FUNCIILE ADN-ULUI

FUNCIA AUTOCATALITIC REPLICAREA

SEMICONSERVATIV A ADN-ULUI
ADN are dou funcii:
1. funcia AUTOCATALITIC, prin care ADN i dirijeaz replicarea
2. funcia HETEROCATALITIC, prin care ADN dirijeaz sinteza diferitelor tipuri de ARN i a proteinelor.
Existena n spaiu i timp a tuturor organismelor vii depinde de desfurarea a dou procese fundamentale:
fotosinteza
replicarea ADN
Sinteza de noi molecule de ADN care s fie transmise din generaie n generaie, reprezint un proces de copiere unic
n lumea vie numit replicare.
Dintre toate moleculele din natur, ADN este unic prin abilitatea de a-i coordona propria replicare, pornind de la
monomeri (nucleotide).
Asemnarea descendenilor cu prinii se bazeaz tocmai pe replicarea exact, cu mare fidelitate a ADN-ului i
transmiterea copiilor rezultate, dintr-o generaie n urmtoarea.
Replicarea este caracteristic doar acizilor nucleici deoarece au o structur potrivit realizrii acestui proces, dar i
datorit existenei i funcionrii unor mecanisme de control foarte riguroase.
Replicarea asigur:
o reproducerea fidel i continuitatea fenomenului ereditar.
o dublarea, la fiecare generaie, a cantitii de informaie genetic, care are drept consecin multiplicarea sistemelor
biologice.
Principiul fundamental al replicrii este c dintr-o molecul
iniial de ADN = ADN parental, rezult dou molecule fiice identice
ntre ele i identice cu molecula parental care dispare ca entitate
distinct, ns se regsete pe jumtate n fiecare din cele dou molecule
fiice, adic exist pe jumtate n fiecare molecul fiic de ADN (se
spune c molecula parental de ADN i topete identitatea n cele dou
molecule fiice care rezult prin replicare).
Principiile sistemelor autoreplicative
1) Informaia genetic din acizii nucleici este reprezentat de secvena de baze azotate i de aceea rolul oricrei
modaliti de replicare este dublarea secvenei de baze a moleculei parentale pentru ca descendenii s primeasc aceeai
informaie genetic (ereditate).
2) Exactitatea autoreproducerii este dat de specificitatea mperecherii dintre bazele azotate (A cu T i G cu C), acesta
fiind mecanismul esenial al autoreplicrii.
3) Nucleotidele (monomerii) sunt adugate individual la captul unei catene n cretere de ctre o enzim
polimerizatoare.
4) n toate cazurile de sintez de acizi nucleici este utilizat o matri reprezentat de o caten polinucleotidic
preexistent numit caten matri.
5) Secvena de baze azotate din catena fiic (numit caten replic) este complementar secvenei de baze azotate a
catenei parentale copiate.
n cursul istoriei geneticii moleculare au existat trei modele care s explice
replicarea ADN:
1) Modelul dispersiv la finalul replicrii toate cele patru catene ADN reprezint
un amestec, un mozaic de ADN nou i ADN vechi.
2) Modelul conservativ molecula parental, dup replicare, se reasambleaz, iar
cele dou catene replic se asambleaz ntre ele, formnd o molecul fiic de ADN cu totul
nou. Molecula parental deci se conserv n ntregime.
Obs: Aceste dou modele sunt greite. Replicarea ADN nu se face nici dispersiv,
nici conservativ.
3) Modelul semiconservativ a fost propus n 1953 de J. D. Watson i F. H. C.
Crick i prezice c n urma reduplicrii unui dublu helix ADN, fiecare din cele dou
molecule-fiice va conine o caten veche (provenit din molecula parental) i o caten nou
sintetizat, deci molecula parental se pstreaz sau conserv pe jumtate (semi) n fiecare
din cele dou molecule-fiice rezultate.

Replicarea semiconservativ a ADN

Bacteriile au ca material genetic un singur cromosom circular (o singur macromolecul de ADN dublu catenar
circular nchis covalent) care la Escherichia coli are cca. 4,6 milioane perechi de baze. La Homo sapiens exist 46 de
cromosomi, adic 46 de molecule de ADN dublu catenar liniar, care nsumeaz cca. 6 miliarde de perechi de baze.

La speciile de eucariote, care au o cantitate de ADN mult mai mare dect procariotele, replicarea ntregului material
genetic nu dureaz foarte mult deoarece fiecare molecul parental de ADN se replic din mai multe puncte simultan =>
copiere rapid.
La cromosomul bacterian exist un singur punct din care ncepe replicarea, iar la cromosomii celulelor eucariote
mai multe puncte.
Replicarea unor asemenea cantiti enorme de informaie genetic se face cu foarte puine erori (1/10 10 nucleotide),
deci copierea ADN este remarcabil prin vitez i prin precizie.
In vivo, sinteza acizilor nucleici se realizeaz n trei etape:
1) sinteza precursorilor nucleotidelor purinice (acidul inozinic) i pirimidinice (acidul uridilic).
2) sinteza nucleotidelor n ADN: dATP, dGTP, dCTP, dTTP; n ARN: ATP, GTP, CTP, UTP.
3) polimerizarea ordonat a nucleotidelor n secven complementar cu o matri, proces numit replicare.
Replicarea ADN se desfoar dup modelul unui fermoar: acesta se desface treptat, formndu-se un ochi de
replicare ale crui capete n form de Y, numite bifurcaii de replicare, se deschid n continuare expunndu-se treptat cele dou
matrie lng care se aeaz succesiv prin complementaritate nucleotide-trifosfat libere, care vor fi legate covalent n cte o
caten replic prin intervenia a numeroase enzime. Acest mecanism al replicrii de tip fermoar se desfoar n trei etape:
1) Iniierea replicrii
2) Alungirea catenelor replic
3) Terminarea replicrii

