Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Subiecte Microbiologie An II Sem I Rezolvate
Subiecte Microbiologie An II Sem I Rezolvate
ARN-/sinteza
proteinelor
Ribozomi
Structur
citoplasmatic
Perete celular
cuplat n citoplasm
Micarea celulelor
Metabolism
Mitocondria
Organite
citoplasmatice
Organizare
Diviziunea celulelor
EUCARIOTE
medie: 5-20 microni
protiste, ciuperci, plante, animale
nucleu cu membran dubl
Cromozomi lineari cu proteine histone.
ADN-ul eucariotei este organizat ntr-unul
saumai multe molecule liniare, numite
cromozomi , care sunt asociate cu proteine
histone. Toate ADN-urile cromozomiale sunt
stocate n nucleul celulei, separate de
citoplasma printr-o membran. Unele
organite eucariote, cum ar fi mitocondriile
conin deasemenea ADN.
sintez de ARN n nucleu
sintez de proteine n citoplasm
60S+40S
structur complex cu membrane
intracitoplasmatice i citoschelet
Membrana plasmatic se aseamana cu cea a
procariotelor n funcie, cu diferene minore
n configurare. Pereii celulelor pot fi sau nu
prezeni.
pg. 1
rotunde (cocii),
alungite (bacili),
ncurbate (spirili, spirochete, vibrioni)
filamentoase (actinomycetele).
Cocii:
-
Bacilii
Sunt bacterii cu form alungit de bastonas cu dimensiuni ntre 1,5 - 10. La bacili este
important examinarea extremitilor, aspectul acestora avnd rol n identificarea lor. Astfel,
bacilii pot prezenta:
- capetele rotunjite (familia Enterobacteriaceae),
- tiate drept (Bacillus anthracis - bacilul crbunos),
- mciucate (Corynebacterium diphteriae - bacilul difteric),
- n form de suveic (Fusobacterium);
Cocobacilii
Sunt bacterii uor alungite, fiind forme intermediare ntre coci i bacili (Yersinia pestis,
Bordetella pertussis, Haemophilus influenzae);
Vibrionii sunt bacterii ncurbate n form de virgul (Vibrio cholerae);
Spirilii sunt bacterii spiralate avnd 1-2 spire rigide (Spirillum volutans);
Spirochetele sunt bacterii spiralate cu corpul flexibil avnd:
- 12-20 de spire (Treponema pallidum),
- foarte multe spire strnse (Leptospira)
- 2-3 spire (Borrelia):
Actinomicetele sunt bacterii foarte asemntoare fungilor i formeaz filamente sau hife lungi
i ramificate care se rup, rezultnd forme bacilare (Actinomyces).
pg. 2
DUPA ASEZARE:
COCI:
- n grmezi sau asemntor unei ciorchini de struguri ca, de exemplu, germenii din genul
Staphylococcus;
- n tetrade la genul Micrococcus;
- n baloturi de cte 8 coci orientai n cele 3 direcii ale spaiului la genul Sarcina;
- n lanuri la genul Streptococcus;
- n diplo, ca dou flcri de lumnare care se unesc prin bazele lor, la specia
Streptococcus pneumoniae;
- n diplo, ca dou boabe de cafea care se privesc fa n fa prin concavitile lor ca, de
pild, la Neisseria gonorrhoeae (gonococ) i Neisseria meningitidis (meningococ);
- izolai, care nu sunt de interes medical.
BACILI:
- cel mai ades izolai i n poziii ntmpltoare unul fa de cellalt ca, de exemplu,
majoritatea bacililor gram-negativi;
- grupai cte doi (diplobacili) sau n lanuri scurte ca, de exemplu, genul Klebsiella;
- dispui n lanuri ca bacilii din genul Bacillus (bacilul crbunos);
- dispui n mod caracteristic sub forma unor majuscule sau litere chinezeti cum sunt
bacilii difterici (Corynebacterium diphteriae);
- n palisad, ca scndurile unui gard (bacilii difterimorfi).
3. Enumerati componentele constante si facultative ale celulei bacteriene
CONSTANTE
Nucleul bacterian
Citoplasma
Situat ntre materialul nuclear i faa intern a membranei citoplasmatice, citoplasma este un
sistem coloidal alctuit din 80% ap, n care se gsete o cantitate mare de molecule organice,
ioni anorganici, enzime, ARN, vacuole i incluzii.
. Ribozomii reprezint sediul sintezelor proteice din celul.
Incluziile sunt structuri legate de activitatea metabolic a celulei bacteriene i reprezint
un material de rezerv care poate fi folosit ca surs de energie.
pg. 3
Membrana citoplasmatic
Este o membran fin (6,5-7nm), elastic, lipsit de rezisten mecanic ce mrginete la
exterior citoplasma bacteriilor i o separ de peretele celular funcia de barier osmotic ce
regleaz schimburile celulei bacteriene, secret numeroase enzime hidrolitice, este sediul
sintezei acizilor grai, a fosfolipidelor ETC
Mezozomii
Sunt structuri membranare care se formeaz prin invaginarea membranei citoplasmatice sub
form de buzunar sau n deget de mnu, prezente la bacteriile gram - pozitive i ocazional la
cele gram negative.Ei particip la replicarea cromozomului bacterian i diviziunea celular,
sinteza peretelui celular i formarea sporului bacterian.
Peretele celular
pg. 4
Bacteriile gram
-
Peptidoglicanul are o grosime de 4-5nm, reprezentnd numai 10% din greutatea uscat
a bacteriei.
Stratul superficial este ns mult mai complex dect la bacteriile gram - pozitive fiind
alctuit din:
membran extern,
lipoproteine
lipopolizaharidul de perete.
pg. 5
pg. 6
pg. 7
Se spala cu apa
Citirea si interpretarea:
pg. 8
pg. 9
citoplasmatice sub form de buzunar sau n deget de mnu, prezente la bacteriile gram pozitive i ocazional la cele gram - negative. Ei nu formeaz n citoplasm caviti inerte, ci
deschise spre spaiul periplasmic (spaiul dintre membrana citoplasmatic i peretele celular) i
sunt n contact direct cu materialul nuclear.
Dup morfologia lor, mezozomii sunt lamelari, veziculari i tubulari, iar dispoziia lor n
celula bacterian poate fi septal, periferic i nuclear.
Funciile mezozomilor:
particip la replicarea cromozomului bacterian i diviziunea celular,
particip la reaciile de fosforilare oxidativ i oxidoreducere, dar n msur mai mic
dect membrana celular,
sediul unor enzime hidrolitice care ndeplinesc rolul enzimelor lizozomale de la celulele
eucariote,
sinteza i secreia unor exoenzime, ca de exemplu penicilinaza sau cefalosporinaza,
sinteza peretelui celular i formarea sporului bacterian.
Vacuolele sunt formatiun sferice care contin diferite substante in solutie apoasa. Au o
membrana lipoproteica numita tonoplast. Au fost descrise in special la bacteriile acvatice.
