite ale cromozomului. La eucariote genele pentru ARNr
se gsesc n sute i chiar mii de copii.
Ribozomii, deci i ARNr, au rol important n procesul de decodificare a
genelor copiate din ADN n moleculele de ARNm.

Transpunerea mesajului genetic din ADN ntr-o form care s permit
descifrarea sa n limbajul proteinelor constituie, n esen, un proces necesar,
ntlnit la marea majoritate a organismelor vii.

11
Transcrierea apare ca un proces tipic de heterocataliz, prin care, n prezena
unei macromolecule de ADN matri, se realizeaz sinteza ARN mesager.
Ca i n cazul replicrii ADN, sinteza ARNm se face prin
complementaritatea bazelor azotate, aa nct, ARNm devine o copie negativ a
catenei de ADN respective, cu particularitile importante c n locul
dezoxiribozei se sintetizeaz riboza, iar baza complementar adeninei nu este
timina, ci uracilul.
n procesul transcrierii rolul de model n sinteza ARNm pe fiecare sector al
moleculei de ADN l joac numai una dintre cele dou catene, numit caten
antisens (-). Catena complementar sau catena sens (+), numit astfel pentru c
are acelai sens 5 3 cu molecula de ARNm, pentru acelai segment, nu este
transcris. Pentru fiecare segment transcris rezult o singur molecul de ARN,
fapt care deosebete transcrierea de replicare (fig. 2-7).


Fig. 2-7: Transcripia i translaia genetic



Transcrierea are loc n prezena enzimei ARN polimeraz.
ARN - polimeraza este o enzim cu greutate molecular foarte mare, format
din civa componeni polipeptidici: enzima minimal, ce catalizeaz formarea
legturii fosfodiester ntre nucleotide; factorul sigma (), avnd rol de iniiator
al catenelor de ARNm; factorul ro (), a crui funcie se manifest n
terminalizarea catenelor (ncheierea transcripiei).
12
Procesul de transcripie se realizeaz n mai multe etape succesive:

Iniierea transcrierii presupune legarea ARN polimerazei prin factorul
la matria de ADN, la nivelul unei secvene specifice de nucleotide, pe care
enzima le recunoate.

Elongaia (alungirea), etap care urmeaz dup iniiere, se realizeaz prin
intermediul enzimei minimale. n acest sens, ARN polimeraza trece ntr-o
conformaie specific transcrierii propriu-zise, prin disocierea de factorul , care
se reataeaz la o alt molecul a acesteia, permind iniierea unei noi molecule
de ADN.

Terminalizarea, ultima etap a procesului transcrierii, este indus de
matri, mai precis de o secven anumit de nucleotide de ADN, recunoscut ca
atare de ctre ARN polimeraz.

2.4. Codul genetic

Descifrarea la nivelul cromozomilor, n procesul translaiei, a informaiei
ereditare din secvenele de nucleotide ale ADN presupune existena unei
corespondene ntre limbajul acizilor nucleici i cel al proteinelor. Ansamblul
echivalenelor dintre grupele de baze azotate din ADN, transcrise n matria de
ARNm i aminoacizii din structura proteinelor constituie codul genetic (tabelul
2-1).
ntreaga cantitate de informaie genetic alctuiete mesajul genetic i este
concentrat n ADN sub forma simbolurilor chimice ale
dezoxiribonucleotidelor.
n sistemul ADN ARN proteine, codul genetic este redat, de fapt, cu
ajutorul celor patru baze azotate din ARNm (adenina A, guanina G, citozina
C, uracilul U), care alctuiesc simbolurile unui alfabet genetic.
Ciberneticianul George Gamow, n anul 1954, a fost primul care a ajuns, pe
cale teoretic, la concluzia c n molecula acizilor nucleici se gsete codificat
biochimic informaia genetic cerut de sinteza proteinelor. El a dedus, n mod
logic, c ntruct n ADN exist numai patru tipuri de baze azotate, iar n
proteine numai 20 de aminoacizi fundamentali, un aminoacid nu poate fi
codificat de o singur baz. De asemenea, pentru codificarea unui aminoacid nu
ajung nici combinaii de cte dou baze, numrul acestora fiind insuficient (4
2
=
16) fa de numrul total al aminoacizilor. De aici, Gamow ajunge la ipoteza c
un aminoacid este codificat de o succesiune de cte trei baze azotate (triplet) i,
n acest mod, numrul combinaiilor posibile de cte trei baze i anume 64 (4
3
)
devine mai mult dect suficient pentru codificarea celor 20 de aminoacizi.
13