I. Iniierea replicrii
Replicarea ncepe din locuri speciale ale moleculei de ADN numite origini ale replicrii.
Cromosomul bacterian are o singur origine a replicrii numit Ori C. Cromosomul eucariot este liniar i mult mai
mare i are mai multe origini ale replicrii.
Aceste locuri speciale din ADN (originile) sunt bogate n perechi A=T (numrul mic de legturi de hidrogen face ca
dublul helix s fie uor de desfcut n aceast regiune) mrginite de perechi GC.
G G C G C C G C AATATTAATATTTATAA C C G G C G C C
||| ||| ||| ||| ||| ||| ||| ||| || || || || || || || || || || || || || || || || || ||| ||| ||| ||| ||| ||| ||| |||
C C G C G G C G TTATAATTATAAATATT G G C C G C G G
1) La nivelul originii replicrii se ataeaz o enzim i desface dublul helix separnd cele dou monocatene ncepnd
din zona cu perechile A=T, prin ruperea punilor de hidrogen dintre acestea. Aceast enzim este helicaza. n urma interveniei
helicazei se formeaz un ochi de replicare care are la capete bifurcaii de replicare care avanseaz i la nivelul crora se vor
alungi catenele replic. La fiecare bifurcaie de replicare acioneaz cte o helicaz care determin desfacerea n continuare a
dublului helix dup modelul fermoarului.
2) Topoizomerazele sunt enzime care intervin asupra dublului helix i i determin modificri topologice (de
conformaie spaial) de tip relaxare sau supratensionare.
Topoizomeraza I acioneaz pe molecula parental de ADN n aval de helicaz i relaxeaz dublul helix permind
helicazei s avanseze. Topoizomeraza se ataeaz la dublul helix ADN i taie una dintre catenele acestuia/introduce o
cresttur monocatenar, rezultnd dou capete libere. Unul dintre capete se rsucete de cteva ori n jurul catenei ntregi, care
funcioneaz ca pivot; astfel, tensiunea acumulat n dublul helix ADN ca urmare a avansrii helicazei este anulat; ulterior,
topoizomeraza re-unete covalent cele dou capete libere, refcnd continuitatea catenei.
n absena topoizomerazei, la un moment dat, prin intervenia helicazei, dublul helix ar deveni supratensionat, iar
helicaza nu ar mai putea s avanseze.
3) Proteinele ssb sunt proteine de legare la monocaten (single strand binding) sau proteine de destabilizare a
dublului helix (HDP).
Pe msur ce ochiul de replicare se mrete prin intervenia helicazei, cele dou monocatene libere au tendina de a se
apropia una de cealalt i de a-i reface punile de hidrogen
(refcnd astfel dublul helix) situaie incompatibil cu replicarea.
Acest fenomen se numete renaturare reasocierea monocatenelor
ntr-un dublu helix. Pentru a fi mpiedicat renaturarea, de fiecare
monocaten a ochiului de replicare se ataeaz proteinele ssb.
4) ARN-polimeraza dependent de ADN (primaza)
este o enzim polimerizatoare de ribonucleotide, cataliznd sinteza
unor fragmente de ARN pe matria ADN. Nu are specificitate de
sens, adic se poate deplasa spre ambele capete ale matriei ADN.
Are specificitate de secven, adic recunoate i se leag
la o anumit zon din ADN care conine o anumit secven se nucleotide. Catalizeaz sinteza, pe matria ADN, a unui scurt
fragment de ARN (oligoribonucleotid) care are 6-8 (5-10) ribonucleotide i se numete primer; primerul ofer ADNpolimerazei captul 3-OH.
Primaza are capacitatea de a sintetiza de novo (de la zero) oligoribonucleotide.

II. Alungirea catenelor replic

5) ADN-polimeraza III (enzima polimerizatoare propriu-zis de la PK)
La procariote exist trei ADN-polimeraze: ADN-polimeraza I (enzima lui Kornberg), ADN-polimeraza II i ADNpolimeraza III care este enzima polimerizatoare propriu-zis. Polimeraza I intervine n excizia primerilor i umplerea golurilor
rmase cu deoxiribonucleotide i n corecia citirii. ADN-polimeraza II se consider c este implicat n recombinarea
genetic.

