CAPITOLUL I

STADIUL ACTUAL AL CERCETRILOR PRIVIND

CIRCUITUL AZOTULUI N NATUR

Chimitii au gsit mijlocul de a izgoni din agriculur spectrul

foametei de azot i au rezolvat problema fixrii azotului atmosferic.
Aceasta ns nu nseamn ca problema este definitiv eliminat.
Savanii din ntreaga lume caut procedee noi, mai ieftine i mai
eficiente pentru fixarea azotului. Cercetrile se efectueaz n dou direcii:
biologic i tehnic.
Cercetrile lui Delwiche (1970) referitoare la substanele organice
azotate din mare, sunt raportate la cei 10 cm de strat activ de la fundul
oceanului, n timp ce Sderlund i Svensson (1976) iau n consideraie
azotul organic dizolvat n coloana de ap.
Mulder, Lie i Woldendorp (1969) consider c bacteriile fixatoare de
azot liber au o contribuie minor la economia global a acestui element n
natur i la fertilitatea solului, pe baza urmtoarelor argumente:
- numrul celulelor de Azotobacter i Beijerinckia, n foarte multe
soluri, este relativ mic; s-a demonstrat, n plus, c prezena n rizosfer a
unui numr mare de bacterii fixatoare de azot, ca Azotobacter, Beijerinckia,
Derxia i Azospirillum, nu atest rolul lor n economia azotului din sistemul
respectiv;
- stimularea fixrii azotului necesit consumul unor cantiti mari de
carbon organic;
- n prezena compuilor cu azot n mediu, i utilizeaz preferenial pe
acetia, diminundu-i, semnificativ, capacitatea fixatoare;
 - n solurile fertile, activitatea lor este uor depresat de
microorganismele nefixatoare care consum substraturile organice cu
carbon.
Day i colab. (1984), utiliznd tehnici mai riguroase, apreciaz
contribuia bacteriilor chemotrofe libere la 2-3 kg N/ha/an i cu un rol mai
important n regiunile tropicale dect n cele temperate.
n ansamblu, n special pe baza studiilor de laborator efectuate cu
tehnici moderne ,se consider c rolul acestei categorii de microorganisme n
fixarea azotului i fertilitatea solului este incert. Ele explic lipsa de interes
pentru bacteriile Azotobacter. Beijerinckia, Clostridium etc., atat de mult
studiate pn n anii 1950.
Dup Evans i Barber (1977), leguminoasele cultivate i cele din flora
spontan introduc n sol 90 x 106 tone N/an, respectiv aproximativ jumatate
din cantitatea total de azot fixat pe cale biologic. Capacitatea fixatoare a
sistemului Rhizobium/ lucern sau Rhizobium/ lupin, poate reprezenta ntre
350 i 600 kg N/ha/an.
Eficiena este determinat de caracterul integrat al simbiozei, n cursul
creia bacteriile beneficiaz de glucidele sintetizate de plante, n cursul
fotosintezei, la rndul lor ,cednd produii rezultai din fixarea azotului, pe
care i exporta direct din nodul n organismul plantei pe calea unui sistem
specializat.
Delwiche (1970 1976) semnaleaz un fapt deosebit, care, dei este
raportat la perioada anilor 1970, i pstreaz ntreaga semnificaie. Ctigul
total de azot fixat anual este de 92 milioane de tone, n timp ce pierderile
prin denitrificare sunt limitate la 83 tone N/an. Diferena de 9 milioane de
tone/an reprezint, probabil, cantitatea de azot fixat care este introdus anual
n biosfer, n structura diferitelor molecule din sol, lacuri, ruri, oceane,
precum i n rezervoarele subterane.
Dup Audus, Ghinea i Ghiorghiade (l970) putem ntlni o aciune
direct mpotriva organismelor, alternd un proces fundamental comun.
Poate exista i o aciune selectiv, fiind inhibate doar procesele vitale ale
unui grup de microorganisme. Unele erbicide pot favoriza, direct sau
indirect, o serie de microorganisme care, astfel, pot substitui ali compui ai
microbiotei, modificnd echilibrul microbian al solului.
J. Audus (1970) arat c microbiota solului alctuiete un microsol
dinamic i complex ale crei populaii se afl ntr-un echilibru foarte delicat,
echilibru meninut printr-o complexitate de interaciuni a cror natur, de
multe ori, ne este cunoscut. Autorul vorbete tocmai de posibilitatea de
tulburare a acestei interaciuni prin aplicarea erbicidelor a pesticidelor, n
general. Prin aceasta se poate tulbura fertilitatea optim a solului.
Obiectivul principal al agriculturii este asigurarea condiiilor
favorabile pentru speciile importante din punct de vedere comercial,
utilizndu-se erbicide n detrimentul multor altor specii.
Practica agricol influeneaz n mod direct sau indirect asupra
diversitii biologice. Aceast aciune se reliefeaz la diferite niveluri,
cauzele generale ale deteriorrii biodiversitii fiind urmtoarele:
- la nivelul ecosistemelor i habitatelor: a influenat direct
micorarea habitatelor multor specii de insecte, psri, amfibii, mamifere,
plante superioare i inferioare;
- la nivelul speciilor: utilizarea erbicidelor duneaz speciilor
comensale, iar a insecticidelor microfaunei. Se tulbur ciclurile de
dezvoltare ale multor organisme. Mecanizarea i fertilizarea provoac
modificarea echilibrului dintre specii;
 - la nivel genetic: se produce micorarea numrului de specii,
varieti, rase utilizate. Monocultura favorizeaz mult acest proces. Are loc
eroziunea genetic ireversibil a speciilor animale i vegetale.
S-a studiat efectul toxic la mai multe grupe de erbicide. Astfel, s-a
observat c exist o sensibilitate diferit la aminotriazine, chiar la tulpina
aparinnd aceleiai specii microbiene. Dintre diazine a fost studiat, sub
aspect microbiologic, mai ales hidrazida maleic. Se pare c aceasta, n doze
normale, provoac o uoar stimulare a microbiotei solului (Levi, Krafts,
Evans, 1968) - cit. Zarnea (1994), dozele excesive fiind inhibitoare.
Substituenii sunt apreciai n general ca fiind toxici pentru microbiot
Bartha i colab. (1967) apreciaz faptul c derivaii ureei sunt cele
mai toxice erbicide pentru microbiota solului. Carbonaii au un efect
depresiv temporar.
n timp ce pe plan local (n mod particular, la nivelul suprafeelor
supuse unei agriculturi intensive) se pun probleme importante pentru
evitarea unui deficit de azot, pe plan global, bilanul circuitului azotului este
pozitiv. Acest caracter este determinat de faptul c, la nivelul biosferei,
cantitatea de azot fixat este mai mare dect cea pierdut prin recoltri,
denitrificri, depuneri de sedimente.
Datorit aportului crescut de azot, mai ales n apele de suprafa i
subterane, exist riscul ca aceast concentraie crescut de azot s
depeasc nivelul acceptabil pentru consumul uman. Exist riscul ca, n
perspectiv, chiar pe plan global, s fie necesar utilizarea denitrificrii
pentru a controla cantitatea de azot fixat n biosfer. n felul acesta, efortul
pentru a gsi ci de mbogire a solului n azot i de a ameliora, pe aceast
cale, alimentaia populaiei globului, va trebui sa fie nlocuit cu efortul de a
menine, n limite normale, ntr-un echilibru rezonabil, ciclul azotului.
 CAPITOLUL II

