Dozarea proteinelor totale prin metoda biuretului Reacia biuretului este comun tuturor proteinelor, deoarece pune n eviden

prezena legturilor peptidice din structura molecular a acestora. Ea este pozitiv i n cazul oligo i polipeptidelor. Aminoacizii n general nu dau aceast reacie de culoare, cu excepia serinei i treoninei. Cel mai simplu compus care produce aceast reacie este biuretul, care se obine prin nclzirea ureei la 180C cu eliminarea unei molecule de amoniac. Principiul metodei Reacia biuretului se bazeaz pe formarea unor compui de tip c elalic ntre legtura peptidic i ionul de Cu+, n mediu alcalin, cu apariia unei culori violet sau albastr. Metoda folosete un singur reactiv, n care idroxidul de cupru este meninut n soluie sub forma unui complex format cu tartratul de sodiu i potasiu i stabilizat cu iodur de potasiu. 2(H2N CO NH2) H2N CO NH CO NH2 + NH3
NaOH

H2N CO NH CO NH2
CuSO4

complex Cu " protein

(culoare violet)

Proba er Tehnica de lucru #e pregtesc trei eprubete$ martor, standard, prob. #e pipeteaz n eprubete conform tabelului urmtor$ Reactivi !eacti" #iuret er #oluie %aCl &,'( tandard Martor $%0 ml 0%1 ml Standard $%0 ml 0%1 ml Prob $%0 ml 0%1 ml

#e amestec i dup )& de minute se msoar extincia probei *E &+ i a standardului *E'+ fa de martor, la lungimea de und de ,-. nm, n cuve de / cm. Calcul Cp = Ep / Es ( Cs g proteine / 1 ml ser = Ep / Es ( Cs

unde) Cp * concentraia probei Ep 0 extincia probei Es 0 extincia standardului Cs 0 concentraia standardului !alori normale nou1nscui$ ,,2 " ',& g3/&& ml ser co&ii 'u# 3 ani) $%+ 8%+ ,-100 ml 'er copii peste ) ani i aduli$ .,. " 4,. g3/&& ml ser Variaii patologice 5alori sczute ale proteinelor totale *hipoproteinemii)) malnutriie6 malabsorbie6 maldi,e'tie. ciroz epatic6 'indrom ne/rotic. glomerulonefrit6 insuficien renal cronic6 ileu' mecanic. 0emora,ii cronice. ar'uri 1ntin'e. amiloidoz6 peritonit6 0i&ertiroidie. 0i&er0idratare. 2alori cre'cute ale &roteinelor totale (hiperproteinemii): ciroz epatic n stadiul compensat6 sarcoidoz6 &ara&roteinemii. de'0idratare (3&'eudo0i&er&roteinemie4). diaree. stri febrile6 dia#et in'i&id. tuberculoz. Separarea electroforetic a proteinelor

7ermenul de electroforez descrie migrarea unei particule ncrcate electric sub influena unui c8mp electric. Constituienii elementari proteici, aminoacizii, sunt substane amfotere, funcion8nd n mediu bazic ca acizi i n mediu acid ca baze. p91ul izoelectric *p9i+ este p91ul la care disociaia acid o egaleaz pe cea bazic, ncrctura electric este nul i migrarea nu are loc. 5alorile sale mai mari sau mai mici determin ncrcarea electric i sensul de migrare astfel nc8t, un p9 bazic va imprima sarcin electric negativ tuturor proteinelor, iar acestea vor migra spre anod *:+. ;in cele expuse mai sus reiese c pentru realizarea unei fracionri electroforetice sunt necesare dou condiii$ a&licarea unui potenial electric uniform i constant6 meninerea unui p9 constant. <n funcie de natura suportului *mediului+ de migrare utilizat pentru fracionare electro/ore5a se clasific n$ electroforez liber n coloana de lichid (mediu omogen) 1n care mi,rarea se desfoar n interiorul unei faze lic ide6 electroforez de zon (mediu eterogen) n care migrarea se desfoar pe suporturi solide de migrare) electro/ore5a &e 06rtie de /iltru electroforeza n geluri *agar, agaroz, amidon, folii de acetat de celuloz, poliacrilamid 'au mi7te) Electroforeza proteinelor pe gel de amidon sau poliacrilamid este te nica cea mai uoar i mai puin costisitoare, care implic o cantitate limitat de materiale, un timp de lucru scurt i o reproductibilitate foarte bun, motiv pentru care n laboratorul clinic tinde s nlocuiasc separarea electroforetic pe 8rtie de filtru. Electroforeza este utilizat pentru analiza i purificarea moleculelor foarte mari cum sunt proteinele i acizii nucleici, dar se aplic i altor molecule ca glucide, aminoacizi, peptide. <n prezent, se poate efectua electroforeza pentru s8nge, urin, sucuri digestive *saliv i suc gastric+, lic id cefalora idian, lic ide patologice de puncie. =entru s8nge, electroforeza studiaz proteinele serice i nu pe cele plasmatice, deoarece fibrinogenul mpiedic separarea net a fraciilor. =entru efectuarea electroforezei, se recolteaz s8nge venos n vacutainere fr anticoagulant. 8/ectuarea electro/ore5ei 'e /ace 1n &aralel cu do5area &roteinelor totale 'erice. !"""#$#1 Electro%oreza proteinelor pe h&rtie de %iltru Principiul metodei > prob de material biologic ('er) care conine proteine este depus pe o band de 8rtie de filtru special. #ub influena curentului electric aplicat