La eucariote exist cca. zece ADN polimeraze, dintre care ADNpolimeraza este enzima polimerizatoare propriu-zis.
Nici o ADN polimeraz nu are specificitate de secven, adic nu
are nevoie de o zon sau o secven anumit din ADN pe care s o
recunoasc, la care s se lege i de la care s nceap polimerizarea.
Toate ADN-polimerazele au specificitate de sens, adic se
deplaseaz pe matria ADN ntotdeauna n sens 3-5, i deci catalizeaz
sinteza catenei replic n sens 5-3, adic n sens antiparalel.
ADN-polimerazele nu pot sintetiza de novo o caten ADN, doar
pot s continue alungirea unei catene preexistente. Pentru a continua
alungirea unei catene preexistente, au nevoie de captul 3-OH al acestei
catene pe care l va recunoate, la care se va lega i ncepnd de la care va
aduga succesiv nucleotide libere, fiecare nou nucleotid fiind legat la cel
precedent printr-o punte fosfodiesteric.
ADN-polimerazele au n molecul trei situsuri specifice:
1) situs pentru captul 3-OH al catenei n curs de alungire
2) situs pentru ataarea la matri
3) situs pentru nucleotidul liber care urmeaz a fi ataat covalent
la catena n curs de alungire.
n urma activitii helicazei se formeaz ochiul de replicare
alctuit din cele dou monocatene ADN cu rol de matrie i care au
polariti opuse, fiind antiparalele.
Pe matria 3-5, n originea replicrii acioneaz primaza care
catalizeaz sinteza unui primer. Acesta ofer captul su 3-OH unei ADN
polimeraze, care ncepe s alungeasc n mod continuu n sens 5-3 o
caten replic, polimeraza deplasndu-se pe matri n sens 3-5 (spre
bifurcaia de replicare). Catena replic astfel sintetizat este o caten
conductoare (leading strand). Deci pe matria 3-5 acioneaz primaza
o singur dat, iar ADN-polimeraza III (n cazul procariotelor) se ataeaz
la matri o singur dat i alungete catena replic, ncepnd de la captul
3-OH al primerului, n mod continuu, pn la completa copiere a
respectivei matrie a ADN-ului parental.
Pe cealalt caten matri, 5-3, catena replic va crete tot spre
bifurcaia de replicare dar n mod discontinuu, deoarece ADN-polimeraza
III sintetizeaz catena replic n mod fragmentar i n sens opus bifurcaiei
de replicare.
Astfel, iniial, pe catena matri 5-3 intervine, la nivelul
bifurcaiei, primaza i sintetizeaz un primer de la care ADN polimeraza
va sintetiza napoi, n sens 3-5 (spre originea replicrii) un fragment de
ADN = fragment Okazaki. Ochiul de replicare se mrete prin desfacerea
n continuare a monocatenelor ADN, iar bifurcaia de replicare avanseaz.
Din nou, la nivelul bifurcaiei acioneaz primaza care sintetizeaz un nou
primer de la care ADN- polimeraza III va sintetiza un nou fragment
Okazaki spre primerul precedent. Deci pe matria 5-3, ADN-polimeraza
III i primaza acioneaz de mai multe ori, cataliznd sinteza unei catene
replic alctuit n prim faz din fragmente ADN (100-200 nucleotide la
eucariote i 1000-2000 nucleotide la procariote), intercalate/care
alterneaz cu primeri. Alungirea acestei catene se face tot n sensul
avansrii bifurcaiei de replicare, dar deoarece ADN-polimeraza III
sintetizeaz fragmentele n sens invers (fiecare fragment Okazaki se
alungete n sens 5-3), alungirea net a catenei replic este puin
defazat temporal fa de alungirea celeilalte catene replic i de aceea
catena replic sintetizat discontinuu se numete caten replic ntrziat
(lagging strand).
6) ADN-polimeraza I = enzima lui Kornberg
ADN-polimeraza I are toate caracteristicile unei ADN
polimeraze, ns nu este enzim polimerizatoare propriu-zis.
Deoarece o monocaten de ADN
nu poate s conin
ribonucleotide, primerii trebuiesc ndeprtai, att cel din catena
conductoare, ct i cei din catena ntrziat.
Excizia primerilor o realizeaz ADN-polimeraza I. n urma
exciziei rmn goluri n catenele replic, umplerea lor cu
deoxiribonucleotide fiind asigurat tot de ADN-polimeraza I. Dup
ndeprtarea primerului, ADN polimeraza I se leag la captul 3-OH
rmas liber al fragmentului Okazaki urmtor i adaug succesiv
deoxiribonucleotide complementare matriei spre fragmentul Okazaki

precedent - cel al crui primer a fost excizat,

fragment care are captul 5-P liber.
Activitatea ADN-polimerazei I de
excizie a primerilor = activitate RN-azic
(ribonucleazic).
ADN-polimeraza
I
completeaz integral golul lsat n urma
exciziei primerului, dar nu poate s realizeze
ultima legtur covalent fosfodiesteric ntre
captul 3-OH al fragmentului de ADN pe
care l-a sintetizat n locul primerului i captul
5-P al fragmentului Okazaki (al crui primer
a fost nlocuit) din catena replic.
7) ADN-ligaza realizeaz legtura
covalent ntre captul 3-OH al fragmentului
de ADN sintetizat de polimeraza I i captul
5-fosfat al fragmentului Okazaki precedent,
stabilind astfel continuitatea covalent a catenei replic.
8) Topoizomerazele acioneaz pe fiecare din cele 2 molecule-fiice de ADN rezultate, introducnd spiralizri,
stabilindu-le astfel conformaia tridimensional normal, helical dextrogir.

III. Terminarea replicrii

La procariote, replicarea se ncheie cnd enzimele implicate n replicare
(ADN-polimeraza III) ajung ntr-un punct T (punct terminus al replicrii) de pe
macromolecula de ADNdc circular, punct situat diametral opus lui Ori C.
La eucariote, replicarea se ncheie prin fuzionarea tuturor ochiurilor de
replicare i prin desprinderea enzimelor de pe moleculele-fiice de ADN rezultate,
fiecare ochi de replicare avnd la capetele sale cte un punct terminus al
replicrii.
Totalitatea proteinelor i
enzimelor implicate n replicare
constituie REPLISOMUL.
REPLICONUL
este
unitatea din ADN n care se
desfaoar un singur eveniment
replicativ;
conine
n
mod
obligatoriu i definitoriu o origine a replicrii i un punct terminus al replicrii.
Cromosomul bacterian este o structur monorepliconic, adic are o
singur origine i un singur punct terminus.
Cromosomii de la eucariote sunt structuri multirepliconice au mai
multe origini ale replicrii i se vor forma mai multe ochiuri de replicare ntr-un
singur cromosom.