ROLUL MICROORGANISMELOR N
CIRCUITUL GLOBAL AL MATERIEl N NATUR

n natur, organismele vii preiau n mod permanent din sol, din ap i

din atmosfer, cantiti mari de elemente pe care le folosesc pentru sinteza
constituenilor lor celulari i pentru obinerea energiei necesare activitilor
lor biologice. Parial, n cursul vieii lor i n cea mai mare parte dup
moarte, substanele organice formate sunt supuse unui proces de
mineralizare, iar elementele componente sunt redate rezervoarelor din care
au provenit.
Circulaia biochimic este dirijat, direct sau indirect, de energia
radiant solar, care este absorbit de organismele fototrofe (plante verzi,
alge, bacterii fotosintetizante). Datorit capacitii de a converti energia
luminoas n energie chimic, ele pot sintetiza substane organice pornind
numai de la CO2 atmosferic, ap i substane minerale.
De la plante, substanele organice astfel sintetizate, sunt preluate sub
form de hran de ctre animale i om, iar dup moartea acestora se rentorc
n sol i n ape, sub form organic, neutilizabil ca atare de ctre plante.
La aceast srcire a solului n substane anorganice se adaug
pierderile determinate de eroziune, fenomenele produse de vnt i ploi, de
depunerea unor compui minerali n sedimente i roci sedimentare, sau
stocate sub forme ce evolueaz spre stadiul de combustibili fosili (crbune,
iei etc.). Dac acest proces ar fi continuu, cu toate c rezervele de elemente
biogene existente n natur sunt foarte mari, s-ar ajunge, la un moment dat,
la epuizarea formelor utilizabile, situaie incompatibil cu existena
organismelor vii. Acest fenomen este mpiedicat de faptul c
microorganismele din sol i din ape, exercitnd o puternic i permanent
aciune de mineralizare a substanelor organice de provenin vegetal sau
animal, menin constituenii anorganici i organici din biosfer ntr-un
raport relativ constant.
Chiar i n mediile acvatice, n care dup date mai noi, n procesul de
remineralizare particip cu un rol important zooplanctonul, rolul bacteriilor
i al fungilor rmne esenial datorit unor particulariti unice:
1. caracter ubicuitar;
2. activitate metabolic intens;
3. capacitate de multiplicare rapid;
4. activitate degradativ marcant chiar asupra unor substane chimice
complexe (celuloz, lignin, chitin) neobinuit (hidrocarburi, fenoli
etc.) sau recalcitrante (de sintez).

2.1. CICLURILE BIOGEOCHIMICE

Ciclurile biogeochimice nsumeaz cile de circulaie ale elementelor
biogene n natur, prin care trec de la forma anorganic la forma organic,
respectiv la diferite combinaii, mai mult sau mai puin complexe, pentru ca
s revin la forma anorganic din compartimentul abiotic al habitatelor
respective.
Evoluia acestor ci n care sunt implicate atmosfera, hidrosfera i
litosfera, implic intrarea n aciune a numeroase etape intermediare de
transformare a unor reacii fizice (solubilizri, precipitaii, volatilizri) i
chimice (oxidri, reduceri, hidrolize), ca i activiti biologice (degradri i
mineralizri, conversie organic prin biosintez), precum i prin translocri
spaiale repetate:
atmosfer <=> ap, atmosfer <=> sol, sol <=> ap, ap <=> sedimente
n unele cazuri, transformrile ciclice sunt relativ simple din punct de
vedere chimic, fiind limitate la simpla alternan anorganic <=> organic.
n acest sens este caracteristic ciclul fosforului, care este preluat de
organismele vii (microorganisme i plante) ca fosfat anorganic solubil i
ncorporat n compui organici prin esterificarea ionului fosfat.Dup moartea
organismelor, fosfatul organic eliberat este reconvertit la formele anorganice.
n cursul acestui ciclu, atomul de fosfor rmne component al gruprii
fosfat. Circulaia lui sub aciunea microorganismelor nu-i modific starea de
oxidare (Stewart, 1976).Transformrile se reduc la trecerea de la fosfat
anorganic la organic i invers, respectiv de la insolubil (imobilizat) la solubil
i mobil (Atlas, 1984)
Situaia este diferit n cazul altor elemente (C, N, 0, S etc.), la care
conversia anorganic <=> organic este nsoit de modificri n starea lor de
oxidare, cu consecine importante pentru utilizarea lor de ctre
microorganisme.
n unele medii, indisponibilitatea elementelor citate nu este
determinat de absena lor, ci de lipsa unor forme chimice accesibile. Ca
urmare, un hectar de sol poate s conin 75000 tone N i s fie, totui,
limitant pentru plante. Fraciunea din azotul total, prezent n biosfer
disponibil pentru a fi utilizat de plante, variaza intre 0,00001 i 0,001% .
n strit, unele cicluri (de exemplu, n ciclul carbonului) prezint ceea
ce Hutchinson a denumit imperfeciuni accidentale, n sensul c, permanent,
anumite cantiti sunt depuse n forme relativ stabile, fiind scoase din circuit,
fie pe termen mediu (ca n cazul humusului), fie pentru zeci i sute de
milioane de ani, ca n cazul combustibililor fosili (Fig.1).
Rezervoare naturale
(atmosfer, hidrosfer,
litosfer)

