Reacii umorale si celulare cu antigenul

Rolul complementului
Rspunsul imun este rezultatul interaciunii dintre antigen si factorii
imunologiei efectori ai organismului , acetia din urm putnd fi grupai in dou
mari categorii : factori umorali (anticorpi) i factori celulari.
Reaciile factorilor imunologici efectori cu antigenul au loc n mod
spontan in vivo, n organismul imunizat ; ele au fost ns obinute i in vitro ,
condiii care au permis lrgirea cunotinelor asupra mecanismelor imunologice
i au condus la concretizarea unui mare numr de tehnici diagnostice ,
prognostice , de evolutivitate etc., cu vast aplicativitate in clinic.

Reacii umorale cu antigenul ( reacii antigen-anticorp)

Prezena anticorpilor intr-un organism poate fi constatat prin punerea in
eviden a anumitor reacii caracteristice pe care serul acestui organism le
dezvolt in prezena antigenului imunizat. n condiii similare, observarea unor
reacii imulogice caracteristice intre serul unui organism i un anumit antigen
permite precizarea unor relaii cauzale intre antigenul respectiv ( bacterie, virus,
agent sensibilizant etc. ) i starea patologic a organismului de la care s-a
prelevat serul.
Reaciile imunologice caracteristice sunt expresia combinrii anticorpilor
cu antigenul corespunztor, complexul antigen-anticorp care ia astfel natere
prezentnd proprieti diferite de acelea ale componenilor si (anticorpii i
antigenul) , ceea ce permite punerea lui n eviden. Astfel, cnd un antigen
solubil este amestecat cu serul organismului imunizat, complexul antigenanticorp format nu mai are acelai grad de solubilitate ca cel al componenilor
1

si; i, atunci cnd proporiile de antigen si anticorp puse in contact sunt

adecvate , complexul format va precipita ; iar aspectul tulbure al amestecului
care rezult va permite constatarea c reacia dintre antigen si anticorp a avut
loc.
Posibilitile de punere in eviden a complexului antigen-anticorp
format sunt foarte variate si ele sunt n mare msur dependente de calitile
componenilor ce intr n reacie i care, n ultim instan , definesc noile
proprieti ale complexului ce ia natere. Astfel,spre exemplu, dac antigenul
intrat in reacie nu este solubil , ci corpuscular , atunci agregatele formate de
complexul antigen-anticorp vor fi deosebit de mari , lund forma unor
aglutinate. Dar, dac anticorpul este monovalent sau dac in reacie intervine
numai haptena antigenului atunci complexul format nu va mai fi precipitalul ; n
schimb , n asemenea situaii , se pot constata modificri ale tensiunii
superficiale i vscozitii amestecului sau schimbrii ale coeficientului de
sedimentare, ale mobilitii electroforetice etc. , care traduc formarea
complexului antigen-anticorp. Mai mult , n asemenea situaii , dac antigenul
avea propriti biologice concrete (citotoxicitate, activitate enzimatic sau
biostimulatoare etc.) , dup punerea lui n contact cu antigenul, chiar n absen a
formrii unui precipitat, se poate constata c i-a pierdut proprietile biologice (
a fost neutralizat ).
Exist o alt serie de reacii ntre antigen i anticorp care, pentru a fi
evideniate , necesit prezena n sistemul de reacie al unor anumite celule,
deoarece n aceste cazuri anticorpii au proprietatea de a se fixa pe celule. Acesta
este cazul anticorpilor opsonizani, a celor anafilactizani, eliberatori de
substane H i a celor citofili pentru macrofage. Trebuie subliniat c, n aceste
cazuri, dei la reacie particip i o component celular, nu este vorba de reac ii
propriu-zise ntre antigen si celul, deoarece factorul imunologic efector este tot
imunoglobulina-anticorp.

