Acesta poate fi împărțit în două părți sub microscop; sistemul mecanic și sistemul optic.

Sistemul mecanic
este modul în care este construit microscopul și părțile în care sunt instalate lentilele. Sistemul optic este sistemul de
lentile și modul în care reușesc să amplifice imaginea.

Microscopul optic generează o imagine mărită utilizând mai multe obiective. În primul rând, lentila obiectivului este o
mărire a imaginii extinse a eșantionului.

Odată ce obținem imaginea mărită, lentilele oculare formează o imagine virtuală mărită a eșantionului original. Avem
de asemenea nevoie de un punct de lumină.

În microscoapele optice există o sursă de lumină și un condensator care se concentrează pe eșantion. Când lumina
a trecut prin eșantion, lentilele sunt responsabile pentru creșterea imaginii.
Părți și funcții ale microscopului optic
Sistem mecanic

Piciorul

Acesta constituie baza microscopului și suportul său principal, poate avea forme diferite, fiind cel mai obișnuit
dreptunghiular și în formă de Y.

Tubul

Are o formă cilindrică și în interior este negru pentru a evita disconfortul reflexiei luminii. Capătul tubului este locul
unde sunt plasate ocularele.

Revolverul

Este o piesă rotativă în care obiectele sunt înșurubate. Când rotim acest dispozitiv, țintele trec prin axa tubului și sunt
plasate în poziție de lucru. Se numește revolver de zgomotul produs de pinion pentru a se potrivi într-un loc fix.

Coloana sau brațul

Coloana vertebrală sau brațul, cunoscută în unele cazuri ca o bucla, este piesa de pe spatele microscopului. Atașat
la tub în partea superioară și în partea inferioară este atașat la piciorul dispozitivului.

Scena

Stadiul este partea metalică plană în care este plasată eșantionul care trebuie urmărit. Are o gaură în axa optică a
tubului care permite razei de lumină să treacă în direcția eșantionului.

Stadiul poate fi fixat sau rotit. Dacă se rotește, cu ajutorul șuruburilor poate fi centrat sau deplasat în mișcări
circulare.

Mașina

Permite mutarea eșantionului cu o mișcare ortogonală, înainte și înapoi, sau de la dreapta la stânga.

Șurubul grosier

Dispozitivul conectat la acest șurub face ca tubul microscopului să alunece vertical, grație unui sistem de rafturi.
Aceste mișcări permit pregătirea rapidă.

Șurubul cu micrometru

Acest mecanism ajută la focalizarea eșantionului cu o focalizare precisă și precisă prin mișcarea aproape
imperceptibilă a scenei.

Mișcările se fac printr-un tambur cu diviziuni de 0,001 mm. Și acest lucru servește și pentru măsurarea grosimii
obiectelor cuplate.
Părți ale sistemului optic

ocularele

Ele sunt sistemele de lentile cele mai apropiate de vizorul observatorului. Sunt cilindri goi în partea superioară a
microscopului echipat cu lentile convergente.

În funcție de existența unuia sau a doi oculare, microscoapele pot fi monoculare sau binoculare

obiective

Ele sunt lentilele care sunt reglate de revolver. Ele sunt un sistem de lentile convergente în care pot fi atașate mai
multe obiective.

Cuplarea obiectivelor se face din ce în ce mai mult în funcție de creșterile lor în direcția acelor de ceasornic.

Obiectivele își măresc creșterea pe o parte și se disting, de asemenea, printr-un inel colorat. Unele dintre obiective
nu se concentrează pe pregătirea în aer și trebuie utilizate cu ulei de imersie.

condensator

Este un sistem de lentile convergente care captează razele luminoase și le concentrează în eșantion, oferind contrast
mai mult sau mai puțin.

Are un regulator pentru reglarea condensului printr-un șurub. Localizarea acestui șurub poate varia în funcție de
modelul microscopului

Sursă de iluminat

Iluminatul este constituit dintr-o lampă cu halogen. În funcție de mărimea microscopului, poate avea mai mult sau mai
puțină tensiune.

Cele mai mici microscoape cele mai utilizate în laboratoare au o tensiune de 12 V. Această iluminare este situată la
baza microscopului. Lumina iese din bec și se duce într-un reflector care transmite razele în direcția plăcii

diafragmă

De asemenea, cunoscut sub numele de iris, este situat pe reflectorul luminii. Prin aceasta puteți regla intensitatea
luminii prin deschiderea sau închiderea acesteia.

transformator

Acest transformator este necesar pentru conectarea microscopului la curent electric, deoarece puterea becului este
mai mică decât curentul electric.

Unele transformatoare au, de asemenea, un potențiometru care servește la reglarea intensității luminii care trece prin
microscop.

Toate părțile sistemului optic de microscoape sunt alcătuite din lentile corectate pentru aberații cromatice și sferice.

Aberațiile cromatice se datorează faptului că lumina este compusă din radiații care suferă o abatere inegală.
Lentilele achromatice sunt folosite pentru a evita schimbarea culorilor probei. Și aberația sferică este dată deoarece
razele care trec prin capăt converg într-un punct mai apropiat, astfel încât o diafragmă este plasată pentru a permite
trecerea la razele din centru.

Microscop de fluorescență
Este un alt tip de microscop optic în care undele luminoase fluorescente și fosforescente sunt utilizate pentru detalii mai bune asupra
studiului componentelor organice sau anorganice.

Ele se remarcă pur și simplu prin utilizarea luminii fluorescente pentru a genera imaginea, nefiind nevoit să depindă în totalitate de reflexia și
absorbția luminii vizibile.

Spre deosebire de alte tipuri de microscopuri analogice, microscopul fluorescent poate prezenta anumite limitări datorită uzurii pe care o
poate prezenta componenta luminii fluorescente datorită acumulării de elemente chimice cauzate de impactul electronilor, uzând moleculele
fluorescente.

Микроскоп стерео (стереомикроскоп, бинокулярная лупа) — микроскоп, оптическая система которого позволяет
наблюдать объект одновременно правым и левым глазом под разными углами, чем обеспечивается объемное восприятие объекта.
По своей сути стереомикроскоп является "специальными" очками для наших глаз, позволяющими видеть объемные предметы под
сильным увеличением, не теряя пространственной ориентации.

Стереомикроскоп формирует различное изображение объекта в левом и правом окуляре, будто мы наблюдаем его с двух сторон
(под углом стереоскопичности, обычно 11-15 градусов) при значительном увеличении. Такой метод формирования изображения
позволяет сохранить виртуальную объемность объекта. Наши глаза с легкостью определяют, на каком расстоянии находится тот
или иной элемент исследуемого образца, а рельеф поверхности становится понятным с первого взгляда.

Стереоскопический микроскоп используют для исследования непрозрачных объемных объектов в отраженном свете. Они
обеспечивают объемное (стереоскопическое) изображение при больших фокусных расстояниях, характеризуются небольшим
увеличением и большим полем зрения. Кроме того, в отличие от обычных оптических микроскопов, которые дают, как правило,
инвертированное изображение, оптическая система стереоскопического микроскопа не "переворачивает" изображение. Это
позволяет широко использовать их для препарирования объектов вручную или с использованием микроманипуляторов.