Mineralizare
Substane organice Substane anorganice
(organisme vii)
Asimilare

Stocare pe termen mediu (humus) sau

lung (combustibili fosili, sedimente)

Fig.1. Schem privind circuitul biogeochimc n natur

(dup Hutchinson, 1970)

Diferitele forme chimice (organic, anorganic, solubil, insolubil) ale

unui element, formeaz rezervoare ale caror mrime poate fi aproximat,
att la scar local (la nivel de habitat) sau chiar extrapolat la nivel de
biosfer. ntre diferitele rezervoare, prezente n atmosfer, litosfer sau
hidrosfer, exist un flux continuu care evolueaz n funcie de viteza de
reciclare a materialelor respective.
Mrimea rezervoarelor poate diferi mult de la un habitat la altul. Ele
pot conine compui uor accesibili, expui unor transformri rapide, sau
relativ inaccesibili, transformai lent. n funcie de condiiile locale, unele
forme chimice pot fi pierdute, iar altele se pot acumula. Mrimea diferitelor
rezervoare determin viteza de turnover. n general, rezervoarele mici (de
exemplu, cel de CO2) au un turnover rapid i, n mod deosebit, sensibil la
perturbri. Viteza cu care evolueaz ntregul ciclu depinde de mrimea
rezervorului i de cea mai lent vitez de turnover. n unele cazuri, viteza
mic de degradare a unor substraturi (celuloz, hemiceluloz, lignin)
determin o "strangulare" a fluxului i ncetinirea lui global (Alexander,
1971).
n unele cazuri, mrimea rezervorului este constant n timp, datorit
unei stri de echilibru, rezultat, n primul rnd, din faptul c pierderea este
echilibrat de un flux aproximativ egal. Ca urmare, cantitatea de carbon
organic, ntr-un teren virgin este, relativ constant, deoarece pierderea de
CO2 este echilibrat de rentoarcerea sub form de carbon organic, ca litier
i esut radicular mort.

2. 2. INTERCONECTAREA CICLURILOR BIOGEOCHIMICE

n mod convenional, exist o tendin de prezentare separat a
ciclului diferitelor elemente biogene, dei, ele sunt strns interconectate i
interdependente, realiznd, n ansamblu, circuitul global al materiei n
natura. n acest sens, exist probe numeroase de la cele mai simple la cele
mai sofisticate.
Bacteriile proteolitice, care descompun proteinele la CO 2 , NH3 , H2S,
sunt implicate n trei cicluri; respectiv, ciclul carbonului, azotului i sulfului.
n mod asemntor, Thiobacillus denitrificans particip n desfurarea celor
trei cicluri prin reducerea nitratului, oxidarea H 2S i utilizarea energiei
pentru reducerea CO2 i sinteza de compui organici ai carbonului.
n Fig.2 sunt prezentate interaciunile dintre ciclurile carbonului,
oxigenului i apei.
Interaciuni similare au loc constant ntre ciclul carbonului i cel al
azotului.
 H2O i CO2 din mediu

H2 H2
O2 CO2 CO2 O2

Constituenii materiei vii

O2 din mediu

Fig.2. Interrelaiile dintre ciclurile oxigenului, carbonului i apei

(dup Weisz, 1982)

Inf1uena omului este foarte evident pe scar local, unde poate

perturba capacitatea proprie de echilibrare a unui ciclu, inducnd, uneori,
modificri severe i greu reversibile ale mediului. Ea se poate manifesta
negativ i la scar global, aa cum se ntmpl cu creterea concentraiei
CO2 n atmosfer, ca o consecin a industrializarii i a arderii
combustibililor fosili.
Poluarea, sub diferitele ei forme, cu un aport excesiv de materie i
energie, poate modifica viteza de transfer a elementelor ntre diferitele
rezervoare; mrimea rezervoarelor producnd schimbri majore n
particularitile biochimice ale habitatelor i asupra comunitilor de
organisme care le populeaz.
n circulaia materiei n natur, rolul microorganismelor este esenial.
Fr microorganisme nu ar putea exista plante, iar n lipsa lor viaa
animalelor ar nceta. Prin urmare, microorganismele sunt tot att de
indispensabile vieii, ca i sursa de energie pe care o reprezint soarele,
deoarece, fr unul dintre aceti factori, nu ar mai exista plante verzi, deci
viaa nsi ar nceta.