n sfrit , o categorie important de reacii antigen-anticorp, care pentru

iniiere i desfurare au nevoie de prezena complementului , constituie
substratul unui mare numr de procese imunologice , printre care bacterioliza ,
bactericidia, imunoaderena i o parte important dintre fenomenele de
imobilizare i conglutinare.
ntruct reaciile dintre antigen si anticorp nu pot fi ntotdeauna direct
vizualizate , ci necesit adesea procedee indirecte de evideniere, s-a considerat
util s se descrie dou stadii in desfurarea acestor procese : a) formarea
complexului antigen-anticorp ca rezultat al reaciei fizico-chimice dintre cei doi
componeni; b) reaciile secundare care urmeaz formrii complexului i care
permit punerea lui n eviden. Aceste dou etape nu pot fi ns net disociate n
timp , iar mecanismele care particip sunt strict dependente ntre ele . Totu i,
deoarece formarea complexului antigen-anticorp este un proces comun,
coordonat de legi generale , iar manifestrile secundare sunt variate ,
condiionate de caliti particulare ale componentilor (care definesc tipul de
reacie : agregare, neutralizare, anafilaxie, opsonizare, adeziune etc.) , este
preferabil s fie descrise in prealabil mecanismele formrii complexului antigenanticorp i ulterior tipurile evideniabile ale reaciilor dintre anticorpi i
antigene.

1. Formarea complexului antigen-anticorp

ntre moleculele de anticorp i cele de antigen corespunztor exist o serie
de regiuni complementare din punct de vedere fizico-chimic : aa numitele
situsuri combinative de pe molecula anticorpului i determinani
antigenici de pe molecula antigenului. Aceste dou zone complementare
determin reacia dintre antigen i anticorp, care n esen este de natur
stereochimic.
3

Modul de reacie ntre situsurile combinative i determinanii antigenici

constituie substratul specificitii acestor reacii i n ultim analiz ,
substratul caracterului dominant al proceselor imunologice efectoare. Acest
mecanism de reacie este determinat de o serie de factori, printre care natura
i talia determinanilor ce intr n reacie , energia caloric a for elor de
legatur , reversibilitatea legturilor i implicit influena temperaturii, pHului, forei ionice etc. asupra vitezei de reacie. Studiul contribuiei fiecruia
dintre aceti factori la formarea complexului antigen-anticorp a permis
formularea unei imagini de ansamblu asupra tipurilor de legtur ce se
realizeaz ntre molecula de antigen i cea de anticorp.
Aceste cercetri au avut ca punct de pornire specificitatea foarte marcat a
reaciei dintre antigen si anticorpul su. Dou antigene care au determinani
comuni pot reaciona fiecare cu anticorpul produs de cellalt, dar reac ia este
mai puin intens dect cea pe care antigenul o d in contact cu anticorpul
produs de el nsui. Cu ct dou antigene conin un numr mai mare de
determinani comuni, cu att reaciile ncruciate pe care le dau sunt mai
intense; de unde rezult c specificitatea combinrii antigenului cu anticorpul
este direct corelat cu numrul de situsuri combinative i determinan i
antigenici complementari care pot intra n reacie.
Natura i talia determinanilor antigenici care intr in reacie cu
molecula de anticorp au fost studiate n special cu ajutorul antigenelor
artificiale. Asemenea studii au artat c formarea complexului antigenanticorp este modificat prin introducerea n molecula de antigen a unor
grupri cu talie molecular redus, ca gruprile azofenil, naftalen, antracen,
arsanil etc. O importan mare deine tipul de legtur dintre grupare i restul
moleculei de antigen; n acest sens nca din 1936 , Mutsaars si Gregoir au
evideniat o specificitate serologic diferit ntre proteina n care au acela i
determinant este legat la nucleul lizinei prin legtur ureidic i cel conjugat
prin azo-legtur. Cercetri mai recente au artat , cu ajutorul haptenelor
4