Стереоскопический микроскоп используют также, например, для проведения микрохирургических операций в офтальмологии, для
генетических исследований, скрининга в диагностике онкологических и инфекционных заболеваний, для получения информации о
клеточных культурах и отдельных клетках, для проведения контроля качества спермы, предварительной обработки и отбора
 яйцеклеток, оценки качества эмбрионов, в судебно-медицинских и экспертно-криминалистических процедурах и так далее.
В стереомикроскопах оптические системы бывают двух видов: Галилея (по схеме Аббе) и Грену. Эти две системы дают
изображения точной цветопередачи и высокой контрастности, но у каждой из этих систем есть свои определенные преимущества и
недостатки.
Схема Галилея (по схеме Аббе) включает один объектив, составленный из линз большого диаметра, расположенный по нормали
к полю наблюдения, через который ведется наблюдение с помощью лучей, вышедших под углами стереоскопичности (11°).
Благодаря такой схеме достигается большое поле зрения, отсутствие искажений изображения при малых увеличениях и
возможность полной коррекции аберраций объектива. Стереоскопические микроскопы системы Галилея обеспечивают работу при
меньшем рабочем расстоянии, но при большем линейном поле. Это происходит за счет того, что система имеет два параллельно
идущих и независимых друг от друга световых потока, которые сформированы одним объективом (по схеме Аббе). Помимо того,
что приборы с такой системой удобно использовать для визуального анализа различных образцов, они дают несравнимо точные
результаты различных измерений.
Достоинства оптической схемы Галилея (по схеме Аббе) с общим главным объективом: большая светосила, широкий выбор
дополнительных аксессуаров (набор для флуоресценции, набор для поляризации, столики с подогревом и так далее), эффективное
исправление оптических аберрации, более совершенная оптика с лучшей разрешающей способностью и точной цветопередачей,
точные результаты различных измерений. Недостатки оптической схемы Галилея: громоздкие габариты, нет ощущения
трехмерного изображения, аналогичного схеме Грену.
Схему Грену составляют два идентичных объектива, наклоненные под углом порядка 14° друг к другу, таким образом, два
оптических канала полностью независимы. Такая схема обеспечивает существенно большую глубину фокуса, однако значительное
меньшее поле зрения, чем схема Аббе. Так как объективы наклонены к изображаемому полю, коррекция кривизны поля для них
невозможна. Стереомикроскопы по системе Грену обеспечивают большую разрешающую способность микроскопа (минимальное
расстояние, при котором две близко находящиеся точки воспринимаются отдельно) и глубину резкого видения, что при
сфокусированной системе микроскопа позволяет получать более четкое, качественное изображение. Это объясняется тем, что при
схеме Грену образуются две оптические ветви, создающие угол стереоскопичности, а изображения левого и правого ракурса
сходятся на расстоянии от окуляров микроскопа до наблюдаемого объекта.
Достоинства оптической схемы по Грену: компактная конструкция, хорошая глубина резкости, легко исправляются оптические
аберрации. Недостатки оптической схемы по Грену: трапецеидальное искажение изображения.
Стереомикроскопы комплектуются объективами и окулярами, характеристики которых можно улучшить дополнительными линзами
и коаксиальными осветителями. А если необходимо провести точные измерения предмета наблюдения или сделать его
фотографию, то стереоскопический микроскоп можно оснастить цифровой камерой и программным обеспечением для анализа
изображения.

Микроскопы прямые исследовательские — высококлассные аппараты, которые предназначены для проведения научных и
практических исследований с прозрачными образцами.

Оптический микроскоп имеет следующие отличительные особенности:

 оптическая схема рассчитана “на бесконечность” и допускает установку в оптический путь между объективом и окулярами
дополнительных устройств обработки проходящего светового потока без нарушения фокусировки;
 оптика самого высокого класса — ахроматическая (коррекция сферической аберрации по одному цвету, коррекция
хроматической аберрации по двум цветам), апохроматическая (коррекция цветовых искажений по трем основным цветам),
планапохроматическая (коррекция искажений по всему видимому спектру), полуапохроматическая (имеют расширенную
спектральную область, ахроматизация выполняется для трех длин волн);
 расширенный набор объективов — до 8 в поворотной турели;
 источники света: LED, галогеновая лампа, ртутная лампа, ксеноновая лампа, металлогалоидная лампа для флуоресценции;
 различные методы исследования и контрастирования: светлое поле (СП), темное поле (ТП), проходящий свет, фазовый
контраст (ФК), простая поляризация, люминесценция, дифференциально-интерференционный контраст (ДИК), чувствительная
цветовая и простая поляризация;
 автоматизация операций: автофокусировка, смена объективов, фильтров, перемещение столика по двум (XY) или трем (XYZ)
координатам, управление конденсором, источниками света и т.п
 Спецификация исследовательских оптических микроскопов подбирается индивидуально под нужды пользователя.
 Сопутствующее оборудование для микроскопов прямых исследовательских: криотомы, микротомы, системы
видеодокументирования, микроманипуляторы, микроинъекторы.

Микроскопы прямые — очень обширная группа микроскопов с разнообразным применением — от изучения строения
кожуры луковицы до цитогенетических исследований. Они применяются для биологических, гистологических,
цитологических, микробиологических, медицинских исследований, а также в областях, не связанных непосредственно с
биологией: для наблюдения объектов в химии, физике, материаловедении и т.д. Микроскопы прямые сконструированы
таким образом, что объективы, насадка, окуляры располагаются над объектом, а осветитель, который включает в себя
источник света (лампу и электрический блок питания) и оптико-механическую систему (конденсор, полевую и апертурную
регулируемую диафрагмы), расположен за объектом. Это отличает их от микроскопов
инвертированных и стереомикроскопов.
 По области применения прямые оптические микроскопы можно разделить на несколько групп: Микроскопы прямые
начального уровня и Микроскопы прямые исследовательские.
 Другие микроскопы:
 Поляризационные микроскопы в общем случае обеспечивают наблюдение на сером или темном фоне разноцветного,
четкого или контрастного изображения. Основные условия освещения: обычный прямо проходящий свет с помощью
поляризатора в осветительной системе превращается в линейно-поляризованный свет, после объекта с помощью
анализатора происходит выделение из структуры изображения тех элементов, которые связаны с анизотропией объекта.
 Микроскоп проекционный: проекция изображения осуществляется непосредственно на специальный большой экран
(система обычного наблюдения с помощью окуляров отсутствует), при этом разработки конструкций и технологий
изготовления экрана направлены на получение такого разрешения элементов изображения объекта, которое было бы
приближено к разрешению обычного микроскопа.
 Конфокальный микроскоп: используется принцип послойного сканирования изображения с различным шагом по
глубине и площади с помощью лазерного луча или обычного пучка света минимального (точечного) размера. Шаг
сканирования объекта по глубине может составлять доли микрона: чем он меньше, тем точнее воспроизводится
объемный рельеф объекта. Оптико-механическая конструкция и электронная схема микроскопов, формирующая
сканирующий пучок, достаточно сложные и точные в изготовлении.
 Анализаторы изображения (аппаратно-программные комплексы) — это комплекс оборудования, в котором изображение
фиксируется, передается с помощью аналоговых или цифровых камер и анализируется в системе компьютера,
обрабатывающего изображение по определенной программе.
 Инвертированные микроскопы — световые микроскопы, где изменён ход лучей относительно прямых световых микроскопов:
объективы расположены под исследуемым образцом, осветительный конденсор находится сверху. Такая "перевернутая"
конструкция позволяет вести исследование объекта с его нижней стороны, причем как толщина объекта исследования, так и посуда
не играют особой роли.
оляет вести исследование объекта с его нижней стороны, причем как толщина объекта исследования, так и посуда не играют
особой роли.