CAPITOLUL III

CIRCUITUL BIOGEOCHIMIC AL AZOTULUI

Azotul este un element esenial pentru existena vieii in biosfer,

deoarece este inclus n structura tuturor proteinelor i acizilor nucleici. Dei
este prezent n natur n cantiti foarte mari, se gsete, aproape invariabil,
n forme inaccesibile plantelor i animalelor. Azotul reprezint 79% din
coninutul atmosferei sub form de azot diatomic, gaz, practic inert,
inaccesibil sistemelor biologice. Se adaug cantiti importante prezente n
structura plantelor i a animalelor terestre, n humus, n substanele organice
din organismele vii din sedimentele din mri i oceane, n roci etc.
n cadrul circuitului azotului n natur, azotul mineral este folosit de
plante i nglobat n structura lor sub form de constitueni celulari.
Animalele sunt dependente de plante ca surs major de azot. esuturile
vegetale i animalele moarte sunt mineralizate prin procesul de proteoliz i
amonificare i convertite, prin nitrificare, n forme din nou accesibile
plantelor. Cu toate acestea, pierderile de azot din sol, legate de recoltarea
plantelor de cultur, precum i cele adiionale, determinate de denitrificare i
levigaie, sunt att de mari nct, cel puin n cazul solurilor agricole,
depesc cantitatea de azot disponibil existent. Se apreciaz c o producie
de gru de 5 000 kg/ha echivaleaz cu o pierdere de 120 kg. n mod
asemntor, o producie de 50 000 kg sfecl necesit 200 kg N, iar
producerea de 5 000 kg biomas uscat/ ha/an, pe o pajite din regiunile
temperate, implic o pierdere de 150 kg N. Din aceasta decurge necesitatea
mbogirii solului n azot combinat, fie pe cale natural, prin fixarea
biologic a azotului atmosferic,fie artificial, prin adugare de ngraminte
azotate. Altfel, exist riscul ca deficitul de azot s devin un factor limitant
al produciei primare n ecosistemele respective.
Fcnd abstracie de cantitile mici de azot molecular care devin
accesibile plantelor pe cale fizico-chimic, prin fixarea lor n sol n cursul
descrcrilor electrice i cu apele din precipitaii, cea mai mare parte a
azotului atmosferic ar rmne nefolosit de vieuitoarele de pe pmnt dac
nu ar exista microorganismele fixatoare de azot.
Cantitatea de azot fixat, pe cale biologic, este apreciat la 175
milioane tone N/an, din care 90 x 106 , tone n solurile agricole. Se adaug
azotul fixat pe cale abiotic, prin iradieri, descrcri electrice din atmosfer
(fulgere), apreciat la 10 tone N/an i cel din procese de combustie, de la
ehipamente electrice, motoare cu combustie intern etc. ce produc oxizi de
azot care, eliberai n atmosfer, sunt readui de ploi n sol sub form de
nitrai.
Circulaia biologic a azotului este un proces lent i continuu, prin
care, sub aciunea a peste 100 de genuri de bacterii diferite, azotul gazos
atmosferic este convertit la forme fixe, care sunt folosite de plante i
introduse n forme organice, n constitueni structurali, utiliznd energia
obinut prin fotosintez. Dup moartea plantelor i animalelor care i-au
consumat, compuii organici ai azotului sunt mineralizai i restituii marelui
rezervor atmosferic.
 Etapele eseniale ale acestui proces, implicnd intrarea n aciune a
mai multor activiti biochimice, unele desfaurate n aerobioz, iar altele n
anaerobioz sunt:
1) Fixarea azotului molecular;
2) Amonificarea;
3) Nitrificarea;
4) Denitrificarea.

CIRCUITUL AZOTULUI N NATUR

Rezervorul natural de
azot atmosferic

Fixarea azotului
(NO2-)

Resturi animale Resturi vegetale Fertilizatori

(NH4+), (NO3=)

Bacterii Fixarea biologic

Bacterii descompuntoare a azotului prin
denitrificatoare aciunea
bacteriilor
nitrificatoare

Amoniac (NH3)
Ion amoniu (NH4+)

Nitrii (NO2=)

Nitrai (NO3=)

Fig. 3. Schem privind circuitului azotului n natur

 n timp ce n ecosistemele naturale circuitul azotului este un proces
echilibrat, n sensul c pierderile de azot din sol sunt compensate de
procesele de fixare, n sistemele supuse procesului de agricultura intensiv,
pierderile depesc ritmul de nlocuire. Se apreciaz c 35% din populaia
globului este absolut dependent de ngrmintele azotate.
Bilanul global al circuitului biogeochimic al azotului este un bilan
pozitiv pentru biosfer, dei exist scurgeri din circuit, att prin denitrificare,
ct i prin depozitarea unei pri de substane organice n sedimente.
Caracterul pozitiv al bilanului, adic a faptului c se fixeaz mai mult azot
dect se pierde, este foarte important deoarece face posibil creterea
biomasei ntregii biosfere. Ponderea activitii umane n acest proces este
substanial i n continu cretere, iar eforturile fcute pe acest drum, sunt
pe deplin justificate, deoarece duc la creterea cantitii de proteine n
alimentaia omului.

3.1.FIXAREA AZOTULUI MOLECULAR

Reprezint orice proces care convertete azotul liber n compui cu
azot.
Molecula de azot poate fi scindat n atomi de azot de energia care
rezult din arderi, din aciunea vulcanilor, descrcri electrice i procese
industiale. Lumina din descrcrile electrice atmosferice furnizeaz energia
care favorizeaz unirea azotului atomic cu oxigenul atomic, formndu-se
oxid de azot. Dup o serie de schimbri compuii cu azot ajung pe pamnt
prin ploaie.

3.1.1.Fixarea biologic a azotului

Este realizat n exclusivitate de bacterii i const n ncorporarea
azotului n combinaii chimice pe care plantele le pot absorbi i utiliza.
Aceste substane sunt amoniacul i ionul de nitrat. Pentru ca azotul
atmosferic, molecular s reacioneze cu hidrogenul i oxigenul, el trebuie s
fie scindat n atomi de azot. Scindarea azotului molecular n azot atomic i
combinarea acestuia cu hidrogenul, avnd ca rezultat amoniacul sau cu
hidrogenul i oxigenul din care rezult ionul de nitrat (NO3-), n mediul
terestru i n mediul acvatic, este realizat de ctre bacterii fixatoare de azot,
cu ajutorul enzimelor. Enzima se numete nitrogenaz. Nitrogenaza
funcioneaz numai n absena oxigenului.
Nu exist nici un exemplu de organisme eucariote fixatoare de azot
molecular. Se apreciaz c aceast proprietate a aprut n cursul evoluiei
ntr-o perioad cnd speciile eucariote erau deja existente i bacteriile erau
singurele organisme dotate cu capacitatea de a metaboliza anaerob i cu
reductazele adecvate unei conversii n direcia nitrogenazelor, sistemul
enzimatic esenial pentru fixarea azotului.

3.1.2. Bacteriile libere fixatoare de azot

Sunt reprezentate de 2 grupuri majore:
1. bacteriile chemotrofe;
2. bacteriile fototrofe (eubacterii i cianobacterii).