12. Masa nucleara bacteriana structura, caracteristici
- vine in contact direct cu citoplasma
- contine ADN, nu are nucleoli
- are afinitate pentru coloranti bazici dar pe preparatele colorate uzual este mascat de
bazofilia intensa a citoplasmei bogata in ARN
- unicul cromozom bacterian este alcatuit dintr-o singura molecula de ADN dublucatenar
cu aspectul unui fir lung (1000-2000 Mm) inchis intr-un inel si replicat pe el insusi
- Nucleul contine informatia genetica necesara proceselor vitale de crestere si
multiplicare
- Codonul din punct de vedere functional, 3 nucleotide consecutive din structura
moleculei de ADN formeaza un codon. Codonii detin informatia genetica pentru a plasa
intr-o anumita secventa un anumit aminoacid
- Cistronul reprezinta o subunitate functionala a genei capabila sa determine
independent sinteza unui lant polipeptidic
- Gena reprezinta o portiune a genomului, o anumita secventa de nucleotide dispuse
liniar
- genele structurale reprezinta circa 90% din ansamblul informatiei genetice
- gena poarta inscrisa in structura sa informatia genetica necesara pentru sinteza unei
proteine specifice, structurale sau functionale (enzime)
13. Cum este inscrisa informatia genetica in genomul celulei bacteriene
- Nucleul contine informatia genetica necesara proceselor vitale de crestere si
multiplicare
- Codonul din punct de vedere functional, 3 nucleotide consecutive din structura
moleculei de ADN formeaza un codon. Codonii detin informatia genetica pentru a plasa
Subiecte microbiologie an II sem I
pg. 10
pg. 11
protejeaz bacteriile de diferii ageni antibacterieni din mediu cum sunt: bacteriofagii,
colicinele, complementul, lizozimul sau alte enzime bacteriolitice;
pg. 12
speciale.
Dispoziia i numrul cililor sunt caracteristice speciei. S-au descris bacterii atriche (fr cili),
monotriche - cu un cil polar (Vibro cholerae), lofotriche - cu un smoc de cili situat la unul din
polii bacteriei - (Pseudomonas fluorescens), amfitriche - cu cilii situai la ambii poli ai
bacteriei (la genul Spirillum) i peritriche - cu cilii dispui pe ntreaga suprafa a bacteriei
(Salmonella, E. Coli, Proteus etc.).
Structura cililor este tubular, ei fiind formai dintr-o protein contractil, flagelina, sub
form polimerizat. Cilul se ataeaz de bacterie printr-un corpuscul bazal i un crlig de
articulaie aflate n citoplasma bacteriei. Corpusculul bazal se inser prin crligul de
articulaie de membrana citoplasmatic i peretele celular.
Mobilitatea i direcia micrii cililor pot fi influenate de concentraia unor substane din
mediu (chimiotactism pozitiv sau negativ) i de temperatur. Ei sunt sediul antigenelor
flagelare (H), importante n identificarea bacteriilor.
Cilii bacterieni nu se observ dect pe preparate colorate special. n practica de rutin nu se
evideniaz flagelii, ci mobilitatea bacteriilor, fie prin examinarea lor pe un preparat nativ
ntre lam i lamel n care se urmresc micrile bacteriilor, fie prin nsmnarea tulpinii
pe un mediu semisolid prin neparea n profunzime a mediului. Dac bacteria crete nu
numai pe traseul nsmnrii i difuzeaz n mediu, ea este mobil.
17. Fimbriile bacteriei
Fimbriile
Fimbriile sunt oligomeri proteici care apar ca apendici filamentoi la suprafaa celulei
bacteriene. Ele sunt alctuite din subuniti proteice cu masa molecular de 17.000 Da i dintro component proteic minor. Sinteza fimbriilor este influenat de condiiile de mediu, mai
ales de temperatur i de factori ce influeneaz rata de dezvoltare a culturii microbiene.
Subunitile proteice ale fimbriilor pot fi supuse unei variaii antigenice care scap bacteria de
rspunsul imun al gazdei.
fimbriile de tip 1, sau pilii comuni, sunt prezente la multe specii de Enterobacteriaceae. Ele se
leag de glicoconjugaii din membrana citoplasmatic a celulelor gazd ce conin manoz.
fimbriile P sunt prezente pe tulpinile de Escherichia coli pielonefritogene. Receptorul pentru
aceste fimbrii sunt glicolipidele ce conin dou molecule alturate de galactoz prezente n
membrana celulelor epiteliului urinar.
fimbriile S s-au evideniat la tulpinile de E.coli implicate n meningite i se ataeaz de
glicoconjugaii ce conin acid sialic.
fimbriile K88 i K89 se gsesc la tulpinile de E.coli enterotoxigene ce produc diaree. Receptorii
celulelor sensibile conin acid sialic i lactoz.
Aceeai tulpin de Escherichia coli poate conine mai multe tipuri de fimbrii codificate de
anumite zone cromozomiale sau plasmidice. Aceast diversitate genetic permite adaptarea
tulpinii la condiii diferite oferite de organismul gazd.
fimbriile ce conin N-metilfenilalanin au fost evideniate la o serie de genuri de bacterii
gram-negative, cum sunt Pseudomonas (bacilul piocianic), Neisseria (gonococ i meningococ),
Bacteroides, Vibro etc.
Subiecte microbiologie an II sem I
pg. 13
pg. 14
tunica proteic este format din proteine chitinoase cu numeroase legturi disulfitice. Ea este
impermeabil, fiind responsabil de rezistena sporilor la unele dezinfectante,
exosporiumul este prezent numai la unii spori i conine lipoproteine i zaharide.
Germinarea sporului. n condiii de mediu favorabile, sporul germineaz i va da natere unei
bacterii vegetative identice cu aceea n care s-a format. Germinarea are loc n 3 etape:
Activarea sporului. Se produce cnd acesta ntlnete condiii favorabile de via, dar i un
factor care s lezeze nveliul sporal (mecanic sau chimic ca, de exemplu, lizozimul, compui cu
grupri sulfhidrilice libere etc.).
Iniierea este declanat de un mediu nutritiv bogat. Pentru unii spori triggerul este L-alanina,
iar pentru altele adenozina. Acesta duce la activarea unei enzime autolitice care degradeaz
cortexul sporal. Are loc absorbia de ap, eliberarea dipicolinatului de calciu i degradarea unor
compui sporali.
Dezvoltarea sporului. Protoplastul sporal se transform n bacterie vegetativ, care trece printro perioad metabolic activ de refacere a constituenilor celulari normali i a echipamentului
enzimatic complet.
19. Apa, substantele minerale si pigmentii in structura celulei bacteriene
Continutul n apa al bacteriilor se situeaza n medie la 85% din masa celulara. Apa este faza
n care se solubilizeaza, sunt transportati electrolitii si substantele neelectrolitice si mediul
n care se petrec toate reactiile metabolice. Ea participa la multe din aceste reactii
(hidroliza, reactii anabolice etc.) si formeaza mpreuna cu substantele anorganice si
macormoleculele organice continute o unitate fizico-chimica si biologica.
Exista apa libera (mediu de dispersie) si apa legata fizico-chimic cu diferite structuri. Sporii au
putina apa, in special apa legata. Bacteriile sunt fiinte acvatice prin excelenta. Roluri: mediu de
dispersie, reactiv in reactiile metabolice, erapa finala a unor reactii oxidative.