Световые микроскопы делятся на основные группы:

 микроскопы проходящего света с условным делением на прямые начального уровня, прямые исследовательские;

 микроскопы инвертированные;
 микроскопы поляризационные.

Микроскоп состоит из нескольких частей: визуализирующей, воспроизводящей и осветительной. Визуализирующая часть. Окуляр

— часть оптической системы, обращенной к глазу наблюдателя, состоит из 2-5 или более линз. Окуляры привносят оптические
искажения, но важнейшими характеристиками окуляров являются такие параметры, как вынос зрачка — расстояние от окуляра до
глаза; поле зрения — угловой размер изображения, видимый через окуляр. Лучшими считаются широкопольные окуляры,
обозначаются буквой W. Осветительная часть. Конденсор — это зеркальная, линзовая или зеркальнолинзовая система, которая
собирает световые лучи и направляет их на рассматриваемый объект. Разрешающая способность микроскопа повышается с
увеличением апертуры его конденсора. Чаще всего в простых учебных микроскопах конденсор несъемный и неподвижный, в
остальных случаях конденсор снимается и при настройке освещения имеет фокусировочное перемещение вдоль оптической оси.
Классификация конденсоров практически аналогична классификации объективов. Осветитель — источники света (естественные и
искусственные). Воспроизводящая часть. Объективы — сложная оптическая часть микроскопа, предназначенная для построения
изображения в плоскости с соответствующим увеличением. Объективы характеризуются номинальным увеличением, числовой
апертурой (разрешающая способность объектива), типом коррекции (на бесконечность), коррекции оптических искажений.

Инвертированные микроскопы отличаются тем, что их оптическая схема "перевернута", наблюдаемая плоскость образца
направлена вниз, а револьверная головка с объективами находится под предметным столиком, благодаря этому плоскость образца
всегда строго перпендикулярна оптической оси объектива. Увеличенное расстояние конденсора и большое рабочее расстояние
между объектом и объективом позволяет размещать посуду разного формата, проводить манипуляции над объектом.
Толщина объекта, являющаяся строгим критерием для прямых микроскопов, не столь важна для инвертированных
микроскопов. Инвертированные микроскопы отличаются меньшим увеличением по сравнению с другими микроскопами из-за
увеличенной толщины лабораторной посуды (чашки Петри, флаконы культуральные и т.п.).
Методы контрастирования микрообъектов:
 метод светлого поля (СП) — применяется при исследовании прозрачных препаратов с различными участками структуры. Пучок
лучей из осветительной части микроскопа проходит препарат и объектив, этот пучок дает равномерно освещенное поле в
плоскости изображения, элементы структуры препарата частично поглощают и отклоняют падающий на них свет, что и приводит к
появлению изображения;
 метод темного поля (ТП) — применяется при изучении живых неокрашенных объектов, достигается освещением объекта полым
конусом света, ни один прямой луч не попадает на объектив, при отсутствии объекта поле будет темным, а при наличии светлый
объект будет виден на темном поле в отраженном свете. Метод основан на эффекте Тиндаля. Известный пример этого эффекта —
обнаружение пылинок в воздухе при освещении их узким солнечным лучом. Для реализации метода нужен свет по Келеру и
темнопольный конденсор;
 метод фазового контраста (ФК) — применяется для изучения живых объектов. Метод основан на изменении условий освещения
при наблюдении слабоконтрастных биологических объектов. В отличии от метода темного поля, выявляющего лишь контуры
объекта, метод ФК позволяет увидеть элементы внутренней структуры объекта. Метод реализован 2 способами: расположением
элементов с фазовым и световым кольцами внутри оптических систем микроскопа и расположением этих элементов вне объектива
и окуляра. Благодаря этому методу контраст живых неокрашенных микрообъектов резко увеличивается и они выглядят темными на
светлом поле (позитивный ФК) или светлыми на темном фоне (негативный ФК);
 поляризация — метод применяется для так называемых анизотропных объектов, такими объектами являются волокна, многие
минералы, некоторые животные и растительные ткани. При исследованиях анизотропных препаратов перед осветительной частью
микроскопа ставят поляризатор, а после объектива — анализатор. При скрещенных поляризаторе и анализаторе в темном поле
зрения микроскопа видны элементы объекта;
 люминесценция (флуоресценция) — метод основан на наблюдении микрообъектов с использованием их способности к
свечению. Этот метод имеет существенные преимущества перед обычными методами микроскопии: цветное свечение, высокая
степень контрастности, возможность исследовать прозрачные и непрозрачные живые объекты, возможность наблюдать процессы в
клетках и тканях в динамике, обнаружение локализации отдельных микроорганизмов.
По типу оптической коррекции объективы делятся на:

 ахроматы — коррекция по цвету, устранены сферические и хроматические аберрации; плоское поле составляет примерно 65 %
диаметра изображения (изображение наблюдаемого объекта может иметь некоторый сине-красный оттенок);
 апохроматы — в сравнении с ахроматическими дают более четкое изображение и более четко передают цвета; достигается за
счет расширенной спектральной области;
 планахроматы — имеют ахроматическую коррекцию, устранена кривизна поля для обеспечения максимально резкого
изображения на всем диаметре. Объективы такой конструкции лучше всего подходят для макрофотосъемки;
 планапохроматы — оптические элементы этих объективов содержат флуорид, что позволят использовать их во флуоресцентной
микроскопии;
 семипланаты — коррекция по кривизне поля зрения.

Для работы с флуоресценцией используются объективы с маркировкой FLUOR. Их делают из материалов с низкой собственной
флуоресценцией и хорошим пропусканием ультрафиолета.

Для улучшения апертуры используют иммерсионную жидкость, помещая в нее объектив. Как правило в качестве иммерсионной
жидкости используется масло (обозначение О на объективе), реже вода (W), иногда глицерин (Gli). Последний чаще применяется в
ультрафиолетовой микроскопии.