la capetele acestei benzi mbibate n soluie tampon cu p9 0 4,., particulele de proteine plasmatice ncrcate negativ se deplaseaz spre anod *:+ cu viteze de migrare diferite, specifice fiecrei fraciuni proteice, separ8ndu1se. <n prezena unui colorant proteinofil fraciunile separate se evideniaz sub form de benzi cu poziii decalate datorit mobilitii electroforetice diferite pe care la posed. ?maginea obinut dup separare i colorare poart denumirea de electroforegram. Evaluarea fraciunilor proteice separate se face dup intensitatea culorii obinute prin procedeul eluiei sau direct. Materiale necesare /. Aparatul de electroforez a. ur'a de curent este alctuit dintr1un redresor care furnizeaz curent continuu prin stabilizarea curentului de la reea. Redresorul debiteaz o tensiune reglabil ntre & " ,&& voli i o intensitate maxim a curentului de ,& mA. Redresorul este prevzut cu un voltmetru i cu un miliampermetru necesare a@ustrii i stabilizrii exacte a parametrilor care definesc c8mpul electric pentru efectuarea electroforezei */2& sau 2&& 5+. b. Cuva de electroforez alctuit din$ cutie de material &la'tic cu dou compartimente pentru electrozi, ce comunic ntre ele, unul pentru anod i cellalt pentru catod, n care se introduce soluia tampon de p9 i trie ionic cunoscute6 electro5i de crbune sau de s8rm de platin spiralat, care sunt dispui n fiecare compartiment6 'u&ort detaabil care permite fixarea n poziie orizontal a benzilor de 8rtie de filtru pe care se realizeaz fracionarea proteinelor6 ca&ac care nc ide etan cuva de electroforez i prin care se poate urmri procesul de migrare electroforetic6 2. u&ortul de migrare este reprezentat de o 8rtie de filtru special tip A atman nr./, - sau /&&, tiat sub form de benzi, cu dimensiunile de )3)& cm. 98rtia de filtru trebuie s prezinte urmtoarele caracteristici$ structur omogen i grosime uniform pe toat suprafaa6 suprafa neted i curat6 nu ad'oar#e &roteine. absorbie minim i egal pentru toate fraciunile proteice. 3. !eacti"ii a. #oluie tampon$ acid dietil#ar#ituric(#ar#ital) 1%89 , 'area de 'odiu a acidului dietil#artituric (dietil#ar#iturat) 10%30 , #e aduce la un litru cu ap distilat. Caracteri'tici) bun conductoare de electricitate &H con'tant * 8%+ : &Hi

p9 0 4,. B p9i la care toate fraciunile proteice sunt ncrcate negativ *anioni+ i migreaz spre polul pozitiv *p9i 0 -,' pentru albumine, p9i 0 .,, pentru C1globuline+ b. #oluia de colorare$ al#a'tru de #rom/enol 0%01 , 'ul/at de 5inc $ , acid acetic ,lacial $ ml #e aduce cu ap distilat la /&& ml. Caracteri'tici) se fixeaz pe toate proteinele de pe suportul de migrare n cantiti direct proporionale cu cantitile fraciunilor proteice. c. #oluia de splare$ acid acetic $; #oluia de splare ndeprteaz colorantul de pe nc8t rm8n colorate numai fraciunile proteice.

