UNIVERSITATEA DIN BUCURETI

FACULTATEA DE CHIMIE
COALA DOCTORAL N CHIMIE

TEZA DE DOCTORAT
Rezumat

Conductor tiinific
Prof. Dr. Luminia Vldescu

Doctorand
Untea Arabela Elena

2012

UNIVERSITATEA DIN BUCURETI

FACULTATEA DE CHIMIE
COALA DOCTORAL N CHIMIE

TEZ DE DOCTORAT
Rezumat
STUDIU CHIMICO - ANALITIC AL
CORELAIILOR NTRE CONINUTUL DE
MICROELEMENTE DIN ORGANISMUL
ANIMAL I CONCENTRAIILE ACESTORA
DIN DIETELE DE HRAN MBOGITE CU
PLANTE I EXTRACTE DIN PLANTE

Conductor tiinific
Prof. Dr. Luminia Vldescu

Doctorand
Untea Arabela Elena

2012

CUPRINS
Capitolul 1. Microelemente eseniale...... 6
1.1. Valoarea biologic a elementelor minerale eseniale pentru organismul animal6
1.2.
Modaliti de asigurare a microelementelor eseniale la purceii nrcai .........................7
Capitolul 2. Folosirea metodelor spectrometrice pentru determinarea coninutului de
microelemente din probe vegetale i probe biologice de origine animal................................9
2.1.
Determinarea coninutului de microelemente din probe vegetale .9
2.2.
Determinarea coninutului de microelemente din probe biologice de origine
animal..........................................................................................................................................10
2.3.
Sursele de microelemente utilizate pentru suplimentarea raiilor de hran a
animalelor......................................................................................................................................10
Capitolul 3. Aspecte practice ale studiului privind corelaia dintre coninutul de
microelemente din organismul animal i concentraiile acestora din dietele de hran
mbogite cu plante si extracte din plante...............................................................................11
3.1.
Luarea i pregtirea probelor pentru analiz ....11
3.2.
Stabilirea condiiilor optime de lucru pentru determinarea microelementelor Fe, Cu, Mn,
Zn din probe biologice..................................................................................................................12
3.3.
Organizarea experimentelor de nutriie animal...............................................................12
Capitolul 4. Validarea metodelor de determinare a microelementelor Fe, Cu, Mn, Zn din
probe biologice............................................................................................................................13
4.1.
Alegerea metodei de aducere n soluie a microelementelor Fe, Cu, Mn, Zn prin
spectrometrie de absorbie atomic cu flacar ....13
4.2.
Verificarea n laborator a metodei de determinare a microelementelor Fe, Cu, Mn, Zn
prin spectrometrie de absorbie atomic cu flacar......................................................................13
4.3.
Validarea metodei de dezagregare cu microunde............................................................14
4.4. Calcularea incertitudinii de msurare la determinarea microelementelor Fe, Cu, Mn, Zn din
probe de material biologic prin spectrometrie de absorbie atomic cu flacar, dupa dezagregare
cu microunde................................................................................................................................16
4.5. Studiu interlaboratoare pentru validarea metodei de determinare a microelementelor Fe, Cu,
Mn, Zn din probe de natur vegetal i stabilirea coninutului de microelemente din
plante............................................................................................................................................17
Capitolul 5. Studiu chimico- analitic al corelaiei ntre coninutul de microelemente din
organismul animal i concentraiile acestora din dietele de hran mbogite cu extracte
vegetale sau plante de cultur.................................................................................................18
5.1. Studiu chimico- analitic al corelaiei ntre coninutul de microelemente din organismul
animal
i
concentraiile
acestora
din
dietele
de
hran
mbogite
cu
inulin..........................................................................................................................................18

5.2. Studiul corelaiei ntre coninutul de microelemente din organismul animal i concentraia
acestora din dietele de hran mbogite cu un amestec pe baza de topinambur i frunze de
ctin...........................................................................................................................................20
Capitolul 6. Studiu chimico- analitic al corelaiei ntre coninutul de microelemente din
organismul animal i concentraiile acestora din dietele de hran mbogite cu plante din
flora spontan............................................................................................................................23
6.1. Determinarea continuului de Fe, Cu, Mn, Zn din oregano, afin si colul babei, provenite
din flora spontan........................................................................................................................23
6.2. Studiul corelaiei ntre coninutul de microelemente din organismul animal i concentraiile
acestora din dietele de hran mbogite cu oregano...................................................................24
6.3. Studiul corelaiei ntre coninutul de microelemente din organismul animal i concentraiile
acestora din dietele de hran mbogite cu amestecuri
de plante din flora
spontan.......................................................................................................................................29
Concluzii.....................................................................................................................................34
Bibliografie (selecie din tez)....................................................................................................36

INTRODUCERE
Scopul tezei de doctorat a fost de a caracteriza din punct de vedere chimico-analitic mai multe
tipuri de probe biologice de origine vegetal i animal n vederea evalurii unor corelaiilor existente
ntre coninutul de microelemete din raiile de hran i regsirea acestora n organismul animal. In
mod concret, s-au evaluat aceste corelaii n cazul suplimentrii raiilor purceiilor nrcai cu anumii
fitoaditivi specii i amestecuri de plante din flora spontan i de cultur) n scopul mbuntirii
statusului mineral in organismul animal, precum i al protejrii mediului prin reducerea cantitilor de
premixuri minerale folosite. Fitoaditivii (aditivii fitogenici) folosii ca suplimente n hrana animalelor
sunt plante sau produi derivai din plante care sunt nglobati n raiile furajere cu scopul de a
mbunti productivitatea animalelor sau/i pentru a crete calitatea alimentelor obinute pornind de
la aceste animale. Premixurile minerale (amestecuri de substane anorganice) sunt folosite n mod
curent ca suplimente n hrana animalelor.
Prezena microelementelor n hrana animalelor este indispensabil asigurrii performanelor
de cretere i sntate. Elemente cum sunt Cu, Fe, Mn i Zn trebuie adugate n hrana animalelor
crescute n ferme de tip convenional. Problema este c sursele sub care se adaug, n special oxizi,
sulfai i alte combinaii anorganice, sunt surse cu biodisponibilitate mic a microelementelor ceea ce
face ca o mare cantitate de microelemente ingerate s ajung direct n dejecii. De altfel, din cauza
biodisponibilitaii mici se folosesc cantiti mari de astfel de substane anorganice pentru a fi asigurat
atingerea necesarului. Problema este acut n cazul cuprului i zincului care sunt metale grele, iar
acumularea lor n sol afecteaz grav calitatea solului i a apelor freatice i de suprafa.
Exist o foarte mare varietate de compui vegetali utilizai n hrana animalelor pentru care au
fost studiate proprietaile antioxidante, antibacteriene dar i potenialul vitaminic sau mineral. Motivul
pentru care s-a dezvoltat domeniul fitoaditivilor furajeri este interzicerea utilizrii antibioticelor n
hrana animalelor, ca urmare a identificrii riscului apariiei rezistenei bacteriilor la aciunea
antibioticelor.
Pentru evaluarea efectelor unor suplimente de aditivi fitogenici n raia de hran, asupra
organismului animal, au fost studiate n cadrul prii experimentale a tezei de doctorat: un extract de
plant (inulina obinut din cicoare), dou plante de cultur (topinambur i ctin, recoltate din serele
unui productor de suplimente alimentare) i trei plante recoltate din flora spontan (oregano, afin i
colul babei). S-au desfaurat o serie de experimente de nutriie pe purcei recent ntrcai (2
experimente a cte 2 loturi cu 4 purcei / lot; 2 experimente a cte 3 loturi i 4 purcei / lot; 1 experiment
n ferm, cu 2 loturi i 8 purcei / lot), n care aceste plante au fost incluse n raiile animalelor. n
cadrul acestor experimente, s-au recoltat probe de materii vegetale (plante, nutre combinat) i probe
de origine animal (ser, organe, fecale, urin,) care au fost analizate, au fost determinate concentraiile
unor elemente metalice i pe baza rezulatelor obinute au fost stabilite corelaii ntre coninutul de
microelemente din organismul animal i cel din plantele folosite ca adausuri n hran.

Capitolul 1

MICROELEMENTE ESENIALE
1.1. VALOAREA BIOLOGIC A ELEMENTELOR
ESENIALE PENTRU ORGANISMUL ANIMAL

MINERALE

Substanele minerale se gasesc att n nutreuri, ct i n corpul animalelor, n cantiti diferite.

Ele sunt prezente n esuturile biologice i se regsesc n cenua obinuta prin arderea acestora.
Att macro ct i microelementele se absorb mai bine cnd sunt sub forma unor sruri relativ
uor solubile n mediul acid din stomac: carbonai, sulfai, oxizi. Substanele minerale din furajele
vegetale au un coeficient de asimilare (absorbie) mai mic n comparaie cu srurile anorganice
administrate animalelor sub form de suplimente minerale (amestecuri, premixuri) nglobate n
nutreurile combinate.
n cazul existenei unor tulburri de nutriie mineral, pentru o diagnosticare precis a
cauzelor i efectelor, de multe ori, se recurge la studii de bilan mineral, asociate cu observaii de
producie i analize privind valorile coninutului mineral n ser i diferite esuturi (organe, piele).
Parametrii indicatori pentru metabolismul mineral sunt: coeficenii de absorbie, concentraia
elementelor minerale n excret i esuturile de depozitare, interaciile cu alte substane nutritive etc.
Valorile acestor parametri arat dac nivelul de substane minerale prezente n hran este unul
adecvat (conform cerinelor i normelor), adic, dac se asigur cantiti corespunzatoare de elemente
minerale n esuturi pentru dezvoltarea animalului i pentru obinerea produciilor specifice speciei i
vrstei. Rezult c analiza coninutului mineral poate constitui de multe ori un indiciu pertinent
asupra satisfacerii cerinelor organismului n substane minerale.
Funciile biologice ale fierului, cuprului, manganului i zincului
Principalele funcii ale fierului sunt legate de participarea la transportul sanguin al oxigenului
i n respiraia tisular. Fierul este component al hemoglobinei i al celulelor roii din snge. Se
gsete n muchi sub form de mioglobin, n ser ca transferin, n placent ca uteroferin, n lapte
ca lactoferin i n ficat ca feritin i hemosiderin (Zimmerman, 1980). De asemenea, joac un rol
important n organism n calitatea sa de component al mai multor enzime metabolice.
Rolul fiziologic al cuprului, component al ceruloplasminei, const n participarea la
hematopoez, condiionnd absorbia i utilizarea fierului n sinteza porfirinei III, a hemului i a
enzimelor cu fier. n absena cuprului in organism s-a constatat apariia unei anemii care nu cedeaz
la administrarea fierului, ci numai prin asocierea lui cu cuprul.
Rolul metabolic al manganului const n participarea lui n diferite sinteze i sisteme
enzimatice: peptidaze, fosfataze, arginaze etc. Manganul particip la funcia atoxic a fierului, la
potenarea vitaminei C i la efectul hipoglicemiant al adrenalinei (Prvu, 2003).

Zincul joac un rol foarte important n structura unor enzime, ca: dehidraza carbonic (0,330,34 % zinc), uricaz (0,1% zinc), carboxipeptidaz pancreatic, alcooldehidrogenaz (din drojdii),
tiroxinaz, fosfataz intestinal, a cror activitate o favorizeaz. Are rol funcional n metaloenzime
cum sunt hidrolaza, liaza, izomeraza, transferaza etc. (Han, 2009). Zincul inactiveaz unele enzime,
ca: pepsina, tripsina etc. El are rol de potenare a unor hormoni, de exemplu insulina i a vitaminei B1
(Wash, 1994).
Cerinele de microelemente ale purceilor nrcai
n nutriia mineral, pentru a defini aportul unui element esenial ntr-o raie alimentar,
trebuie rspuns, n primul rnd, la ntrebrile ct? i n ce form? Marea dificultate n gsirea
rspunsurilor la aceste ntrebri se datoreaz faptului c recomandrile trebuie s se integreze strns,
n complexul de factori care influeneaz procesul de nutriie: complexitatea raiei i a sursei de
minerale, nivelul energetic al hranei, temperatura ambiant i factorii de stres (Criste, 2000).
Nutriionitii consider c este nevoie de o marj de siguran ntre necesar i recomandrile
practice, recomandnd o risip economic de elemente minerale (Diaz, 1986).
Lipsa datelor experimentale care s fundamenteze diferite sisteme de recomandri, a dus la
apariia unor diferenieri ntre noiunile de: cerin, recomandare i suplimentare (Paullauf, 1989). De
obicei, aporturile recomandate i indicate n tabele, pentru fiecare specie i categorie de animale,
reprezint un multiplu de 2-5 ori al valorii cerinelor nete determinate.
Pentru elementele minerale eseniale, exist cerine de ntreinere i producie clar stabilite
pentru aproape toate speciile i prin urmare exist i preocuparea nutriionistilor de a asigura
atingerea cerinelor prin includerea amestecurilor de sruri ale acestor minerale n nutreurile
combinate.
Cerinele de microelemente publicate n NRC 1998, pentru diferite categorii de porci sunt
prezentate n tabelul 1.1.
Tabelul 1.1. Cerinele de microelemente pentru porci, conform NRC 1998
Microelement
Greutate corporal
3-5 kg
5-10 kg 10-20 kg
20-50 kg 50-80 kg
Fe (mg / kg)
100
100
80
60
50
Cu (mg / kg)
6
6
5
4
3.5
Mn (mg / kg)
4
4
3
2
2
Zn (mg / kg)
100
100
80
60
50