CODUL GENETIC
ntreaga organizare molecular a organismelor se bazeaz pe existena i funcionarea proteinelor. Unele proteine au
rol structural, iar altele diverse roluri funcionale (ex. enzime). Proteinele sunt polimeri de aminoacizi; o protein este
caracterizat prin numrul, tipul i succesiunea aminoacizilor din alctuirea ei, trsturi care i definesc structura primar.
Exist 20 de aminoacizi uzuali, din care sunt constituite n mod curent proteinele: glicin (Gly), alanin (Ala),
izoleucin (Ile), valin (Val), cistein (Cys), serin (Ser), metionin (Met), leucin (Leu), triptofan (Trp), fenilalanin (Phe),
histidin (His), acid aspartic (Asp), asparagin (Asn), acid glutamic (Glu), glutamin (Gln), arginin (Arg), prolin (Pro),
tirozin (Tyr), lisin (Lys), treonin (Thr).
Iniial s-a considerat c informaia genetic (care este foarte divers i n cantitate mare, n strns legtur cu
numrul de caractere) este deinut de proteine, care prezint un numr suficient de mare de uniti diferite (monomerii
aminoacizii) ca s realizeze foarte multe combinaii diferite, fiecare combinaie fiind rspunztoare de un caracter.
La nceputul sec. al XX-lea, Levene a enunat teoria tetranucleotidului conform creia ADN este alctuit dintr-o
succesiune monoton de 4 nucleotide (AGCT)n. Ipoteza lui Levene s-a dovedit greit.
Experimentul lui O. T. Avery din 1944 a infirmat aceaste teorii (rolul codificator al proteinelor i monotonia ADN) i
s-a dovedit c informaia genetic este coninut (codificat biochimic) n ADN.
S-a demonstrat ulterior c proteinele sunt sintetizate pe baza informaiei din ADN. Deci aceast informaie trebuie s
precizeze, pentru fiecare protein n parte, numrul de aminoacizi, tipul aminoacizilor i poziia fiecruia n protein, adic
structura primar a proteinei.
A aprut ns curnd o problem: numrul foarte mare de caractere implic un numr foarte mare de molecule sau
secvene ADN diferite necesare pentru codificarea tuturor caracterelor. Dar numrul de uniti diferite din alctuirea ADN este
mic i anume patru uniti diferite cele patru tipuri de nucleotide. Cum reuesc doar aceste patru uniti s constituie o aa de
mare diversitate de secvene ADN care s codifice ntreaga diversitate a proteinelor?

Deci cele patru

nucleotide ale ADN trebuie
s se organizeze cumva
astfel nct s codifice
caracteristicile
structurii
primare a proteinelor.
Dac un aminoacid
ar fi codificat de un sigur
nucleotid, ar fi acoperii
patru aminoacizi i deci ar
rmne 16 aminoacizi pe
care nu ar avea cine s-i
codifice.
Dac un aminoacid
ar fi codificat de o
pereche/dublet de nucleotide, deoarece se pot forma cu cele patru nucleotide doar 16 asemenea dublete diferite, tot ar rmne
patru aminoacizi pentru care nu ar exista dublete codificatoare.
De aceea, singura variant posibil pentru ca toi cei 20 de aminoacizi s aib cte o unitate codificatoare n ADN este
ca aceast unitate s fie alctuit din cte trei nucleotide triplete de nucleotide numite codoni. Cu cele patru nucleotide din
ADN se pot forma n total 64 de codoni diferii (combinaii de cte trei nucleotide, 4 3 = 64), care s codifice pentru cei 20 de
aminoacizi uzuali. Deci, n ADN unitatate codificatoare pentru un aminoacid este secvena de trei nucleotide succesive numit
codon.
Codul genetic este o colecie de triplete de nucleotide (codoni) care determin structura primar a proteinelor, n
esen preciznd poziia aminoacizilor n catena polipeptidic. Codificarea biochimic presupune traducerea informaiei
ereditare din secvena de baze azotate a acidului nucleic ntr-o secven de aminoacizi din catena polipeptidic.
ntre secvena de nucleotide din ADN i secvena de aminoacizi din catenele polipeptidice exist o strns
coresponden numit coliniaritate.
Unitatea de codificare genetic este codonul, iar codul genetic reprezint totalitatea celor 64 de codoni.
Exista dou tipuri de cod genetic :
- cod genetic informaional reprezentat de succesiunea sau secvena de codoni din ADN ; acesta este perpetuat si
conservat prin replicare de-a lungul generaiilor.
- cod genetic operaional care copiaz prin complementaritate pe cel informaional i este reprezentat de secvena
de codoni din ARNm, secven care va fi folosit direct n sinteza proteinelor; acest cod genetic nu este depozitar
de informaie genetic, ci doar depozitar de mesaj genetic, nefiind peren (permanent) i transmisibil i
funcioneaz doar temporar.
Codul genetic operaional = secvena de ribonucleotide a unui ARNm matur (ARNmm), organizat n codoni i care
decide la nivelul ribosomilor numrul, ordinea i tipul aminoacizilor n catena polipeptidic.
Pentru un ARNmm dat, totalitatea codonilor cuprins ntre un codon START i un codon STOP constituie cadrul de
citire.
Codul genetic ARN conine 64 de codoni, dintre care:
61 codoni sens codoni care codific pentru cte un aminoacid. Dintre acetia codonul AUG este codon START.
3 codoni nonsens (UAA, UAG, UGA) i au rol de codoni STOP: nu codific pentru vreun aminoacid, doar
marcheaz terminarea mesajului genetic.

Caracteristicile codului genetic

Codul genetic este neacoperit sau nesuprapus: secvena de ribonucleotide a ARNmm este organizat n codoni
individuali, codonii vecini neavnd nucleotide comune.
2. Codul genetic este far virgule: secvena de ribonucleotide a ARNmm este citit n ribosomi n mod continuu, codon
dup codon, ntre codoni neexistnd semne de punctuaie.
3. Codul genetic este redundant sau degenerat: exist 61 de codoni sens, dar doar 20 de aminoacizi rezultnd c mai muli
codoni numii codoni sinonimi vor codifica pentru acelai aminoacid. Excepii de la redundan: UGG i AUG.
4. Codul genetic este universal: n toate sistemele supramoleculare, de la virusuri la om, aceiai codoni codific pentru
aceiai aminoacizi.
1.

CODUL GENETIC OPERAIONAL

U
U

UUU
UUC
UUA
UUG
CUU
CUC
CUA
CUG
AUU
AUC
AUA
AUG
GUU
GUC
GUA
GUG

Fenilalanin
Leucin

Leucin

Izoleucin
Metionin/START
Valin

UCU
UCC
UCA
UCG
CCU
CCC
CCA
CCG
ACU
ACC
ACA
ACG
GCU
GCC
GCA
GCG

Serin

Prolin

Treonin

Alanin

UAU
UAC
UAA
UAG
CAU
CAC
CAA
CAG
AAU
AAC
AAA
AAG
GAU
GAC
GAA
GAG

G
Tirozin
STOP

Histidin
Glutamin
Asparagin
Lizin
Acid aspartic
Acid glutamic

UGU
UGC
UGA
UGG
CGU
CGC
CGA
CGG
AGU
AGC
AGA
AGG
GGU
GGC
GGA
GGG

Cistein
STOP
Triptofan
Arginin

Serin
Arginin

Glicin

U
C
A
G
U
C
A
G
U
C
A
G
U
C
A
G

Codonul GUG n mod tipic codific pentru valin, dar foarte rar are rol i de codon START.