Substante minerale 2-30% din greutatea uscata a bacteriei si variaza in functie de
specie. Unele elemente intra in compozitia diferitelor strucuri (sulful in str aa)
Roluri:
- favorizeaza schimburile cu mediul
- regleaza presiunea osmotica
- pot stimula cresterea si functia bacteriei
- activeaza unele sisteme enzimatice
- contribuie la reglarea pH-ului
Pigmentii pigmentogeneza este caracteristica bacteriilor cromogene si este dependenta
de conditiile de cultivare
Poate reprezenta un criteriu de identificare.
Dupa localizarea pigmentului bacteriile pot fi:
- cromofore (pigmentul este legat in citoplasma)
- paracromofore (pigmentul este prezent in perete sau in stratul mucos)
- cromopare (pigmentul este difuzibil in mediu
Roluri:
- protectie fata de UV
- antibiotic
- enzimatic
Subiecte microbiologie an II sem I
pg. 15
pg. 16
pg. 17
Unde se dezvolta
Reactia energogenetica
Exemple
1. STRICT AEROBE
in prez. O2 atmosferic
Respiratie aeroba
-Pseudomonas
-Mycobacterium
tuberculosis
2. STRICT ANAEROBE
in absenta de O2
atmosferic [prezenta =
toxica.
Nu
au:
superoxiddismutaza si
catalaza]
Fermentatie in conditii
anaerobe
[fermentatia in conditii
aerobe => radicali de
superoxid => toxic]
-Clostridium
-Bacteroides
-Prevotella
-Fusobacterium
3. FACULTATIV
ANAEROBE
4. ANAEROBE
AEROTOLERANTE
tolereaza O2
- fermentatie in conditii -Streptococcus
aerobe, fara particip.
Prezinta:
superoxiddismutaza si O2
catalaza sau enzimele
exista in sistemele de
cultura
5. MICROAEROFILE
-Neisseria
-Brucella
-Campylobacter
(6-10% conc. CO2)
pg. 18
pg. 19
este favorizata de adaosul de glicerol sau dimethilsulfoxid. Acesti agenti chimici induc o
solidificare amorfa, vitroasa care nlocuieste solicificarea prin cristalizare.
26. Structua si sinteza peptidoglicanului
Peptidoglicanul sau mureina este structura chimica responsabila de rigiditatea peretelui celular
si care asigura forma si rezistenta mecanica a bacteriei. Prezent la toate bacteriile, el consta
dintr-un schelet, format din molecule lungi paralele polizaharidice de N-acetil-glucozamina
si acid N-acetil-muramic. Moleculele de acid N-acetil-muramic din lanturile vecine sunt
legate intre ele prin punti polipeptidice, transversale.
pg. 20
clorura de sodiu, care se adauga la mediile uzuale ntr-o concentratie de 0,9%. Pentru cultivarea
bacteriilor halofile concentratie poate creste pna la 10%,
mono sau polizaharidele, unii alcooli (glicerina, manitol) pot nmbogati mediile, deoarece
constituie surse de carbon usor accesibile multor bacterii
28. Definiti notiunea de crestere si multiplicare bacteriana
Cresterea si nmultirea bacteriilor este rezultatul nutritiei si al metabolismului bacterian. Viteza
de multiplicare a bacteriilor este foarte mare dar nu toate bacteriile se divid repede. Baciul
tuberculos, de pilda, a carui timp de generatie este de 24 de ore, se va nmulti lent si va
produce o infectie cu evolutie insidioasa, cronica.
Cresterea oricarui organism are loc prin sinteza de noi molecule;
Multiplicarea= o consecinta a cresterii(se restabileste rap dintre volum si si supraf
celulei). Multiplicarea se face de obicei prin diviziune simpla.
n organism, cresterea si multiplicarea bacteriilor este diferita de multiplicarea in vitro,
fiind stresata de necesitati nutritive (prin competitie cu flora normala) si prin mecanismele de
aparare antiinfectioasa. Conditiile pe care microorganismele le ntlnesc n organism le
selecteaza pe acelea care cresc n anumite limite de temperatura, osmolaritate si pH.
29. Definiti notiunea de mediu selectiv, electiv si de imbogatire; exemple
Mediul electiv: prezinta ingrediente speciale pentru un anumit tip de bacterie.
-
Mediul selectiv: Inhiba dezvoltarea unor bacterii in detrimentul altora. Se deosebesc bacterii
patogene de cele saprofite.
-
Chapman: stafilococ
Selenit: Salmonella
pg. 21
pg. 22
Faza de declin care dureaza mai multe zile se caracterizeaza prin scaderea numarului de
bacterii, remarcndu-se o divergenta ntre curba care ilustreaza numarul total de bacterii si cea
care reprezinta bacteriile vii. Ea se datoreaza scaderii substantelor nutritive si acumularii de
substante toxice pentru bacterii. Modificarile morfologice sunt pregnante att n ceea ce
priveste forma, dimensiunile ct si caracterele tinctoriale.
33. Aspectele culturilor bacteriene pe medii solide; corelatii intre acestea si patogenitate;
exemple
Aspectul culturilor pe mediile solide
Dimensiunea
- Mari, >2mm (Staphylococcus spp, K. pneumoniae)
- Medii 1-2 mm( Streptococcus pyogenes)
- Mici ,1mm ( Streptococcus viridans)
- Foarte mici( Mycoplasma, Ureaplasma)
Tulpinile care pe medii solide formeaza colonii tip S , tulbura omogen mediul, tulpinile
care formeaza colonii R tulbura mai putin omogen, sau pot lasa mediul limpede formand
flocoane care se depun, sau un strat, val
Cultivarea microbilor pe medii solide permite, de asemenea, numaratoarea de germeni ntrun anumit produs. Acest aspect este deosebit de important deoarece n multe infectii
criteriul de implicare etiologic este numarul bacteriilor n produsul de examinat (infectii
urinare).
34. Aspectele culturilor bacteriene pe medii lichide corelatii intre acestea si patogenitate;
exemple
Caracterele culturale ale microbilor pe medii lichide difera. Astfel, bacteriile apartinnd
familiei Enterobacteriaceae tulbura uniform mediul, altele, ca de pilda bacteriile strict aerobe (Pseudomonas,
Nocardia) formeaza pelicule la suprafata mediului. Altele formeaza agregate care se dezvolta sub forma de
grunji ce se depun pe peretele eprubetei sau la fundul mediului (Streptococcus). Unele bacterii secreta n
mediu pigmenti difuzibili ca de exemplu bacilul piocianic (Ps.aeruginosa).
Unele medii de lichide au ca factor electiv anumite substante, ca, de exemplu, selenitul acid de
sodiu, care permite dezvoltarea salmonelelor din materiile fecale.
pg. 23
pg. 24
pg. 25
pg. 26
pg. 27
pg. 28
pg. 29
pg. 30
pg. 31
prima celul bacterian poate s codifice diferite caractere (rezistena la antibiotice, secreia
unor enzime, toxine etc.), ce se vor manifesta fenotipic la noua bacterie gazd.
Cel mai bine studiat exemplu de transducie specializat este cea mediat de fagul lambda
i gena bacterian ce codific degradarea galactozei (lambda-gal).
