Curs 6

Limfocitele. Caracteristici. Clasificare.

Limfocitele reprezintă aproximativ 25 - 45% din totalul leucocitelor în sângele periferic, și

anume, în jur de 1500 - 4000 elemnte celulare /mm​3​.
Din punct de vedere morfologic, limfocitele pot fi clasificate în…
● limfocite mici, cu diametru de apoximativ 6 - 9μm, acestea la rândul lor se împart în
două categorii...
○ limfocite T = limfocite rozetante, care, cu ajutorul citometriei în flux, se pot
clasifica în…
■ limfocite T helper - Th
■ limfocite T supresor - Ts
■ limfocite Tcitotoxice - Tc
■ limfocite T contra-supresor - Tcs
○ limfocite B​ = non-rozetante
● limfocite mari, cu diametru de aproximativ 10 - 16 μm, cu citoplasmă abudentă,
conținând granulații azurofile. Acestea reprezintă o populație de aproximatov 15 -
20% din totalul limfocitelor din sângele periferic. Se mai numesc ​LGL = large
granular limfocytes​. Acestei categorii morfologice îi aparțin celulele NK - natural
killer, celule care își desfășoară funcțiile în cadrul imunității înnăscute și în cadrul
răspunsului imnu celular.

Limfocitele T

… sunt majoritare în populația totală de limfocite.

Au o durată de viață foarte lungă - ani, zeci de ani,
Sunt celule intens recirculante, fiind într-o permanentă dinamică în căutarea antigenului
pentru care au fost pre-programate.

Markerii de suprafață ai limfocitului T

pe membrana limfocitului se exprimă trei categorii de receptori…

● Receprori de recunoaștere antigenică
● Receptori cu rol accesor în activarea limfocitului T
● Receptori de adeziune intercelulară
Receptorii de recunoștere antigenică

1. complexul receptorial TCR-CD3 implicat direct în recunoașterea epitopilor prezentați

de APC și în generarea primelor semnale activatorii
2. CD4 sau CD8 care recunosc moleculele prezentatoare de Ag - CD4 recunoaște
MHC-II, CD8 recunoaște MHC-I
Împreună, acești receptori de recunoaștere antigenică, recunosc simultan atât epitopul cât și
molecula prezentatoare.

Funcțiile receptorilor de recunoaștere antigenică…

● realizează o recunoaștere imunologică asociativă
● reprezintă principala cale de activare metabolică pentru limfocitul T

Caracteristicile recunoașterii antigenice

● Limfocitele T recunosc determinanții antigenici/epitopii doar după structura lor
primară și, din aceasta, secvența de aminoacizi hidrofili ce intră în componența
determinanților antigenici liniari.
● Limfocitele T recunosc doar antigene prezentate în cmplex cu moleculele MHC, în
cadrul cooperării celulare cu APC. Nu recunosc antigene solubile.
● Recunoașterea antigenică realizată de limfocitele T este asociativă.

Recunoașterea prin TCR-CD3

TCR - T cell receptor

….este un complex receptorial heterodimeric format din două lanțuri transmembranare
asociate prin punți disulfurice…
● lanțul 𝞪 - are M=45kD, este elaborat după codul unor gene depe cromozomul 14
● lanțul 𝞫 - are M=40kD, este eelaborat după codul unor gene depe cromozomul 7
Ambele lanțuri sunt orientate cu capătul N-terminal extramembranar și cu cel C- terminal
intracelular. Segmentul extracelular are conformație imunoglobulin-like, cel transmembranar
conține zona balama, iar cel intracelular este scurt.

Lanțurile 𝞪 și 𝞫 în porțiunea lor extramembranară se organizează în bucle/domenii.

Domeniile N-terminale au aprox 100 - 110 aminoacizi și sunt variabile - V𝞪 și V𝞫 - de la
celulă la celulă. Aceste domenii se poziționează față în față, se asociază, formând o cavitate,
care reprezintă ​situsul combinativ pentru Ag sau situsul de recunoaștere a antigenului​. În
această structură pot fi recunoscuți epitopii prezentați de APC. Putem spune că acest situs
este cel mai important din punct de vedere funcțional, fiind implicat direct în recunoașterea
antigenului.
Domeniile constante - C𝞪 și C𝞫 - sunt secvențe de aminoacizi regăsite în structura TCR de pe
majoritatea limfocitelor.