80-120 kg
40
3
2
50

1.2. MODALITI DE ASIGURARE A MICROELEMENTELOR

ESENIALE LA PURCEII NRCAI
Chiar dac suntem n secolul XXI, nc nu sunt stabilite nivelele optime de microelemente
care trebuie suplimentate/adugate raiei de baz. Se cunosc cerinele fiziologice, dar nu se tie exact
ct mai trebuie suplimentat/adugat, fa de coninutul existent n furajele componente ale raiei de

baz, pentru obinerea de producii performante din punct de vedere cantitativ, calitativ, economic i
ecologic.
Beneficii ale suplimentrii raiei de baz a purceilor nrcai cu microelemente eseniale
La purceii nrcai (15-30 Kg) principalul obiectiv n stabilirea cerinelor este acela al
optimizrii performanelor de cretere pe perioada primelor sptmni dup nrcare. Este o perioad
n care pot s apar probleme serioase legate de: scderea sporului n cretere, consumuri mai mici de
furaje, creterea morbiditii i a mortalitii.
Pe lng ali factori de stres care se instaleaz n perioada postnrcare, trecerea de la laptele
matern la o hrnire solid constituie o schimbare major n viaa unui purcel. n practic,
suplimentarea hranei animalelor cu microelemente se face conform recomandrilor productorilor de
premixuri (concentrate, amestecuri) minerale. Aceste recomandri de cele mai multe ori nu se
bazeaz pe date tiinifice care s in cont de complexul de factori prezentat mai sus. Practic sunt de
2 - 3 ori mai mari dect cerintele stabilite tiinific.
Biodisponibilitatea elementelor minerale din sursele de suplimentare a hranei
Dup evaluarea cantitii de microelement prezent n hran, biodisponibiliatea acestuia este
cel mai important aspect n asigurarea organismului cu minerale la nivelul cerintelor. Cheia micorrii
cantitilor de minerale ingerate de animale este aceea a mririi biodisponibilitii lor din hran. Orice
surs de microelemente poate fi evaluat prin intermediul biodisponibilitii. Pentru aceasta este
necesar s se realizeze cel puin studiul absorbabilitii acestuia, concentraiile n snge i organele de
depozit, dar i performanele zootehnice.
In vivo, sunt folosite cteva metode pentru determinarea biodisponibilitii microelementelor.
Uneori, se folosesc studii de bilan, dar pentru c elementele sunt slab absorbite, mici erori de
estimare a ingestei sau excretei pot conduce la mari erori n bilantul final. Alt metod de estimare a
biodisponibilitii este determinarea concentraiei microelementelor n unele organe de depozit.

Capitolul 2

FOLOSIREA METODELOR SPECTROMETRICE PENTRU

DETERMINAREA CONINUTULUI DE MICROELEMENTE
DIN PROBE VEGETALE I PROBE BIOLOGICE DE ORIGINE
ANIMAL
Unele elemente minerale sunt eseniale pentru sntatea i productivitatea animalului i au
un rol nutriional i biochimic bine definit. Exist i o alt categorie de elemente minerale care
apar n hran i esut animal n cantiti foarte mici i care, la nivelul actual de cunoastere, nu au
rol nutriional. Aceste elemente sunt denumite, convenional, contaminani.

2.1. DETERMINAREA CONINUTULUI DE MICROELEMENTE

DIN PROBE VEGETALE
Determinarea elementelor minerale in probele de nutre este ingreunata de faptul ca ele au
o matrice organic complex care conine specii chimice a cror concentratie poate varia de la
nivelul urmelor pn la acela de componeni majori. Aceast fapt a impus dezvoltarea unei game
largi de metode analitice (Emons, 2006): spectrometrie de absorbie atomic (cu flacar - FAAS
sau cuptor de grafit - GFAAS), spectrometria de emisie optic cu plasm cuplat inductiv (ICPOES), spectrometria de mas cu plasm cuplat inductiv (ICP-MS) i voltametria. Totui,
spectrometria de absorbie atomic este considerat a fi metoda de referin
(regulament152/2009) pentru analiza microelementelor din nutreuri. De aceea este folosit ca
baz de comparaie pentru alte metode de analiz.
Dezagregarile pe cale uscat, umed i cu microunde sunt cele mai folosite metode de
aducere in soluie a analiilor din matrice organic n vederea determinrii de microelemente din
probe biologice (Tuzen, 2007).
In tabelul 2.3. sunt nscrise cteva referinte bibliografice privind compararea metodelor
de aducere n soluie a microelementelor din diferite tipuri de probe.
Tabel 2.3. Studii care au implicat compararea metodelor de dezagregare n vederea
determinarii microelementelor prin metode spectrometrice
Materialul
Microelementele
Metoda de
Bibliografie
analizat
determinate
determinare
Concentrat de sup Cu, Zn, Mn, Fe, Al
FAAS
Soylac, 2006
Condimente
Cu, Cd, Pb, Zn, Mn, Fe, Cr, Ni FAAS
Soylac, 2010
Ceai
Zn, Cu, Ni
FAAS
Soylac, 2007
Alimente
Cd, Fe, Pb, Zn
AAS
Da Col, 2009
Biscuii
Fe, Zn
FAAS
Doner, 2004

2.2. DETERMINAREA CONINUTULUI DE MICROELEMENTE DIN

PROBE BIOLOGICE DE ORIGINE ANIMAL
Metode de aducere a analiilor n soluie
Cateva Studii privind determinarea unor microelemente din probe biologice prin metode
spectrometrice sunt trecute in tabelul 2.11.
Tabelul 2.11. Studii privind determinarea unor microelemente din probe biologice
Probe biologice
Microelemente studiate
Metoda de
Bibliografie
determinare
Carne de gina
Cu, Cd, Pb, Se, Mn, As, AAS
Uluozlu, 2009
Cr, Ni, Co, Al, Zn, Fe
Pete
Cu, Fe, Mn, Zn, Se, Cr
AAS
Tuzen, 2009
Ficat
Cu, Zn
FAAS
Mesko, 2006
Rinichi de porc, ficat bovin Cd, Cu, Pb
FAAS
Pereira-Filho, 2002
Lapte
Cu, Fe, Pb
FAAS
Florian, 2001
Crab
Cd, Cr, Cu, Fe, Mn, Ni, Zn ICP-OES
Mutlu, 2011

2.3. SURSELE DE MICROELEMENTE UTILIZATE PENTRU

SUPLIMENTAREA RAIILOR DE HRANA A ANIMALELOR
Surse convenionale - srurile anorganice
Pe pia exist un numr extrem de mare de amestecuri de sruri minerale destinate
nutriiei animale. ntr-o serie de ri ale Uniunii Europene, exist o legislaie restrictiv fa de
folosirea unor amestecuri minerale la nivele ridicate i compuse din surse anorganice, surse
suspectate ca fiind poteniali ageni de poluare (Nicholson, 2008).
Surse neconvenionale - aditivii fitogenici in hrana animalelor
n ultimii 50 de ani microelemente precum Cu i Zn au nceput s fie folosite, pe scar
larg i la nivele foarte ridicate (Carlson, 1999; Hill, 2001; Poulsen, 1995) n hrana purceilor n
locul antibioticelor cu rol de stimulatori de cretere. Folosirea antibioticelor n hrana animalelor
este interzisa in UE datorita preocuprilor privind instaurarea rezistenei bacteriilor la om i
animale (Lalles, 2007). Insa si practica folosirii nivelelor ridicate de microelemente are un
impact negativ i de lung durat asupra mediului (sol i apa freatic) din jurul marilor ferme
(Nicholson, 2008). n acest context se nscriu cercetrile privind utilizarea plantelor/ aditivilor
fitogenetici. Se ridic ns ntrebarea dac aceste plante pot s fie i o surs natural de
microelemente (Rozica, 2005), biodisponibile la nivel intestinal, astfel ca balastul de mineral
excretat s fie diminuat.

10

Capitolul 3

ASPECTE PRACTICE ALE STUDIULUI PRIVIND CORELAIA

DINTRE CONINUTUL DE MICROELEMENTE DIN
ORGANISMUL ANIMAL I CONCENTRAIILE ACESTORA
DIN DIETELE DE HRAN MBOGITE CU PLANTE I
EXTRACTE DIN PLANTE
3.1. LUAREA I PREGTIREA PROBELOR PENTRU ANALIZ
n vederea realizrii experimentelor in cadrul studiului privind corelaiile dintre coninutul de
microelemente din organismul animal i concentraiile acestora n raiile suplimentate cu plante sau
extracte din plante, a fost necesar organizarea corecta a etapelor de lucru, n Laboratorul de Chimie
Analitic i Analize instrumentale in vederea determinarii concentraiilor de microelemente Fe, Cu,
Mn, Zn dintr-un numar foarte mare de probe biologice de tipuri diferite ct i pentru organizarea
experimentelor de nutriie animala.
Luarea i pregtirea probelor de material vegetal
Materialul vegetal (plantele folosite ca suplimente n experimentele de nutriie) recoltat i
uscat natural a fost mrunit prin tiere, mcinat n moara i cernut prin sita cu orificii ptrate cu
latura de 1 mm, conform prevederilor din Regulamentul (CE) nr. 152/2009. Probele prelevate din
materiile prime furajere componente ale raiei i din nutreul combinat, au fost prelevate folosind
eantioane colective (10 kg) reduse prin metoda sferturilor la eantioane de 1 kg.
Probele de plante, extracte de plante, materii prime furajere, nutreuri combinate, uscate i
mcinate au fost aduse n soluie prin dezagregare cu microunde.
Luarea i pregtirea probelor de material biologic de origine animal
Probele de origine animal (fecale, urin, ser, organe) recoltate pe parcursul desfurrii
experimentelor de nutritiie au fost prelevate astfel:
Pe parcursul experimentelor, fecalele au fost recoltate cantitativ, o dat pe zi. La sfritul
perioadei de bilan (o sptmn), probele prelevate au fost cntrite i omogenizate foarte bine
pentru a se constitui probe medii sptmnale. Probele de fecale uscate i mcinate au fost aduse n
soluie prin dezagregare cu microunde.
Urina a fost recoltat o dat pe zi i s-a nregistrat cantitatea eliminat. O cot de 10% din
cantitatea de urin eliminat a fost depozitat n sticle de plastic cu dop nfiletat, n care s-a adugat o
soluie de acid sulfuric 0,1 N astfel nct s asigure un pH de 2-4.
Serul - La nceputul i la finalul experimentelor, de la fiecare animal aflat n studiu, s-au
recoltat cte 7 mL de sange, din vena cav anterioar, n tuburi cu heparin.

11

Organe - La ncheierea experimentului, purceii au fost sacrificai conform prevederilor din

Legea privind protecia i bunstarea animalelor (Dir. 93/119/CCE, Ordin 180/2006). La fiecare
purcel sacrificat s-au recoltat probe de organe (ficat, rinichi, splina, inima, plmn, creier).
Pentru stabilirea metodei optime de aducere n soluie a analiilor din probele de organe, s-a
efectuat un studiu comparativ al rezultatelor obinute folosind trei metode de dezagregare: pe cale
uscata, pe cale umeda si cu microunde. Acest studiu s-a fcut pe ficat folosind un material de referin
certificat: Bovine liver CRM BCR 185R. In urma comparrii rezultatelor experimentale a fost
aleas pentru dezagregarea probelor biologice, metoda cea mai eficient din punct de vedere analitic
si economic, dezagregarea cu microunde.

3.2.

STABILIREA CONDIIILOR OPTIME DE LUCRU PENTRU

DETERMINAREA MICROELEMENTELOR Fe, Cu, Mn, Zn DIN
PROBE BIOLOGICE

n vederea stabilirii condiiilor de lucru pentru determinrile cantitative ale microelementelor

Fe, Cu, Mn, Zn din probe biologice de material vegetal i organic prin spectrometrie de absorbie
atomic cu flacr, s-au folosit reactivi de puritate analitica i aparatura de laborator corespunzatoare
scopului stabilit. Pentru transvazare, diluii i stocare s-a folosit sticlarie clasa A.

3.3.

ORGANIZAREA
ANIMAL

EXPERIMENTELOR

DE

NUTRIIE

Tehnica experimental folosit n studiul privind absorbia i utilizarea microelementelor Fe,

Cu, Mn, Zn din diferite surse vegetale utilizate n hrana purceilor dup nrcare, s-a bazat pe
folosirea cutilor de digestibilitate n experimentele de tip microtest i a boxelor n experimentele de
tip macrotest.
Experienele de tip microtest, s-au desfurat pe purcei masculi metii n stare fiziologic
corespunztoare, sntoi cu o capacitate normal de ingerare a hranei. Numrul de purcei/ lot a fost
de 4 purcei/lot. Experimentele au durat aproximativ 30 de zile, n funcie de perioada n care purceii
nrcai au atins greutatea de 30 de kg. Structura de baz a raiei experimentale a fost aceeai pentru
toi purceii aflai n experimente.
n cadrul experimentelor de tip macrotest, realizate s-au folosit ca material biologic 16 purcei
metii, dup nrcare, cazai n cuti din fier beton, cu grtar pentru scurgerea dejeciilor. Evacuarea
dejeciilor s-a realizat pe pern de ap. Animalele au fost cazate cte 8 n fiecare box.
Porcii au fost cntrii individual la intrarea n experiment, sptmnal i la sfritul
experimentului. Pe parcursul experimentului s-a urmrit evoluia parametrilor zootehnici: greutatea
corporal, sporul mediu zilnic, consumul mediu zilnic de furaje i consumul specific.

12

Capitolul 4

VALIDAREA METODELOR DE DETERMINARE A

MICROELEMENTELOR Fe, Cu, Mn, Zn DIN PROBE BIOLOGICE
n acest capitol sunt prezentate rezultatele experimentale obinute i concluziile formulate pe
baza acestora n cadrul experimentelor efectuate privind alegerea i validarea metodelor de
dezagregare i determinare a microelementelor Fe, Cu, Mn, Zn, din probe biologice de natur
animal i vegetal (Untea, 2010a; Untea 2012a).