DNP-polilizinice, c ndeprtarea gruprii reactive de masa moleculei de

antigen (ceea ce se obine prin creterea numrului de molecule de lizin n
gruparea haptenic) duce la alt tip de legtur ntre antigen i anticorp i ,prin
aceasta, la o modificare a specificitii antigenului.
Aceste cercetri au evideniat deci c determinanii antigenici sunt de fapt
grupri chimice cu talie relativ mic , al caror mod de legare n molecula
antigenic i a cror poziie spaial este adesea hotartoare.Natura chimic a
acestor determinani i a legturilor din reacia lor cu anticorpii a fost n plus
atestat de influena pe care o au condiiile de pH, de salinitate i temperatur
asupra formrii complexului antigen-anticorp. Astfel, spre exemplu, pentru
formarea unui anumit tip de complec antigen-anticorp este optim o anumit
valoare a pH ului mediului , ceea ce nseamn c , combina ia depinde de
gradul de ionizare al anumitor grupri. n acelai sens s-a constatat c exist
o concentraie optim de sruri, de obicei cea fiziologic , care asigur o
intesitate maxim a formrii complexului antigen-anticorp. O zon optima
similar ntre 15 i 40 C.
Viteza de reacie ntre antigen i anticorp s-a observat a fi variabil n
timp: astfel, dei combinarea iniial a antigenului cu serul imun anti-protein
de cal sau anti-polizaharid pneumococic are loc practic n cateva secunde de
la amestecarea preparatelor , totui reacia nu este complet dect dup un
timp mai ndelungat.
Viteza de reacie dintre antigen i anticorp este dependent de raportul
dintre antigen i anticorp, de temperatura mediului de racie , de pH-ul
mediului i de concentraia n sruri.ns ,la condiii identice, viteza de rac ie
variaz mult n funcie de tipul antigenului: polizaharidul pneumococic se
cupleaz 90% cu anticorpii n numai 3 secunde , n timp ce reac ia pentru
antigenul Rh necesit 60 de minute. n determinarea vitezei de reac ie pot s
intervin, desigur, prezena unor anticorpi deficitari, valena antigenului etc. ;
dar principala cauz o contituie tipul de legare a antigenului cu anticorpul.
5

Reversibilitatea complexelor antigen-anticorp este un alt

aspect al tipului de legtur realizat ntre antigen i anticorp. Posibilitatea de
disociere a complexelor antigen-anticorp a fost semnalat de numeroi
cercettori. S-au folosit n acest scop metode diferite , prin care adugarea
unui exces de antigen constituie o cale curent pentru solubilizarea
complexului antigen-anticorp att in vitro ct i in vivo. Acest fenomen a fost
interpretat ca o inversare a unor reacii dintre determinanii antigenici i
situsurile combinative , proces care este coordonat de legea maselor i poate
fi prelucrat matematic. n conformitate cu legea maselor, aplicat la
amestecul de antigen i anticorp, rezult ca trebuie s existe o relaie linear
ntre logaritmul raportului anticorp|antigen n precipitat i logaritmul
concentraiei componentei n exces (antigenul sau anticorpul) aflat n
supernatant.Verificarea experimental a acestei ipoteze a artat existena
relaiilor lineare prevzute prin calculul matematic.
Reversibilitatea reaciilor serologice a fost demonstrat prin tehnici
variate. Iniial, Eisen i Karush au folosit dializa consecutiv a haptenei i
anticorpului contra hapten, constatnd un anumit echilibru, bine definit,
ntre compuii solubilizai din complexul antigen-anticorp. Ulterior, un
echilibru dinamic ntre hapter , anticorp i compuii ce conin una , dou sau
trei molecule de anticorp a fost evideniat cu ajutorul tehnicilor combinate de
dializ de echilibru, electrodializ , electroforez i imunoelectroforez ,
ultracentrifugare, trasori radioactivi etc.
Aplicarea legii aciunii maselor la procesul de formare a complexului
antigen-anticorp a permis, prin determinarea experimental a constantei de
echilibru ntre complexul format i componenii solubili , s se determine de
la caz la caz gradul de stabilitate al complexului antigen-anticorp. Aceste
studii au facut de asemenea posibil calcularea energiei libere i variaiile
entalpiei i entropiei la temperaturi diferite.