Tabelul 2-1: Codificarea aminoacizilor de ctre ADN i transcripia pe ARNm

Nr
crt
Aminoacidul
Abreviere
Codul
ADN
Transcripia
ARNm
1.
Alanin Ala CGA CGG CGC
CGC
GCU GCC GCA
GCG
2.
Arginin Arg GCA GCT GCC
TCT GCG TCC
CGU CGA CGG
AGA CGC AGG
3.
Asparagin Asp TTA TTG AAU AAC
4.
Acid aspartic Ac.
Asp.
CTA CTG GAU GAC
5.
Cistein Cis ACG AC UGU UGC
6.
Glutamin Glm GTT GTC CAA CAG
7.
Acid
glutamic
Ac.
Glu.
CTT CTC GAA GAG
8.
Glicin Gli CCA CCG CCT
CCC
CGU GGC GGA
GGG
9.
Histidin His GTA GTG CAU CAC
10.
Izoleucin Ileu TAA TAG AAU AUC
11.
Leucin Leu AAT AAC GAA
GAG GAT GAC
UUA UUG CUU
CUC CUA CUG
12.
Lizin liz TTT TTC AAA AAG
13.
Metionin Met TAC A UG
14.
Fenilalanin Fen AAA AAG U UU UUC
15.
Prolin Pro GGA GGG GGT
GGC
CCU CCC CCA
CCG
16.
Serin Ser AGA AGC AGT
AGC TCA TCG
UCU UCG UCA
UCG AGU AGC
17.
Tirozin Tir ATA ATG UAU UAC
18.
Treonin Tre TGA TGG TGT
TGC
ACU ACC A CA
ACG
19.
Triptofan Tri ACC UGG
20.
Valin Val CAA CAG CT
CAC
GUU GUC GUA
GUG
21.
Triplei
terminali
ATT ATC ACT UAA UAG UGA


Grupele nucleotidice din ARN au fost numite cuvinte de cod sau codoni.
Informaia genetic, conservat n secvenele nucleotidice de ADN, este
14
convertit n secvene de codoni ARN i, mai departe, n secvenele de
aminoacizi, n proteine. Codul genetic este astfel un sistem biochimic, similar
unui dicionar bilingv care permite traducerea din limbajul acizilor nucleici n
limbajul proteinelor. Nucleotidele constituie literele dicionarului, iar codonii
i aminoacizii corespunztori formeaz cuvinte n limbajele respective.
Descifrarea corespondenelor codoni aminoacizi s-a fcut ntre anii 1961
1967 de ctre S. Ochoa i W. Nirenberg (.a).
Totodat s-a ajuns s se stabileasc urmtoarele caracteristici mai importante
ale codului genetic.
- Codul genetic este tripletic, adic elementele sale codonii - se compun din
secvene trinucleotidice; dicionarul codului genetic include n total 64 de
codoni diferii.
- Codul genetic este universal, deoarece la toate organismele vii, de la bacterii
i pn la mamiferele superioare, aminoacizii ce intr n alctuirea
proteinelor sunt codificai de aceiai codoni. De exemplu, codonul CUC
specific ncorporarea leucinei, att la eucariote, ct i la procariote.
Pn la structura sa actual codul genetic a trecut ntr-o ndelung evoluie.
Este sigur ns c, odat ajuns la un anumit stadiu, cel actual, codul genetic nu a
mai evoluat, rmnnd identic la organisme aflate pe orice treapt de evoluie
(ipoteza accidentului ngheat).
- Codul genetic este degenerat, n sensul c unui aminoacid i corespund mai
muli codoni; de exemplu, leucina este codificat de codonii UUA, UUG,
CUU, CUC, CUA, CUG. n fapt, trei aminoacizi sunt codificai de ase
codoni (serina, leucina, arginina), cinci aminoacizi de patru codoni (prolina,
treonina, valina, alanina, glicina), un aminoacid de trei codoni (izoleucina),
nou aminoacizi de doi codoni (fenilalanina, tirozina, histidina, glutamina,
asparagina, lizina, acidul aspartic, acidul glutamic, cisteina) i doar doi
aminoacizi sunt codificai de un singur codon (metionina i triptofanul).
- Codul genetic are caracter semisistematizat, deoarece litera a treia a
fiecrui codon prezint un caracter oscilatoriu (Wobble) n specificarea
aminoacizilor, ceea ce se coreleaz cu fenomenul de degenerare (Crick,
1966).
- Codul genetic relev trei codoni non sens (stop, care nu corespund nici
unui aminoacid). Este vorba de codonii ocru (UAA) ambr (UAG) i azur
(UGA), care joac ns rol direct n ncheierea sintezei polipeptidice.
- Codul genetic are grad redus de ambiguitate, adic fiecare codon nu
corespunde dect unui singur aminoacid i nu mai multora. Exist totui i
codoni ambigui, care conin informaia pentru mai muli aminoacizi, ca, de
exemplu, codonii UUG i GUG, care dac se gsesc la nceputul unui lan
polipeptidic codific metionina, iar dac sunt plasai n mijlocul catenei
codific leucina i, respectiv, valina.
15
- Codul genetic este nesuprapus (nonoverlaping code) sau fr acoperire,
n sensul c doi codoni succesivi nu au nicio nucleotid comun, deci literele
nu se suprapun.
- Codul genetic este fr virgule (commaless code), adic ntre doi codoni
succesivi nu apar nucleotide necodificatoare, deci nu intervin semne
separatoare sau pauze.