8rtia de filtru, astfel

d. #oluia de etalare *eluant+$ car#onat de 'odiu cri'tali5at 10;. #oluia de carbonat de sodiu se amestec n volume egale cu metanol *metanolul se adaug n cantiti mici, cu agitarea recipientului, pentru a evita precipitarea+. #oluia eluant dizolv colorantul fixat pe proteine, care trece de pe fraciunea proteic fixat pe 8rtia de filtru n soluia eluant. Aceasta se va colora cu at8t mai intens cu c8t fraciunea proteic a fost mai colorat *direct proporional cu cantitatea de protein din fraciunea respectiv+. 9. ;ispozitiv automat sau fotometru pentru evaluarea cantitativ$ Draciunile proteice separate se pot evalua cantitativ prin dou procedee$ &rin fotometrare direct a electroforegramei, utiliz8nd un densitometru *intregrator+ automat i obinerea curbei respective din care se calculeaz procentul fiecrei fraciuni proteice separate6 &rin decu&area '&oturilor colorate, eluia lor i determinarea extinciei la fotometru. $. <lte materiale nece'are) 'tati" cu e&ru#ete micro&i&ete /oar/ece bi de colorare bi de splare vase cu soluie dezinfectant ap distilat

ti/on Proba er Tehnica de lucru' a. <&licarea &ro#ei =e #en5ile de 06rtie de /iltru special, cu dimensiunile menionate anterior, se marc eaz transversal linia de start, cu creionul, la 4 cm distan de unul din capetele benzii. Einia de start reprezint poziia de aplicare a probei supuse analizei. #e umecteaz benzile de 8rtie de filtru n soluia tampon cu p9 0 4,. i se elimin excesul de lic id prin tamponarea lor cu 8rtie de filtru obinuit. #e aaz cuva pentru electroforez n poziie orizontal pe o mas. #e toarn soluie tampon n cele dou compartimente ale electrozilor *acestea comunic ntre ele, astfel nc8t prin nclinarea uoar a cuvei lic idul a@unge la acelai nivel n ambele compartimente+ #e ntind benzile n poziie perfect orizontal pe suportul amplasat n cuva de electroforez, astfel nc8t capetele acestora s fie imersate n soluia tampon din cele dou compartimente ale cuvei. Captul benzilor prevzut cu linia de start se aaz spre catod, deoarece direcia de migrare a fraciunilor proteice va fi spre anod *p91ul tamponului fiind n domeniu alcalin, proteinele se vor ncrca electronegativ+. #e las benzile sub tensiunea curentulului electric timp de /, minute, pentru ec ilibrare. #e aplic cu a@utorul unei micropipete /& Fl din proba de ser. Aplicarea probei se face prin micri liniare repetate ale v8rfului pipetei de1a lungul liniei de start *se evit aplicarea probei p8n la marginile benzii+. #. Mi,rarea) #e asigur etaneizarea cuvei de migrare cu a@utorul capacului, se pune n funciune redresorul i se stabilesc parametrii curentului electric *tensiunea i intensitatea+. 7ensiunea *diferena de potenial+ se calculeaz prin raportare la lungimea benzii de 8rtie, iar intensitatea curentului prin raportare la limea benzilor de 8rtie. <n general se recomand ca tensiunea s nu depeasc /& 53cm, iar inten'itatea 2%$ m<-cm. ;up terminarea timpului de migrare *migrare rapid - " . ore sau migrare lent /4 ore+ se ntrerupe curentul i se scoate din cuv suportul cu benzile de 8rtie. Genzile de 8rtie se usuc la temperatura camerei timp de )& de minute% a&oi se introduc n etuv la //&HC timp de /, minute pentru fixarea proteinelor separate.

c. Colorarea) Genzile de 8rtie de filtru se imerseaz ntr1o baie de colorare care conine soluia de albastru de bromfenol cu care se las n contact timp de cel puin )& de minute. ;up acest interval de timp benzile se introduc n baia care conine soluia de splare i se repet de c8teva ori operaia de splare, p8n ce fondul 8rtiei devine incolor. =rin ndeprtarea excesului de colorant nereinut de fraciunile proteice, acestea apar individualizate sub form de benzi colorate n albastru. Ilterior, benzile de 8rtie de filtru pe care sunt etalate fraciunile proteice se usuc la temperatura ambiant, iar dup uscare se trec prin vapori de amoniac care sc imb culoarea indicatorului, fraciunile proteice separate devenind albastru " violet.