Energia de legtur ntre antigen i anticorp a fost iniial

determinat experimental de ctre Boyd, cu ajutorul unui calorimetru
sensibil. Folosind ca antigen hemocianina i anticorpi specifici de cal, Boyd
gsete c formarea complexului antigen-anticorp dezvolt circa 3 calorii per
gram de azot al antigenului; ceea ce, pentru greutatea molecular de 6 800
000 a hemocianinei reprezint circa 3 300 kcal/mol antigen. Prin extrapolare,
s-a calculat c aceast energie corespunde la circa 40 kcal/mol de anticorp.
ntruct metoda iniial a lui Boyd utiliza un antigen cu talie foarte mare,
ceea ce contribuie la constituirea unui complex antigen-anticorp cu un raport
Atc/Atg deosebit de mare, s-au refcut msurtorile asupra energiei libere
dezvoltat in reaciile antigen-anticorp cu ajutorul unor antigene obinuite i
folosind metode de estimare termodinamic variate: a) msurarea direct a
cldurii de reacie ; b) dialize de echilibru ; c)analiza precipitatelor i
supernatantelor ; d) observaii electroforetice i prin ultacentrifugare; e)
difuziunea luminii etc. Rezultatele obinute au permis aprecieri multiple:
a) Variaia energiei libere care reprezint energia de legare ntre
situsurile combinative ale anticorpului i determinanii antigenici ; pentru
diferite tipuri de complexe antigen-anticorp , s-au gsit valori ale varia iei
energiei libere ntre -4,8 i 14 kcal/mol;
b) Variaia entalpiei care corespunde schimbului total de cldur din
cursul reaciei;valorile variaiei entalpiei au fost gsite ca variind ntre 0 i
9;
c) Variaia entropiei care reprezint diferena dintre entalpie i energia
liberat n reacii , n condiii termodinamice date i corespunde nivelului
de particule libere din sistem ; faptul c pentru variaia entropiei s-au gsit
valori pozitive arat c , n sistem , dup formarea complexului antigenanticorp , se gsesc mai multe particule libere (ceea ce pare s fie
rezultatul moleculelor de ap provenite din unirea antigenului cu
anticorpul i modificrilor consecutive de structur teriar ).
7

Tipuri de legtur ntre antigen i anticorp. Rezultatele

privind natura i talia gruprilor reactive, energia de legtur, condiiile de
reversibilitate ale complexului antigen-anticorp au permis adncirea
cunotinelor asupra modului de reacie dintre moleculele de antigen i
anticorpii respectivi.
Teoretic, exist un numr mai mare de lagturi chimice care ar putea
interveni la formarea complexului antigen-anticorp. Dintre acestea, unele
sunt legturi puternice, ca cele ionice si cele covalente; n aceste cazuri,
energia de legtur este mare , de ordinul a 50 -100 kcal/mol. Alte fore de
legtur necesit energii mult mai mici ; astfel , atracia ntre gruprile
polare aprotice, de tipul punilor de hidrogen, implic energii de a 5
kcal/mol ; atracia de tip coulombian , ntre grupri cu sarcin opus ,
implic energii de ordinul 4,5 kcal/mol; iar forele de atracie de tip van
der Waals sunt de ordinul a 0,25-1,9 kcal/mol. ntruct energia de lagtur
in complexele antigen-anticorp este de ordinul a 4-15 kcal/mol , exist
toate argumentele pentru a admite implecarea, n aceste cazuri, a
legturilor slabe. Dealtfel, n acest sens demonstreaz valorile cldurii de
reacie rezultat din combinarea anticorpilor aglutinani anti-B cu un
antigen corespunztor, care s-au dovedit egale cu 4 legturi de hidrogen
sau 20 legturi van der Waals.
Forele slabe de lagtur menionate sunt eficiente numai la distane foarte
mici; ele sunt invers proporionale cu distana dintre grupele reactive , i
anume ;cu ptratul aceste distane n cazul forelor coulombiene, cu puterea a
asea n cazul punilor de hidrogen i cu puterea a aptea n cazul forelor van
der Waals. Aceasta presupune ca distana dintre determinanii antigenici i
situsurile anticorpice care intr n reacie trebuie s fie foarte mic , ceea ce a
condus la concepia c reacia antigen-anticorp trebuie s aib un mecanism
similar cu cel al reaciilor dintre enzime i substanele lor : anticorpul trebuie s
prezinte o concavitate de grupri reactive n care s se muleze o convexitare de
8