2.5. Translaia genetic

Translaia reprezint traducerea secvenei bazelor azotate din ADN,
transcrise n molecula de ARNm, n succesiuni de aminoacizi, adic n proteine
specifice (lanuri de aminoacizi).
Prin polimerizarea aminoacizilor iau natere macromolecule de polipeptide
(fig. 2-7).
ntruct lanul polipeptidic poate include zeci i chiar sute de aminoacizi din
cele 20 de tipuri, rezult un numr imens de combinaii posibile, n funcie de
natura i proporia aminoacizilor i de succesiunea lor n lan.
Ribozomii constituie sediul principal al sintezei proteinelor, viteza
procesului de biosintez a acestora fiind direct proporional cu cantitatea de
ribozomi. De asemenea, proteinele nou sintetizate se asociaz cu ribozomii, iar
biosinteza proteinelor n sistemele acelulare libere nu se poate svri dect n
prezena ribozomilor.
n procesul polimerizrii lanurilor polipeptidice, ribozomii (unitile
ribozomale) se constituie n agregate ribozomale, unite ntre ele prin molecule
de ARNm, i formeaz polizomii.
Procesul de translaie comport patru etape succesive, i anume: activarea
aminoacizilor, iniierea sintezei, alungirea catenei polipeptidice, ncheierea
sintezei.




Activarea aminoacizilor (AA) i formarea complexelor AA ARNt

Pentru a fi legai la ARNt, aminoacizii intr mai nti ntr-o reacie cu o
substan donatoare de energie adenozin-trifosfat (ATP). Reacia are loc n
prezena enzimei aminoacil-sintetaz, rezultnd aminoacid activat (legat de
adenozin-monofosfat AMP)

aminoacil sintetaz
AA + ATP ---------------------------- AA AMP + P P
16
n continuare, aminoacidul activat intr n reacie cu molecula de ARNt i
are loc legtura aminoacidului la acesta

aminoacil sintetaz
AA - AMP + ARNt--------------------- AA ARNt + AMP

Odat legat la ARN de transfer, aminoacidul va fi transportat la locul
sintezei proteice, unde va fi integrat n lanul polipeptidic codificat de gena
aflat n translaie.



Iniierea sintezei lanurilor polipeptidice

Se realizeaz prin decodificarea primului codon (unitate de codificare
format din trei nucleotide succesive din ARN
m
, care specific ce aminoacid
trebuie inclus n molecula proteic), denumit codon iniiator. La toate
organismele eucariote acesta este tripleta 5

AUG - 3

, care codific
aminoacidul metionin.
Imediat dup sinteza catenelor polipeptidice, gruparea formil a metioninei
este eliminat de ctre o enzim specific (la procariote), iar n 50% din cazuri
metionina nsi este ndeprtat.