Transducia specializat nu trebuie s se confunde cu conversia lizogen. In acest caz
caracterul nou al celulei bacteriene este codificat chiar de genomul bacteriofagului temperat.
Fenomenul a fost descris pentru prima oar, aa cum am mai artat, la Corynebacterium
diphteriae, toxigeneza fiind tributar prezenei unui fag temperat n cromozomul bacterian.
54. Conjugarea bacteriana
Reprezinta un proces de transfer de material genetic (cromozomial sau extracromozomial) prin
efectuarea unei legaturi intre celule. Prin intermediul factorului F+ inserat n cromozom se
poate transfera o copie ntreag a cromozomului celulei donoare la cea receptoare.
Conjugarea la bacilii gram negativi.
Transferul prin conjugare a plasmidelor este condiionat de prezena n plasmid a genelor de
transfer tra, care sunt responsabile de sinteza sex-pilului i de transferul plasmidului.
Conjugarea ncepe prin sinteza sex-pilului care va adera de receptori specifici prezeni pe
peretele celular al bacteriei receptoare. Dup formarea legturii dintre celula donor i cea
receptor are loc replicarea de transfer a plasmidului. O caten parental de ADN va rmne n
celula donor, iar a doua va trece n celula receptoare, pe tiparul lor sintetizndu-se catene
complementare.
Din punct de vedere medical importante sunt plasmidele conjugative de rezisten - plasmidele
R.
frecvena transferrii: frecvena transferului multor plasmide slbatice pe receptori adecvai
este relativ sczut 10-4/ cel. Dac se incubeaz donorii i receptorii mpreun mai multe ore,
numrul de celule recombinante cresc;
spectrul de gazde: plasmidele transferabile R circul ntre specii diferite. Dar nu exista transfer
intre bacterii G+ si GConjugarea la bacterii gram-pozitive
S-au descris procese de mperechere i la bacteriile gram-pozitive ca, de pild, la genurile
Streptococcus, Streptomyces, Clostridium, procesul bazndu-se pe performana celulei
receptoare.
Celula receptoare produce un peptid cu mol. mic (GM=1000 daltoni) care determin sinteza
unor substane proteice de agregare de ctre celula donoare cu afinitate pentru unele
substane adezive de pe suprafaa receptorului. Se produce astfel o legtur strns ntre
Subiecte microbiologie an II sem I
pg. 32
receptor i donor cu formarea unei puni intercelulare care permite transferul de material
genetic. Prin analogie cu substanele atrgtoare la insecte peptidul ce induce substana de
agregare a fost desemnat ca sexpheromon.
Spectru larg de activitate, poate distruge sau inhiba multe specii de microorg. patogene
Absenta toxicitatii pentru gazda
Absenta efectului alergizant pentru gazda
Absenta efectelor de eliminare a florei normale din organismul gazdei
Capacitatea de a accesa zonele anatomice in care se dezvolta infectia
Stabilitate chimica
Inductor slab al rezistentei microorg.
In clinica sunt utilizate in vederea combaterii infectiilor (nu trebuie folosite abuziv sau fara
interpretarea corecta a datelor de laborator).
In laborator antibioticele sunt testate pentru a se observa daca unele tulpini bacteriene mai
sunt sau nu sensibile la acestea.
56. Antibiotice bactericide si bacteriostatice exemple
Bactericid = actiunea antibioticelor duce la distrugerea bacteriilor. Exemple: penicilina,
vancomicina, cefalosporine, bacitracina
Bacteriostatic = antibiotice care opresc multiplicarea bacteriana. Exemple: tetraciclina,
eritromicina, sulfamidele
57. Clasificarea antibioticelor dupa mecanismul de actiune exemple
1.
2.
3.
4.
pg. 33
pg. 34
3. Timp de incubare
- 37 grade C => 18-20h
4. Microcomprimatele cu antiobiotic
- diametru: 6 mm
- 8 comprimate/placa => 8 zone de inhibitie
- depunere: manuala, automana (dispencer)
5. Interpretare: masurarea zonei de inhibitie in mm => corelatii cu tabel
Tehnica de lucru
-
61. Definiti notiunea de CMI si CMB. Cum se determina si care este utilitatea.
CMI = concentratia minima inhibitorie. Cea mai mica concentratie de antibiotic care determina
inhibitia dezvoltarii unei culturi bacteriene. => efect bacteriostatic
CMB = concentratia minima bactericida. Cea mai mica concentratie de antibiotic care
determina distrugerea bacteriilor => efect bactericid
Determinarea CMI
a. in mediu solid
- se face prin metoda E-Test asemenea metodei difuzimetrice
- metoda E- test exprim direct, cantitativ, prin valori CMI, gradul de sensibilitate
microbian
- se adauga pe mediu un strip de plastic, marcat pe scara valorilor MIC n g/ml.
- dupa difuzia antibioticului se citeste diametrul zonei de inhibitie pe striperul de
plastic
- se compara cu tabel
b. in mediu lichid
- in bulion Mueller-Hinton se prepara dilutii binare de antibiotic (descrescator)
- in fiecare tub se adauga cant. fixa de inocul
- se folosesc martori+ si martori- incubare 18-20h, 37 grade C
- ultimul tub ramas limpede = CMI
Determinare CMB
-
se fac treceri pe medii solide din tuburile ramase vizibil limepezi (de la det. CMI)
pg. 35
pg. 36
S-a observat ca tulpinile de bacil Koch izolate de la pacienti din India sunt mai virulente pentru
cobai dect cele izolate de la pacientii din Anglia. De asemenea, patogenitatea tulpinilor de
pneumococ pentru soricelul alb variaza n functie de cantitatea materialului capsular.
Exemplele sunt nenumarate.
Virulenta unei tulpini microbiene se apreciaza prin comparatie cu o tulpina standard a carei
virulenta este cunoscuta si se exprima prin DLM (doza letala minima) sau DL50 (doza letala
medie). Doza letala minima este numarul total de germeni necesari sau cantitatea de toxina
necesara pentru a omor toate animalele dintr-un lot experimental, iar DL50 numarul de
germeni sau cantitatea de toxina necesara pentru a omor 50% dintr-un lot de animale
experimentale.
Pentru a produce o infectie, microorgansimele trebuie sa parcurga, n general, dar nu n mod
obligatoriu, urmatoarele etape:
atasarea si patrunderea n organismul gazda;
invadarea locala sau generala a organismului;
multiplicarea n organismul gazda si secretia unor factori de patogenitate.
FACTORI DE INVAZIE MICROBIANA :
Diseminarea bacteriilor n organsim se poate face pe mai multe cai:
din aproape n aproape, prin intermediul unor exoenzime si a unor elemente structurale ale
bacteriilor;
prin endocitoza si translocare;
pe cale sanghina sau/si limfatica.
pg. 37
Zonele organismului populate n mod normal cu microorganisme sunt: pielea, tractul respirator
superior (vestibul nazal, faringe), tubul digestiv (cavitatea bucala si intestinul gros), tractul
urinar (partea anterioara a uretrei) si vaginul.
n zonele intens colonizate, ca, de pilda, n intestinul gros, numarul de bacterii este de 1 x
1012/ml pe cnd n zonele cu flora mai redusa, cum sunt pielea, vaginul, numarul lor nu
depaseste n mod normal 1 x 106/ml.
n afara de aceste zone, microorganisme mai pot aparea n numar mic si n mod pasager n
restul tractului respirator, digestiv si n uter, fiind rapid ndepartate de mijloacele de aparare ale
organismului. Sngele, lichidul cefalorahidian, lichidele sinoviale, din seroase, tesuturile
profunde sunt sterile. Prezenta microbilor n aceste zone are ntotdeauna o semnificatie
patologica.