grupri complementare reactive aparinnd antigenului. Calculele fcute n

aceste sens au dus la concluzia c cele dou feluri de grupe reactive trebuie s
se afle la distane de 5-6 angstromi una de alta, iar un situs combinativ trebuie s
aib cam 34 x 12 x 7 A , ceea ce nseamna cam 2 500 -3 000 A2 ca arie total.
Aceast suprafat nu depaete 1% din cea total a unei molecule de IgG. Cum
pe o molecul de anticorp exist un numr mare de situsuri conbinative , s-ar
putea considera c polivalena acestor anticorpi este egal cu cea a locurilor de
combinare. Din punct de vedere practic ns , datorit taliei moleculei de
antigen, nu este posibil s reacioneze simultan toate situsurile combinative ale
anticorpului. ntre numrul de molecule de antigen i cele de anticorp care se
combin exist posibilitatea unor proporii variate , ntre o limit superioar i
una inferioar, determinate de valenele celor doi componei ce intr n reacie.
Proporia relativ a fiecrui compenent poate varia n complexul antigenanticorp n funcie de valena lor.
2) Reacii de agregare i mecanismele de formare
Reaciile de precipitare dintre anticorp i un antigen solubil ca i cele de
aglutinare realizate de anticorp cu un antigen particulat, sunt rezultatul unor
procese de agregare. Diferena ntre precipitarea specific i aglutinarea const
n diferena de talie a particulelor de antigen; ambele reacii constau n unirea
specific a anticorpului cu antigenul. n acest sens, Jones i Pol au observat c
particulele de colodiu, mbrcate cu albu de ou, erau aglutinate de dilu ii foarte
mari de ser anti-ovalbumin, chiar dac acelai ser imun ddea reacii de
precipitare cu ovalbumina n diluii mult mai mici. Prezena determinan ilor
antigenici la suprafaa celulelor bacteriene, protozoarelor , eritrocitelor etc.a
fost evideniat prin contrast de faz, microscopie electronic, anticorpi
fuloresceni etc.
Exist variate procese de combinare a antigenului cu anticorpul care dau
nastere la agregate. Printre reaciile de precipitare tipice, n afar de
9

precipitarea i flocularea clasic , trebuie amintite : a) reacia inelului (de

precipitare) care apare la interfaza de separare a antiserului pus n contact cu
soluia de antigen ; b) imunodifuzia de tip Ouchterlony , care const n formarea
unor benzi de precipitat ca urmare a difuziei concomitente a antigenului i
anticorpilor ntr-un gel de agar ; c) imunoelectroforeza , care este rezultatul
separrii electroforetice a serurilor urmat de dubl difuzie n gel; d)
evidenierea complexului antigen-anticorp format prin utilizarea marcrii cu
radioizotopi, metale grele etc. a antigenului sau prin separarea lui prin
ultracentrifugare, cromatografie etc.
n ceea ce privete imunoaglutinarea , tehnicile care folosesc acest
procedeu au cptat o extindere larg deoarece permit identificarea i dozarea
unor cantiti mici de anticorp (sau antigen ). La baza baza acestor tehnici st
constatarea c polizaharidele antigenice pot fi adsorbite pe suprafaa membranei
hematiilor, proteinele antigenice pot fi absorbite de hematiile tanate , iar lipidele
antigenice pot fi absorbite pe particule inerte, cum este kaolinul, polistirenul,
colodiul etc. Hematiile sau particulele coloidale astfel pregtite constituie
antigene cu talie mult marit , care pot fi uor vizualizate dup agregare n
prezena unor mici cantiti de anticorpi.
Tehnicile cantitative de imunoagregare au fost utilizate ca metode
analitice pentru estimarea anticorpilor intrai n reacie i pentru analiza
mecanismelor imune de agregare. Iniiate de ctre Heidelberger, aceste tehnici
analizeaz N-proteic n complexul antigen-anticorp, dup tratarea adecvat a
preparatului. Cercetri similare, ntreprinse cu polizaharidul pneumococic tip I i
serurile specifice, au demonstrat c aglutininile i precipitinele respective sunt
identice.
Cantitile de antigen necesare pentru agregare sunt n general deosebit de
mici: cu 0,2-1 g/ml se pot obine precipitate vizibile cu ovalbumina sau
polizaharidul pneumococic, puse n prezena unor cantiti variabile de ser imun.
La diluii mari de ser imun, precipitarea nu mai are loc. Acest proces nu este
10