4.1.

ALEGEREA METODEI DE ADUCERE N SOLUIE

MICROELEMENTELOR Fe, Cu, Mn, Zn DIN PROBE DE FICAT

Pentru a alege metoda optim de dezagregare a probelor de ficat, n vederea determinrii

cantitative a microelementelor Fe, Cu, Mn, Zn, prin FAAS, s-au comparat rezultatele obinute prin
folosirea a trei metode: dezagregarea pe cale uscat, dezagregarea pe cale umed i dezagregarea cu
microunde. Determinrile au fost fcute folosind ca material de referin: Certified bovine liver
(CRM BCR 185R) (Untea, 2012a). Dintre rezultatele obinute prin aplicarea celor trei metode de
aducere n soluie, la dezagregarea cu microunde, s-au obinut cele mai apropiate procente de
recuperare de 100% i medii caracterizate de cele mai mici valori ale deviaiei standard.

4.2. VERIFICAREA
N LABORATOR A METODEI DE
DETERMINARE A MICROELEMENTELOR
Fe, Cu, Mn, Zn PRIN
SPECTROMETRIE DE ABSORBIE ATOMIC CU FLACR
Metoda de determinare a microelementelor prin spectrometrie de absorbie atomic cu flacr
a fost verificat n laborator, urmrind o serie de parametri: linearitate, domeniu de lucru,
sensibilitate, limit de detecie i limit de cuantificare (Untea, 2010a, Untea 2012a) n conformitate
cu regulile internaionale (Validation of Analitical Procedures, 1995).
Verificarea parametrilor de performan pentru metoda de determinarea a fierului,
cuprului, manganului si zincului prin FAAS
Linearitatea, domeniul de lucru i sensibiliatatea metodei de determinare au fost evaluate
prin trasarea dreptei de etalonare cu 10 puncte, folosind soluii standard cu concentraii cuprinse ntre
0,5 i 5 ppm pentru Fe ; 0,4 i 4 ppm pentru Cu ; 0,2 i 2 ppm pentru Mn si 0,1 i 1 ppm pentru Zn.
Limita de detecie i limita de cuantificare a metodei de determinare a fierului, cuprului,
manganului si zincului prin FAAS
n scopul determinrii limitei de detecie, LOD i a limitei de cuantificare, LOQ s-au preparat
serii de 5 soluii, cu aceeai concentraie : soluia etalon entru Fe, cu concentraia cea mai mic

13

folosit pentru trasarea curbei de etalonare (0,5 ppm) a fost diluat de 50 ori (LOD = 0,03 ppm si
LOQ = 0,22 ppm); soluia etalon pentru Cu, cu concentraia de 0,4 ppm a fost diluat de 40 ori (LOD
= 0,014 ppm si LOQ = 0,06 ppm); soluia etalon pentru Mn, cu concentraia de 0,2 ppm a fost diluat
de 20 ori (LOD = 0,04 ppm si LOQ = 0,16 ppm) i soluia etalon pentru Zn, cu concentraia de 0,1
ppm a fost diluat de 10 ori (LOD = 0,008 ppm si LOQ = 0,03 ppm).

4.3.VALIDAREA METODEI DE DEZAGREGARE CU MICROUNDE

Validarea metodei de dezagregare cu microunde pentru probe de ficat
Metoda de aducere n soluie a microelementelor Fe, Cu, Mn, Zn folosind dezagregarea probei
cu microunde a fost validat urmrind parametrii specifici protocolului: exactitate (acuratee),
precizia, repetabilitatea, reproductibilitatea i recuperarea. Pentru a calcula parametrii de performan
ai metodei, s-a preparat o serie de 8 probe de material de referin organic ( ficat bovin CRM BCR
185R) cu coninut certificat: 184 ppm Fe, 277 ppm Cu, 11,07 ppm Mn i 138,6 ppm Zn (Untea,
2012a).
Evaluarea exactitii metodei de dezagregare cu microunde s-a determinat folosind 8 probe de
material de referin certificate i apoi s-a determinat coninutul de microelemente Fe, Cu, Mn, Zn
prin spectrometrie de absorbie atomica.
Valoarile obtinute pentru exactitate au fost de 101,80% pentru Fe ; 99,09% pentru Cu;
98,13% pentru Mn i 98,18% pentru Zn. Valorile calculate se ncadreaza n intervalul impus de
criteriul de performan (bias 2%), astfel nct, metoda poate fi considerat validat pentru
parametrul exactitate.
Datele obinute la determinarea preciziei metodei de determinare cantitative a microelementelor
(Fe, Cu, Mn, Zn) din probe de ficat prin FAAS dupa dezagregare cu microunde au fost :
Fier - precizia in aceeasi zi : RSD = 0,46% ; 0,60% ; 0,66%, iar in zile diferite : RSD = 1,48%;
Cupru - precizia in aceeasi zi : RSD = 1,50% ; 1,23% ; 1,03% iar in zile diferite : RSD = 1,18%;
Mangan - precizia in aceeasi zi : RSD = 1,87% ; 1,96% ; 1,74% iar in zile diferite : RSD = 1,92%;
Zinc - precizia in aceeasi zi : RSD = 1,68% ; 1,95% ; 1,62% iar in zile diferite : RSD = 1,81%.
Criteriul de performan impus: valoarea maxim admis a RSD este n conformitate cu
ecuaia Horwitz : RSD = 2(1-0.5lgC). Pentru o concentraie de 1 ppm, RSD = 10,72%. n cazul
metodelor validate s-au obinut valori RSD < 2%, deci criteriul de performan a fost ndeplinit.
Datele obinute la determinarea reproductibilitii metodei de determinare cantitativ a
cuprului din probe de ficat prin FAAS dup dezagregare cu microunde au fost :
Fier - RSD = 1,93% pentru analistul 1 i RSD = 1,14% pentru analistul 2;
Cupru - RSD = 1,50% pentru analistul 1 i RSD = 1,47% pentru analistul 2;
Mangan - RSD = 1,98% pentru analistul 1 i RSD = 1,61% pentru analistul 2;
Zinc - RSD = 1,72% pentru analistul 1 i RSD = 1,82% pentru analistul 2.
Valorile RSD < 2%, ceea ce arat c metoda poate fi considerat validat pentru acest
parametru.

14

Din datele obinute la determinarea parametrului regsire pentru metoda de determinare

cantitativ a fierului, cuprului, manganului i zincului din probe de ficat prin FAAS dup dezagregare
cu microunde, au rezultat procente de regasire de 101,41 pentru Fe ; 101,72 pentru Cu ; 100,45 pentru
Mn i 100,51 pentru Zn. Randamentul de regsire a fost cuprins n intervalul 100% 2%, deci
metoda poate fi considerat validat pentru acest parametru.
Validarea metodei de dezagregare cu microunde pentru probe de amestec de plante
Pentru a calcula parametrii de performan ai metodei, s-a preparat o serie de 8 probe de
material de referin vegetal (amestec botanic MIXED POLISH HERBS INCT-MPH-2) cu coninut
certificat (460 ppm Fe, 7,77 ppm Cu, 191 ppm Mn i 33,5 ppm Zn).
La determinarea exactitii metodei de determinare cantitativ a microelementelor din probe de
material vegetal prin FAAS dup dezagregare cu microunde, s-au obtinut urmatoarele valori: 99,85%
pentru Fe; 98,38% pentru Cu; 98,13% pentru Mn i 98,81% pentru Zn. Valorile obinute se
ncadreaza n intervalul impus de criteriul de performan (bias 2%), astfel nct, metoda poate fi
considerat validat pentru parametrul exactitate.
Datele obinute la determinarea preciziei metodei de determinare cantitativ a microelementelor
(Fe, Cu, Mn, Zn) din probe de material vegetal prin FAAS dupa dezagregare cu microunde au fost :
Fier - precizia in aceeasi zi : RSD = 0,38% ; 0,47% ; 0,99%, iar in zile diferite : RSD = 1,53%;
Cupru - precizia in aceeasi zi : RSD = 1,47% ; 1,66% ; 1,64% iar in zile diferite : RSD = 1,85%;
Mangan - precizia in aceeasi zi : RSD = 0,74% ; 1,18% ; 0,75% iar in zile diferite : RSD = 1,08%;
Zinc - precizia in aceeasi zi : RSD = 1,68% ; 0,94% ; 1,40% iar in zile diferite : RSD = 1,84%.
Valorile RSD < 2%, ceea ce arat c metoda poate fi considerat validat pentru acest
parametru.
La determinarea reproductibilitii metodei de determinare cantitative a microelementelor
(Fe, Cu, Mn, Zn) din probe de material vegetal prin FAAS dup dezagregare cu microunde s-au
obtinut urmatoarele valori:
Fier - RSD = 1,93% pentru analistul 1 i RSD = 1,14% pentru analistul 2;
Cupru - RSD = 1,87% pentru analistul 1 i RSD = 1,10% pentru analistul 2;
Mangan - RSD = 1,83% pentru analistul 1 i RSD = 0,99% pentru analistul 2;
Zinc - RSD = 1,84% pentru analistul 1 i RSD = 1,83% pentru analistul 2.
Valorile RSD < 2%, ceea ce arat c metoda poate fi considerat validat pentru acest
parametru.
Pentru metoda de determinare cantitativ a microelemnetelor (Fe, Cu, Mn, Zn) din probe de
material vegetal (material de referin MIXED POLISH HERBS INCT-MPH-2) prin FAAS dup
dezagregare cu microunde, regasirea a fost de 100,33% pentru Fe; 100,63% pentru Cu; 98,21%
pentru Mn i 101,27% pentru Zn. Randamentul de regsire a fost cuprins n intervalul 100% 2%,
deci metoda poate fi considerat validat pentru acest parametru.

15

4.4. CALCULAREA
INCERTITUDINII
DE
MSURARE
LA
DETERMINAREA MICROELEMENTELOR Fe, Cu, Mn, Zn DIN PROBE DE
MATERIAL BIOLOGIC PRIN SPECTROMETRIE DE ABSORBIE
ATOMIC CU FLACR, DUP DEZAGREGARE CU MICROUNDE
Cuantificarea surselor de incertitudine
Scopul determinrilor experimentale efectuate este de a cuantifica incertitudinea aparut n
etapele parcurse ntr-o analiz. Acest lucru poate fi fcut utiliznd date experimentale proprii sau date
obinute din presupuneri bine fundamentate.
- Volumul (V) - Incertitudinea compus asociat folosirii unui balon de 50 mL, este alctuit din
trei incertitudini individuale: etalonarea, repetabilitatea, temperatura
- Masa (m) - Incertitudinea compus asociat masei, u(m) este alcatuit din: incertitudinea de
linearitate; incertitudinea metrologic; incertitudinea de repetabilitate; incertitudinea de rezoluie.
- Concentraia de microelement (C0) Incertitudinea asociata concentratiei de microelement din
probele de natura animal i vegetal se calculeaz cu ajutorul curbei de etalonare
corespunzatoare.
Pentru a calcula incertitudinea standard compusa a unui produs, u(r)/r se compun
incertitudinile standard care intervin n rezultatul final. Datele folosite pentru calculul incertitudinii de
msurare pentru probele de ficat bovin (P1) i de material vegetal (P2) sunt prezentate n tabelul 4.42.
Tabelul 4.42. Datele folosite pentru calcularea incertitudinii de msurare a concentraiilor de
microelemente Fe, Cu, Mn, Zn din probe de ficat bovin i material vegetal (materiale de referin)
u(V)
u(m)
Sxx
S
u(c0)
r
U(r)
FIER
P1
0,029
0,00012
7,58
0,0076
0,089
0,179
187,31
P2
0,029
0,00012
7,58
0,0076
0,080
0,160
459,33
CUPRU
P1
0,029
0,00012
5,75
0,153
1,669
3,338
274,48
P2
0,029
0,00012
0,63
0,029
0,357
0,713
7,65
MANGAN
P1
0,029
0,00012
0,40
0,049
0,632
1,263
10,86
P2
0,029
0,00012
1,44
0,156
1,582
3,164
188,73
ZINC
P1
0,029
0,00012
0,32
0,178
2,294
4,588
136,07
P2
0,029
0,00012
0,32
0,178
2,315
4,630
33,10
Din tabelul 4.42 se observa valori ridicate ale incertitudinii de msurare n raport cu rezultatul
determinrii n cazul unor concentraii mici de microelement n proba de analizat. Unul din factorii
care influeneaz valoarea final a incertitudinii este domeniul de lucru, care trebuie stabilit n funcie
de domeniul de concentraii n care se gsete analitul n proba de analizat.

16

4.5.
STUDIU
INTERLABORATOARE
PENTRU
VALIDAREA
METODEI DE DETERMINARE A MICROELEMENTELOR Fe, Cu, Mn, Zn
DIN PROBE DE NATUR VEGETAL I STABILIREA CONINUTULUI
DE MICROEMENTE DIN PLANTE
Cunoasterea cu precizie a coninutului de microelemente Fe, Cu, Mn, Zn n plantele folosite
ca adaosuri n raiile de hran ale purceilor din experimentele efectuate n cadrul elaborarii tezei de
doctorat, este necesar pentru a calcula nivelul de includere al acestora n raiile purceilor, n cadrul
experimentelor de bilan mineral (Untea, 2009; Untea, 2010b; Untea, 2010c; Untea, 2012d). La
studiul au participat 7 laboratoare din 6 institude de cercetare din Romnia.
Pentru stabilirea irurilor de date omogene, a mediei robuste, a deviaiei standard i a
incertitudinii s-a aplicat Algoritmul A (Thompson, 2006). Valorile asumate, deviaiile standard i
incertitudinile asociate ale irurilor de date corespunztoare determinarilor de Fe, Cu, Mn i Zn din
cele 3 plante analizate, sunt prezentate n tabelul 4.44.