V𝞪 și V𝞫 nu angajează legături prin toate secvențele de aminoacizi. Se realizează contacte

punctiforme cu epitopul prin scurte secvențe de aminoacizi - în număr de 8 - 15 - care vin în
contact cu acesta prin plicaturarea lanțurilor din care sunt alcătuite porțiunile V𝞪 și V𝞫.
Aminoacizii din vârful protruziilor care proemină în interiorul cavității situsului angajează
legături cu epitopul prin “complementaritate“. Aceste regiuni care protruzionează în
interiorul cavitîții și interacționează cu epitopul se numesc ​regiuni determinante ale
complementarității -​ CDR
Cele 6 CDR din situsul combinativ pentru Ag angajează contacte selective cu epitopul și cu
moleculele prezentatoare când limfocitul T cooperează cu APC. CDR1 și CDR2 ale ambelor
domenii variabile angajează legături cu moleculele MHC, recunoscând doar domeniile
polimorfe…
● MHC-I ↔ 𝞪1 și 𝞪2
● MHC-II ↔ 𝞪1 și 𝞫1
CDR3 de pe ambele domenii variabile sunt singurele implicate în recunoașterea Ag.
Prin TCR limfocitul T realizează o recunoaștere imunologic asociativă intrareceptorială. C
ele 6 CDR (1, 2 și 3 de pe ambele domenii variabile) constituie o sub-structură din situsul
combinativ pentru Ag care recunoaște în același timp epitopul și molecula prezentatoare prin
domeniile ei polimorfe. Această sub-structură se numește ​paratop.
Zona balama este o porțiune dotată cu maximă flexibilitate, favorizând net contactul cu
antigenul. Lanțurile 𝞪 și 𝞫 se asociază și aici prin punți disulfurice. Segmentele acestea
transmembranare pot avea aproximativ 20 de aminoacizi.
Segmentele intracitoplasmatice sunt extrem de scurte, de aproximativ 5 - 12 aminoacizi.

Funcțiile TCR
1. recunoașterea antigenică
2. generarea unor semnale activatorii
TCR nu poate realiza însă transmiterea / transducția acestor semnale la nivel
intracitoplasmatic datorită capetelor C-terminale foarte scurte.

CD3
...se asociază la TCR și formează un complex receptorial heptameric, CD3 fiind un complex
pentameric.
Conține trei lanțuri scurte transmembranare - 𝞬, 𝞭, 𝟄 - cu M mici în jur de 20 - 25 kD. Aceste
trei lanțuri sunt elaborate după codul unor gene localizate pe cromozomul 11. Lanțurile scurte
asociază apoi două lanțuri foarte lungi, de obicei ideentice între ele - 𝞯 - foarte fine de
aproximativ 16 kD. Lanțurile 𝞯 sunt elaborate după gene de pe cromozomul 1.
Toate aceste lanțuri - cele trei scurte și cele două foarte lungi sunt asociate între ele și la TCR
prin punți disulfurice, formând complexul receptorial heptameric.

Funcțiile CD3 în relație cu TCR…

1. transmiterea stimulilor activatori din lanț în lanț
2. acces la sistemele enzimatice din citoplasmă. În structura segmentelor
intracitoplasmatice ale lanțurilor 𝞯 există scurte secvențe de aminoacizi identice,
 bogate în tirozină - motivele activatoare tirozinice imunoregulatorii = ITAM - care au
rolul de a fixa proteinkinaze.

Recunoașterea prin CD4 sau CD8

CD4
...este un marker definitoriu pentru limfocitul T helper. Este sintetizat după codul unor gene
de pe cromozomul 12 și are M = 60kD. Este alcătuit dintr-un lanț dispus în trei porțiuni -
extracelulară, transmembranară și intracitoplasmatică. Porțiunea extracelulară este organiztă
în patru domenii diferite între ele - D1...4. Segmentul intracitoplasmatic este foarte lung.

Funcțiile CD4...
● Segmentul extracelular joacă un rol important în cooperarea dintre limfocitul Th și
APC, realizând legături cu moleculele MHC-II expuse pe APC - prin domeniul D1
care interacționează cu 𝞪2 - domeniu monomorf al moleculei MHC-II.
● Segmentul intracelular foarte lung are rol în activarea limfocitului Th. Acest segment
se află în contact direct cu o proteintirozinkinază - p56​lck​ .

CD8
...este marker definitoriu pentru limfocitele T citotoxice si T supresor. Structural, este un
complex heterodimeric, cu M = 70 kD, sintetizat după codul unor gene de pe cromozomul 2.
Lanțurile 𝞪 și 𝞫 au o configurație imunoglobulin-like. În segmentul extracelular, fiecare lanț
se organizează în câte o buclă/domeniu.
Funcțiile CD8…
● Domeniul 𝞪 din segmentul extracelular are rol în cooperarea dintre limfocitele Tc sau
Ts și APC prin legături între acest domeniu și molecula MHC-I exprimată pe APC,
prin domeniul monomorf 𝞪3.
● Segmentul intracelular se află în contact direct cu p56​lck , având rol în activarea
limfocitului Tc sau s.

Cei patru receptori - TCR, CD3, CD4, CD8 - realizează ​recunoașterea antigenică asociativă
dublă intrareceptorială și interreceptorială.