datorit lipsei totale de anticorpi deoarece, dac se reduce cantitatea de antigen,

precipitatul se formeaz i cu diluii mari de ser imun; este vorba de o inhibiie
prin exces de antigen sau despre o solubilizare a complexului antigen-anticorp
n prezena unui exces de antigen. Un fenomen similar, dar care se produce mai
rar, este cel al inhibiiei prin exces de anticorpi. Solubilizarea complexului
antigen-anticorp prin exces de anticorpi a fost semnalat n unele boli
autoimune, n cazul serurilor imune de cal antiprotein.
Procesele de inhibiie prin exces de antigen sau anticorpi nu sunt provocate prin
blocarea formrii complexului antigen-anticorp, ci datorit excesului unuia
dintre componeni-complecii formai conin un numr mare din componentul ce
satureaz i, astfel, agregabilitatea sistemului este mult diminuat.
Mecanismul imunoagregrii. O molecul de imunoglobulin-anticorp
posed dou lanuri polipeptidice uoare (L) i doup grele (H), legate ntre ele
printr-o serie de legturi disulfurice. Hidroliza menajat cu tripsin a acestor
molecule duce la eliberarea a dou fragmente Fab (t) i un fragment Fc (t),
dintre care fiecare fragment Fab are capacitatea de a se lega monovalent cu
antigenul, reprezentnd deci o grupare combinativ monovalent. Devine astfel
evident c, dac o structur imunoglobulinic incomplet de tipul fragmentului
menovalent Fab este pus n contact cu antigenul ea se va comporta bivalent,
fiecare fragment Fab reacionnd cu o molecula de antigen. n cazul cnd o
aceeai molecul de antigen este fixat-monovalent-de mai multe molecule de
anticorpi i acestea reacioneaz prin cealalt valen cu alt molecul de
antigen, se va forma o reea tridimensional de multiple complexe antigenanticorp. Talia acestei formaiuni de supercompleci imuni poate fi enorm,
atingnd n reaciile de floculare volume n jur de 1 mm, vizibile cu ochiul liber.
Formarea unor asemenea supercompleci face uor de neles capacitatea lor de
agregare, spre deosebire de cazurile cnd n reacie intr anticorpi sau antigene
incomplete, care nu permit formarea de reele tridimensionale.

11

Teoria reelei a fost formulat iniial de Marrack i dezvoltat de

Heidelberger, Pauling i alii. Conform acestei concepii, astzi larg verificat
experimental, imunoagregarea nu comport dect reacii specifice ntre
anticorpii i antigenele corespunztoare; influena altor factori are un substrat
nespecific, putnd accelera procesul de agregare, fr s participe direct la
formarea complecilor imuni.
Reelele de antigen i anticorpi au putut fi dealtfel vizualizate prin
microscopie electronic. Atunci cnd se folosesc antigene cu talie mare, n
imaginile electronice obinute cu aceste preparate moleculele de anticorpi se
observ ca nite puni ce leag ntre ele structurile antigenice.
O alt posibilitatea de evideniere a reelelor de antigene i anticorpi a fost
obinut prin utilizarea trasorilor radioactivi i a metodei autoradiografice.
Astfel, Punescu si colaboratorii pun n contact antigenele marcate cu I i
anticorpii citofilipentru macrofage i complexele obinute le pun n eviden pe
cale autoradiografic; n frotiurile finale, antigenele apar fixate pe celule, prin
anticorpii citofili. Mai multe mononucleare sunt reinute mpreun, formnd
compleci alternani de tipul celul-anticorp-antigen-anticorp-celul. Existena
acestor compleci a fost dealtfel sugerat nc de experinele lui Pauling i
colab. Care au preparat dou seruri imune: anti-A i anti-B; fiecare ser n parte
nu precipita cu haptena corespunztoare, dar, dac cele dou haptene A i B se
cuplau i se puneau n contact simultan cu cele dou seruri, avea loc formarea de
precipitat. Acest precipitat trebuie s fie rezultatul constituirii unor complec i de
tip alternant: ser anti-B-BA-ser anti-A-AB-ser Anti-B
3) Reacii de neutralizare
Antigenele dotate cu activitate biologic (toxine, enzime, hormoni, etc.)
induc formarea de anticorpi neutralizani, care au capacitatea de a le bloca
activitatea biologic. Reacia dintre aceste antigene i anticorpii corespunztori
poate duce uneori la formarea de precipitate; cum nsa dozele minime biologic
active din asemenea antigene sunt adesea att de mici nct nu pot asigura, prin
12