Codul genetic mitocondrial. UGA este codon sens i codific pentru triptofan. UAA, UAG, AGA i AGG sunt
codoni STOP. AUA, AUU, AUG sunt codoni START. AUU este i codon sens, codificnd pentru izoleucin, iar AUA
codific pentru metionin.

FUNCIA HETEROCATALITIC A ADN-ULUI DE LA

GEN LA PROTEIN
Genele sau factorii ereditari sunt unitaile structural-funcionale
ale fenomenului ereditar.
Definiia 1: Gena este un segment din macromolecula de ADN
la toate organismele (sau de ARN la ribovirusuri) care conine informaia
ereditar ce dirijeaz sinteza unei anumite catene polipeptidice.
Definiia 2: Gena este o regiune din ADN al crei produs final
este fie un polipeptid, fie o molecul de ARN.
ADN are dou funcii:
1. funcia autocatalitic prin care dirijeaz propria sintez
(replicare)
2. funcia heterocatalitic prin care dirijeaz sinteza
proteinelor.
Procesul prin care ADN dirijeaz sinteza proteinelor = expresie
genic.
Etape n stabilirea relaiei gen-produsul ei final
1. gena codific pt.enzim
2. gena
protein
3. gena
caten polipeptidic
4. gena
caten polipeptidic sau un tip de ARN
Expresia genelor are drept finalitate sinteza unei proteine. Acest proces se realizeaz n dou etape:
a) transcrierea (transcripia) = copierea informaiei genetice dintr-o gen ADN ntr-o macromolecul de
ARNm.
b) traducerea (translaia) = sinteza catenei polipeptidice pe baza mesajului genetic din ARNm.
Deci ntre gen (ADN) i protein se interpune ARN.

REPLICARE

Dogma central a geneticii

TRANSCRIERE

ADN

ARN
REVERSTRANSCRIERE

TRADUCERE

PROTEIN

Fluxul de informaie de la
ADN la proteine poate fi descris n
termeni lingvistici deoarece ambele
tipuri de molecule sunt polimere i
se poate considera c sunt alctuite
dintr-o succesiune de cuvinte
aparinnd la dou limbi diferite, dar
corespondente (adic unui cuvnt
din limba ADN i corespunde un
cuvnt din limba proteinelor).
Deci ADN i proteinele
conin informaie scris n dou
limbi chimice diferite (codonii n acizi nucleici i aminoacizii n proteine).

Transcrierea generaliti
Transcrierea = sinteza ARN dirijat de ADN.
Deoarece ambele tipuri de acizi nucleici utilizeaz acelai limbaj chimic (nucleotidele), informaia este doar transcris
(scris dintr-o parte n alta). Ca i n replicare, catenele ADN constituie matrie pentru sinteza unei monocatene
complementare, ns n locul T va fi inclus U ca baz azotat complementar lui A din catena matri ADN. Aceast molecul
de acid nucleic care copiaz informaia din ADN i o va folosi n sinteza proteinelor este ARNm.
Transcrierea ns este un termen general folosit pentru a descrie copierea informaiei din ADN n orice tip de ARN.

Traducerea generaliti
Traducerea = sinteza efectiv de polipeptide, proces dirijat de ARNm.
Celula traduce secvena de ribonucleotide, organizat n codoni, din ARNm n secvena de aminoacizi a unei catene
polipeptidice. Procesul se realizeaz la nivelul ribosomilor care asigur legarea covalent, ordonat a aminoacizilor ntr-o
caten polipeptidic conform mesajului din ARNm.
De ce este necesar ARNm? De ce nu este utilizat direct n traducere macromolecula de ADN?
1. pentru protejarea ADN i a informaiei genetice.
2. ADN poate fi copiat n mai multe molecule de ARNm pentru aceeai gen i deci pot fi sintetizate simultan mai
multe copii ale aceleiai proteine.
Principiile generale ale transcrierii sunt aceleai la procariote i la eucariote, ns mecanismul este puin diferit
deoarece procariotele nu au materialul genetic protejat ntr-un nucleu. De aceea:
la procariote cele dou procese se desfoar n acelai compartiment celular n citoplasm, cvasisimultan
(aproape simultan); la eucariote cele dou procese sunt separate spaial i temporal, transcrierea avnd loc n
nucleu, iar traducerea n citoplasm
n urma transcrierii unei gene, la procariote rezult direct un ARNmm; la eucariote rezult un ARNm precursor =
pre-ARNm care este prelucrat rezultnd ARNmm care iese din nucleu i va fi tradus n proteine la nivelul
ribosomilor.
Pre-ARNm reprezint transcriptul primar.