Element

Tabelul 4.44. Rezultatele obinute n urma folosirii algoritmului A

corespunztoare determinrii concentraiilor de Fe, Cu, Mn i Zn din probe
flora spontan
Afin
Oregano
Mrimi
Medie
Valoare
Medie
Valoare
aritmetic
asumat
aritmetic asumat
mg/kg
mg/kg
mg/kg
mg/kg
Medie
81,32
1886,47
Fe
81,11
1868,80
Deviaie standard 13,47
250,91
16,57
240,99
Incertitudine
3,78
55,00
Medie
4,68
9,90
Cu
4,54
10,87
Deviaie standard
1,53
1,78
1,84
1,63
Incertitudine
0,42
0,44
204,36
76,78
Mn Medie
204,10
77,17
Deviaie standard 11,35
5,59
11,86
7,13
Incertitudine
2,71
1,63
Medie
53,98
53,40
Zn
53,43
53,30
Deviaie standard 4,60
3,15
5,68
4,41
Incertitudine
1,30
1,01

pentru irurile de date

de plante recoltate din
Colul babei
Medie
Valoare
aritmetic asumat
mg/kg
mg/kg
279,43
278,25
48,89
51,57
11,77
7,19
9,12
2,61
1,46
0,79
46,07
46,13
4,24
4,62
1,05
44,95
44,73
4,34
4,94
1,13

Pentru a evalua performanele statistice ale participanilor, s-au folosit scorurile Z, Z i Zeta.
Parametri statistici calculai pentru determinarea concentraiilor de microelemente Fe, Cu,
Mn, Zn n probe de afin au aratat c in cazul cuprului, pentru laboratoarele 1 i 7 s-au calculat valori
zeta cuprinse ntre 2 i 3, respectiv mai mari dect 3. n probele de oregano i colul babei,
determinrile manganului i zincului nu au artat diferene ntre performanele participanilor.

17

Capitolul 5

STUDIU CHIMICO-ANALITIC AL CORELAIEI NTRE

CONINUTUL DE MICROELEMENTE DIN ORGANISMUL
ANIMAL I CONCENTRAIILE ACESTORA DIN DIETELE DE
HRAN MBOGITE CU EXTRACTE VEGETALE SAU CU
PLANTE DE CULTUR
n cutarea unor substane care s nlocuiasc antibioticele pentru perioada de nrcare a
purceilor, s-a propus ca alternativ utilizarea extractelor din plante (Han, 2006).
Scopul acestui studiu realizat n cadrul tezei de doctorat a fost acela de a evalua efectul
utilizrii n hrana purceilor nrcai, a unor extracte de plante sau plante de cultur asupra corelaiei
dintre coninutul de microelemente al acestora i regsirea lor n organismul animal.

5.1. STUDIU CHIMICO - ANALITIC AL

CORELAIEI
NTRE
CONINUTUL DE MICROELEMENTE DIN ORGANISMUL ANIMAL
I CONCENTRAIILE ACESTORA DIN DIETELE DE HRAN
MBOGITE CU INULIN
n cadrul proiectului internaional FP 6 Feed for Pig Health, s-a desfurat un experiment de
evaluare a compusului natural inulina, folosit ca alternativ la antibiotice. n acest proiect, rolul
Institutului de Cercetare - Dezvoltare pentru Biologie i Nutriie Animal (IBNA) a fost de a studia
biodisponibilitatea microelementelor coninute n compuii naturali folosii ct i efectul lor asupra
statusului mineral al animalelor.
Experimentul, efectuat n cadrul prii experimentale a tezei de doctorat, a avut loc n dou
ferme diferite pentru a putea fi evaluate, prin comparaie, influenele date de condiiile ambientale.
S-au folosit: o ferm care asigura condiii stricte de igien i o ferm cu condiii obinuite, specifice
creterii porcilor n scopuri comerciale.
Prin experiment s-a evaluat n ce msur suplimentul de inulin adugat n hran influeneaz
nivelul microelementelor n ficatul purceilor nrcai, prin comparaie cu lotul de purcei hrnit numai
cu raia de baz (Untea, 2012b, Untea, 2012c).
Rezultatele obinute n studiul corelaiei ntre coninutul de microelemente din
organismul animal i concentraia acestora din dietele de hran mbogite cu extracte vegetale
Au fost prelevate probe de ficat de la purceii sacrificai la nceputul experimentului (ziua 0 de
administrare a raiei cu supliment de inulin), dup 5 zile i dup 11 zile (la finalul experimentului).
Concentraiile de microelemente n probele de ficat recoltate de la purceii sacrificai sunt prezentate
n tabelele 5.3. i 5.4.

18

Tabel 5.3. Efectele suplimentelor de inulin asupra depozitelor de Cu, Mn i Zn din ficatul
purceilor nrcai (Ferm comercial)
Concentraii
Cu
ppm

Lot martor
Zn
ppm

Mn
ppm

Lot experimental
Cu
Zn
ppm
ppm

Mn
ppm

Probe
0,00
50,00
35,00
0,00
50,00
35,00
Premix
6,44
34,88
2,44
6,44
34,88
2,44
Materii furajere
6,44
84,88
37,44
6,44
84,88
37,44
Total furaj
207,14 5,7
206,79 8,7
10,41 0,8 207,14 5,7
206,79 8,7
10,41 0,8
Ficat - 28 de zile (LB)
144,12*
16,5
193,43

17,1
10,85

0,5
143,38*

10,8
188,57*

19,4
10,79 0,6
Ficat - 33 de zile
26,62* 5,5
131,95* 2,8 10,29 1,4 71,31* 7,6
128,15* 15,2 9,93 1,4
Ficat - 39 de zile
Nota: * - semnificativ diferit fa de LB (p0.05) (LB = linia de baz)
Nu s-au nregistrat diferene semnificative (p0,05) ntre loturi n ceea ce privete
concentraiile de Zn din ficatul purceilor sacrificai la 33, respectiv 39 de zile. La finalul
experimentului, concentraiile de zinc din ficat au fost semnificativ mai mici (p 0,05) dect cele
determinate n probele de ficat prelevate de la purceii sacrificai la 33 de zile. Explicaia este legat
de coninutul de zinc din raie. Suplimentul de Zn adus prin premix n raiile purceilor a fost de doar
50 ppm fat de 80 ppm nivelul recomandat de National Research Council, NRC (1998), deoarece
unul dintre obiectivele experimentului a fost acela de a reduce n raie cantitile de microelemente cu
rol de promotor de cretere (Cu, Zn). n consecin, a fost redus i absorbia zincului din hran,
concentraia de Zn din ficat fiind direct proporional cu nivelul din raie, comportare n concordana
cu literatura de specialitate (Carlson, 1999). Inulina din raie nu a avut efect asupra concentraiilor de
Zn din ficat.
Rezultatele experimentale au artat c suplimentele de inulin n hrana de baz nu au
influenat absorbia manganului n organismul purceilor.
Concentraiile de Cu n ficatul purceilor la finalul experimentului au fost semnificativ mai
mici dect valorile nregistrate la nceputul studiului. Rezultatele obinute pentru concentraiile de Cu
n ficat, sunt n acord cu datele publicate n literatura de specialitate la aceeai categorie de purcei
(Jondreville, 2005; Apgar, 1995). Rezultatele din tabelul 5.3. nu au artat diferene semnificative
ntre loturi dup primele 5 zile de tratament (vrsta de 33 zile), dar concentraiile de Cu n ficat au
fost semnificativ diferite (p = 0.0002) ntre loturi la finalul experimentului (vrsta de 39 zile). Aceste
rezultate demonstreaz c, dei nivelul de Cu din raie nu a diferit ntre loturi, suplimentul de inulin
a imbuntit absorbia i utilizarea cuprului n organismul purceilor nrcai. Evoluia concentraiilor
de Cu s-a incadrat pe o pant descendent pe parcursul experimentului, la final, concentraiile de Cu
din ficatul purceilor lotului M reprezentnd doar 12,5% din concentraia de Cu nregistrat n ficatul
purceilor sacrificai la nceputul experimentului i pentru lotul experimental, 34,43% din valoarea
iniial (tabelul 5.4.).
Nivelul de Cu din raie (6,44 ppm) corespunde cerinele purceilor, de 5 ppm (NRC, 1998), dar
sursele de Cu din raie sunt doar materiile vegetale, biodisponibilitatea cuprului fiind redus. O raie

19

deficitar n Cu determin o slab activitate a superoxide dismutazei din ficat i celulele roii
(Iskandar, 2005) ceea ce poate conduce la un nivel scazut de Cu n ficat.
Din figura 5.1. se observ c depozitele de Cu n ficatul purceilor din experimentul desfurat
n ferma comercial sunt mai mici dect n cazul fermei experimentale, att pentru lotul martor, ct i
pentru lotul experimental. n cazul fermei comerciale, concentraiile de Cu din ficat au sczut pe
parcursul perioadei experimentale, n timp ce pentru purceii din ferma experimental, dup o tendin
iniial descresctoare, nivelul de Cu a crescut n saptmna final. O posibil explicaie ar putea fi
absorbia intestinal mai bun a cuprului n cazul animalelor crescute n ferma cu condiii ideale de
igien.

Fig. 5.1. Evoluia concentraiilor de Cu n ficat n timp, n cazul purceilor crescui n cele 2
ferme n care au avut loc experimentele

5.2. STUDIUL CORELAIEI NTRE CONINUTUL DE MICROELEMENTE

DIN ORGANISMUL ANIMAL I CONCENTRAIA ACESTORA DIN
DIETELE DE HRAN MBOGITE CU UN AMESTEC PE BAZ DE
TOPINAMBUR I FRUNZE DE CTIN
n scopul evalurii efectelor adugrii n ratia de hran a purceilor nrcai, a unui amestec de
plante de cultur, asupra coninutul de microelemente din organismul purceilor din experiment, n
vederea stabilirii de corelaii ntre acestea, s-au organizat 2 experimente de nutriie animal. Srurile
de Fe, Cu, Mn, Zn care se folosesc de obicei ca adaosuri minerale n hrana animalelor, au fost
nlocuite parial n raiile purceilor din experiment cu un amestec de plante de cultur, pe baz de
topinambur i frunze de ctin (Untea, 2010d, Untea, 2010e; Untea, 2012f).
Materialele vegetale folosite la producerea acestui amestec rezult ca subproduse industriale
de la prepararea de suplimente alimentare naturale. S-a ales acest amestec pentru c topinamburul
este bogat n inulin, o oligozaharid care acioneaz la nivelul tractusului digestiv al purceilor

20

favoriznd absorbia microelementelor, iar ctina este un adevrat premix vitamino mineral natural
(Beveridge, 1999; Gutzeit,2008).
Amestecul de plante pe baz de ctin i topinambur a fost testat la un nivel de 3% nglobare
n nutreul combinat n cadrul unui microtest folosind cuti metabolice individuale i n condiii de
ferm n hala experimental. Microelementele din materiile prime ale raiei de baz depesc
necesarul. Insa datorita slabei lor biodisponibilitati, att din furajele vegetale, datorit prezenei
fitailor ct i din aditivii minerali, raiile se suplimenteaz cu premixuri minerale. n ideea nlocuirii
pariale a srurilor anorganice de Fe, Cu, Mn i Zn din raie cu suplimente provenite din amestecul de
plante, fr a afecta performanele bioproductive, raia experimental, E, a avut nivelul
microelementelor Fe, Cu, Mn, Zn din premix injumtit.
n figura 5.4. este prezentat evaluarea grafic a concentraiilor de microelemente determinate
n furajele administrate purceilor n cele 2 tipuri de experiment.
160,00
140,00

120,00
100,00
80,00

Cu

Fe

macrotest

Mn

macrotest

microtest

microtest

ppm

macrotest

0,00

microtest

20,00

x 10

microtest

40,00

x 10

macrotest

60,00

Zn

Fig. 5.4. Prezentarea grafic comparativ a concentraiilor de microelemente determinate n

furajele administrate purceilor n experimentele de tip microtest vs macrotest
Datele din figura 5.4. arat c, pentru toate cele patru microelemente studiate: Fe, Cu, Mn i
Zn, att in cazul experimentelui de tip microtest, ct i a celui de tip macrotest, nivelul lor n furajele
administrate loturilor experimentale, E (cu 3% amestec botanic n raie) a fost mai mic dect la lotul
martor.
Rezultatele obinute n cadrul experimentului microtest au fost comparate cu cele obinute n
condiii de ferm de ctre purceii din loturile martor, M i experimental, E. Nu au existat diferene
semnificative ntre mediile greutilor purceilor la nceputul experimentelor. La final, au existat
diferene semnificative ntre purceii din loturile aparinnd experimentului microtest fa de cei din
experimentul de tip macrotest. Nu au existat diferene ntre purceii din loturile din acelai experiment.