d. Evaluarea cantitativ a electroforegramelor$ Electroforegrama obinut prin separarea proteinelor serice se compune din cinci fraciuni proteice, sub form de benzi, crora li se msoar densitatea optic, fiecare band av8nd un maxim de absorbie. <n ordinea mobilitii electroforetice *exprimat ca diferena n centimetri de la linia de start p8n la mi@locul fiecrei fraciuni separate+, fraciunile sunt$ albumina, J1, J2, K i C1 globuline. Albumina este fraciunea cu cea mai mare mobilitate electroforetic, fraciunile J i K posed mobilitate electroforetic intermediar, iar globulinele, mobilitatea cea mai mic. Albumina, J1 i K globulinele apar sub forma unor benzi omogene, bine definite, J 2 i C globulinele apar ca benzi difuze, iar fraciunea C prezint n partea sa central o zon mai intens colorat.

(igura )* Aspectul benzilor fraciunilor proteice separate electroforetic nsoite de electroforegrama normal

#e pregtesc cinci eprubete n care se pipeteaz c8te , ml de soluie eluant. #e traseaz cu creionul pe electroforegram conturul fiecrei fraci uni colorate. #e decupeaz cu foarfeca fiecare fraciune, tind suprafaa respectiv de 8rtie de filtru n poriuni mici. =oriunile de 8rtie corespunztoare fiecrei fraciuni se introduc separat n cele cinci eprubete pentru eluarea colorantului reinut de fraciunea respectiv. #e astup eprubetele i se las )& de minute pentru eluarea colorantului, timp n care eprubetele se agit de c8teva ori. ;up omogenizare se determin la fotometru, la lungimea de und de ,L& nm, n cuve de / cm extincia lic idului colorat obinut dup eluare. #e obin pentru fiecare band cinci valori de densitate optic proporionale cu concentraiile proteinelor din zonele respective *albumine, J1, J2, K i C1 globuline+. #e calculeaz totalul acestor valori care se consider /&&(. #e calculeaz valorile procentuale ale fiecrei fraciuni proteice separate electroforetic, dup urmtoarea formul$

+ = E ( 100 / unde) + * valoarea procentual a fiecreia dintre cele cinci fraciuni proteice separate E 0 extincia determinat a fraciunii x 0 suma extinciilor celor cinci fraciuni *considerat /&& (+ =entru a exprima fraciunile n g3/&& ml ser, se determin valoarea proteinelor totale i se calculeaz cantitile corespunztoare fiecrei fraciuni pe baza concentraiilor procentuale obinute. Raportul albumin3globuline *A3M+ se calculeaz prin relaia$ ,/- * E albumin / E globuline VIII.2.2 Electroforeza proteinelor pe folii de acetat de celuloz Materiale necesare 1. <&aratul de electro/orez alctuit din$ redre'or camer umed. dispozitiv de fotometrare *densitometru+ adaptat pentru folii de acetat de celuloz. 2. u&ortul de mi,rare) folii de acetat de celuloz 3. !eacti"ii) a. #oluia tampon$ 7ampon barbiturat p9 0 4,., trie ionic &,&L, #e dizolv &,))/ g de veronal i /,4-4 g de medinal n ap distilat i se aduce volumul la /2& ml. b. Amestecul de colorant i fixator #e dizolv &,' g de colorant =onceau #, /),- g acid tricloracetic i /),g acid sulfosalicilic n /&&& ml de ap distilat. c. #oluia de acid acetic , ( d. #oluia pentru transparentizare$ #e amestec L& ml de acid acetic glacial cu )& ml de acetat de etil. #e prepar zilnic nainte de utilizare.

(igura .