TRANSCRIEREA
ARN-polimeraza recunoate o secven
specific de nucleotide din ADN secven numit
promotor i care marcheaz/conine locul unde
trebuie s nceap transcrierea, se leag la acest
nivel de ADN, realizeaz denaturarea local a
dublului helix ADN i va cataliza polimerizarea
(legarea covalent) ribonucleotidelor aliniate prin
complementaritate pe una din cele dou catene ADN
care va funciona ca matri, rezultatul fiind o
molecul de ARN.
ARN polimeraza sintetizeaz catena sau
transcriptul ARN n direcia 5-3, deci alunec pe matri n direcia 3-5. ns ARN polimeraza nu necesit primer, putnd
iniia de novo sinteza unei catene ARN.
La procariote locul din ADN unde se ncheie transcrierea se numete terminator, caracterizat de asemenea de o
secven specific de nucleotide.
Promotorul este situat n amonte de terminator. Segmentul de ADN care este transcris constituie o unitate de
transcriere.
Procariotele au o singur ARN polimeraz pentru transcrierea tuturor tipurilor de ARN. Eucariotele au trei ARN
polimeraze: ARN-polimeraza I, ARN-polimeraza II, ARN-polimeraza III, dintre care ARN-polimeraza II catalizeaz sinteza
ARNm.
Transcrierea se realizeaz n trei etape:
1. Legarea ARN-polimerazei la catena ADN i iniierea transcrierii:
Promotorul unei gene ncorporeaz i punctul de start al
transcrierii (nucleotidul de unde ncepe efectiv sinteza ARN) i se
extinde pe cteva zeci de nucleotide n amonte de punctul de start.
Promotorul are trei funcii importante:
servete ca situs de ataare a ARNpolimerazei.
determin locul de unde ncepe
transcrierea.
determin care dintre cele dou catene de
ADN va fi folosit ca matri.
La procariote ARN-polimeraza recunoate singur
promotorul i se leag la acesta fr ajutorul unor intermediari.
La eucariote legarea ARN polimerazei II la promotor i
iniierea transcrierii sunt mediate de proteine numite factori
transcripionali. Doar dup ce anumii asemenea factori se ataeaz la
promotor se va lega i ARN polimeraza II.
Ansamblul ARN polimeraza II + factori transcripionali
legai la promotor constituie i se numete complexul de iniiere a
transcrierii.
Promotorii de la eucariote includ o secven particular
situat cu 25 de nucleotide n amonte de punctul de start numit cutia TATA (TATA-box, cutia Goldberg-Hogness; este
element cis-reglator), situat pe catena ADN care nu va funciona ca matri n transcriere. O secven similar ca rol este
prezent i la nivelul promotorului genelor PK cutia Pribnow-Schaller (5-TATAAT-3)
2. Alungirea catenei ARN:
ARN-polimeraza se deplaseaz pe ADN, desface dublul helix i expune
10-20 de baze ADN la care se mperecheaz prin complementaritate ribonucleotide
(formnd puni de hidrogen) care sunt adugate succesiv la captul 3-OH al
catenei ARN n cretere de ctre ARN-polimeraz.
n urma ARN-polimerazei, catena ARN sintetizat se desprinde de matria
ADN, iar cele dou catene ADN renatureaz.
La eucariote rata de transcriere este de 60 de nucleotide pe secunde.
O singur gen poate fi transcris simultan de mai multe ARN polimeraze
care acioneaz succesiv pe matri, rezultnd mai multe molecule de ARNm pentru
aceeai protein i ca urmare se vor sintetiza mai multe catene polipeptidice
identice ntr-un timp mai scurt.

3. Termina(liza)rea transcrierii:
Mecanismul este diferit la procariote fa de eucariote.
La procariote transcrierea se realizeaz pn la o secven
terminator. Secvena terminator transcris (este deci o secven din molecula
de ARN) funcioneaz ca semnal de terminare, determinnd
detaarea/desprinderea de ADN a ARN-polimerazei i eliberarea
transcriptului care este disponibil pentru utilizare direct, imediat ca ARNm.
La eucariote, pre-ARNm este tiat din catena ARN n cretere n
timp ce ARN-polimeraza II continu s transcrie ADN-ul. Polimeraza
transcrie o seven din ADN numit secven pentru semnalul de
poliadenilare, care codific pentru semnalul de poliadenilare (AAUAAA)
din pre-ARNm. Apoi la 10-35 nucleotide n aval de semnalul AAUAAA,
proteine asociate cu ARN n cretere l taie din transcriptul ARN elibernd
pre-ARNm. ARN-polimeraza continu s transcrie sute de nucleotide n aval
de locul unde a fost tiat pre-ARNm, iar terminarea transcrierii se realizeaz
prin cderea sau desprinderea ARN-polimerazei de pe ADN, prin mecanism
incomplet cunoscut.

PROCESAREA PRE-ARNM
Sunt dou tipuri de modificri pe care le sufer pre-ARNm:
I. Modificarea capetelor pre-ARNm
a) bonetarea (cpcirea) captului 5: acest capt este este primul transcris
i nainte de a se finaliza transcrierea la acesta se adaug covalent o fosfoguanozin
numit bonet (sau cap 5)
b) poliadenilarea: dup terminarea transcrierii, la captul 3 (care a fost
ultimul transcris) este adugat enzimatic o succesiune de 50-250 de nucleotide cu
adenin, adic pre-ARNm este poliadenilat la captul 3, rezultnd o coad poli-A.
Rolurile bonetei i ale cozii poli-A:
faciliteaz exportul ARNmm din nucleu n citoplasm.
protejeaz ARNm de degradarea enzimatic.
odat ARNmm ajuns n citoplasm, ambele structuri ajut ribosomul s se ataeze la captul 5 al acestuia.
II. Editarea ARNm (splicing)
O unitate transcripional ADN are n medie circa
8000 nucleotide. Fiecare aminoacid este codificat de un
codon (trei nucleotide), deci pre-ARNm va avea 8000 de
nucleotide, dar doar 1200 de nucleotide vor codifica pentru
o protein de 400 de aminoacizi; deci genele ADN i
transcriptele lor primare au regiuni, secvene mari noninformaionale, netraduse.
Aceste
secvene
non-informaionale
(necodificatoare) se numesc introni i sunt
intercalate printre secvenele codificatoare (care se
numesc exoni) ale genei, deci i printre secvenele
codificatoare ale pre-ARNm.
La sinteza unui transcript primar ARN,
ARN-polimeraza II transcrie i intronii i exonii din
gena ADN, dar molecula de ARNm ajunge n
citoplasm doar cu exonii. Intronii sunt excizai din
pre-ARNm, iar exonii sunt unii la loc rezultnd un
ARNmm cu secven informaional continu,
alctuit n ntregime din codoni.
Acest proces de excizie a intronilor i sudare
a exonilor se numete splicing. Procesul este realizat
de ctre spliceosom alctuit din proteine + ARNsn;
spliceosomul interacioneaz cu anumite situsuri din introni, excizeaz intronii i unete capetele celor doi exoni care flancau
(mrgineau) intronul.