21

Rezultatele obinute la determinrile privind parametrii sngelui au aratat c, n ambele tipuri

de experiment, valorile nregistrate n finalul experimentului se ncadreaz n limitele normalului
pentru categoria de purcei care s-au aflat in experiment.
n cazul concentraiilor de microelemente n fecale s-au nregistrat valori mai mari pentru
purceii din loturile macrotestului pentru Cu, Mn i Zn, dar comparabile cu cele obinute n cazul
microtestului, respectndu-se proporia fa de concentraiile calculate prin raportare la lotul martor,
M. n cazul fierului concentraiile determinate n fecale au fost semnificativ (P 0,05) mai mari n
condiiile experimentale specifice (de ferma) macrotestului.
n cazul fierului, pentru toate cele trei tipuri de organe prelevate de la purceii din ambele loturi
ale macrotestului, concentraiile au fost mai mici dect cele nregistrate la purceii din loturile
microtestului. Aceast observaie respect rezultatele comparative obinute n cazul concentraiilor
regsite n fecale. Concentraiile de Fe din fecalele animalelor participante la macrotest au fost
semnificativ mai ridicate dect n cazul celor din microtest. n acest context, depozitele de Fe n
organele studiate sunt mai mari n cazul loturilor participante la microtest.
Concentraiile de Cu n principalele organe de depozit au fost comparabile ntre cele dou
tipuri de experiment. Totodata ele au fost comparabile i ntre loturi, M respectiv E, cu excepia
concentraiei de Cu din rinichi n experimentul tip microtest unde concentraia de Cu la lotul E a fost
semnificativ (P 0,05) mai mare dect la lotul M.
n cazul zincului, concentraiile determinate n organele recoltate de la purceii ambelor loturi
din macrotest au fost uor mai mari dect cele determinate n organele purceilor din loturile
microtestului. Diferenele ns nu au fost semnificative.

22

Capitolul 6

STUDIU CHIMICO-ANALITIC AL CORELAIEI NTRE

CONINUTUL DE MICROELEMENTE DIN ORGANISMUL
ANIMAL I CONCENTRAIILE ACESTORA DIN DIETELE DE
HRAN MBOGITE CU PLANTE DIN FLORA SPONTAN
n aceast capitol, sunt descrise 2 experimente de digestibilitate i bilan mineral realizate pe
purcei, dup ntrcare, (10-30 kg) n vederea stabilirii biodisponibilitii microelementelor Fe, Cu, Zn,
Mn din nutreuri combinate n care au fost inclui fitoaditivi. Fitoaditivii folosii au fost: oregano,
afine, colul babei.

6.1. DETERMINAREA CONINUTULUI DE Fe, Cu, Mn, Zn DIN OREGANO,

AFIN I COLUL BABEI, PROVENITE DIN FLORA SPONTAN
Evaluarea potenialului antioxidant al plantelor recoltate din flora spontan
Rezultatele obinute la determinarea capacitii de antioxidant a plantelor recoltate din flora
spontan, arat c extractele alcoolice de oregano, fructe de afin i colul babei conin polifenoli cu
activitate antioxidant. Polifenolii din plantele menionate au capacitatea de a chelata ionii metalelor
tranziionale i de a anihila radicalii liberi (Untea, 2010f).
Determinarea cantitativ a coninutului de Fe din probe de sol
Analiza probelor de sol prelevate din zona de recoltare a plantei oregano (zona Pueti)
evideniaz un sol uor acid (pH = 6,81) i o concentraie de fier mobil de 75,5 mg/kg. Valoarea pHului este caracteristic unui sol cu aciditate moderat.
Determinarea cantitativ a coninutului de Fe, Cu, Mn, Zn din componentele raiilor
n scopul evalurii efectelor adugrii n raia de hran a purceilor nrcai, a unui amestec de
plante, asupra coninutul de microelemente din organismul purceilor din experiment, n vederea
stabilirii de corelaii ntre acestea, au fost organizate 2 experimente, tip microtest, pe purcei nrcai
in care s-a studiat corelatia ntre coninutul de microelemente din organismul animal i concentraia
acestora n dietele de hran mbogite cu suplimente de plante recoltate din flora spontana (Untea,
2010g; Untea, 2011; Untea, 2012e).
n primul experiment desfurat pe 3 loturi de purcei lotul M i loturile experimentale E1, E2
a fost testat oregano (sovrv) n raie, n prezena unor componente care s asigure rate diferite de
includere a microelementelor Fe, Cu, Mn, Zn n premix. n premixul mineral administrat purceilor
din lotul E1 nu au fost adugate dect sruri de Zn 0,5%, iar premixul administrat purceilor din
lotul E2 a inclus microelementele Fe, Cu, Mn, Zn n proporie de 0,5% (jumtate din rata de includere
a microelementelor din raia purceilor din lotul M).

23

n al doilea experiment, desfurat pe 3 loturi de purcei (M, E1, E2) au fost testate amestecuri
de oregano (inclus n raie n proporie de 3%) i afin (inclus n raie n proporie de 1%) - lotul E1,
respectiv oregano (inclus n raie n proporie de 3%) i colul babei (inclus n raie n proporie de
1%) - lotul E2. Premixul administrat loturilor experimentale a inclus microelementele Fe, Cu, Mn,
Zn n proporie de 0,5% (jumtate din rata de includere a microelementelor din raia lotului M).
Experimentul 1- Oregano recoltat din flora spontan are un coninut ridicat de Fe. Acest fapt
dovedit prin analiz, aa cum s-a artat n capitolul 4.5. a facut ca nivelul de Fe n raia lotului E2 s
fie uor mai mare dect la lotul M, dei coninutul de sulfat de fier (II) din premixul raiei lotului E2 a
fost redus la jumatate fat de nivelul raiei lotului M. Prin reducerea cantitilor de saruri anorganice
n premix, raiile loturilor experimentale au avut un coninut de Cu cu 68%, respectiv cu 34% mai mic
dect lotul martor, Mn cu 46%, respectiv cu 22% mai mic dect lotul martor. n raiile loturilor
experimentale coninutul de oxid de zinc din premix a fost cu 50% mai mic faa de nivelul celui din
lotul martor. Cele dou loturi experimentale nu s-au difereniat ntre ele prin nivelul de Zn din raie, ci
prin nivelurile celorlalte microelemente studiate: Fe, Cu, Mn.
Experimentul 2 - Plantele introduse n raiile experimentale au suplinit o parte din cantitatea
de fier adus n mod obinuit prin premix astfel nct raiile acestor loturi au avut un coninut de Fe cu
doar 13-16% mai mic fa de M. Prin reducerea cantitii de sulfat de Cu (II), respectiv de sulfat de
Mn (II) n premix, raiile loturilor experimentale au avut un aport de Cu cu 73-75%, respectiv pentru
Mn cu 32-34% mai mic dect cele ale lotului M. n raiile loturilor experimentale cantitatea de oxid
de zinc din premix a fost cu 50% mai mic fat de nivelul lotului M. Cele dou loturi experimentale
nu au diferit ntre ele prin nivelul de Zn din raie i nici prin nivelul celorlalte microelemente studiate
(Fe, Cu, Mn) i au avut un coninut de Zn cu aproximativ 35% mai mic fa de lotul martor.

6.2. STUDIUL CORELAIEI NTRE CONINUTUL DE MICROELEMENTE

DIN ORGANISMUL ANIMAL I CONCENTRAIILE ACESTORA DIN
DIETELE DE HRAN MBOGITE CU OREGANO
Experimentul prezentat n acest capitol a fost de tip microtest, fiind realizat ntr-o hal
experimental echipata cu cuti de digestibilitate (Untea 2010g, Untea 2011, Untea 2012e).
Valorile sporului mediu nu s-au difereniat semnificativ (P 0,05), chiar n condiiile
reducerii coninutului de sruri anorganice de Fe, Cu, Mn si Zn n premixurile raiilor loturilor
experimentale E1 i E2 fa de lotul M. Rezultatele obinute la determinrile privind parametrii
hematologici i biochimici ai sngelui arat c, n cazul purceilor din cele 3 loturi studiate, valorile
nregistrate la finalul experimentului se ncadreaz n limitele normalului pentru specie i categorie
(Prvu, 2003). Cu toat variaia biologic a purceilor, nu s-au nregistrat diferene semnificative (P
0,05) ntre loturi.
Datele bilanului mineral
Pentru studiul corelaiei ntre coninutul de microelemente din organismul purceilor i
concentraia acestora din dietele de hran mbogite cu oregano, pe baza determinarilor din hrana si
excreta (fecale si urina) s-a alcatuit un bilan mineral.
24

Rezultatele de bilan au aratat c ingesta de Fe la purceii din lotul E1 a fost aproximativ cu 12

% mai mic dect la cei din lotul M. La purceii din lotul E2, ingesta a fost mai mare cu 8% fa de
cei din lotul M, datorit concentraiei mari de fier existente n oregano. n aceste condiii, cantitatea
de Fe eliminat prin fecale a fost in valoare absolut mai mic la purceii din lotul E1 (aproximativ
7%), dar nediferit semnificativ (P 0,05) fa de purceii din celelalte 2 loturi studiate. Coeficienii de
absorbie i retenie ai fierului la lotul M au fost semnificativ (P 0.05) mai mari fa de cei
nregistrai la lotul E1, fr a se nregistra ns diferene semnificative (P 0,05) fa de E2. Faptul ca
nu au existat diferene intre coeficenii de absorbie ai fierului la M comparativ cu E2, s-ar putea
explica prin nivelurile reduse de Mn i Zn in aceste ratii, elemente competitoare cu fierul n procesul
de absorbie la nivelul tractusului digestiv (Hill, 1983).
Ingesta de Cu la lotul experimental E1, fr premix mineral, dar cu supliment de 3% oregano,
a fost, cu 74% mai mic dect pentru M, iar la lotul E2 care a avut n premix jumtate din cantitatea
administrat lotului M i 3% oregano, cu 46% mai mic. n aceste condiii, cantitatea de Cu eliminat
prin fecale a fost cu 61,4% mai mic dect la purceii din lotul martor, pentru lotul E1 i cu 35% mai
mic dect la purceii din lotul martor pentru celelalat lot experimental, E2. Aa cum era de ateptat,
coeficienii de absorbie i de retenie ai cuprului la purceii din lotul M sunt semnificativ (P 0,05)
mai mari dect la loturile experimentale. i ntre loturile experimentale au existat diferene
semnificative (P 0,05) pentru coeficienii de absorbie i de retenie calculai. Datele de bilan
mineral au aratat ca valorile coeficienilor de absorbie se ncadreaz n plaja de valori raportat n
literatura de specialitate (Veum, 2004 i Carlson, 1999) la aproximativ aceeai categorie de animale,
n cazul administrrii unei raii cu un coninut de 16,5 ppm Cu.
In cazul manganului, ingesta la lotul E1, a fost, cu 57% mai mic dect pentru purceii lotului
martor, iar la lotul E2, cu 21% mai mic. n aceste condiii, pentru lotul E1, cantitatea de Mn
eliminat prin fecale a fost cu 40% mai mic dect pentru lotul M, i cu 30% mai mic pentru celelalt
lot experimental E2. Coeficenii de absorbie i de retenie ai manganului determinai pentru lotul M
sunt semnificativ (P 0,05) mai mari dect la loturile experimentale. i ntre loturile experimentale
au fost diferene semnificative n ceea ce privete valoarea coeficienilor de absorbie i retenie
calculai, obinndu-se valori mai mari pentru lotul E2.
Rezultatele bilanului mineral au aratat c ingesta de Zn la purceii loturilor experimentale a
fost cu 25% mai mic dect la purceii lotului martor. Cantitatea de Zn eliminat prin fecale a fost 1718% mai mic dect la purceii lotului martor. Coeficenii de absorbie i retenie ai zincului la lotul
purceii lotului martor sunt cu doar 5-10% mai mari dect la purceii din loturile experimentale (tabelul
6.24.). Se remarc faptul c purceii lotului E1 au avut coeficieni de absorbie mai mici (P 0,05)
dect purceii celorlalte dou loturi, M i E2, dei loturile experimentale au avut acelai nivel de Zn n
raie. Explicaia ar putea consta n efectul lipsei de Cu i Fe adugat n raia lotului E1. Coeficienii de
absorbie obinuti pentru Zn sunt mai ridicai dect valorile raportate n literatur n experimente
desfurate n condiii similare (Veum, 2004 32,8% i Carlson, 2004 20,9%, Revy, 2002
26,9%).
Pentru a cuantifica relaia existent ntre cantitile de microelemente ingerate i cele
eliminate prin fecale i urin, s-au stabilit urmatoarele ecuaii de regresie i coeficieni de corelaie:

25

pentru Fe: R2 = 0,9918; Cu: R2 = 0,9918; Mn: R2 = 0,9895; Zn: R2 = 0,9960. Datele prezentate mai
sus au aratat c cele trei loturi studiate au respectat aceeai relaie de proporionalitate ntre ingesta i
excreta pentru toate microelementele studiate.
Deoarece pe durata experimentului, bilanul mineral a fost efectuat sptmnal, s-a putut
urmri evoluia n timp a eliminrilor de microelemente prin fecale. Eliminrile de Fe prin fecale la
lotul E2 au fost mai mari pe toat durata experimentului, fa de cantitile eliminate de purceii lotului
M, fapt considerat normal avnd n vedere c, nivelul de Fe ingerat la lotul E1 a fost mai mare dect
la lotul M. O situaie diametral opus s-a nregistrat pentru lotul E1, unde o cantitate mai mic de Fe
n ingest, fa de lotul M, a condus la diminuarea valorilor de Fe excretate. Eliminrile de Cu i Mn
prin fecale la purceii din lotul M au fost mai mari nc din perioada de nceput a experimentului, fapt
considerat normal, avnd n vedere ca la lotul M cantitile de Cu, respectiv Mn ingerate au fost
semnificativ (P 0,05) mai mari dect la loturile experimentale. Cele mai mici valori de Cu i Mn
excretate prin fecale au fost nregistrate la lotul E1 care a primit hrana fara adaos de premix mineral.
Cantitile cele mai mari de Zn eliminate prin fecale s-au nregistrat la purceii din lotul M, din cauza
nivelului redus de Zn in raiile loturilor E1 si E2.