Aparatul de electroforez

(igura .1 Sistemul de scanare densitometric i nregistrare a rezultatelor

(igura .$ Aspectul fraciunilor proteice separate electroforetic pe folii de acetat de celuloz

Proba er Tehnica de lucru #e umplu cuvele aparatului de electroforez cu tampon barbituric. e 'cot /oliile de acetat de celuloz din cutie, se noteaz i se imerseaz n soluia tampon timp de /, minute, cu gri@ s nu se prind bule de aer n mediul de acetat de celuloz. #e scot foliile din soluia tampon i se nltur excesul de lic id cu a@utorul unei 8rtii de filtru. Doliile se aaz n camera umed ntre cele dou cuve, av8nd gri@ ca cele dou capete ale membranei de acetat de celuloz s fie imersate n soluia tampon. #e aplic &,2, Nl din serul de analizat la captul dinspre anod a foliei cu a@utorul unui dispozitiv special furnizat de firm. #e d drumul la curentul electric pentru obinerea separrii electroforetice */&& voli timp de 2& de minute+. #e ntrerupe curentul, se scot membranele de acetat de celuloz i se imerseaz apoi n amestecul de colorant i /i7ator tim& de 10 minute. #e scot foliile din baia de colorant, se las s se scurg excesul de soluie colorant i se spal n trei bi succesive de acid acetic ,( *fiecare

splare dureaz dou minute+. #e nltur excesul de lic id i se las s se usuce la tem&eratura camerei ('au la +0C). #e imerseaz ncet foliile n alcool etilic timp de , minute, se trec n soluia de transparentizare, unde rm8n doar un minut i apoi se las s se usuce la -& " .&HC. ;eterminarea cantitativ a fraciunilor proteice se face prin scanare densitometric cu a@utorul densitometrului care interpreteaz gelurile. b!er"aii Oetoda este extrem de precis i rapid, put8nd furniza rezultate n decurs de o or. ;etaliile referitoare la te nica de lucru depind de aparatura accesibil.

Rezultate

b
(igura ./ a) Aspectul benzilor fraciunilor proteice separate electroforetic pe folie de acetat de celuloz; b) Rezultatul interpretrii foliilor prin scanare densitometric

7raseul electroforetic prezint un aspect tipic la adultul sntos, sub forma unei diagrame cu diferite v8rfuri ce corespund fraciilor proteice *figura ,)+$ primul v8rf corespunde albuminei, care este fraciunea cea mai rapid, migr8nd cel mai repede6 al doilea "6r/ core'&unde J1>,lo#ulinelor. al treilea "6r/ e'te al J2>,lo#ulinelor. al &atrulea "6r/ e'te al K1,lo#ulinelor. ultimul "6r/ core'&unde C1globulinelor, cele mai lente fraciuni proteice.

(igura .) Traseul electroforetic n condiii normale

!alori normale =roteinemia normal presupune o valoare total normal i o repartiie procentual caracteristic a fiecrei fraciuni proteice$ =roteine totale +%0 8%0 ,; <l#umine 3%$ $%$ ,; ($0 +2;) ?lo#uline 2%$ 3%$ ,; (38 $0;) J1>,lo#uline 0%2 0%9 ,; (9 8;) J2>,lo#uline 0%$ 0%@ ,; (+ 10;) K1globuline &,. " /,/ g( *4 " /,(+ C1globuline &,L " /,L g( */& " 2&(+ Ai#rino,en 0%2 0%9 ,; Raport Albumine3Mlobuline$ /,2 " /,,. 5aloarea acestui raport condiioneaz 5#91ul. Variaii fiziologice Electroforeza proteinelor serice ale sugarului este asemntoare cu cea a adultului, dar prezint o scdere a "6r/ului C1globulinelor, mai ales n perioada de ) " . luni, c8nd exist o ipo1gamaglobulinemie fiziologic. %ou1 nscutul i prematurul nu prezint aceast anomalie ns albuminemia este frecvent sczut n perioada neonatal. Ea aduli electro/ore,rama este cea descris mai sus, fr diferene ma@ore ntre cele dou sexe. %u se observ nici o variaie semnificativ a "alorilor la /emei% &e durata ciclului men'trual. Ba "6r'tnici se observ n general o scdere a v8rfului C1globulinelor asemntoare cu scderile din deficitele imune i o ipoalbuminemie. L, ( dintre btr8ni prezint o ipoproteinemie datorat scderii simultane a albuminelor i imunoglobulinelor. 5ariaiile determinate de oboseal *diminuarea gamaglobulinelor+ i de condiiile climatice 'unt relativ reduse. > diet deficitar n proteine, poate influena traseul electroforetic, n sensul diminurii albuminelor i creterii globulinelor, n special a fraciunii beta. arcina, mai ales n al treilea trimestru, determin o diminuare a albuminelor i o cretere a J2 i K1globulinelor, 1n tim& ce C1globulinele au valori normale. Variaii patologice Creterea raportului albumine3globuline nu are importan prea mare, dar scderea acestuia sub cifra / sugereaz boli care scad sinteza de albumin sanguin sau boli care cresc sinteza de globuline. Cauzele care duc la scderea albuminelor sunt aceleai care produc i scderea proteinelor totale. Albumine