Микроскопы люминесцентные есть как в прямых микроскопах, так и в инвертированных.

Микроскопия - методы контраста

1. Cветлое поле

Метод светлого поля в проходящем свете применяется при исследовании прозрачных препаратов, у которых
различные участки структуры по-разному поглощают свет (тонкие окрашенные срезы животных и растительных
тканей, тонкие шлифы минералов и другие).
Пучок лучей из осветительной системы проходит препарат и объектив и дает равномерно освещенное поле в
плоскости изображения. Элементы структуры препарата частично поглощают и отклоняют падающий на них
свет, что и обусловливает появление изображения.

Метод может быть полезен и при наблюдении непоглащающих объектов, но лишь в том случае, если они
рассеивают освещающий пучок настолько сильно, что значительная часть его не попадает в объектив.
Метод светлого поля в отраженном свете применяется для наблюдения непрозрачных объектов, к примеру,
травленых шлифов металлов, биологических тканей и различных минералов. Освещение препарата
производится сверху, через объектив, который одновременно выполняет и роль осветительной системы.
Изображение, как и при проходящем свете, создается за счет того, что разные участки препарата неодинаково
отклоняют падающий на них свет, а отраженные лучи имеют различную интенсивность.

2. Темное поле

Темнопольная микроскопия основана на способности микроорганизмов сильно рассеивать свет. Для

темнопольнои микроскопии пользуются обычными объективами и специальными темнопольными
конденсорами.
Основная особенность темнопольных конденсоров заключается в том, что центральная часть у них затемнена
и прямые лучи от осветителя в объектив микроскопа не попадают. Объект освещается косыми боковыми
лучами и в объектив микроскопа попадают только лучи, рассеянные частицами, находящимися в препарате.
Темнопольная микроскопия основана на эффекте Тиндаля, известным примером которого служит обнаружение
пылинок в воздухе при освещении их узким лучом солнечного света.
Чтобы в объектив не попадали прямые лучи от осветителя, апертура объектива должна быть меньше, чем
апертура конденсора. Для уменьшения апертуры в обычный объектив помещают диафрагму или пользуются
специальными объективами, снабженными ирисовой диафрагмой.
При темнопольной микроскопии микроорганизмы выглядят ярко светящимися на черном фоне. При этом
способе микроскопии могут быть обнаружены мельчайшие микроорганизмы, размеры которых лежат за
пределами разрешающей способности микроскопа. Однако темнопольная микроскопия позволяет увидеть
только контуры объекта, но не дает возможности изучить внутреннюю структуру. С помощью темнопольнои
микроскопии изучают препараты типа раздавленная "капля". Предметные стекла должны быть не толще 1,1-1,2
мм, покровные 0,17 мм, без царапин и загрязнений.
При приготовлении препарата следует избегать наличия пузырьков и крупных частиц (эти дефекты будут
видны ярко святящимися и не позволят наблюдать препарат). Для темнопольной применяют более мощные
осветители и максимальный накал лампы.
Настройка темнопольного освещения в основном заключается в следующем:
1) устанавливают свет по Келеру;
2) заменяют светлопольный конденсор темнопольным;
3) на верхнюю линзу конденсора наносят иммерсионное масло или дистиллированную воду;
4) поднимают конденсор до соприкосновения с нижней поверхностью предметного стекла;
5) объектив малого увеличения фокусируют на препарат;
6) с помощью центрировочных винтов переводят в центр поля зрения светлое пятно (иногда имеющее
затемненный центральный участок);
7) поднимая и опуская конденсор, добиваются исчезновения затемненного центрального участка и получения
равномерно освещенного светлого пятна.
Если этого сделать не удается, то надо проверить толщину предметного стекла (обычно такое явление
наблюдается при использовании слишком толстых предметных стекол - конус света фокусируется в толще
стекла).
После правильной настройки света устанавливают объектив нужного увеличения и исследуют препарат.

3. Поляризация

Метод исследования в поляризованных лучах применяется в проходящем и в отраженном свете для так
называемых анизотропных объектов, обладающих двойным луче преломлением или отражением.
Такими объектами являются многие минералы, угли, некоторые животные и растительные ткани и клетки,
искусственные и естественные волокна. При исследовании анизотропных препаратов к обычной схеме
микроскопа перед осветительной системой добавляют поляризатор, а после объектива - анализатор,
находящиеся в скрещенном либо параллельном положении относительно друг друга.
При скрещенных поляризаторе и анализаторе в темном поле зрения микроскопа видны темные, светлые или
окрашенные анизотропные элементы объекта. Вид этих элементов зависит от положения объекта
относительно плоскости поляризации и от величины двойного лучепреломления.
Более точное определение оптических данных объекта делается с помощью различных компенсаторов
(неподвижных кристаллических пластинок, подвижных клиньев и пластинок).

4. Фазовый контраст

При микроскопии неокрашенных микроорганизмов, отличающихся от окружающей среды только по показателю

преломления, изменения интенсивности света (амплитуды) не происходит, а изменяется только фаза
прошедших световых волн. Поэтому глаз этих изменений заметить не может и наблюдаемые объекты выглядят
малоконтрастными, прозрачными.
Для наблюдения таких объектов используют фазово-контрастную микроскопию, основанную на превращении
невидимых фазовых изменений, вносимых объектом, в амплитудные, различимые глазом.
Фазово-контрастное устройство может быть установлено на любом световом микроскопе и состоит из:
1) набора объективов со специальными фазовым пластинками;
2) конденсора с поворачивающимся диском. В нем установлены кольцевые диафрагмы, соответствующие
фазовым пластинкам в каждом из объективов;
3) вспомогательного телескопа для настройки фазового контраста.
Настройка фазового контраста заключается в следующем:
1) заменяют объективы и конденсор микроскопа на фазовые (обозначенные буквами Ph) ;
2) устанавливают объектив малого увеличения. Отверстие в диске конденсора должно быть без кольцевой
диафрагмы (обозначенной цифрой "0");
3) настраивают свет по Келеру;
4) выбирают фазовый объектив соответствующего увеличения и фокусируют его на препарат;
5) поворачивают диск конденсора и устанавливают соответствующую объективу кольцевую диафрагму;
6) вынимают из тубуса окуляр и вставляют на его место вспомогательный телескоп. Настраивают его так,
чтобы были резко видны фазовая пластинка (в виде темного кольца) и кольцевая диафрагма (в виде светлого
кольца того же диаметра). С помощью регулировочных винтов на конденсоре совмещают эти кольца.
Вынимают вспомогательный телескоп и вновь устанавливают окуляр.
Благодаря применению этого способа микроскопии контраст живых неокрашенных микроорганизмов резко
увеличивается и они выглядят темными на светлом фоне (позитивный фазовый контраст) или светлыми на
темном фоне (негативный фазовый контраст).
Фазово-контрастная микроскопия применяется также для изучения клеток культуры ткани, наблюдения
действия различных вирусов на клетки и т. п. В этих случаях часто применяют биологические микроскопы с
обратным расположением оптики - инвертированные микроскопы. У таких микроскопов объективы
расположены снизу, а конденсор - сверху.