(a)

(b)

(c)
(d)
Fig. 6.6. Evoluia eliminrii de microelemente prin fecale, n timp: (a) fier, (b) cupru, (c) mangan,
(d) zinc

26

Depozitele de Fe n ficat, splina, rinichi, inima, plaman i creier, determinate la finalul

experimentului, nu au atins, la niciunul dintre cele 3 loturi, valoarea de la nceputul experimentului.
Fapt firesc, avnd n vedere: depozitele de microelemente cu care se nasc purceii; capacitatea mare
de asimilare din perioada pre-nrcare; cantitatea de Fe administrat injectabil n a 2 a zi de via, cu
scopul de a preveni anemiile (practic obinuit n toate fermele). Cele mai mari concentraii de Fe sau gsit n ficat i splin. Nivelul de Fe n ficatul purceilor din lotul E1 a fost semnificativ (P 0,05 )
mai mic dect cel nregistrat pentru purceii din loturile M i E2. Concentratiile de Cu n organele de
depozit ale purceilor la nceputul experimentului au fost atinse i la final pentru purceii din lotul M.
Cele mai mari concentraii de Cu au fost n rinichi, inim i ficat. ntre loturile experimentale E1, E2
nu au existat diferene semnificative. Cu excepia creierului, concentraiile de Cu determinate n
organele purceilor din lotul M au fost semnificativ (P 0,05) mai mari fa de cele determinate la
loturile E1 i E2. Concentratiile de Mn n organele purceilor au depit la finalul experimentului
concentratia determinat la nceputul studiului. Cele mai mari concentraii de Mn s-au gsit n ficat,
rinichi i plmni. ntre loturile studiate nu au existat diferene semnificative (P 0,05).
Concentratiile de Zn n organele purceilor nu au depit la finalul experimentului nivelul de Zn
nregistrat la nceputul studiului. Cele mai mari concentraii de Zn s-au gsit n ficat unde valorile
determinate la lotul M au fost semnificativ diferite (p0,05) fa de valorile determinate la loturile
experimentale. n celelalte organe, concentraiile de Zn au fost comparabile ntre loturi.

(a)
(b)
Fig. 6.10. Valori medii ale concentraiilor de Fe, Cu, determinate n organele de depozit

27

(c)
(d)
Fig. 6.10. Valori medii ale concentraiilor de Mn, Zn determinate n organele de depozit
n figurile 6.11-6.14 sunt prezentate rezultatele proceselor de repartiie a cantitilor de
microelemente ingerate, pentru toate cele 3 loturi studiate.

(a)

(b)

(c)
Fig. 6.11. Reprezentarea grafic a rezultatelor experimentale privind repartiia fierului ingerat
n organismul purceilor i n excret: (a) M; (b) E1; (c) E2

28

Cantitatea de microelement reinut n organismul animalului s-a considerat (Pop, 2006) ca

fiind diferena dintre cantitatea de element mineral ingerat i cantitatea excretat prin fecale i urin.
Din cantitatea reinut n organism s-a considerat cantitatea de microelement depozitat n organe
(ficat, splin, rinichi, plmn, inima, creier) pe parcursul experimentului (diferena dintre cantitile
calculate pe baza rezultatelor experimentale la finalul experimentului i cantitile calculate la
nceputul experimentului); prin diferena (cantitate de microelement reinut minus cantitatea de
mineral depozitat n organe) s-a calculat cantitatea de microelement reinut n alte esuturi.
Cel mai mare procent de Fe eliminat s-a nregistrat pentru purceii din lotul E1. n organe a
fost depozitat sub 1% din fierul ingerat, aceast cantitate fiind repartizat preponderent n ficat.

(a)

(b)

(c)
Fig. 6.12. Reprezentarea grafic a rezultatelor experimentale privind repartiia cuprului ingerat
n organismul purceilor i n excret: (a) M; (b) E1; (c) E2
Procentul cel mai important de Cu reinut n organismul animal a fost nregistrat pentru
purceii din lotul M, unde i cantitatea ingerata a fost cea mai nsemnat. Ficatul deine cea mai mare
parte a cuprului depozitat n organe fiind urmat, ca valoare, de cantitile depozitate n rinichi.

29

(a)
(b)

(c)
Fig. 6.13. Reprezentarea grafic a rezultatelor experimentale privind repartiia manganului
ingerat n organismul purceilor i n excret: (a) M; (b) E1; (c) E2
Ca i n cazurile fierului i cuprului, cel mai mare procent de mangan eliminat a fost
nregistrat pentru lotul cu cea mai mica cantitate de Mn ingerat. Ponderea cea mai mare de Mn
repartizat n organe o deine ficatul.

(a)

(b)

Fig. 6.14. Reprezentarea grafi a rezultatelor experimentale privind repartiia zincului ingerat
n organismul purceilor i n excret: (a) M; (b) E1;

30

(c)
Fig. 6.14. Reprezentarea grafi a rezultatelor experimentale privind repartiia zincului ingerat
n organismul purceilor i n excret: (c) E2
Din figurile 6.14. se observ c cel mai mare procent de Zn eliminat s-a nregistrat pentru
lotul E1 dei cantitatea de Zn ingerat nu a diferit ntre loturile experimentale. n ceea ce privete
cantitile de microelemente depozitate n organe pe parcursul experimentului, ponderea cea mai
mare o ocup ficatul. Ca i n cazul celorlalte microelemente studiate, explicaia este dat de faptul c
ficatul are cea mai mare mas, dintre organele studiate, dar i cea mai important concentraie de
microelement.
Cea mai mare concentraie de microelemente a fost determinat n ficat (de 2-3 ori mai mare
dect n cazul altor organe). n urma raportrii la masa de tesut organic, s-a confirmat faptul c ficatul
este depozitul principal de microelemente al organismului.
Cantitatea de Fe depozitat n organe de ctre purceii din lotul M este de aproximativ 1,7 ori
mai mare dect n cazul loturilor experimentale. Eficiena utilizrii fierului din sursa anorganic
prezent n hrana purceilor din lotul M a fost mai ridicat.
In cazul cuprului, valorile raportrilor procentuale dintre cantitatea depozitat i cea ingerat,
ct i dintre cantitatea depozitat i cea reinut n organism arata ca: E1 > M > E2, respectiv E1 > E2
> M. Pe aceast baz se poate trage concluzia c un nivel mai mic de Cu in raie a condus la o
utilizare mai eficient a acestuia, mai ales n cazul folosirii adaosurilor de plante n raie.
Si pentru Mn, valorile numerice ale raportului dintre cantitatea depozitat i cea ingerat, ct
i dintre cantitatea depozitat i cea reinut n organism au fost favorabile lotului E1: E1 > M > E2.
Pe aceast baz se poate trage concluzia c un nivel mai mic de Mn n raie a condus la o utilizare mai
eficient a acestuia.
O valoare a ingestei de 1,3 ori mai mare la purceii din lotul M, dect la cei din cele dou loturi
experimentale a condus la cantiti de Zn depozitate n organele animalelor lotului M de aproximativ
2 ori mai mari dect n cazul loturilor experimentale.

31

6.3. STUDIUL CORELAIEI NTRE CONINUTUL DE MICROELEMENTE

DIN ORGANISMUL ANIMAL I CONCENTRAIILE ACESTORA DIN
DIETELE DE HRAN MBOGITE CU AMESTECURI DE PLANTE
DIN FLORA SPONTAN
Valorile sporului mediu zilnic calculate pentru loturile martor, M i experimental, E2 (lot cu
amestec de oregano i afin), nu s-au difereniat semnificativ (P 0,05), chiar n condiiile reducerii
coninutului de sruri anorganice de Fe, Cu, Mn i Zn n premixurile raiilor. Dei raia lotului E1
(raia cu amestec de oregano i colul babei) a avut inclus acelai tip de premix ca i lotul E2,
performanele de cretere ale purceilor acestui lot au fost semnificativ (P 0,05) mai mici dect cele
ale animalelor lotului M i lotului E2. Aceste rezultate au fost cauzate de consumul semnificativ (P
0,05) mai mic nregistrat pentru acest lot. Explicaia lipsei de apetit a purceilor lotului E1 este c,
colul babei (planta cu spini mici) dei a fost mcinat de 2 ori inainte de includerea n furaj, a dat
totui acestuia o consisten rugoasa, iritant pentru purcei.
Parametrii hematologici i biochimici se ncadreaz n intervalul normal de valori, pentru
purceii din loturile M i E2. n cazul lotului E1, s-a determinat un numr de leucocite n snge sub
limita inferioar a intervalului normal ceea ce ar putea indica o stare infecioas instalat n organism
sau un tip de anemie.
Datele bilanului mineral
Conform rezultatelor bilanului, ingesta de Fe la purceii din lotul E1 a fost, aproximativ cu 60
% mai mic dect la cei din lotul M datorit consumului mic de hran. La purceii din lotul E2,
ingesta a fost mai mare cu 18,5% fa de cei din lotul M datorit aportului important de fier adus n
hran de plantele adaugate. n aceste condiii, cantitatea de Fe eliminat prin fecale a fost semnificativ
(P 0,05) mai mic la loturile E1 (aproximativ cu 55%) i E2 (aproximativ cu 15%) fa de M.
Coeficienii de absorbie i retenie ai fierului determinai la purceii din lotul M au fost semnificativ
(P 0,05) mai mari fa de coeficienii determinai la purceii din loturile E1 i E2.
n cazul cuprului, ingesta la lotul E2 (fr premix mineral dar cu supliment de 3% oregano i
1% afin), a fost cu 75% mai mic dect pentru M, iar la lotul E1 (fr premix mineral dar cu
supliment de 3% oregano i 1% colul babei) a fost cu 85% mai mic dect pentru M. Ca i n cazul
fierului, diferena dintre ingesta celor doua loturi experimentale s-a datorat unui consum de furaj mai
mic nregistrat pentru purceii din lotul E1. n aceste condiii, cantitatea de Cu eliminat prin fecalele
purceilor din lotul E2 a fost cu 56% mai mica dect in cazul purceilor din lotul M. Cantitatea de Cu
eliminata prin fecale de purceii din lotul E1 a fost cu 75% mai mic dect cea a purceilor din lotul M.
Aa cum era de ateptat, coeficenii de absorbie i retenie ai cuprului la lotul M sunt semnificativ
(P0,05) mai mari dect la loturile experimentale. i ntre loturile experimentale au fost diferene
semnificative n ceea ce privete valoarea coeficienilor de absorbie i retenie calculai, n favoarea
lotului E2.

32

Rezultatele bilanului mineral arat c ingesta de Mn la purceii din lotul E2 a fost, cu 55% mai
mica dect la cei din lotul martor. La lotul E1, ingesta de Mn a fost cu 75% mai mic dect la lotul
M. Diferena ntre loturile experimentale a fost determinat de consumul diferit de hrana. Cantitatea
de Mn eliminat prin fecale la lotul E2 a fost cu 52% mai mic dect la lotul M, iar pentru purceii de
la E1 cu 62% mai mic dect la lotul M. Coeficienii de absorbie i retenie ai manganului la lotul M
sunt semnificativ (P 0,05) mai mari dect la loturile experimentale. i ntre loturile experimentale
au fost diferene semnificative (P 0,05) n ceea ce privete valoarea coeficienilor de absorbie i
retenie calculai, n conformitate cu datele obinute pentru ingesta i excreta.
Ingesta de Zn la purceii din lotul E2 a fost cu 25% mai mic dect pentru purceii din lotul M,
iar la animalele din lotul E1 cu 85% mai mic. Diferen ntre loturile experimentale a fost adus de
consumul diferit de hran. Cantitatea de Zn eliminat prin fecale la lotul E2 a fost cu 19% mai mic
dect la lotul M, iar pentru purceii din lotul experimental E1 cu 75% mai mic dect pentru animalele
din lotul M. Coeficenii de absorbie i retenie ai zincului la purceii din lotul M sunt mai mari dect
la purceii din lotul E2, dar nesemnificativ. Valorile calculate pentru aceeai coeficienti in cazul
purceilor din lotul E1 au diferit semnificativ fa de animalele din loturile M i E2.
Cu ajutorul datelor de bilan au fost construite graficele din figura 6.19. Ele evideniaza
corelaia deosebit de bun ntre cantitatea de microelement ingerat i cea excretat de animalele
participante la experiment.
Pentru a cuantifica relaia existent ntre cantitile de microelemente ingerate i cele
eliminate prin fecale i urin, s-au considerat ecuaiile de regresie i coeficienii de corelaie: pentru
Fe: Y= 0,5061X + 54,918; R2 = 0,9964; pentru Cu: Y= 0,3764X + 3,1152; R2 = 0,9956; pentru Mn:
Y= 0,5133X + 5,8562; R2 = 0,9889; pentru Zn: Y= 0,4727X + 9,5494; R2 = 0,9970.
n cazul celor trei loturi studiate s-a respectat aceeai relaie de proporionalitate ntre ingesta
i excreta pentru toate microelementele studiate. Cantitile mici de microelemente ingerate ct i de
microelemente excretate sunt evideniate prin situarea punctului corespunztor lotului E1 n partea
inferioar a graficului.
Deoarece pe durata experimentului, bilanul mineral a fost efectuat sptmnal, se poate
urmri evoluia eliminrilor de microelemente prin fecale (figura 6.20.).
50,00

300,00

C u elim inat m g /z i/anim al

F e elim inat m g /z i/anim al

330,00

E1

270,00

E2

240,00
210,00
180,00
150,00
120,00

M
E1

40,00

E2

30,00
20,00
10,00

90,00
2

16

22

0,00

z ile

z ile

16

(a)
Fig. 6.20. Evoluia eliminrii de microelemente prin fecale, n timp: (a) fier, (b) cupru

33

22

(b)

80,00
Mn elim inat m g /z i/anim al

Z n elim inat m g /z i/anim al

70,00

E1

60,00

E2

50,00
40,00
30,00
20,00
10,00

140,00

120,00

E1
E2

100,00
80,00
60,00
40,00
20,00
0,00

0,00
2

16

2,00

22

9,00

16,00

22,00

z ile

z ile

(c)
(d)
Fig. 6.20. Evoluia eliminrii de microelemente prin fecale, n timp: (c) mangan, (d) zinc
Cantitile mici de Fe ingerate se regsesc, proporional i n cantitile eliminate, graficul
corespunztor lotului E1 avnd o alur descendent. Tendina eliminrilor de Fe pentru purceii din
lotul M este ascendent, n timp ce graficul corespunzator purceilor din lotul E2 este constant n timp.
Eliminarile de Cu i Mn prin fecale la purceii din lotul M au fost mai mari nc din perioada de
nceput a experimentului, datorita unor concentraii mai mari de microelemente n furaj. Tendina
descendent a eliminrilor de Cu i Mn n timp este similar observaiilor fcute n cazul fierului.
Eliminrile de Zn prin fecale la purceii din lotul M depesc ca valoare cantitile corespunztoare
animalelor din cele dou loturi experimentale, fiind astfel evideniat nivelul redus de Zn din raiile
loturilor E1 i E2. Cele mai mici cantiti eliminate pe tot parcursul experimentului caracterizeaz
purceii din lotul E1 n conformitate cu cantitile ingerate.