1. Bacterii chemotrofe fixatoare de azot: Clostridium pasteurianum i

Azotobacter sp. au fost descrise, iniial, ca singurele bacterii fixatoare de
azot i considerate, mult timp, ca avnd o importan esenial pentru acest
proces pe plan global.
Ulterior, s-a demonstrat c din numrul total de 260 de genuri de
bacterii chemotrofe, aproximativ 10% conin nitrogenaza i, ca urmare, au
proprietatea de fixare a azotului atmosferic. Ele includ specii din genurile:
Alcaligenes, Aquaspirillum, Arthrobacter, Azospirillum, Azotobacter,
Bacillus, Bejerinckia, Campylobacter, Citrobacter, Clostridium, Derxia,
Enterobacter, Erwinia, Frankia, Klebsiella. Methylobacter Methylococcus,
Methylosinus. Mycobacterium, Propionibacterium, Rhizobium, Thiobacillus,
Xanthobacter.
Dintre acestea, unele (Rhizobium, Frankia, Azospirillum) au
capacitatea de a forma simbioze cu diferite grade de specificitate i activitate
n natur.
Celelalte sunt fixatoare libere de azot. Unele sunt aerobe (Azotobacter
Beijerinckia etc.), altele anaerobe (Clostridium pasteurianum ,
Desulfovibrio), iar celelalte, n majoritate , aerobe facultativ anaerobe
(Klebsiella, Citrobacter, Enterobacter).
Rspndirea lor n natur este adesea caracteristic:
Azotobacter chroococcum n soluri neutre i alcaline;
A. agilis n ape uzate alcaline i neutre, srace n azot, bogate n carbon;
Beijerinckia n soluri acide, n special tropicale i subtropicale;
Derxia gummosa n special n solurile din India.
 Din mediile acvatice au fost izolate: Azotobacter agile, A.
chroococcum, Azomonas agili, A. insignis, Aeromonas sp., Achromobacter
sp., Pseudomonas sp., Flavobacterium sp., Corynebacterium, iar n Marea
Neagr, o specie de Spirillum, fixatoare de azot atmosferic.
Fixarea azotului atmosferic n mediile bine aerate este considerat
unanim ca sporadic, dificil sau imposibil de reprodus i are loc cu o rat
insuficient pentru a satisface nevoile recoltelor intensive. Importana
bacteriilor chemotrofe fixatoare de azot decurge, probabil din capacitatea lor
de a fixa cantiti mici pe suprafee mari i pe perioade ndelungate, n tot
cursul anului i nu n perioade scurte (39 50 de zile) ca n cazul
leguminoaselor.

2. Bacteriile fototrofe fixatoare de azot

Dintre cele 12 genuri de bacterii fototrofe identificate pn n prezent,
92% au capaciti fixatoare de azot. Capacitatea de a sintetiza nitrogenaze
este mai degrab regul dect excepie la fototrofe. Ele includ specii din
genurile: Amoebobacter, Chlorobium, Chromatium, Ectothiorhodospira,
Pelodictyon, Prosthecochloris, Rhodomicrobium, Rhodopseudomona,
Rhodospirillum, Thiocapsa, Thiocystis.
Datorit capacitii de a realiza fotosintez anoxigenic, importana
lor este limitat la mediile anoxice i anume, n principal, la sedimentele din
lacurile puin adnci.

3.1.3. Fixarea biologic a azotului n asociaie cu plantele

 Deoarece cantitatea de azot disponibil pentru plante este decisiv
pentru creterea produciei primare, este firesc ca oamenii s depun eforturi
susinute pentru a putea spori intrrile de azot n circuitul biologic.
Principala cale de cretere a cantitii de azot n circuitul
biogeochimic o reprezint n prezent fixarea industrial a azotului liber, prin
fabricarea de ngrminte azotoase. Cantitatea de N fixat pe aceast cale se
ridic la circa 50 milioane tone pe an (1978), reprezentnd cam 1/3 din
cantitatea total de azot fixat pe cale biologic. Cifrele arat c activitatea
uman afecteaz profund circuitul azotului pe scar planetar.
Aceast orientare este justificat i de faptul c fixarea industrial
(procedeu energofag ce consum 3% din producia mondial anual de gaze
naturale), ridic numeroase probleme tehnice, economice i ecoloice,
precum i dificulti ridicate de transport, aplicare, poluarea apelor freatice, a
malurilor i a lacurilor etc.
n urma cercetrilor, s-a observat c numai 50% din ngrmintele
administrate n sol sunt preluate eficient de ctre plante i c necesarul n
anul 2000 a fost de 1 miliard tone. Se apreciaz c, pentru fiecare cretere de
populaie cu 6 x 106 locuitori, o ar trebuie s construiasc o fabric de
ngrminte azotate, cu o capacitate de 106 kg NH4/zi. Efortul este
realizabil din punct de vedere tehnologic i financiar, dar consecinele
negative pentru mediu sunt intolerabile: poluare, eutrofizare, contaminarea
apelor freatice cu nitrai, acumulare de nitrozamine cancerigene, efect
distructiv al stratului atmosferic cu ozon, prin aciunea N 2O produs n cursul
denitrificrii microbiene etc.
Suprautilizarea ngrmintelor agricole pe baz de azot pentru
creterea produciilor la hectar influeneaz circuitul azotului. Nitraii folosii
n exces polueaz ecosistemele acvatice i apa freatic.
 Cantitatea de nitrai, n majoritatea ecosistemelor acvatice, este
limitant i prin aceasta, influeneaz dezvoltarea algelor, a fitoplanctonului.
Excesul de ngrminte este adus de ploaie n bli, lacuri, ruri. Fiind n
exces, stimuleaz dezvoltarea algelor. Algele mor, iar descompunerea lor, de
ctre bacteriie aerobe, consum oxigenul dizolvat n ap. Scderea cantitii
de oxigen provoac moartea altor organisme prin asfixie, ca de exemplu,
petii.
Nitriii dizolvai mai pot ptrunde n apa freatic. Consumarea apei
din fntni cu nitrii i nitrai este periculoas mai ales pentru copiii mici.
Azotatul de amoniu, ca ngrmnt se fabric dup metoda Haber i
Bosch, n care azotul atmosferic este combinat cu hidrogenul la temperatur
i presiune ridicat. Sursa de hidrogen este gazul metan sau hidrocarburile
din petrol.
n actuala criz de energie, cnd pericolul epuizrii surselor de petrol
i gaze naturale este iminent, iar preul petrolului este n cretere continu,
i costurile ngrmintelor fabricate pe cale industrial devine tot mai
ridicat.
n aceste condiii, apare fireasc nevoia de a gsi alte ci, mai ales
biologice, de fixare a azotului atmosferic sau de utilizare a asociaiilor
simbionte, fixatoare de azot. Cercetrile se desfoar pe mai multe ci, una
din aceste ci const n ncercarea de fixare a azotului liber, n simbioz cu
bacteriile.
n aceast privin, asociaia Azolla Anabaena reprezint o
important surs de azot n culturile de orez. Cercetrile efectuate la
Institutul Internaional pentru Cercetarea Orezului din Filipine, au stabilit c,
datorit acestei asociaii, se obin recolte constante de 3 4 tone orez/ha,
fr aplicarea ngrmintelor. n mod empiric, n mai multe zone de cultur
a orezului, Azolla este utilizat ca ngrmnt.
Asociiile de angiosperme cu actinomicete fixatoare de azot, sunt
recomandate i folosite n silvicultur, suplinind ngrmintele (Torrey,
1978). Astfel, n Taiwan, meiul (Setaria sp.) este cultivat n alternan cu
aninul (Alnus sp.) n Noua Guinee, Casuarina este cultivat pentru
ameliorarea solului, n Japonia, de mai mult vreme, sunt plantate Alnus,
Myrica, Eleagnus, n amestec cu alte esene, mai ales de conifere, n acelai
scop ameliorarea fertilitii solului.
Bacterii fixatoare de azot din genul Spirillium au fost gsite simbionte
cu unele graminee spontane, de exemplu Digitaria i chiar cu porumb n
America de Sud. Unul din cei mai importani productori primari din
mlatinile srate de pe coasta atlantic a Americii de Nord gramineul
Spartina alterniflora fixeaz azotul atmosferic prin rdcini, n simbioz
cu bacterii fixatoare de azot (Charlene Van Raalte, 1977). Cunoaterea
precis a condiiilor n care se instaleaz o asemenea simbioz ar deschide
perspectiva producerii ei i la gramineele cultivate.