5. Флуоресценция (люминесценция)

Флуоресцентная (люминесцентная) микроскопия основана на способности некоторых веществ

люминесцировать, т. е. светиться при освещении невидимым ультрафиолетовым или синим светом. Цвет
люминесценции смещен в более длинноволновую часть спектра по сравнению с возбуждающим ее светом
(правило Стокса).
При возбуждении люминесценции синим светом цвет ее может быть от зеленого до красного, если
люминесценция возбуждается ультрафиолетовым излучением, то свечение может быть в любой части
видимого спектра. Эта особенность люминесценции позволяет, используя специальные светофильтры,
поглощающие возбуждающий свет, наблюдать сравнительно слабое люминесцентное свечение.
Устройство флуоресцентного микроскопа и правила работы с ним отличаются от обычного светового
микроскопа в основном следующим:
1. Наличие мощного источника света в осветителе, излучающего преимущественно в коротковолновой
(ультрафиолетовой, синей) части спектра (ртутно-кварцевая лампа или галогенная кварцевая лампа).
2. Наличие системы светофильтров:
• возбуждающие светофильтры пропускают только ту часть спектра, которая возбуждает люминесценцию;
• теплозащитный светофильтр защищает от перегрева другие светофильтры, препарат и оптику
флуоресцентного микроскопа;
• "запирающие" светофильтры расположены между окуляром. Эти светофильтры поглощают возбуждающее
излучение и пропускают свет люминесценции от препарата к глазу наблюдателя.
Способ освещения препаратов для возбуждения люминесценции заключается в том, что препарат освещают
светом, падающим на него через объектив. Благодаря этому освещенность увеличивается при использовании
объектов, имеющих большую числовую апертуру, т. е. тех, которые используются для изучения
микроорганизмов.
Важную роль при этом способе освещения играет специальная интерференционная светоделительная
пластинка, направляющая свет в объектив. Она представляет собой полупрозрачное зеркало, которое
избирательно отражает и направляет в объектив часть спектра, которая возбуждает люминесценцию, а
пропускает в окуляр свет люминесценции.
Оптика объективов флуоресцентного микроскопа изготавливается из нелюминесцирующих сортов оптического
стекла и склеивается специальным нелюминесцирующим клеем. При работе с объективами масляной
иммерсии используется нелюминесцирующее иммерсионное масло.
Поскольку большинство микроорганизмов не обладают собственной люминесценцией существует несколько
способов их обработки для наблюдения в флуоресцентном микроскопе. Прежде всего, это
флуорохромирование - окрашивание сильно разведенными (до нескольких микрограмм/мл) растворами
флуоресцирующих красителей (флуорохромов). Флуоресцентная микроскопия по сравнению с обычной
позволяет:
• сочетать цветное изображение и контрастность объектов;
• изучать морфологию живых и мертвых клеток микроорганизмов в питательных средах и тканях животных и
растений;
• исследовать клеточные микроструктуры, избирательно поглощающие различные флуорохромы, являющиеся
при этом специфическими цитохимическими индикаторами;
• определять функционально-морфологические изменения клеток;
• использовать флуорохромы при иммунологических реакциях и подсчете бактерий в образцах с невысоким их
содержанием.

6. Хоффмановский контраст

Хоффмановский контраст (ХК) представляет собой метод косого освещения, повышающий контраст в
окрашенных и неокрашенных препаратах за счет образования градиента оптических фаз. ХК пoзвoляeт
нaблюдaть тpexмepнoe изoбpaжeниe живыx oбpaзцoв в плacтикoвыx чaшкax c выcoкoй чeткocтью, чтo дaeт
pacшиpeнныe вoзмoжнocти для peшeния нaучныx и cпeциaльныx мeдицинcкиx зaдaч. За счет использования
бoльшиих paбoчих paccтoяний и выcoких чиcлoвых aпepтуp метод позволяет тoчнo oтcлeживaть движeние в
пoлe зpeния, нaпpимep, пpи проведении микроманипуляций.

Дpугиe иccлeдoвaния - тaкиe, кaк элeктpoфизиoлoгия, вспомогательные репродуктивные технологии и ЭКО -

тpeбуют нe тoлькo кoндeнcopoв, нo и oбъeктивoв c бoльшим paбoчим paccтoяниeм. При иccлeдoвaнии тoлcтыx
oбpaзцoв ХК пoмoгaeт peшить зaдaчу пocлoйнoгo изучeния oбpaзцa путeм выбopa пocлeдoвaтeльнocти
фoкaльныx плaнoв. Пpи этoм кaждый вepxний фoкaльный плaн нe нeceт инфopмaции о нижeлeжaщeм плaне.
ХК мoжeт быть пpимeнeн нa микpocкoпe c флуopecцeнтным ocвeтитeлeм. Изучeниe мopфoлoгии c
пpимeнeниeм флуopecцeнции или бeз тaкoвoй вoзмoжнo бeз cмeны oбъeктивoв и oбpaзцa. Стоит отметить
преимущество Хоффмановского контраста по сравнению с Фазовым контрастом.
Известно, что Фaзoвoму кoнтpacту пpиcущ эффeкт Гaлo - появление светящегося ореола по контуру
изображения объекта. B peзультaтe Bы мoжeтe пoтepять вaжную инфopмaцию. XК нe дaeт Гaлo, чтo пoзвoляeт
лeгкo oпpeдeлять cвoйcтвa кpaeвыx cтpуктуp, нaпpимep, тoчнo зaмepять углы или расстояния.

7. ДИК (дифференциально-интерференционный контраст)

 ДИК (дифференциально-интерференционный контраст) - является прекрасным механизмом для создания
контраста в прозрачных препаратах. Микроскопия с ДИК представляет собой интерференционную систему с
расщеплением пучка света, при которой контрольный пучок отклоняется на небольшое расстояние, обычно
меньшее, чем диаметр дифракционного кружка.
С помощью данного метода получается монохроматическое оттененное изображение, которое отображает
градиент оптических путей как высоко-, так и низкопространственных частот, присутствующих в препарате.
Те участки препарата, при прохождении через которые оптические пути удлиняются по отношению к
контрольному пучку, выглядят ярче или темнее, тогда как участки, между которыми различия меньше,
обладают противоположным контрастом.
Чем круче становится градиент оптических пучков, тем резче контраст изображения

Поляризационный микроскоп – это оптический микроскоп, снабженный специальными поляризующими фильтрами для изучения
анизотропных соединений в проходящем и отраженном свете.

Рис. 1. Линейно-поляризованный свет.

Рис. 2. Взаимное расположение плоскостей поляризатора и анализатора.

Принцип работы поляризационного микроскопа в проходящем свете.