(a)
Fig. 6.21. Valori medii ale concentraiilor de Fe (a), Cu (b), determinate n organele de depozit

34

(b)

(c)
Fig. 6.21. Valori medii ale concentraiilor de Mn (c), Zn (d) determinate n organele de depozit

(d)

Nivelul concentratiilor de Fe determinate n organele purceilor sacrificati la nceputul

experimentului nu au fost egalate in finalul experimentului la niciunul dintre cele 3 loturi. Cantitile
de Fe determinate n organele animalelor din lotul E1 sunt n concordan cu parametrii evaluai
anterior, adic semnificativ mai mici fa de cazul animalelor din loturile M i E2. Pentru toate
organele, concentraiile de Cu determinate n cazul purceilor din lotul M au fost semnificativ (P
0,05) mai mari dect cele regsite n organele purceilor din loturile experimentale. Acest fapt este n
conformitate cu ingesta mai mare de Cu la lotul M. Concentraiile de Cu n organele animalelor din
lotul E1 au fost semnificativ (P 0,05) mai mici fa de cele nregistrate la loturile M i E2. ntre
concentraiile de Mn din organele animalelor aparinnd loturilor M i E2 nu au existat diferene
semnificative. Cele mai mari concentraii de Zn s-au gsit n ficat. Concentraiile de Zn determinate
n organele animalelor, altele dect ficatul, nu s-au difereniat semnificativ (P > 0,05) ntre loturile
M i E2.
Cantitatea de Fe depozitat n organele purceilor lotului M a fost de aproximativ 2,7 ori mai
mare dect n cazul lotului E2. Dei cantitatea de Cu ingerat de animalele din lotul M a fost de 4 ori
mai mare dect cantitatea ingerata de cele din lotul E2, cantitatea de Cu depozitat n organe de
purceii din lotul M n fiecare zi a experimentului a fost de doar 2,3 ori mai mare. Se poate considera
c un nivel mai mic de Cu n raie a condus la o utilizare mai eficient a acestuia. Raportul dintre
cantitatea de Mn ingerat de purceii din lotul M fa de cea ingerata de animalele din lotul E2, a fost

35

de 2,2. Raportul dintre cantitatea de Mn depozitat de purceii din lotul M fa de E2 a fost de 1,7.
Rapoartele dintre cantitatea depozitat i cea ingerat, ct i dintre cantitatea depozitat i cea reinut
n organism, sunt favorabile animalelelor lotului E2. Se poate considera c un nivel mai mic de Mn n
ratie a condus la o utilizare mai eficient a acestuia. Pentru purceii din lotul E1, la care s-a nregistrat
o eliminare masiv de Mn prin fecale, cantitatea reinut n organism a avut o valoare mic,
comparativ cu celelalte loturi. Datorit valorii negative nregistrate pentru depozitele de Zn in
organele purceilor din lotul E1, s-au obinut valori negative i pentru rapoartele calculate astfel incat
se poate concluziona c raia administrat a fost ineficient n privina depozitrii zincului n
organismul animalelor. Coeficienii obinuti prin cele dou tipuri de raportri au fost superiori pentru
animalele din lotul M.
CONCLUZII
Microelementele sunt eseniale pentru majoritatea proceselor metabolice de baz care au loc
n organismul animal. Principalele funcii ale microelementelor sunt legate de participarea la
transportul sanguin al oxigenului, hematopoeza, respiraia tisular i au rol funcional in sistemele
enzimatice. Raiile purceilor sunt suplimentate n mod obinuit cu microelemente, care se adaug n
hrana animalelor sub form de compui anorganici sau organici din surse naturale sau de sintez.
Principalii factori care limiteaz suplimentarea cu microelemente a raiei de baz a purceilor sunt
legai de biodisponibilitatea surselor de microelemente i de impactul acestora asupra mediului
nconjurtor. n acest context, n cadrul elaborrii tezei de doctorat au fost efectuate studii privind
nlocuirea suplimentelor de substane anorganice din hrana animalelor cu plante sau extracte din
plante pentru mbuntirea calitii produselor animale i pentru o mai bun protecie a mediului.
Obiectivul tezei a fost de a caracteriza din punct de vedere chimico-analitic mai multe tipuri
de probe biologice de origine vegetal i animal n vederea evalurii corelaiilor existente ntre
coninutul de microelemete din raiile de hran i regsirea acestora n organismul animal. n mod
concret, s-au evaluat aceste corelaii n cazul suplimentrii raiilor purceiilor recent nrcai cu
anumii fitoaditivi (specii i amestecuri de plante din flora spontan i de cultur) n ideea
mbuntirii statusului mineral i a protejrii mediului prin reducerea cantitilor de premixuri
minerale. Fitoaditivii (aditivii fitogenici) folosii ca suplimente n hrana animalelor sunt plante sau
produi derivai din plante care sunt nglobai n raiile furajere cu scopul de a mbunti
productivitatea animalelor sau/i pentru a crete calitatea alimentelor obinute de la aceste animale.
Premixurile minerale (amestecuri de substane anorganice) sunt folosite n mod curent ca suplimente
n hrana animalelor.
Originalitatea datelor prezentate n cadrul tezei de doctorat const n:
- caracterizarea urmtoarelor resurse vegetale: ctina, topinambur, oregano, afin i colul
babei, din punct de vedere al coninutului de microelemente Cu, Fe, Mn, Zn. Pe baza datelor obinute,
s-a putut stabili, care dinte aceste plante pot fi folosite ca surse de microelemente n hrana purceilor
recent nrcai;

36

- evaluarea efectelor resurselor vegetale propuse din perspectiva folosirii lor ca surse de
microelemente, asupra statusului mineral al purceilor nrcai. Aceste plante au fost utilizate i
evaluate, pentru prima dat, ca posibili ageni de prevenire a afectiunilor asociate dezechilibrelor
minerale produse prin nrcarea purceilor, de exemplu anemia feripriv. De asemenea, prin folosirea
acestor plante, s-a studiat posibilitatea reducerii adaosurilor de microelemente de origine anorganic
n raiile purceilor (practica uzual), implicit reducerea cantitilor de microelemente eliminate prin
fecale, component important pentru strategiile de protejare a mediului.
Pentru atingerea obiectivelor, s-a pornit de la realizarea unui studiu bibliografic privind
microelementele eseniale si folosirea metodelor spectrometrice pentru determinarea coninutului de
microelemente din probe vegetale i probe biologice de origine animal.
In continuare, in primul capitol din partea experimental a tezei de doctorat, au fost
evideniate aspectele practice ale studiului prin precizarea modalitilor de luare i pregtire a
probelor pentru analiz, stabilirea condiiilor optime de lucru pentru determinarea concentraiilor de
microelemente Fe, Cu, Mn, Zn din probe biologice i organizarea experimentelor de nutriie animal:
experimente de tip microtest i experimente de tip macrotest. Aceast etap a fost urmat de validarea
metodelor de determinare a microelementelor Fe, Cu, Mn, Zn din probe biologice si prezentarea
rezultatelor obinute in experimentele de nutriie animal care au vizat stabilirea de corelaii ntre
coninutul de microelemente din organismul animal i concentraiile acestora din dietele de hran
mbogite cu extracte vegetale, plante din flora spontan, sau plante de cultur.
Din punct de vedere analitic, probele biologice au o matrice organic complex care conine
specii chimice a cror proporie poate exista de la nivelul urmelor pn la componeni majori. Acest
fapt a impus dezvoltarea unei game largi de metode analitice. Totui, spectrometria de absorbie
atomic este considerat a fi metoda de referin pentru analiza microelementelor din probe biologice.
Aspectele practice ale organizrii experimentelor efectuate n cadrul studiilor din teza de
doctorat privind evaluarea efectelor unor suplimente din plante sau extracte din plante asupra
coninutului de microelemente din organismul animal se refer la: prelevarea i pregtirea probelor
biologice (materiale vegetale sau probe de origine animal) n vederea analizrii lor; stabilirea
condiiilor optime de lucru pentru determinarea concentraiilor de microelementelor Fe, Cu, Mn, Zn
din probe biologice, validarea sau verificarea n laborator a metodelor de lucru folosite; organizarea
experimentelor de nutriie animal: experimente de tip microtest i experimente de tip macrotest.
Studiul privind compararea metodelor de dezagregare a probelor biologice de origine animal i
vegetal, n vederea determinrii cantitative a coninutului de microelemente, a fost efectuat pe
materiale de referin i a avut ca rezultat alegerea metodei de dezagregare cu microunde ca fiind
metoda optim de aducere n soluie a microelementelor din probe de ficat i din probe de material
vegetal. Aceast metod necesit cel mai scurt timp de lucru, un volum mediu de reactivi concentrai
i este caracterizat de exactitate exprimat prin valori foarte apropiate de 100%.
S-a urmat protocolul de validare pentru metoda de dezagregare cu microunde i determinare
prin FAAS a microelementelor Fe, Cu, Mn i Zn din probe de ficat material de referin. n urma
validrii metodei de determinare a fierului, cuprului, manganului i zincului din probe biologice de
origine animal i vegetal prin spectrometrie de absorbie atomic n flacr, dup dezagregare cu

37

microunde i a calculului incertitudinii asociate, s-a putut trage concluzia, pe baza rezultatelor
obinute, c metoda corespunde scopului propus de a realiza un studiu chimico-analitic al corelaiei
dintre coninutul de microelemente din dietele de hran suplimentate cu extracte de plante, sau cu
plante i nivelul de regsire al acestora n organismul animal.
ntruct nu se dispune de un material de referin pentru validarea metodei de determinare a
microelementelor Fe, Cu, Mn, Zn din probe de natur vegetal din flora spontan i stabilirea
coninutului de microelemente din astfel de plante, s-a organizat un studiu interlaboratoare.
Rezultatele furnizate de ctre participanii la studiu au alctuit iruri de date care acoper o plaj
relativ larga de valori, iar media aritmetic calculat nu caracterizeaz irurile formate. Pentru
stabilirea irurilor de date omogene, a mediei, a deviaiei standard i a inceritudinii s-a aplicat
Algoritmul A. Pentru a evalua capacitatea de analiz a laboratoarelor participante, s-au calculat
scorurile Z, Z i Zeta. Din totalul datelor obinute pentru scorurile analizate, s-au nregistrat 9 valori
zeta discutabile sau nesatisfctoare. Aceste rezultate pot fi puse pe seama unor valori subestimate ale
incertitudinilor de calcul raportate de ctre participanii la studiul interlaboratoare. Rezultatele
obinute n urma aplicrii Algoritmului A, au artat c toate cele 3 plante analizate conin concentraii
importante de microelemente. Valorile determinate justific folosirea acestor plante n studii de
nutriie animal. Plantele oregano, afin i colul babei, analizate au fost folosite ca adaosuri n raiile
de hran ale unor purcei nrcai n cadrul a dou experimente
Rezultatele analizelor chimice efectuate n experimentul de nutriie animal n cadrul studiului
chimico-analitic al corelaiei ntre coninutul de microelemente din organismul animal i
concentraiile acestora din dietele de hran mbogite cu inulina, au artat c prezena inulinei a
imbuntit biodisponibilitatea cuprului din raiile de hran ale purceilor nrcati. Nu s-au nregistrat
diferene semnificative ntre loturi n privina depozitelor de Mn i Zn din ficat. Biodisponibilitatea
cuprului a fost mai crescut n cazul purceilor crescui n condiii de igien ideale fa de cei crescui
n condiiile unei ferme comerciale.
Experimentul efectuat pentru studiul chimico-analitic al corelaiei ntre coninutul de
microelemente din organismul animal i concentraiile acestora din dietele de hran mbogite cu
plante de cultura, a demonstrat ca utilizarea unui amestec format din tuberculi presai de topinambur
(Helianthum tuberossum) i frunze de ctin (Hippophae rhamnoides), sub form de pulbere uscat,
n raiile purceilor, n care aportul de sruri anorganice a fost redus la jumtate (n comparaie cu un
premix comercial), nu a afectat negativ performanele bioproductive i nici profilul parametrilor
hematologici ai purceilor, care s-au nscris n valorile specifice speciei i categoriei. Amestecul a fost
testat, att n condiii de microtest, ct i condiii de macrotest, iar datele obinute n experimentul
macrotest au fost confirmate de cele furnizate de experimentul microtest.
Pentru studiul corelaiei ntre coninutul de microelemente din organismul animal i
concentraia acestora din dietele de hran mbogite cu plante din flora spontan, s-au organizat doua
experimente. Fitoaditivii folosii n experimente au fost inclui n raii individual sau n amestecuri.
Plantele folosite au fost: oregano (Origanum Vulgare L.), afin (Vaccinium myrtillus L.), colul babei
(Tribulus terestris) i un amestec de catin i topinambur.