Alungirea (elongaia) catenei polipeptidice

Reprezint etapa propriu-zis a reaciei de polimerizare a aminoacizilor n
polipeptide macromoleculare i se realizeaz prin adugarea progresiv, unul
cte unul, a aminoacizilor constitueni ai lanului polipeptidic n cretere.




ncheierea sintezei lanurilor polipeptidice

Lanurile polipeptidice au lungimi limitate, ceea ce reprezint o constant
specific i cu caracter ereditar. S-a dedus de aici c finalizarea sintezei proteice
prin sistarea ciclurilor de ncorporare a unor noi aminoacizi, urmat de
desfacerea complexului de elongaie, cu eliberarea ribozomilor i a ARN
m
, ar
trebui s se produc sub aciunea unui semnal codificator.
nc din anii 1964-1965 (Brenner i colab.) s-a stabilit c semnalele
terminatoare sunt aa numiii codoni nonsens UAA, UAG i UGA, care nu
corespund nici unui aminoacid.

17
2.6. Reglajul genetic

Mecanismele implicate n reglarea funcionrii i expresiei genelor, la
eucariote, sunt mult mai complexe i mai variate dect la procariote.
Avnd n vedere multicelularitatea unui organism eucariot, cu att mai mult
este necesar existena unei reglri care s asigure funcionarea corespunztoare
a fiecrei celule aflate ntr-un tot unitar, organismul.
Controlul se exercit la mai multe nivele, de-a lungul unei anumite ci de
funcionare a genelor:

a. Reglajul la nivelul transcripiei genelor din ADN n ARN mesager
(ARNm)

Este cea mai important cale de reglaj, deoarece la acest nivel se selecteaz
genele care trebuie s funcioneze la un moment dat, urmnd a fi transcrise n
ARNm.
Pentru a fi represate (inactivate), genele de la organismele eucariote sunt
cuplate cu proteine represoare, denumite histone, care asigur condensarea
puternic a cromatinei (substana fundamental a cromozomilor eucariotici, care
conine i ADN-ul), mpiedicndu-se astfel funcionarea lor. Activarea genelor
care trebuie s funcioneze la un moment dat se face n mod specific, prin
intervenia altor proteine, cele activatoare, denumite nonhistone.
O alt modalitate de reglaj genetic la nivelul transcripiei const n metilarea
parial a ADN, i anume, genele care conin n structura lor nucleotide cu
citozin metilat nu pot fi transcrise, deci nu funcioneaz.


b. Reglajul maturrii moleculelor de ARNm

La eucariote, gena este alctuit dintr-o alternan de poriuni informaionale
(exoni) i poriuni noninformaionale (introni). n molecula de ARNm se
copiaz att exonii, ct i intronii. Moleculele funcionale de ARNm (cele care
trebuie translatate n proteine) trebuie s conin numai exonii, aa nct reglajul
genetic la acest nivel trebuie s asigure eliminarea intronilor i asamblarea
exonilor, proces care are loc n nucleul celulei, rezultnd ARNm matur.

c. Reglajul de transport

Acesta const n selectarea din rndul moleculelor de ARNm mature care
vor fi trecute din nucleu n citoplasma celulei, n vederea decodificrii ulterioare
n procesul translaiei.

18
d. Reglajul la nivelul translaiei

Constnd n selectarea din rndul moleculelor de ARN
m
existente la un
moment dat n citoplasm a acelora care vor fi translatate n proteine.

e. Reglajul degradrii moleculelor de ARNm

Const n selectarea i degradarea moleculelor de ARNm care au fost
decodificate i translatate n proteine. Acest proces este necesar mai ales pentru
acele molecule de ARNm care nu vor mai fi refolosite imediat sau deloc (dac
refolosirea unei molecule de ARNm s-ar face dup un interval de timp relativ
mare, pn n momentul respectiv exist pericolul modificrii nedorite, prin
mutaie, a informaiei genetice deinute, aa nct degradarea acestor molecule
de ARNm constituie o modalitate eficient de prentmpinare a unor astfel de
evenimente nedorite.