Большинство органических и неорганических соединений, а также ряд биологических объектов имеют анизотропное строение
(отличные свойства в различных направлениях) и, как следствие, обладают двойным лучепреломлением. При прохождении
поляризованного света (распространение световой волны в одной плоскости (Рис.1)) через такие материалы, изучаемые объекты
демонстрируют свойственные только им морфологию, рельеф, окраску, плеохроизм, цвета интерференции и характер погасания в
наблюдаемом поле зрения микроскопа. На основании этих характеристик выполняется определение соединения, а также возможно
установить историю его преобразований. Иногда для точной идентификации соединения требуются дополнительные исследования.
В упрощенном виде принцип работы поляризационного микроскопа выглядит следующим образом. В нижней части микроскопа
располагается осветитель, над которым находится поляризационный фильтр. Свет, проходя через этот фильтр, превращается в
линейно-поляризованный (распространяется в одной плоскости) и далее проходит через прозрачный образец (например, шлиф или
срез). Исследуемый образец расщепляет световой луч на две составляющие. Над образцом находится еще один поляризационный
фильтр (расположен между объективами и окуляром) – анализатор. В зависимости от взаиморасположения анализатора и нижнего
фильтра, будут наблюдаться два разных изображения (Рис. 2). Если анализатор установлен так, что плоскости колебаний световых
волн совпадают (параллельны) с нижним поляризационным фильтром, то в окулярах микроскопа будет видно равномерно
освещенное поле, где разные элементы образца будут различаться по рельефу и цвету за счет различных показателей
преломления и цветов поглощения (Рис. 3). В отличие от обычной светлопольной микроскопии (см. подробнее методы
контраста, микроскопы прямые исследовательские), при прохождении поляризованного света некоторые соединения будут
демонстрировать плеохроизм (изменение окраски при вращении предметного столика).
При перпендикулярном расположении плоскостей анализатора и нижнего поляризационного фильтра, два луча, полученные в
результате расщепления световой волны изучаемым образцом, соединяются анализатором. В зависимости от разности оптических
путей в образце и от длин волн света, в анализаторе возникает усиливающая или ослабляющая интерференция. В результате, в
поле зрения микроскопа, изучаемые объекты демонстрируют различные цвета интерференции – от низких серых до высоких
оранжевых и красных (Рис. 4). При повороте образца относительно поляризаторов интенсивность цветов интерференции
изменяется циклически – от полного погасания до максимума. Кристаллические соединения, в зависимости от своего состава и
структуры, имеют определенный угол полного погасания (определенное положение оптических осей относительно поляризаторов).
Изотропные соединения будут постоянно выглядеть темными.

Pис. 3. Фотография кристаллов циркона в проходящем свете без анализатора (поляризационная микроскопия).
Рис. 4. Фотография кристаллов циркона в проходящем свете с анализатором (поляризационная микроскопия).

Для повышения контрастности изображения, в случае низких цветов (темно-серые) интерференции образца, в оптическую систему
можно устанавливать вспомогательные пластины. Пластина создает собственную разность оптических путей. Разности оптических
путей пластины и образца либо складываются, либо вычитаются. Когда направление колебаний медленного луча в образце и
вспомогательной пластине совпадают, разности оптических путей складываются, когда же направление колебаний быстрого луча в
образце совпадает с направлением колебаний медленного луча в пластине – вычитаются. Направления колебаний медленного и
быстрого лучей в пластине известны, что позволяет определить соответствующие направления и в образце.
Коноскопический метод позволяет определить: одно- или двуосный объект; знак двойного лучепреломления; ориентацию объекта и
величину угла между оптическими осями. В оптическую систему вводят линзу Бертрана, что обеспечивает появление
специфического изображения (коноскопических фигур), анализ которых позволяет получить необходимую информацию об образце.
Современные оптические поляризационные микроскопы позволяют также анализировать образец в отраженном свете. Это
необходимо для экспрессного анализа морфологии и соотношения непрозрачных фаз (например, рудная минералогия), в том числе
с пропускающими свет соединениями.

Устройство поляризационного микроскопа

Рис. 5. Поляризационный микроскоп с вращающимся предметным столиком.

В упрощенном виде поляризационный микроскоп имеет следующее строение (снизу вверх) (Рис. 5):
Осветитель – галогеновая или светодиодная лампа, располагающаяся в основании микроскопа. Интенсивность освещения
регулируется.
Поляризатор представляет собой пластинку и располагается над осветителем (крепиться в основание конденсора), в некоторых
моделях вращается на 360°.
Конденсор расположен над поляризатором под предметным столиком. Он является одной из главных частей микроскопа,
влияющих на качество изображения. Конденсор – это система линз, собирающая лучи от источника света и направляющая
сформированный световой пучок на образец. Он дает возможность регулировать яркость, контрастность, глубину резкости и
равномерность освещения изучаемого объекта. В представленных в данном разделе поляризационных микроскопах конденсор
съемный и подвижный и снабжен ирисовой диафрагмой (для плавной регулировки интенсивности освещения). По типу оптической
коррекции конденсоры в поляризационных микроскопах относятся к ахроматическим (коррекция сферической аберрации по
одному цвету, коррекция хроматической аберрации по двум цветам). Для получения максимально четкого изображения
используются конденсоры, свободные от натяжений. Конденсоры могут быть малой (до 0,3), средней (0,75) и большой (свыше 0,75)
числовой аппретуры. С ростом значения аппретуры растет разрешающая способность микроскопа. Для получения наилучших
результатов числовая апертура конденсора должна быть больше либо близка числовой апертуре объектива. Числовая апертура
конденсора уменьшается при перемещении его вниз по оптической оси, а также при сужении и перекрытии отверстия апертурной
диафрагмы конденсора. Для работы на различных увеличениях некоторые конденсоры выполняются с откидными элементами
(линзы, кольца для светофильтров).
Над конденсором располагается предметный столик, вращающийся на 360° и центрируемый относительно оптической оси.
Столик имеет градуировку угла поворота и возможность фиксации. На столик можно прикрепить вспомогательный механический
держатель, позволяющий зафиксировать предметное стекло и плавно перемещать его в горизонтальной плоскости по оси XY
(визуальное сканирование образца). Некоторые столики снабжены механизмом рефокусировки (опускаются под нажатием руки и
автоматически поднимаются после отпускания).
Над предметным столиком располагается револьвер с несколькими объективами (до 5). В объективе находиться система линз,
собирающая и фокусирующая световые лучи от наблюдаемого объекта для получения изображения. Тип объективов –
планахроматы (коррекция искажений по всему видимому спектру) и ахроматы (коррекция сферической аберрации по одному цвету,
коррекция хроматической аберрации по двум цветам). Кратность увеличения объективов – от х2,5 до х100, апертура – 0,05-1,25.
Выше располагается промежуточный тубус с анализатором, вспомогательными пластинами (кварцевый клин, кварцевые и
слюдяные пластины, компенсатор Сенармонта, Берека, интерференционный фильтр) и линзой Бертрана. Анализатор вращается на
360° с минимальным шагом 0.1° (при зафиксированном поляризаторе), либо на 180° (при вращающемся поляризаторе). На этом же
уровне может быть установлен осветитель для работы с отраженным светом.
Выше располагается окулярный тубус – бинокулярный или тринокулярный. Окуляры широкоугольные, с увеличением от 6,3 до 16
и с диаметром поля зрения от 11 до 20 мм, с перекрестием или сменной шкалой и стекой. Межзрачковое расстояние регулируется
(55-75 мм, 47-75 мм). Тринокулярный тубус позволяет установить камеру для фотографирования образцов.

