2012

1. Enzimele de restricţie:
a) sunt componente ale citoplasmei eucariote,
b) acţionează în mod restricţionat doar le nivelul ARNului monocatenar;
c) fac incizii la nivelul legăturii dintre baza azotată şi gruparea fosfat;
d) taie ADNul la nivelul unor secvenţe a căror lungime poate varia de la 4 bp până la
20 bp;
e) taie ADNul odată la fiecare 256 perechi de baze.

2. Avantajele PCR constau în aceea că:

a) se poate realiza pornind de la cantităţi foarte mici de ADN sau ARN;
b) poate fi uşor compromis prin contaminare;
c) poate fi folosit pentru caracterizarea funcţională a produşilor unei gene;
d) face posibilă analiza ADN-ului provenit de la forme conservate;
e) permite amplificarea cu fidelitate a unor segmente de cca. 300Kbp

3. Plasmidele utilizate ca vectori de clonare trebuie să conţină:

a) secvenţă care să dirijeze replicarea plasmidului în celula gazdă;
b) un marker care să permită selectarea celulelor ce conţin plasmidul;
c) situsuri unice de restricţie pentru endonucleaze;
d) situsuri multiple de restricţie pentru endonucleaze;
e) secvenţe care să permită acţiunea ligazelor.

4. În vederea secvenţierii ADNului pot fi utilizate următoarele metode:

a) Southern blot;
b) Maxam-Gilbert;
c) Sanger;
d) Nortern blot;
e) PCR.

2013
1. Care dintre următoarele sunt etape în clonarea unei gene
a) amplificarea genei prin PCR
b) ligarea ADN cu ajutorul ADN ligazei
c) transformarea celulelor gazdă cu molecule recombinate
d) digestia ARN cu enzime de restricţie
2. Care dintre următoarele amorse va amplifica ADN monocatenar cu secvenţa
5ʹ ATGCACGTGATCCAGG
a) 5ʹ CCTGGA
b) 5ʹ ATGCAC
c) 5ʹ TACGTG
d) 5ʹ TCCAGG

3. Transcriptaza inversă este utilizată pentru:

a) sinteza unei molecule de ADN utilizând o matriţă ARN
b) sinteza unei molecule de ARN utilizând o matriţă de ADN
c) sinteza unei molecule de ADN utilizând o matriţă de ADN
d) sinteza unei molecule de ADN fară a fi necesară matriţa

4. Diagrama următoare s-a obţinut în urma migrării în gel a produşilor de

secvenţializare prin metoda Sanger. Scrieţi secvenţa obţinută şi indicaţi orientarea
moleculei.

5. Care dintre următoarele sunt caracteristice vectorilor de exprimare?

a) conţin promotor
b) conţin origine de replicare
c) conţin un situs multiplu de clonare
d) conţin un marker de selecţie pentru celulele transformate
 6. Un fragment de ADN de 8 kb a fost marcat cu 32P la capetele 5'. Acest fragment
a fost digerat cu enzimele de restricţie EcoRI şi Bgl II separat şi cu amble împreună
(vezi schema de mai jos, cu puncte sunt indicate fragmentele ce au 32P la capetele 5',
mărimile fragmentelor sunt în kb).

Care dintre variantele prezentate mai jos corespund cu harta de restricţie a fragmentului
analizat?

2014
1. Care dintre următoarele tehnici vor fi utilizate pentru clonarea unei gene procariote care codifică
o proteină?
a) amplificarea genei prin PCR
b) purificarea de ARNm
c) digestia ADN cu enzime de restricţie
d) purificarea de ADNg bacterian

2. Un cercetător vrea să cloneze o genă ca să obţină o proteină recombinată. Această proteină ar

trebui să conţină o etichetă de 6-His (etichetă de 6 Histidine) la capătul C-terminal al proteinei.
Care dintre următoarele opţiuni ar trebui să le selecteze cercetătorul, dacă situsul multiplu de
clonare conţine codonul START?
a) să aleagă un vector de exprimare ce are eticheta de 6-His în aval de situsul multiplu de
clonare
b) b) să includă codonul STOP în gena clonată
 c) să excludă codonul STOP din gena clonată
d) să aleagă un vector de clonare

3. Care dintre următoarele sunt caracteristice metodei de secvenţiere Sanger?

a) are la bază metoda PCR
b) este utilizată o singură amorsă (primer)
c) sunt utilizate cel puţin 2 amorse într-o reacţie
d) se obţin fragmente de mărimi variabile

4. Mai jos este schema de clonare a unei gene într-un vector de clonare (plasmid). Pentru clonare
vectorul şi gena au fost digerate cu enzima de restricţie EcoRV (situs de recunoaştere GAT↓ATC).
Vectorul de clonare are mărimea de 3000 pb, iar gena 1000 pb.