Alte posibiliti i mecanisme de reglaj genetic la eucariote

- Reglajul genetic la nivelul unor segmente cromozomiale
Dei fiecare celul somatic a organismului deine aceeai informaie
genetic, genele funcioneaz diferit de la esut la esut. Astfel, o anumit gen
nu va funciona niciodat n unele esuturi, dar va fi activat atunci cnd trebuie
i ct trebuie ntr-un esut anume. n acest context se nelege ca un segment
cromozomial care conine o anumit gen poate fi permanent represat n
anumite esuturi, dar ntr-un esut specific zona respectiv va fi fie represat, fie
activ, n funcie de necesitatea producerii unei proteine necesar n esutul
respectiv.

- Reglajul genetic la nivelul unor cromozomi ntregi
Dac genele de pe un ntreg cromozom trebuie s fie la un moment dat
represate, se nelege c la nivelul cromozomului respectiv trebuie s acioneze
mecanisme specifice care s mpiedice transcripia genelor.
Un exemplu n acest sens l reprezint la femelele de la mamifere inactivarea
tuturor genelor de pe unul din cei doi cromozomi X, proces care are loc prin
heterocromatinizarea (condensarea) cromozomului respectiv i transformarea lui
n cromatin sexual (corpuscul intens condensat, de form triunghiular sau
plan convex, ataat n interfaz de membrana nuclear). Vor rmne astfel
active doar genele de pe cel de-al doilea cromozom X.

- Reglajul genetic la nivelul ntregului genom
n funcionarea lor, genele sunt influenate i de ctre factorii de mediu. n
anumite condiii de mediu o gen poate funciona ntr-un fel, n alte condiii de
mediu altfel.
19
Reglajul genetic la nivelul ntregului genom este un reglaj pe termen lung
i se realizeaz prin interaciuni multiple i complexe ntre gene, cromozomi i
citoplasma celular.
Prin reglaj pe termen lung se controleaz, de exemplu, sinteza diverilor
hormoni n organismele animale.


2.7. Cromozomii morfologie i structur
La organismele eucariote, cea mai mare cantitate de ADN se gsete n
nucleu, i mai precis, n nite formaiuni filiforme numite cromozomi (fig. 2-8).



Fig. 2-8: De la ADN la cromozomi

Cromozomii sunt constitueni fundamentali ai nucleului, care au capacitate
de autoreproducere i, la eucariote (specii cu nucleu individualizat), apar, de
regul, doar n timpul diviziunii celulare, colorndu-se specific cu coloranii
bazici (chroma = culoare, soma = corp).
Cromozomul relev o morfologie dinamic, variabil n diferite faze ale
ciclului celular. Astfel, n interfaz el se prezint despiralizat i nu este
detectabil cu microscopul optic. Totui, n acest stadiu, cromozomul se
dovedete funcional, deoarece acum are loc dublarea cantitii de acid
dezoxiribonucleic (ADN), unul din principali si componeni. n profaz, ca
prim faz a diviziunii celulare, filamentele cromozomiale ncep s se
spiralizeze i s condenseze, apoi ajungnd s se individualizeze sub form de
20
corpusculi compaci (fig. 2-8). Pn la sfritul metafazei i nceputul anafazei,
cromozomul este format din dou uniti structurale i funcionale, difereniate
n sens longitudinal, numite cromatide. Cromatidele se unesc ntr-o zon
comprimat a cromozomului numit centromer.
Cnd centromerul ocup o poziie median, determinnd o mprire a
cromozomului n dou brae egale, cromozomul se numete metacentric.
Situarea centromerului spre una din extremiti (submedian sau subterminal)
face ca braele s fie inegale iar cromozomul se numete submetacentric (dac
centromerul este submedian) sau acrocentric (dac centromerul este
subterminal). Cromozomii cu centromerul terminal i care au un singur bra se
numesc telocromozomi (cromozomi telocentrici sau monobrachiali. Denumirea
deriv de la noiunea de telomer care indic regiunea terminal captul unui
cromozom normal unipolar la eucariote).
n includerea unui cromozom n funcie de poziia centromerului n una sau
alta dintre cele trei tipuri morfologice se folosesc indicaiile rezultate din
formulele: r = l / s sau d = l s,

n care:
r este raportul;
l lungimea braului lung al cromozomului;
s lungimea braului scurt al cromozomului;
d diferena.