TRADUCEREA (SINTEZA PROTEINELOR)

n procesul traducerii o celul interpreteaz mesajul genetic i construiete o
protein n conformitate cu acesta.
Mesajul este reprezentat de o succesiune de codoni n lungul ARNm, iar
interpretul (sau traductorul) este ARNt. Funcia ARNt este de a transfera aminoacizi
din soluia citoplasmatic la ribosomi.
n citoplasm exist toate cele 20 de tipuri de aminoacizi, fie sintetizai de
ctre celul din alte substane, fie preluai din mediul extracelular.
Ribosomul adaug fiecare aminoacid adus de ARNt la captul n cretere al
unei catene polipeptidice.
Moleculele de ARNt nu sunt identice. Cheia traducerii mesajului genetic
ntr-o secven specific de aminoacizi este reprezentat de faptul c fiecare tip de
ARNt traduce un anumit codon din ARNm ntr-un anumit aminoacid.
ARNt sosete la ribosom purtnd un aminoacid specific la un capt, iar la
cellalt capt al ARNt este o triplet de nucleotide = anticodon care se mperecheaz
prin complementaritate cu codonul adecvat din ARNm. De ex.: anticodonul AAA se
mperecheaz cu codonul UUU.
Pe msur ce molecula de ARNm se deplaseaz prin ribosom, aminoacizii
adui de ARNt vor fi adugai covalent la catena polipeptidic ori de cte ori apare n
ARNm codonul corespunztor.
Codon dup codon mesajul genetic este tradus pe msur ce ARNt-urile
aduc aminoacizi n ordinea prescris, iar ribosomul i unete covalent ntr-o caten
polipeptidic.
ARNt este traductor sau molecul adaptor deoarece citete cuvintele din
ARNm sau codonii i le traduce n cuvinte ale proteinei i anume aminoacizi.

FUNCIILE ARNt
Acurateea traducerii mesajului genetic implic doi pai de recunoatere:
1. Trebuie s se realizeze o potrivire corect ntre ARNt i un aminoacid.
Un ARNt care se leag la un codon care specific pentru un aminoacid trebuie s
transporte la ribosom doar acel aminoacid codificat de codonul respectiv. Fiecare
aminoacid este ataat la ARNt corect de ctre o enzim specific numit aminoacil-ARNt
sintetaza.
Situsul activ al fiecrui tip de sintetaz permite doar o combinaie specific de
ARNt i aminoacid.
Exist 20 de tipuri diferite de sintetaze, cte una pentru fiecare aminoacid.
Fiecare sintetaz este capabil s lege aminoacidul specific la toate tipurile diferite de
ARNt care conin anticodoni complementari codonilor sinonimi care codific pentru
aminoacidul caracteristic sintetazei.
Sintetaza catalizeaz ataarea covalent a aminoacidului la ARNt specific, proces
energizat prin hidroliza ATP i numit activarea aminoacidului,
rezultatul fiind aminoacil-ARNtaa = aminoacid activat, este
eliberat de enzim i n acest fel ARNt transport aminoacidul
ctre catena polipeptidic n cretere din ribosom. (Aminoacid
activat = aminoacid legat covalent la ARNt, la captul 3 de la
nivelul braului acceptor al moleculei.)
2. Al doilea pas de recunoatere presupune o
potrivire corect ntre anticodonul din ARNt i codonul din ARNm. Dac ar exista cte un tip de
ARNt pentru fiecare codon ARNm ar trebui s fie 61 tipuri de ARNt. De fapt sunt doar cca. 45, deci
unii ARNt trebuie s fie capabili s recunoasc i s se lege la mai mult de un codon. O asemenea
versatilitate este posibil deoarece regulile de mperechere ntre a treia baz a codonului i baza
corespondent din anticodonul ARNt nu se poate aplica la fel de strict ca n replicare i n transcriere.
De exemplu: U de la captul 5 al anticodonului se poate mperechea cu A sau G din poziia a
treia (captul 3) a codonului. Relaxarea regulii de mperechere = WOBBLE explic de ce codoni
sinonimi difer prin baza a treia, dar n mod normal nu i prin celelalte baze. Exist patru perechi de
baze non-Watson-Crick: G-U, I-U, I-A i I-C, unde I este inozina.

RIBOSOMUL
Ribosomul faciliteaz cuplarea specific ntre anticodonul ARNt i codonul ARNm n timpul sintezei proteice.
Ribosomul, care este suficient de mare pentru a fi vazut la microscopul electronic, este alctuit din dou subuniti
subunitatea mare i subunitatea mic. Subunitile ribosomale sunt alctuite din proteine i un tip de ARN ARNr.

La EK genele pentru ARNr din cromosom (vezi Tipuri de ARN) sunt transcrise i ARNr este procesat i asamblat la
nivelul nucleolului cu proteine importate din citoplasm, rezultnd subunitile ribosomale care sunt apoi exportate, prin porii
nucleari, n citoplasm.
Att la PK ct i la EK, subunitile (mic i mare) se asociaz pentru a forma ribosomul funcional doar cnd se
ataeaz de o molecul ARNm.
Aproximativ 2/3 din masa ribosomului este ARNr. Deoarece o celul conine mii de ribosomi, ARNr este cel mai
abundent tip de ARN. Cu toate c ribosomii de la PK i cei de la EK sunt foarte similari ca structur i funcie, cei de la EK
sunt puin mai mari i difer ntructva prin compoziia molecular. Aceste diferene au importan n clinic (clinic
semnificative). Anumite antibiotice pot inactiva ribosomii de la PK fr a inhiba abilitatea ribosomilor EK de a sintetiza
proteine. Aceste antibiotice (tetraciclin i streptomicin) sunt utilizate n combaterea infeciilor bacteriene.
Structura ribosomului i reflect funcia aducerea mpreun a ARNm i ARNt-uri purttoare de aminoacizi. n afar
de un situs de legare la ARNm, fiecare ribosom are 3 situsuri pentru legarea ARNt:
- situsul P situsul peptidil-ARNt conine ARNt care poart catena polipeptidic n cretere.
- situsul A situsul aminoacil-ARNt conine ARNt-ul care poart urmtorul aminoacid care va fi adugat la
catena polipeptidic
- ARNt descarcat de aminoacid prsete ribosomul din situsul E (exit)