Grupul sau familia Genurile sau speciile principale Caracteristici fiziologice

Azotobacteriaceae Azotobacter, Azomonas, Bejerinckia, Derxia, Libere, heterotrofe, aerobe

Xanthobacter
 Spirillaceae Azospirillium, Aquaspirillum, Campylobacter Libere, heterotrofe, microaerobe

Methylomonadaceae Methylomonas, Methylomonas, Methilococcus, Libere, heterotrofe, microaerobe

Methylobacter

Enterobacteriaceae Clebsiella, Citrobacter, Enterobacter Libere, heterotrofe, facultativ

anaerobe

Bacilliaceae Clostridium Libere, heterotrofe, strict anaerobe

Thilobacillus Libere, autotrofe

Chromtatiaceae Chromatium, Thiocistis, Thiocapsa, Ectothiospira

Chlorabiaceae Chclorobium
Libere, fototrofe, anaerobe

Rhodospirilliaceae Rhodosirillium, Rhodopseudomonas, Rhodomicrobium

Cynobacteria Anabaena, Nostoc, Calothrix, Scytonema Fototrofe, aerobe cu heterocisti

Spirulina, Oscillatoria, Lyndbya, Plectonema, Fototrofe, aerobe, fr heterocisti

Phormidium
Synechococcus, Dermocarpa, Pleurocapsa, Xenococcus, Fototrofe, aerobe, unicelulae
Gloeothece
Rhizobacteriaceae Rhizobium leguminosarium,R.trifolii, R.phaseoli, Simbionte
R.meliloti, R.rupini, Bradyrhizobium japonicum

Streptomycetaceae Frankia discariae, F.coriariae, F.dyadis, F.pushiae, Simbionte

F.casuarinae

Tabelul I. Principalele grupe de microorganisme fixatoare de azot

Foarte multe specii de bacterii fixatoare de azot sunt asociate, n
diferite grade, cu plantele, n aa fel nct fixarea azotului este rezultatul unei
cooperari, mai mult sau mai puin intime, cu planta gazd.
n aceast categorie sunt incluse:
1) simbioza Rhizobium / plante leguminoase;
2) simbioza Rhizobium / plante neleguminoase;
3) simbiozele asociative;
4) simbiozele foliare;
5) actinorizele;
6) cianobacteriile simbiotice fixatoare de azot, care i exercit activitatea n
asociaii, mai mult sau mai puin eficiente, cu diferite alte organisme, ca de
exemplu:
cu fungii din categoria Ascomycetes sau Basidiomycetes, n
licheni;
cu muchii din grupul Hepaticae (Anthochos, Blasia,
Clavicularia);
cu pteridofitele n asociaia Azolla /Anabaena azollae;
cu gimnospermele ( Cycas, Ceratozamia, Encephalartos etc);
cu anigiospermele (Gunera sp.).