Pielea este populata de multe specii bacteriene, densitatea acestora fiind mai mare n zonele
umede, cum sunt axila, zona perineala, zonele interdigitale si scalpul. Specia cel mai des
ntlnita, care reprezinta 90% din flora cutanata aeroba este Staphylococcus epidermidis. Se
apreciaza densitatea S.epidermidis la 103-104/cm2. n regiunile umede se poate ntlni si S.
aureus.
Speciile ce colonizeaza aceste cavitatea bucala si vestibulul nazal sunt, n general, streptococi,
stafilococi, bacili difterimorfi, coci gram-negativi si mai rar ciuperci. Unele din aceste specii, ca,
de exemplu, S.aureus, Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis, Candida, sunt
conditionat patogene.
Stomacul contine doar ocazional flora bacteriana acidotoleranta (unii lactobacili si streptococi)
data fiind aciditatea gastrica pronuntata. Frecvent se izoleaza de pe mucoasa gastrica
Helicobacter pylori, care ar putea constitui cauza unor gastrite si a ulcerului duodenal. La
personane la care se admnistreaza o medicatie ce schimba pH-ul continutului gastric, flora
normala sufera modificari.
Intestinul gros este cea mai populata zona cu microbi a organismului. Aici, peste 90% din flora
este anaeroba, reprezentata mai ales de bacili apartinnd genului Bacteroides, nsotita de
enterobacterii care sunt facultativ anaerobe, la care se adauga protozoare nepatogene, ca, de
pilda Entamoeba coli.
Uretra anterioara este populata la ambele sexe cu flora asemanatoare celei de pe piele: S.
epidermidis, Enterococcus faecalis, difterimorfi etc.
Flora vaginala variaza n functie de vrsta. Astfel, pna la pubertate flora vaginala contine specii
prezente pe piele, iar dupa pubertate pna la menopauza vaginul este populat cu o varietate
foare mare de bacterii, predominante fiind speciile de Lactobacillus (bacili Dderlein). Dintre
speciile prezente mentionam: stafilococi coagulazo-negativi, streptococi (mai ales din grupul B),
enterococi, Gardnerella vaginalis, micoplasme, Mobiluncus etc. Ocazional pot fi prezente si
specii de Candida.
pg. 38
pg. 39
pg. 40
Infectia reprezinta o patrundere activa sau pasiva a unor germeni patogeni intrun
organism gazda. Pt realizarea acesteia microorganismele trebuie sa colonizeze
organismul gazda si sa depaseasca mecanisemele de aparare, sa se multiplice si sa intre
intr-un lant de transmitere prin care poarte contamina o noua gazda.
INFECTIE INAPARENTA
-
STAREA DE BOALA
-
PURTATOR DE GERMENI
-
Starea de purttor de germeni este, de fapt, definitorie pentru orice persoan care
adpostete germeni patogeni. Dei multe dintre acestea par sntoase, ele constituie,
totui, poteniale focare adiionale de contaminare, cu att mai mult cu ct, n practic,
numrul lor este mult mai mare dect al celor clinic afectate. n cazul acestor purttori
aparent sntoi, infecia se rezum numai la procesul de multiplicare local a
germenilor, deoarece gradul mai mare de rezisten sau imunitate al individului afectat
mpiedic rspndirea i multiplicarea agenilor patogeni n ntregul lor organism
pg. 41
ATRIBUTE
-
Specific
Discerne intre self si nonself
Are memorie
Reactioneaza numai fata de moleculele care indeplinesc conditia de antigen
Poate fi de tip
o Umoral
o Celular
pg. 42
Pasiv
o Natural transferul anticorpilor materni la fat
o Artificial transferul de seruri imune sau anticorpi preformati de alta gazda
pg. 43
Activ
o Natural in urma contactului cu diferite microorganism
o Artificiala in cazul administrarii antigenelor sub forma vaccinurilor.
74. Organele centrale si periferice ale sistemului imun; localizare, functi
Sunt mduva osoas roie i timusul. n aceste organe limfocitele devin celule
imunocompetente, dobndind repertoriul de recunoatere a antigenelor i
proprietatea de a deosebi selful de non-self. Acest proces de colarizare se
desfoar n absena antigenelor din mediul extern.
- n timus prolifereaz limfocitele T, din care 10% dobndesc caracterul imunocompetent
iar restul de 90% sunt distruse.
- Limfocitele B se diferentiaza in maduva rosie, aceasta fiind si un organ limfoid secundar
ORGANELE LIMFOIDE SECUNDARE
- Dup diferenierea lor n organele limfoide primare, limfocitele B i T migreaz pe calea
vaselor sanguine i limfatice n organele limfoide secundare, care sunt ganglioni
limfatici, splina, amigdalele i esutul limfoid ataat mucoaselor (MALT).
- Limfocitele imunocompetente care populeaz organele limfoide secundare sunt celule
antigen-reactive. Deci spre deosebire de organele limfoide primare, unde instruirea se
face n absena antigenului, n organele limfoide secundare prezena acestuia este
obligatorie.
pg. 44
Ganglionii limfatici
o au rolul unui filtru pentru antigenele venite pe cale limfatic i care vor fi
preluate de celulele prezentatoare de antigen (CPA): macrofage, celulel
foliculare dentritice).
o Sub capsula conjunctiv a ganglionilor se afl sinusul subcapsular, marginat de
macrofage. Limfocitele i antigenele ajung din alte regiuni aici prin vasele
limfatice aferente.
o Zona cortical a ganglionului conine limfocitele B organizate n foliculi limfoizi,
care prezint centrii germinativi dac au fost stimulai antigenic.
o Zona paracortical conine limfocite T care sunt n contact strns cu celulele
dendritice (prezentatoare de antigen).
o Zona medular conine limfocitele T i B, plasmocite, dispuse n cordoane i
macrofage aezate de-a lungul traveelor conjunctive. n trecerea limfei de la
vasul limfatic aferent spre cel eferent, antigenele sunt fagocitate de macrofagele
din zona medular.