Традиционная широкопольная флуоресцентная микроскопия стала одним из самых популярных методов в микроскопии

благодаря высокой чувствительности и хорошему контрасту изучаемых структур. Однако метод хорошо работает только для тонких
объектов (например, для монослоя клеток). При увеличении толщины объекта изображение становится менее контрастным (более
«размытым») за счет того, что помимо света в плоскости фокусировки, в объектив попадает также свет выше и ниже фокальной
плоскости, «засвечивая» изображение. Такая «засветка» становится еще больше при большем увеличении объектива. Для борьбы
с эти эффектом было придумано несколько стратегий: собирать свет только из фокальной плоскости (конфокальная
микроскопия), вызывать флуоресценцию только в фокальной плоскости (мультифотонная микроскопия), использовать
структурированный свет с последующей компьютерной обработкой (микроскопия структурированного освещения). Получаемые
изображения становятся более контрастными, такую четкую картину можно получать на разной глубине объекта (т.е. получить
оптический срез), что позволяет 1) заглянуть внутрь толстого объекта, например, тотального препарата или толстого среза, 2)
сделать несколько оптических срезов на разной глубине и построить объемную (3D) реконструкцию объекта.
Конфокальная микроскопия

Конфокальная микроскопия – метод флуоресцентной микроскопии, основанный на применении точечной диафрагмы (пинхол,
pinhole) для устранения внефокусного света, что позволяет улучшить пространственное разрешение и контраст изображения.
Метод позволяет получать четкое изображение с небольшого по глубине участка препарата (оптический срез). Изменяя фокус
объектива, можно получить серию оптических срезов на разной глубине объекта (z-стек), затем на ее основе реконструировать
трехмерное изображение образца. Конфокальная микроскопия нашла широкое применение в биологии и медицине,
материаловедении и физике полупроводников

Традиционно в качестве источника света для конфокального микроскопа используется лазер. При этом флуоресценция
возбуждается в локальной точке и попадает на высокочувствительный детектор (фотоэлектронный умножитель, лавинный
фотодиод и т.п.). Для формирования двумерного изображения проводится растровое сканирование образца: лазерный пучок
перемещается по образцу, сканируя его точка за точкой. Такой метод сканирования может занимать продолжительное время и
оказаться неудобным в исследованиях, где флуоресцентный сигнал быстро меняет локализацию или быстро выгорает либо в
случаях, когда необходимо уменьшить фототоксическое воздействие лазерного излучения.

Значительное увеличение скорости сканирования удалось достигнуть, расположив многочисленные пинхолы на вращающемся
диске (диск Нипкова, spinning-disk). Свет от галогеновой лампы (или светодиода) освещает весь объект, возбужденная
флуоресценция проходит через объектив и попадает на диск Нипкова. Пинхолы на диске Нипкова отсеивают внефокусный свет,
передавая изображение из фокальной плоскости на матрицу фотокамеры. При небольших скоростях вращения диска на
изображении еще заметны спиралевидные следы перемещения пинхолов, но при высоких скоростях изображение выглядит

непрерывным.
 Лазерный конфокальный микроскоп на основе вращающегося диска позволяет снимать со скоростью от 30 до нескольких тысяч
кадров в секунду, это инструмент выбора для высокоскоростной съёмки динамических процессов в клетках, долговременной съемки
с минимальной фототоксичностью.

Мультифотонная микроскопия (multiphoton, MP)

При традиционной лазерной конфокальной микроскопии свет одновременно облучает, хотя и локальную точку по осям X и Y, но
проникает на значительную глубину (т.е. по оси Z), вызывая флуоресценцию флуорохромов. Толщина оптического среза,
обусловленная размером пинхола, иногда бывает избыточной для оптимального разрешения, а уменьшение пинхола приводит к
падению интенсивности флуоресцентного сигнала. Выгорание флуорохромов и фототоксичность выше и ниже области интереса
также иногда бывает нежелательно. Глубина проникновения света также ограничена: чем меньше длина волны, тем меньше
глубина, на которую могут проникнуть фотоны. Это не удобно при изучения толстых образцов, поскольку как раз коротковолновое
излучение, имеющее бо́льшую энергию, используется для возбуждения большинства флуорохромов.

Мультифотонная микроскопия основана на использовании длинноволнового излучения (как правило, 700 – 1000 нм, т.е.
инфракрасного света), каждый из фотонов несет энергию, недостаточную для возбуждения молекулы флуорохрома, но при
одновременном воздействии двух или более таких фотонов, суммарной энергии становится достаточно, чтобы вызвать
флуоресценцию. При помощи этого метода можно вызвать флуоресценцию в очень локальном участке как по осям X и Y, так и по Z,
следовательно нет «мешающего» света выше и ниже точки фокуса, пинхол оказывается не нужен. Разрешение по Z оказывается
выше, фототоксичность за пределами фокальной плоскости ниже, чем при классической конфокальной микроскопии. Глубина
проникновения инфракрасного света самая большая, поэтому возможно анализировать объекты до 1 мм толщиной. К недостаткам
можно отнести более высокую стоимость оборудования, при этом методе зачастую одновременно возбуждаются все флуорохромы,
поэтому больше внимания нужно уделять подбору красителей для многоцветного окрашивания.

Микроскопия структурированного освещения — SIM (Structured Illumination Microscopy)

Еще одной попыткой убрать флуоресцентный сигнал выше и ниже плоскости фокуса стала разработка метода структурированного
освещения. В своем традиционном виде этот метод основан на использовании оптической решетки, которая проецируется на
объект. Для каждого положения фокуса на объекте производится как минимум три снимка с разным положением проекции решетки.
Наиболее четкое изображение решетки будет там, где объект находится в фокальной плоскости. Программное обеспечение
анализирует контрастность изображения решетки в разных положениях, удаляет всю информацию по изображению вне фокуса,
затем совмещает все снимки в один оптический срез с разрешением изображения, сопоставимым с конфокальной микроскопией.
Модулем структурированного освещения может оснащаться флуоресцентный конфокальный микроскоп или стереомикроскоп.
 Заключение

Когда качество изображения широкопольного флуоресцентного микроскопа перестает соответствовать решаемым задачам,
исследователю приходится обращаться к более сложным системам. Выбор определяется задачами и бюджетом. Как правило,
традиционного конфокального микроскопа достаточно для большинства приложений. Если планируется дальнейшее усложнение
задач, возможно, имеет смысл выбирать конфигурацию конфокального микроскопа подороже, чем было бы достаточно, но с
возможностью дополнения в дальнейшем необходимыми модулями: модулем мультифотонного возбуждения или системой
сверхвысокого разрешения. Диаэм предлагает системы разного уровня сложности от разных производителей. Наши специалисты
всегда доступны для обсуждения задач и подбора оптимальной конфигурации.

https://www.dia-m.ru/catalog/lab/mikroskopy/mikroskopy-invertirovannye/
Боксы (шкафы) биологической безопасности (ламинарные шкафы биологической безопасности, ламинары) предназначены
для создания ламинарного воздушного потока в контролируемой рабочей зоне, очистки и обеззараживания циркулирующего
воздуха от взвешенных пылевидных и аэрозольных частиц, а также обеспечения безопасных условий работы с патогенными
микроорганизмами, аэрогенными вирусами, цитостатиками и пр. Для защиты продукта внутри рабочей камеры от внешних и
перекрестных загрязнений, для работы с веществами, не представляющими угрозы здоровью оператора,
используются ламинарные укрытия.