Ribosomul ine ARNt i ARNm n strns apropiere i poziioneaz noul aminoacid pentru adiia la captul COOH al
unui polipeptid n cretere, apoi catalizeaz formarea unei legturi peptidice. Pe masur ce se alungete, polipeptidul trece
printr-un tunel de ieire (exit tunnel) din subunitatea mare. Cnd polipeptidul este complet, este eliberat n citosol prin tunelul
de ieire.

Cercetri recente susin ipoteza c nu proteinele, ci ARNr este responsabil n mod primar att de structura ct i de
funcia ribosomului.
Proteinele, situate mai ales la exterior, constituie suport pentru modificrile conformaionale ale moleculelor de ARNr
pe care acestea le sufer n timp ce catalizeaz traducerea. ARN este principalul component al interfeei dintre cele dou
subuniti pe de o parte i situsurile A i P pe de alt parte; ARN este catalizatorul formrii legturii peptidice. Astfel,
ribosomul poate fi considerat o ribozim uria.

TRADUCEREA = SINTEZA UNUI POLIPEPTID

Se desfoar n 3 etape: 1. iniierea; 2. alungirea; 3. terminarea
Toate cele trei etape necesit factori proteici care ajut ARNm, ARNt si ribosomul n procesul traducerii. Iniierea i
alungirea necesit energie asigurat prin hidroliza GTP (guanozin-trifosfat).

1) Asamblarea ribosomului i iniierea traducerii

Etapa de iniiere aduce mpreun ARNm, ARNt (purttor al primului aminoacid din polipeptid) i cele 2 subuniti
ribosomale. Subunitatea mic se leag de ARNm si de ARNt iniiator care poart aminoacidul metionin (Met).
ARNt iniiator = Met-ARNtMet adic metionil-ARNt.
Subunitatea mic se deplaseaz n aval pe molecula de ARNm pe care o scaneaz pn cnd gsete codonul START
(AUG) care semnalizeaz nceputul traducerii i marcheaz nceputul cadrului de citire din ARNm.

ARNt iniiator, deja asociat n acest complex, se leag la codonul START din ARNm care formeaz cu anticodonul
puni de H. La complexul [ARNm ARNt subunitatea ribosomal mic] se ataeaz i subunitatea mare, completnd
complexul de iniiere a traducerii.

Proteine = factori de iniiere sunt necesare pentru a aduce aceste componente mpreun. Celula consum energie sub
form de GTP pentru formarea complexului de iniiere.
La finalul formrii complexului de iniiere:
- Met-ARNtMet sau ARNt iniiator ocup situsul P din ribosom
- Situsul A vacant este pregtit s primeasc urmtorul aminoacil-ARNtaa
Polipeptidul este ntotdeauna sintetizat ntr-o singur direcie de la Metonina iniial de la captul amino-terminal
(NH2-terminal sau N-terminal) spre ultimul aminoacid de la captul carboxil-terminal (COOH-terminal sau C-terminal).

2) Alungirea catenei polipeptidice

Aminoacizii noi sunt adugai unul cte unul la aminoacidul precedent. Fiecare adiie implic participarea ctorva
proteine factori de elongare i se desfoar ntr-un ciclu cu trei etape:
a) recunoaterea codonului anticodonul unui aminoacil-ARNtaa care tocmai a ajuns la ribosom se mperecheaz
prin complementaritate cu codonul corespunztor din situsul A. Hidroliza GTP crete acurateea i eficiena
acestei etape.
b) formarea legturii peptidice o molecul de ARNr din subunitatea mare catalizeaz formarea unei legturi
peptidice ntre noul aminoacid din situsul A i captul COOH al catenei polipeptidice n cretere, ataat de un
ARNt n situsul P. Polipeptidul se va ataa la ARNt din situsul A, la care era legat noul aminoacid adugat.
c) translocarea ribosomul transloc ARNt din situsul A n situsul P. ARNt gol (neocupat) din situsul P este mutat
n situsul E i de aici este eliberat din ribosom. Situsul A devine din nou liber s primeasc un alt aminoacilARNtaa i ciclul se reia.

Consum de energie se realizeaz n etapele a) i c). Recunoaterea codonului necesit hidroliza a dou molecule de
GTP, proces care crete precizia i acurateea etapei. nc un GTP este hidrolizat ca s asigure energia necesar deplasrii cu
un codon a ribosomului pe ARNm (translocare). ARNm este deplasat prin ribosom ntr-o singur direcie, adic ribosomul se
deplaseaz pe ARNm n sensul 5-3. ARNm i ribosomul se mic relativ unul fa de cellalt, unidirecional, codon dup
codon. Ciclul de elongare/alungire la PK dureaz mai puin de 1/10 secunde i se repet pn cnd polipeptidul este complet.

3) Terminarea traducerii
Alungirea continu pn cnd un codon STOP (UAG, UGA sau UAA) din ARNm ajunge n situsul A al ribosomului.
O protein numit factor de eliberare se leag direct la codonul STOP din situsul A i determin adiia unei molecule de ap
n loc de un aminoacid la catena polipeptidic. Aceast reacie hidrolizeaz polipeptidul complet de ARNt din situsul P,
elibernd polipeptidul prin tunelul de ieire al subunitii mari a ribosomului. Ulterior se dezasambleaz i restul complexului
de traducere.

REZUMAT