5alori sczute *hipoalbuminemii)) scderea aportului$ malnutriie6 malabsorbie6 scderea sinte5ei) epatit cronic6 ciroz6 &ierderi) 'indrom ne/rotic. entero&atii e7'udati"e. creterea distrugerilor$ 0emora,ii. ar'uri. infecii grave6 0i&ertiroidie. dia#et 5a0arat. supuraii6 analbuminemie congenital. 2alori cre'cute (hiperalbuminemii) 'unt /oarte rare) leucemie limfatic cronic6 0i&o,ama,lo#ulinemii. Globuline #cderea globulinelor are valoare prognostic important n epatite. 5alori sczute *hipoglobulinemii)) 0e&atite cronice ,ra"e. ciro5e a"an'ate. &ierderi &roteice 1ndelun,ate) di,e'ti"e) entero&atii diareice% neo&la'm di,e'ti". renale) 'indrom ne/rotic. ar'uri e7tin'e. ec5eme &la'mora,ice. 0i&o-a,ama,lo#ulinemii ,enetice. 2alori cre'cute (hiperglobulinemii)) infecii i inflamaii cronice6 ne/ro&atii cronice. C tumori mali,ne. perioada de convalescen boli acute6 stri postagresive acute *reacie la scderea albuminelor+6 cola,eno5e. epatite acute i cronice. 1-globuline

Au valoare prognostic nul i valoare diagnostic sczut. 5alori sczute$ etili'm cronic. anemii. ciroze *asociaz scdere de J2>,lo#uline). ictere mecanice cu angiocolit. 2alori cre'cute) boli infecioase acute$ reumatism articular acut, pneumonii6 poliartrita reumatoid6 astm bronic6 in/arct miocardic. neo&la'me. 0i&ertiroidie. dia#et 5a0arat. necro5e 1ntin'e. ar'uri. sindroame nefrotice *asociaz cretere J21globuline i scdere albumine i C1globuline+6 afeciuni epatice$ ciroz biliar6 amiloidoz epatic6 epatite epidemice *creteri uoare+. 2-globuline <u valoare diagnostic foarte redus i valoare prognostic pentru epatitele grave. 5alori sczute$ izolate sau asociate cu scderea J11globulinelor n ciroze epatice severe sau oricare afeciune epatic gravP 2alori cre'cute) 'indrom ne/rotic. cancere 0e&atice 'e"ere. atrofie epatic6 epatite epidemice i ictere mecanice de cauz neoplazic *creteri uoare+. -globuline Au valoare diagnostic i pronostic pentru gravitatea epatitelor. 5alori sczute$ afeciuni epatice grave6 atro/ie epatic acut6 ictere ,ra"e.

2alori cre'cute) primele sptm8ni postinfarct miocardic acut6 dia#et 5a0arat. amiloidoz6 'indrom ne/rotic. unele neo&la'me (1n '&ecial cele meta'tatice). sarcoidoz6 ciro5e (cre'c 1ncet dar aDun, la "alori ridicate). 0e&atite) acute e&idemice. to7ice. etilice. icter mecanic. -globuline: 5alori sczute$ 'indrom ne/rotic. a,ama,lo#ulinemii. 0i&o,ama,lo#ulinemii. con,enitale. do#6ndite) mielom cu lanuri uoare6 leucemie limfatic cronic6 lim/oame.