Dacă plasmidul nerecombinat circular este digerat doar cu EcoRV sau doar cu BamHI atunci se
obţine doar un fragment de 3000 pb. Atunci când plasmidul nerecombinat este tăiat cu ambele
enzime se obţin 2 fragmente: unul de 2000 pb şi 1000 pb. Dacă gena este digerată cu enzima
BamHI atunci se obţin 2 fragmente: 200 şi 800 pb. Care va fi mărimea fragmentelor dacă plasmidul
recombinat se va digera cu enzima BamHI?
a) 1000 + 3000 pb
b) se pot obţine două variante: 1)1200 + 2800 sau 2) 1800 + 2200
c) 200 + 800 +3000
d) 4000

2015

1. Un cercetător intenţionează să cloneze o genă ce codifică o proteină de la Escherichia coli

într-un plasmid de exprimare şi să o exprime în celule gazdă de Escherichia coli. Care dintre
următoarele tipuri de PCR le va utiliza în acest scop?
a) amplificarea genei prin PCR cu amorse specifice genei
b) secvenţierea plasmidului recombinat prin metoda Sanger (PCR de secvenţializare)
 c) verificarea clonelor corect recombinate prin colony-PCR utilizând amorse specifice genei
d) RT-PCR

2. În imaginea de mai jos sunt prezentate rezultatele de la secvenţializare Sanger.

Care va fi secvenţa genei dacă s-a utilizat amorsa Reverse pentru secvenţializare? (nucleotidele
nu sunt împărţite pe codoni )
a) ATG GAA GAC ACA GAT GAT GAT GAT GAT
b) ATC ATC ATC ATC ATC TGT GTC TTC CAT
c) TAC CTT CTG TGT CTA CTA CTA CTA CTA
d) TAG TAG TAG TAG TAG ACA CAG AAG GTA.
3. Mai jos sunt prezentate amorsele utilizate pentru amplificarea unei gene.
Forward GCA TGC TCC TGT CTA ACA CTG
Reverse AGG ACC CCT GTC CAG TGT TAA
Care va fi temperatura de topire a celor două amorse şi temperatura de aliniere pentru
PCR? a) Tm=60°C, Ta=64°C

b) Tm=64°C, Ta=60°C
c) Tm=54°C, Ta=50°C
d) Tm=60°C, Ta=56°C

4. Pentru clonarea unui fragment de ADN de 350pb din gena pentru ARNr 16S se va utiliza?
a) un plasmid de clonare

b) un plasmid de exprimare
c) un cosmid
d) YAC

5. Un cercetător a efectuat două reacţii de PCR şi a migrat produşii PCR rezultaţi într-un gel
de agaroză (vezi imaginea de mai jos, M- marker molecular ADN, 1 şi 2 probele de PCR).
Fragmentul ţintă în ambele cazuri trebuie să fie de 550pb.
Analizând imaginea, care dintre următoare sunt corecte?
a) în ambele cazuri s-a amplificat fragmentul ţintă
b) doar în cazul probei 2 s-a amplificat fragmentul ţintă
c) gelul de agaroză nu conţine bromură de etidiu
d) în cazul ambelor probe nu există produşi PCR-ţintă.
6. Dacă după ligarea unui plasmid cu o genă, produşii de ligare au fost transformaţi în celule
de E.coli, iar pe mediu solid au rezultat doar 3 colonii albastre şi 2 albe, care vor fi posibilele
explicaţii ale acestui număr redus de clone?
a) eficienţa de transformare a bacteriilor a fost mică
b) nu s-a pus antibiotic pe mediu
c) s-a pus doar IPTG şi antibiotic pe mediu
d) s-a pus doar X-Gal şi antibiotic pe mediu.
7. Genele A şi B au fost amplificate separat prin PCR utilizând amorse specifice nefosforilate.
Gena A conţine la capătul 3' situsul pentru enzima de restricţie KpnI (GGTAC/C), iar gena
B conţine la capătul 5' situsul pentru enzima de restricţie NheI(G/CTAGC).
7A. Care sunt etapele în crearea unei molecule himere A-B?
a) digestia genei A cu enzima KpnI
b) digestia genei B cu enzima NheI
c) incubarea genelor cu enzima T4 ADN polimeraza
d) ligarea fragmentelor cu T4 ADN polimerază
e) amplificarea prin PCR a genei himere

7B. Scrieţi care din nucleotidele din secvenţele de recunoaştere a celor 2 situsuri de
restricţie vor rămâne în molecula himeră.