38

n cadrul experimentului n care hrana unor purcei nrcai au fost adugate suplimente de
oregano, ca surse organice de microelemente, performanele bioproductive nu au fost afectate prin
scderea coninutului de microelemente din premixul mineral administrat purceilor. Nivelurile de
microelemente (Fe, Cu, Mn, Zn) excretate au fost proporionale cu cele ingerate, fapt important din
punct de vedere al polurii mediului cu metale grele. Biodisponibilitatea microelementelor din
oregano, a compensat nivelul scazut de element mineral primit prin premix.
n experimentul n care n hrana purceilor nrcai au fost adaugate amestecuri de plante
recoltate din flora spontan, ca surse organice de microelemente, performanele bioproductive nu au
fost afectate prin scderea coninutului de microelemente din premixul mineral administrat purceilor,
n cazul folosirii unui amestec de oregano si afin. Nivelurile de microelemente Fe, Cu, Mn, Zn
excretate au fost proporionale cu cele ingerate, fapt important din punct de vedere al polurii
mediului cu metale grele. Biodisponibilitatea microelementelor din amestecul de oregano i afin, a
compensat nivelul sczut de element mineral primit prin premix.
Datorit consistenei iritante pe care a imprimat-o suplimentul de colul babei furajului, pentru
purceii lotului care a primit supliment de oregano i colul babei s-au inregistrat parametri
bioproductivi semnificativ mai mici decat pentru celelalte loturi studiate. i cantitaile de
microelemente eliminate, au fost reduse pentru purceii acestui lot, acest fapt fiind n concordan cu
cantitile mici de microelemente ingerate. Pe parcursul experimentului nu au fost depozitate cantitai
de microelemente n tesuturile organice evaluate. Raia administrat purceilor a fost ineficient n
privina depozitrii microelementelor n organismul animalelor. Biodisponibilitatea microelementelor
din amestecul de oregano i colul babei, a fost redus i a afectat statusul microelementelor n
organismul purceilor, acest amestec neputnd compensa microelementele primite de purcei n mod
uzual prin premix.
Rezultalele studiilor chimico-analitice afectuate pe probe biologice de material vegetal i de
organe animale obinute n cadrul unor experimente de nutriie animal, sunt prezentate i discutate n
teza de doctorat n cuprinsul a 4 capitole (Capitolele 3 - 6). Ele sunt prezentate n 134 de tabele i 66
de figuri. Datele experimentale au fost discutate n corelaie cu informaiile existente n literatura de
specialitate, prezentat sistematizat n Capitolele 1 i 2.
Pe baza rezultatelor experimentale obinute n cadrul studiilor efectuate pentru elaborarea
tezei de doctorat, se poate aprecia c nlocuirea adausurilor de minerale sub form de sruri sau oxizi
anorganici i a antibioticelor n hrana purceilor, cu anumite plante de cultur sau din flora spontan
sau cu extracte de plante, are un efect benefic asupra sntii i a creterii animalelor, a calitii
produselor alimentare i a protejrii mediului. Pot fi recomandate n acest sens, inulina (extras din
cicoare), oregano i fructele de afin (din flora spontan) i ctina i topinamburul cultivate ca plante
medicinale.
Teza de doctorat este prezentat pe parcursul a 270 de pagini si cuprinde 207 referine
bibliografice.

39

BIBLIOGRAFIE
(selecie din tez)
***Validation of Analytical Procedures. Methodology, step 4. ICH Topic Q2B
(CPMP/ICH/281/95). Definitions and Terminology, step 5. ICH Topic Q2A
(CPMP/ICH/381/95), (1995).
Apgar G.A., Kornegay E.T., Lindemann M.D. and Notter D.R., J. Anim. Sci. , 73, 2640-2646,
(1995).
Beveridge, T., Li, T.S., Oomah, B.D., Smith, A., J Agric Food Chem., 47(9), 3480-8, (1999).
Carlson M.S., Hill M.G., Link J.E, J. Anim. Sci. , 77, 1199-1207, (1999).
Da-Col, J.A., Domene, S.M.A., Pereira-Filho, E.R., Food Analitycal Methods, 2(2), 110-115,
(2009).
Demirel, S., Tuzen, M., Saracoglu, S., Soylak, M., Journal of Hazardus Materials, 152 (3), 10201026, (2008).
Doner, G., Akman, S., Anal. Lett., 33, 3333-3341, (2000).
Doner, G., Ege, A., Analytica Chimica Acta, 520(1-2), 217-222, (2004).
Emons, H., Held, A., Ulberth, F., Pure Appl. Chem., 78, 135-143, (2006).
Ettle, T., Schelegel, P., Roth, F.X., Journal of animal physiology and animal nutrition, 92, 35-43,
(2007).
Florian, D., Knapp, G., Anal. Chem., 73 (7), 15151520, (2001).
Han, Y.K., Thacker, P.A., Journal of Animal and Veterinary Advances, 8 (5), 868-875, (2009).
Han, Z.K., Wang, G.J., Yao, W., Zhu, W.Y., Curr.Iss. Intest. Microbiol, 7, 53-60, (2006).
Hill, G.M., Mahan D.C., Carter S.D., Cromwell G.L., Ewan R.C., Harold R.L., Lewis P.S., Miller
P.S., Shurson G.C., Veum T.L., J.Anim.Sci., 79, 934-941, (2001).
Iskandar, M., Swist, E., Trick, K., Wang, B., LAbbe, M.R. & Bertinato, J., Nutrition Journal, 4,
35-37, (2005).
Jondreville, C., Hayler, R. and Feuerstein, D., Animal Science, 81, 77-83, (2005).
Lalles J.P., Archiva Zootechnica, 11 (1), 5-15, (2008).
Lalles, J.P., Bosi, P., Smidt, H., Stockes, C.R., Livestock Science, 108(1-3), 82-93, (2007).
Loh, G., Eberhard, M., Brunner, R.M., Hennig, U., Kuhla, S., Kleessen, B. & Metges, C.C.,
Journal of Nutrition, 136, 1198-1202, (2006).
Mesco, M.F., Moraes, D.P., Barin, J.S., Dressler, V.L., Knapp, G., Flores, E., Microchemical
Journal, 82(2), 183-188, (2006).
Mutlu, C., Trkmen, M., Trkmen, A., Tepe, Y., Bull Environ Contam Toxicol., 87(3), 282-6,
(2011).
Nicholson, F; Chambers, B.J., Trace elements in animal production systems, Wageningen
Academic Publishers, 55-63, (2008).
Parvu Gh., Costea M., Pirvu M., Nicolae B., Tratat de Nutritia Animalelor, Coral Sanivet,
Bucuresti, (2003).
Pereira-Filho, E.R., Berndt, H., Arruda, M.A.Z., J. Anal. At. Spectrom., 17, 1308-1315, (2002).

40

Pop M.I., Halga P., Avarvarei T., Nutritia si alimentatia animalelor, vol I., Editura Tipo
Moldova, Iasi, (2006).
Poulsen H.D., Larsen T., Livest. Prod.sci., 43, 235-242, (1995).
Revy, P.S., Jondreville, C., Dourmad J.Y., Guinotte, F. Nys, Y., Anim. Res., 51, 315-326,
(2002).
Rincker M.J., Hill, G.M., Link J.E., Rowntree J.E., J. Anim. Sci., 82, 3189-3197, (2004).
Rincker, M.J., Clarke, S.L., Einstein, R.S., Link, J.E., Hill, G.M., J.Anim.Sci., 83, 2137-2145,
(2005).
Rozica, S., Onjia, A., Dogo, S., Slavkovic, L., Popovic, A., Talanta, 67(1), 233-239, (2005).
Scholz-Ahrens, K. & Schrezenmeir, J., Journal of Nutrition, 137, 2513-2523, (2007).
Soylak, M., Colak, H., Tuzen, M., Turkoglu, O., Elci, L., Journal of Food and Drug Analysis,
14(1), 62-67, (2006).
Soylak, M., Tuzen, M., Souza Anderson, S., das Gracas, A.K.M., Ferreira, S.L.C., Journal of
Hazardus Materials, 149 (2), 264-268, (2007).
Soylak, M., Unsal Y.E., Food and Chemical Toxicology, 48(6), 1511-1515, (2010).
Spears, J.W., Hansen, S.L., Trace elements in animal production systems, Wageningen Academic
Publishers, 55-63, (2008).
Thompson, M., Accred. Qual. Assur., 10, 574-575, (2006).
Tuzen, M., Food and Chemical Toxicology, 47(8), 1785-1790, (2009).
Tuzen, M., Soylak, M., Food Chem., 102, 1089-1095, (2007).
Uluozlu, O.D., Tuzen, M., Mendil, T., Soylak, M., Journal of Hazardous Materials, 163 (2-3),
982-987, (2009).
Untea, A., Criste, R., Olteanu, M., Olaru, R., Enache, L., Estimation of Fe and Zn concentration
from 3 nourishing supplements to organizing a nutrition experiment on weaned piglets, 4th
International Symposium on Recent Advances in Food Analysis, Prague, Czech Republic, 4-6
November, 2009 (prezentare poster).
Untea, A., Criste, R.C. and Vladescu, L.; Development and validation of a liver samples
preparation method for FAAS trace elements content determination, 7th Aegean Analitycal
Chemistry Days, Lesvos, Grecia, 29 sept. 3 oct., (2010 a) (prezentare poster).
(Untea, 2010b) - Criste, R.D., Untea, A., Olteanu, M., Costache, I., Balint, L., Ionescu, M, Studiu
interlaboratoare de determinare a concentratiei de Cu in trei plante din flora spontana in
vederea evaluarii potentialului acestora ca surse naturale de minerale pentru purcei, Arhiva
Zootehnica, 13:2, 19-29, (2010).
Untea, A., Criste, R., Cornescu, G., Radutoiu, D., Interlaboratory study on Mn determination in 3
species of spontaneous flora used as alternative mineral sources for weaning piglets (10-30
kg), XIV International Symposium Feed Technology, Novi Sad, Serbia, 97-104, (2010c).
(Untea, 2010d) Hebean, V., Lefter, N., Criste, R.D., Untea, A., Tamas, V., Belala, D., Effects
of partial replacement of copper sulphate from weaned piglets diets (10-30 kg) with a
botanical mix on bioproductive performance and Cu excreta, 7th International Copper
Meeting: Copper in Biology, 16-20 octombrie (2010), Alghero, Sardinia (prezentare poster).

41

(Untea, 2010e) - Lefter, N., Untea, A., Hebean, V., Belala, D., Tamas, V., Effects of a botanical
mix in weaned piglets diets (10-30 kg) on bioproductive performance and excreta of some
trace elements (Zn, Fe, Mn), Al 9lea Simpozion Internaional de Biologie i Nutriie Animal,
Bucuresti, Romania, 23-24 septembrie, (2010) (prezentare poster).
(Untea, 2010f) - Papuc C., Criste R., Durdun N., Untea A., Nicorescu A. The effect of some
mineral and phytogenic additives, rich in polyphenols, upon lipid peroxidation process,
Revista de Chimie, 61 (10), 920-925, (2010).
Untea, A., Criste, R.D., Radutoiu, D., Effects of the supplemental oregano (Oregano Vulgaris)
given to weaned piglets on iron absorption, retention and elimination, al 9-lea Simpozion
Internaional de Biologie i Nutriie Animal, Bucuresti, Romania, 23-24 septembrie, (2010g),
(comunicare oral).
Untea A., Criste R.D., Panaite T., Costache I.; Effect of the dietary oregano (origanum vulgare)
on Cu and Zn balance in weaned piglets, Journal of Trace Elements in Medicine and Biology,
25 (1), S35-S40, (2011).
Untea, A., Criste, R.C. and Vladescu, L.; Development and validation of a microwave digestion
FAAS procedure for Cu, Mn and Zn determination in liver; Revista de Chimie, 63 (4), 341346, (2012a).
(Untea, 2012b) Taranu I., Marin D. E. , Untea A., Janczyk P., Motiu M., Criste R. D., and
Souffrant W.B., Effect of dietary natural supplements on immune response and mineral
bioavailability in piglets after weaning, Czech Journal of Animal Science, 57(7), 332-343,
(2012b).
Untea, A., Criste, R.D., Taranu, I., Souffrant, W.-B., Ianckic, P., Vladescu, L., Dragomir, C.,
Effects of dietary inulin on mineral bioavailability in recently weaned piglets, Czech Journal
of Animal Science, (2012c) (trimis la revist).
(Untea, 2012d) Criste, R.D., Untea, A., , Olteanu, M., Radutoiu, D., Lacatusu A. and Vladescu,
L., Microelements content assessement of some plant species of Romanian spontaneous flora,
Communications in Soil Science and Plant Analysis, (2012) (trimis la revist)
(Untea, 2012e) Criste, R.D., Untea, A., Vladescu, L., Olteanu, M., Mircea E., Lacatusu, A.,
Oregano, a Possible Natural Source of Trace Elements: Iron Status in Piglets, Animal Feed
Science and Technology, (2012) (trimis la revist).
(Untea, 2012f) Untea, A., Criste, R.D., Vladescu, L., Tamas V., Lefter N., Mihaila C., The
effect of a botanical mix in weaned piglets diets (10-30 kg) on Cu status, Journal of Animal
Feed Science, (2012) (in lucru).
Veum, T.L., Carlson, M.S., Wu, W.C., Bollinger, D.W., Ellersieck, M.R., J. Anim. Sci., 82, 10621080, (2004).

42