Splina
o este format din pulpa roie implicat n distrugerea eritrocitelor mbtrnite i
pulpa alb care reprezint esutul limfoid al splinei. Acest esut este organizat n
jurul arteriolelor centrale, constuituind arii limfoide periarteriolare.
o Ele cuprind o zon adiacent arteriolei care conine limfocite T, n jurul acestei
zone dispunndu-se limfocitele B, organizate fie n foliculi primari nestimulai, fie
n foliculi secundari stimulai ce conin centri germinativi. n zona marginal a
centrilor germinativi se gsesc macrofage i celule dendritice
Sistemul imun al mucoaselor (MALT)
o este format din esut limfoid ataat mucoasei gastrointestinale, respiratorii i a
tractului uro-genital i este deosebit de important n aprarea antiinfecioas
pg. 45
pg. 46
pg. 47
pg. 48
pg. 49
macrofage splenice,
macrofage din maduva osoasa si timus (macrofagele de aici nu trebuie confundate cu
celulele dendritice)
EOZINOFILELE
-
BAZOFILELE SI MASTOCITELE
-
Bazofilele snt foarte puin numeroase n sngele periferic, ele reprezentnd numai 0,2%
din leucocitele circulante.
pg. 50
pg. 51
pg. 52
pg. 53
Deci, activarea complementului pe calea alternativa este rezultatul stabilizarii C3bBb (a C3convertazei) ce poate fi determinata, printre altele, de prezenta bacteriilor.
Indiferent pe ce cale s-a activat complementul, reactiile urmatoare sunt comune ambelor
cai.
C3 convertaza se combina cu C3b formnd C5 convertaza (C3b2BbP pentru calea alternativa si
C3b4b2a pentru calea clasica). C5 se va descompune in C5a si C5b. C5b se fixeaza pe suprafata
bacteriei. De C5b se vor lega n continuare C6,7,8 care mpreuna cu mai multe molecule de C9,
care polmerizeaza, formeaza un complex de atac al membranei ce perforeaza membrana
celulara cu liza consecutiva a celulei bacteriene.
83. Inteleukinele
Unele simptome generale ale infectiei, ca, de exemplu, febra, somnolenta, starea de
disconfort, durerea musculara etc., se datoreaza activitatii acestor substante.
n cazul invaziei organismului de catre agenti straini (bacterii, toxine), se declanseaza
secretia de citokine care contribuie n ansamblu la cresterea rezistentei la infectii.
Astfel, citokinele au rol important n declansarea inflamatiei. IL-1este implicata n
producerea febrei, cresterea permeabilitatii vasculare, induce explozia respiratorie n
macrofage si PMN, moment esential n fagocitoza. IL-6 declanseaza n ficat sinteza proteinelor
de faza acuta. IL-8 secretata de macrofage la stimularea acestora de Il-1 si TNFa este un
puternic factor chemotactic pentru PMN, contribuind astfel la formarea puroiului n focarul
infectios. TNFa favorizeaza agregarea si activarea leucocitelor neutrofile si eliberarea enzimelor
proteolitice din celulele mezemchimale, deci sunt producatoare de leziuni tisulare.
Citokinele sunt peptide, asemanatoare hormonilor, cu proprietati imunomodulatoare,
produse de celulele care raspund invaziei microbiene. Cele care actioneaza chiar asupra
celulelor care le produc sunt denumite autocrine, cele cu efect pe celulele nvecinate paracrine,
iar cele cu efect pe celule la distanta endocrine. Exista multe celule producatoare de citokine,
dar cele mai importante sunt macrofagele si limfocitele.
pg. 54
pg. 55
structurii imunoglobulinelor.
Dificultatea de a obine anticorpi monoclonali in vitro a constat n imposibilitatea de
cultivare a limfocitelor B.
Anticorpii monoclonali s-au obinut n laborator de prin izolarea n cadrul unui rspuns
imun policlonal a unui singur limfocit B i hibridizarea lui cu o celul tumoral care s-i confere
imortalitate. Produsul de fuziune, hibridomul, unete imortalitatea celulei tumorale cu
specificitatea celulei B. Anticorpii monoclonali sunt reactivi foarte valoroi ntruct recunosc un
singur epitop. Ei nu reacioneaz ncruciat dect n cazuri de excepie cnd structurile sunt
extrem de asemantoare.
Anticorpii monoclonali au o larg utilizare att n cercetare, terapie ct i n practica de
rutin a oricrui laborator. Cu ajutorul anticorpilor monoclonali marcai cu o substan
fluorescent (de obicei izotiocianatul de fluorescein) se evideniaz prin microscopie n UV
antigene bacteriene sau virale n produsele patologice sau biologice recoltate de la bolnavi,
fiind astfel posibil un diagnostic rapid i precis n infecii n care agentul etiologic este greu de
cultivat (infecii chlamydiene, herpetice, sifilis etc.).
pg. 56
Vaccinarea antipolio
Vaccinarea antihepatit B
pg. 57
Se efectueaz acolo unde exist risc de izbucniri epidemice: vaccinare anti-tifoidic, antidizenteric, anti-hepatit A (de ex. n regiunile unde s-au produs inundaii).
Vaccinri de necesitate
Se efectueaz preventiv, post expunere (de ex. vaccinarea antirabic i antitetanic, n cazul
mucturilor de animale, pentru prevenirea rabiei i tetanosului, vaccinarea antitetanic cu o
doz de rapel, n cazul plgilor tetanigene, vaccinarea antirujeolic a contacilor de rujeol, n
primele 5 zile de la contact).
Sunt necesare pentru cei ce cltoresc n zone endemice pentru anumite boli: vaccinarea antiamarilic (mpotriva febrei galbene), anti-pestoas (mpotriva ciumei), antiholeric. Se
efectueaz n centre speciale.
Se efectueaz la personalul care, prin natura profesiei, este expus riscului de a contacta diverse
boli (vaccinare anti-hepatitic B la personalul medical; vaccinare anti-leptospirotic, anticarbunoas, antirabic la personalul din zootehnie etc.). Unele din aceste vaccinri se
efectueaz n centre speciale.
Vizeaz selectiv grupele de populaie cu risc crescut pentru forme grave de boal i deces
(bolnavi cronici sau vrste extreme: copii i btrni). n Romnia, se ncadreaz n aceast
categorie vaccinarea antigripal.
Din aceast categorie fac parte: vaccinarea obligatorie a gravidelor n luna a VIII-a, cu o doz de
rapel anti-diftero-tetanic (n scopul imunizrii pasive a ftului, anticorpii materni trecnd n
sngele fetal, unde persist i dup natere, aproximativ pn la vrsta de 6 luni), i vaccinarea
anti-rubeolic selectiv a fetelor (n clasa a VII-a), n scopul reducerii
incidenei rubeolei congenitale.
3. Vaccinri opionale
Vaccinare antivariceloas
Vaccinare antihepatitic A
Vaccinare antigripal
Vaccinare antipneumococic
Vaccinare antimeningococic
pg. 58
pg. 59
93.Tipuri de imunoglobuline
Imunoglobulinele se clasific n funcie de lanurile pe care le conin n 5 clase: IgG, IgM,
IgA, IgD, IgE. De exemplu imunoglobulina G conine 2 lanuri grele i dou lanuri uoare sau
. Aceeai imunoglobulin conine sau lanuri sau . Imunogobulinele care conin lanuri
apar de dou ori mai frecvent dect cele ce conin lanuri .
(nu stiu ce sa scriu mai mult)
pg. 60
pg. 61
Gruprile unui antigen care sunt recunoscute de organism ca non-self se numesc epitopi.
Partea complementar a efectorilor imuni (anticorpi sau receptori de pe suprafaa limfocitelor)
se numete paratop. Un antigen poart n general mai muli epitopi diferii fa de care
organismul va produce tot atia anticorpi cu paratopi diferii. S-au descris i antigene cu
epitopi identici repetitivi.