3.1.4. Perspective ale mbuntirii procesului de fixare

biologic a azotului
Printre procedeele preconizate pentru remanierea acestei situaii cele
mai semnificative, ca perspectiv de abordare, sunt urmatoarele:
mrirea activitii fixatoare a tulpinilor de Rhizobium n urma
transferului genelor hup (hidrogen uptake), care asigur reciclarea
eficient a hidrogenului produs n nodoziti;
transferul genelor nif la bacterii nefixatoare de N2O n vederea
obinerii de noi bacterii cu aceast proprietate. Realizarea este condiionat
de numeroase dificulti tehnice, decurgnd din necesitatea de a transfera
20 40 de gene, de a asigura stabilitatea i activitatea lor n noile celule,
protecia nitrogenazei de aciunea inhibitoare a oxigenului, aprovizionarea
cu ATP, reglarea sintezei diferiilor produi codificai n cantiti adecvate;
obinerea de plante capabile s fixeze autonom azotul prin
transferul genelor nif;
mrirea spectrului de gazde n simbiozele asociative pentru a
include toate plantele de cultur importante.
n general, toate aceste abordri au ca inconvenient major, incompleta
cunoatere a bazelor genetice i biochimice ale fixarii azotului i a
asociaiilor simbiotice. Este nc puin cunoscut biologia bacteriilor
fixatoare de azot n natur i contribuia lor la structura i funcia habitatului
pe care l ocup, ecologia lor ca membrii liberi ai rizosferei i ai microbiotei
acesteia.
Exist riscul ca bacteriile nou create sau plantele modificate, s creeze
dezechilibre n circulaia altor elemente (P, K, Mg etc.), mai greu de
normalizat, sau, chiar de activare a unor microorganisme slbatice,
capabile s competiioneze cu cele modificate genetic.
S-au realizat numeroase cercetri i experiene n ceea ce privete
posibilitatea de transfer a complexului de gene ce controleaz fixarea de
azot, de la bacterii n celulele plantelor superioare, care n acest fel ar deveni
capabile s fixeze azotul liber.
Astfel, s-a reuit transferul acestui complex de la Klebsiella
pneumoniae la Escherichia coli.
De asemenea, s-a reuit introducerea de bacterii fixatoare de azot la
pin, utiliznd fungi ca purttori ai bacteriilor. Plantele de pin au nceput s
fixeze mici cantiti de azot. n una din variantele experienei, ciuperca
purttoare, modificat de bacterie, s-a dovedit a fi duntoare pentru plantele
de pin. Varianta a fost distrus din precauie. Acest fapt arat i pericolele
care pot rezulta din asemenea intervenii (Search, 1979).
Problema transferului genelor respective este complex, deoarece
implic nu numai transferul genelor ce determin producerea nitrogenazei,
dar i a celor ce controleaz mecanismele prin care nitrogenaza este ferit de
contactul cu oxigenul.
Din aceast cauz, dei s-a reuit transferul genelor ce induc
producerea de nitrogenaz la Agrobacterium, enzima produs a fost inactiv,
deoarece aceste bacterii sunt strict aerobe.
Interesul este stimulat de unele calcule care demonstreaz c
mbuntirile pe cale biologic ar fi echivalente cu aplicarea optim de
ngrminte azotate.

3.2. AMONIFICAREA
Amonificarea este procesul de conversie a compuilor organici cu azot, la
stadiul de amoniac. Procesul de amonificare este rezultatul activitii a
numeroase organisme heterotrofe ca bacterii, actinomicete.
Cea mai mare parte a azotului din orizonturile superficiale ale solului
este prezent sub forma de azot n combinaii organice. El provine din
proteinele vegetale sau animale, din masa microbian, din excrementele
animale etc.
n climatul temperat, o rezerv major de azot organic este asociat cu
humusul, rezerva accesibil organismelor vii numai dup ce a fost
mineralizat printr-un proces foarte lent (Alexander, 1971 ).
Mineralizarea azotului organic din sol este un proces esenial n ciclul
acestui element n natur, deoarece asigur conversia la forme anorganice,
mai mobile, utilizabile de ctre plante, ca i de ctre microorganisme.
ntregul proces de mineralizare, deci de transformare a compuilor organici
compleci n compui minerali simpli, este nsoit de eliberarea de energie,
care astfel devine utilizabil pentru alte procese de nutriie.
n sens larg, procesul de amonificare evolueaz n doua etape
succesive:

3.2.1.Etapa nespecific
Etapa de proteoliz, este efectuat de microorganisme heterotrofe ca:
Pseudomonas sp., Arthobacter sp., Bacillus thermoproteolyticus, Proteus
sp., Serratia marcescens, Bacillus subtilis, Bacillus mycoides, Clostridium
sp., Flavobacterium sp. sau de fungi ca : Aspergillus, Mucor, Penicillium.
Rhizopus, Alternaria etc., crora li se adaug efectul proteinazelor de origine
vegetal sau animal.
n cursul acestei faze, compuii organici cu structur complex sunt
hidrolizai la molecule care pot ptrunde n celule, fiind utilizate de alte
microorganisme sau, sunt degradate n continuare n etapa specific de
amonificare propriu-zis.

3.2.2.Etapa specific
Aceast etap, determinat de microorganismele din sol, asigur
degradarea n continuare a compuilor rezultai din etapa premergtoare de
proteoliz i a celor rezultai din hidroliza acizilor nucleici, precum i a
ureei, acidului uric, glucidelor animale i conversia lor n NH4.
n sens strict, amonificarea este reprezentat de procesul de eliberare a
NH3, prin aciunea microorganismelor asupra moleculelor rezultate din
descompunerea proteinelor, a acizilor nucleici. n acest sens, producerea i
eliberarea de NH3 prin aciunea microorganismelor de putrefacie, nu este un
proces de amonificare. Amonificarea se realizeaz prin mecanisme diferite,
incomplet elucidate, n funcie de natura microorganismelor implicate i de
condiiile de mediu. Ele au ns ntotdeauna, NH3 ca produs final.
Procesul de amonificare evolueaz lent. Ritmul i randamentul su
sunt evideniate de cantitatea de azot amoniacal care rmne n sol la
sfritul procesului. Amonificarea evolueaz n condiii optime n straturile
superficiale ale solurilor bine structurate, aerate, cu umiditate potrivit, la un
pH apropiat de neutralitate. Randamentul este optim la temperatura de 30C,
dar limitele la care se realizeaz sunt mult mai largi (2 40C).

