Disciplina: Citologie vegetala

Lucrare practic nr. 1

I. METODE
VEGETAL

TEHNICI

DE

LUCRU

UTILIZATE

BIOLOGIA

I. 1. Microscopul fotonic binocular: alctuire, mod de utilizare

Ce este microscopul fotonic?
Microscopul fotonic este un instrument optic care, utiliznd lumina, mrete
obiectele sau structurile de dimensiuni mici, invizibile cu ochiul liber.
Microscopul fotonic permite distingerea detaliilor dintr-un obiect aflat la o distan
de 0,2m. Puterea de rezoluie a microscopului exprim cea mai mic distan la care
dou puncte ale obiectului pot fi vzute distinct.
Din ce este alctuit microscopul fotonic?
A. Partea mecanic:
1. Piciorul (talpa sau soclul):
i. forma: poligonal, triunghiular sau de potcoav;
ii. rol: asigur stabilitatea microscopului;
iii. prezint: lampa, oglinda, orificiul de ptrundere a luminii,
butoane de reglare a luminii.
2. Coloana:
i. rol: menine diferite pri ale microscopului, servete la
deplasarea microscopului;
ii. prezint: mner, tubul port-oculare, revolverul port-obiective,
mecanismul de micare pe vertical a prii optice;
3. Platina (msua):
i. rol: menine preparatul microscopic;
ii. prezint: un orificiu central, cleme, rigle i mecanisme pentru
micare n plan orizontal;
4. Mecanismul de punere la punct a imaginii cuprinde:
i. uruburi sau vize macrometrice;
ii. uruburi sau vize micrometrice.
B. Partea optic:
1. Obiectivele :
iii. sunt sisteme de lentile ntr-o montur metalic;
iv. au putere de mrire diferit: 6x, 10x, 20x, 40x, 90x.
2. Ocularele:
v. sunt formate din 2 lentile aflate la extremitile unei monturi
metalice;
vi. lentila superioar lentila ocular; lentila inferioar lentila
colectoare.
3. Sursa de lumin (lampa sau becul): este ncorporat n picior.
4. Oglinda
5. Condensatorul:
i. este un sistem de lentile;
ii. proiecteaz n planul preparatului imaginea sursei luminoase;
iii. sub acesta exist o diafragm - iris.
Puterea de mrire a microscopului = puterea de mrire a obiectivului x
puterea de mrire a ocularului.
ex: ocular 10x; obiectiv 20x
puterea de mrire a microscopului = 200x

Tub portoculare
Ocular
e

Revolver
portobiective

Platin

Obiective

Condensator

Partea

urub cu
cremalier

mechanic

Partea optic

Mner

Oglind
urub
macrometri
c
urub
micrometri
c
Talp

Surs de
lumin

Microscop fotonic NOVEX (Holland)

Care sunt manevrele de lucru pe care le vei efectua

pentru vizualizarea unui preparat la microscopul fotonic?
conectm cablul la sursa de curent electric;
declanm aprinderea sursei de lumin;
mrim intensitatea luminii la nivelul sursei de lumin;
fixm preparatul pe platina microscopului;
aducem n axul microscopului obiectivul care mrete de 10 ori;
ne asigurm c seciunea de observat este strbtut de fluxul de
lumin;
privim prin oculare (reglm distana interocular, dac este nevoie);
acionm uruburile macrometrice pn obinem imagine n cmpul
microscopic;
aducem n ax obiectivul care mrete de 20 de ori;
privind prin oculare, micm uruburile micrometrice, pn obinem din
nou imagine;
n mod similar procedm pentru obinerea imaginii la obiectivul ce
mrete de 40 de ori.

Cum procedm pentru scoaterea preparatului de la microscop ?

aducei n axul microscopului obiectivul 20, apoi 10;
eliberam preparatul dintre clemele de fixare;
reducem intensitatea luminii la nivelul becului;
nchidem alimentarea la sursa de curent.

I. 2. Tehnic de obinere a preparatului microscopic n urma

secionrii la microtomul de mn
Am aflat mai sus din ce este alctuit un preparat microscopic ns, ne-a rmas s
nelegem cum anume putem obine o seciune, att de subire nct s poat fi
strbtut de lumin (de ordinul m) i att de dreapt pe toat suprafaa ei, ca s
putem examina detalii i s putem obine desene de calitate.
Mai jos sunt enumerate etapele de lucru care se parcurg n mod curent n
laboratorul nostru pentru obinerea preparatelor microscopice:

1. Fixarea materialului de studiat:

fixarea = omorrea instantanee a celulelor i esuturilor cu prezervarea
structurii lor;
- soluii fixatoare: alcool etilic 70%, aldehid formic (7 20%), sau
amestec (FEA): formol/alcool etilic/acid acetic: 1/40/1.
Secionarea:
- folosind: microtomul de mn, mduva de soc, briciul botanic;
- tipuri de seciuni posibile: superficiale, transversale, longitudinal
radiare, longitudinal tangeniale;
Colorarea: de exemplu: cu verdeiod i carmin alaunat;
- treceri succesive prin: hipoclorit (20 minute), ap acetic (splare),
verde-iod (1 minut), alcool etilic (splare), carmin alaunat (20 minute),
ap (splare).
Montarea:
- pentru preparatele proaspete sau temporare n: ap ori amestec
ap/glicerin: 1/1;
- pentru preparatele permanente sau definitive n: glicero - gelatin sau
balsam de Canada.
Etichetarea: cu denumirea tiinific a plantei, organul secionat, tipul de
seciune.
-

2.

3.

4.

5.

Reinei afinitatea coloranilor pentru anumite componente celulare,

n funcie de compoziia lor chimic (exemplu, carminul alaunat
coloreaz n roz pereii celulozici, iar verdele iod coloreaz n verde
pereii lignificai ai celulelor vegetale).