Выбор шкафа биологической безопасности I, II или III классов определяется следующими критериями:
 цель применения - защита оператора и/или продукта и/или окружающей среды;
 класс патогенности микроорганизмов (включая вирусы), с которыми планируется работать;
 требуемый уровень очистки воздуха от взвешенных частиц разных размеров;
 ширина рабочей зоны – от 90 до 180 см;
 конструкция и материал, из которого изготовлен бокс биологической безопасности; эргономичность;
 опции - ультрафиолетовая лампа, подвод воды, газа, установка дополнительного оборудования.

Защита оператора и окружающей среды (I класс) — защита оператора и окружающей среды при работе с опасными агентами, а
также для предотвращения перекрестной контаминации внутри рабочей камеры. Бокс биологической безопасности I класса
защиты — бокс, сконструированный таким образом, чтобы обеспечить защиту оператора. Принцип действия основан на
принудительном удалении опасных веществ из рабочей зоны ламинарным восходящим потоком воздуха. Очищаемый воздух
проходит фильтрацию и удаляется во внешнюю среду.
 ащита продукта оператора и окружающей среды (II класс) — защита оператора, продукта и окружающей среды при работе с
патогенными агентами и микроорганизмами III–IV групп патогенности согласно СП 1.2.731-99 (тип А), и II группой патогенности
согласно СП 1.3.1285-03 (тип В), микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней
согласно CП 1.3.2322-08, передающихся воздушно-капельным путем, при проведении работ с использованием токсических
химических веществ, а также для создания абактериальной беспылевой воздушной среды. Бокс биологической безопасности II
класса защиты — это бокс с передним окном, через которое оператор может производить манипуляции внутри бокса,
сконструированный таким образом, чтобы обеспечить защиту оператора, при этом риск загрязнения продукта и перекрестной
контаминации сведен к минимуму. Нисходящий ламинарный воздушный поток удаляет отработанный воздух с помощью
высокоэффективной фильтрации в окружающую среду.

Боксы биологической безопасности II класса защиты делятся на два типа:

 тип A2 — для работы с патогенными агентами, с микроорганизмами III-IV групп патогенности в медицинских, бактериологических и
вирусологических лабораториях; принудительная рециркуляция (70%) воздуха в замкнутом объеме через фильтр HEPA;
 тип В2 — для оснащения отдельных рабочих мест медицинских, фармацевтических и других учреждений, осуществляющих работу
с патогенными биологическими агентами и микроорганизмами; отсутствует рециркуляция воздуха в рабочей камере, 100% выброс
отработанного воздуха.

При работе с чумой, цитостатиками, токсичными химическими веществами и радионуклидами требуется обязательное

подсоединение ламинарного бокса к системе вытяжной вентиляции производительностью не менее 1015 м³/час; помещение,
где установлен бокс, должно быть оборудовано приточной вентиляцией производительностью не менее 1000 м³/час. Во всех
остальных случаях необходимость подключения к системе вытяжной вентиляции определяется самостоятельно эксплуатирующей
организацией исходя из анализа и оценки рисков.

Защита оператора и окружающей среды (III класс) — защита оператора, продукта

и окружающей среды при работе с патогенными агентами и микроорганизмами I–II групп патогенности согласно СП1.3.1285-2003, с
химическими веществами, требующими контроля состава атмосферы, радиоизотопами, канцерогенами и т.п. Бокс биологической
безопасности III класса защиты — это бокс, в котором рабочая зона полностью изолирована от внешней среды, а оператор отделен
от рабочего места физическим барьером и может проводить манипуляции в рабочей камере бокса только через перчатки,
механически соединенные с боксом. Профильтрованный воздух постоянно подается в бокс, а удаляемый воздух, очищенный
минимум двойными высокоэффективными фильтрами, через собственную вытяжную систему выводится во внешнюю среду.
Ламинарный бокс применяется при работе с особо опасным микробиологическим материалом, вирусами, бактериями; при работе с
химическими веществами, требующими контроля состава атмосферы; при работе с радиоизотопами, канцерогенами; при сборке
электронных компонентов, а также в фармацевтике, криминалистике и в органическом синтезе.

В разделе представлены ламинарные шкафы с шириной рабочей поверхности от 90 до 180 см, доступен широкий выбор опций и
аксессуаров: дополнительные розетки, светодиодное освещение, краны для технических газов, комплекты для дезинфекционной
обработки бокса парами формальдегида. Для стерилизации в шкафах биологической безопасности в условиях ламинарного потока
рекомендуется использовать горелки автоматические и стерилизаторы электрические, так как они не нарушают однородность
ламинарных потоков. В боксах биологической безопасности дезинфекция достигается специальными дезинфицирующими
средствами.

Изоляторы для стерильных работ (асептические изоляторы)  представляют собой герметичную камеру, оборудованную
передаточными устройствами и приспособлениями для манипуляций, не нарушающих герметичности. Изоляторы для стерильных
работ обеспечивают защиту образца, оператора и окружающей среды.

Бокс (шкаф) биологической безопасности класс III, БМБ-III-«Ламинар-С»-0,9 PROTECT, это бокс, в котором рабочая зона
полностью изолирована от внешней среды, а оператор отделен от рабочего места физическим барьером и может проводить
манипуляции в рабочей камере бокса только через перчатки, механически соединенные с боксом. Профильтрованный воздух
постоянно подается в бокс, а удаляемый воздух, очищенный минимум двойными высокоэффективными фильтрами, через
собственную вытяжную систему выводится во внешнюю среду. Бокс применяется при работе с особо опасным микробиологическим
материалом, вирусами, бактериями; при работе с химическими веществами, требующими контроля состава атмосферы.
https://www.dia-m.ru/catalog/lab/main-boksy-shkafy-biologicheskoy-bezopasnosti/shkafy-
biologicheskoi-bezopasnosti/?PAGEN_SIM=3

https://bdc-air.ru/product/laminarnyi-boks-2-klassa/