2alori crescute " semnific un proces imunologic cronic asociat cu$ infecii subacute i cronice6 &ara5ito5e% "iro5e. inflamaii cronice6 #oli de cola,en) poliartrita reumatoid6 lu&u' eritemato' 'i'temic. afeciuni epatice$ 0e&atite cronice acti"e. ciro5a 0e&atic6 neo&la5ii) #oala Hod,Ein. leucemie mielomonocitar cronic VIII.# $eterminarea acti"itii peptidice Teste de disproteinemie Ec ilibrul dinamic normal al proteinelor sanguine poart denumirea de euproteinemie i privete at8t cantitatea total de proteine c8t i raporturile cantitative dintre fraciunile proteice. =rin disproteinemie se nelege o modificare cantitativ i calitativ a proteinelor plasmatice, care apare ca urmare a unui mecanism fiziopatologic declanat de o serie de afeciuni. ;isproteinemia reprezint incapacitatea organismului de a menine constante i n limite normale fraciunile sale proteice. Paraproteinemia presupune apariia de proteine atipice *paraproteine+, absente n plasma normal i este subordonat disproteinemiei *fiecare disproteinemie este nsoit de apariia de paraproteine+. <n ser, n condiii fiziologice, proteinele reprezint un sistem coloidal stabilizat prin moleculele de albumin. <n cazul modificrii raportului normal albumin3globuline, ca urmare a unor stri patologice nsoite de scderi ale factorilor stabilizani *albuminele+ sau creteri ale factori precipitani *globulinele+, se produce un dezec ilibru n sistemul coloidal al serului *instabilitate3labilitate coloidal+. Testele de disproteinemie (testele de labilitate seric) alctuiesc un ansamblu de reacii n care apare o turbiditate sau o floculare prin adugarea diferiilor reactivi n ser, pun8nd astfel n eviden existena dezec ilibrului ntre diferitele fraciuni proteice *modificarea raportului albumin3globuline+. !"""#/#1 Testul timol 0metoda Mac 1agan2 Principiul metodei =rin adugarea soluiei tampon saturat de timol *p9 0 L,-+ la o prob de ser apare o turbiditate n cazul n care globulinele sunt crescute *n

special J21globulinele+ sau albuminele sunt sczute. 7urbiditatea se datoreaz apariiei unui complex timol " globulinic " fosfolipidic. Mradul de turbiditate se determin fotometric la ..& nm, n cuve de / cm. Proba er Tehnica de lucru <ntr1o eprubet cu &,&, ml de ser proaspt se adaug ) ml de reactiv timol n tampon 1 veronal. #e agit i se las timp de )& de minute n repaus la temperatura camerei. #e evalueaz turbiditatea prin comparare cu o scal de etalonare sau fotometric prin citire la #peQol fa de ap distilat *R 0 ..& nm, factor de pant ),+. Rezultatul testului se exprim n uniti Oac Eagan *IOE+.

(igura .. Testul timol

!alori normale 0 9 FMB

Variaii patologice 5alori crescute se nregistreaz n$ epatopatii difuze *infecioase, toxice+6 ciroz epatic6 inflamaii cronice *poliartrita reumatoid, reumatismul articular acut+6 cola,eno5e. endocardita subacut6 GHC &ulmonar. ne/ro&atii. mielom multi&lu. infecii virale6 neo&la'm. !"""#/#$ Testul cu sul%at de zinc 0testul 3un4el2 Principiul metodei O soluie tamponat de sulfat de zinc *p9 0 L,-+ adugat la o prob de ser determin creterea turbiditii serului n cazul prezenei C1 globulinelor n cantitate crescut *direct proporional cu concentraia acestora+. 7urbiditatea aprut se datoreaz formrii unui complex metal " C1 globuline i urme de K1globuline *complex insolubil+. Reactivi !eacti" IunEel ('ul/at de 5inc tam&onat) Proba er Tehnica de lucru <ntr1o eprubet cu &,&, ml de ser proaspt se adaug ) ml de reactiv SunQel *sulfat de zinc tamponat+. #e amestec coninutul eprubetei prin rsturnare de c8teva ori. #e las timp de )& de minute 1n re&au' la tem&eratura camerei. #e evalueaz turbiditatea prin comparare cu scala turbidimetric de etalonare de la timol sau fotometric, prin citire la #peQol fa de ap distilat *R 0 .,& nm, factor de pant -&+. Rezultatul testului se exprim n uniti turbidimetrice#

(igura .5 Testul cu sul at de !inc

!alori normale 2 " ' uniti turbidimetrice Variaii fiziologice 5alorile apar crescute la persoanele v8rstnice *p8n la /2 uniti+ i sczute n primele . luni de via extrauterin. Variaii patologice 7estul SunQel este mai specific ca testul timol i mai selectiv pentru C1 globuline, pun8nd n eviden variaia acestora i prezint interes n ceea ce privete prognosticul i evoluia unei epatite infecioase.