1.

Replicarea , denaturarea i renaturarea ADN,

Replicarea ADN (funcia autocatalitic a ADN) sau biosinteza lui se face dup modelul
semiconservativ. Dup acest model rezult dou molecule fiice bicatenare, fiecare avnd o
caten polinucleotidic veche (matri) i una nou sintetizat. a eucariote procesul are loc !n
faza " (sintetic) din interfaza mitozei.
Replicarea macromoleculei de ADN ncepe prin ruperea
legturilor de hidrogen dintre cele dou catene. #ele dou catene
se desfac ca un fermoar i fiecare caten veche adiioneaz
nucleotide pe baz de complementaritate, refcndu$se structura
dublu catenar a fiecrei molecule fiice.
Etapele replicrii ADN-ului:
1. iniierea replicrii
2. alungirea au elongaia
!. terminarea replicrii
1. "niierea replicrii #ordinea intrrii n $uncie a en%imelor care $ac polimeri%area
ADN& :
%rima enzim ce acioneaz este o endonuclea% (&) care produce bree sau tieturi la
nivelul catenelor. 'n aceste bree ptrund ADN helica%ele (() i rup puniile de
hidrogen,desprind cele dou catene i dnd natere unui ochi de sintez. %entru a putea
aciona !n continuare ADN polimeraza este nevoie de prezena unui primer care are o )rupare
*+$,- liber. %rimerul este sintetizat de ctre prima% (*) i este alctuit din .$&/
ribonucleotide la eucariote i din &/$./ ribonucleotide la procariote.
'a procariote iniierea replicrii are loc ntr-un ingur punct de pe molecula bicatenar
de form circular a ADN$ului 0 punct denumit originea replicrii #(R" & i se desfoar
bidirecional.
'a eucariote replicarea ncepe n puncte de iniiere di$erite. 'n acest fel macromolecula
de ADN conine mai multe uniti de replicare numite repliconi i se desfoar bidirecional
din fiecare ori)ine.
2. Elongaia1 const !n sinteza noii catene imediat dup primer prin adu)area de
nucleotide pe baz de complementaritate cu matria, proces catalizat de enzima ADN
polimera%a (2).
'n replicare intervine ADN polimera%a """ la procariote i ADN polimera%a delta #& ) la
eucariote.Ambele enzime iniiaz repliarea numai dup o secven scurt ribonucleotidic
numit primer, sintetizat de ctre primaz.
3nzima se deplaseaz numai !n direcia *+$$$$$ 4+ pe ambele catene matri, determinnd
polimerizarea noilor catene numai !n direcia 4+$$$$$ *+ (funcie polimerazic 4+$$$$$ *+ ) .
'a procariote, catena care se sintetizeaz de pe catena matri cu orientare *+$$$$$ 4+ poart
numele de caten conductoare, iar catena care se sintetizeaz antiparalel este denumit
caten decalat.
*inte%a catenei conductoare e de$oar continuu, n timp ce inte%a catenei
decalate e de$oar pe fragmente Okazaki, adic dicontinuu.
a eucariote, !n loc de catena conductoare se folosete denumirea de caten progresiv,
iar !n loc de caten decalat 0 caten retrograd.
!. +erminarea alungirii au replicrii:
5ra)mentele ,6aza6i ale catenei decalate sunt le)ate cu a7utorul ADN liga%elor (4) pentru
a se realiza o caten fiic continu, dar asamblarea catenei decalate necesit !ndeprtarea
primerului ribonucleotidic cu a7utorul ADN polimera%ei " (.) care dei este o polimeraz are i
activitate e8onucleazic !n direcia 4+$$$*+ (!ndeprtnd ribonucleotidlele din primer) i face
!nlocuirea lui cu o secven corespunztoare de deo8iribonucleotide.
"mportant de reinut:
replicarea ADN se face dup model semiconservativ
%rocesul se desfsoar !n * etape1 iniierea replicrii, elon)aia i terminarea
replicrii
3nzima principal de replicare este ADN polimeraza (ADN polimeraza 999 la
procariote i i ADN polimeraza delta () 0 la eucariote
'n replicarea ADN intervin . enzime !n ordinea1 endonucleaza, helicazele,
primaza, ADN polimeraza, li)aza, ADN polimeraza 9 (cu funcia e8oucleazic)
a procariote replicarea !ncepe !ntr$un sin)ur punct !n timp ce la eucariote
replicarea !ncepe !n mai multe puncte diferite pe un cromozom, numite originea replicrii
:eplicarea ADN se face continuu de pe catena matri *+$$$$$ 4+ i discontinuu de
pe catena antiparalel cu direcia 4+$$$$*+.
a sfritul replicrii rezult dou molecule de ADN identice cu molecula mam,
fiecare avnd o caten veche i una nou sintetizat.
:eplicarea in vivo a ADN are loc !n faza " a interfazei mitozei la eucariote.
Denaturarea i renaturarea ADN
Denaturarea (topirea ADN) preupune ruperea legturilor de hidrogen dintre
catenele complementare ale ADN.
*e reali%ea% prin ridicarea temperaturii la ,- - ./
-
0.
Temperatura medie de topire #+m & a ADN -ete temperatura la care 1-2 din ADN
ete denaturant. , ;m este mai mare la un ADN bo)at !n perechi de baze )uanin$
citozin (datorit le)turilor triple) i ;m mai mic la un ADN bo)at !n perechi de baze
adenin$timin (datorit le)aturilor duble).
<<< Dup ce s$a realizat denaturarea termic dac are loc o rcire 3ruc a oluiei n care
e gete ADN-ul denaturat, atunci nu e 4or putea re$ace punile de hidrogen dintre
cele dou catene i ADN-ul rm5ne monocatenar #ADN denaturat&.
( rcire lent a oluiei n care e gete ADN 4a duce la renaturarea ADN.
Aplicaii1
%rin tehnica denaturrii i renaturrii se pot realiza hi3ri%i moleculari !ntre catene de
ADN provenite de la specii diferite (hibrid ADN 0ADN) i hibrizi ADN 0 A:N
Renaturarea ete cu at5t mai e$icient i mai rapid cu c5t ADN-ul peciilor
anali%ate pre%int ec4ene de nucleotide omoloage mai lungi, deci cu c5t ete
mai tr5n apropierea $ilogenetic.
"mportant de reinut:
Denaturarea ADN se face prin !nclzirea soluiei !n care se )sete ADN la o
temperatur =/ $ >2
/
# cnd are loc ruperea punilor de hidro)en dintre cele dou catene
ale ADN.
;emperatura la care 4/? din ADN este denaturant se numete temperatur de topire
:cirea brusc a soluiei va duce la obinerea de ADN denaturant iar prin rcire lent se
obine ADN renaturat deoarece se refac le)turile de h@dro)en dintre cele dou catene.
%rin tehnica denaturrii renaturrii se pot obine hibrizi de tipul1 ADN$ADN, ADN$A:N
Denaturarea, renaturarea are aplicaii !n stabilirea )radului de !nrudire dintre specii. #u
ct renaturarea are loc pe distane mai lun)i cu att speciile sunt mai apropiate filo)enetic