Poziia epitopilor ntr-un antigen este diferit i n funcie de aceast poziie pot fi
recunoscui de limfocitele - T sau B.
Tipuri de antigene:
Antigenele de histocompatibilitate (MHC)
Se deosebesc trei clase de antigene majore de histocompatibilitate: MHC-I, MHC-II i
MHC-III.
Limfocitele T recunosc antigenele strine numai dac acestea sunt n asociaie cu
antigenele MHC.
Limfocitele T - helper (CD4) recunosc antigenele doar n asociaie cu MHC-II. Antigenele pot
fi prezentate, deci, limfocitelor Th doar de macrofage (monocite i macrofage tisulare) i
limfocitele B. Aceasta constituie baza restriciei imunologice.
Limfocitele T - citotoxice (CD8) vneaz celulele organismului care devin non-self prin
modificarea structurii antigenice de suprafa n urma ptrunderii unui virus, unui
microorganism facultativ intracelular sau a transformrii tumorale. Ele recunosc antigenele de
pe suprafaa acestor celulele numai n asociaie cu antigenele MHC-I. n condiii fiziologice vor fi
reperate toate celulele devenite non-self.
Antigene microbiene
Dintre acestea amintim:
antigenele capsulare (Streptococcus pneumoniae, Klebsiella, Bacillus anthracis,
antigenul de nveli Vi al bacilului tific, antigenul K al bacilului coli enteropatogen etc.),
antigenele de perete (antigenul O din peretele bacteriilor gram-negative, proteina M a
streptococului de grup A),
exoenzimele (coagulaza, hemolizinele secretate de Staphylococcus aureus,
fibrinolizinele streptococului beta-hemolitic de grup A etc.),
exotoxinele (difteric, tetanic, diferitele enterotoxine etc.)
Antigene de specificitate- Antigenele pe baza crora agenii infecioi se ncadreaz n
diferite uniti taxonomice (familii, genuri, specii)
Superantigenele sunt antigene care stimuleaz n mod necontrolat i dramatic
proliferarea limfocitelor T care au n structura receptorului lor pentru antigen anumite
specificiti V (vezi receptorii pentru antigen ai limfocitelor), fr s se supun
restriciei MHC.
97.Antigenele-factori de care depinde imunogenitatea
Antigenele trebuie s aib o anumit configuraie de suprafa i o structur chimic ce le
confer caracterul de non-self, deci de strin de organism.
Natura chimic a antigenelor este foarte variat. Cele mai bune antigene sunt proteinele
urmate de polizaharide, care sunt antigene i haptene foarte bune, apoi de lipide i acizi
nucleici, care sunt cel mai ades haptene. Se adminte c greutatea molecular a unui antigen
Subiecte microbiologie an II sem I
pg. 62
este n general peste 10.000 D, dar exist i excepii. Glucagonul, spre exemplu, este
imunogenic cu toate c are GM de 3.600 D.
Intensitatea rspunsului imun fa de un antigen este n funcie de natura chimic,
persistena n organism, doza, ritmul, calea, intervalul i calea de administrare. Cunoaterea
rspunsului n funcie de aceti factori st la baza elaborrii calendarului de vaccinri.
Administrarea antigenelor cuplate cu adjuvani induce un rspuns imunitar mai intens,
deoarece crete perioada de remanen a antigenului n organism. Exemple de adjuvani sunt
adjunvatul Freund incomplet ce conine ap, ulei mineral i lanolin i adjuvantul Freund
complet care conine n plus BCG1.
Studiul rspunsului imun fa de antigenele cuplate i necuplate cu adjuvani este foarte
important, deoarece antigenele de pe suprafaa bacteriilor nu induc niciodat rspunsuri imune
n stare pur, ci cuplate cu corpul bacterian, a crui componente au rol adjuvant, influeneaz
rspunsul imun.
Din punct de vedere al organismului care produce anticorpii fa de antigene, acestea sunt:
- antigene alogenice, care provin de la indivizii aceleiai specii i mpart specia n grupe. Un
exemplu de astfel de antigene sunt antigenele eritrocitare care determin grupele
sanguine,
- antigene singenice, care provin de la acelai organism,
- autoantigene, care sunt substane proprii organismului ce au suferit o modificare,
nemaifiind recunocute ca self de sistemul imunitar,
- antigene xenogenice sunt antigene care provin de la o alt specie. Astfel de antigene,
foarte importante n patologia uman, sunt antigenele bacteriene.
98.Reactia antigen-anticorp;mecanism general si forme de evidentiere
Este determinat de interaciunea specific dintre epitopii antigenului i paratopii anticorpilor
Intervin legturi
o de hidrogen
o electrostatice
o fore Van der Waals
o hidrofobe
Caracetristici:
1. Are o mare putere de rezoluie
2. Selectivitatea fiecrei reacii nu este absolut
3. Necesit obinerea unui semnal secundar
pentru a fi detectabil
4. Prezint un domeniu de aplicare extrem de larg
Forme de evidentiere:
pg. 63
pg. 64
pg. 65
2.Aglutinare pasiv sau indirect, n care particula servete doar de suport pentru un
determinant antigenic solubil fixat artificial pe suprafaa sa (hematii, particule de latex sau
microcristale de colesterol)
Ex. TPHA - se bazeaza pe o reactie de hemaglutinare pasiva pentru evidentierea anticorpilor
specifici anti-treponemici.
Reacia de coaglutinare este utilizat n detectarea antigenelor diferitelor grupuri de steptococi,
Neisseria meningitidis i Neisseria gonorrhoeae, Haemophilus influenzae, Streptococcus
pneumoniae
Tehnica Coombs direct (test antiglobulinic direct)La un nou-nscut: prezena Ac materni
anti-Rh fixai pe hematii (dac mama este Rh-)
Testul Coombs indirect (detecteaz anticorpii circulanti antieritrocitari)
102.Reactia de fixare a complementului
Este o reactie complexa, constituita din 2 sisteme Ag-Ac si cu participarea C.In RFC participa Ig
capabile sa fixeye C- IgM si IgG(se utilizeaza in diagn virozelor,infectiilor bacteriene etc.)Toate
componentele RFC sunt utilizate in acelasi volum fiind titrate in prealabil pentru aprecierea
dozelor de lucru.Rectia este nsoit de martori ai tuturor componenilor.
RFC se efectueaz n 2 etape utiliznd 2 sisteme
I etap-Sistemul de baz este constituit din Ag 1(diagnosticuri sau Ag necunoscute),Ac
1(serul bolnavului) i complement in doza de lucru.Amestecul este incubat la 1h i 37C sau
mentinut 16-18 ore la 4C.Dac Ac se combin cu Ag omolog va avea loc i fixarea C(efect
frecvent invizibil).
II etap-la sistemul de baz se adaug sistemul indicator(hemolitic), constituit di hematii de
berbec(Ag2) combinate cu Ac specifici- serul hemolitic(Ac2).Peste 1h incubare la 37C
reactia este terminat.