Astfel, cnd centromerul este situat n punctul median, deci cnd r = 1,
braele cromozomului sunt perfect egale, sau cnd centromerul este situat n
regiunea median, valoarea raportului r = 1.0 1.7, deci cnd braele sunt
sensibil egale, cromozomul este metacentric (i se simbolizeaz cu M, respectiv
m).
Cnd centromerul este situat spre unul din capetele cromozomului
determinnd dou brae inegale, el va fi clasificat submetacentric (simbolizat
sm), la o valoare a raportului dintre brae cuprins ntre limitele r = 1.7 3.0 i
subtelocentric (simbolizat st) la o valoare a raportului dintre brae cuprins ntre
limitele r = 3.0 7.0. n cazul n care centromerul ocup o poziie n regiunea
terminal determinnd formarea unui bra foarte lung i a unui bra extrem de
scurt, deci r = 7.0 - , cromozomul este inclus n categoria cromozomilor
acrocentrici (simbolizat t).
La telocromozomi sau telocentrici (simbolizai cu T), la care centromerul
este situat terminal, iar cromozomul este alctuit dintr-un singur bra, raportul
braelor r = .
La stabilirea tipurilor morfologice de cromozomi se utilizeaz i indicele
centromeric, care reprezint raportul ntre braul scurt i lungimea total a
cromozomului raportat la 100. Indexul centromeric poate avea valori ntre 0.0 i
50.0.
21
nfiarea cromozomilor n metafaza diviziunii celulare, dat de form i
mrime, la care se adaug numrul acestora (n celule somatice) constituie ceea
ce se numete cariotip, iar reprezentarea grafic a acestuia indicnd mrimea
relativ a cromozomilor, poziia centromerului, a sateliilor i a strangulrilor
secundare este cunoscut sub numele de idiogram.
Ca numr, cromozomii variaz de la o specie la alta n limite foarte mari.
Astfel la viermele nematod Parascaris equorum exist 2 cromozomi (o pereche
de cromozomi omologi), iar la unele specii de fluturi, crabi, peti, numrul
cromozomilor este de ordinul sutelor (tabelul 2-2).

Tabel 2-2: Numrul diploid de cromozomi la unele specii de animale
Specia Denumire latin Nr.
cromozomi
Musculia de oet Drosophila melanogaster 8
Albin Apis melifera 32
Vierme de mtase Bombyx mori 56
Crab Eupagurus ochotensis 254
Crap Cyprinus carpio 104
Gin Gallus domesticus 78
oarece Mus musculus 40
obolan Rattus norvegicus 42
Hamster auriu Misocricetus auratus 44
Cine Canis familiaris 78
Pisic Felis catus 38
Porc Sus scrofa 38
Capr Capra hircus 60
Vac Bos taurus 60
Oaie Ovis aries 54

Chiar dac la unele specii este prezent acelai numr de cromozomi (capr i
vac, pisic i porc, cine i gin), morfologia lor este deosebit.
Substana cromozomal fundamental este cromatina (de la grec. chroma =
culoare), numit astfel deoarece se coloreaz fixnd rapid colorani bazici.
Cromatina nu este omogen, fiind constituit din eucromatin i
heterocromatin. Eucromatina este substana cromozomal format din acid
dezoxiribonucleic (ADN) i proteine, care se coloreaz puternic n timpul
diviziunii celulare iar n interfaz nu se coloreaz sau se coloreaz slab.
Heterocromatina constituie substana cromozomal care se coloreaz puin n
timpul diviziunii, dar, n schimb, se coloreaz n ntreg ciclul celular, devenind
mai vizibil tocmai n interfaz.
n compoziia chimic a cromatinei intr ADN n proporii nsemnate,
depite ns de cuantumul de participare al proteinelor histonice i nehistonice.
ADN rmne ns componenta esenial, structural i funcional a
cromozomului eucariot.
22



Cuprins


1. Introducere ......................................................................................................................... 1
1.1. Genetica tiina ereditii i variabilitii ................................................................ 1
1.2. Scurt istoric al geneticii.............................................................................................. 1
2. Aparatul i structurile biochimice ale ereditii ................................................................. 4
2.1. Acidul dezoxiribonucleic ........................................................................................... 4
2.2. Replicaia ADN.......................................................................................................... 8
2.3. Transcripia genetic .................................................................................................. 9
2.4. Codul genetic............................................................................................................ 13
2.5. Translaia genetic.................................................................................................... 16
2.6. Reglajul genetic........................................................................................................ 18
2.7. Cromozomii morfologie i structur ..................................................................... 20





23