2018
Un genetician studiază gena padl și varianta ei truncată tpadl (lipsește secvența de localizare
mitocondrială), de la E. coli. El a clonat în vectorul pJET 1.2 cele două gene. Proba I conține
vectorul pJET1.2 în care a fost introdusă gena padl completă. Proba II conține vectorul pJET1.2 în
care a fost introdusă gena tpadl. In timpul clonării, etichetele tuburilor s-au șters. El își propune
să restabilească, ce se găsește în fiecare tub, motiv pentru care realizează o digestie cu enzime de
restricție.

Harta vectorului pJET I .2 este redată în imaginea de mai jos.

Geneticianul are la dispoziție enzimele de restricție Not I, Nco I, Ec052 1, Xba I și trei dintre cele mai
comune tampoane (buffer) de reacție: tamponul A, tamponul B, tamponul C. În tabelul de mai jos
sunt prezentate condițiile optime de reacție pentru enzimele de restricție.

Enzimă % din activitate în % din activitate în % din activitate în Temperatura

tamponul A tamponul B tamponul C optimă de reacție
Not 1 100 25 50 37
Nco 1 75 100 50 37
Ec052 1 100 50 25 37
Xbal 25 25 100 25

1. Ce enzime de restricție va folosi geneticinaul pentru digestia plasmidului?

a) Not I și Eco52 I
b) Not l și Nco l
c) Nco I și Xba I
d) Not 1 și Xba I
e) Eco52 I și Xba I
Pentru a vedea rezultatul digestiei, geneticianul face o electroforeză în gel de agaroză. Imaginea
gelului obținut de el este următoarea:

2. Stabiliți ce conțin primele trei godeuri ale gelului de agaroză:

a) Godeu 1: Marker de greutate moleculară, Godeu 2: Proba I, Godeu 3: Proba II
b) Godeu 1: Marker de greutate moleculară, Godeu 2: Proba II, Godeu 3: Proba I

3. Ce reprezintă fiecare din fragmentele notate cu A, B, C?

a) A-gena tpad1, B-gena pad1, C-vectorul pJET1.2
b) A-vectorul pJET1.2, B-gena pad1, C-gena tpad1
c) A-gena pad1, B-vectorul pJET1.2, C-gena tpad1
d) A-vectorul pJET.1, B-gena tpad1, C-gena pad1
e) A-gena pad1, B-gena tpad1, C-vectorul pJET1.2

4. Care este lungimea genelor padl și tpadl și ce lungimi se așteaptă să aibă lanțurile de amino acizi
pe care pot să le sintetizeze PADI și respectiv tPAD1?
a) pad1 3800pb, tpad1 2500pb, PAD1 1267AA, tPAD1 833AA
b) pad1 2500pb, tpad1 3800pb, PAD1 833AA, tPAD1 1267AA
 c) pad1 1267AA, tpad1 833AA, PAD1 2500pb, tPAD1 3800pb
d) pad1 3800pb, tpad1 2500pb, PAD1 3800AA, tPAD1 2500AA

5. Ce îi lipsește vectorului pJET 1.2 pentru a putea fi utilizat în exprimarea celor două gene PAD1
și tPAD1?
a) o secvență promotor, un situs de legare al ribozomilor;
b) o secvență promotor, un marker de selecție
c) origine de replicare, situs multiplu de clonare
d) o secvență promotor, origine de replicare
e) un marker de selecție, origine de replicare

2022

1. Mai jos este secvența codifieatonre a genel pentru lucIferaza (1653pb) de ia licurici (Photinus
pyralis) (sunt prezentate doar capetele genei), gena întreagă în genom are 2387pb:
1-ATG GAA GAC GCC AAA AAC ATA AAG AAA GGC CCG (NNNNNN)1584nt ATA AAG GCC AAG
AAG GGC GGA AAG TCC AAA TTG TAA-1653
Indicați amorsele Forward si Reverse care pot ff utilizate pentru amplifcaren acestei gene si
caleulapi Tm:

Nr. Secvența amorsei Forward sau Reverse Tm

1 TTA CAA TTT GGA CTT TCC GCC

2 CCT TTC AGG TTT AAC ATT
3 GGA AAG TCC AAA TTG TAA
4 TAG CTT CTG CGG TTT TTG
5 ATG GAA GAC GCC AAA AAC ATA

2. Din celule de licurici s-a extras și purificat ARN total, care s-a utilizat pentru transcrierea
inversă. Care dintre următoarele sunt adevărate pentru a obține un produs PCR care să conțină
doar cadrul deschis de citire (ORF) al genei (pentru PCR se vor utiliza amorsele de la punctul 1):
a) pentru PCR se va utiliza ARN total
b) pentru PCR se va utiliza ADNc obținut la transcrierea inversǎ
c) ADNc se va obține utilizând amorse oligo-dT
d) pentru obtinerea de ADNc se va utiliza o ADN polimerazǎ ADN-dependentǎ
e) pentru obtinerea de ADNc se va utiliza o ADN polimerază ARN-dependentǎ
f) pentru obtinerea de ADNc se va utiliza o ARN polimerază ARN-dependentǎ
g) produsul PCR obținut va avea 1653pb
 h) produsul PCR obtinut va avea 2387pb
i) produsul PCR obtinut va avea ceva mai mult de 1653pb datorită prezenței cozii poli-A
j) se vor obține 2 produși PCR: 1653pb și 2387pb

3. Un plasmid a fost liniarizat prin digestia cu enzime de restricție după cum urmează:
#1-plasmid tăiat cu enzime de restricție EcoRV (GAT/ATC) și Ndel (CA/TATG) și tratat cu
fosfatazǎ alcalinǎ
#2-plasmid tăiat cu EcoRV (GAT/ATC)
#3-plasmid tăiat cu Ndel (CA/TATG) și tratat apoi cu nucleaza de la fasolea Mung

După digestia cu enzime de restricție, toate variantele de plasmid au fost purificate.

Produsul PCR a fost obținut cu amorsele de la punctul 1 după cum urmează:

#4-produs PCR amplificat cu Taq polimerază
#5-produs PCR amplificat cu ADN polimerază cu fidelitate mare (cu activitate exonucleazică
3'-5)
#6-produs PCR amplificat cu Taq polimerază și tratat cu nucleaza de la fasolea Mung

Indicați (cu Fals sau Adevărat) combinații de plasmid și produs PCR care pot fi legate de T4
ADN ligază și genera molecule recombinate. (*PCR a fost realizat cu amorse standard)

Vector Produs PCR

#4 #5 #6

#1

#2

#3

4. Dacă vectorul utilizat Ia punctul 3 este un vector de exprimare în celule de E.coli și admitem
că gena a fost clonată în situsul multiplu de clonare, atunci ordinea elementelor structurale
ale vectorului vor fi (direcția 5'-3'):
a) Gena pentru luciferazā
b) Secvența semnal de terminare a transcrierii
c) Promotor
d) Situs de legare a ribosomilor (ribosome binding site)
e) Codon START
f) Operator
g) Codon STOP
5. Molecula recombinată obținută la punctul 3 a fost introdusă în celule de E.coli și indusă
exprimarea genei recombinate. Care dintre următoarele este cea mai eficientă și rapidă
metodă pentru analiza exprimării genei:

a) micro-array cu sonde marcate fluorescent

b) micro-array utilizând luminescența naturală a luciferazei
c) metoda Northern blot
d) metoda Southern blot
e) PCR standard cu amorsele de la punctul 1
f) detecția luminescenței naturale a proteinei recombinate
g) purificare de ARNtotal, transcriere inversă cu amorse randomice și qPCR cu amorse specifice
h) secvențializarea genei prin metoda Sanger

6. Dacă este necesară exprimarea genei pentru luciferază în celule de eucariote atunci vectorul
de exprimare în care se va subclona gena va contine:
a) Promotor recunoscut de ARN polimeraza II
b) Regiune Kozak
c) Genă pentru rezistență la ampicilină controlată de un promotor procariot
d) Origine de replicare specifică bacteriilor
e) Secventă semnal de poli-adenilare
f) Coadă poli-A
g) Situs multiplu de clonare
h) Situs de legare al ribosomilor în aval de promotorul eucariot
i) Promotor recunoscut de ARN polimeraza I
j) Operator
k) Operon