3.3. NITRIFICAREA
Nitrificarea este un proces biologic prin care NH3, sau alte forme
reduse ale azotului anorganic rezultate n cursul procesului de amonificare,
sunt oxidate pn la nitrai, care reprezint forma de compui azotai cel mai
uor asimilabil de ctre majoritatea plantelor.
Nitrificarea cuprinde dou etape successive, strns cuplate i este
realizat de bacterii specifice, diferite:
Nitritbacteriile care convertesc amoniacul prin oxidare, n nitrit.
Sunt Gram-negative i heterogene ca form (bastonae, spiralate, sferice
etc). Unele dintre ele au sisteme membranare complexe intracelulare,
vizibile pe seciuni ultrafine la microscopul electronic. Cele mai cunoscute
sunt: Nitrosomonas europea , Nitrosococcus nitrosus. N. occanus , N.
mobilis , Nitrospira briensis, Nitrosolobus multiformis, Nitrosovibrio tenuis
(Backhoops i Harms, 1987) - cit. Zarnea (I994).
Nitratbacteriile convertesc nitritul prin oxidare n nitrat i sunt
reprezentate de: Nitrobacter winogradskyi. N. hamburgensis. Nitrosococcus
mobilis, Nitrospira gracilis, Nitrospira marina.
 Bacteriile nitrificatoare sunt prezente pretutindeni n sol, n bazinele
acvatice dulci i marine, n sistemele de epurare a apelor uzate, n depozitele
de compost.
Prezena oxigenului este obligatorie pentru toate speciile de bacterii
nitrificatoare. Reaciile nceteaz imediat n absena lui, sau se desfaoar
ntr-un ritm ncetinit pe masur ce tensiunea oxigenului scade.
Bacteriile nitrificatoare se dezvolt cel mai bine la pH ntre 7,5 8,
dar cresc n natur i n condiii suboptimale (pH =6). Temperatura optim
de dezvoltare este cuprins ntre 25 35C, limita inferioar fiind de 5C,
iar cea superioar de 40C.
n sol, umiditatea acioneaz indirect asupra nitrificrii, datorit
faptului c afecteaz gradul de aerare. Nitrificarea reprezint o etap cu
importan excepional n circulaia azotului n natur, deoarece aduce
substanele azotate din mediu (sol, ap etc.) n forma lor cea mai uor
asimilabil de ctre plante. De altfel, s-a observat c, n general, numrul
bacteriilor nitrificatoare este corelat cu gradul de fertilitate a solului, el
putnd ajunge n solurile foarte fertile pn la un million de bacterii/gram de
sol. Este sigur c acest numr mare este determinat i de faptul c aceste
soluri sunt lucrate i aerate.
Etapa urmtoare este cea de asimilare, n cadrul creia rdcinile
plantelor absorb nitraii i ncorporeaz azotul n proteine, acizi nucleici i
clorofil. Ierbivorele transform azotul n azot al proteinelor animale.

3.4. DENITRIFICAREA
Denitrificarea este procesul de descompunere a nitrailor pn la
azotul molecular, gazos, N2.
 Procesul se realizeaz de ctre bacterii denitrificatoare, anaerobe. Ele
triesc i se dezvolt n sol, acolo unde exist puin oxigen sau deloc.
Bacteriile din genul Pseudomonas folosesc azotaii ca surs de oxigen,
necesar pentru degradarea glucozei i formrii ATP-ului. Aceste bacterii au
capacitatea de a degrada ionul NO3 i NO2 pn la azot atomic, care se
ntoarce n atmosfer.
Denitrificarea este mai intens n solurile din pdure pentru c exist
condiii mai favorabile dect n solurile agricole.
Descris iniial de Schonbein (1868) cit. Zarnea (1994),
denitrificarea este un proces biologic efectuat n exclusivitate, de bacterii i
const n reducerea dezasimilatorie a unuia sau a ambilor oxizi ionici ai
azotului, nitratul (NO3) i nitritul ( N02) pn la oxizi gazoi, ca oxidul
nitric (NO) sau oxidul nitros (N2O), acetia pot fi ei nii redui n
continuare la azot gazos i eliminai ca atare n atmosfer. Simultan, are loc
oxidarea materiei organice din mediu cu producerea de energie.
Bacteriile denitrificatoare formeaz un grup biochimic i taxonomic
heterogen, care reunete peste 75 de genuri diferite. Contrar concepiilor mai
vechi, nici o bacterie denitrificatoare nu este strict anaerob. Acestea pot
chiar utiliza oxigenul ca acceptor final de electroni i prefer chiar respiraia
aerob, dac aceasta este posibil. Cresc n anaerobioz, pe medii care
conin NO3 , NO2 i N2O.
Principalele bacterii denitrificatoare sunt: Alcaligenes faecalis, A.
eutrophus, A. denitrificans, Azospirilum sp., Bacillus azotoformans,
Hyphomicrobium vulgare, Moraxela sp., Neisseria sicca. N. flavescens,
Micrococus denitrificans, Pseudomonas aerogenes, P. pentosaceum
Rhizobium sp. . Rhodopseudomonas sp., Thiobacillus denitrificans etc.
 Sunt ubicvitare, fiind prezente n toate tipurile de sol, inclusiv n zona
arctic, n nmolul activat, n sedimentele lacurilor, n sedimentele marine i
n numr mare n rizosfera plantelor, datorit prezenei substanelor organice
uor accesibile
3.4.1.Rolul denitrificrii n ciclul global biogeochimic
Denitrificarea reprezint calea major de formare a unei bune pri din
azotul atmosferic i de echilibrare a schimburilor dintre acesta i mediile
terestre sau acvatice. Acest lucru i confer o mare importan ecologic i
biogeochimic. Ea este rspunzatoare, n acelai timp, de pierderi majore (5
80%) din fertilizatorii azotai aplicai de ctre om. De asemenea, reprezint
un mecanism ce favorizeaz reducerea coninutului n azot al afluenilor
staiilor de epurare a apelor reziduale, reducnd pericolele de eutrofizare a
bazinelor receptoare.
Denitrificarea cuplat cu nitrificarea poate fi folosit pentru tratarea
apelor uzate oraeneti cu coninut bogat n substane organice, cu scopul de
a reduce cantitatea de azot n exces, contaminarea i riscul de eutrofizare a
apelor receptoare.