Interpretarea rezultatelor- dac C a fost fixat de primul sistem Ag-Ac hemoliza nu se
observ(rezultat pozitiv).Dac Ag1 nu corespunde cu Ac1, C rmne disponibil pentru
fixarea pe sistemul indicator Ag2-Ac2,provocnd hemoliza(rezultat negativ).
pg. 66
103.Reactia de seroneutralizare
Este reacia serologic de inhibare specific a unor caracteristici biologice ale Ag
microbian.Acest lucru nseamn combinarea Ag specific, biologic activ,cu Ac corespunztor
conducnd la blocarea proprietailor biologice ale acestuia.Pentru a putea vizualiza reacia
trebuie sa adugm un sistem indicator(hematii de oaie).
RSN se realizeaz n 2 etape:
I etap- se pun n contact Ag i serul imun neutralizant(contine Ac anihilanti)
Dup o perioad de incubare(formarea reaciei Ag-Ac) amestecul este testat pentru efectul su
biologic.
II etap-dac reactia Ag-Ac s-a realizat efctul biologic dispare( proprietatea biologic a Ag a fost
neztralizat) dac nu efectul biologic activ se produce pe sistemul indicator.
Aplicatii:
1.Diagn microbiologic: identif. Serologic a Cl. perfringens,identif exoroxinei difterice,exotxinei
botulinice.
2.Serodiagnostic:dozarea ac ASLO,serodiagnosticul unor viroze
Reactia ASLO:reactia de seroneutralizare utilizat n diagnosticul microbiologic indirect:ASLO se
practica n: diagn serologic al infeciilor streptococice i post-streptococice i a complicaiilor
ASLO(-) nu infirm diagnosticul de infecie streptococic
Principiu:dozarea Ac antistreptolizin O se bazeaz pe efectul neutralizant al acestora asupra
streptolizineiO(SLO) prin existena n ser a antistreptolizinei O este observat prin absena
hemolizei unor eritrocite test(sistemul indicator)
Materiale necesare:
Ser de cercetat,SLO liofilizat.snge defibrinat de iepure,soluie salin,sol de Rivanol, etc.
Tehnica de lucru.
I-serul bolnavului se inactiveaz 30 min la 56C i se trateaz cu Rivanol pentru ndeprtarea
inhibitorilor
-se efectueaz dilutia 1/10 a seului si se menine 30 min la 56C
Se realizeaz diluii succesive binare,de ser i se pun n contact cu SLO(cantitate constanata)
Se agit tuburile i se menin 15 min la 37C(R. de neutralizare)
II- se adaug suspensia de hematii cantitate fix,0,5 ml n fiecare tub
Subiecte microbiologie an II sem I
pg. 67
pg. 68
Tipul I: Alergenele care induc acest tip de hipersensibilitate sunt foate variate ca, de pild,
polenul, sporii de mucegai (Aspergillus), praful de cas, prul animalelor, unele alimente (ou,
lapte, cpuni, ciocolat etc.), seruri terapeutice, medicamente (penicilina), veninul unor
insecte (viespi) etc
Tipul II: Sindromul Goodpasture poate fi considerat un exemplu tipic.
Reacia de tip II apare i n unele infecii, ca, de pild, n infeciile streptococice (cardita
reumatismal), n care se sintetizeaz anticorpi fa de unele antigene streptococice ce au
asemnre cu un antigen al fibrei miocardice. Hipersensibilitatea citotoxic-citolitic se mai
ntlnete n infecii cu mycoplasme, virusuri (hepatit B), protozoare (malarie) etc.
Tipul III: plmnul de fermier datorat inhalrii prafului provenit dela fn mucegit
Boala serului este o reacie de tip III generalizat i apare la pacieni crora li s-au administrat,
n scop terapeutic, doze mari de ser imun heterolog (ser antidifteric sau antitetanic preparat pe
cai).
Tipul IV: Manifestrile clinice ale hipersensibiblitii de tip ntrziat sunt reacia la tuberculin,
reacia granulomatoas, dermatita de contact i hipersensibilitatea Jones-Mote.
106.Reactii anafilactice mecanism,forme de manifestare
Primul pas n desfurarea reaciei de tip I este reprezentat de contactul alergenului cu
organismul, cea mai frecvent cale de ptrundere a acestor antigene fiind cea respiratorie.
Alergenele se pot afla n forme mai mult sau mai puin pure (polenul), sau cuplate cu particulele
de praf inhalate i depozitate pe mucoasa respiratorie. Dup depozitarea n epiteliu, sau
penetrarea filmului de mucoas, alergenele sunt preluate de celulele prezentatoare de antigen
(CPA). Acestea prezint alergenul limfocitelor Th. Limfocitele Th activate vor secreta
interleukinele IL4, IL13 i IL5. IL4 i IL13 vor aciona asupra limfocitului B care sub aciunea
acestor interleukine se va transforma n plasmocit care va produce n loc de IgG, IgE.
Interleukina 5 va induce eozinofilie. Limfocitele Th activate induc apoi transformarea
limfocitelor B n plasmocite productoare de IgE.
A doua etap a reaciei de tip I este activarea celulelor mastocitare i este declanat de
o nou ntlnire cu alergenul.
Alergenul se va uni cu IgE fixate pe mastocite i va determina o reacie ncruciat ntre
dou molecule de IgE cu interconexiuni ale receptorilor Fc la nivelul membranei iritate a celulei
mastocitare. Degranularea apare ca o consecin a influxului de Ca++. Granulele, coninnd
mediatori deja sintetizai, migreaz spre suprafaa celulelor mastocitare, fuzioneaz cu
membrana extern i i elibereaz constituienii (histamina, serotonina, leucotriene i
prostaglandine, factori chemotactici).
n a treia faz a reciei de tip I, mediatorii produc variate efecte care dau natere
simptomatologiei clinice
Forme de manifestare:
La nivelul tractului respirator, histamina eliberat determin contracia musculaturii
netede a bronhiilor (bronhoconstricia) n decurs de cteva minute. n acelai timp, mediatorii
Subiecte microbiologie an II sem I
pg. 69
pg. 70
cal. Dac proteinele nu au fost nlturate din circulaie pn la apariia anticorpilor, acetia se
vor uni cu ele i complexele imune formate se vor depune pe pereii vaselor. Prin activarea
complementului se vor leza pereii vaselor la care se adaug leziunile datorate enzimelor
lizozomale pe care PMN, frustrate de a nu putea fagocita complexele depuse pe pereii
vaselor, le elibereaz aici.
n scurt timp pacienii devin febrili, prezint rash urticarian, adenit generalizat,
splenomegalie, tumefieri i dureri articulare, leucocitoz cu neutrofilie i eozinofilie, scderea
complementului seric. Frecvent apare albuminurie, care traduce leziuni de glomerulonefrit.
Infecii cronice cauzate de streptococi hemolitici, stafilococi, virusuri hepatitice (stimulare
antigenic persistent) pot duce la continua formare de complexe imune i afectarea
consecutiv a organelor vizate. Un exemplu este glomerulonefrita care apare la la 2-3
sptmni de la debutul unei infeciei cu anumite serotipuri de Streptococcus pyogenes sau S.
zooepidemicus. Mecanismul patogenic este similar bolii serului.
pg. 71
pg. 72