Recunoașterea antigenică asociativă dublă are două faze…

 1. Prin TCR-CD3 se recunosc epitopul și molecula MHC = recunoaștere antigenică
asociativă intrareceptorială,
2. TCR se asociază cu CD4 sau CD8 care recunosc molecula MHC = recunoaștere
antigenică asociativă interreceptorială

Limfocitul T are contact în aceleași momente atât cu molecula prezentatoare de Ag - prin

CDR 1 și 2 , CD4 sau CD8 = în total 5 contacte - cât și cu epitopul prin CDR3 în total 2
contacte.

Limfocitul T recunoaște doar Ag membranare prezentate.

Ag membranare pot fi…
● expuse pe membrane în complex cu moleculele MHC
● constitutive = aparțin structural membranei
● atașate = haptene
Limfocitele T nu recunosc Ag atașate, nici Ag constitutive. Ele recunosc doar Ag prezentate
în complex cu moleculele MHC. recunoașterea realizată de limfocitele T este MHC
restrictivă.

Receptorii cu rol accesor în activarea lmfocitului T

CD28, CD45,...
...reprezintă căi accesorii de activare metabolică a limfocitului T

CD28
...este o glicoproteină transmembranară, cel mai frecvent sub forma unui complex
homodimeric, cu M sub 50 kD.

Acest receptor este exprimat pe suprafețele limfocitelor T citotoxic și helper, niciodata pe T

supresor. Realizează o legătură cu un contra-ligand - CD80 - exprimat pe membranele APC
profesionale. Odată realizată această ligare, se generează și se transmit semnale activatoare
care favorizează maturarea funcțională a limfocitului…
● Th - începe sa producă interleukine
● Tc - eliberează citokine cu rol distructiv

CD45
...este o glicoproteină transmembranară exprimată pe membranele tuturor celulelor de origine
hematogenă, cu excepția eritrocitelor și plachetelor.
Pe membrana limfocitului B se exprimă izoformele cu M între 220 - 240 kD. Pe membrana
limfocitului T se exprimă izoformele cu M mai mică, între 180 - 220 kD.
Acest receptor ocupă 10% din aria limfocitului T și de obicei este în contact cu lanțurile 𝞯 ale
CD3 prin punți disulfurice, fiind asociat la complexul TCR-CD3. CD45 se activează ori de
câte ori are loc recunoașterea antigenică, pentru că semnalele activatoare care vin pe calea
TCR-CD3 au acces și la CD45, care astfel se activează și începe să funcționeze ca o
protein-tirozin-fosfatază (PTP), defosforilând tirozinele…

PTP activă →defosforilează PTK (p56​lck​) și preia fosfatul de pe tirozina.

CD45 poate și liga independent liganzi exprimați pe APC (CD22)

Receptorii de adeziune intercelulară

CD2, LFA1…
...au un rol important de aducere a celulelor - APC și limfocitul T - în contact pentru a putea
interacționa eficient, pentru a avea loc prezentarea Ag și recunoașterea acestuia. Au un rol
esențial în cooperarea celulară dintre APC și limfocitul T, adeziunea celulară fiind, de fapt,
prima etapă a oricărui răspuns imun.

CD2
...este exprimat pe membranele tuturor limfocitelor T naive. Este o glicoproteină
transmembranară cu M de 50 kD. Segmentul extracelular se organizează în două
bucle/domenii, iar cel intracelulareste foarte lung.
Angajează legături prin complementaritate cu un contraligand de pe membrana APC - LFA3
(CD58). Cele două moleecyle de adeziune - CD2 și CD58 - reprezintă cuplul de adeziune de
linia I, afinitatea dintre aceste molecule fiind foarte înaltă.
(LFA = Ag asociat funcției limfocitare)

LFA1
...este o 𝞫2-integrină, alcătuită din două lanțuri 𝞪 și 𝞫 …
● 𝞪 = CD11a
● 𝞫 = CD18

LFA1 este prezent pe membrana limfocitelor T, mai ales cele cu memorie, pe membrana
limfocitelor B, pe monocite, macrofage. Acest receptor de adeziune angajează legături cu
contraliganzi de pe APC care aparțin familiei ICAM (inter cell adhesion molecules).
Cuplul LFA1 - ICAM este un cuplu de adeziune de linia a doua.

De ce au receptorii de adeziune un rol esențial în cooperarea celulară?

Funcțiile receptorilor de adeziune…
● permit contacte intime între celule pe arii mari ale membranelor celulare.
● înving forțele elctrostatice de respingere - electropozitive pe versantul extern când
celulele sunt în repaus.
● permit stabilirea de contacte antigen-specifice MHC-epitop-TCR-CD3, complexele
moleculare participante la recunoaștere difuzează pe membranele celulare.
La finalul acestei încercări de a descrie principalele caracteristici ale limfocitelor T, putem
realiza clasificarea lor fenotipică…

LT/Marker CD2 CD3 CD4 CD8 CD28

de suprafață

Th + + + - +

Tc + + - + +

Ts + + - + -