reacia cu anticorpul, formarea unor precipitate vizibile, pentru punerea n

evidena a reactiilor de neutralizare se prefer teste specifice care pot demonstra
blocarea activitii biologice a antigenului cnd este pus n contact cu serul
imun.
Pentru toxine, testele de neutralizare necesit de obicei probe in vivo, direct pe
animalul de experien sau pe organe izolate. Aceste teste se practic n dou
etape: 1) realizarea in vitro de amestecuri toxin-antitoxin (ser imun) n care
toxina este pstrat n concentraie constant (egal de obicei cu o doz limit
mortal: DLM), iar antitoxina este introdus n concentraii crescnde; 2)
administrarea amestecurilor astefl obinute la animale sensibile i observarea
mortalitii obinute n funcie de doza de antiser folosit n amestec (cantitatea
cea mai mic de ser imun care poate neutraliza efectul unei DLM din toxina
respectiv este denumit unitate antitoxic: U.A)
n prezena anticorpilor specifici, blocarea activitii enzimatice poate fi
total sau numai parial, nsoit sau nu de formarea unor precipitate.
Activitatea enzimatic a precipitatelor imune formate este cu att mai redus cu
ct valoarea raportului anticorp/enzim este mai mare att n amestecul esen ial,
ct i n complexul format. ntre neutralizarea activitii enzimatice i gradul de
precipitare al amestecului

nu exist o relaie liniar: n primul rnd,

neutralizarea se poate constata nainte ca precipitatul s se formeze; n al doilea

rnd, neutralizarea este maxim n prezena unui exces de anticorpi, spre
deosebire de precipitare care este maxim n zona de echivalen, neutralizarea
se poate dealtfel obine i cu fragmente Fab(t) monovalente ale Ig-anticorpi
respectivi, care nu produc i precipitare.
Spre deosebire de imunoreaciile de neutralizare a toxinelor, n cazul
neutralizrii enzimelor reacia poate fi inhibat de prezena substratului, care
intr n competiie cu anticorpul pentru determinanii antigenici ai centrului activ
catalitic. Acest inhibiie prin competiie are un mecanism stereochimic, aa cum
dealtfel demonstreaz faptul c n timp ce competiia dintre anticopr i un
13

substrat cu talie mic poate bloca numai neutralizarea, lsnd intact capacitatea
precipitant a serului imun; dac substratul competitiv are talie mare atunci se
inhib nu numai fixarea anticorpilor neutralizani, ci i a situsurilor combinative
de precipitare.
Dac n cazul enzimelor substratul poate anihila determinantul antigenic
al centrului activ biologic, un fenomen similar poate fi indus la toxine prin
formalizare, procedeu care modific exotoxinele bacteriene n anatoxine.
Att n cazul enzimelor, ct i al toxinelor blocarea funciei active biologic nu
poate suprima total funcia antigenic a moleculei. Serurile preparate cu
anatoxine au capacitatea antitoxic integral; desigur, aceast afirmaie este
valabil numai pentru exotoxine, singurele care pot fi transformate n anatoxine
prin formolizare.

CUPRINS
14

1. Rolul complementului ..1

2. Reacii umorale cu antigenul 1
3. Formarea complexului antigen-anticorp ..3
4. Reacii de agregare i mecanismele de formare ..9
5. Reacii de neutralizare 12

15